CN114208665A - 布鲁堡油点百合快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法，包括：根据预设筛选要求筛选布鲁堡油点百合的叶龄不高于15天的叶片，经消毒灭菌，切成小块，得外植体；将外植体接种到诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导培养14～21天，得丛生芽；将丛生芽切分成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养25～35天，得增殖苗；将增殖苗接种到生根培养基上，进行生根培养12～20天，得生根苗；将生根苗进行炼苗，移栽到营养基质中进行栽培，以得到布鲁堡油点百合幼苗。本发明提供的快速繁殖方法可有效加快布鲁堡油点百合的繁殖速度，加大布鲁堡油点百合的繁殖系数，并且能保持稳定的性状，满足大规模的生产需要。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法。
背景技术
布鲁堡油点百合(Ledebouria caesiomontana)属天冬门科油点百合属多年生草本植物，原产非洲肯尼亚、南非等国，生长在潮湿的森林中及林缘，以及岩石缝和草丛中，其是喜光照植物，生长适温为20～30℃，低于10℃则停止生长。布鲁堡油点百合植株矮胖，叶片上面分布着椭圆形的油状斑点，紫红色的鳞茎肥大呈酒瓶状，是一种很好的小形盆栽观赏植物，具有较高的市场经济价值。
我国鲜有布鲁堡油点百合栽培扩繁技术的报道，其与百合科百合属植物不同科属，传统百合组培方法并不适用于布鲁堡油点百合的培养。现有布鲁堡油点百合一般采用分株的方式进行繁殖，但生长缓慢，自然繁殖系数低，无法满足大规模的生产需要。
发明内容
针对现有布鲁堡油点百合繁殖速度缓慢，繁殖系数低，无法满足大规模的生产需要的问题，本发明提供了一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供了一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法，包括：
根据预设筛选要求筛选布鲁堡油点百合的叶龄不高于15天的叶片，经消毒灭菌，切成小块，得外植体；
将所述外植体接种到诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导培养14～21天，得丛生芽；
将所述丛生芽切分成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养25～35天，得增殖苗；
将所述增殖苗接种到生根培养基上，进行生根培养12～20天，得生根苗；
将所述生根苗进行炼苗，移栽到营养基质中进行栽培，以得到布鲁堡油点百合幼苗。
优选的，所述消毒灭菌包括：用清水冲洗15～20分钟，接着用2％的次氯酸钠溶液消毒灭菌12～15分钟，再用无菌水清洗4～5次。
优选的，外植体的长度为1.3～1.7cm，宽度为0.7～0.9cm。
优选的，所述诱导培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA。
优选的，所述诱导培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和3.0mg/L的6-BA。
优选的，所述诱导培养基还包括6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖；所述诱导培养基的pH为5.8～6.0。
优选的，所述诱导培养的温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d。
优选的，所述增殖培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA。
优选的，所述生根培养基包括MS培养基和0.1mg/L的NAA。
优选的，所述营养基质包括泥炭土、珍珠岩和赤玉土；所述泥炭土、珍珠岩和赤玉土的体积比为3:1:1。
本发明提供的布鲁堡油点百合快速繁殖方法利用布鲁堡油点百合叶片作为外植体，通过确定外植体繁殖各阶段的培养基及培养条件，大大地提高了布鲁堡油点百合外植体的丛生芽诱导效果，同时丛生芽分化速度快、分化量大、质量好，生根培养后布鲁堡油点百合幼苗移栽存活率可达98％。通过本发明提供的繁殖方法，能够极大地缩短布鲁堡油点百合的繁殖周期，加大布鲁堡油点百合的繁殖系数，并且能保持稳定的性状，能够满足大规模的生产需要。
附图说明
图1为本发明提供的布鲁堡油点百合的外植体接种于诱导培养基进行培养7天后的生长图；
图2为本发明提供的布鲁堡油点百合的外植体接种于诱导培养基进行培养12天后的生长图；
图3为本发明提供的布鲁堡油点百合的外植体接种于诱导培养基进行培养15天后的生长图；
图4为本发明提供的布鲁堡油点百合的丛生芽接种于增殖培养基进行培养30天后的生长图；
图5为本发明提供的布鲁堡油点百合的增殖苗接种于生根培养基进行培养14天后的生长图；
图6为本发明提供的布鲁堡油点百合的生根苗移栽于营养基质进行栽培20天后的生长图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
在本发明中，所涉及的MS培养基是指Murashige and Skoog培养基，所涉及的NAA是指萘乙酸，所涉及的6-BA是指6-苄氨基腺嘌呤。
本发明实施例公开了一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法，包括：
S10、根据预设筛选要求筛选布鲁堡油点百合的叶龄不高于15天的叶片，经消毒灭菌，切成小块，得外植体。
可理解地，筛选出无病虫害，生长茂盛，外观整齐干净的布鲁堡油点百合植株，选取其叶龄不高于15天的叶片。进一步的，用纸巾轻轻擦去叶片表面的灰尘泥土，然后用清水冲洗15～20分钟，接着在超净工作台上用2％的次氯酸钠溶液消毒灭菌12～15分钟，再用无菌水清洗4～5次，最后用无菌滤纸吸干叶片表层水分后备用。进一步的，将经消毒灭菌的叶片在接种盘上裁切成长度为1.3～1.7cm，宽度为0.7～0.9cm的小块备用，即得布鲁堡油点百合的外植体。将叶片进行消毒灭菌处理可以有效避免外植体在繁殖过程中受到细菌感染。
S20、将所述外植体接种到诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导培养14～21天，得丛生芽。
可理解地，将外植体分别接种于诱导培养基上，每个诱导培养基可接种3～5个外植体，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，以获得丛生芽。该培养条件有利于外植体分化出丛生芽。
在优选的实施例中，诱导培养基以MS培养基为基础培养基，并添加一定浓度的植物生长激素，具体的，可添加0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA，或者添加0.4mg/L的NAA、3.0mg/L的6-BA。进一步的，还可以添加6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，以保证诱导培养基可以满足外植体生长所需的营养供给。进一步的，可调节诱导培养基的pH为5.8～6.0，所有培养基均在121℃、108kPa下灭菌20分钟。
S30、将所述丛生芽切分成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养25～35天，得增殖苗。
可理解地，将培养好的丛生芽切分成单株芽，并将单株芽转入增殖培养基上进行增殖培养，每个增殖培养基可以接种4～8株单芽，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，以获得增殖苗。
在优选的实施例中，增殖培养基以MS培养基为基础培养基，并添加一定浓度的植物生长激素，具体的，可添加0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA。进一步的，还可以添加6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，以保证增殖培养基可以满足生长营养供给。进一步的，可调节增殖培养基的pH为5.8～6.0，所有培养基均在121℃、108kPa下灭菌20分钟。
S40、将所述增殖苗接种到生根培养基上，进行生根培养12～20天，得生根苗。
可理解地，当增殖苗长至2～3cm时，选取分化出3～4片真叶的增殖苗并将其转入生根培养基上进行生根培养，每个生根培养基可以接种4～8株增殖苗，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，以获得生根苗。
在优选的实施例中，生根培养基以MS培养基为基础培养基，并添加一定浓度的植物生长激素，具体的，可添加0.1mg/L的NAA。进一步的，还可以添加6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，以保证生根培养基可以满足生长营养供给。进一步的，可调节生根培养基的pH为5.8～6.0，所有培养基均在121℃、108kPa下灭菌20分钟。
S50、将所述生根苗进行炼苗，移栽到营养基质中进行栽培，以得到布鲁堡油点百合幼苗。
可理解地，将生根较好的生根苗的培养基瓶盖揭开，继续在温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的条件下炼苗2～3天，然后用镊子轻轻的夹出生根苗，在流水下轻轻冲洗掉其根部的培养基，将其栽种于经过消毒处理的营养基质中进行栽培。进一步的，该营养基质用小号育苗盆分装，每盆可栽种1～2株苗，并浇水淋透，定期浇水保持湿度80％以上，至其适应外界环境，18～22天后可转入常规管理，以得到布鲁堡油点百合幼苗。
在优选的实施例中，营养基质包括泥炭土、珍珠岩和赤玉土，具体的，营养基质按照泥炭土、珍珠岩和赤玉土的体积比3:1:1混合而成。该营养基质成分配比可提供布鲁堡油点百合幼苗充分的生长所需养分，提高布鲁堡油点百合幼苗的栽培成活率。
本发明实施例提供的布鲁堡油点百合快速繁殖方法利用布鲁堡油点百合叶片作为外植体，通过确定外植体繁殖各阶段的培养基及培养条件，大大地提高了布鲁堡油点百合外植体的丛生芽诱导效果，同时丛生芽分化速度快、分化量大、质量好，生根培养后布鲁堡油点百合幼苗移栽存活率可达98％。通过本发明提供的繁殖方法，能够极大地缩短布鲁堡油点百合的繁殖周期，加大布鲁堡油点百合的繁殖系数，并且能保持稳定的性状，能够满足大规模的生产需要。
下面结合具体实施例来进一步说明本发明提供的布鲁堡油点百合快速繁殖方法。
1、外植体的制备
摘取深圳市仙湖植物园非洲基地保育大棚栽培的符合筛选条件的布鲁堡油点百合叶片，用纸巾轻轻擦去叶片表面的灰尘泥土，然后用清水冲洗15分钟，接着在超净工作台上用2％的次氯酸钠溶液消毒灭菌13分钟，再用无菌水清洗4～5次，最后用无菌滤纸吸干叶片表层水分，在接种盘上裁切成长度为1.4～1.6cm，宽度为0.7～0.9cm的小块，即得布鲁堡油点百合外植体，备用。
2、丛生芽的诱导
将预先处理好的外植体分别接种到下表1中的6种不同诱导培养基中，其中诱导培养基均以MS培养基为基础培养基，均添加有6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，诱导培养基的pH均为5.8～6.0，每个培养基接种3～5个外植体，重复10次，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，观察记录每种诱导培养基上丛生芽的出芽时间，丛生芽的状态数量，统计丛生芽的诱导率情况。结果数据如下表1所示，其中各项数据均为平均值。
表1
由表1可以看出，不同浓度的生长激素组合对布鲁堡油点百合丛生芽的诱导具有一定的差异，当诱导培养基中添加0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA时，布鲁堡油点百合外植体的丛生芽诱导效果最好，诱导率可达97.5，出芽速度快，出芽量多，芽质量好；当诱导培养基中添加0.4mg/L的NAA和3.0mg/L的6-BA时，布鲁堡油点百合外植体的丛生芽诱导效果第二好，诱导率可达95.1，出芽速度快，出芽量多，且芽质量好；而当采取其他较低浓度的生长激素组合时，布鲁堡油点百合丛生芽的诱导效果较差，出芽较慢，出芽量较少，质量一般。
如图1-图3所示，将布鲁堡油点百合外植体接种到编号4的诱导培养基中，培养7天后可以看到叶片拉长卷曲增厚，叶片切口处增厚膨大，培养12天后可以看到在叶片切口和中间部位萌出芽点，培养15天后可以看到丛生芽增高长大。
3、增殖培养
将培养21天后的丛生芽切分成单株芽，并将单株芽转入增殖培养基上进行增殖培养，增殖培养基配方为MS培养基并添加0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA，调节增殖培养基的pH为5.8～6.0，所有培养基均在121℃、108kPa下灭菌20分钟。每个增殖培养基接种4～8株单芽，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，观察记录增殖情况。
如图4所示，将单株芽进行增殖培养30天，可得到越来越多的增值苗，每株增值苗有5～7株小苗芽。采用本发明提供的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，增殖培养时增值系数可达5.72。
4、生根培养
当增殖苗长至2～3cm时，选取分化出3～4片真叶的增殖苗并将其转入生根培养基上进行生根培养，生根培养基配方为MS培养基并添加0.1mg/L的NAA，调节生根培养基的pH为5.8～6.0，所有培养基均在121℃、108kPa下灭菌20分钟。每个生根培养基接种4～8株增殖苗，然后放入培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的培养室内进行培养，观察记录生根情况。
如图5所示，将增殖苗进行生根培养14天，可看到增殖苗可长出数条不定根，苗高约3cm，成为健壮的完整植株。采用本发明提供的快速繁殖方法，布鲁堡油点百合增殖苗的生根率可达100％。
5、炼苗及移栽
将生根较好的生根苗的培养基瓶盖揭开，继续在温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d的条件下炼苗2天，然后用镊子轻轻的夹出生根苗，在流水下轻轻冲洗掉其根部的培养基，将其栽种于装有营养基质的小号育苗盆中进行栽培，营养基质按照泥炭土、珍珠岩和赤玉土的体积比为3:1:1混合后经消毒处理制得。每盆可栽种1～2株苗，并浇水淋透，定期浇水保持湿度在80％以上，至其适应外界环境，20天后转入常规管理，观察记录布鲁堡油点百合幼苗成活情况。
如图6所示，将生根苗移栽至营养基质中20天后，可以看到布鲁堡油点百合幼苗成活状态良好。采用本发明提供的快速繁殖方法，布鲁堡油点百合幼苗移栽成活率可达98％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，包括：
根据预设筛选要求筛选布鲁堡油点百合的叶龄不高于15天的叶片，经消毒灭菌，切成小块，得外植体；
将所述外植体接种到诱导培养基上，在诱导条件下进行诱导培养14～21天，得丛生芽；
将所述丛生芽切分成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养25～35天，得增殖苗；
将所述增殖苗接种到生根培养基上，进行生根培养12～20天，得生根苗；
将所述生根苗进行炼苗，移栽到营养基质中进行栽培，以得到布鲁堡油点百合幼苗。
2.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述消毒灭菌包括：
用清水冲洗15～20分钟，接着用2％的次氯酸钠溶液消毒灭菌12～15分钟，再用无菌水清洗4～5次。
3.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述外植体的长度为1.3～1.7cm，宽度为0.7～0.9cm。
4.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA。
5.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和3.0mg/L的6-BA。
6.根据权利要求4或5所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养基还包括6g/L的琼脂和30g/L的蔗糖；
所述诱导培养基的pH为5.8～6.0。
7.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养的温度为25℃，光照强度为40μmol/m·s，光照时长为16h/d。
8.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述增殖培养基包括MS培养基、0.4mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA。
9.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述生根培养基包括MS培养基和0.1mg/L的NAA。
10.根据权利要求1所述的布鲁堡油点百合快速繁殖方法，其特征在于，所述营养基质包括泥炭土、珍珠岩和赤玉土；所述泥炭土、珍珠岩和赤玉土的体积比为3:1:1。
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