CN116391622A - 一种百合组培快繁方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种百合组培快繁方法及其应用，该方法包括外植体消毒、初代诱导、继代增殖、生根培养和驯化移栽五个步骤。本发明建立了其组培快繁殖技术体系，为功能性百合产业化奠定了良好基础。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种百合组培快繁方法及其应用。
背景技术
百合(Lilium spp.)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)植物，生有球形鳞茎，露地种植时一年一季，是极具观赏价值和经济价值的多年生单子叶草本。百合有“三好”，因其形态优美、亭亭玉立，口感爽脆、清热去火，花开吉祥、寓意圆满，享有“好看、好吃、好听”的殊誉。作为深受国内外广大消费者喜爱的球根花卉，百合鲜切花及种球销量历年来屡创新高，逐渐成为霸占鲜花市场的主力军之一。
在我国，观赏百合种球主要从荷兰进口，价格昂贵且运输成本高。由于百合在繁育期间容易容易受到土传病害的侵染，繁殖速度缓慢、繁殖效率低下，易在多代繁殖后造成品种退化，使百合的生产受到限制，因此，探索出一条能满足国内百合消费需求、快捷产出百合种苗的方法迫在眉睫。
发明内容
本发明目的在于提供一种百合组培快繁方法及其应用，以实现百合高效的快繁体系，为产出周期短、成本低、遗传性状稳定、表现型一致的百合幼苗提供技术支持。
本发明解决其技术问题采用的技术方案为：
一种百合组培快繁方法，该方法包括外植体消毒、初代诱导、继代增殖、生根培养和驯化移栽五个阶段，包括以下步骤：
(1)外植体消毒：选择百合品种‘飞翔韶华’或‘飞翔天橙’的鳞茎中内层健康饱满鳞片作为外植体洗净后，依次用75％乙醇、1％次氯酸钠进行消毒、切块；
(2)初代诱导：将消毒完成的外植体接种于诱导培养基中进行培养得到无菌苗；
所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/LNAA；
(3)继代增殖：挑选生长旺盛的无菌苗，切取1～2.5cm的不定芽，转入增殖培养基中进行培养得到增殖无根丛苗；
所述的增殖培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/LNAA；
(4)生根培养：将所述的增殖无根丛苗切分成单个小苗，转入生根培养基中进行培养得到生根无菌苗；
所述的生根培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/LNAA；或1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA；
(5)驯化移栽：将百合生根无菌苗从培养室内移出进行炼苗移栽。
作为一种优选技术方案，所述的百合品种为‘飞翔韶华’时，所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，所述的增殖养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，所述的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA。
作为一种优选技术方案，所述的百合品种为‘飞翔天橙’时，所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，所述的增殖养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，所述的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
作为一种优选技术方案，所述炼苗移栽的移栽培基质为：泥炭土：蛭石＝2:1。
进一步优选的，所述初代诱导、继代增殖和生根培养的培养条件为23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗。
进一步优选的，所述炼苗移栽的方法为：将百合生根无菌苗从培养室内移出，第1～4d阶段性拧开瓶盖，去除苗根部培养基，移栽到育苗穴盘中，浇透水后覆膜保湿2～4d，移栽30d后即得百合无菌苗，统计各处理成活率及生长状况。
所述的初代诱导，培养40d后得到无菌苗，统计诱导率及丛芽诱导数。
所述的继代增殖，培养50d后增殖无根丛苗，统计不定芽增殖系数。
所述的生根培养，培养30d后即得生根无菌苗，统计生根率、生根数及平均根长。
上法在培育百合品种‘飞翔韶华’或‘飞翔天橙’幼苗中的应用。
本发明的百合组培快繁方法中所述的百合材料为由南京农业大学科研团队与国内同行合作，自主研发培育并公开的新品种，功能性百合‘飞翔韶华’和‘飞翔天橙’。
本发明技术人员在研究过程中发现，不同的百合品种在组培快繁过程中需要采用不同的培养基配方，因此针对特定的百合品种筛选组培效果最佳的培养基配方和基质配方是本发明的主要发明点。
本发明的有益效果：
本发明建立了两个功能性品种最佳组培快繁技术体系：‘飞翔韶华’最佳诱导培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，最适增殖养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，最佳生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA，适宜的驯化培基质是泥炭土：蛭石＝2:1，组培苗成活率为100％；‘飞翔天橙’最佳诱导培养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，最适增殖养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，最佳生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂，适宜的驯化培基质是泥炭土：蛭石＝2:1，组培苗成活率为100％。本发明建立了其组培快繁殖技术体系，为功能性百合产业化奠定了良好基础。
附图说明
图1百合鳞片外植体表面消毒。
图2‘飞翔韶华’百合鳞片诱导培养不定芽分化情况。
图3‘飞翔韶华’继代增殖情况。
图4‘飞翔韶华’无菌苗生根情况；
其中，1为生根培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂的无菌苗生根情况；2为生根培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA的无菌苗生根情况；3为生根培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1.0mg/L NAA的无菌苗生根情况；4为生根培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1.0mg/L NAA的无菌苗生根情况。
图5‘飞翔韶华’组培苗生长情况。
图6‘飞翔天橙’百合鳞片诱导培养不定芽分化情况。
图7‘飞翔天橙’继代增殖情况。
图8‘飞翔天橙’无菌苗生根情况。
图9‘飞翔天橙’组培苗生长情况。
具体实施例
下面结合图表和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例仅用于说明本发明，并不用来限制本发明的保护范围。除非特别说明，以下实施例所用试剂和器材均为市购或本领域常用，以下实施例所用方法均为本领域常用方法。
实施例1
(1)外植体消毒
百合鳞茎中内层健康饱满鳞片作为外植体表面灭菌，首先把外体植放入滴入2滴洗洁精的烧杯中，加入自来水，玻璃棒轻轻搅拌2min，用纱布清洗外植体表面污垢，流水下缓慢冲洗1.5h，蒸馏水洗涤2遍，干净锥形瓶装至超净工作台，用75％乙醇消毒30s，消毒时边缓慢晃动锥形瓶，无菌水冲洗2遍，再在1％次氯酸钠溶液中浸泡20min，无菌水冲洗3～5次，最后放在无菌的滤纸上控干水分，将消毒好的鳞片切成1cm×1cm的小块，获得无菌外植体(如图1所示)。
(2)初代诱导
将消毒完成的外植体接种于诱导培养基(MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/L NAA)中，在23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，40d后统计诱导率及丛芽诱导数，每个处理3次重复。
(2)继代增殖
挑选生长旺盛的无菌苗，切取1～2.5cm的不定芽，每瓶3个接种量转入增殖培养基(MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/L NAA)中，于23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培50d后统计不定芽增殖系数，每个处理3次重复。
(4)生根培养
将所述增殖无根丛苗切分成单个小苗，转入生根培养基(含有MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA的培养基或含有1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA的培养基)中，于23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，30d即得百合生根无菌苗，统计生根率、生根数及平均根长，每个处理3次重复。
(5)驯化移栽
将百合生根无菌苗从培养室内移出，炼苗的第1～4d阶段性缓慢拧开培养瓶瓶盖，清洗去除苗根部培养基，移栽到不同移栽基质的育苗穴盘中，浇透水后覆膜保湿2～4d，筛选合适的移栽培养基(配方见表1)。移栽30d后，统计各处理成活率及生长状况，每个处理3次重复。
表1栽培基质类型
(6)数据处理
不定芽诱导率＝出芽外植体数/接种外植体数×100％
不定芽分化系数＝不定芽总数/接种外植体数
不定芽增殖倍数＝小鳞茎总数/接种小鳞茎数
有重复的数据导入SPSS进行齐性检验，得到各组数据的标准差和组间差异，差异程度用英文小写字母表示。
结果分析
(1)初代诱导培养基选择
表2‘飞翔韶华’不定芽诱导分化情况
由表2、图2可知，不同的培养基组分对‘飞翔韶华’的诱导率及丛芽诱导数的影响存在较大差异，培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA对‘飞翔韶华’鳞片诱导不定芽的效果最好，诱导率达到83.33％，丛芽诱导数达到2.58。外植体在诱导过程中，在第三周出现不定芽，之后植株长势加快，可以观察到愈伤组织分化丛芽中，越低浓度的6-BA培养基形成的愈伤组织越松散，分化出芽的数量更多，且不易褐化。
(2)继代培养基的选择
表3‘飞翔韶华’不定芽增殖结果
由表3、图3可知，不同处理对‘飞翔韶华’的增值系数影响不同，‘飞翔韶华’在MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的增殖培养基中增殖系数最高，达到3.43，与其他处理间的差异显著。在百合增殖过程中，会有部分无菌材料通过愈伤组织途径分化增殖，且随6-BA浓度的增加，通过愈伤组织增值的情况越明显，愈伤组织途径形成的苗细弱，不适宜做快繁材料。
(3)生根培养基的选择
表4‘飞翔韶华’无菌苗生根情况
由表4、图4可知，接种30d后发现不加或低浓度NAA的MS+3％蔗糖+0.7％琼脂或1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂培养基中组培苗根的数量较少，而添加较高浓度NAA生根培养基中组培苗根的数量较多，但长度极短。结合生根率、生根条数、平均根长及表型，得出‘飞翔韶华’最适宜的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA。
(4)驯化基质选择
表5‘飞翔韶华’炼苗栽培基质筛选
由表5、图5中的成活率、苗长势、根生长状况来看，泥炭土：蛭石＝2:1是最适宜‘飞翔韶华’幼苗生长的栽培基质。
实施例2
(1)外植体消毒
百合鳞茎中内层健康饱满鳞片作为外植体表面灭菌，首先把外体植放入滴入2滴洗洁精的烧杯中，加入自来水，玻璃棒轻轻搅拌2min，用纱布清洗外植体表面污垢，流水下缓慢冲洗1.5h后，用蒸馏水洗涤2遍，干净锥形瓶装至超净工作台，用75％乙醇消毒30s，消毒时边缓慢晃动锥形瓶，无菌水冲洗2遍，再在1％次氯酸钠溶液中浸泡20min，无菌水冲洗3～5次，最后放在无菌的滤纸上控干水分，将消毒好的鳞片切成1cm×1cm的小块，获得无菌外植体。
(2)初代诱导
将消毒完成的外植体接种于诱导培养基(MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/L NAA)中，在23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，40d后统计诱导率及丛芽诱导数，每个处理3次重复。
(3)继代增殖
挑选生长旺盛的无菌苗，切取1～2.5cm的不定芽，每瓶3个接种量转入增殖培养基(MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/L NAA)中，于23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培50d后统计不定芽增殖系数，每个处理3次重复。
(4)生根培养
将所述增殖无根丛苗切分成单个小苗，转入生根培养基(含有MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA的培养基或含有1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA的培养基)中，于23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，30d即得百合生根无菌苗，统计生根率、生根数及平均根长，每个处理3次重复。
(5)驯化移栽
将百合生根无菌苗从培养室内移出，炼苗的第1～4d阶段性缓慢拧开培养瓶瓶盖，清洗去除苗根部培养基，移栽到不同移栽基质的育苗穴盘中，浇透水后覆膜保湿2～4d，筛选合适的移栽培养基(配方见表1)。移栽30d后，统计各处理成活率及生长状况，每个处理3次重复。
(7)数据处理
不定芽诱导率＝出芽外植体数/接种外植体数×100％
不定芽分化系数＝不定芽总数/接种外植体数
不定芽增殖倍数＝小鳞茎总数/接种小鳞茎数
有重复的数据导入SPSS进行齐性检验，得到各组数据的标准差和组间差异，差异程度用英文小写字母表示。
结果分析
(1)初代诱导培养基选择
表6‘飞翔天橙’不定芽诱导分化情况
由表6、图6可知，不同的培养基组分对‘飞翔天橙’的诱导率及丛芽诱导数的影响存在较大差异，培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA对‘飞翔天橙’鳞片诱导不定芽的效果最好，诱导率达到90.00％，丛芽诱导数达到2.83。外植体在诱导过程中，第三周出现不定芽，之后植株长势加快，同时可以观察到越低浓度的6-BA培养基形成的愈伤组织越松散，分化出芽的数量更多，且不易褐化。
(2)继代培养基的选择
表7‘飞翔天橙’不定芽增殖结果
由表7、图7可知，不同处理对‘飞翔天橙’的增值系数影响不同，在MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA中增殖的效果也达到最好，且各处理间差异较大，在增殖过程中均呈现随6-BA浓度的增加，通过愈伤组织增殖的情况越明显。
(3)生根培养基的选择
表8‘飞翔天橙’无菌苗生根情况
由表8、图8可知，接种30d后发现不加或低浓度NAA的MS+3％蔗糖+0.7％琼脂或1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂培养基中组培苗根的数量较少，而添加较高浓度NAA生根培养基中组培苗根的数量较多，大部分根粘连在一起，出现许多毛细根。结合生根率、生根条数、平均根长及表型，‘飞翔天橙’最适宜的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
(4)驯化基质选择
表9‘飞翔天橙’炼苗栽培基质筛选
由表9、图9中的成活率、苗长势、根生长状况来看，泥炭土：蛭石＝2:1是最适宜‘飞翔天橙’幼苗生长的栽培基质。
总结：由以上两个实施例结果可知，‘飞翔韶华’最佳诱导培养基MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，最适增殖养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA，最佳生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA，适宜的驯化培基质是泥炭土：蛭石＝2:1，组培苗成活率为100％；‘飞翔天橙’最佳诱导培养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，最适增殖养基是MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，最佳生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂，适宜的驯化培基质是泥炭土：蛭石＝2:1，组培苗成活率为100％。本发明建立了两个功能性品种最佳组培快繁技术体系。
Claims (7)
1.一种百合组培快繁方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)外植体消毒：选择百合品种‘飞翔韶华’或‘飞翔天橙’的鳞茎中内层健康饱满鳞片作为外植体洗净后，依次用75％乙醇、1％次氯酸钠进行消毒、切块；
(2)初代诱导：将消毒完成的外植体接种于诱导培养基中进行培养得到无菌苗；
所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/LNAA；
(3)继代增殖：挑选生长旺盛的无菌苗，切取1～2.5cm的不定芽，转入增殖培养基中进行培养得到增殖无根丛苗；
所述的增殖培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/LNAA；
(4)生根培养：将所述的增殖无根丛苗切分成单个小苗，转入生根培养基中进行培养得到生根无菌苗；
所述的生根培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/LNAA；或1/2MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0～1.5mg/L NAA；
(5)驯化移栽：将百合生根无菌苗从培养室内移出进行炼苗移栽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的百合品种为‘飞翔韶华’时，所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，所述的增殖养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，所述的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L NAA。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的百合品种为‘飞翔天橙’时，所述的诱导培养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，所述的增殖养基为：MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，所述的生根培养基为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述炼苗移栽的移栽培基质为：泥炭土：蛭石＝2:1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述初代诱导、继代增殖和生根培养的培养条件为23℃、光照强度为2000Lx、光周期为12h光照/12h黑暗。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述炼苗移栽的方法为：将百合生根无菌苗从培养室内移出，第1～4d阶段性拧开瓶盖，去除苗根部培养基，移栽到育苗穴盘中，浇透水后覆膜保湿2～4d，移栽30d后得百合无菌苗。
7.权利要求1～6中的任意一种方法在培育百合品种‘飞翔韶华’或‘飞翔天橙’幼苗中的应用。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1771797A (zh) * | 2005-11-15 | 2006-05-17 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种鲜切花百合的高效离体繁殖方法 |
| CN102405845A (zh) * | 2011-12-12 | 2012-04-11 | 中山火炬职业技术学院 | 一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法 |
| CN102754598A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-31 | 中国长江三峡集团公司 | 百合试管小鳞茎诱导方法 |
| CN103141381A (zh) * | 2013-02-24 | 2013-06-12 | 周世永 | 一种东方百合组织培养方法 |
| US20150150203A1 (en) * | 2012-08-06 | 2015-06-04 | Council Of Scientific & Industrial Research | Bioreactor vessel for large scale growing of plants under aseptic condition |
| CN109315288A (zh) * | 2017-07-31 | 2019-02-12 | 赵义平 | 一种百合的组培快繁方法 |
| CN109526735A (zh) * | 2017-07-31 | 2019-03-29 | 赵义平 | 一种亚洲百合的栽培方法 |
| CN111280059A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-16 | 南京农业大学 | 一种高效的百合脱毒方法 |
| CN113317206A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-08-31 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种用于墨脱百合组培快繁的培养基组合、组培快繁方法及应用 |
-
2023
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Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1771797A (zh) * | 2005-11-15 | 2006-05-17 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种鲜切花百合的高效离体繁殖方法 |
| CN102405845A (zh) * | 2011-12-12 | 2012-04-11 | 中山火炬职业技术学院 | 一种观赏百合的组织培养快速繁殖方法 |
| CN102754598A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-31 | 中国长江三峡集团公司 | 百合试管小鳞茎诱导方法 |
| US20150150203A1 (en) * | 2012-08-06 | 2015-06-04 | Council Of Scientific & Industrial Research | Bioreactor vessel for large scale growing of plants under aseptic condition |
| CN103141381A (zh) * | 2013-02-24 | 2013-06-12 | 周世永 | 一种东方百合组织培养方法 |
| CN109315288A (zh) * | 2017-07-31 | 2019-02-12 | 赵义平 | 一种百合的组培快繁方法 |
| CN109526735A (zh) * | 2017-07-31 | 2019-03-29 | 赵义平 | 一种亚洲百合的栽培方法 |
| CN111280059A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-16 | 南京农业大学 | 一种高效的百合脱毒方法 |
| CN113317206A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-08-31 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种用于墨脱百合组培快繁的培养基组合、组培快繁方法及应用 |
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