CN102405845A - 一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：选取观赏百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精和0.1％升汞处理，然后用无菌水冲洗5～7次；将灭菌好的鳞片切成1-2cm2小块，接种在诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导23～27天出芽成为鳞茎丛；将诱导的鳞茎丛切取2～3个单芽转接至增殖培养基上进行增殖培养25～35天；在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为2～4cm的丛芽切成单芽接种至生根培养基上培养生根20-26天成为试管苗；将试管苗进行炼苗后清洗再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理。本发明加大了繁殖系数，加快繁殖速度，达到脱毒复壮，避免了多代繁殖常造成退化以及种间杂交不亲合等问题。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。
【背景技术】
百合是重要的切花、盆花和庭院用植物材料。传统的百合繁殖方法如分球、分珠芽或鳞片扦插、鳞片包埋等，存在繁殖系数较小，多代繁殖常造成退化以及种间杂交不亲合等问题。依靠传统无性繁殖法繁殖，病毒逐代传递积累，危害日趋严重，影响百合花卉的规模生产和应用。
【发明内容】
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种通过组织培养对观赏百合进行快速繁殖的方法，适于观赏百合的产业化生产，能够满足观赏百合的大量市场需求。
本发明为了实现上述目的，采用以下技术方案：
一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与灭菌：选取观赏百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精处理5～10s，用0.1％升汞处理5～15min，然后用无菌水冲洗5～7次；
(2)鳞茎丛的诱导：将灭菌好的鳞片切成1-2cm2小块，接种在MS基本培养基附加α-萘乙酸(NAA)1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L的诱导培养基上，在温度为23～27℃，光照强度为2000lx，光照周期为12小时/天的诱导条件下进行诱导23～27天出芽成为鳞茎丛；
(3)鳞茎丛的增殖培养：将诱导的鳞茎丛切取2～3个单芽转接至MS基本培养基附加6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L的增殖培养基上，在温度为23～27℃，光照强度为2000lx，光照周期为12小时/天的条件下进行增殖培养25～35天；
(4)生根培养：在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为2～4cm的丛芽切成单芽接种至MS基本培养基附加吲哚丁酸(IBA)0.5mg/L的生根培养基上，在温度为23～27℃，光照强度为2000lx，光照周期为12小时/天的条件下培养生根2026天成为试管苗；
(5)试管苗的移栽：将试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基，再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理，即得观赏百合幼苗。
如上所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述观赏百合为莫娜(Lilium Mona)、黄天霸(Lilium Manissa)、巴巴拉(Lilium Barbaresco)、索邦(Lilium Sorbonne)中的一种。
本发明的优点在于：利用组织培养基加大繁殖系数，加快繁殖速度，达到脱毒复壮，促进了百合商品种球的生产和百合新品种的培育，避免了多代繁殖常造成退化以及种间杂交不亲合等问题。
由于组培快繁条件可以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个周期，因此在百合的生产上有重要应用价值。本发明适用于工厂化生产，快速大量繁殖百合鳞茎，培育无病毒苗，能够带动农户育苗致富，取得良好经济效益。
【具体实施方式】
下面结合具体实施例来进一步说明本发明观赏百合的组织培养快速繁殖方法：
实施例1
(1)选取莫娜百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精处理5s，再用0.1％升汞处理15min，然后用无菌水冲洗5次；
(2)将灭菌好的鳞片切成1cm2小块，接种在MS附加不同浓度的NAA和6-BA诱导培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的诱导条件下诱导25天出芽成为鳞茎丛，诱导结果如表1所示；
表1
| 培养基号 | NAA(mg/L) | 6-BA(mg/L) | 诱导率(％) |
| 1 | 0.5 | 0.1 | 42.8 |
| 2 | 0.5 | 0.2 | 63.4 |
| 3 | 0.5 | 0.5 | 78.6 |
| 4 | 1 | 0.1 | 67.3 |
| 5 | 1 | 0.2 | 84.6 |
| 6 | 1 | 0.5 | 96.5 |
| 7 | 2 | 0.1 | 78.3 |
| 8 | 2 | 0.2 | 64.8 |
| 9 | 2 | 0.5 | 73.5 |
(3)将诱导的鳞茎丛切取2个单芽转接至MS+6-BA 1.0mg/L+不同浓度NAA增殖培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下进行增殖培养30天，增值结果如表2所示；
表2
(4)在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为2cm的丛芽切成单芽接种至MS+IBA 0.5mg/L生根培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下培养生根20天成为试管苗；
(5)选取根长1～2cm试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理至适应外界环境，即得莫娜百合幼苗，移栽成活率在90％以上。
实施例2
(1)选取巴巴拉百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精处理10s，再用0.1％升汞处理5min，然后用无菌水冲洗7次；
(2)将灭菌好的鳞片切成2cm2小块，接种在MS附加不同浓度的NAA和6-BA诱导培养基上，在温度23℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的诱导条件下诱导27天出芽成为鳞茎丛，诱导结果如表3所示：
表3
| 培养基号 | NAA(mg/L) | 6-BA(mg/L) | 诱导率(％) |
| 1 | 0.5 | 0.1 | 43.2 |
| 2 | 0.5 | 0.2 | 62.8 |
| 3 | 0.5 | 0.5 | 78.2 |
| 4 | 1 | 0.1 | 67.8 |
| 5 | 1 | 0.2 | 84.1 |
| 6 | 1 | 0.5 | 96.8 |
| 7 | 2 | 0.1 | 78.8 |
| 8 | 2 | 0.2 | 64.2 |
| 9 | 2 | 0.5 | 73.1 |
(3)将诱导的鳞茎丛切取3个单芽转接至MS+6-BA 1.0mg/L+不同浓度NAA增殖培养基上，在温度23℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下进行增殖培养25天，增值结果如表4所示；
表4
(4)在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为4cm的丛芽切成单芽接种至MS+IBA 0.5mg/L生根培养基上，在温度23℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下培养生根23天成为试管苗；
(5)选取根长1～2cm试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理至适应外界环境，即得巴巴拉百合幼苗，移栽成活率在90％以上。
实施例3
(1)选取黄霸天百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精处理10s，再用0.1％升汞处理15min，然后用无菌水冲洗7次；
(2)将灭菌好的鳞片切成1cm2小块，接种在MS+NAA 1.0mg/L+6-BA0.5mg/L诱导培养基上，在温度27℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的诱导条件下诱导23天出芽成为鳞茎丛，
(3)将诱导的鳞茎丛切取3个单芽转接至MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L增殖培养基上，在温度27℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下进行增殖培养30天，接种个数30个，增殖后总芽数为318个；
(4)在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为3cm左右的丛芽切成单芽接种至MS+IBA 0.5mg/L生根培养基上，在温度27℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下培养生根25天成为试管苗；
(5)选取根长1～2cm试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理至适应外界环境，即得黄霸天百合幼苗，移栽成活率在90％以上。
实施例4
(1)选取索邦百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用75％酒精处理8s，再用0.1％升汞分别处理10min，然后用无菌水冲洗6次；
(2)将灭菌好的鳞片切成1cm2小块，接种在MS+NAA 1.0mg/L+6-BA0.5mg/L诱导培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的诱导条件下诱导25天出芽成为鳞茎丛；
(3)将诱导的鳞茎丛切取3个单芽转接至MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L增殖培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下进行增殖培养35天，接种个数30个，增殖后总芽数为320个；
(4)在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为2～3cm的丛芽切成单芽接种至MS+IBA 0.5mg/L生根培养基上，在温度25℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天的条件下培养生根26天成为试管苗；
(5)选取根长1～2cm试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基再移栽到黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成的营养基质中进行栽培管理至适应外界环境，即得索邦百合幼苗，移栽成活率在90％以上。
Claims (10)
1.一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与灭菌：选取百合中间层无损伤的鳞片用清水清洗干净，再依次用酒精和升汞溶液进行处理，然后用无菌水冲洗5～7次；
(2)鳞茎丛的诱导：将灭菌好的鳞片切成小块，接种在诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导23～27天出芽成为鳞茎丛；
(3)鳞茎丛的增殖培养：将诱导的鳞茎丛切取2～3单芽转接至增殖培养基上进行增殖培养25～35天；
(4)生根培养：在增殖的鳞茎丛中选取叶片高度为2～4cm的丛芽切成单芽接种至生根培养基上培养生根20-26天为试管苗；
(5)试管苗的移栽：将试管苗进行炼苗，将炼苗后的试管苗洗净根部的培养基再移栽到营养基质中进行栽培管理，即得观赏百合幼苗。
2.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述用酒精和升汞溶液进行处理的步骤为用75％酒精处理5～10s，再用0.1％升汞处理5～15min。
3.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述鳞茎丛的诱导步骤中的鳞片小块为1-2cm2大小。
4.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述诱导培养基为MS基本培养基附加α-萘乙酸1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述诱导条件为温度23～27℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天。
6.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述增殖培养基为MS基本培养基附加6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L，α-萘乙酸0.5mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述生根培养基为MS基本培养基附加吲哚丁酸0.5mg/L。
8.根据权利要求5所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述增殖培养条件和生根培养条件同诱导条件相同为温度23～27℃，光照强度2000lx，光照周期12小时/天。
9.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述营养基质为黄心土和蛭石按体积比1∶1混合而成。
10.根据权利要求1所述的一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法，其特征在于所述观赏百合的品种为莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦中的一种。
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