CN106244671A - 一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断检测试剂盒 - Google Patents

一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明试剂盒一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，是通过使用复合稳定剂取代之前的单独的稳定剂来完成的，该复合稳定剂是一种新型的高效稳定剂，但是对不同的生化试剂可能组分含量有所不同，但是对于保护试剂中相关酶类有重要作用，其作用机理主要是复合稳定剂在一定溶质和外界条件下形成一种球形膜，球形膜可以将有机酶类进行包裹，但是当有底物诱导时，球形膜又将酶释放出来参与反应。该方法为生化试剂中的酶参与的生化反应不稳定因素的处理和改良提供了方向，为本发明试剂盒占有市场和长期发张奠定了基础。

Description

一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断检测试剂盒
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，特别涉及运用全自动生化分析仪自动检测人体血清天冬氨酸氨基转移酶活性问题。
背景技术
肝功能的健全与否直接涉及到我们人类自身的生命安全问题，近年来由于经济快速发展，人民生活水平提高，一系列不良问题引起的肝病尤为值得重视。肝病是一种常见的疾病，其危害性较大，严重时刻夺去患者生命，因此对于肝病的前期诊断和预防尤为重要，天冬氨酸氨基转移酶，在体内各组织中广泛分布，其中以心脏活性较高。较高的天冬氨酸氨基转移酶活性暗示了肝脏细胞受损，一般发生于脂肪肝，乙肝，肝硬化等肝胆疾病。
截止目前为止，医院一般采用全自动生化分析仪进行检测，但是生化试剂的不稳定性对该试剂的储存、运输和使用造成了一定的困扰，同时检测结果也容易受到质疑，鉴于以上问题呢，本发明一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，主要是通过重组了一组复合稳定剂，这种方法与以往有人通过简单的添加稳定剂和表面活性剂来延长试剂使用和储存时间是完全不同的。本发明是通过重组多种物质形成一个球形膜，这种膜可以对试剂中所用到的酶进行一个保护作用，但是当酶受到底物诱导时，便会从膜中游离出来参与反应。
发明内容
本发明是一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断试剂盒，本发明试剂盒是由试剂R1和试剂R2两种试剂组成的液体型双试剂检测诊断试剂，其中试剂R1组成为：
三羟甲基氨基缓冲液 0.1mol/l
CTAB 15m mol/L
迭氮钠 0.3g/L
三氯甲烷 1%
NADH 5m mol/L
维生素C氧化酶 3KU/L
天冬氨酸 5m mol/L
复合稳定剂 x%
试剂R2组成为：
甘氨酸缓冲液 0.1mol/L
α-酮戊二酸 4moL/L
苹果酸脱氢酶 2500U/L
复合稳定剂 x%
本发明一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶监测诊断试剂盒，试剂R1和试剂R2中各物质的选择依据：
三羟甲基氨基缓冲液主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，致使检测结果不会受到波动和影响。
NADH还原型辅酶在酶促反应中生成不同形式的辅酶，引起吸光度变化。
CTAB作为一种有效的加速剂，促进离子配位和反应进行。
迭氮钠作为防腐剂，主要是防止试剂在储藏和运输中腐败变质。
三氯甲烷抗胆红素干扰物质，能够有效的去除胆红素干扰。
维生素C氧化酶，氧化维生素C，去除为维生素C引起的干扰。
复合稳定剂，保护作用，保护试剂能够保持高效长期储存和使用
甘氨酸缓冲液主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，致使检测结果不会受到波动和影响。
α-酮戊二酸反应底物，用于生成草酰乙酸。
苹果酸脱氢酶，用于催化草酰乙酸反应生成NAD和苹果酸。
本发明一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，一方面解决了天冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒试剂不稳定问题，另一方面由于本方法材料价格低廉，易于购买和操作，因此本发明试剂盒对提高本试剂盒的市场占有率和销量都奠定了基础。
应用本发明试剂盒，可以在迪瑞系列，迈瑞系列，东芝系列和日立系列全自动生化分析仪上进行操作，具体操作方式以BS-800为例：样本量：试剂R1：试剂R2=10ul:225ul:75ul，检测波长设置为340nm,检测方法为速率法，校准物质以朗道复合校准品为主。
附图说明
图1为本发明试剂与对照试剂稳定性检测结果;
图2为本发明试剂与对照试剂盒的抗干扰能力;
图3为本发明试剂与对照试剂重复性检测结果;
图4为本发明试剂与对照试剂临床检测结果;
图5为本发明试剂与对照试剂相关性图。
具体实施方式
我们将结合图表、实施例对本发明进行说明：
试剂R1组成为：
三羟甲基氨基缓冲液 0.1mol/l
CTAB 15m mol/L
迭氮钠 0.3g/L
三氯甲烷 1%
NADH 5m mol/L
维生素C氧化酶 3KU/L
天冬氨酸 5mmol/L
复合稳定剂 x%
试剂R2组成为：
甘氨酸缓冲液 0.1mol/L
α-酮戊二酸 4moL/L
苹果酸脱氢酶 2500U/L
复合稳定剂 x%
实施例1
本发明在具体实施中，所述的试剂R1为复合稳定剂含量为5.5%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.5g/L
丙三醇 75ml/L
甘露醇 10g/L
拉通X-405 7.5ml/L
葡聚糖-2000 9.5g/L
三羟甲基甲烷 10g/L
迭氮钠 3g/L
本发明在具体实施中，所述的试剂R2为复合稳定剂含量为7.5%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.0g/L
丙三醇 55ml/L
甘露醇 8g/L
拉通X-405 5.5ml/L
葡聚糖-2000 7.5g/L
三羟甲基甲烷 8.0g/L
迭氮钠 3g/L
实施例2
本发明在具体实施中，所述的试剂R1为复合稳定剂含量为7.5%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.5g/L
丙三醇 75ml/L
甘露醇 10g/L
拉通X-405 7.5ml/L
葡聚糖-2000 9.5g/L
三羟甲基甲烷 10g/L
迭氮钠 3g/L
本发明在具体实施中，所述的试剂R2为复合稳定剂含量为7.5%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.5g/L
丙三醇 75ml/L
甘露醇 10g/L
拉通X-405 7.5ml/L
葡聚糖-2000 9.5g/L
三羟甲基甲烷 10g/L
迭氮钠 3g/L
实施例3
本发明在具体实施中，所述的试剂R1为复合稳定剂含量为10%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.5g/L
丙三醇 75ml/L
甘露醇 10g/L
拉通X-405 7.5ml/L
葡聚糖-2000 9.5g/L
三羟甲基甲烷 10g/L
迭氮钠 3g/L
本发明在具体实施中，所述的试剂R2为复合稳定剂含量为5.5%，其组成及含量如下所示：
EDTA-Na2 2.5g/L
丙三醇 75ml/L
甘露醇 10g/L
拉通X-405 7.5ml/L
葡聚糖-2000 9.5g/L
三羟甲基甲烷 10g/L
迭氮钠 3g/L
本发明试剂盒性能检测试验：
稳定性试验检测：
运用本发明实试剂盒（实施例1配方配制）和目前市场上流通的试剂盒进行对比，校准液和质控品分别是朗道926UN和1005UN，使用仪器为全自动生化分析仪BS-800，参数设置如下，波长为340nm，反应方向为反方向，读数点设置为21-27点，样本量：试剂R1：试剂R2=10ul：225ul：75ul，仪器为BS-800。检测结果如图1所示：
通过本实验，我们发现本发明试剂盒在4℃条件下历时4个月之后几乎没有发生任何变化，但是对照试剂在4度℃条件下以降低近10%；37℃条件下，本发明试剂盒和对照试剂盒均有不同程度降低，本发明试剂盒在第30天时降低了2.6%，在120天时几乎不再发生变化，相比之下对照试剂盒，第11天降低几乎10%，120天后降低了33%；45℃条件下本发明试剂盒与4℃条件下几乎没有变化，但是对照试剂盒第7天降低近10%，第120天降低了41%。因此本发明试剂盒在想比对照试剂盒，其稳定性远优于对照试剂盒。
干扰实验
以朗道校准品926UN进行校准，以朗道质控品1005UN做为参考物质，用购买胆红素和维生素C，分别配制成200umol/L的胆红素溶液和50mg/L的维生素C溶液，将溶液取溶解朗道质控品1005UN，暂时称作A液和B液。然后通过倍比稀释配制成不同梯度的质控品，即A原液、稀释2倍、稀释4倍稀释8倍，B原液、稀释2倍、稀释4倍、稀释8倍。运用BS-800全自动生化分析仪进行测试，采用市场上流通天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒作为对照试剂。采用实施例2配方，测试结果如图2所示：
由图2可以看出本发明试剂盒在胆红素含量为200umol/L时，本发明试剂盒几乎不受胆红素干扰影响，但是相比之下对照试剂盒在胆红素含量为100umol/L时已经严重受到胆红素干扰，不能保证检测结果的准确性。对于维生素C从图2中检测结果来看，当维生素C含量在50mg/L以内，对本发明试剂盒不会产生任何干扰，但是对于对照试剂盒，当维生素C含量为25mg/L时检测结果已经偏移了靶值10%。因此可见本发明试剂盒在处理胆红素和维生素C问题上远优于对照试剂盒。
重复性实验
运用朗道校准品926UN进行校准，对朗道质控品1005UN重复测试N=20次，所用试剂为本发明实施例3配方试剂与市场流通天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，使用BS-800全自动生化分析仪进行检测，检测方法在此不在重述。检测结果如图3所示：
通过图3我们可以看出本发明试剂盒与对照试剂盒无论变异系数还是标准差均能满足行业标准要求，二者相差无几。从另一方面也反应出本发明试剂盒能够胜任该试剂盒在市场和医学上的任务和要求。
临床样本检测实验
本发明试剂盒同对比试剂盒对随进N=40个样本进行测试，测试结果如图4，通过该图4记录的数值，进而计算出，本发明试剂盒与市场流通的试剂盒的相关性。本发明试剂盒采用实施例1配方进行检测。检测结果如图4所示：
通过图4和图5说明本发明试剂盒与目前市场流通的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断试剂盒有着良好的相关性，其相关系数r=0.9998。
综上所述，再加上本实验室长时间来的检验数据(有部分数据再次没有呈现),本发明试剂盒中当试剂R1中复合稳定剂的比例为5.5%，试剂R2中复合稳定剂的比例为7.5%时为最好，每个实施例中我们都进行了三组不同比例的检测，每次均是选择较好的一组，本发明试剂盒未将所有数据全部呈现，综合所有检测结果，均以实施例1的配方为最佳方案。

Claims (4)

1.一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测诊断试剂盒，其特征在于，本发明试剂盒是一种液体型双试剂检测诊断试剂盒。
2.根据权利要求１所述的试剂盒，其特征在于本试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成双试剂型检测诊断试剂盒，试剂R2组分为缓冲液、表面活性剂、防腐剂、维生素C氧化酶，NADH，天门冬氨酸，三氯甲烷和复合稳定剂；试剂R2组分为缓冲液，α-酮戊二酸，苹果酸脱氢酶，以及复合稳定剂。
3.根据权利要求1和2所述的试剂盒，其特征在于本发明试剂盒所用的缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液或甘氨酸缓冲液其中的一种。
4.根据权利要求1和2所述的试剂盒，其特征在于所用的稳定剂是一种复合稳定剂，该复合稳定剂是由EDTA-Na2，丙三醇，甘露醇，曲拉通X-405，葡聚糖-2000，三羟甲基甲烷和迭氮钠组成的，其中各组分的含量为：EDTA-Na2为1-5g/L，丙三醇为10-100ml/L，甘露醇为10-30g/L，曲拉通X-405为5-10ml/L，葡聚糖-2000为10-15g/L，三羟甲基甲烷为5-10g/L，迭氮钠为2-5g/L。
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