CN112684176A - 一种Rh血型抗原检测卡及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种Rh血型抗原检测卡及制备方法，属于血型定型技术领域。所述检测卡包括八个微柱凝胶管，八个所述凝胶管包括两管含有IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶管、两管含有IgM性质的单克隆抗c抗体的凝胶管、两管含有IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶管以及两管含有IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶管。本申请的检测卡可以特异性的检测样本中的四种抗原，能够准确的获得待测者的Rh血型，符合临床快速检测的要求，另外，本申请血型检测卡还具有较长的使用时效，提高了产品的市场竞争力。
Description
技术领域
本申请涉及血型定型卡领域，特别涉及一种Rh血型抗原检测卡及制备方法。
背景技术
ABO 血型系统和Rh血型系统是人类最为重要的两个血型系统，高度的免疫原性使二者具有重要的临床意义，在急诊抢救、手术治疗、贫血治疗、输血前检查等过程中都是不可缺少的，试验结果的正确与否直接关系到病人的生命安危。
根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。Rh血型系统在输血医学中的重要性仅次于ABO血型系统，Rh系统主要的抗原有D、C、c、E、e抗原，因为D抗原的免疫原性远远强于其他Rh抗原，所以临床中通常根据D抗原的有无将人群的Rh血型分为“Rh阴性”与“Rh阳性”两类。正因如此，临床上很少对C、c、E、e抗原进行检测，而且市面上也缺少针对C、c、E、e抗原检测的检测卡，降低了血型检测的准确性，提高了交叉配血过程中发生危险的可能性。
发明内容
针对现有技术不存在针对C、c、E、e抗原检测的检测卡的问题，本申请的目的是提供一种Rh血型抗原检测卡及制备方法。
第一方面，本申请提供了一种Rh血型抗原检测卡，是通过以下技术方案得以实现的：
一种Rh血型抗原检测卡，包括八个微柱凝胶管，八个所述凝胶管包括两管含有IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶管、两管含有IgM 性质的单克隆抗c抗体的凝胶管、两管含有IgM 性质的单克隆抗E抗体的凝胶管以及两管含有IgM 性质的单克隆抗e抗体的凝胶管。
通过采用上述技术方案，本申请检测卡中的单克隆抗C抗体、单克隆抗c抗体、单克隆抗E抗体和单克隆抗e抗体能够特异性的与红细胞表面的C、c、E、e抗原发生反应，使凝集或致敏的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应，从而确定被检者的血型。本申请的检测卡可以对Rh血型系统中的RhC和RhE进行检测，填补了相关技术中无对应检测卡的空白，使血型检测更加准确，从而降低了交叉配血的风险。而且，采用本申请的检测卡检测Rh血型，检测速度快，操作步骤简单，符合临床快速诊断的要求。另外，本申请检测卡还可以结合RhD检测结果，最终获得被检者Rh血型。
可选的，每个所述微柱凝胶管均包括IgM性质的单克隆抗抗体、抗体稀释剂和葡聚糖凝胶；所述抗体稀释剂包括以下组分：
磷酸二氢钠 0.2-0.6g/L；
磷酸氢二钠 0.2-0.6g/L；
糖类 8-12g/L；
卵磷脂 6-8 g/L；
钠盐 3-5g/L；
泊洛沙姆 0.01-0.05g/L；
纳他霉素 15-18mg/L。
通过采用上述技术方案，本申请的抗体稀释中除包括最基本的缓冲成分外，还包括抗体稳定剂、渗透压调节剂、表面活性剂和抗菌剂，从而使本申请的抗体稀释剂可以为抗体提供一个良好的保存条件，提高抗体的稳定性，使抗体在较高的活性状态下保持较长的时间。具体的，缓冲液可以为抗体提供最适宜的pH值，防止过高或过低的pH导致抗体失活、凝集现象的发生；稳定剂的加入能够有效避免抗体在保存过程中蛋白聚集和沉淀；渗透压调节剂的加入可以有效的保护抗体，使抗体的理化性质维持在稳定的水平；表面活性剂的加入可以增加抗体的稳定性，使抗体更好的分散在抗体稀释剂中，优选的，本申请的表面活性剂优选泊洛沙姆407；抗菌剂的加入可以防止抗体稀释剂在长期储存过程中细菌的滋生，从而影响检测结果的准确性。综上所述，本申请的抗体稀释剂可以在存放、运输过程中有效维持抗体的物理性质、化学性质、生物性质的稳定性，不会随着保存时间的延长和条件的改变，出现较大的差异，从而保证了检测结果的准确性，提高了检测卡的使用有效期。
可选的，所述抗体稀释剂包括以下组分：
磷酸二氢钠 0.3-0.5g/L；
磷酸氢二钠 0.3-0.5g/L；
糖类 9-11g/L；
卵磷脂 6.5-7.5 g/L；
钠盐 3.5-4.5g/L；
泊洛沙姆 0.02-0.04g/L；
纳他霉素 16-17mg/L。
可选的，所述糖类选用海藻糖、麦芽糖、蔗糖或麦芽糖、松三糖和香菇多糖的混合物中的一种。
可选的，所述麦芽糖、松三糖和香菇多糖混合物中三者的质量浓度比为1:（0.5-1）:（0.1-0.2）。
通过采用上述技术方案，本申请的糖类可以选择多种，都可以起到提高抗体稳定性的作用，尤其是麦芽糖、松三糖和香菇多糖的混合物，这三者相互作用能够使抗体在较长时间内具有很好的稳定性，不会随着存放时间的延长出现凝集和失活现象，从而显著延长了产品的保存期。
可选的，所述钠盐选用氯化钠、柠檬酸钠中的一种或两种，氯化钠和柠檬酸钠混合的质量浓度比为1:（0.5-2）。
通过采用上述技术方案，本申请选择氯化钠和/或柠檬酸钠作为渗透压调节剂，对抗体起到很好的保护作用，尤其是渗透压调节剂选用氯化钠和柠檬酸钠混合物时，抗体的稳定性进一步提高。
第二方面，本申请提供了一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，是通过以下技术方案得以实现的：
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，包括以下步骤：
S1.抗体稀释液的配制：称取规定量的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、糖类、卵磷脂、钠盐、泊洛沙姆、纳他霉素溶于水中，调节溶液pH至6-7；
S2.凝胶的制备：聚丙烯酰胺葡聚糖粉末采用4-6倍体积的生理盐水浸泡24-48h，然后洗涤3-5次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒，收集颗粒大小均匀且完整呈球形凝胶颗粒，得到葡聚糖凝胶；
S3. 抗体稀释：采用步骤S1配制的抗体稀释剂对IgM性质的单克隆抗C抗体、IgM性质的单克隆抗c抗体、IgM性质的单克隆抗E抗体、IgM性质的单克隆抗e抗体分别进行稀释，稀释后的IgM性质的单克隆抗C抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗c抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗E抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗e抗体的效价≥64；
S4.凝胶的配制：将步骤S3稀释后的四种抗体分别与步骤S2制备的葡聚糖凝胶按体积比为(1-5):1的比例混合，分别制备得到含IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗c抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶；
S5.分装：将步骤S4制备的四种带有抗体的凝胶分别加入到不同微柱管中，每种凝胶分装两管，形成八个微柱凝胶管的Rh血型抗原检测卡。
通过采用上述技术方案，本申请首先将聚丙烯酰胺葡聚糖进行溶胀，然后将稀释的抗体与溶胀的聚丙烯酰胺葡聚糖进行混合获得含有抗体的凝胶，再将含有抗体的凝胶加入到凝胶管进行封口。本申请血型检测卡的制备方法简单，适合大规模生产，且制备获得的血型检测卡特异性高，检测结果准确，符合临床快速检测的要求。另外，本申请血型检测卡还具有较长的使用时效，提高了产品的市场竞争力。
可选的，步骤S2中，聚丙烯酰胺葡聚糖的粒径为20-50nm。
通过采用上述技术方案，本申请的聚丙烯酰胺葡聚糖的粒径限制在20-50nm，可以更好的截留凝集的红细胞，从而使检测结果更加容易判读。
可选的，步骤S2中，浸泡后的聚丙烯酰胺葡聚糖采用生理盐水洗涤1-2次，再采用蒸馏水洗涤2-3次。
通过采用上述技术方案，本申请将溶胀的聚丙烯酰胺葡聚糖首先采用生理盐水清洗，再采用蒸馏水清洗，可以有效去除凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒，从而更好的截留凝集的红细胞。
可选的，步骤S5中，每个微柱管分装20-25μL凝胶。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请能够快速检测样本中的C、c、E、e抗原，从而确定待检者的Rh血型，方便了临床检测，检测结果准确，降低了交叉配血过程中发生危险的可能性；
2、本申请的抗体稀释剂能够长时间保持抗体的活性，抗体的稳定性好，提高了检测结果的准确性、可靠性，延长了检测卡的使用有效期；
3、本申请的检测卡制备方法简单，适合大规模生产。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
本申请的松三糖购自上海源叶生物科技有限公司；
本申请的泊洛沙姆购自湖北麦凯斯精化科技有限公司；
本申请的香菇多糖购自山东绿叶制药有限公司。
制备例1
抗体稀释剂的制备：
称取规定量的磷酸二氢钠0.2g、磷酸氢二钠0.6g、麦芽糖4.71g、松三糖2.35g、香菇多糖0.94g、卵磷脂8g、氯化钠2g、柠檬酸钠1g、泊洛沙姆0.05g、纳他霉素15mg溶于1L水中，调节溶液pH至7，制得抗体稀释剂。
制备例2
抗体稀释剂的制备：
称取规定量的磷酸二氢钠0.6g、磷酸氢二钠0.2g、麦芽糖5.71g、松三糖5.71g、香菇多糖0.58g、卵磷脂6g、氯化钠1.67g、柠檬酸钠3.33g、泊洛沙姆0.01g、纳他霉素18mg溶于1L水中，调节溶液pH至6，制得抗体稀释剂。
制备例3
抗体稀释剂的制备：
称取规定量的磷酸二氢钠0.3g、磷酸氢二钠0.5g、麦芽糖4.09g、松三糖4.09g、香菇多糖0.82g、卵磷脂7.5g、氯化钠1.75g、柠檬酸钠1.75g、泊洛沙姆0.04g、纳他霉素16mg溶于1L水中，调节溶液pH至6.6，制得抗体稀释剂。
制备例4
抗体稀释剂的制备：
称取规定量的磷酸二氢钠0.5g、磷酸氢二钠0.3g、麦芽糖6.87g、松三糖3.43g、香菇多糖0.7g、卵磷脂6.5g、氯化钠1.8g、柠檬酸钠2.7g、泊洛沙姆0.02g、纳他霉素17mg溶于1L水中，调节溶液pH至6.4，制得抗体稀释剂。
制备例5
抗体稀释剂的制备，与制备例1的不同之处在于：采用8g海藻糖替换麦芽糖、松三糖和香菇多糖。
制备例6
抗体稀释剂的制备，与制备例1的不同之处在于：采用8g蔗糖替换麦芽糖、松三糖和香菇多糖。
制备例7
抗体稀释剂的制备，与制备例1的不同之处在于：包含8g麦芽糖，不含松三糖、香菇多糖。
制备例8
抗体稀释剂的制备，与制备例2的不同之处在于：包含5g氯化钠，不含柠檬酸钠。
制备例9
抗体稀释剂的制备，与制备例2的不同之处在于：包含5g柠檬酸钠，不含氯化钠。
实施例1
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，包括以下步骤：
S1.凝胶的制备：聚丙烯酰胺葡聚糖粉末采用4倍体积的生理盐水浸泡48h，采用生理盐水洗涤1次，再采用蒸馏水洗涤3次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒，收集颗粒大小均匀且完整呈球形凝胶颗粒，得到葡聚糖凝胶；聚丙烯酰胺葡聚糖的粒径为20-50nm；
S2. 抗体稀释：采用制备例1制备的抗体稀释剂对IgM性质的单克隆抗C抗体、IgM性质的单克隆抗c抗体、IgM性质的单克隆抗E抗体、IgM性质的单克隆抗e抗体分别进行稀释；稀释后的IgM性质的单克隆抗C抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗c抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗E抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗e抗体的效价≥64；
S3.凝胶的配制：将步骤S2稀释后的四种抗体分别与步骤S1制备的葡聚糖凝胶按体积比为1:1的比例混合，分别制备得到含IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗c抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶；
S4.分装：将步骤S3制备的四种带有抗体的凝胶分别加入到不同微柱管中，每种凝胶分装两管，每个微柱管分装20μL凝胶，形成八个微柱凝胶管的Rh血型抗原检测卡；
S5.封口：采用铝箔复合封口膜对本实施例制备的Rh血型抗原检测卡进行热封封口。
实施例2
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，包括以下步骤：
S1.凝胶的制备：聚丙烯酰胺葡聚糖粉末采用6倍体积的生理盐水浸泡24h，采用生理盐水洗涤2次，再采用蒸馏水洗涤2次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒，收集颗粒大小均匀且完整呈球形凝胶颗粒，得到葡聚糖凝胶；聚丙烯酰胺葡聚糖的粒径为20-50nm；
S2. 抗体稀释：采用制备例1制备的抗体稀释剂对IgM性质的单克隆抗C抗体、IgM性质的单克隆抗c抗体、IgM性质的单克隆抗E抗体、IgM性质的单克隆抗e抗体分别进行稀释；稀释后的IgM性质的单克隆抗C抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗c抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗E抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗e抗体的效价≥64；
S3.凝胶的配制：将步骤S2稀释后的四种抗体分别与步骤S1制备的葡聚糖凝胶按体积比为5:1的比例混合，分别制备得到含IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗c抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶；
S4.分装：将步骤S3制备的四种带有抗体的凝胶分别加入到不同微柱管中，每种凝胶分装两管，每个微柱管分装25μL凝胶，形成八个微柱凝胶管的Rh血型抗原检测卡；
S5.封口：采用铝箔复合封口膜对本实施例制备的Rh血型抗原检测卡进行热封封口。
实施例3
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例2制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例4
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例2制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例5
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例3制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例6
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例3制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例7
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例4制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例8
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例4制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例9
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例5制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例10
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例5制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例11
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例6制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例12
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例6制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例13
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例7制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例14
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例7制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例15
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例8制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例16
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例8制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例17
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用制备例9制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
实施例18
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例2不同之处在于：步骤S2中采用制备例9制备的抗体稀释剂对抗体进行稀释。
对比例1
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2中采用生理盐水对抗体进行稀释。
对比例2
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2抗体稀释剂中不含糖类。
对比例3
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2抗体稀释剂中不含钠盐。
对比例4
一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2抗体稀释剂中不含卵磷脂。
本申请实施例1-18及对比例1-4制备获得的Rh血型抗原检测卡的使用方法如下：
1. Rh血型抗原检测卡包括八个微柱凝胶管，其中，第一与第五管为含有IgM 性质的单克隆抗C抗体的凝胶管、第二和第六管为含有IgM 性质的单克隆抗c抗体的凝胶管、第三和第七管为含有IgM 性质的单克隆抗E抗体的凝胶管、第四和第八管为含有IgM 性质的单克隆抗e抗体的凝胶管；
2.用生理盐水将待检者红细胞配置成0.5-0.8%浓度，分别加入第一至第四或第五至第八微管中，每管50μL；
3.将微柱凝胶卡垂直竖立，轻敲混匀置离心机内离心，900rpm离心2min，1500rpm离心3min，取出后肉眼判断结果；
4.结果判读：红细胞沉于微柱凝胶的底部为阴性结果，红细胞浮在凝胶表面或胶中为阳性结果，具体判读标准参见表1，判定结果参见表2。
采用本申请实施例1-18和对比例1-4制备获得的血型检测卡以及生产18个月、24个月后的血型检测卡对确定血型的180名志愿者进行血型检测，一共9种血型（CcEe、CCEe、CCee、CCEE、CcEE、Ccee、ccEe、ccEE、ccee），每种血型20名志愿者，实验结果见表3-5。
从表3-5可以看出，本申请实施例1-18制备的血型检测卡能够准确检测样本中的C、c、E、e抗原，检测结果与预定结果相同，检测结果准确、可靠。另外，采用生产18个月及24个月后的血型检测卡对确定血型的样本进行检测时，本申请实施例1-8制备的血型检测卡中的抗体稀释剂能够很好的保持抗体的有效性，生产24个月后的血型检测卡依旧具有较高的准确性。本申请实施例9-18制备的血型检测卡中的抗体稀释剂能够在一定程度上保证抗体的有效性，生产18个月后的血型检测卡依旧具有较高的准确性。而对比例1采用生理盐水稀释抗体，生理盐水无法长期维持抗体的稳定性，所以抗体逐渐失活，无法与样本中的抗原进行特异性结合，进而无法进行血型的检测。对比例2-4与实施例的区别分别为不含糖类、钠盐和卵磷脂，实验结果表明，抗体稀释剂中不含有上述三种物质，抗体的稳定性较差，检测卡的使用有效期较短。
本具体实施方式的实施例均为本申请的较佳实施例，并非依此限制本申请的保护范围，故：凡依本申请的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：包括八个微柱凝胶管，八个所述凝胶管包括两管含有IgM 性质的单克隆抗C抗体的凝胶管、两管含有IgM 性质的单克隆抗c抗体的凝胶管、两管含有IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶管以及两管含有IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶管。
2.根据权利要求1所述的一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：每个所述微柱凝胶管均包括IgM性质的单克隆抗抗体、抗体稀释剂和葡聚糖凝胶；所述抗体稀释剂包括以下组分：
磷酸二氢钠 0.2-0.6g/L；
磷酸氢二钠 0.2-0.6g/L；
糖类 8-12g/L；
卵磷脂 6-8 g/L；
钠盐 3-5g/L；
泊洛沙姆 0.01-0.05g/L；
纳他霉素 15-18mg/L。
3.根据权利要求2所述的一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：所述抗体稀释剂包括以下组分：
磷酸二氢钠 0.3-0.5g/L；
磷酸氢二钠 0.3-0.5g/L；
糖类 9-11g/L；
卵磷脂 6.5-7.5 g/L；
钠盐 3.5-4.5g/L；
泊洛沙姆 0.02-0.04g/L；
纳他霉素 16-17mg/L。
4.根据权利要求2或3所述的一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：所述糖类选用麦芽糖、松三糖和香菇多糖的混合物或海藻糖、麦芽糖、蔗糖中的一种。
5.根据权利要求4所述的一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：所述麦芽糖、松三糖和香菇多糖混合物中三者的质量浓度比为1:（0.5-1）:（0.1-0.2）。
6.根据权利要求2或3所述的一种Rh血型抗原检测卡，其特征在于：所述钠盐选用氯化钠、柠檬酸钠中的一种或两种，氯化钠和柠檬酸钠混合的质量浓度比为1:（0.5-2）。
7.一种权利要求1-6任一所述的Rh血型抗原检测卡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.抗体稀释液的配制：称取规定量的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、糖类、卵磷脂、钠盐、泊洛沙姆、纳他霉素溶于水中，调节溶液pH至6-7；
S2.凝胶的制备：聚丙烯酰胺葡聚糖粉末采用4-6倍体积的生理盐水浸泡24-48h，然后洗涤3-5次，除去凝胶破损碎片和聚集的凝胶颗粒，收集颗粒大小均匀且完整呈球形凝胶颗粒，得到葡聚糖凝胶；
S3. 抗体稀释：采用步骤S1配制的抗体稀释剂对IgM性质的单克隆抗C抗体、IgM性质的单克隆抗c抗体、IgM性质的单克隆抗E抗体、IgM性质的单克隆抗e抗体分别进行稀释，稀释后的IgM性质的单克隆抗C抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗c抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗E抗体的效价≥64、IgM性质的单克隆抗e抗体的效价≥64；
S4.凝胶的配制：将步骤S3稀释后的四种抗体分别与步骤S2制备的葡聚糖凝胶按体积比为(1-5):1的比例混合，分别制备得到含IgM性质的单克隆抗C抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗c抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗E抗体的凝胶、含IgM性质的单克隆抗e抗体的凝胶；
S5.分装：将步骤S4制备的四种带有抗体的凝胶分别加入到不同微柱管中，每种凝胶分装两管，形成八个微柱凝胶管的Rh血型抗原检测卡。
8.根据权利要求7所述的一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，其特征在于：步骤S2中，聚丙烯酰胺葡聚糖的粒径为20-50nm。
9.根据权利要求7所述的一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，其特征在于：步骤S2中，浸泡后的聚丙烯酰胺葡聚糖采用生理盐水洗涤1-2次，再采用蒸馏水洗涤2-3次。
10.根据权利要求7所述的一种Rh血型抗原检测卡的制备方法，其特征在于：步骤S5中，每个微柱管分装20-25μL凝胶。
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