CN112129951A - 一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 - Google Patents
一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112129951A CN112129951A CN202010974316.6A CN202010974316A CN112129951A CN 112129951 A CN112129951 A CN 112129951A CN 202010974316 A CN202010974316 A CN 202010974316A CN 112129951 A CN112129951 A CN 112129951A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- diluent
- saa
- enzyme
- concentration
- labeled
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 title claims abstract description 55
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 46
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 10
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 9
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims abstract description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 23
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 23
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WCGGWVOVFQNRRS-UHFFFAOYSA-N dichloroacetamide Chemical compound NC(=O)C(Cl)Cl WCGGWVOVFQNRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 4
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 2
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 19
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 3
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 29
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 29
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 4
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/775—Apolipopeptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7095—Inflammation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种SAA化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用,其中稀释液的pH为6.6,由以下成分组成:20~100mM MES缓冲液,0.5~1%NaCl,0.1~1mM二价金属盐,0.1~0.5%Tween‑20,1~5%甘露醇,0.1~1%牛血清白蛋白,0.01~0.1%防腐剂。本发明针对现有技术中的SAA化学发光酶免疫检测试剂盒存在非特异性反应且酶标工作液稳定性差的缺陷,提供了一种针对人血清样蛋白A的碱性磷酸酶标记物性能的稀释液,通过调节组分的pH,对组分中多种成分及其浓度进行筛选和优化优选,从而得到了一种可降低非特异性反应,并提高试剂检测精密度、线性和稳定性,适用于碱性磷酸酶SAA抗体标记物的稀释液。
Description
技术领域
本发明属于生化检测体外诊断试剂技术领域,具体涉及一种SAA化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用。
背景技术
化学发光免疫分析法根据标记物的不同分为三种类型:直接化学发光、酶促化学发光和电化学发光。酶促发光法中所用到的酶标记物,是将一些活性较高的酶与具有特异性的抗原抗体经适当方法联接而成的蛋白复合物。目前常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)。因碱性磷酸酶所用到的底物分子结构中包含有稳定性较强的金刚烷基以及和酶作用产生发光的芳香基团,可持续发光几十分钟,越来越多的化学发光免疫分析法中使用碱性磷酸酶用于标物。
血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A protein,SAA)是由肝脏分泌的一种急性时相反应蛋白。它来自于载脂蛋白家族,是组织淀粉样蛋白A的前体物质。其血浆浓度在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下显著上升,可作为淋巴细胞等免疫细胞的趋化因子;并上调多种炎症因子(如TNF、IL-6及IL-8等)的表达。病毒感染时SAA明显升高,感染后4-6h即升高,康复期消失更快,急性期感染病人增高幅度反映病情严重程度。某些疾病,如病毒感染、移植排斥反应、冠心病等,SAA的敏感性高于CRP,可为临床提供更好的诊疗依据。
目前市面上关于检测SAA的试剂盒大部分都是使用比浊法、层析法或酶联免疫吸附法等,使用化学发光酶免疫分析法的SAA试剂盒相对较少,主要是因为人血清中含有碱性磷酸酶的同工酶,可能存在由于非特异性吸附造成的非特异性发光反应,导致测定结果不准确。其次,碱性磷酸酶标记物存在系列缺陷,其中最大的难点就是增加其稳定时间。标记好抗体的碱性磷酸酶原液的保存液中会添加20-50%的甘油,在2-8℃中短期保存、在-20℃中保存一年左右。在制备试剂盒中的工作液时,往往是将标记原液稀释百倍甚至千倍以上,导致其稳定性大大降低。然而由于化学发光酶免疫分析法的灵敏度高、结果稳定误差小,因此在SAA化学发光酶免疫检测试剂盒中使用一种既能减少非特异性反应又能长期保持酶高活性的酶标稀释液尤为重要。而目前少有的化学发光免疫分析法用于检测SAA的试剂盒中,都没有明确针对人血清样蛋白A的碱性磷酸酶标记物性能所研究的酶标稀释液。
发明内容
本发明针对现有技术存在的缺陷,提供了一种SAA化学发光酶免疫检测酶标稀释液,通过对稀释液中多种组分及其浓度进行优选,得到了一种可降低非特异性反应、提高试剂检测精密度和稳定性的稀释液。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种SAA化学发光酶免疫检测酶标稀释液,所述稀释液用于碱性磷酸酶SAA抗体标记物工作液的配制,所述稀释液的pH为6.6,由以下成分组成:20~100mM MES缓冲液,0.5~1%NaCl,0.1~1mM二价金属盐,0.1~0.5%Tween-20,1~5%甘露醇,0.1~1%牛血清白蛋白,0.01~0.1%防腐剂,其中所述百分比均为质量百分比。
进一步的,所述MES缓冲液的浓度为50mM。
进一步的,所述Tween-20的浓度为0.25%。
进一步的,所述甘露醇的浓度为3%。甘露醇作为冻干保护剂,保护稀释液中抗体和酶的稳定性。
进一步的,所述牛血清白蛋白的含量为0.25~0.75%。牛血清白蛋白作为酶的稳定剂,可维持酶的高活性,并减少非特异性反应。
更进一步的,所述牛血清白蛋白的浓度为0.25%
进一步的,所述二价金属盐选自氯化镁、氯化锌、硫酸镁、硫酸锌中的一种或多种。
进一步的,所述二价金属盐为5mM氯化镁和0.1mM氯化锌。
进一步的,所述防腐剂选自Proclin系列、KroVin系列、叠氮化钠、二氯乙酰氨、咪唑烷基脲、硫柳汞、庆大霉素中的一种或多种。
本发明还提供上述稀释液在碱性磷酸酶SAA抗体标记物工作液中的应用。
本发明还提供了一种SAA化学发光酶免疫检测试剂盒,其中包括所述稀释液配制成的酶标工作液。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明针对现有技术中的SAA化学发光酶免疫检测试剂盒存在非特异性反应且酶标工作液稳定性差的缺陷,提供了一种针对人血清样蛋白A的碱性磷酸酶标记物性能的酶标稀释液,通过调节组分的pH,对组分中多种成分如:缓冲液、表面活性剂、保护剂等及其浓度进行优选,得到了一种可降低非特异性反应,同时可提高试剂检测精密度、线性和稳定性,适用于碱性磷酸酶SAA抗体标记物的稀释液,并将其应用于SAA化学发光酶免疫检测试剂盒中。
附图说明
图1为本发明实施例6中包含组6-1配方的SAA化学发光试剂盒与西门子比浊试剂检测结果的相关性检测图。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
以下各实施例中仅对检测试剂中的碱性磷酸酶SAA抗体标记物的稀释液进行优化,其余试剂以及使用方法与常规试剂和常规使用方法相同,其中检测步骤为:添加10μL待测样本于一支反应管内,全自动发光仪自动将样本稀释30倍,同时添加经稀释液稀释的50μL酶标抗体工作液和50μL磁珠抗体工作液于另一只反应管中缓和,然后取稀释后的待测样本添加到上述混有酶标抗体工作液和磁珠抗体工作液的反应管中,混匀后温育5min,然后利用全自动发光仪清洗掉未结合的酶标抗体,最后添加发光底物,并测试结果。
各实施例中稀释液的配制方法为:按照常规方法配制相应浓度的缓冲液,并根据缓冲液的质量加入相应质量百分比的NaCl、表面活性剂、防腐剂、BSA等物质,并加入二价金属盐使其终浓度为目标浓度,调节pH后即得稀释液,用于碱性磷酸酶SAA抗体标记物工作液的配制。
实施例1缓冲液优化
本实施例主要对稀释液中的缓冲液及其浓度进行优化,以减少非特异性反应,进行比较的缓冲液包括:20~100mM的三种缓冲液,分别为Tris缓冲液(三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液)、PB缓冲液(磷酸盐缓冲液)和MES缓冲液(2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液),按照下表配制不同的稀释液:
将上述9种不同的稀释液分别配制成酶标工作液,并按照常规方法检测不同浓度SAA校准品的光子数、信噪比S/N和线性相关系数R2,结果如表1所示。
表1不同缓冲液对光子数、信噪比和线性的影响
其中若0点光子值(即校准品浓度为0时的光子数)降低,但信噪比(S/N)无明显变化,则说明稀释液改变的配方压低了整体的反应性,若0点光子数降低,信噪比相对增大,则说明改变的配方降低了非特异性反应。根据表1的测定结果,结合0点光子值、信噪比和线性的结果,其中组1-7、1-8和1-9的信噪比和线性相关系数显著高于其他组,且0点光子数显著降低,即选用MES缓冲液制备稀释液后,非特异性反应显著降低,且线性显著提高,进一步的,当MES缓冲液的浓度为50mM时,效果最优。
实施例2表面活性剂优化
本实施例主要对稀释液中的表面活性剂及其浓度进行优化,以提高试剂的检测精密度,首先是对表面活性剂的种类进行优选,进行比较的表面活性剂包括:质量浓度0.2%的六种表面活性剂,分别为Tween-20、Triton X-100、Triton X-114、PVP10、PVP 40与花王A90,按照下表配制不同的稀释液:
将上述9种不同的稀释液分别配制成酶标工作液,并按照常规方法检测不同低、中、高三个浓度样本(分别为2mg/L、50mg/L和200mg/L)各10次,计算10次检测结果的变异系数(CV,%),结果如表2所示。
表2表面活性剂种类对精密度的影响
其中变异系数(CV)越小,说明试剂的检测精密度越高,根据表2的结果,其中组2-2,在检测低、中、高浓度样本时,CV值均比其他表面活性剂显著降低,即添加有Tween-20的稀释液可显著提高检测试剂的检测精密度。
接着对筛选出的Tween-20进行浓度优化,具体为:
并按照上述方法检测各试剂的精密度,即变异系数,结果如表3所示。
表3 Tween-20浓度对精密度的影响
根据表3的结果,体系中表面活性剂Tween-20的浓度对精密度也会产生一定的影响,其中组2-10、2-11和2-12的CV值均低于4%,显著低于其他组,即当稀释液中Tween-20的浓度为0.1%~0.5%时,检测试剂的精密度较优,更进一步地,当Tween-20的浓度为0.25%时,检测试剂的精密度最好。
实施例3稀释液pH值优化
本实施例主要对稀释液中的pH值进行优化,以提高试剂的稳定性。其中用于比较的pH包括:6.0、6.2、6.4、6.6和6.8,各稀释液的配方如下:
将上述5种不同的稀释液分别配制成酶标工作液,分别检测试剂在4℃保存7天和37℃热处理7天后,用于检测不同浓度校准品的信号,并计算37℃热处理7天后的信号相比于4℃保存7天后的信号保留率(%),结果如表4所示。
表4热处理7天后的信号保留率
其中37℃热处理7天后的信号保留率越高,则表明试剂的热稳定性强,根据表4的结果,其中组3-4在各个校准品浓度下的信号保留率均在90%左右,高于其他组,即当稀释液的pH为6.6时,试剂的稳定性最好。
实施例4多元醇类保护剂优化
本实施例主要对稀释液中多元醇类保护剂种类及浓度进行优化,以提高试剂的稳定性。其中用于比较的多元醇包括:1%-5%的甘油、山梨醇和甘露醇,各稀释液的配方如下:
将上述9种不同的稀释液分别配制成酶标工作液,分别将试剂在4℃保存7天和37℃热处理7天后,用于检测不同浓度校准品的信号,并计算37℃热处理7天后的信号相比于4℃保存7天后的信号保留率(%),并将测定结果与实施例3中的组3-4进行比较,结果如表5所示。
表5不同多元醇对稀释液稳定性的影响
根据表5的测定结果,其中组4-7、4-8和4-9在各个校准品浓度下的信号保留率均高于90%,显著高于其他组,并且相比于实施例3中的稀释液组3-4,组4-7、4-8和4-9的信号保留率有不同程度的提高,即在稀释液中添加甘露醇可进一步提高试剂的稳定性,并且当甘露醇浓度为3%时(组4-8),得到的检测试剂的稳定性最好。
实施例5牛血清白蛋白浓度优化
牛血清白蛋白可作为碱性磷酸酶的稳定剂,可维持酶的高活性,并减少非特异性反应,然而稀释液中牛血清白蛋白的浓度可能影响SAA化学发光酶免疫检测试剂的稳定性,因此本实施例主要对稀释液中的牛血清白蛋白(BSA)含量,即质量浓度(%)进行优化,各组的配方如下:
将上述5组不同的稀释液分别配制成酶标工作液,按照上述方法计算37℃热处理7天后的信号相比于4℃保存7天后的信号保留率(%),并将测定结果与实施例3中的组3-4进行比较,结果如表6所示。
表6 BSA含量对稀释液稳定性的影响
根据表6的测定结果,随着BSA含量的降低,检测试剂的信号保留率有所提高,即稳定性呈上升趋势,然而BSA含量过低,如组5-5,会导致信号保留率高于100%,即37℃热处理后相比于4℃保存,其信号保留率也发生了显著变化,即稳定性下降。只有组5-4的信号保留率在各校准品浓度下,信号保留率都接近100%,即当稀释液中BSA含量为0.25%时,试剂的稳定性最优。
实施例6不同稀释液的比较
本实施例主要将本发明优化得到的稀释液与现有技术公开的碱性磷酸酶化学发光免疫检测稀释液进行比对和分析,其中组6-1为本发明优化得到的稀释液,组6-2和组6-3为专利CN109900900A公开的稀释液配方,组6-4为专利CN102115737B公开的稀释液配方,组6-5为专利CN110824159A公开的稀释液配方,配方中各物质比对如下表所示:
按照上表的配方分别配制5组不同的稀释液用于SAA碱性磷酸酶化学发光免疫检测,并对比各组在不同样本浓度下的信噪比、线性、精密度和稳定性。按照实施例1的方法检测信噪比和线性,信噪比与线性相关系数结果如表7所示;按照实施例2的方法检测精密度,变异系数值如表8所示,按照实施例3的方法检测稳定性,37℃热处理后的信号保留率如表9所示。
表7不同稀释液对信噪比和线性的影响
表8不同稀释液对精密度的影响
表9不同稀释液对稳定性的影响
综合表7-9的检测结果,本发明经过优化后得到的稀释液配方,对于SAA化学发光酶免疫检测试剂的综合使用性能最好,信噪比、线性、精密度和稳定性的性能均最优。
接着将本发明优化得到的稀释液配方即组6-1的配方,配制成SAA抗体酶标工作液,并配合常规使用的SAA抗体磁珠工作液组成SAA化学发光试剂盒,并用该试剂盒检测西门子比浊试剂测定的样本,其临床相关性如附图1所示,计算得到相关性R2大于0.98,即相关性好,可供检测使用。
综上,本发明通过对稀释液的组分及含量进行筛选和优化,得到了一个综合性能最优异,可显著降低非特异性反应,提高试剂检测精密度、线性和稳定性,特异性针对人血清样蛋白A的碱性磷酸酶标记物的稀释液。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种SAA化学发光酶免疫检测酶标稀释液,所述酶标稀释液用于碱性磷酸酶SAA抗体标记物工作液的配制,其特征在于,所述稀释液的pH为6.6,由以下成分组成:20~100mMMES缓冲液,0.5~1%NaCl,0.1~1mM二价金属盐,0.1~0.5%Tween-20,1~5%甘露醇,0.1~1%牛血清白蛋白,0.01~0.1%防腐剂,其中所述百分比均为质量百分比。
2.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述MES缓冲液的浓度为50mM。
3.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述Tween-20的浓度为0.25%。
4.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述甘露醇的浓度为3%。
5.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述牛血清白蛋白的含量为0.25~0.75%。
6.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述二价金属盐选自氯化镁、氯化锌、硫酸镁、硫酸锌中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的稀释液,其特征在于,所述二价金属盐为5mM氯化镁和0.1mM氯化锌。
8.根据权利要求1所述的稀释液,其特征在于,所述防腐剂选自Proclin系列、KroVin系列、叠氮化钠、二氯乙酰氨、咪唑烷基脲、硫柳汞、庆大霉素中的一种或多种。
9.如权利要求1所述的稀释液在碱性磷酸酶SAA抗体标记物工作液中的应用。
10.一种SAA化学发光酶免疫检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括权利要求1-8任一项所述的稀释液配制成的酶标工作液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010974316.6A CN112129951A (zh) | 2020-09-16 | 2020-09-16 | 一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010974316.6A CN112129951A (zh) | 2020-09-16 | 2020-09-16 | 一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112129951A true CN112129951A (zh) | 2020-12-25 |
Family
ID=73846835
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010974316.6A Pending CN112129951A (zh) | 2020-09-16 | 2020-09-16 | 一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112129951A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114200125A (zh) * | 2021-12-06 | 2022-03-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1989007271A1 (en) * | 1988-01-28 | 1989-08-10 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoassays using monoclonal antibodies directed against natural binding proteins |
JP2003009857A (ja) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Asahi Kasei Corp | アルカリホスファターゼの安定化方法 |
CN102628863A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-08-08 | 上海蓝怡科技有限公司 | 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液 |
US20150241414A1 (en) * | 2014-02-26 | 2015-08-27 | Canon Kabushiki Kaisha | Alkaline phosphatase stabilizer, immunotest kit, preservation method and immunotest method |
CN107656071A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-02-02 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种NT‑ProBNP检测试剂盒及其使用方法 |
CN107907691A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种肌红蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
CN107942072A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 肾损伤因子1检测试剂盒 |
CN108088839A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-29 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒 |
CN110824159A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-02-21 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及其应用 |
-
2020
- 2020-09-16 CN CN202010974316.6A patent/CN112129951A/zh active Pending
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1989007271A1 (en) * | 1988-01-28 | 1989-08-10 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoassays using monoclonal antibodies directed against natural binding proteins |
JP2003009857A (ja) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Asahi Kasei Corp | アルカリホスファターゼの安定化方法 |
CN102628863A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-08-08 | 上海蓝怡科技有限公司 | 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液 |
US20150241414A1 (en) * | 2014-02-26 | 2015-08-27 | Canon Kabushiki Kaisha | Alkaline phosphatase stabilizer, immunotest kit, preservation method and immunotest method |
CN107907691A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-13 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种肌红蛋白检测试剂盒及其使用方法 |
CN107942051A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法 |
CN107656071A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-02-02 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种NT‑ProBNP检测试剂盒及其使用方法 |
CN107942072A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 肾损伤因子1检测试剂盒 |
CN108088839A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-29 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒 |
CN110824159A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-02-21 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ANDREA LORINCZ, ET AL.: "Specificity of Immunoreactions: The Importance of Testing Specificity in Each Method." * |
JOHNSON.G.ΕLOWERY K.M.: "及 缓冲液成分对抗茶碱单克隆抗体特异性的影响" * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114200125A (zh) * | 2021-12-06 | 2022-03-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法 |
CN114200125B (zh) * | 2021-12-06 | 2024-02-13 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7955792B2 (en) | Diluent for norovirus or sapovirus specimen and method for detecting virus | |
CN102301237B (zh) | 用于肝纤维化诊断的生物标记 | |
CN108398551B (zh) | 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法 | |
CN109863406B (zh) | 用于测定维生素d的方法和成分 | |
CN112014577B (zh) | 一种提高gpc3检测灵敏度的试剂盒及其制备方法 | |
CN112526140A (zh) | 测定超敏肌钙蛋白t含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
CN112679605A (zh) | 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
CN103033624A (zh) | 一种人髓过氧化物酶化学发光免疫检测试剂盒 | |
CN113311169A (zh) | 一种测定免疫球蛋白g4的试剂盒及其制备方法 | |
Yeo et al. | A rapid, automated enzymatic fluorometric assay for determination of D-arabinitol in serum | |
CN112129951A (zh) | 一种saa化学发光酶免疫检测酶标稀释液及其应用 | |
CN109704954B (zh) | 3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸的衍生物、均相酶免疫检测试剂及其制备方法 | |
CN113150133B (zh) | 针对SARS-CoV-2的单克隆抗体或其抗原结合片段 | |
CN117434274A (zh) | 一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法 | |
CN108362892B (zh) | 一种降钙素原胶体金免疫比浊法检测试剂 | |
JP2911602B2 (ja) | 診断のための補助物としての酵素指標の測定 | |
CN116500251A (zh) | 胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒 | |
CN113238055A (zh) | 空间邻近化学发光法检测降钙素原的试剂盒及其检测方法和应用 | |
CN111505303A (zh) | 化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白试剂盒及使用方法 | |
CN115651065A (zh) | 一种用于肝纤维化和肝硬化检测的试剂盒 | |
CN111825663B (zh) | 一种11-脱氢血栓烷素b2衍生物及其制备方法与11-脱氢血栓烷素b2检测试剂 | |
CN115353566A (zh) | 用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用 | |
CN107271416B (zh) | 肌红蛋白检测用试剂体系 | |
WO2019169798A1 (zh) | 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及糖尿病抗体谱检测试剂盒及其制备方法 | |
CN112485447A (zh) | 一种测定补体C1q的试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201225 |