CN104920217A - 一种百合培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种百合培养方法，百合胚无菌培养方法以百合幼胚为外植体在无菌条件下进行胚的离体培养；百合快速组培方法采用鳞片作为外植体进行诱导后再进行初代培养，将生长最好的愈伤组织切割成适当大小，移栽到最适培养基中，继代培养后移栽组培苗；百合黑暗变温立体育种方法将从鳞茎上剥取的鳞片放到培养箱里，洗净除菌处理后，置于暗光中，在变温条件下培养。使用百合黑暗变温立体育种方法能够减短种球的形成时间，利用组织培养技术,能够迅速去除病毒和更新品种,加快了百合的快速繁殖速度，缩短了百合的生育周期，通过对胚的无菌培养,能有效的缩短百合种籽的培育周期。
Description
技术领域
本发明属于植物栽培领域，尤其涉及一种百合培养方法。
背景技术
随着人们对百合日益增长的消费需求，国内对百合种植的研究也越来越深入与广泛。通过对百合种球的处理及设施栽培，使得原本只能秋植的百合一年四季皆可种植与开花。传统的百合栽培，以地栽为主，由于封粘重易板结，容易滋生各种土传病，不利于百合生长，进而严重影响了百合的品质，尽管每年都要对封进行消毒与改良，但效果不明显。百合忌连作，种植过百合的土壤，通常要间隔四年左右再种植，才能保证百合的相对品质，对于专业业种植百合者来说，土地利用率太低。因此，开发选择一种百合快速繁育种球，不受土地资源限制的栽培方法及其应用方法，对于满足人们日益增长的百合消费需求，提高百合种球繁育,缓解土地资源压力和种球需求，具有重大意义。
传统的百合繁殖方法主要采用常规分球、分珠芽鳞片扦插、鳞片包埋等。但采用这些方法繁殖，繁殖系数较小不能满足大面积生产对种苗的需求，特别是经多代分殖以后，常造成种性退化，甚至病毒积累，影响百合的产量和质量。利用组织培养技术，能够迅速去除病毒和更新品种,加快了百合的快速繁殖速度，缩短了百合的生育周期。在百合杂交育种中也存在着基因库贫乏、种间杂交不亲和等局限性，而组织培养技术则可克服这些弊端。
发明内容
本发明的目的在于提供一种百合培养方法，旨在解决传统的百合栽培方法土地利用率低，容易造成种性退化和病毒积累的问题。
本发明是这样实现的，一种百合培养方法包括百合胚无菌培养方法、百合快速组培方法、百合黑暗变温立体育种方法；
所述百合胚无菌培养方法以百合幼胚为外植体在无菌条件下进行胚的离体培养，观察不同百合胚的萌发和生长情况，并选出适合百合胚在无菌条件下萌发\增殖和生根的培养基；
所述百合快速组培方法采用鳞片作为外植体进行诱导后再进行初代培养，将生长最好的愈伤组织切割成适当大小，移栽到最适培养基中，继代培养后移栽组培苗；
所述百合黑暗变温立体育种方法将从鳞茎上剥取的鳞片放到培养箱里，洗净除菌处理后，置于暗光中，在变温条件下培养。
进一步，所述百合胚无菌培养方法将不同品种的百合和在不同剂量的培养基中无菌培养，具体包括：
步骤一、胚培养：取授粉后的蒴果，在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面，再用0.1％的升汞溶液浸泡15min，然后再用无菌水冲洗；在无菌接种箱里将蒴果切开，选取有胚种子剥取种胚，接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上，放置到培养室培养；
步骤二、增殖培养：在无菌条件下，将胚培养所得幼苗的鳞片剥离，移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上，6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L.
步骤三、生根培养：将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上，NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L，分为加质量比0.1％的活性炭与不加活性炭两种情况。
进一步，所述百合快速组培方法中的继代培养包括：
步骤一、丛生芽的诱导：将继代培养后的愈伤组织接种到不同配比初代培养基上进行培养；
步骤二、增殖继代培养：取培养出来的初生代丛生芽，将茎切成数段，接种到继代培养基上，待腋芽萌发，并于切口处膨大形成愈伤组织，培养若干天；
步骤三、生根培养：将丛生芽切割下来，转入生根培养基中，接种在MS+NAA0.5mg/L或IBA0.5mg/L的培养基中。
进一步，百合快速组培方法中，培养基是以MS为基本培养基，附加不同激素构成的；诱导和分化培养基，附加白糖30g/L，生根培养基附加白糖20g/L，优选0.1mg/l NAA和1.0mg/l的BA单独或混合使用。
进一步，百合快速组培方法中，根据MS培养基中元素分类，分为以下四种母液：
母液Ⅰ：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4；
母液Ⅱ：KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O；
母液Ⅲ：FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O；
母液Ⅳ：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸。
进一步，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容；
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容。
使用百合黑暗变温立体育种方法能够减短种球的形成时间，利用组织培养技术,能够迅速去除病毒和更新品种,加快了百合的快速繁殖速度，缩短了百合的生育周期，通过对胚的无菌培养,能有效的缩短百合种籽的培育周期。
附图说明
图1是本发明实施例提供的百合胚无菌培养方法流程图；
图2是本发明实施例提供的百合快速组培方法流程图。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下。
本发明是这样实现的，一种百合培养方法包括百合胚无菌培养方法、百合快速组培方法、百合黑暗变温立体育种方法；
所述百合胚无菌培养方法以百合幼胚为外植体在无菌条件下进行胚的离体培养，观察不同百合胚的萌发和生长情况，并选出适合百合胚在无菌条件下萌发\增殖和生根的培养基；
实施例1
食用百合(松花岭1号)的胚选择及培养基:
步骤a:采集松花岭1号授粉后30～60d的蒴果,在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面3次,再用0.1％的升汞溶液浸泡15min,然后再用无菌水冲洗3次.在无菌接种箱里将蒴果切开,选取有胚种子剥取种胚,接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上,放置到培养室培养,温度为24℃～27℃,光照3000Lx,光照时数12h/d；
步骤b:在无菌条件下,将胚培养所得幼苗的鳞片剥离,移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上培养.6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L；
步骤c:将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上,NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L,分为加活性炭(0.1％)与不加活性炭两种情况；
步骤d:观察每种培养基,记录生长情况。
实施例2
药用百合(铁炮百合)的胚选择及培养基:
步骤a:采集铁炮百合授粉后30～60d的蒴果,在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面3次,再用0.1％的升汞溶液浸泡15min,然后再用无菌水冲洗3次.在无菌接种箱里将蒴果切开,选取有胚种子剥取种胚,接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上,放置到培养室培养,温度为24℃～27℃,光照3000Lx,光照时数12h/d；
步骤b:在无菌条件下,将胚培养所得幼苗的鳞片剥离,移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上培养.6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L；
步骤c:将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上,NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L,分为加活性炭(0.1％)与不加活性炭两种情况；
步骤d:观察每种培养基,记录生长情况。
实施例3
观赏百合(西伯利亚))的胚选择及培养基:
步骤a:采集西伯利亚)授粉后30～60d的蒴果,在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面3次,再用0.1％的升汞溶液浸泡15min,然后再用无菌水冲洗3次.在无菌接种箱里将蒴果切开,选取有胚种子剥取种胚,接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上,放置到培养室培养,温度为24℃～27℃,光照3000Lx,光照时数12h/d；
步骤b:在无菌条件下,将胚培养所得幼苗的鳞片剥离,移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上培养.6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L；
步骤c:将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上,NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L,分为加活性炭(0.1％)与不加活性炭两种情况；
步骤d:观察每种培养基,记录生长情况。
不同品种所得种子的有胚率不同,最高为食用百合,达到4.50％,其次是观赏百合,达到2.75％。最低是药用百合,只有1.00％(表1)。蒴果大小与有胚率呈一定正相关,蒴果越饱满有胚率越高,同一蒴果中有胚种子与无胚种子的大小相差不大,但有胚种子的厚度明显大于无胚种子。
表1百合蒴果及种子情况
百合胚的离体培养
表2百合胚培养的萌发情况
| 百合 | 接种胚数 | 萌发胚数 | 萌发率 | 萌发时间 |
| (个) | (个) | (％) | (d) | |
| 食用百合 | 143 | 127 | 88.8 | 10 |
| 药用百合 | 86 | 74 | 86.0 | 11 |
| 观赏百合 | 72 | 59 | 82.0 | 9 |
不同百合胚离体培养萌发情况,食用百合萌发率88.8％,药用百合萌发率86.0％,观赏百合萌发率82.0％.通过萌发情况,可以发现有胚率较高的萌发率也相对较高,成正相关(表2)。
不同培养基对百合胚培养得到的幼苗增殖的影响,食用百合幼苗鳞片在3号培养基的诱导率最高,达到30.0％,观赏百合幼苗鳞片在4号培养基的诱导率最高,达到27.7％,(表3\表4)。通过不同培养基中幼苗鳞片生长情况来看,长势没有明显区别,较适合幼苗鳞片增殖的培养基为MS+NAA0.01mg/L+6-BA0.5mg/L或MS+NAA0.01mg/L+6-BA0.75mg/L。
表3不同培养基对食用百合幼苗鳞片增殖培养的影响
表4不同培养基对观赏百合幼苗鳞片增殖培养的影响
不同培养基对百合幼苗生根影响以食用百合松花岭1号为材料,在幼苗无菌条件下接种30d后调查生根情况.发现加有活性炭的培养基生根情况较好,根系粗壮,没有加活性炭的培养基中根系细弱,根数多但长度短,生根率最高的培养基为1/2MS+0.1％活性炭,在此培养基中幼苗的根系和根长值都较高,其次培养基1/2MS+NAA0.05mg/L+0.1％活性炭,在不加活性炭的培养基中,最好的培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L(表5)。
表5不同培养基对百合幼苗生根的影响
所述百合快速组培方法采用鳞片作为外植体进行诱导后再进行初代培养，将生长最好的愈伤组织切割成适当大小，移栽到最适培养基中，继代培养后移栽组培苗；
当试管苗的根原基突起或形成几毫米长的短根时，将其取出，洗去琼脂，移入有少量营养的人工基质中。移栽后，保持高湿度，避免阳光直射和过大的温度波动，经过7d的逐步锻炼过程，再定植到土壤中。为了减少组培苗培养程序,降低生产成本,选用3个品种,各30个无根绿豆大小的小鳞茎球移栽,约20d后陆续生根,生根率70％。同时,经实验观察,在移栽前的一次继代培养基中适当减少BA浓度,增加NAA浓度,有利于小鳞茎的生长,有菌条件下移栽生根成活率可提高至82％。
所述百合黑暗变温立体育种方法将从鳞茎上剥取的鳞片放到培养箱里，洗净除菌处理后，置于暗光中，在变温条件下培养。
实施例4
食用百合(松花岭一号)的黑暗变温育种步骤:
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径7～12cm、纵径6～10cm以上的鳞茎为佳.
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，选择宽2厘米和厚2厘米的鳞瓣。
步骤c：用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：将冲洗洁净的百合鳞瓣，轻轻盛放到培养箱中。
步骤e：将七个培养箱上下叠放在支架上，一个支架上放六组，其列间设通道，通道宽60～80厘米，以利于空气流通，便于工作人员走动或检查。置于暗光中培养。步骤f：温度控制在4℃～8℃，湿度保持在90％以上。每天查看情况。
实施例5
药用百合(铁炮)的黑暗变温育种步骤:
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径5～10cm、纵径4～6cm以上的鳞茎为佳.
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，要求其宽1～2厘米、厚1～3毫米以内。
步骤c：用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：将冲洗洁净的百合鳞瓣，轻轻盛放到培养箱中。
步骤e：将七个培养箱上下叠放在支架上，一个支架上放六组，其列间设通道，通道宽60～80厘米，以利于空气流通，便于工作人员走动或检查。置于暗光中培养.步骤f：温度控制在4℃～8℃，湿度保持在90％以上。每天查看情况。
实施例6
观赏百合(索邦)的黑暗变温育种步骤:
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径4～9cm、纵径5～8cm以上的鳞茎为佳。
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，要求其宽2.5～3厘米、厚2～3毫米。
步骤c：用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：将冲洗洁净的百合鳞瓣，轻轻盛放到培养箱中.
步骤e：将七个培养箱上下叠放在支架上，一个支架上放六组，其列间设通道，通道宽60～80厘米，以利于空气流通，便于工作人员走动或检查。置于暗光中培养。步骤f：温度控制在4℃～8℃，湿度保持在90％以上。每天查看情况。
对照例4
食用百合(松花岭一号)
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径7～12cm、纵径6～10cm以上的鳞茎为佳.
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，选择宽2厘米、厚2毫米的鳞瓣。
步骤c：用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：用锯末拌上500倍多菌灵做成1.2m的箱面。
步骤e：将冲洗洁净的百合鳞瓣，一片一片轻轻的扦插到基质上。深度为整体的1/3.步骤f：温度控制在20℃～24℃，湿度保持在80％～90％以内。每天查看情况。
对照例5
药用百合(铁炮)
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径5～12cm、纵径4～6cm以上的鳞茎为佳.
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，要求其宽1～2厘米、厚1～3毫米。
步骤c：用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：用锯末拌上500倍多菌灵做成1.2m的箱面。
步骤e：将冲洗洁净的百合鳞瓣，一片一片轻轻的扦插到基质上。深度为整体的1/3.步骤f：温度控制在20℃～24℃，湿度保持在80％～90％以内。每天查看情况。
对照例6
观赏百合(索邦)
步骤a:选择优质百合鳞茎,即个大、无病斑、外观整洁的百合鳞茎,横径4～9cm、纵径5～8cm以上的鳞茎为佳.
步骤b：从鳞茎上剥取的鳞瓣，要求其宽2.5～3厘米、厚2～3毫米.
步骤c：鳞瓣冲洗用自来水冲洗，并用手轻轻搅动，避免造成新的伤口，淘洗洁净后，将鳞瓣捞出，置入培养箱，控干水后，再用500倍多菌灵药液或AM复合生物菌剂300倍液浸泡处理1分钟，有防腐烂的效果。
步骤d：用锯末拌上500倍多菌灵做成基质装到筐子里。
步骤e：将冲洗洁净的百合鳞瓣，一片一片轻轻的扦插到基质上。深度为整体的1/3.步骤f：温度控制在20℃～24℃，湿度保持在80％～90％以内。每天查看情况。
以上实施例和对照例，按统一方式进行管理，按每次10组进行试验，取每个指标平均值进行对比，具体培育效果见表6：
表6
由表6可以看到，就观赏百合而言，使用本发明黑暗培养(实施例6)的鳞瓣与未使用本发明传统培养(对照组6)的鳞瓣在球数方面并没有显著差异。而在球径方面，使用本发明培养的鳞瓣则明显优于未使用本发明培养的鳞瓣，说明使用本发明培养技术能够减短种球的形成时间。对食用和药用百合而言，无论是在球数和球径上，使用本发明黑暗培养(实施例4～5)的鳞瓣较未使用本发明传统(对照组4～5)栽培的鳞瓣均有明显提高，说明使用本发明培养的鳞瓣能更好、更快的满足人们需求。
进一步，所述百合胚无菌培养方法将不同品种的百合和在不同剂量的培养基中无菌培养，具体包括：
S101、胚培养：取授粉后的蒴果，在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面，再用0.1％的升汞溶液浸泡15min，然后再用无菌水冲洗；在无菌接种箱里将蒴果切开，选取有胚种子剥取种胚，接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上，放置到培养室培养；
S102、增殖培养：在无菌条件下，将胚培养所得幼苗的鳞片剥离，移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上，6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L；
S103、生根培养：将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上，NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L，分为加质量比0.1％的活性炭与不加活性炭两种情况。
进一步，所述百合快速组培方法中的继代培养包括：
S201、丛生芽的诱导：将继代培养后的愈伤组织接种到不同配比初代培养基上进行培养；
S202、增殖继代培养：取培养出来的初生代丛生芽，将茎切成数段，接种到继代培养基上，待腋芽萌发，并于切口处膨大形成愈伤组织，培养若干天；
S203、生根培养：将丛生芽切割下来，转入生根培养基中，接种在MS+NAA0.5mg/L或IBA0.5mg/L的培养基中。
进一步，百合快速组培方法中，培养基是以MS为基本培养基，附加不同激素构成的；诱导和分化培养基，附加白糖30g/L，生根培养基附加白糖20g/L，优选0.1mg/l NAA和1.0mg/l的BA单独或混合使用。
进一步，百合快速组培方法中，根据MS培养基中元素分类，分为以下四种母液：
母液Ⅰ：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4；
母液Ⅱ：KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O；
母液Ⅲ：FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O；
母液Ⅳ：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸。
进一步，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容；
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容。
以上所述仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
Claims (6)
1.一种百合培养方法，其特征在于，所述的百合培养方法包括百合胚无菌培养方法、百合快速组培方法、百合黑暗变温立体育种方法；
所述百合胚无菌培养方法以百合幼胚为外植体在无菌条件下进行胚的离体培养，观察不同百合胚的萌发和生长情况，并选出适合百合胚在无菌条件下萌发\增殖和生根的培养基；
所述百合快速组培方法采用鳞片作为外植体进行诱导后再进行初代培养，将生长最好的愈伤组织切割成适当大小，移栽到最适培养基中，继代培养后移栽组培苗；
所述百合黑暗变温立体育种方法将从鳞茎上剥取的鳞片放到培养箱里，洗净除菌处理后，置于暗光中，在变温条件下培养。
2.如权利要求1所述的百合培养方法，其特征在于，所述百合胚无菌培养方法将不同品种的百合和在不同剂量的培养基中无菌培养，具体包括：
步骤一、胚培养：取授粉后的蒴果，在无菌条件下用75％酒精棉球擦拭表面，再用0.1％的升汞溶液浸泡15min，然后再用无菌水冲洗；在无菌接种箱里将蒴果切开，选取有胚种子剥取种胚，接种到培养基MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L上，放置到培养室培养；
步骤二、增殖培养：在无菌条件下，将胚培养所得幼苗的鳞片剥离，移植到MS+NAA0.01mg/L+6-BA0～1.0mg/L的增殖培养基上，6～BA浓度分别为0\0.25\0.5\0.75\1.0mg/L；
步骤三、生根培养：将所得种苗接种在MS+6-BA1.0mg/L+2.4-D0.5mg/L+NAA0～1.0mg/L的生根培养基上，NAA的浓度分别为0\0.2\0.5\0.75\1.0mg/L，分为加质量比0.1％的活性炭与不加活性炭两种情况。
3.如权利要求1所述的百合培养方法，其特征在于，所述百合快速组培方法中的继代培养包括：
步骤一、丛生芽的诱导：将继代培养后的愈伤组织接种到不同配比初代培养基上进行培养；
步骤二、增殖继代培养：取培养出来的初生代丛生芽，将茎切成数段，接种到继代培养基上，待腋芽萌发，并于切口处膨大形成愈伤组织，培养若干天；
步骤三、生根培养：将丛生芽切割下来，转入生根培养基中，接种在MS+NAA0.5mg/L或IBA0.5mg/L的培养基中。
4.如权利要求1所述的百合培养方法，其特征在于，百合快速组培方法中，培养基是以MS为基本培养基，附加不同激素构成的；诱导和分化培养基，附加白糖30g/L，生根培养基附加白糖20g/L，优选0.1mg/l NAA和1.0mg/l的BA单独或混合使用。
5.如权利要求1所述的百合培养方法，其特征在于，百合快速组培方法中，根据MS培养基中元素分类，分为以下四种母液：
母液Ⅰ：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4；
母液Ⅱ：KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O；
母液Ⅲ：FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O；
母液Ⅳ：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸。
6.如权利要求1所述的百合培养方法，其特征在于：
母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容；
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容。
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|---|---|---|---|---|
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| CN107691160A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-02-16 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 一种川百合无毒鳞茎的培育方法 |
| CN113841613A (zh) * | 2021-10-26 | 2021-12-28 | 甘肃省农业科学院生物技术研究所 | 一种兰州百合种苗高效繁育方法 |
| CN116491422A (zh) * | 2023-05-30 | 2023-07-28 | 安徽农业大学 | 百合离体快繁体系建立方法 |
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2015
- 2015-06-15 CN CN201510330863.XA patent/CN104920217A/zh active Pending
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