CN103843664B - Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 - Google Patents
Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103843664B CN103843664B CN201410110179.6A CN201410110179A CN103843664B CN 103843664 B CN103843664 B CN 103843664B CN 201410110179 A CN201410110179 A CN 201410110179A CN 103843664 B CN103843664 B CN 103843664B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- medium
- cultivated
- lyciumexsertum
- taking
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000593063 Lycium exsertum Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- CGIDKJRJBMFXKV-UHFFFAOYSA-N 6-n'-benzylpurine-6,6-diamine Chemical compound N1=CN=C2N=CN=C2C1(N)NCC1=CC=CC=C1 CGIDKJRJBMFXKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 36
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 22
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 18
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-yl acetate Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)C)=CC=CC2=C1 VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 11
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 10
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 8
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 8
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 5
- 208000035126 Facies Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 4
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000012549 training Methods 0.000 claims description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 3
- -1 within 7 days Substances 0.000 claims description 2
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract description 13
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract description 13
- 244000241838 Lycium barbarum Species 0.000 abstract description 8
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 5
- 241001106041 Lycium Species 0.000 abstract description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 238000009413 insulation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 9
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000028446 budding cell bud growth Effects 0.000 description 3
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 230000036433 growing body Effects 0.000 description 2
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000669618 Nothes Species 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- 241000135164 Timea Species 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-naphthalen-1-ylacetate Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)OC)=CC=CC2=C1 YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y02P60/216—
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
本发明公开了一种Lycium？exsertum组织培养及快速繁殖方法，以解决引进枸杞的繁殖问题。该方法包括如下步骤：外殖体处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗以及移栽，发明的优点如下：A、本发明中对Lycium？exsertum进行继代培养时，仅使用了6-苄氨基腺嘌呤与吲哚-3-乙酸配比，极大地降低了激素积累对多次继代的影响，同时也降低了成本。B、本发明中对<i>Lyciumexsertum</i>的继代苗木进行生根培养时，所采用的培养基配比中没有添加任何激素，做到了培养基配制的简化和成本的降低，并且效果较好。C、本发明中泥炭、蛭石、珍珠岩1:1:1的移栽基质混合配比，能够在栽培过程起到很好的保水和保温的作用，能够提高移栽的成活率。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法。
背景技术
茄科枸杞属Lyciumexsertum是从美国引进的茄科枸杞属植物，主要分布在亚利桑那沙漠地区，其进化程度高于我国的枸杞。在生殖进化上，已经由雌雄同体和自交不亲和的二倍体进化到自交亲和的多倍体阶段，而我国仍处在自交不亲和的二倍体进化阶段。该种枸杞的引进对于我国枸杞的种质资源的改良有很大的意义。该种枸杞引进后面临的首要问题是进行扩大繁殖。
发明内容
本发明的目的是提供一种Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，以解决引进枸杞的繁殖问题。
本发明技术方案如下：本发明种子为茄科枸杞属（Lyciumexsertum）购于美国的S&SSEEDS,INC.联系方式为P.O.BOX1275CARPINTERIAAVECARPINTERIA,CA93013,USA。
一种Lyciumexsertum组织培养方法，具体步骤如下：
A、外殖体处理采用Lyciumexsertum幼嫩茎段作为外殖体，剪去叶片，留少量叶柄，每2-3个芽剪成一段，将茎段洗去污渍，后用水冲洗干净，冲洗时间为5-10min，然后将其放入超净工作台中,进行消毒，消毒后剪去茎段两端，放于培养皿中备用；
优选的，消毒的最佳方案如下：先用75%酒精振荡消毒5s，再用0.1%升汞溶液消毒6—6.5分钟，最后用无菌水清洗3-4次；
B、初代培养
以MS培养基为基础培养基，添加不同类型的激素及数量进行初代培养。通过初代培养可以获得所繁育物种的无菌材料。这一阶段的培养效果依植物种类及培养基成分而异，可能形成一个芽或多个芽。
优选的，添加0.05mg/L的萘乙酸（NAA）、3%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为：25℃，湿度为70%RH。
C、继代培养
在初代培养的基础上获得的芽苗数量不多，还需进一步扩大繁殖，才能发挥组织培养快速繁殖的优势。
通过对L.exsertum的最佳培养基的筛选，培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽，以MS为基本培养基，添加6-苄氨基腺嘌呤与吲哚-3-乙酸。
优选的，继代培养基主要成分以及培养条件如下：以MS培养基为基础培养基，添加0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为23℃，湿度为70%RH。
优选的，所述6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸的浓度比为2:1时，芽分化系数最高，生长最旺盛。
D、生根培养
继代培养扩大繁殖后进行生根诱导获得完整再生的植株。
生根培养有三种优选方案：方案一、所述步骤D生根培养条件：使用步骤C继代培养植株叶片为材料，以1/4的MS培养基为基础培养基，添加1.5%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx下12h光暗交替，温度为23℃，湿度为70%RH。
方案二、使用步骤B的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，
方案三、使用步骤C的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，方案二和三的培养条件：以1/2MS培养基为基础培养基，添加1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、0.5mg/L的吲哚丁酸（IBA）；培养条件是先在25℃下暗培养7d，然后在25℃、光强为3000lx全光照，湿度为70%RH下培养至丛芽长出。此条件下丛芽增殖系数最高，生长最旺盛，增殖系数能达到5.0以上。
E、炼苗移栽
炼苗：将生根培养的苗木在与移栽环境相同的条件下闭瓶炼苗5-7d，让组培苗逐渐适应外界条件。
移栽：炼苗移栽基质以泥炭、蛭石、珍珠岩1：1：1混合配制，将苗子移栽到装有基质的花盆中，浇透水后，覆膜。
优选的，炼苗移栽对基质用0.1%多菌灵浇透，移栽时将炼好苗的植株的根部浸入0.1%多菌灵和0.1g/Ld的NAA混合溶液中浸泡10min。
优选的，枸杞组培苗移栽初期，由于苗木幼嫩，必须设置遮阳网，光强度为全光照时的30%。每日通风，通风时间逐日加长，同时逐渐增加光强，直到全天开放。适时浇水，隔日喷少量0.1%多菌灵溶液，7天后喷1/4MS营养液。待幼苗成活后逐渐全光照。
发明的优点：
1）本发明中对Lyciumexsertum进行继代培养时，仅使用了6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）与吲哚-3-乙酸（IAA）配比，极大地降低了激素积累对多次继代的影响，同时也降低了成本。
2）本发明中对Lyciumexsertum的继代苗木进行生根培养时，所采用的培养基配比中没有添加任何激素，做到了培养基配制的简化和成本的降低，并且效果较好。
3）本发明中泥炭、蛭石、珍珠岩1:1:1的移栽基质混合配比，能够在栽培过程起到很好的保水和保温的作用，能够提高移栽的成活率。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的具体实施过程，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
A、外殖体处理
采集Lyciumexsertum幼嫩茎段作为外殖体，剪去叶片，留少量叶柄，每2-3个芽剪成一段，将茎段用洗衣粉水洗去污渍，后用自来水冲洗干净，冲洗时间为5-10min。然后将其放入超净工作台中,进行消毒，消毒后剪去茎段两端，放于培养皿中备用。
B、初代培养
每次处理接种30瓶，外殖体接种后每隔7天记录一次生长状况。
以MS培养基为基础培养基，添加0.05mg/L的NAA、3%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为25℃，湿度为70%RH。不定芽生长的比例达到93.3%。
C、继代培养
培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽，以MS培养基为基础培养基，添加0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸（IAA），使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光照：24h/d，光强为3000lx，温度为23℃，湿度为70%RH。此条件增殖系数最高，生长最旺盛。每次处理接种30瓶，每7天观察并记录幼苗的增殖效果。
D、生根培养
生根培养基主要成分以及培养条件：以1/4的MS培养基为基础培养基，添加1.5%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx下12h光暗交替，温度为23℃，湿度为70%RH。从第7d开始生根，15d后可移栽，生根率在80%以上，生根条数平均在4.3条。
E、炼苗移栽
炼苗：将生根培养的苗木在与移栽环境相同的条件下闭瓶炼苗5-7d，让组培苗逐渐适应外界条件。
实施例2
与实施例1区别在于生根培养步骤不同：使用步骤B的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，以1/2MS培养基为基础培养基，添加1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚丁酸（IBA）；培养条件是先在25℃下暗培养7d，然后在25℃、光强为3000lx全光照，湿度为70%RH下培养至丛芽长出。
实施例3
与实施例1区别在于生根培养步骤不同：使用步骤C的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，以1/2MS培养基为基础培养基，添加1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚丁酸（IBA）；培养条件是先在25℃下暗培养7d，然后在25℃、光强为3000lx全光照，湿度为70%RH下培养至丛芽长出。此条件下丛芽增殖系数最高，生长最旺盛，增殖系数能达到5.0以上。
实施例4
对实施例1炼苗后的产品进行移栽：炼苗移栽基质以泥炭、蛭石、珍珠岩1：1：1混合配制，在移栽前对基质进行高温灭菌。冷却后装盆，准备移栽，移栽前对基质用0.1%多菌灵浇透；移栽时将炼好苗的植株完整的从锥形瓶中取出，放入水中洗净根上的培养基，将根部浸入0.1%多菌灵和0.1g/L的NAA的混合溶液中浸泡10min。将苗子移栽到装有基质的花盆中，浇透水后，覆膜。
枸杞组培苗移栽初期，由于苗木幼嫩，必须设置遮阳网，光强度为全光照时的30%左右。每日通风，通风时间逐日加长，同时逐渐增加光强，直到全天开放。适时浇水，隔日喷少量0.1%多菌灵溶液，7天后喷1/4MS营养液。15d后统计成活率，移栽成活率在90%以上，而在沙和田园土基质中移栽的效果较差。
实施例5与实施例1不同之处在于，步骤A消毒的具体方案如下：先用75%酒精振荡消毒5s，再用0.1%升汞溶液消毒6min，最后用无菌水清洗3-4次。
实施例6与实施例1不同之处在于，步骤A消毒的具体方案如下：先用75%酒精振荡消毒5s，再用0.1%升汞溶液消毒6.5min，最后用无菌水清洗3-4次。该方案效果最佳，正常生长的比例可达85%。
试验
试验一、考察用0.1%升汞消毒为6min，并且用75%酒精消毒，看消毒时间对初代培养生长的影响：
将准备好的材料先用75%酒精分别消毒4s、5s、6s、7s、8s；再用0.1%升汞溶液消毒6min，后用无菌水冲洗3-4遍。再剪去嫩茎两端接种，每瓶接种1个，每处理接种30瓶。接入培养基中，统计污染、干枯和正常生长的个数，结果见表1。
由表1可以得出，当0.1%升汞溶液消毒6min并且用75%的酒精消毒5s较好，萌发率达50%。
试验二、考察用0.1%升汞消毒为6.5min，并且用75%酒精消毒，看消毒时间对初代培养生长的影响：
将准备好的材料，先用75%酒精分别消毒4s、5s、6s、7s、8s；再用0.1%升汞溶液消毒6.5min，后用无菌水冲洗3-4遍。再剪去嫩茎两端接种，每瓶接种1个，每处理接种30瓶。接入培养基中，统计污染、干枯和正常生长的个数，结果见表2。
由表2可以得出，当0.1%升汞溶液消毒时间为6.5min时，75%的酒精消毒5s最好，萌发率达96.7%。
试验三、考察培养基激素及配比对L.exsertum不定芽增殖情况的影响（见表3）
以MS培养基为基础，添加不同类型的激素及数量进行初代培养。通过初代培养可以获得所繁育物种的无菌材料。这一阶段的培养效果依植物种类及培养基成分而异，可能形成一个芽或多个芽。每处理接种30瓶，外殖体接种后每隔7天记录一次生长状况。
通过不同配比初代培养基的比较，在0.05mg/L的NAA、0.1mg/L的NAA和0.05mg/L的IAA培养基中容易形成愈伤组织,但是也能诱导产生一定数量的不定芽，产生的数量较无激素与0.1mg/L的IAA多，且差异显著；在0.05mg/L的NAA+0.05mg/L的6-BA培养基中发生分化率较高,不定芽的发生数量最多,与无激素和0.1mg/L的IAA相比达到极显著水平；与0.05mg/L的NAA、0.1mg/L的NAA和0.05mg/L的IAA相比达到显著水平。本实验表明初代培养不定芽增殖最佳培养基为MS+0.05mg/L的NAA+0.05mg/L的6-BA。
试验四、考察以1/4的MS为基本培养基，添加不同种类及浓度生根激素对生根率的影响
以继代培养后的无菌茎段为材料，添加不同种类及浓度生根激素进行生根培养。由表4（Lyciumexsertum生根培养统计表）可以得出，在不添加任何激素的情况下，生根率最高，须根数量最多，根系状态最适宜移栽。
试验五、考察在无激素添加的培养基中生根速度
表5（Lyciumexsertum生根天数统计表）统计了在无激素添加的培养基中生根速度，7d后开始生根，开始每天统计生根率，15d后达到最大生根数量，生根率达到80%。
Claims (7)
1.一种Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
A、外植体处理采用茄科枸杞属Lyciumexsertum幼嫩茎段作为外植体，剪去叶片，留少量叶柄，每2-3个芽剪成一段，将茎段洗去污渍，后用水冲洗干净，冲洗时间为5-10min，然后将其放入超净工作台中,进行消毒，消毒后剪去茎段两端，放于培养皿中备用；
B、初代培养
以MS培养基为基础培养基进行初代培养；培养过程为以MS培养基为基础培养基，添加0.05mg/L的萘乙酸、3%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8，培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为25℃，湿度为70%RH；
C、继代培养
培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽，以MS培养基为基础培养基，添加0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为23℃，湿度为70%RH；
D、生根培养：使用步骤C继代培养植株叶片为材料，以1/4的MS培养基为基础培养基，添加1.5%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx下12h光暗交替，温度为23℃，湿度为70%RH；
E、炼苗移栽
炼苗：将生根培养的苗木在与移栽环境相同的条件下闭瓶炼苗5-7d；移栽：炼苗移栽基质以泥炭、蛭石、珍珠岩1：1：1混合配制，将苗子移栽到装有基质的花盆中，浇透水后，覆膜。
2.一种Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
A、外植体处理采用茄科枸杞属Lyciumexsertum幼嫩茎段作为外植体，剪去叶片，留少量叶柄，每2-3个芽剪成一段，将茎段洗去污渍，后用水冲洗干净，冲洗时间为5-10min，然后将其放入超净工作台中,进行消毒，消毒后剪去茎段两端，放于培养皿中备用；
B、初代培养
以MS培养基为基础培养基进行初代培养；培养过程为以MS培养基为基础培养基，添加0.05mg/L的萘乙酸、3%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8，培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为25℃，湿度为70%RH；
C、继代培养
培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽，以MS培养基为基础培养基，添加0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为23℃，湿度为70%RH；
D、丛芽增殖培养:使用步骤B或步骤C的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，以1/2MS培养基为基础培养基，添加1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚丁酸；培养条件是先在25℃下暗培养7d，然后在25℃、光强为3000lx全光照，湿度为70%RH下培养至丛芽长出;
E、生根培养：使用步骤C继代培养植株叶片为材料，以1/4的MS培养基为基础培养基，添加1.5%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx下12h光暗交替，温度为23℃，湿度为70%RH；
F、炼苗移栽
炼苗：将生根培养的苗木在与移栽环境相同的条件下闭瓶炼苗5-7d；移栽：炼苗移栽基质以泥炭、蛭石、珍珠岩1：1：1混合配制，将苗子移栽到装有基质的花盆中，浇透水后，覆膜。
3.根据权利要求1或2所述的Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤A消毒方案如下：先用75%酒精振荡消毒5s，再用0.1%升汞溶液消毒6—6.5分钟，最后用无菌水清洗3-4次。
4.根据权利要求1或2所述的Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：所述6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的吲哚-3-乙酸的浓度比为2:1。
5.根据权利要求1或2所述的Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：所述炼苗移栽对基质用0.1%多菌灵浇透，移栽时将炼好苗的植株的根部浸入0.1%多菌灵和0.1g/L的NAA混合溶液中浸泡10min。
6.根据权利要求1或2所述的Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：组培苗移栽初期，设置遮阳网，光强度为全光照时的30%。
7.根据权利要求1或2所述的Lyciumexsertum组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：移栽前两日遮光密封保湿培养，第三日开始每日通风，通风时间逐日加长，同时逐渐增加光强，直到全天开放；适时浇水，隔日喷少量0.1%多菌灵溶液，7天后喷1/4的MS营养液，待幼苗成活后逐渐全光照。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410110179.6A CN103843664B (zh) | 2014-03-24 | 2014-03-24 | Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410110179.6A CN103843664B (zh) | 2014-03-24 | 2014-03-24 | Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103843664A CN103843664A (zh) | 2014-06-11 |
| CN103843664B true CN103843664B (zh) | 2016-05-18 |
Family
ID=50852123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410110179.6A Expired - Fee Related CN103843664B (zh) | 2014-03-24 | 2014-03-24 | Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103843664B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104054564B (zh) * | 2014-06-12 | 2015-11-18 | 中宁县沃杞农业科技有限公司 | 一种枸杞脱毒组培苗移栽方法 |
| CN104335901B (zh) * | 2014-11-14 | 2016-06-15 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法 |
| CN104429851B (zh) * | 2014-11-14 | 2016-07-06 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 柴达木枸杞离体快繁苗的移栽方法 |
| CN107996398A (zh) * | 2016-10-28 | 2018-05-08 | 四川大巴山生态农业开发有限公司 | 一种枸杞的组织培养方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103181324A (zh) * | 2013-03-23 | 2013-07-03 | 甘肃农业大学 | 黑果枸杞优质种苗快速繁殖的方法 |
| CN103609451A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-03-05 | 山东省农作物种质资源中心 | 一种枸杞无菌苗及其诱导愈伤的获得方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60006367T2 (de) * | 1999-03-25 | 2004-08-12 | University Of Guelph, Guelph | Mikropropagation und herstellung von phytopharmazeutischen pflanzen |
-
2014
- 2014-03-24 CN CN201410110179.6A patent/CN103843664B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103181324A (zh) * | 2013-03-23 | 2013-07-03 | 甘肃农业大学 | 黑果枸杞优质种苗快速繁殖的方法 |
| CN103609451A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-03-05 | 山东省农作物种质资源中心 | 一种枸杞无菌苗及其诱导愈伤的获得方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 枸杞的组织培养与快速繁殖(简报);王雅英等;《亚热带植物科学》;20041231;第33卷(第3期);第1-4节，摘要 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103843664A (zh) | 2014-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103858762B (zh) | 一种金线莲组织培养快速增殖方法 | |
| CN102422816A (zh) | 草莓的茎尖离体快速培养方法 | |
| CN105340747A (zh) | 一种甘草无性快速繁殖方法 | |
| CN105494103A (zh) | 一种摩帝类兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103704130B (zh) | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 | |
| CN106258959B (zh) | 一种杜鹃花组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104663453A (zh) | 一种杉木组培快繁方法 | |
| CN102657094B (zh) | 一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法 | |
| CN111616052A (zh) | 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用 | |
| CN106718877B (zh) | 一种红火炬郁金优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN109392712A (zh) | 一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法 | |
| CN105993956A (zh) | 一种茅苍术快速繁殖方法 | |
| CN106665357A (zh) | 一种建立石蒜再生体系的方法 | |
| CN103843664B (zh) | Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法 | |
| CN106942053B (zh) | 一种针对兴安天门冬的组培快繁方法 | |
| CN104542307A (zh) | 一种木鳖的培养方法 | |
| KR100868523B1 (ko) | 새우난속 식물의 기내 무균발아를 통한 증식방법 | |
| CN104094841B (zh) | 茄科枸杞属短柄枸杞组织培养及快速繁殖方法 | |
| CN109964816A (zh) | 一种非洲菊单倍体移栽苗的育苗方法 | |
| CN109042330A (zh) | 一种桃叶卫矛的组织培养方法 | |
| CN106165648B (zh) | 一种紫荆组培培养基及培养方法 | |
| CN104642111B (zh) | 一种金花茶种苗繁育方法 | |
| CN105010123B (zh) | 通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基 | |
| CN106605596B (zh) | 一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法 | |
| CN108849500A (zh) | 一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Jie Inventor after: Zheng Yuliang Inventor after: Feng Lidan Inventor after: Wang Youke Inventor after: He Jing Inventor before: Li Jie Inventor before: Feng Lidan Inventor before: Wang Youke Inventor before: Zhang Baolin Inventor before: Zhang Guangzhong Inventor before: Cai Guojun |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170111 Address after: 730600 Gansu province Baiyin Jingyuan County Dongsheng Town Xin Cun Chai Patentee after: DINGXIN GANSU AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 730070 Anning District, Gansu, Lanzhou Camp Village Gate No. 1 Patentee before: Gansu Agricultural University |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160518 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |