CN102369217A - Il-1结合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明包括IL-1α结合蛋白。具体而言，本发明涉及抗体，其为嵌合的、CDR嫁接的和人源化的抗体。本发明的抗体具有对IL-1α的高亲和力并中和IL-1α活性。本发明的抗体可以是全长抗体或其抗原结合部分。也提供了本发明的抗体的制备方法和使用方法。本发明的抗体或抗体部分用于，例如在患有病症的人受试者中检测IL-1α和抑制IL-1α活性，在所述病症中，IL-1α活性是有害的。

Description

IL-1结合蛋白
与相关申请的交叉参考
本申请要求于2009年1月29日提交的美国临时申请系列号61/206,250的优先权利益。
发明领域
本发明涉及IL-1结合蛋白，且具体而言涉及其在预防和/或治疗IL-1介导的疾病中的用途。
发明背景
细胞因子例如白细胞介素-1（IL-1）和肿瘤坏死因子（TNF），是由多种细胞例如单核细胞和巨噬细胞产生的分子，其已鉴定为炎症过程的介质。白细胞介素-1是具有广泛生物学和生理学效应的细胞因子，所述生物学和生理学效应包括发热、前列腺素合成（在例如成纤维细胞、肌肉和内皮细胞中）、T淋巴细胞活化和白细胞介素-2产生。
白细胞介素-1超家族：IL-1超家族的最初成员是IL-1α、IL-1β和IL-1受体拮抗剂（IL-1RA）。IL-1α和β是与针对感染的免疫防御有关的促炎细胞因子。IL-1Rα是与IL-1α和IL-1β竞争受体结合的分子，从而阻断其在免疫活化中的作用。近年来可见到其他分子加入IL-1超家族，包括IL-18（见Dinarello CA（1994）FASEB J. 8（15）：1314–25；Huising，MO等人，(2004) Dev. Comp. Immunol. 28（5）：395–413）和另外六个与IL-1α、IL-1β或IL-1RA结构同源的基因。将后六个成员命名为IL1F5、IL1F6、IL1F7、IL1F8、IL1F9和IL1F10。相应地，将IL-1α、IL-1β和IL-1RA分别重新命名为IL-1F1、IL-1F2和IL-1F3（见Sims JE等人，（2001）Trends Immunol. 22（10）：536–7；Dunn E等人，（2001）Trends Immunol. 22（10）：533–6）。IL-1家族的另一个推定成员最近得到描述，被称为IL-33或IL-1F11，尽管该命名尚未得到HGNC基因家族命名法数据库的正式接受。
IL-1α和IL-1β：IL-1α和IL-1β都由巨噬细胞、单核细胞和树突细胞产生。它们形成身体对感染的炎症反应的重要部分。这些细胞因子增加粘着因子在内皮细胞上的表达，来使得对抗病原体的细胞白细胞能够向感染位点移行，并重置下丘脑体温调节中枢，从而导致其自身表现为发热的体温升高。因此将IL-1称为内源性致热原。升高的体温帮助身体免疫系统对抗感染。IL-1对于血细胞生成的调节也是重要的。IL-1β在外周组织的产生也和与发热相关的痛觉过敏（对疼痛的敏感性增高）有关（Morgan MM等人，（2004）Brain Res. 1022（1-2）：96–100）。在很大程度上，IL-1的这两种形式结合相同的细胞受体。该受体由两个相关但不相同的亚基组成，所述亚基通过通常与某些其他受体共享的通路传导细胞内信号。这些包括先天免疫受体的Toll家族和IL-18的受体。IL-1的这两种形式也具有相似的生物学性质，包括诱导发热、慢波睡眠和嗜中性、T和B淋巴细胞活化、成纤维细胞增生、对某些细胞的细胞毒性、诱导胶原酶、肝急性期蛋白的合成、以及集落刺激因子和胶原产生增加。
编码IL-1两个不同形式的cDNA已得到分离和表达；这些cDNA代表两个不同的基因产物，称为IL-1β（Auron等人，（1984）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:7909）和IL-1α（Lomedico等人，（1984）Nature 312:458）。IL-1β是由人单核细胞产生的、在mRNA和蛋白质水平的主要形式。人IL-1的两种形式仅共享26%的氨基酸同源性。尽管其多肽序列不同，但两种形式的IL-1具有结构相似性（Auron等人，（1985）J. Mol. Cell Immunol. 2:169），这是由于氨基酸同源性被限制于IL-1分子的不连续区。
IL-1α和IL-1β作为前体肽产生。换言之，它们作为长蛋白质产生，然后进行加工以释放较短的活性分子，称为成熟蛋白质。例如，成熟的IL-1β是由蛋白质胱天蛋白酶家族的特定成员（称为胱天蛋白酶-1或白细胞介素-1转变酶（ICE））切割后从IL-1β原释放的。人IL-1超家族各成员成熟形式的三维结构由产生桶状蛋白质的12-14 β-链组成。
IL-1α是与各种免疫反应、炎症过程和血细胞生成有关的多效细胞因子。IL-1α由活化的巨噬细胞产生，通过诱导IL-2释放、B细胞成熟和增生、以及成纤维细胞生长因子活性而刺激胸腺细胞增生。IL-1α蛋白质与炎症反应有关，经鉴定为内源性致热原，并有报道其刺激前列腺素和胶原酶从滑膜细胞释放。其作为蛋白原(proprotein)产生，由钙激活中性蛋白酶蛋白水解加工，并以尚未得到充分研究的机制释放。该基因以及八个其他白细胞介素1家族基因形成染色体2上的细胞因子基因簇。IL-1α及其致病作用在Ibelgaufts, Lexikon Zytokine（Cytokine Dictionary）, Medikon Verlag, Munich 1992以及其引用文献中得到详细描述。关于IL 1α的不需要的作用也有参考文献，例如Oppenheim等人， Immunology Today 7 (1986) 45-56, Durum等人，Ann. Rev. Immunol. 3 (1985) 263-287和Synnons等人，Lymphokine Research 8 (1989) 365-372。IL 1α最初由于其增加软骨再吸收的作用而被称为“分解代谢物”，但也由于其对滑膜细胞中胶原酶和前列腺素的刺激性作用而被称为“单核细胞因子”（MCF），以及对急性期反应具有刺激性作用的“白细胞内源性因子”（LEM）。除此之外，由于IL 1α可以在许多不同的细胞中合成，例如单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和淋巴细胞，所以IL 1α具有广谱生物学活性，且除此之外，许多细胞具有IL 1α的特异性受体。因此，具体而言，可以理解IL 1α作为各种病症和病症症状的触发物占有重要位置。这些病症经常是显著严重的病症，目前根本无法治疗或仅仅可以得到不充分治疗。已有建议说这些基因的多态性与类风湿性关节炎和阿尔茨海默氏病相关。一般而言，IL-1已牵涉于许多人类疾病，包括关节炎、肺纤维化、中枢神经系统疾病、糖尿病和某些心血管疾病。
本领域需要能够结合IL-1α的改良抗体。优选地，该抗体结合IL-1α。优选地，该抗体能够中和IL-1α。本发明提供能够结合IL-1α、以高亲和力结合、以及结合并中和IL-1α的结合蛋白、CDR嫁接的抗体、人源化抗体及其片段的新家族。本发明提供抑制IL-1α的治疗手段，并提供治疗与IL-1α水平升高相关的疾病特别是炎性病症的组合物和方法。
发明概述
本发明提供了能够结合IL-1α、以高亲和力结合、以及结合并中和IL-1α的结合蛋白、CDR嫁接的抗体、人源化抗体及其片段的新家族。本发明提供了抑制IL-1α的治疗手段，并提供了治疗与IL-1α水平升高有关的疾病特别是炎性病症的组合物和方法。一方面，本发明提供了包含可变重链多肽的结合蛋白，所述可变重链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 37，SEQ ID No.38，SEQ ID No.39，SEQ ID No.40，SEQ ID No.48，SEQ ID No.50，SEQ ID No.52和SEQ ID No.54；其中所述结合蛋白能够结合人IL-1α。另一方面，本发明提供了包含可变轻链多肽的结合蛋白，所述可变轻链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SED ID No.41，SEQ ID No.42，SEQ ID No.43，SEQ ID No.44，SEQ ID No.45，SEQ ID No.46，SEQ ID No.47，SEQ ID No.49，SEQ ID No.51，SEQ ID No.53和SEQ ID No.55；其中所述结合蛋白能够结合人IL-1α。
一方面，本发明提供了结合蛋白，所述结合蛋白包含可变重链多肽，所述可变重链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 37，SEQ ID No.38，SEQ ID No.39，SEQ ID No.40，SEQ ID No.48，SEQ ID No.50，SEQ ID No.52和SEQ ID No.54；以及可变轻链多肽，所述可变轻链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SED ID No.41，SEQ ID No.42，SEQ ID No.43，SEQ ID No.44，SEQ ID No.45，SEQ ID No.46，SEQ ID No.47，SEQ ID No.49，SEQ ID No.51，SEQ ID No.53和SEQ ID No.55；其中所述结合蛋白能够结合人IL-1α。另一方面，结合蛋白包含选自下述的可变重链多肽和可变轻链多肽：SEQ ID NO.:38和SEQ ID NO.:44，SEQ ID NO.:40和SEQ ID NO.:44，SEQ ID NO.:48和SEQ ID NO.:49，SEQ ID NO.:50和SEQ ID NO.:51，SEQ ID NO.:52和SEQ ID NO.:53，以及SEQ ID NO.:54和SEQ ID NO.:55。上述结合蛋白，其中所述结合蛋白是免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR嫁接的抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、双特异性抗体、F(ab’)2、或Fv。另一方面，上述结合蛋白包含选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、以及人IgA恒定结构域。另一方面，本发明的结合蛋白另外包含重链恒定区，所述重链恒定区具有选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3；以及另外的轻链恒定区，所述轻链恒定区具有选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5。
本发明的结合蛋白能够调节人IL-1α的生物学功能并另外能够中和人IL-1α。一方面，如通过表面等离振子共振测量的，结合蛋白具有的对于所述靶的结合速率（on rate）常数（Kon）选自：至少约102M-1s-1；至少约103M-1s-1；至少约104M-1s-1；至少约105M-1s-1；和至少约106M-1s-1。另一方面，如通过表面等离振子共振测量的，结合蛋白具有的对于所述靶的解离速率（off rate）常数（Koff）选自：至多约10-3s-1；至多约10-4s-1；至多约10-5s-1；和至多约10-6s-1。另一方面，结合蛋白具有的对于所述靶的解离常数（KD）选自：至多约10-7 M；至多约10-8 M；至多约10-9 M；至多约10-10 M；至多约10-11 M；至多约10-12 M；和至多10-13 M。另外，结合蛋白具有的对于IL-1α的解离常数（KD）选自：1.34x10-9M；1.35x10-9M；2.09x10-9M；2.8x10-11 M；1x10-11 M；3.1x10-11 M；3.2x10-11 M；和3.3x10-11 M。
本发明的结合蛋白另外包含选自下述的试剂：免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒剂。显像剂可以是放射性标记（包括但不限于3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho、和153Sm）、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记、或生物素。治疗剂或细胞毒剂可以是抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素、和细胞凋亡剂。
在另一个实施方案中，抗体构建体是糖基化的。优选地，糖基化是人糖基化模式。
在另一个实施方案中，如上公开的结合蛋白作为晶体存在。优选地，该晶体是无载体的药学控释晶体。在一个实施方案中，结晶的结合蛋白具有比其可溶性配对物更长的体内半衰期。在另一个实施方案中，结晶的结合蛋白在结晶后保持生物学活性。
本发明的一个方面涉及编码以上公开的任何一种结合蛋白的分离的核酸。进一步的实施方案提供包含以上公开的分离的核酸的载体，其中所述载体选自pcDNA；pTT（Durocher 等人，Nucleic Acids Research 2002，第30卷，No.2）；pTT3（具有另外的多克隆位点的pTT；pEFBOS（Mizushima，S.和Nagata，S.,（1990）Nucleic acids Research 第18卷，No. 17）；pBV；pJV和pBJ。
在另一个方面，宿主细胞用以上公开的载体转化。一方面，宿主细胞是原核细胞，包括但不限于大肠杆菌（E. coli）。在相关实施方案中，宿主细胞是真核细胞，包括但不限于原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。一方面，宿主细胞是哺乳动物细胞，包括但不限于，CHO和COS；或真菌细胞例如啤酒糖酵母（Saccharomyces cerevisiae）；或昆虫细胞例如Sf9。
本发明的另一个方面提供了生产结合IL-1α的结合蛋白的方法，所述方法包括在足以生产结合IL-1α的结合蛋白的条件下，在培养基中培养如上公开的任何一种宿主细胞。另一个实施方案提供了根据如上公开的方法生产的结合蛋白。
一个实施方案提供了用于释放结合蛋白的组合物，其中所述组合物包含制剂，所述制剂又包含如上公开的结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物和成分，以及至少一种聚合载体。一方面，聚合载体是选自下述的一种或多种的聚合物：聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮(poly(dioxanone))、聚乙二醇、聚（羟丙基）甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、血纤蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖（glycaminoglycans）、硫酸化多糖（sulfated polyeaccharides）、掺合物及其共聚物。在另一方面，成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇（lactitol）、明胶、羟丙基-β-环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。另一个实施方案提供了用于治疗哺乳动物的方法，所述方法包括给哺乳动物施用有效量的如上公开的组合物的步骤。
本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含如上公开的结合蛋白和药学可接受的载体。在进一步的实施方案中，药物组合物包含用于治疗病症的至少一种另外的治疗剂，在所述病症中，IL-1α活性是有害的。在一方面，另外的试剂选自：治疗剂，显像剂，细胞毒剂，血管发生抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；粘附分子阻断剂；抗细胞因子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；环孢菌素；雷帕霉素；FK506；可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂，麻醉药，非类固醇消炎药（NSAID），止痛剂，麻醉剂，镇静剂，局部麻醉剂，神经肌肉阻断剂，抗微生物剂，抗牛皮癣剂，皮质类固醇，促蛋白合成类固醇，促红细胞生成素，免疫接种，免疫球蛋白，免疫抑制剂，生长激素，激素替代药物，放射性药物，抗抑郁药，抗精神病药，刺激剂，哮喘药物治疗，β激动剂，吸入类固醇，口服类固醇，肾上腺素或类似物，细胞因子，和细胞因子拮抗剂。
在另一个方面，本发明提供了用于抑制人IL-1α活性的方法，包括将人IL-1α与如上公开的结合蛋白接触，从而抑制人IL-1α活性。在一个有关方面中，本发明提供了用于在患有病症的人受试者中抑制人IL-1α活性的方法，在所述病症中IL-1α活性是有害的，所述方法包括给人受试者施用如上公开的结合蛋白，从而使得人受试者中的IL-1α活性被抑制并达到治疗。
在另一个方面，本发明提供了在受试者中治疗（例如治愈、抑制、改善、延迟或预防发作、或预防再发或复发）或预防IL-1α相关病症的方法。该方法包括：以足以治疗或预防IL-1α相关病症的量，给受试者施用IL-1α结合剂（具体为拮抗剂），例如此处所述的抗IL-1α抗体或其片段。可以给受试者单独或与此处所述的其他治疗方式组合施用IL-1α拮抗剂，例如抗IL-1α抗体或其片段。
在另一个方面，本申请提供了检测体外样品（例如生物学样品，例如血清、血浆、组织、活组织检查）中IL-1α存在的方法。该方法可用于诊断病症，例如免疫细胞相关病症。该方法包括：（i）将样品或对照样品与此处所述的抗IL-1α抗体或其片段接触；并且（ii）检测抗IL-1α抗体或其片段与样品或对照样品之间复合物的形成，其中，样品中复合物形成相对于对照样品的统计学显著性变化指示样品中存在IL-1α。
在另一个方面，本申请提供了体内检测IL-1α存在的方法（例如在受试者中体内成像）。该方法可用于诊断病症，例如IL-1α相关病症。该方法包括：（i）在允许抗体或片段与IL-1α结合的条件下，给受试者或对照受试者施用此处所述的抗IL-1α抗体或其片段；并且（ii）检测抗体或片段与IL-1α之间复合物的形成，其中，受试者中复合物形成相对于对照受试者的统计学显著性变化指示存在IL-1α。
在另一个方面，本发明的结合蛋白可用于治疗病症，所述病症选自类风湿性关节炎、骨关节炎、青少年慢性关节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、全身性红斑狼疮、Crohn氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、甲状腺炎、哮喘、变应性疾病、牛皮癣、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、与器官移植相关的急性或慢性免疫性疾病、肉状瘤病、动脉粥样硬化、弥散性血管内凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、肾病综合征、慢性疲乏综合征、韦格纳氏肉芽肿病、过敏性紫癜（Henoch-Schoenlein purpurea）、肾显微血管炎、慢性活动性肝炎、葡萄膜炎、脓毒性休克、中毒性休克综合征、脓毒病综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合征、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、中风、原发性胆汁性肝硬变、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏病、散发性多腺性I型缺乏和多腺性II型缺乏、Schmidt氏综合征、成人（急性）呼吸窘迫综合征、秃头、斑秃（alopecia areata）、血清反应阴性关节病（arthopathy）、关节病、Reiter氏病、牛皮癣性关节病、溃疡性结肠炎性关节病、肠病性滑膜炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病、脊椎关节病（spondyloarthopathy）、动脉粥样化疾病/动脉硬化、特应性变态反应、自身免疫性大疱性疾病、寻常天疱疮、落叶状天疱疮、类天疱疮、线性IgA疾病、自身免疫性溶血性贫血、Coombs阳性溶血性贫血、获得性恶性贫血、青少年性恶性贫血、肌痛脑炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮肤念珠菌病、巨细胞性动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合征、获得性免疫缺陷相关病、乙型肝炎、丙型肝炎、常见的各种免疫缺陷（常见的可变低丙种球蛋白血症）、扩张型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、过早卵巢衰竭、纤维化肺疾病、隐原性纤维化肺泡炎、炎症后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病相关性间质性肺病、混合型结缔组织病相关性肺病、全身性硬皮病相关性间质性肺病、类风湿性关节炎相关性间质性肺病、全身性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多肌炎相关性肺病、Sjögren氏病相关性肺病、强直性脊柱炎相关性肺病、脉管炎性弥散性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药物诱导的间质性肺病、纤维化、放射性纤维化、闭塞性细支气管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴细胞性浸润性肺病、传染后间质性肺病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎（传统自身免疫性或狼疮样肝炎）、2型自身免疫性肝炎（抗LKM抗体肝炎）、自身免疫介导的低血糖、具有黑棘皮症的B型胰岛素耐受性、甲状旁腺机能减退、与器官移植相关的急性免疫性疾病、与器官移植相关的慢性免疫性疾病、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、1型牛皮癣、2型牛皮癣、特发性白细胞减少（leucopaenia）、自身免疫性嗜中性白细胞减少症、肾脏病NOS、肾小球肾炎（glomerulonephritides）、肾显微血管炎（vasulitis）、莱姆病、盘状红斑狼疮、特发性男性不育症或NOS、精子自身免疫性、多发性硬化（所有亚型）、交感性眼炎、结缔组织病继发的肺动脉高压、Goodpasture氏综合征、结节性多动脉炎的肺表现、急性风湿热、类风湿性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、Sjörgren氏综合征、Takayasu氏病/动脉炎、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少症、自身免疫性甲状腺病、甲状腺机能亢进、甲状腺肿性（goitrous）自身免疫性甲状腺功能减退（Hashimoto氏病）、萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退、原发性粘液性水肿、晶状体性（phacogenic）葡萄膜炎、原发性血管炎、白癜风急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬变、酒精诱导的肝损伤、胆汁郁积（choleosatatis）、特应性肝病、药物诱导的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、变态反应和哮喘、B群链球菌（GBS）感染、精神障碍（例如，抑郁和精神分裂症）、Th2型和Th1型介导的疾病、急性和慢性痛（不同形式的疼痛）、以及癌症例如肺、乳腺、胃、膀胱、结肠、胰、卵巢、前列腺和直肠癌以及造血恶性肿瘤（白血病和淋巴瘤）、无β脂蛋白血症（Abetalipoprotemia）、手足发绀、急性和慢性寄生或感染过程、急性白血病、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、急性或慢性细菌感染、急性胰腺炎、急性肾功能衰竭、腺癌、心房（aerial）异位搏动、AIDS痴呆复征、酒精诱导的肝炎、变应性结膜炎、过敏性接触性皮炎、变应性鼻炎、同种异体移植物排斥、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎缩性侧索硬化、贫血、心绞痛、前角细胞（horn cell）变性、抗cd3治疗、抗磷脂综合征、抗受体超敏反应、主动脉和周围性动脉瘤（aneuryisms）、主动脉壁夹层形成、高动脉压、动脉硬化、动静脉瘘、共济失调、心房纤维颤动（持续性或阵发性）、心房扑动、房室传导阻滞、B细胞淋巴瘤、骨移植物排斥、骨髓移植（BMT）排斥、束支传导阻滞、Burkitt氏淋巴瘤、烧伤、心律失常、心脏震晕综合征、心脏肿瘤、心肌病、心肺分流术炎症应答、软骨移植排斥、小脑皮质变性、小脑病症、紊乱性或多源性房性心动过速、化学疗法相关病症、慢性髓细胞性白血病（CML）、慢性酒精中毒、慢性炎性病理学、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性阻塞性肺部疾病（COPD）、慢性水杨酸盐中毒、结肠直肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、接触性皮炎、肺源性心脏病、冠状动脉疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培养物阴性脓毒病、囊性纤维化、细胞因子疗法相关病症、拳击员痴呆（Dementia pugilistica）、脱髓鞘病、登革出血热、皮炎、皮肤病学状况、多尿症（diabetes）、糖尿病、糖尿病性动脉硬化性（ateriosclerotic）疾病、弥漫性Lewy小体病、扩张性充血性心肌病、基底神经节病症、中年唐氏综合征、由阻断CNS多巴胺受体的药物诱导的药物诱导的运动障碍、药物敏感性、湿疹、脑脊髓炎、心内膜炎、内分泌病、会厌炎、EB病毒感染、红斑性肢痛病、锥体外束和小脑病症、家族性嗜血性（hematophagocytic）淋巴组织细胞增多症、胎儿胸腺移植排斥、Friedreich氏共济失调、功能性外周性动脉病症、真菌性脓毒病、气性坏疽病、胃溃疡、肾小球肾炎、任何器官或组织的移植物排斥、革兰氏阴性脓毒病、革兰氏阳性脓毒病、由于细胞内生物的肉芽肿、毛细胞性白血病、Hallerrorden-Spatz病、hashimoto氏甲状腺炎、枯草热、心脏移植排斥、血色素沉着症、血液透析、溶血性尿毒性综合征/血栓溶解性血小板减少性紫癜、出血、肝炎（A）、希氏束心律失常（arrythmias）、HIV感染/HIV神经病、何杰金氏病、运动过度性运动障碍、超敏反应、超敏感性肺炎、高血压、运动机能减退性运动障碍、下丘脑-垂体-肾上腺轴评价、特发性Addison氏病、特发性肺纤维化、抗体介导的细胞毒性、虚弱、婴儿型脊髓性肌萎缩、主动脉炎症、流行性感冒a、电离辐射照射、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、缺血性再灌注损伤、缺血性中风、青少年类风湿性关节炎、青少年脊髓性肌萎缩、卡波西氏肉瘤、肾移植排斥、军团杆菌、利什曼病、麻风病、皮层脊髓系统损伤、脂肪水肿、肝移植排斥、淋巴水肿（lymphederma）、疟疾、恶性淋巴瘤、恶性组织细胞增多症、恶性黑素瘤、脑膜炎、脑膜炎球菌血症、代谢性/特发性、偏头痛、线粒体多系统病症、混合型结缔组织病、单克隆丙种球蛋白病、多发性骨髓瘤、多系统变性（Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager和Machado-Joseph）、重症肌无力、鸟胞内分支杆菌、结核分支杆菌、骨髓异常增生综合征、心肌梗死、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生儿慢性肺病、肾炎、肾变病、神经变性疾病、神经原性I肌萎缩、嗜中性粒细胞减少性发烧、非何杰金淋巴瘤、腹主动脉及其分支闭塞、闭塞性动脉病症、okt3治疗、睾丸炎/附睾炎（epidydimitis）、睾丸炎/输精管切除术逆转操作、器官巨大症、骨质疏松症、胰移植排斥、胰癌、恶性肿瘤的肿瘤相关综合征/高钙血症、甲状旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性动脉粥样硬化（atherlosclerotic）疾病、外周血管病症、腹膜炎、恶性贫血、卡氏肺囊虫性肺炎、肺炎、POEMS综合征（多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、和皮肤变化综合征）、灌注后综合征、泵后综合征、MI心切开术后综合征、先兆子痫、进行性核上（supranucleo）麻痹、原发性肺动脉高压、放射治疗、Raynaud氏现象和疾病、Raynoud氏病、Refsum氏病、常规狭窄QRS心动过速、肾血管性高血压、再灌注损伤、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小体型老年性痴呆、血清反应阴性关节病、中风、镰状细胞贫血、皮肤同种异体移植物排斥、皮肤变化综合征、小肠移植排斥、实体瘤、特殊心律失常（arrythmias）、脊髓性共济失调、脊髓小脑变性、链球菌肌炎、小脑结构损伤、亚急性硬化性全脑炎、晕厥、心血管系统梅毒、全身性过敏反应（anaphalaxis）、全身炎症反应综合征、全身发作性青少年类风湿性关节炎、T细胞或FAB ALL、毛细血管扩张、血栓闭塞性脉管炎、血小板减少症、毒性、移植物、创伤/出血、III型超敏反应、IV型超敏反应、不稳定心绞痛、尿毒症、尿脓毒病、荨麻疹、心脏瓣膜疾病、静脉曲张、血管炎、静脉疾病、静脉血栓形成、心室纤维性颤动、病毒和真菌感染、病毒性脑炎/无菌性脑膜炎、病毒相关性噬红细胞（hemaphagocytic）综合征、Wernicke-Korsakoff综合征、Wilson氏病、任何器官或组织的异种移植排斥、急性冠状动脉综合征、急性特发性多神经炎、急性炎性脱髓鞘性多发性神经根性神经病、急性缺血、成人Still氏病、斑秃、过敏反应、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、动脉硬化、特应性湿疹、特应性皮炎、自身免疫性皮炎、与链球菌感染相关的自身免疫性病症、自身免疫性肠病、自身免疫性听力丧失、自身免疫性淋巴细胞增生综合征（ALPS）、自身免疫性心肌炎、自身免疫性过早卵巢衰竭、睑炎、支气管扩张、大疱性类天疱疮、心血管病、灾变性抗磷脂综合征、乳糜泻、颈椎关节强硬、慢性缺血、疤痕性类天疱疮、具有多发性硬化风险的临床孤立综合征（CIS）、结膜炎、儿童期发病性精神病、慢性阻塞性肺部疾病（COPD）、泪囊炎、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、糖尿病、椎间盘突出、盘脱垂、药物诱导的免疫性溶血性贫血、心内膜炎、子宫内膜异位、眼内炎、巩膜外层炎、多形性红斑、重型多形性红斑、妊娠期类天疱疮、Guillain-Barré综合征（GBS）、枯草热、Hughes综合征、特发性帕金森氏病、特发性间质性肺炎、IgE介导的变态反应、免疫性溶血性贫血、内含体肌炎、传染性眼炎性疾病、炎性脱髓鞘疾病、炎性心脏病、炎性肾病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、Kussmaul病或Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、网状青斑、黄斑变性、显微镜下多脉管炎、Morbus Bechterev、运动神经元病症、粘膜类天疱疮、多器官衰竭、重症肌无力、脊髓异常增生综合征、心肌炎、神经根障碍、神经病、非甲非乙型肝炎、视神经炎、骨质溶解、少关节的JRA、周围动脉闭塞性疾病（PAOD）、周围血管疾病（PVD）、外周动脉疾病（PAD）、静脉炎、结节性多动脉炎（或结节性动脉外膜炎）、多软骨炎、风湿性多肌痛、白发症、多关节的JRA、多发性内分泌缺陷综合征、多肌炎、风湿性多肌痛（PMR）、泵后综合征、原发性帕金森综合征、前列腺炎、单纯红细胞再生障碍、原发性肾上腺机能不足、复发型视神经脊髓炎、再狭窄、风湿性心脏病、SAPHO（滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎）、硬皮病、继发性淀粉样变性、休克肺、巩膜炎、坐骨神经痛、继发性肾上腺机能不足、聚硅氧烷相关的结缔组织病、Sneddon-Wilkinson皮肤病、关节强硬性脊椎炎、Stevens-Johnson综合征（SJS）、全身性炎症应答综合征、颞动脉炎、弓形体视网膜炎、中毒性表皮坏死松解、横贯性脊髓炎、TRAPS（肿瘤坏死因子受体，I型变态反应，II型糖尿病、荨麻疹、普通型间质性肺炎（UIP）、脉管炎、春季结膜炎、病毒性视网膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada综合征（VKH综合征）、湿黄斑变性和伤口愈合。
一方面，本发明的结合蛋白用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、Crohn氏病、多发性硬化、胰岛素依赖性糖尿病和牛皮癣。在另一方面，本发明的结合蛋白也用于治疗患有自身免疫性疾病的人，所述疾病具体为与炎症相关的那些疾病，包括强直性脊柱炎、变态反应、自身免疫性糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎。
在另一个方面，本发明提供了治疗患有病症的患者的方法，所述病症中，人IL-1α是有害的，所述方法包括在如上讨论的第二种试剂施用之前、同时或之后，施用如上公开的任何一种结合蛋白的步骤。在另一个实施方案中，可以与一种或多种IL-1α拮抗剂（例如抗IL-1α抗体或其片段）共同施用或共同配制的另外的治疗剂包括但不限于：TNF拮抗剂；TNF受体的可溶性片段；ENBREL；TNF酶拮抗剂；TNF转换酶（TACE）抑制剂；毒蕈碱性受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素γ； perfenidone；化疗剂，氨甲蝶呤；来氟洛米；西罗莫司（sirolimus）（雷帕霉素）或其类似物CCI-779；COX2或cPLA2抑制剂；NSAIDs；免疫调谐剂；p38抑制剂；TPL-2，MK-2和NFkB抑制剂；布地萘德；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素；柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂肪加氧酶抑制剂；美沙拉秦；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1β抗体；抗IL-6抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF的抗体或激动剂；CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配体的抗体；FK506；雷帕霉素；霉酚酸酯；布洛芬；强的松龙；磷酸二酯酶抑制剂；腺苷激动剂；抗凝剂；补体抑制剂；肾上腺素能药；IRAK、NIK、IKK、p38、或MAP激酶抑制剂；IL-1β转换酶抑制剂；TNFα转换酶抑制剂；T细胞发信号抑制剂；金属蛋白酶抑制剂；6-巯基嘌呤；血管紧张素转换酶抑制剂；可溶性细胞因子受体；可溶性p55 TNF受体；可溶性p75 TNF受体；sIL-1RI；sIL-1RII；sIL-6R；抗炎细胞因子；IL-4；IL-10；IL-11；和TGFβ。
在一个实施方案中，如上公开的药物组合物经由选自下述的至少一种模式给受试者施用：肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内（intrarticular）、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注（bolus）、阴道、直肠、口腔含化、舌下、鼻内、和经皮。
本发明的一个方面提供针对本发明的至少一种IL-1α结合蛋白的至少一种IL-1α抗独特型抗体。抗独特型抗体包括包含分子的任何蛋白或肽，所述分子包含至少部分免疫球蛋白分子，例如但不限于，重或轻链的至少一个互补性决定区（CDR）或其配体结合部分，重链或轻链可变区，重链或轻链恒定区，构架区，或其可以掺入本发明的结合蛋白内的任何部分。
发明详述
本发明涉及IL-1α结合蛋白，具体而言，涉及结合IL-1α的抗IL-1α抗体或其抗原结合部分。本发明的各个方面涉及抗体和抗体片段、及其药物组合物、以及用于制备此种抗体和片段的核酸、重组表达载体和宿主细胞。本发明还包含了使用本发明的抗体在体外或体内检测人IL-1α、抑制人IL-1α活性、并调节基因表达的方法。
除非本文另有定义，连同本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数，且复数术语应包括单数。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。同样，除非另有具体说明，术语例如“元件”或“组分”涵盖包含一个单位的元件和组分以及包含超过一个亚单位的元件和组分。
一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。使用标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制、和递送、以及患者治疗。
为了本发明可以更容易地理解，选择的术语在下文定义。
如本文使用的，术语“多肽”指氨基酸的任何聚合链。术语“肽”和“蛋白”可与术语多肽互换使用，且同样指氨基酸的聚合链。术语“多肽”包含天然或人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合的。
术语“分离的蛋白”或“分离的多肽”是这样的蛋白或多肽，其由于其衍生起源或来源不与天然结合的组分结合，所述天然结合的组分在其天然状态下与其伴随；基本上不含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然起源的细胞的细胞系统中合成的多肽将是与其天然结合的组分“分离的”。还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得蛋白基本上不含天然结合的组分。
如本文使用的，术语“回收”指通过分离，例如使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得化学种类例如多肽基本上不含天然结合的组分的过程。
如本文使用的，术语“人IL-1 α”（此处缩写为hIL-1α或IL-1α）包括与各种免疫反应、炎症过程和血细胞生成有关的多效细胞因子。例如，IL-1 α包括由活化的巨噬细胞产生的人细胞因子，通过诱导IL-2释放、B细胞成熟和增生、以及成纤维细胞生长因子活性而刺激胸腺细胞增生。术语人IL-1 α 意在包括可以通过标准重组表达方法制备的重组人IL-1 α （rhIL-1 α）。
表1：人IL-1α 的序列
Figure 393582DEST_PATH_IMAGE001
如本文使用的，“生物学活性”指细胞因子的所有固有生物学性质。IL-1 α的生物学性质包括但不限于结合IL-1 α受体；（其他实例包括：通过诱导IL-2释放、B细胞成熟和增生、以及成纤维细胞生长因子活性而刺激胸腺细胞增生。）
如本文使用的，关于抗体、蛋白、或肽与第二种化学种类相互作用的术语“特异性结合”或“特异地结合”，意指相互作用取决于化学种类上特定结构（例如，抗原决定簇或表位）的存在；例如，抗体识别且与特定蛋白结构结合而不是一般地与蛋白结合。如果抗体对表位“A”特异，那么在包含标记的“A”和抗体的反应中，包含表位A的分子（或游离的，未标记的A）的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。
如本文使用的，术语“抗体”广泛地指包含4条多肽链－2条重（H）链和2条轻（L）链的任何免疫球蛋白（Ig）分子，或其保留Ig分子的基本表位结合特征的任何功能片段、突变体、变体或衍生。此种突变体、变体或衍生抗体形式是本领域已知的。其非限制性实施方案在下文讨论。
在全长抗体中，每条重链包含重链可变区（在本文中缩写为HCVR或VH）和重链恒定区。重链恒定区包含3个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区（在本文中缩写为LCVR或VL）和轻链恒定区。轻链恒定区包含1个结构域CL。VH和VL区可以进一步细分成称为互补性决定区（CDR）的高变区，用称为构架区（FR）的较保守区域点缀。每个VH和VL由3个CDRs和4个FRs组成，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可以是任何类型（例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY）、种类（例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2）或亚类。
如本文使用的，术语抗体的“抗原结合部分”（或简单地“抗体部分”），指保留与抗原（例如，hIL-1α）特异性结合的能力的一种或多种抗体片段。已显示抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。此种抗体实施方案也可以是双特异性、双重特异性、或多特异性形式；与2种或更多不同抗原特异性结合。包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的例子包括（i）Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；（ii）F（ab'）2片段，包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；（iii）由VH和CH1结构域组成的Fd片段；（iv）由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，（v）dAb片段（Ward 等人，（1989）Nature 341：544-546，Winter 等人，PCT公开WO 90/05144 A1，在此引入作为参考），它包含单个可变结构域；和（vi）分离的互补性决定区（CDR）。此外，尽管Fv片段的2个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头来连接，所述合成接头使得它们能够作为单条蛋白链制备，在所述单条蛋白链中VL和VH区配对以形成单价分子（称为单链Fv（scFv）；参见，例如，Bird等人，（1988）Science 242：423-426；和Huston等人，（1988）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：5879-5883）。此种单链抗体也预期包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。也包含其他形式的单链抗体例如双抗体。双抗体是二价、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许相同链上的2个结构域之间的配对，从而促使结构域与另一条链的互补结构域配对且产生2个抗原结合部位（参见例如，Holliger，P.等人，（1993）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：6444-6448；Poljak，R.J.等人，（1994）Structure 2：1121-1123）。此种抗体结合部分是本领域已知的（Kontermann和Dubel eds.，Antibody Engineering（2001）Springer-Verlag. New York. 第790页（ISBN 3-540-41354-5）。
如本文使用的，术语“抗体构建体”指包含与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接的一个或多个本发明的抗原结合部分的多肽。接头多肽包含通过肽键连接的2个或更多氨基酸残基，且用于连接一个或多个抗原结合部分。此种接头多肽是本领域众所周知的（参见例如，Holliger，P.等人，（1993）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：6444-6448；Poljak，R.J.等人，（1994）Structure 2：1121-1123）。免疫球蛋白恒定结构域指重或轻链恒定结构域。人IgG重链和轻链恒定结构域氨基酸序列是本领域已知的，并表示于表2中。
表2：人IgG重链恒定结构域和轻链恒定结构域的序列
Figure 310722DEST_PATH_IMAGE002
另外，抗体或其抗原结合部分可以是较大的免疫粘附分子的一部分，所述免疫粘附分子通过抗体或抗体部分与一个或多个其他蛋白质或多肽的共价或非共价结合形成。这种免疫粘附分子的实例包括使用链霉抗生物素蛋白核心区以制备四聚scFv分子（Kipriyanov, S.M.等人，(1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101）以及使用半胱氨酸残基、标记肽和C末端聚组氨酸标签以制备二价和生物素化scFv分子（Kipriyanov, S.M.等人，(1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058）。可以使用常规技术例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶分别消化整个抗体，从整个抗体制备抗体部分例如Fab和F(ab')2片段。此外，可以使用如此处所述的标准重组DNA技术获得抗体、抗体部分和免疫粘附分子。
如本文使用的，“分离的抗体”意指基本不含其他具有不同抗原特异性的抗体的抗体（例如，特异性结合hIL-1α的分离的抗体基本不含与除hIL-1α外的抗原特异性结合的抗体）。然而，特异性结合hIL-1α的分离的抗体可以与其他抗原（例如来自其他物种的IL-1α分子）具有交叉反应性。另外，分离的抗体可基本不含其他细胞材料和/或化学试剂。
如本文使用的，术语“人抗体”预期包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包括例如在CDRs且特别是CDR3中，不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如，在体外通过随机或位点专一诱变或在体内通过体细胞突变引入的突变）。然而，如本文使用的，术语“人抗体”不预期包括其中来源于另一种哺乳动物物种例如小鼠种系的CDR序列已嫁接到人构架序列上的抗体。
如本文使用的，术语“重组人抗体”预期包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞内的重组表达载体表达的抗体（在下文部分II C中进一步描述），从重组、组合人抗体文库中分离的抗体（Hoogenboom H.R.,（1997）TIB Tech. 15：62-70；Azzazy H.和Highsmith W.E.,（2002）Clin. Biochem. 35：425-445；Gavilondo J.V.和Larrick J.W.（2002）BioTechniques 29：128-145；Hoogenboom H.和Chames P.（2000）Immunology Today 21：371-378），从对于人免疫球蛋白基因是转基因的动物（例如小鼠）中分离的抗体（参见例如Taylor，L. D.等人，（1992）Nucl. Acids Res. 20：6287-6295；Kellermann S-A.和Green L.L.（2002）Current Opinion in Biotechnology 13：593-597；Little M.等人，（2000）Immunology Today 21：364-370），或通过包括使人免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列剪接的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此种重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区。然而，在某些实施方案中，对此种重组人抗体实施体外诱变（或，当使用对于人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变），且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是，尽管来源于人种系VH和VL序列且与人种系VH和VL序列相关，但可能在体内的人抗体种系谱内非天然存在的序列。
术语“嵌合抗体”指包含来自一个物种的重和轻链可变区序列以及来自另一个物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人恒定区连接的鼠重和轻链可变区的抗体。
术语“CDR嫁接的抗体”指包含来自一个物种的重和轻链可变区序列的抗体，但其中VH和/或VL的一个或多个CDR区域的序列用另一个物种的CDR序列替换，例如具有鼠重和轻链可变区的抗体，其中一个或多个鼠CDRs（例如，CDR3）已用人CDR序列替换。
术语“人源化抗体”指包含来自非人物种（例如，小鼠）的重和轻链可变区序列的抗体，但其中至少部分VH和/或VL序列已改变成更“人样”，即更类似于人种系可变序列。一种类型的人源化抗体是CDR嫁接的抗体，其中将人CDR序列引入非人VH和VL序列以替换相应的非人CDR序列。
术语“Kabat编号”、“Kabat定义”和“Kabat标记”在本文中可互换使用。本领域公认的这些术语指氨基酸残基编号系统，所述氨基酸残基比抗体或其抗原结合部分的重和轻链可变区中的其他氨基酸残基更可变（即高变）（Kabat等人，（1971）Ann. NY Acad ， Sci. 190：382-391和Kabat，E.A.等人，（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest ， Fifth Edition，U.S. Department of Health and Human Services，NIH公开号91-3242）。对于重链可变区，高变区对于CDR1为氨基酸位置31－35，对于CDR2为氨基酸位置50－65，且对于CDR3为氨基酸位置95－102。对于轻链可变区，高变区对于CDR1为氨基酸位置24－34，对于CDR2为氨基酸位置50－56，且对于CDR3为氨基酸位置89－97。
如本文使用的，术语“接纳体”或“接纳体抗体”指抗体或核酸序列，所述抗体或核酸序列提供或编码一个或多个构架区的至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的氨基酸序列。在一个实施方案中，术语“接纳体”指提供或编码一个或多个恒定区的抗体氨基酸或核酸序列。在另一个实施方案中，术语“接纳体” 指提供或编码一个或多个构架区和一个或多个恒定区的抗体氨基酸或核酸序列。在具体实施方案中，术语“接纳体”指人抗体氨基酸或核酸序列，所述人抗体氨基酸或核酸序列提供或编码一个或多个构架区的至少80%、优选至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的氨基酸序列。依照该实施方案，接纳体可含有至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、或至少10个氨基酸残基，这些氨基酸残基不存在于人抗体的一个或多个具体位置。接纳体构架区和/或一个或多个接纳体恒定区可以是例如从种系抗体基因、成熟抗体基因、功能抗体（例如本领域公知的抗体、开发中的抗体、或可通过商业途径获得的抗体）衍生或获得的。
如本文使用的，术语“CDR”指在抗体可变序列内的互补性决定区。在重链和轻链的每个可变区中存在3个CDRs，所述CDRs对于每个可变区命名为CDR1、CDR2和CDR3。如本文使用的，术语“CDR组”指在能够结合抗原的单个可变区中出现的3个CDRs的组。这些CDRs的确切边界已根据不同系统不同地限定。由Kabat（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest（National Institutes of Health，Bethesda，Md.（1987）和（1991））描述的系统，不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提供了限定3个CDRs的精确残基边界。这些CDRs可以被称为Kabat CDRs。Chothia和同事（Chothia和Lesk，J. Mol. Biol. 196：901-917（1987）以及Chothia 等人，Nature 342：877-883（1989））发现Kabat CDRs内的某些亚部分采取几乎相同的肽主链构象，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia CDRs，所述Chothia CDRs具有与Kabat CDRs重叠的边界。与Kabat CDRs重叠的限定CDRs的其他边界已由Padlan（FASEB J. 9：133-139（1995））和MacCallum（J Mol Biol 262（5）：732-45（1996））描述。再其他的CDR边界定义可能不严格地遵循上述系统之一，但仍将与Kabat CDRs重叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDRs并不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或加长。本文使用的方法可以利用根据这些系统中的任何一种限定的CDRs，尽管优选的实施方案使用Kabat或Chothia限定的CDRs。
如本文使用的，术语“规范”残基指CDR或构架中定义具体规范CDR结构的残基，如由Chothia等人，(J. Mol. Biol. 196:901-907 (1987)；Chothia等人，J. Mol. Biol. 227:799 (1992)定义的，两者均在此引入作为参考。根据Chothia等人，尽管在氨基酸序列水平的巨大多样性，但许多抗体的CDR的关键部分具有几乎相同的肽主链构象。各个规范结构主要为形成环的氨基酸残基的邻接区段限定了一套肽主链扭转角。
如本文使用的，术语“供体”和“供体抗体”指提供一个或多个CDRs的抗体。在一个实施方案中，供体抗体是来自与获得或衍生构架区的抗体不同的物种的抗体。在人源化抗体上下文中，术语“供体抗体”指提供一个或多个CDRs的非人抗体。
如本文使用的，术语“构架”或“构架序列”指减去CDRs的可变区的剩余序列。因为CDR序列的确切定义可以由不同系统来决定，所以对构架序列的含义进行相应不同的解释。6个CDRs（轻链的CDR-L1、-L2和-L3，以及重链的CDR-H1、-H2和-H3）也将轻链和重链上的构架区分成在每条链上的4个亚区（FR1、FR2、FR3和FR4），其中CDR1位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，且CDR3位于FR3和FR4之间。不将特定亚区指定为FR1、FR2、FR3或FR4，如其他人提及的，构架区代表单条天然存在的免疫球蛋白链可变区内的组合FR's。如本文使用的，FR代表4个亚区之一，且FRs代表构成构架区的4个亚区中的2个或更多。
人重链和轻链接纳体序列为本领域所公知。在本发明的一个实施方案中，人重链和轻链接纳体序列选自表3和表4中所述的序列。
表3：重链接纳体序列
Figure 28142DEST_PATH_IMAGE003
表4：轻链接纳体序列
Figure 423352DEST_PATH_IMAGE004
如本文使用的，术语“种系抗体基因”或“基因片段”指由非淋巴样细胞编码的免疫球蛋白序列，所述非淋巴样细胞尚未经历成熟过程，所述成熟过程导致用于表达特定免疫球蛋白的遗传重排和突变（参见，例如，Shapiro 等人，Crit. Rev. Immunol. 22（3）：183-200（2002）；Marchalonis 等人，Adv Exp Med Biol. 484：13-30（2001））。由本发明的各种实施方案提供的优点之一源于下述认识：种系抗体基因比成熟抗体基因更可能保存物种中个体特有的基本氨基酸序列结构，因此当在那个物种中治疗上使用时，更不可能被识别为来自外来来源。
如本文使用的，术语“关键”残基指可变区中的某些残基，其对于抗体尤其是人源化抗体的结合特异性和/或亲和力具有更多影响。关键残基包括但不限于下列中一个或多个：接近CDR的残基、潜在的糖基化位点（可以是N-或O-糖基化位点）、稀有残基、能够与抗原相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、规范残基、重链可变区和轻链可变区之间的接触残基、Vernier区内的残基、以及可变重链CDR1的Chothia定义和第一个重链构架的Kabat定义之间重叠的区域中的残基。
如本文使用的，术语“人源化抗体”是抗体或其变体、衍生物、类似物或片段，其与目的抗原免疫特异性结合，且包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的构架（FR）区、和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区（CDR）。如此处使用的，在CDR上下文中的术语“基本上”指具有的氨基酸序列至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％等同于非人抗体CDR的氨基酸序列的CDR。人源化抗体包含基本上所有至少一个、且一般为2个可变结构域（Fab、Fab'、F（ab'）2、FabC、Fv），其中所有或基本上所有CDR区对应非人免疫球蛋白（即，供体抗体）的那些，且所有或基本上所有构架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。优选地，人源化抗体也包含至少部分免疫球蛋白恒定区（Fc），一般为人免疫球蛋白的那种。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链以及至少重链的可变结构域。抗体还可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3、和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体只包含人源化轻链。在一些实施方案中，人源化抗体只包含人源化重链。在具体实施方案中，人源化抗体只包含轻链的人源化可变结构域和/或人源化重链。
人源化抗体可以选自任何种类的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG 1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自超过一个种类或同种型的序列，且特定恒定结构域可以使用本领域公知的技术进行选择，以优化所需的效应子功能。
人源化抗体的构架和CDR区不需要与亲本序列精确对应，例如，可以通过取代、插入和/或缺失至少一个氨基酸残基来诱变供体抗体CDR或共有构架，以便该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架均不对应。然而，在一个实施方案中，这种突变不会是广泛的。通常，至少80%，优选至少85%，更优选至少90%，以及最优选至少95%的人源化抗体残基将与亲本FR和CDR序列的残基对应。如本文使用的，术语“共有构架”指共有免疫球蛋白序列中的构架区。如本文使用的，术语“共有免疫球蛋白序列”指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸（或核苷酸）形成的序列（见例如Winnaker, From Genes to Clones（Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987）。在免疫球蛋白家族中，共有序列中各位置由家族中在该位置最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸出现一样频繁，则任一个可以包括在共有序列中。
如本文所使用的，“Vernier”区指可以调整CDR结构并精调与抗原的配合（fit）的构架残基的亚群，如由Foote和Winter所述的（1992, J. Mol. Biol. 224:487-499，在此引入作为参考）。Vernier区残基形成CDRs基础层，并且可以影响CDRs结构以及抗体亲和力。
术语“多价结合蛋白”在本说明书用于指包含2个或更多抗原结合部位的结合蛋白。多价结合蛋白经工程改造为具有3个或更多抗原结合部位，且一般不是天然存在的抗体。术语“多特异性结合蛋白”指能够结合2种或更多相关或无关靶的结合蛋白。如本文所使用的，双重可变结构域（DVD）结合蛋白是包含2个或更多抗原结合部位的结合蛋白，并且是四价或多价结合蛋白。这种DVDs可以是单特异性的，即能够结合一种抗原，或多特异性的，即能够结合2种或更多抗原。将包含两个重链DVD多肽和两个轻链DVD多肽的DVD结合蛋白质称为DVD Ig。DVD Ig的每一半包含重链DVD多肽，和轻链DVD多肽，和2个抗原结合部位。每个结合部位包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中每个抗原结合部位总共6个与抗原结合有关的CDRs。DVD结合蛋白以及制备DVD结合蛋白的方法公开在美国专利申请号11/507,050中，且在此引入作为参考。
本发明的一个方面和DVD结合蛋白有关，其包含能够结合IL-1α的结合蛋白。在另一个方面，DVD结合蛋白能够结合IL-1α和第二个靶。在一个实施方案中，DVD蛋白质能够识别IL-1α和IL-1β。
如本文使用的，术语“中和”指当结合蛋白特异性结合细胞因子时，中和细胞因子的生物学活性。优选地，中和结合蛋白质是中和抗体，其与hIL-1α的结合导致hIL-1α生物学活性的抑制。优选地，中和结合蛋白结合hIL-1α且使hIL-1α的生物学活性减少至少约20％、40％、60％、80％、85％或更多。可以通过测量本领域所公知的hIL-1α生物学活性的一个或多个指示物，来评估中和结合蛋白对hIL-1α生物学活性的抑制。
术语“表位”包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的任何多肽决定簇。在某些实施方案中，表位决定簇包括分子例如氨基酸、糖侧链、磷酰基、或磺酰基的化学活性表面定组（grouping），且在某些实施方案中，可以具有具体三维结构特征、和/或具体电荷特征。表位是由抗体结合的抗原区域。在某些实施方案中，当抗体在蛋白和/或大分子复杂混合物中优先识别其靶抗原时，它被说成特异性结合抗原。
如本文使用的，术语“表面等离振子共振”指通过检测生物传感器基质内的蛋白浓度改变，例如使用BIAcore系统（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，瑞典和Piscataway，NJ），允许分析实时生物特异性相互作用的光学现象。关于进一步的描述，参见Jönsson，U.,等人，（1993）Ann. Biol. Clin. 51：19-26；Jönsson，U.,等人，（1991）Biotechniques 11：620-627；Johnsson，B.,等人，（1995）J. Mol. Recognit. 8：125-131；和Johnnson，B.,等人，（1991）Anal. Biochem. 198：268-277。
如本领域已知的，如本文使用的术语“Kon”意指抗体与抗原结合以形成抗体/抗原复合物的结合速率常数。
如本领域已知的，如本文使用的术语“Koff”意指抗体从抗体/抗原复合物中解离的解离速率常数。
如本领域已知的，如本文使用的术语“Kd”意指具体抗体抗原相互作用的解离常数。
如本文使用的术语“标记的结合蛋白”指具有标记掺入的蛋白，所述标记为结合蛋白的鉴定作准备。在一个方面，标记是可检测标记，例如，掺入放射性标记的氨基酸或使生物素化（biotinyl）部分与多肽附着，所述生物素化部分可以通过标记的抗生物素蛋白（例如包含可以通过光学或比色法检测的荧光标记或酶促活性的链霉抗生物素蛋白）进行检测。关于多肽的标记例子包括但不限于下述：放射性同位素或放射性核素（例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho、或153Sm）；荧光标记（例如，FITC、罗丹明、镧系磷光体），酶促标记（例如，辣根过氧化物酶、萤光素酶、碱性磷酸酶）；化学发光标记；生物素化基团；由次级报道分子识别的预定多肽表位（例如，亮氨酸拉链对序列、关于第二抗体的结合位点、金属结合结构域、附加表位）；和磁性试剂，例如钆螯合物。
术语“抗体缀合物”指与第二化学部分，例如治疗剂或细胞毒剂化学连接的结合蛋白例如抗体。术语“试剂”在本文中用于指化合物、化合物混合物、生物大分子、或由生物学材料制备的提取物。在一个方面，治疗剂或细胞毒剂包括但不限于，百日咳毒素、紫素、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷（tenoposide）、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、心得安、和嘌呤霉素及其类似物或同源物。
如本文使用的，术语“晶体”和“结晶的”指以晶体形式存在的抗体或其抗原结合部分。晶体是物质固态的一种形式，它不同于其他形式例如无定形固态或液晶态。晶体由规则、重复、三维排列的原子、离子、分子（例如，蛋白例如抗体）、或分子组合（assembly）（例如，抗原/抗体复合物）组成。这些三维排列根据本领域充分了解的特定数学关系排列。晶体中重复的基本单位或构件被称为不对称单位。符合给定、明确的晶体学对称性的排列中的不对称单位重复提供了晶体的“晶胞”。通过在所有3个维度中规则平移的晶胞重复提供了晶体。参见Giege，R.和Ducruix，A. Barrett，Crystallization of Nucleic Acids and Proteins，a Practical Approach，第2版，第20 1-16页，Oxford University Press，New York，New York,（1999）。"。
此处提到的术语“多核苷酸”意指2个或更多核苷酸的聚合形式，所述核苷酸为核糖核苷酸或脱氧核苷酸，或任一类型核苷酸的修饰形式。该术语包括单和双链形式的DNA，但优选是双链DNA。
如本文使用的，术语“分离的多核苷酸”应意指下述多核苷酸（例如，基因组的、cDNA、或合成来源的，或其某一组合），由于其来源，“分离的多核苷酸”不与在自然界中发现“分离的多核苷酸”与之结合的全部或部分多核苷酸结合；与在自然界中它不与之连接的多核苷酸可操作地连接；或在自然界中不作为较大序列的部分存在。
如本文使用的，术语“载体”意指能够运输它已与之连接的另一种核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，它指另外的DNA区段可以连接到其内的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组内。某些载体能够在它们已引入其内的宿主细胞中自主复制（例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体）。其他载体（例如非游离型哺乳动物载体）在引入宿主细胞内时可以整合到宿主细胞基因组内，且因此连同宿主基因组一起进行复制。此外，某些载体能够指导它们与之可操作地连接的基因表达。此种载体在本文中被称为“重组表达载体”（或简单地，“表达载体”）。一般而言，在重组DNA技术中使用的表达载体通常为质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明预期包括此种其他形式的表达载体，例如提供等价功能的病毒载体（例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒）。
术语“可操作地连接的”指其中所述组分处于允许它们以其预期方式起作用的关系中的并列。与编码序列“可操作地连接的”控制序列以这样的方式连接，从而使得编码序列的表达在与控制序列相容的条件下完成。“可操作地连接的”序列包括与目的基因邻接的表达控制序列，和反式或在远处起作用以控制目的基因的表达控制序列。如本文使用的，术语“表达控制序列”指实现它们与之连接的编码序列表达和加工所必需的多核苷酸序列。表达控制序列包括合适的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号例如剪接和多腺苷酸化信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列（即，Kozak共有序列）；增强蛋白稳定性的序列；和需要时，增强蛋白分泌的序列。此种控制序列的性质依赖于宿主生物而不同；在原核生物中，此种控制序列一般包括启动子，核糖体结合位点，和转录终止序列；在真核生物中，此种控制序列一般包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”预期包括其存在是表达和加工必需的组分，且还可以包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列和融合配偶体序列。
如此处定义的，“转化”指外源DNA通过其进入宿主细胞的任何方法。转化可以使用本领域众所周知的各种方法在天然或人工条件下发生。转化可以依赖于用于将外来核酸序列插入原核或真核宿主细胞内的任何已知方法。该方法基于待转化的宿主细胞进行选择，且可以包括但不限于，病毒感染、电穿孔、脂质转染、和粒子轰击。此种“转化的”细胞包括其中插入的DNA能够作为自主复制质粒或作为宿主染色体部分复制的稳定转化的细胞。它们还包括瞬时表达插入的DNA或RNA有限时间段的细胞。
如本文使用的，术语“重组宿主细胞”（或简单地“宿主细胞”）意指其中已引入外源DNA的细胞。应当理解，此种术语不仅意指特定的受试细胞，还意指此种细胞的后代。因为由于突变或环境影响可能在随后世代中出现某些修饰，所以此种后代实际上可能不等同于亲本细胞，但仍包括在如本文使用的术语“宿主细胞”的范围内。在一个方面，宿主细胞包括选自任何生物界的原核和真核细胞。真核细胞包括原生生物、真菌、植物和动物细胞。在另一个方面，宿主细胞包括但不限于原核细胞系大肠杆菌；哺乳动物细胞系CHO、HEK 293和COS；昆虫细胞系Sf9；和真菌细胞啤酒糖酵母。
标准技术可以用于重组DNA、寡核苷酸合成、以及组织培养和转化（例如，电穿孔、脂质转染）。酶促反应和纯化技术可以根据制造商的说明书或如本领域通常完成的或如本文所述的来进行。前述技术和程序一般可以根据本领域众所周知以及如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual（第2版， Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.（1989）），为了任何目的在此引入作为参考。
如本领域已知的且如本文使用的，“转基因生物”指具有包含转基因的细胞的生物，其中引入生物（或生物祖先）内的转基因表达在该生物中非天然表达的多肽。“转基因”是DNA构建体，所述DNA构建体稳定且可操作地整合到转基因生物由其发育的细胞的基因组内，从而指导编码的基因产物在转基因生物的一种或多种细胞类型或组织中表达。
术语“调节”和“调谐”可互换使用，且如本文使用的，指目的分子活性（例如， hIL-1A的生物学活性）中的变化或改变。调谐可以是目的分子的某一活性或功能量级中的增加或减少。分子的示例性活性和功能包括但不限于，结合特征、酶促活性、细胞受体激活、和信号转导。
如本文使用的，相应地，术语“调节剂”是能够改造或改变目的分子活性或功能（例如，hIL-1α的生物学活性）的化合物。例如，与在不存在调节剂的情况下观察到的活性或功能量级相比较，调节剂可以引起分子某一活性或功能量级中的增加或减少。在某些实施方案中，调节剂是减少分子至少一种活性或功能量级的抑制剂。示例性抑制剂包括但不限于，蛋白、肽、抗体、肽体（peptibodies）、碳水化合物或小有机分子。肽体在例如WO01/83525中描述。
如本文使用的，术语“激动剂”指当与目的分子接触时，与在不存在激动剂的情况下观察到的活性或功能量级相比较，引起分子某一活性或功能量级中的增加的调节剂。具体目的激动剂可以包括但不限于，IL-1α多肽或多肽、核酸、碳水化合物、或与IL-1α结合的任何其他分子。
如本文使用的，术语“拮抗剂”或“抑制剂”指当与目的分子接触时，与在不存在拮抗剂的情况下观察到的活性或功能量级相比较，引起分子某一活性或功能量级中的减少的调节剂。具体目的拮抗剂包括阻断或调节IL-1α生物学或免疫学活性的那些。IL-1α拮抗剂和抑制剂可以包括但不限于，蛋白、核酸、碳水化合物、或与IL-1α结合的任何其他分子。
如本文使用的，术语“有效量”指疗法的量，其足以减少或改善病症或其一种或多种症状的严重性和/或持续时间，预防病症进展，引起病症消退，预防与病症相关的一种或多种症状复发、发展、发作或进展，检测病症，或增强或改善另一种疗法（例如，预防或治疗剂）的预防或治疗作用。
如本文使用的，术语“样品”以其最广泛的含义使用。如本文使用的，“生物学样品”包括但不限于，来自生物（living thing）或从前生物的任何量的物质。此种生物包括但不限于，人、小鼠、大鼠、猴、狗、兔和其他动物。此种物质包括但不限于，血液、血清、尿、滑液、细胞、器官、组织、骨髓、淋巴结和脾。
I. 结合人IL-1α的抗体
本发明的一个方面提供以高亲和力、慢解离速率及高中和能力结合IL-1α的、分离的鼠单克隆抗体或其抗原结合部分。本发明的第二个方面提供结合IL-1α的嵌合抗体。本发明的第三个方面提供结合IL-1α的CDR嫁接的抗体或其抗原结合部分。本发明的第四个方面提供结合IL-1α的人源化抗体或其抗原结合部分。优选地，抗体或其部分是分离的抗体。优选地，本发明的抗体是中和人抗IL-1α抗体。
A. 制备抗IL-1α抗体的方法
可以通过本领域已知的许多技术中的任一种制备本发明的抗体。
1. 使用杂交瘤技术的抗IL-1α单克隆抗体
单克隆抗体可以使用本领域已知的广泛多样的技术来制备，包括使用杂交瘤、重组体、和噬菌体展示技术，或其组合。例如，单克隆抗体可以使用杂交瘤技术来生产，包括本领域已知和例如Harlow 等人，Antibodies：A Laboratory Manual,（Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988）；Hammerling，等人：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681（Elsevier，N.Y.，1981）中教导的那些（所述文献在此全文引入作为参考）。如本文使用的，术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”指来源于单个克隆，包括任何真核、原核、或噬菌体克隆，而不是产生其的方法的抗体。
使用杂交瘤技术生产和筛选特异性抗体的方法是常规的而且是本领域所公知的。在一个实施方案中，本发明提供了产生单克隆抗体的方法以及由这样的方法产生的抗体，所述方法包括培养分泌本发明抗体的杂交瘤细胞，其中，优选地，通过将从用本发明的抗原免疫接种的小鼠分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后从融合得到的杂交瘤筛选分泌能够结合本发明的多肽的抗体的杂交瘤克隆，来生成杂交瘤。简而言之，用IL-1α抗原免疫接种小鼠。在优选的实施方案中，将IL-1α抗原与佐剂一起施用，以刺激免疫反应。这种佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI（胞壁酰二肽）或ISCOM（免疫刺激复合物）。这种佐剂通过将多肽隔绝在局部沉积中而保护多肽免于快速分散，或者它们可以含有刺激宿主分泌对于巨噬细胞趋化性的因子和免疫系统其他组分的物质。优选地，如果施用多肽，那么免疫接种进度将涉及两次或更多次施用该多肽，分布在几周内。
用IL-1α抗原免疫接种动物后，可以从动物获得抗体和/或抗体生产细胞。通过放血或处死动物，从动物获得含有抗IL-1α抗体的血清。可以照从动物获得的那样使用血清，可以从血清获得免疫球蛋白级分，或者可以从血清纯化抗IL-1α抗体。以这种方式获得的血清或者免疫球蛋白是多克隆的，因此具有一系列异质性质。
一旦检测到免疫应答，例如在小鼠血清中检测到特异性针对抗原IL-1α的抗体，就收获小鼠脾并分离脾细胞。然后通过广为人知的技术将脾细胞与任何合适的骨髓瘤细胞融合，例如来自可从ATCC获得的细胞系SP20的细胞。通过有限稀释选择并克隆杂交瘤。然后通过本领域已知的方法对于分泌能够结合IL-1α的抗体的细胞测定杂交瘤克隆。可以通过用阳性杂交瘤克隆免疫接种小鼠产生腹水，其一般含有高水平的抗体。
在另一个实施方案中，可以从免疫接种的动物制备产生抗体的无限增殖化杂交瘤。免疫接种后，处死动物，并将脾B细胞与本领域公知的无限增殖化骨髓瘤细胞融合（见例如Harlow和Lane，如上）。在优选实施方案中，骨髓瘤细胞不分泌免疫球蛋白多肽（非分泌性细胞系）。在融合及抗生素选择后，使用IL-1α或其部分、或表达IL-1α的细胞，筛选杂交瘤。在优选实施方案中，使用酶联免疫测定（ELISA）或放射免疫测定（RIA）优选ELISA进行初始筛选。在WO 00/37504中提供了ELISA筛选的实例，在此引入作为参考。
如下文进一步讨论的，产生抗IL-1α抗体的杂交瘤被选择、克隆和进一步筛选所需特征，包括强杂交瘤生长、高抗体产生和所需抗体特征。杂交瘤可以在同系动物体内、在缺乏免疫系统的动物例如裸鼠中、或在体外细胞培养中培养和扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员众所周知的。
在优选实施方案中，如上所述，杂交瘤是小鼠杂交瘤。在另一个优选实施方案中，杂交瘤在非人、非小鼠物种，例如大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马中生产。在另一个实施方案中，杂交瘤是人杂交瘤，其中人非分泌性骨髓瘤与表达抗IL-1α抗体的人细胞融合。
可以通过已知技术产生识别特异表位的抗体片段。例如，可以使用酶例如木瓜蛋白酶（以产生Fab片段）或胃蛋白酶（以产生F(ab')2片段），通过蛋白酶剪切免疫球蛋白分子，产生本发明的Fab和F(ab')2片段。F(ab')2片段含有可变区、轻链恒定区和重链CHI结构域。
2. 使用SLAM的抗IL-1α单克隆抗体
在本发明的另一个方面，重组抗体使用本领域中称为选择淋巴细胞抗体法（SLAM）的程序从单个、分离的淋巴细胞中产生，所述SLAM如美国专利号5,627,052、PCT公开WO 92/02551和Babcock，J.S.等人，（1996）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93：7843-7848中所述。在这种方法中，使用抗原特异性溶血噬斑测定筛选分泌目的抗体的单个细胞，例如来源于章节1中所述免疫接种的动物中任一个的淋巴细胞，其中使用接头例如生物素将抗原IL-1α或其片段与绵羊红细胞偶联，并用于鉴定分泌具有对于IL-1α的特异性的抗体的单个细胞。鉴定分泌抗体的目的细胞后，通过逆转录酶PCR从细胞中拯救重和轻链可变区cDNAs，随后可以在合适的免疫球蛋白恒定区（例如，人恒定区）背景中，在哺乳动物宿主细胞例如COS或CHO细胞中表达这些可变区。用扩增的免疫球蛋白序列转染的、来源于体内选择的淋巴细胞的宿主细胞，随后可以经历进一步的体外分析和选择，例如通过淘选转染的细胞以分离表达针对IL-1α的抗体的细胞。扩增的免疫球蛋白序列进一步可以进行体外处理，例如通过体外亲和力成熟法，例如PCT公开WO 97/29131和PCT公开WO 00/56772中描述的那些。
3. 使用转基因动物的抗IL-1α单克隆抗体
在本发明的另一个实施方案中，抗体通过用IL-1α抗原免疫接种非人动物来生产，所述非人动物包含一些或全部人免疫球蛋白基因座。在优选实施方案中，非人动物是XENOMOUSE转基因小鼠，包含人免疫球蛋白基因座大片段且在小鼠抗体产生方面有缺陷的工程改造的小鼠品系。参见，例如，Green等人，Nature Genetics 7：13-21（1994）和美国专利5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。还参见于1991年7月25日公开的WO 91/10741，于1994年2月3日公开的WO 94/02602，均于1996年10月31日公开的WO 96/34096和WO 96/33735，于1998年4月23日公开的WO 98/16654，于1998年6月11日公开的WO 98/24893，于1998年11月12日公开的98/50433，于1999年9月10日公开的WO 99/45031，于1999年10月21日公开的WO 99/53049，于2000年2月24日公开的WO 00 09560，和于2000年6月29日公开的WO 00/037504。XENOMOUSE转基因小鼠生产全人抗体的成体样人谱，且产生抗原特异性人Mabs。通过引入兆碱基大小的、人重链基因座和x轻链基因座的种系构型YAC片段，XENOMOUSE转基因小鼠包含约80％人抗体谱。参见Mendez 等人，Nature Genetics 15：146-156（1997），Green和Jakobovits J. Exp. Med. 188：483-495（1998），其公开内容在此引入作为参考。
4. 使用重组抗体文库的抗IL-1α单克隆抗体
体外方法也可以用于制备本发明的抗体，其中筛选抗体文库以鉴定具有所需结合特异性的抗体。关于重组抗体文库的此种筛选的方法是本领域众所周知的，且包括在下述参考文献中描述的方法：例如，Ladner等人，美国专利号5,223,409；Kang等人，PCT公开号WO 92/18619；Dower等人，PCT公开号WO 91/17271；Winter等人，PCT公开号WO 92/20791；Markland等人，PCT公开号WO 92/15679；Breitling等人，PCT公开号WO 93/01288；McCafferty等人，PCT公开号WO 92/01047；Garrard等人，PCT公开号WO 92/09690；Fuchs等人，（1991）Bio/Technology 9：1370-1372；Hay等人，（1992）Hum Antibod Hybridomas 3：81-85；Huse等人，（1989）Science 246：1275-1281；McCafferty 等人， Nature（1990）348：552-554；Griffiths等人，（1993）EMBO J 12：725-734；Hawkins等人，（1992）J Mol Biol 226：889-896；Clackson等人，（1991）Nature 352：624-628；Gram等人，（1992）PNAS 89：3576-3580；Garrad等人，（1991）Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom等人，（1991）Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等人，（1991）PNAS 88：7978-7982，US专利申请公开20030186374，和PCT公开号WO 97/29131，其各自内容在此引入作为参考。
重组抗体文库可以来自用IL-1α或IL-1α的部分免疫接种的受试者。可选地，重组抗体文库可以来自首次用于实验的受试者，即，尚未用IL-1α免疫接种的受试者，例如，来自尚未以人IL-1α免疫接种的人受试者的人抗体文库。通过用包含人IL-1α的肽筛选重组抗体文库，以从而选择识别IL-1α的那些抗体，来选择本发明的抗体。实施这种筛选和选择的方法在本领域广为人知，如在前面段落中的参考文献中所述的。为了选择对hIL-1α有特定结合亲和力的本发明的抗体，例如以特定koff速率常数从人IL-1α解离的那些抗体，可以使用本领域已知的表面等离振子共振方法来选择具有所需koff速率常数的抗体。为了选择对hIL-1α有特定中和活性的本发明的抗体，例如具有特定IC50的那些抗体，可以使用本领域已知的用于评估hIL-1α活性抑制的标准方法。
在一个方面，本发明与结合人IL-1α的分离的抗体或其抗原结合部分有关。优选地，该抗体是中和抗体。在各种实施方案中，该抗体是重组抗体或单克隆抗体。
例如，本发明的抗体也可以使用本领域已知的各种噬菌体展示方法来产生。在噬菌体展示方法中，功能性抗体结构域在噬菌体颗粒表面上展示，所述噬菌体颗粒携带编码其的多核苷酸序列。具体地，此种噬菌体可以用于展示由谱或组合抗体文库（例如，人或鼠）表达的抗原结合结构域。表达结合目的抗原的抗原结合结构域的噬菌体可以用抗原进行选择或鉴定，例如使用标记的抗原或被固体表面或珠结合或捕获的抗原。这些方法中使用的噬菌体一般是包括fd和M13结合结构域的丝状噬菌体，所述结合结构域由具有Fab、Fv或dsFv抗体结构域的噬菌体表达，所述抗体结构域与噬菌体基因III或基因VIII蛋白重组融合。可以用于制备本发明抗体的噬菌体展示方法的例子包括下述参考文献中公开的那些：Brinkman 等人，J. Immunol. Methods 182：41-50（1995）；Ames 等人，J. Immunol. Methods 184：177-186（1995）；Kettleborough 等人，Eur. J. Immunol. 24：952-958（1994）；Persic 等人，Gene 187 9-18（1997）；Burton 等人，Advances in Immunology 57：191-280（1994）；PCT申请号PCT/GB91/01134；PCT公开WO 90/02809；WO 91/10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO 93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；以及美国专利号5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743和5,969,108，其各自在此全文引入作为参考。
如上文参考文献中所述，噬菌体选择后，来自噬菌体的抗体编码区可以进行分离并用于产生完整抗体，且在任何所需宿主中表达，所述完整抗体包括人抗体或任何其他所需抗原结合片段，所述宿主包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如，如下文详细描述的。例如，也可以采用重组生产Fab、Fab'和F（ab'）2片段的技术，其中使用本领域已知的方法，例如下述参考文献中公开的那些：PCT公开WO 92/22324；Mullinax 等人，BioTechniques 12（6）：864-869（1992）；和Sawai 等人，AJRI 34：26-34（1995）；以及Better 等人，Science 240：1041-1043（1988）（所述文献全文引入作为参考）。可以用于生产单链Fvs和抗体的技术例子包括下述参考文献中描述的那些：美国专利4,946,778和5,258,498；Huston 等人，Methods in Enzymology 203：46-88（1991）；Shu 等人，PNAS 90：7995-7999（1993）；以及Skerra 等人，Science 240：1038-1040（1988）。
作为通过噬菌体展示筛选重组抗体文库的替代，本领域已知的用于筛选大组合文库的其他方法可以应用于本发明的双重特异性抗体的鉴定。如Szostak和Roberts的PCT公开号WO 98/31700，以及Roberts，R.W.和Szostak，J.W.（1997）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94：12297-12302中描述的，一类可替代的表达系统是其中重组抗体文库作为RNA-蛋白融合物表达的表达系统。在这种系统中，通过在其3’末端上携带嘌呤霉素－肽基接纳体抗生素的合成mRNAs的体外翻译，在mRNA及其编码的肽或蛋白之间产生共价融合。因此，基于编码的肽或蛋白例如抗体或其部分的性质，例如抗体或其部分与双重特异性抗原的结合，特定mRNA可以从mRNAs的复杂混合物（例如，组合文库）中富集。由此种文库筛选回收的编码抗体或其部分的核酸序列，可以通过上述重组方法（例如，在哺乳动物宿主细胞中）表达，且此外可以通过mRNA-肽融合物的另外筛选循环，或通过上述用于重组抗体体外亲和力成熟的其他方法实施进一步的亲和力成熟，在所述mRNA-肽融合物中已将突变引入最初选择的序列内。
在另一种方法中，本发明的抗体也可以使用本领域已知的酵母展示方法来产生。在酵母展示方法中，使用遗传方法以使抗体结构域束缚于酵母细胞壁，且将它们显示在酵母表面上。具体地，此种酵母可以用于展示由谱或组合抗体文库（例如，人或鼠）表达的抗原结合结构域。可以用于制备本发明的抗体的酵母展示方法的例子包括在Wittrup等人，美国专利号6,699,658（此处引入作为参考）中公开的那些。
B．重组IL-1α抗体的产生
本发明的抗体可以通过本领域已知的许多技术中的任何一种来生产。例如，来自宿主细胞的表达，其中编码重和轻链的一种或多种表达载体通过标准技术转染到宿主细胞内。术语“转染”的各种形式预期包含通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞内的广泛多样的技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖转染等。尽管可能在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体，但优选在真核细胞中、且最优选在哺乳动物宿主细胞中表达抗体，这是因为此种真核细胞（且特别是哺乳动物细胞）比原核细胞更可能装配和分泌正确折叠和免疫学活性的抗体。
用于表达本发明的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢（CHO细胞）（包括在Urlaub和Chasin,（1980）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77：4216-4220中描述，与DHFR选择标记一起使用的dhfr-CHO细胞，例如，如R.J. Kaufman和P.A. Sharp（1982）Mol. Biol. 159：601-621中描述的）、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞、和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体被引入哺乳动物宿主细胞内时，抗体通过将宿主细胞培养足够时间段来生产，以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选抗体分泌到其中宿主细胞生长的培养基内。抗体可以使用标准蛋白纯化法从培养基中回收。
也可以使用宿主细胞产生功能性抗体片段，例如Fab片段或scFv分子。将理解，上述程序的改变在本发明范围内。例如，可能需要用编码本发明抗体的轻链和/或重链的功能性片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于去除编码轻和重链之一或二者的一些或全部DNA，所述轻和重链对于结合目的抗原不是必需的。由这种截断的DNA分子表达的分子也包括在本发明的抗体中。另外，也可以通过标准化学交联方法将本发明的抗体与第二种抗体交联，产生双功能抗体，其中一个重链和一个轻链是本发明的抗体，而另一个重链和轻链对除目的抗原之外的抗原具有特异性。
在用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合部分的优选系统中，编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体通过磷酸钙介导的转染引入dhfr-CHO细胞内。在重组表达载体内，抗体重和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调节元件可操作地连接，以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，所述DHFR基因允许使用氨甲蝶呤选择/扩增选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选转化体宿主细胞以允许表达抗体重和轻链，且从培养基中回收完整的抗体。使用标准分子生物学技术以制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体。更进一步地，本发明提供了合成本发明的重组抗体的方法，其通过在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞直至本发明的重组抗体被合成来实现。该方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
1. 抗IL-1α抗体
表5是本发明优选的抗hIL-1α抗体的VH和VL区的氨基酸序列表。
表5 VH和VL区氨基酸序列表
Figure 926139DEST_PATH_IMAGE005
2. 抗IL-1α嵌合抗体
嵌合抗体是抗体的不同部分来源于不同动物物种的分子，例如具有来源于鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。产生嵌合抗体的方法为本领域已知，并在实施例2.1中详细讨论。见例如Morrison, Science 229:1202（1985）；Oi等人，BioTechniques 4:214（1986）；Gillies等人，（1989） J. Immunol. Methods 125:191-202；U.S专利号5,807,715；4,816,567；和4,816,397，其在此全文引入作为参考。另外，可以使用为产生“嵌合抗体”而开发的技术（Morrison等人，1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81:851-855；Neuberger等人，1984, Nature 312:604-608；Takeda等人，1985, Nature 314:452-454，其在此全文引入作为参考），其通过将来自具有合适的抗原特异性的小鼠抗体分子的基因与来自具有合适的生物学活性的人抗体分子的基因剪接。
3. 抗IL-1α CDR嫁接的抗体
本发明的CDR嫁接的抗体包含来自人抗体的重和轻链可变区序列，其中VH和/或VL的一个或多个CDR区替换为本发明的鼠抗体的CDR序列。来自任何人抗体的构架序列可以充当用于CDR嫁接的模板。然而，在此种构架上的直接链替换通常导致与抗原的结合亲和力的一些丧失。人抗体与最初鼠抗体越同源，使鼠CDRs与人构架组合将在CDRs中引入可减小亲和力的变形的可能性越小。因此，优选选择替换除CDRs外的鼠可变构架的人可变构架与鼠抗体可变区构架具有至少65％的序列同一性。更优选地，除CDRs外的人和鼠可变区具有至少70％的序列同一性。甚至更优选地，除CDRs外的人和鼠可变区具有至少75％的序列同一性。最优选地，除CDRs外的人和鼠可变区具有至少80％的序列同一性。用于生产嵌合抗体的方法是本领域已知的，并在实施例2.2中得到详细讨论（也参见EP 239,400；PCT公开WO 91/09967；美国专利号5,225,539；5,530,101；和5,585,089），镶面（veneering）或表面重建（resurfacing）（EP 592,106；EP 519,596；Padlan，Molecular Immunology 28（4/5）：489-498（1991）；Studnicka 等人，Protein Engineering 7（6）：805-814（1994）；Roguska 等人，PNAS 91：969-973（1994）），和链改组（美国专利号5,565,352）。
4. 抗IL-1α人源化抗体
人源化抗体是来自结合所需抗原的非人物种抗体的抗体分子，具有来自非人物种的一个或多个互补性决定区（CDRs）和来自人免疫球蛋白分子的构架区。已知的人Ig序列在下述中公开，例如，
Figure 748602DEST_PATH_IMAGE006
Figure 953318DEST_PATH_IMAGE007
Figure 152218DEST_PATH_IMAGE008
Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)，其各个全文引入作为参考。如本领域已知的，此种输入的序列可以用于减少免疫原性，或减少、增强或修饰结合、亲和力、结合速率、解离速率、抗体亲抗原性、特异性、半衰期、或任何其他合适的特征。
人构架区中的构架残基可以用来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变，优选改善抗原结合。这些构架取代通过本领域众所周知的方法鉴定，例如通过对CDR和构架残基的相互作用建模以鉴定对抗原结合重要的构架残基，和序列比较以鉴定在特定位置上的罕见构架残基。（参见，例如，Queen 等人，美国专利号5,585,089；Riechmann 等人，Nature 332：323（1988），其在此全文引入作为参考）。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的且是本领域技术人员熟悉的。举例说明且展示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能发挥中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可以选择FR残基且从共有和输入序列组合，从而使得达到所需抗体特征，例如对一种或多种靶抗原的亲和力增加。一般而言，CDR残基直接且最重要地与影响抗原结合有关。抗体可以使用本领域已知的多种技术进行人源化，例如但不限于下述参考文献中描述的那些：Jones 等人，Nature 321：522（1986）；Verhoeyen 等人，Science 239：1534（1988）），Sims 等人，J. Immunol. 151：2296（1993）；Chothia和Lesk，J. Mol. Biol. 196：901（1987），Carter 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89：4285（1992）；Presta 等人，J. Immunol. 151：2623（1993），Padlan，Molecular Immunology 28（4/5）：489-498（1991）；Studnicka 等人，Protein Engineering 7（6）：805-814（1994）；Roguska. 等人，PNAS 91：969-973（1994）；PCT公开WO 91/09967，PCT/：US98/16280，US96/18978，US91/09630，US91/05939，US94/01234，GB89/01334，GB91/01134，GB92/01755；WO90/14443，WO90/14424，WO90/14430，EP 229246，EP 592,106；EP 519,596，EP 239,400，美国专利号5,565,332、5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5814476、5763192、5723323、5,766886、5,714,352、6,204,023、6,180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539；4,816,567；其各自全文引入作为参考，包括其中引用的文献。
C. 抗体和抗体生产细胞系的生产
优选地，本发明的抗IL-1α抗体表现出降低或中和IL-1α活性的高能力，例如通过本领域已知的几种体外和体内测定中的任何一个所评估的。优选地，本发明的抗IL-1α抗体也表现出降低或中和IL-1α活性的高能力。
在优选的实施方案中，分离的抗体或其抗原结合部分结合人IL-1α，其中抗体或其抗原结合部分以约0.1s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或以约1x10-6M或更小的IC50抑制人IL-1α活性。可选地，抗体或其抗原结合部分可以以约1x10-2s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或可以以约1x10-7M或更小的IC50抑制人IL-1α活性。可选地，抗体或其抗原结合部分可以以约1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或可以以约1x10-8M或更小的IC50抑制人IL-1α。可选地，抗体或其抗原结合部分可以以约1x10-4s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或可以以约1x10-9M或更小的IC50抑制人IL-1α活性。可选地，抗体或其抗原结合部分可以以约1x10-5s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或可以以约1x10-10M或更小的IC50抑制人IL-1α活性。可选地，抗体或其抗原结合部分可以以约1x10-5s-1或更低的Koff速率常数从人IL-1α解离，如通过表面等离振子共振测定的，或可以以约1x10-11M或更小的IC50抑制人IL-1α活性。
在某些实施方案中，抗体包含重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。优选地，重链恒定区是IgG1重链恒定区或IgG4重链恒定区。另外，抗体可以包含轻链恒定区，κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。优选地，抗体包含κ轻链恒定区。可选地，抗体部分可以是例如Fab片段或单链Fv片段。
Fc部分中改变抗体效应子功能的氨基酸残基替换是本领域已知的（Winter等人，美国专利号5,648,260; 5624821）。抗体的Fc部分介导几种重要的效应子功能，例如细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、依赖补体的细胞毒性（CDC）以及抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率。取决于治疗目的，在一些情况下这些效应子功能对于治疗用抗体是所需的，但在其他情况下可能是不必要的或甚至有害的。某些人IgG同种型，特别是IgG1和IgG3，经由分别与FcγRs和补体C1q结合介导ADCC和CDC。新生Fc受体（FcRn）是决定抗体循环半衰期的关键组分。在另外一个实施方案中，至少一个氨基酸残基在抗体恒定区例如抗体Fc区中进行替换，从而改变抗体的效应子功能。
一个实施方案提供了标记的结合蛋白，其中本发明的抗体或抗体部分用另一种功能分子（例如，另一种肽或蛋白）衍生化或连接。例如，本发明的标记的结合蛋白可以通过使本发明的抗体或抗体部分与一种或多种其他分子实体功能性连接（通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式）来衍生，所述其他分子实体例如另一种抗体（例如，双特异性抗体或双抗体）、可检测试剂、细胞毒剂、药学试剂、和/或可以介导抗体或抗体部分与另一种分子（例如链霉抗生物素蛋白核心区或聚组氨酸标签）结合的蛋白或肽。
本发明的抗体或抗体部分可以由之衍生化的有用的可检测试剂包括荧光化合物。示例性荧光可检测试剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测酶衍生化，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、葡糖氧化酶等。当抗体用可检测酶衍生化时，它通过添加酶用于生产可检测反应产物的另外的试剂进行检测。例如，当可检测试剂辣根过氧化物酶存在时，添加过氧化氢和二氨基联苯胺导致可检测的有色反应产物。抗体也可以用生物素衍生化，且通过抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合的间接测量进行检测。
本发明的另一个实施方案提供了结晶结合蛋白。优选地，本发明涉及如此处所公开的完整抗IL-1α抗体及其片段的晶体，以及包含此种晶体的制剂和组合物。在一个实施方案中，结晶结合蛋白具有比结合蛋白的可溶性配对物更长的体内半衰期。在另一个实施方案中，结合蛋白在结晶化后保留生物学活性。
本发明的结晶结合蛋白可以根据本领域已知的和如WO 02072636中公开的方法来生产，在此引入作为参考。
本发明的另一个实施方案提供了糖基化的结合蛋白，其中抗体或其抗原结合部分包含一个或多个碳水化合物残基。新生体内蛋白生产可以经历称为翻译后修饰的进一步加工。特别地，糖（糖基）残基可以酶促添加，这个过程称为糖基化。所得到的具有共价连接的寡糖侧链的蛋白被称为糖基化蛋白或糖蛋白。蛋白糖基化取决于目的蛋白的氨基酸序列，以及在其中表达蛋白的宿主细胞。不同生物可以产生不同的糖基化酶（例如，糖基转移酶和糖苷酶），且具有不同的可用底物（核苷酸糖）。由于此种因素，蛋白糖基化模式和糖基残基组成可以依赖于在其中表达特定蛋白的宿主系统而不同。在本发明中有用的糖基残基可以包括但不限于，葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、n-乙酰葡糖胺和唾液酸。优选地，糖基化的结合蛋白包含糖基残基，从而使得糖基化模式是人的。
不同的蛋白糖基化可以导致不同的蛋白特征，这是本领域技术人员已知的。例如，与哺乳动物细胞例如CHO细胞系中表达的相同蛋白的那种相比较，在微生物宿主例如酵母中生产，和利用酵母内源性途径糖基化的治疗用蛋白的功效可能是减少的。此种糖蛋白在人中也可以是免疫原性的，且在施用后显示减少的体内半衰期。人和其他动物中的特定受体可以识别特定糖基残基且促进蛋白从血流中快速清除。其他不利效应可以包括蛋白折叠、可溶性、对蛋白酶的易感性、运输、转运、区室化、分泌、由其他蛋白或因子识别、抗原性、或变应原性中的变化。因此，从业者可能偏好具有特定糖基化组成和模式的治疗用蛋白，例如等同于或至少类似于在人细胞或预期受试动物的物种特异性细胞中生产的那种的糖基化组成和模式。
表达不同于宿主细胞那种的糖基化蛋白可以通过遗传修饰宿主细胞以表达异源糖基化酶来完成。使用本领域已知的技术，从业者可以生成显示人蛋白糖基化的抗体或其抗原结合部分。例如，酵母菌株已进行遗传修饰以表达非天然存在的糖基化酶，从而使得在这些酵母菌株中生产的糖基化蛋白（糖蛋白）显示等同于动物细胞特别是人细胞那种的蛋白糖基化（美国专利申请20040018590和20020137134）。
此外，本领域技术人员将认识到，目的蛋白可以使用宿主细胞文库来表达，所述宿主细胞进行基因工程改造以表达各种糖基化酶，从而使得文库的成员宿主细胞生产具有变体糖基化模式的目的蛋白。从业者随后可以选择并分离具有特定新糖基化模式的目的蛋白。优选地，具有特定选择的新糖基化模式的蛋白显示改善或改变的生物学性质。
D. 抗IL-1α抗体的用途
已知其与人IL-1α结合的能力，本发明的抗人IL-1α抗体或其部分可以用于检测IL-1α（例如，在生物样品中，例如血清或血浆），其中使用常规免疫测定，例如酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）或组织免疫组织化学。本发明提供在生物学样品中检测IL-1α的方法，包括将生物学样品与本发明的抗体或抗体部分接触，并检测与IL-1α结合的抗体（或抗体部分）或未结合的抗体（或抗体部分），以从而检测生物学样品中的IL-1α。抗体用可检测物质直接或间接标记，以促进结合或未结合的抗体的检测。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。合适酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适辅基复合物的例子包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺（dichlorotriazinylamine）荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；且合适放射性材料的例子包括3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho、或153Sm。
作为标记抗体的替代，可以通过利用以可检测物质标记的rhIL-1α标准和未标记的抗人IL-1α抗体的竞争免疫测定在生物学流体中测定人IL-1α。在该测定中，将生物学样品、标记的rh IL-1α标准和抗人IL-1α抗体组合，并测定与未标记的抗体结合的标记的rhIL-1α标准的量。生物学样品中人IL-1α的量与结合抗IL-1α抗体的标记的rhIL-1α标准的量成反比。类似地，也可以通过利用以可检测物质标记的rhIL-1α标准物和未标记的抗人IL-1α抗体的竞争免疫测定在生物学流体中测定人IL-1α。
本发明的抗体和抗体部分优选能够在体外和体内中和IL-1α活性。因此，本发明的此种抗体和抗体部分可以例如，在包含IL-1α的细胞培养物中、在人受试者中或在具有本发明的抗体与其交叉反应的IL-1α的其他哺乳动物受试者中用于抑制IL-1α活性。在一个实施方案中，本发明提供了抑制IL-1α活性的方法，包括将IL-1α与本发明的抗体或抗体部分接触，从而抑制IL-1α活性。例如，在含有或怀疑含有IL-1α的细胞培养物中，可以将本发明的抗体或抗体部分添加到培养基来在培养物中抑制IL-1α活性。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于减少受试者中的IL-1α活性的方法，有利地为从患有其中IL-1α活性是有害的疾病或病症的受试者。本发明提供了在在患有这种疾病或病症的受试者中减少IL-1α活性的方法，该方法包括将本发明的抗体或抗体部分施用给受试者，从而减少受试者中的IL-1α活性。优选地，IL-1α是人IL-1α，而受试者是人受试者。可替代地，受试者可以是表达IL-1α的哺乳动物，其中本发明的抗体可以结合所述IL-1α。更进一步地，受试者可以是（例如通过施用IL-1α或通过表达IL-1α转基因）已引入IL-1α的哺乳动物。本发明的抗体可以施用于人受试者用于治疗目的。另外，为了兽医目的或作为人类疾病的动物模型，可以将本发明的抗体施用给表达IL-1α的非人哺乳动物，该抗体可以结合所述IL-1α。关于后者，这种动物模型可用于评价本发明的抗体的治疗功效（例如测试施用的计量和时程）。
如本文使用的，术语“其中IL-1α活性是有害的病症”预期包括疾病和其他病症，其中患有该病症的受试者中IL-1α的存在已显示或怀疑负责病症的病理生理学或是促进病症恶化的因素。因此，其中IL-1α活性是有害的病症是其中IL-1α活性减少预期减轻病症症状和/或进展的病症。此种病症可以例如由患有病症的受试者生物学流体中IL-1α浓度的增加（例如受试者血清、血浆、滑液等中IL-1α浓度的增加）来证实，这可以例如使用如上所述的抗IL-1A抗体检测。可以用本发明的抗体治疗的病症的非限制性例子包括下文关于本发明抗体的药物组合物部分中讨论的那些病症。
D. 药物组合物
本发明还提供了包含本发明的抗体或其抗原结合部分，和药学可接受的载体的药物组合物。包含本发明的抗体的药物组合物用于在下述方面使用，但不限于下述方面，病症诊断、检测或监控，病症或其一种或多种症状的预防、治疗、管理或改善和/或研究。在具体实施方案中，组合物包含本发明的一种或多种抗体。在另一个实施方案中，药物组合物包含本发明的一种或多种抗体，以及除本发明抗体外用于治疗病症的一种或多种预防或治疗剂，在所述病症中IL-1α和/或IL-1α活性是有害的。优选地，预防或治疗剂已知在病症或其一种或多种症状的预防、治疗、管理或改善中有用，或已在其中使用或目前正在其中使用。依照这些实施方案，组合物可以进一步包含载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的抗体和抗体部分可以掺入适合于给受试者施用的药物组合物内。一般地，药物组合物包含本发明的抗体或抗体部分和药学可接受的载体。如本文使用的，“药学可接受的载体”包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。药学可接受的载体的例子包括下述一种或多种：水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，及其组合。在许多情况下，将优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇、或氯化钠。药学可接受的载体可以进一步包含少量辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液，所述辅助物质增强抗体或抗体部分的保存期限或效力。
各种递送系统是已知的，且可以用于施用本发明的一种或多种抗体或本发明的一种或多种抗体与预防剂或治疗剂的组合，用于预防、管理、治疗或改善病症或其一种或多种症状，例如被囊化在脂质体中、微粒、微胶囊、能够表达抗体或抗体片段的重组细胞、受体介导的胞吞（参见，例如，Wu和Wu，J. Biol. Chem. 262：4429-4432（1987））、作为逆转录病毒或其他载体部分的核酸构建等。施用本发明的预防或治疗剂的方法包括但不限于，肠胃外施用（例如，皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下），硬膜外施用，瘤内施用和粘膜施用（例如，鼻内和经口途径）。此外，可以使用肺施用，例如利用吸入器或喷雾器，和含气溶胶化剂（aerosolizing agent）的制剂。参见，例如，美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540、和4,880,078；以及PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346、和WO 99/66903，其各自全文引入作为参考。在一个实施方案中，本发明的抗体、组合疗法、或本发明的组合物使用Alkermes AIR®肺药物递送技术（Alkermes，Inc.，Cambridge，Mass.）来施用。在具体实施方案中，本发明的预防或治疗剂肌内、静脉内、瘤内、经口、鼻内、肺、或皮下施用。预防或治疗剂可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或单次快速静脉注射，通过经由上皮或粘膜皮肤衬里（例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等）吸收，且可以连同其他生物学活性剂一起施用。施用可以是全身或局部的。
在具体实施方案中，可能需要使本发明的预防或治疗剂局部施用在需要治疗的区域；这可以通过例如但不限于局部输注、注射、或通过植入物来完成，所述植入物为多孔或无孔材料，包括膜和基质，例如硅橡胶（sialastic）膜、聚合物、纤维基质（例如，Tissuel®）、或胶原基质。在一个实施方案中，有效量的本发明拮抗剂的一种或多种抗体局部施用于受试者的受累区域，以预防、治疗、管理、和/或改善病症或其症状。在另一个实施方案中，有效量的本发明的一种或多种抗体，与有效量的除本发明抗体外的一种或多种疗法（例如，一种或多种预防或治疗剂）组合，局部施用于受试者的受累区域，以预防、治疗、管理、和/或改善病症或其一种或多种症状。
在另一个实施方案中，预防或治疗剂可以在控释或持续释放系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵以达到控释或持续释放（参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14：20；Buchwald等人，1980，Surgery 88：507；Saudek等人，1989，N. Engl. J. Med. 321：574）。在另一个实施方案中，聚合材料可以用于达到本发明疗法的控释或持续释放（参见例如，Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise（eds.），CRC Pres.，Boca Raton，Fla.（1974）；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance，Smolen和Ball（eds.），Wiley，New York（1984）；Ranger和Peppas，1983，J.，Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23：61；还参见Levy等人，1985，Science 228：190；During等人，1989，Ann. Neurol. 25：351；Howard等人，1989，J. Neurosurg. 7 1：105）；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；PCT公开号WO 99/15154；和PCT公开号WO 99/20253。在持续释放制剂中使用的聚合物的例子包括但不限于，聚甲基丙烯酸2-羟乙酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚甲基丙烯酸、聚乙醇酸交酯（PLG）、聚酐、聚N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚乙二醇、聚丙交酯（PLA）、丙交酯-乙醇酸交酯共聚物（PLGA）、和聚原酸酯。在优选的实施方案中，持续释放制剂中使用的聚合物是惰性的、不含可沥滤杂质、贮藏稳定、无菌和生物可降解的。在另外一个实施方案中，控释或持续释放系统可以接近预防或治疗靶放置，从而只需要全身剂量的部分（参见，例如，Goodson，in Medical Applications of Controlled Release，同上，第2卷，第115-138页（1984））。
控释系统在Langer（1990，Science 249：1527-1533）的综述中讨论。本领域技术人员已知的任何技术都可以用于生产包含本发明的一种或多种治疗剂的持续释放制剂。参见，例如，美国专利号4,526,938，PCT公开WO91/05548，PCT公开WO96/20698，Ning等人，1996，"Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy &Oncology 39：179-189，Song等人，1995，"Antibody Mediated Lung Targeting of Long- Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 50：372-397，Cleek等人，1997，"Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24：853-854，和Lam等人，1997，"Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24：759-760，其各自在此全文引入作为参考。
在具体实施方案中，当本发明的组合物是编码预防或治疗剂的核酸时，核酸可以体内施用以促进其编码的预防或治疗剂的表达，这通过下述实现，将其构建为合适的核酸表达载体的部分且施用，从而使得其成为细胞内的，例如利用逆转录病毒载体（参见美国专利号4,980,286），或直接注射，或使用微粒轰击（例如，基因枪；Biolistic，Dupont），或用脂质或细胞表面受体或转染剂包被，或与已知进入核的同源异型框样肽连接施用（参见，例如，Joliot等人，1991，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88：1864-1868）。可替代地，核酸可以细胞内引入且通过同源重组整合入宿主细胞DNA内用于表达。
本发明的药物组合物配制为与其预期施用途径相容。施用途径的例子包括但不限于，肠胃外，例如，静脉内、皮内、皮下、经口、鼻内（例如，吸入）、经皮（例如，局部）、跨粘膜、和直肠施用。在具体实施方案中，组合物依照常规程序配制为药物组合物，所述药物组合物适合于静脉内、皮下、肌内、经口、鼻内或局部施用于人类。一般地，用于静脉内施用的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可以包括增溶剂和局部麻醉剂例如利多卡因（lignocamne），以减轻注射部位处的疼痛。
如果本发明的组合物将局部施用，那么组合物可以配制为软膏、乳膏、经皮贴剂、洗剂、凝胶、洗发剂、喷雾剂、气溶胶、溶液、乳剂形式或本领域技术人员众所周知的其他形式。参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第19版，Mack Pub. Co.，Easton，Pa.（1995）。对于不可喷雾的局部剂型，一般使用包含与局部应用相容的载体或一种或多种赋形剂，且具有优选大于水的动态粘度的粘性至半固体或固体形式。合适的制剂包括但不限于，溶液、悬浮液、乳剂、乳膏、软膏、粉末、搽剂、油膏等，必要时进行灭菌或与助剂（例如防腐剂、稳定剂、湿润剂、缓冲液或盐）混合用于影响各种性质，例如，渗透压。其他合适的局部剂型包括可喷雾的气溶胶制剂，其中活性成分，优选地，与固体或液体惰性载体组合，与加压挥发物（例如，气体推进剂，例如氟利昂）在混合物中包装或包装在挤压瓶中。必要时保湿剂（moisturizer）或湿润剂也可以加到药物组合物和剂型中。此种另外成分的例子是本领域众所周知的。
如果本发明的方法包括组合物的鼻内施用，那么组合物可以配制为气溶胶形式、喷雾剂、雾或滴剂形式。特别地，用于根据本发明使用的预防或治疗剂可以以从加压包或喷雾器呈递的气溶胶喷雾剂形式方便地递送，使用合适的推进剂（例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体）。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过提供阀来确定，以递送计量的量。可以配制包含化合物和合适粉末基例如乳糖或淀粉的粉末混合物的胶囊和药液筒（由例如明胶组成），用于在吸入器或吹入器中使用。
如果本发明的方法包括经口施用，那么组合物可以配制为片剂、胶囊、扁胶剂、粒状胶囊（gelcaps）、溶液、悬浮液等经口形式。片剂或胶囊可以通过常规方法用药学可接受的赋形剂制备，所述赋形剂例如粘合剂（例如，预凝胶玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、或羟丙基甲基纤维素）；充填剂（例如，乳糖、微晶纤维素、或磷酸氢钙）；润滑剂（例如，硬脂酸镁、滑石或硅石）；崩解剂（例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠）；或湿润剂（例如，十二烷基硫酸钠）。片剂可以通过本领域众所周知的方法进行包被。用于经口施用的液体制剂可以采取下述形式，但不限于下述形式，溶液、糖浆或悬浮液，或它们可以呈现为干燥产品，用于在使用前用水或其他合适的载体构建。此种液体制剂可以通过常规方法用药学可接受的添加剂制备，所述添加剂例如悬浮剂（例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物、或氢化食用脂肪）；乳化剂（例如，卵磷脂或阿拉伯胶）；非水载体（例如，杏仁油、油酯、乙醇、或分馏植物油）；和防腐剂（例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸）。适当时制剂还可以包含缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。用于经口施用的制剂可以适当地配制，用于缓慢释放、控释、或持续释放一种或多种预防或治疗剂。
本发明的方法可以包括用气溶胶化剂（aerosolizing agent）配制的组合物的肺施用，例如利用吸入器或喷雾器。参见，例如，美国专利号6,019,968，5,985,320，5,985,309，5,934,272，5,874,064，5,855,913，5,290,540，和4,880,078；和PCT公开号WO 92/19244，WO 97/32572，WO 97/44013，WO 98/31346，和WO 99/66903，其各自在此处全文引入作为参考。在具体实施方案中，本发明的抗体、组合疗法、和/或本发明的组合物使用Alkermes AIR®肺药物递送技术（Alkermes，Inc.，Cambridge，Mass.）来施用。
本发明的方法可以包括配制用于通过注射（例如通过单次快速静脉注射或连续输注）肠胃外施用的组合物的施用。用于注射的制剂可以与添加的防腐剂一起以单位剂型（例如，在安瓿或多剂容器中）呈递。组合物可以采取此种形式，如在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂，且可以包含配制试剂例如悬浮、稳定和/或分散剂。可替代地，活性成分可以为粉末形式用于在使用前用合适的载体（例如，无菌无致热原水）构建。
本发明的方法可以另外包括配制为积存（depot）制剂的组合物的施用。此种长效制剂可以通过植入（例如皮下或肌内）或通过肌内注射来施用。因此，例如，组合物可以用合适的聚合或疏水材料（例如，作为在可接受的油中的乳剂）或离子交换树脂配制，或配制为微溶衍生物（例如，作为微溶盐）。
本发明的方法包括配制为中性或盐形式的组合物的施用。药学可接受的盐包括由阴离子形成的那些，例如来源于盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的那些，以及由阳离子形成的那些，例如来源于钠、钾、铵、钙、铁氢氧化物，异丙胺，三乙胺，2-乙氨基乙醇，组氨酸，普鲁卡因等的那些。
一般地，组合物的成分分开或混合在一起以单位剂型提供，例如，作为在密封容器中的干冷冻干燥粉末或无水浓缩剂，所述密封容器例如安瓿或小药囊，其指示活性剂的量。当施用方式是输注时，组合物可以用包含无菌药物级别的水或盐水的输注瓶分配。当施用方式是注射时，可以提供无菌注射用水或盐水安瓿，从而使得成分可以在施用前进行混合。
特别地，本发明还提供了包装在密封容器中的本发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，所述密封容器例如安瓿或小药囊，其指示试剂的量。在一个实施方案中，本发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，作为在密封容器中的干无菌冷冻干燥粉末或无水浓缩剂提供，且可以重构（例如，用水或盐水）至合适浓度以用于给受试者施用。优选地，本发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，作为在密封容器中的干无菌冷冻干燥粉末提供，其单位剂量为至少5 mg、更优选至少10 mg、至少15 mg、至少25 mg、至少35 mg、至少45 mg、至少50 mg、至少75 mg、或至少100 mg。冷冻干燥的本发明的预防或治疗剂或药物组合物应在其原容器中贮存于2℃－8℃，并且本发明的预防或治疗剂或药物组合物应在重构后1周内施用，优选5天内、72小时内、48小时内、24小时内、12小时内、6小时内、5小时内、3小时内、或1小时内。在可替代的实施方案中，本发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，以液体形式在指示试剂的量和浓度的密封容器中提供。优选地，液体形式的施用的组合物在密封容器中提供，其量为至少0.25 mg/ml，更优选至少0.5 mg/ml、至少1 mg/ml、至少2.5 mg/ml、至少5 mg/ml、至少8 mg/ml、至少10 mg/ml、至少15 mg/kg、至少25 mg/ml、至少50 mg/ml、至少75 mg/ml或至少100 mg/ml。液体形式应在其原容器中贮存于2℃－8℃。
本发明的结合蛋白可以掺入适用于肠胃外施用的药物组合物内。在一个方面，结合蛋白将制备为包含0.1－250 mg/ml抗体的可注射溶液。可注射溶液可以由在燧石或琥珀色小瓶、安瓿或预装注射器中的液体或冷冻干燥剂型组成。缓冲液可以是L-组氨酸（1－50 mM），最佳5－10 mM，pH 5.0－7.0（最佳pH 6.0）。其他合适的缓冲液包括但不限于，琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠或磷酸钾。氯化钠可以用于修饰浓度0－300 mM（对于液体剂型最佳150 mM）的溶液的毒性。对于冷冻干燥剂型可以包括冷冻保护剂，主要为0－10％蔗糖（最佳0.5－1.0％）。其他合适的冷冻保护剂包括海藻糖和乳糖。对于冷冻干燥剂型可以包括膨胀剂，主要为1－10％甘露糖醇（最佳2－4％）。稳定剂可以在液体和冷冻干燥剂型中使用，主要为1－50 mM L-甲硫氨酸（最佳5－10 mM）。其他合适的膨胀剂包括甘氨酸、精氨酸，可以作为0－0.05％聚山梨醇酯80（最佳0.005－0.01％）包括。另外的表面活性剂包括但不限于，聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。
本发明的组合物可以为多种形式。这些包括例如，液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液（例如，可注射和可输注溶液）、分散体或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期施用方式和治疗应用。一般优选的组合物为可注射或可输注溶液形式，例如类似于由其他抗体被动免疫接种人使用的那些的组合物。优选的施用方式是肠胃外的（例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内）。在优选实施方案中，抗体通过静脉内输注或注射来施用。在另一个优选实施方案中，抗体通过肌内或皮下注射来施用。
治疗组合物一般必须是无菌且在制备和贮存条件下是稳定的。组合物可以配制为溶液、微乳剂、分散体、脂质体、或适合于高药物浓度的其他有序结构。无菌可注射溶液可以通过下述制备：将需要量的活性化合物（即，抗体或抗体部分）与上文列举的一种成分或成分组合一起掺入合适的溶剂中，必要时随后进行过滤灭菌。一般地，分散体通过将活性化合物掺入无菌载体内来制备，所述无菌载体包含基本分散介质和来自上文列举那些的必需的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌、冷冻干燥粉末的情况下，优选的制备方法是由其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加任何另外所需成分的粉末的真空干燥和喷雾干燥。溶液的正确流动性可以通过下述来维持，例如利用包衣例如卵磷脂，在分散体的情况下维持所需颗粒大小和利用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂来引起，所述试剂例如单硬脂酸盐和明胶。
本发明的结合蛋白可以通过本领域已知的多种方法来施用，尽管对于许多治疗应用，优选的施用途径/模式是皮下注射、静脉内注射或输注。如技术人员将认识到的，施用途径和/或模式将依所需结果而变。在某些实施方案中，活性化合物可以与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于快速释放，例如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂、和微囊化递送系统。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此种制剂的许多方法是获得专利保护的或是本领域技术人员一般已知的。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R. Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
在某些实施方案中，本发明的抗体或抗体部分可以例如，与惰性稀释剂或可同化食用载体一起经口施用。化合物（和若需要，其他成分）也可以装入硬或软壳明胶胶囊中，压缩成片剂，或直接掺入受试者的饮食内。对于经口治疗施用，化合物可以与赋形剂掺合，且以可摄食片剂、口腔含化片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、薄片（wafer）等的形式使用。为了通过除肠胃外施用外施用本发明的化合物，可能必须用材料包被化合物、或将化合物与材料共施用，以防止其失活。
补充性活性化合物也可以掺入组合物内。在某些实施方案中，本发明的抗体或抗体部分与一种或多种另外的治疗剂共配制和/或共施用，所述治疗剂可用于治疗病症，在所述病症中，IL-1α活性是有害的。例如，本发明的抗hIL-1α抗体或抗体部分可以与结合其他靶的一种或多种另外的抗体（例如，结合其他细胞因子或结合细胞表面分子的抗体）共配制和/或共施用。此外，本发明的一种或多种抗体可以与2种或更多前述治疗剂组合使用。此种组合疗法可以有利地利用较低剂量的施用的治疗剂，从而避免与各种单一疗法相关的可能毒性或并发症。
在某些实施方案中，针对IL-1α的抗体或其片段与本领域已知的半衰期延长载体连接。此种载体包括但不限于，Fc结构域、聚乙二醇、和葡聚糖。此种载体在例如美国申请系列号09/428,082和公开的PCT申请号WO 99/25044中描述，其为了任何目的在此引入作为参考。
在具体实施方案中，施用含有编码本发明的抗体或本发明的另一种预防或治疗剂的核苷酸序列的核酸序列，以经由基因疗法治疗、预防、管理、或改善病症或其一种或多种症状。基因疗法指通过给受试者施用表达的或可表达核酸来进行的疗法。在本发明的这个实施方案中，核酸生产其编码的抗体或介导预防或治疗作用的本发明预防或治疗剂。
本领域可用的任何关于基因治疗的方法可以根据本发明使用。关于基因治疗方法的一般综述，参见Goldspiel等人，1993，Clinical Pharmacy 12：488-505；Wu和Wu，1991，Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev，1993，Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32：573-596；Mulligan，Science 260：926- 932（1993）；以及Morgan和Anderson，1993，Ann. Rev. Biochem. 62：191-217；May，1993，TIBTECH 11（5）：155-215。可使用的重组DNA技术领域中通常已知的方法描述于 Ausubel等人（eds.），Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，NY（1993）；和Kriegler，Gene Transfer and Expression，A Laboratory Manual，Stockton Press，NY（1990）。各种基因治疗方法的详细描述在US20050042664 A1中公开，其在此引入作为参考。
IL-1α在与多种涉及免疫和炎症要素的疾病有关的病理学中起到关键作用。这些疾病包括但不限于：获得性免疫缺陷病综合征；获得性免疫缺陷相关病；获得性恶性贫血；急性冠状动脉综合征；急性和慢性痛（不同形式的疼痛）；急性特发性多神经炎；与器官移植相关的急性免疫性疾病；与器官移植相关的急性或慢性免疫性疾病；急性炎性脱髓鞘性多发性神经根性神经病；急性缺血；急性肝病；急性风湿热；急性横贯性脊髓炎；Addison氏病；成人（急性）呼吸窘迫综合征；成人Still氏病；酒精性肝硬变；酒精诱导的肝损伤；变应性疾病；变态反应；秃头；斑秃；阿尔茨海默氏病；过敏反应；强直性脊柱炎；强直性脊柱炎相关性肺病；抗磷脂抗体综合征；再生障碍性贫血；动脉硬化；关节病；哮喘；动脉粥样化疾病/动脉硬化；动脉粥样硬化；特应性变态反应；特应性湿疹；特应性皮炎；萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退；自身免疫性大疱性疾病；自身免疫性皮炎；自身免疫性糖尿病；与链球菌感染相关的自身免疫性病症；自身免疫性肠病；自身免疫性溶血性贫血；自身免疫性肝炎；自身免疫性听力丧失；自身免疫性淋巴细胞增生综合征（ALPS）；自身免疫介导的低血糖；自身免疫性心肌炎；自身免疫性嗜中性白细胞减少症；自身免疫性过早卵巢衰竭；自身免疫性血小板减少症（AITP）；自身免疫性甲状腺病；自身免疫性葡萄膜炎；闭塞性细支气管炎；Behcet氏病；睑炎；支气管扩张；大疱性类天疱疮；恶病质；心血管病；灾变性抗磷脂综合征；乳糜泻；颈椎关节强硬；衣原体；胆汁郁积（choleosatatis）；慢性活动性肝炎；慢性嗜酸性肺炎；慢性疲乏综合征；与器官移植相关的慢性免疫性疾病；慢性缺血；慢性肝病；慢性粘膜皮肤念珠菌病；疤痕性类天疱疮；具有多发性硬化风险的临床孤立综合征（CIS）；常见的各种免疫缺陷（常见的可变低丙种球蛋白血症）；结缔组织病相关性间质性肺病；结膜炎；Coombs阳性溶血性贫血；儿童期发病性精神病；慢性阻塞性肺部疾病（COPD）；Crohn氏病；隐原性自身免疫性肝炎；隐原性纤维化肺泡炎；泪囊炎；抑郁；皮炎硬皮病；皮肌炎；皮肌炎/多肌炎相关性肺病；糖尿病性视网膜病；糖尿病；扩张型心肌病；盘状红斑狼疮；椎间盘突出；盘脱垂；弥散性血管内凝血；药物诱导的肝炎；药物诱导的间质性肺病；药物诱导的免疫性溶血性贫血；心内膜炎；子宫内膜异位；眼内炎；肠病性滑膜炎；巩膜外层炎；多形性红斑；重型多形性红斑；女性不育；纤维化；纤维化肺疾病；妊娠期类天疱疮；巨细胞性动脉炎（GCA）；肾小球肾炎；甲状腺肿性自身免疫性甲状腺功能减退（Hashimoto氏病）；Goodpasture氏综合征；痛风性关节炎；移植物抗宿主病（GVHD）；Grave氏病；B群链球菌（GBS）感染；Guillain-Barré综合征（GBS）；含铁血黄素沉着病相关性肺病；枯草热；心力衰竭；溶血性贫血；过敏性紫癜；乙型肝炎；丙型肝炎；Hughes综合征；亨廷顿氏舞蹈病；甲状腺机能亢进；甲状旁腺机能减退；特发性白细胞减少；特发性血小板减少症；特发性帕金森氏病；特发性间质性肺炎；特应性肝病；IgE介导的变态反应；免疫性溶血性贫血；内含体肌炎；传染病；传染性眼炎性疾病；炎性肠病；炎性脱髓鞘疾病；炎性心脏病；炎性肾病；胰岛素依赖性糖尿病；间质性肺炎；IPF/UIP；虹膜炎；青少年慢性关节炎；青少年性恶性贫血；青少年类风湿性关节炎；Kawasaki氏病；角膜炎；干燥性角膜结膜炎；Kussmaul病或Kussmaul-Meier病；Landry氏麻痹；朗格汉斯细胞组织细胞增多症；线性IgA疾病；网状青斑；莱姆关节炎；淋巴细胞性浸润性肺病；黄斑变性；特发性男性不育症或NOS；恶性肿瘤；肾显微血管炎；显微镜下多脉管炎；混合型结缔组织病相关性肺病；Morbus Bechterev；运动神经元病症；粘膜类天疱疮；多发性硬化（所有亚型：原发进行性，继发进行性，复发缓和性（relapsing remitting）等）；多器官衰竭；肌痛脑炎/Royal Free疾病；重症肌无力；脊髓异常增生综合征；心肌梗死；心肌炎；肾病综合征；神经根障碍；神经病；非酒精性脂肪性肝炎；非甲非乙型肝炎；视神经炎；器官移植排斥；骨关节炎；骨质溶解；卵巢癌；卵巢衰竭；胰腺炎；寄生虫病；帕金森氏病；少关节的JRA；类天疱疮；落叶状天疱疮；寻常天疱疮；周围动脉闭塞性疾病（PAOD）；周围血管疾病（PVD）；外周动脉疾病（PAD）；晶状体性葡萄膜炎；静脉炎；结节性多动脉炎（或结节性动脉外膜炎）；多软骨炎；风湿性多肌痛；白发症；多关节的JRA；多发性内分泌缺陷综合征；多肌炎；散发性多腺性I型缺乏和多腺性II型缺乏；风湿性多肌痛（PMR）；传染后间质性肺病；炎症后间质性肺病；泵后综合征；过早卵巢衰竭；原发性胆汁性肝硬变；原发性粘液性水肿；原发性帕金森综合征；原发性硬化性胆管炎；原发性硬化性肝炎；原发性血管炎；前列腺和直肠癌以及造血恶性肿瘤（白血病和淋巴瘤）；前列腺炎；牛皮癣；1型牛皮癣；2型牛皮癣；牛皮癣性关节炎；牛皮癣性关节病；结缔组织病继发的肺动脉高压；结节性多动脉炎的肺表现；单纯红细胞再生障碍；原发性肾上腺机能不足；放射性纤维化；反应性关节炎；Reiter氏病；复发型视神经脊髓炎；肾脏病NOS；再狭窄；类风湿性关节炎；类风湿性关节炎相关性间质性肺病；风湿性心脏病；SAPHO（滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎）；肉状瘤病；精神分裂症；Schmidt氏综合征；硬皮病；继发性淀粉样变性；休克肺；巩膜炎；坐骨神经痛；继发性肾上腺机能不足；脓毒病综合征；脓毒性关节炎；脓毒性休克；血清反应阴性关节病；聚硅氧烷相关的结缔组织病；Sjögren氏病相关性肺病；Sjögren氏综合征；Sneddon-Wilkinson皮肤病；精子自身免疫性；脊椎关节病；关节强硬性脊椎炎；Stevens-Johnson综合征（SJS）；Still氏病；中风；交感性眼炎；全身性炎症应答综合征；全身性红斑狼疮；全身性红斑狼疮相关性肺病；全身性硬皮病；全身性硬皮病相关性间质性肺病；Takayasu氏病/动脉炎；颞动脉炎；Th2型和Th1型介导的疾病；甲状腺炎；中毒性休克综合征；弓形体视网膜炎；中毒性表皮坏死松解；横贯性脊髓炎；TRAPS（肿瘤坏死因子受体I型（TNFR）相关性周期综合征）；具有黑棘皮症的B型胰岛素耐受性；1型变态反应；1型自身免疫性肝炎（传统自身免疫性或狼疮样肝炎）；2型自身免疫性肝炎（抗LKM抗体肝炎）；II型糖尿病；溃疡性结肠炎性关节病；溃疡性结肠炎；荨麻疹；普通型间质性肺炎（UIP）；葡萄膜炎；脉管炎性弥散性肺病；脉管炎；春季结膜炎；病毒性视网膜炎；白癜风；Vogt-Koyanagi-Harada综合征（VKH综合征）；韦格纳氏肉芽肿病；湿黄斑变性；伤口愈合；耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病。
在一个方面，本发明的抗体或其抗原结合部分用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、Crohn氏病、多发性硬化、胰岛素依赖性糖尿病和牛皮癣。
本发明的抗体和抗体部分也可以用于治疗患有自身免疫性疾病的人，所述自身免疫性疾病特别是与炎症相关的那些，包括强直性脊柱炎、变态反应、自身免疫性糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎。
本发明的抗体或抗体部分也可以与自身免疫和炎性疾病治疗中有用的一种或多种另外治疗剂一起施用。
本发明的抗体或其抗原结合部分可以单独或组合使用以治疗此种疾病。应当理解本发明的抗体或其抗原结合部分可以单独或与另外的试剂例如治疗剂组合使用，所述另外的试剂由技术人员根据其预期目的进行选择。例如，另外的试剂可以是领域公认为治疗由本发明的抗体治疗的疾病或状况有用的治疗剂。另外的试剂也可以是赋予治疗组合物有利属性的试剂，例如影响组合物粘度的试剂。
应进一步理解将包括在本发明内的组合是对其预期目的有用的那些组合。下文所述试剂是举例说明性目的的且不希望是限制性的。作为本发明部分的组合可以是本发明的抗体和选自下列的至少一种另外的试剂。组合还可以包括超过一种另外的试剂，例如，2种或3种另外的试剂，如果组合是这样的，从而使得形成的组合物可以执行其预期功能的话。
优选的组合是非类固醇消炎药，也称为NSAIDS，它包括药物如布洛芬。其他优选的组合是皮质类固醇，包括强的松龙；当与本发明的抗IL-1α抗体组合治疗患者时，通过逐渐减少所需的类固醇剂量，可以减少或甚至消除类固醇使用的众所周知的副作用。本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于类风湿性关节炎的治疗剂的非限制性例子包括下述：细胞因子抑制性消炎药（CSAIDs）；针对其他人细胞因子或生长因子的抗体或拮抗剂，例如，TNF、LT、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、干扰素、EMAP-II、GM-CSF、FGF、和PDGF。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与针对细胞表面分子或其配体包括CD154（gp39或CD40L）的抗体组合，所述细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80（B7.1）、CD86（B7.2）、CD90、CTLA。
治疗剂的优选组合可以在自身免疫和后续炎症级联中的不同点上进行干扰；优选的例子包括TNF拮抗剂，如嵌合、人源化或人TNF抗体，D2E7（PCT公开号WO 97/29131）、CA2（RemicadeTM）、CDP 571、和可溶性p55或p75 TNF受体，其衍生物（p75TNFR1gG（EnbrelTM）或p55TNFR1gG（Lenercept），以及TNFα转换酶（TACE）抑制剂；类似地由于相同原因其他IL-1抑制剂（白细胞介素-1转换酶抑制剂，IL-1RA等）可以是有效的。其他优选的组合包括白细胞介素11。另外一种优选的组合是自身免疫应答的其他关键参与物（player），所述关键参与物可与IL-1α功能平行作用，依赖于IL-1α功能或与IL-1α功能一致；特别优选的是IL-18拮抗剂，包括IL-18抗体或可溶性IL-18受体，或IL-18结合蛋白。另外一种优选的组合是非耗尽性抗CD4抑制剂。另外一种优选的组合包括共刺激途径CD80（B7.1）或CD86（B7.2）拮抗剂，包括抗体、可溶性受体或拮抗性配体。
本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如氨甲蝶呤、6-MP、硫唑嘌呤 柳氮磺吡啶、美沙拉秦、奥沙拉嗪 氯喹（chloroquinine）/羟氯喹、青霉胺、硫化苹果酸金（肌内和经口）、硫唑嘌呤、秋水仙碱、皮质类固醇（经口、吸入和局部注射）、β2肾上腺素受体激动剂（沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗）、黄嘌呤（茶碱、氨茶碱）、色甘酸盐、萘多罗米、酮替芬、异丙托铵和乙东碱、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯、来氟洛米、NSAIDs例如布洛芬、皮质类固醇例如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗凝剂、补体抑制剂、肾上腺素能药、干扰经由促炎细胞因子例如TNFα或IL-1的发信号的试剂（例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂）、IL-1β转换酶抑制剂、TNFα转换酶（TACE）抑制剂、T细胞发信号抑制剂例如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物（例如，可溶性p55或p75 TNF受体和衍生物p75TNFRIgG（EnbrelTM和p55TNFRIgG（Lenercept））、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R）、抗炎细胞因子（例如，IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ）、塞来昔布、叶酸、硫酸羟氯喹、洛芬昔布、依那西普、英夫单抗、萘普生、伐地考昔、柳氮磺吡啶、甲基强的松龙、美洛昔康、乙酸甲基强的松龙、硫代苹果酸金钠、阿司匹林、曲安缩松、萘磺酸右丙氧芬/扑热息痛、叶酸盐、萘普酮、扶他林、吡罗昔康、依托度酸、双氯酚酸钠、奥沙普嗪、盐酸羟可酮、重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、双氯酚酸钠/米索前列醇、芬太尼、阿那白滞素（anakinra）、人重组体、盐酸曲马多、双水杨酸酯、舒林酸、氰钴胺素/fa/吡哆醇、扑热息痛、阿仑膦酸钠、强的松龙、硫酸吗啡、盐酸利多卡因、吲哚美辛、硫酸葡糖胺（glucosamine sulf）/软骨素、盐酸阿米替林、磺胺嘧啶、盐酸羟可酮/扑热息痛、盐酸奥洛帕定、米索前列醇、甲氧萘丙酸钠、奥美拉唑、环磷酰胺、利妥希玛、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、罗氟司特（Roflumilast）、IC-485、CDC-801、和美苏帕玛（Mesopram） 。优选的组合包括氨甲蝶呤或来氟洛米，并且在中等或重度类风湿性关节炎的情况下，环孢菌素。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于炎性肠病的治疗剂的非限制性例子包括下述：布地奈德；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素、柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂肪加氧酶抑制剂；美沙拉秦；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗-IL-1β单克隆抗体；抗-IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；针对其他人细胞因子或生长因子的抗体或拮抗剂，所述细胞因子或生长因子例如TNF、LT、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、和PDGF。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与针对细胞表面分子或其配体的抗体组合，所述细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如氨甲蝶呤、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯、来氟洛米、NSAIDs例如布洛芬、皮质类固醇例如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗凝剂、补体抑制剂、肾上腺素能药、干扰经由促炎细胞因子例如TNFα或IL-1的发信号的试剂（例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂）、IL-1β转换酶抑制剂、TNFα转换酶抑制剂、T细胞发信号抑制剂例如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物（例如可溶性p55或p75 TNF受体，sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R）和抗炎细胞因子（例如，IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ）。
其中抗体或抗原结合部分可以组合用于Crohn氏病的治疗剂的优选例子包括下述：TNF拮抗剂，例如抗TNF抗体，D2E7（PCT公开号WO 97/29131；HUMIRA），CA2（REMICADE），CDP 571，TNFR-Ig构建体，（p75TNFRIgG（ENBREL）和p55TNFRIgG（Lenercept））抑制剂和PDE4抑制剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与皮质类固醇组合，例如布地奈德和地塞米松。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如柳氮磺吡啶、5-氨基水杨酸和奥沙拉嗪，以及干扰促炎细胞因子例如IL-1合成或作用的试剂，例如IL-1β转换酶抑制剂和IL-1ra。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与T细胞发信号抑制剂一起使用，例如，酪氨酸激酶抑制剂 6-巯基嘌呤。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与IL-11组合。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与下述试剂组合：美沙拉秦、强的松、硫唑嘌呤、巯基嘌呤、英夫单抗、甲基强的松龙琥珀酸钠、地芬诺酯/硫酸阿托品、盐酸洛哌丁胺、氨甲蝶呤、奥美拉唑、叶酸盐、环丙沙星/葡萄糖-水、重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、盐酸四环素、氟轻松、甲硝唑、硫柳汞/硼酸、消胆胺/蔗糖、盐酸环丙沙星、硫酸莨菪碱、盐酸哌替啶、盐酸咪达唑、盐酸羟可酮/扑热息痛、盐酸异丙嗪、磷酸钠、磺胺甲异
Figure 8048DEST_PATH_IMAGE009
唑/甲氧苄啶、塞来昔布、聚卡波非、萘磺酸右丙氧芬、氢化可的松、多种维生素、巴柳氮二钠、磷酸可待因/扑热息痛、盐酸考来维仑（colesevelam hcl）、氰钴胺素、叶酸、左氟沙星、甲基强的松龙、那他珠单抗和干扰素γ。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于多发性硬化的治疗剂的非限制性例子包括下述：皮质类固醇；强的松龙；甲基强的松龙；硫唑嘌呤；环磷酰胺；环孢菌素；氨甲蝶呤；4-氨基吡啶；替扎尼定；干扰素-β1a（AVONEX；Biogen）；干扰素-β1b（BETASERON；Chiron/Berlex）；干扰素α-n3）（Interferon Sciences/Fujimoto），干扰素-α（Alfa Wassermann/J&J），干扰素β1A-IF（Serono/Inhale Therapeutics），聚乙二醇化干扰素（Peginterferon）α2b（Enzon/Schering-Plough），共聚物1（Cop-1；COPAXONE；Teva Pharmaceutical Industries，Inc.）；高压氧；静脉内免疫球蛋白；克拉屈滨（clabribine）；针对其他人细胞因子或生长因子及其受体的抗体或拮抗剂，例如，TNF、LT、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-1A、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、和PDGF。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与针对细胞表面分子或其配体的抗体组合，所述细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如氨甲蝶呤、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯、来氟洛米、NSAIDs例如布洛芬、皮质类固醇例如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗凝剂、补体抑制剂、肾上腺素能药、干扰经由促炎细胞因子例如TNFα或IL-1的发信号的试剂（例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂）、IL-1β转换酶抑制剂、TACE抑制剂、T细胞发信号抑制剂例如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物（例如可溶性p55或p75 TNF受体，sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R）、以及抗炎细胞因子（例如IL-4、IL-10、IL-13和TGFβ）。
其中抗体或其抗原结合部分可以组合用于多发性硬化的治疗剂的优选例子包括干扰素-β，例如IFNβ1a和IFNβ1b；考帕松，皮质类固醇，胱天蛋白酶抑制剂，例如胱天蛋白酶-1抑制剂，IL-1 抑制剂，TNF抑制剂，以及针对CD40配体和CD80的抗体。
本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如阿来组单抗、屈大麻酚、尤迈（Unimed）、达克珠单抗（daclizumab）、米托蒽醌、盐酸扎利罗登（xaliproden hydrochloride）、4-氨基吡定、乙酸格拉太咪尔、那他珠单抗、辛纳必醇（sinnabidol）、a-免疫因子（a-immunokine） NNSO3、ABR-215062、AnergiX.MS、趋化因子受体拮抗剂、BBR-2778、卡拉古林（calagualine）、CPI-1189、LEM（脂质体被囊化的米托蒽醌）、THC.CBD （大麻素激动剂）、MBP-8298、美苏帕玛（PDE4抑制剂）、MNA-715、抗IL-6 受体抗体、神经素（neurovax）、哌非尼酮allotrap 1258（RDP-1258）、sTNF-R1、他仑帕奈（talampanel）、特立氟胺（teriflunomide）、TGF-β2、替利莫肽（tiplimotide）、VLA-4 拮抗剂（例如，TR-14035、VLA4 Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen）、干扰素γ拮抗剂、IL-4激动剂。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于心绞痛的治疗剂的非限制性例子包括下述：阿司匹林、硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、琥珀酸美托洛尔、阿替洛尔、酒石酸美托洛尔、阿罗地平磺酸盐、盐酸地尔硫
Figure 1412DEST_PATH_IMAGE010
、硝酸异山梨酯、重硫酸氯吡格雷、硝苯地平、阿托伐他汀钙、氯化钾、呋塞米、斯伐他汀、盐酸维拉帕米、地高辛、盐酸普萘洛尔、卡维地洛、赖诺普利、螺内酯、氢氯噻嗪、马来酸依那普利、纳多洛尔、雷米普利、依诺肝素钠、肝素钠、缬沙坦、盐酸索他洛尔、非诺贝特、依泽替米贝（ezetimibe）、布美他尼、氯沙坦钾、赖诺普利/氢氯噻嗪、非洛地平、卡托普利、富马酸比索洛尔。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于强直性脊柱炎的治疗剂的非限制性例子包括下述：布洛芬、扶他林和米索前列醇、萘普生、美洛昔康、吲哚美辛、扶他林、塞来昔布、洛芬昔布、柳氮磺吡啶、氨甲蝶呤、硫唑嘌呤、米诺环素、强的松、依那西普、英夫单抗。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于哮喘的治疗剂的非限制性例子包括下述：沙丁胺醇、沙美特罗/氟替卡松、孟鲁司特钠、丙酸氟替卡松、布地奈德、强的松、沙美特罗羟萘甲酸盐（sameterol xinafoate）、盐酸左旋沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇/异丙托铵、强的松龙磷酸钠、曲安缩松、倍氯美松双丙酸酯、异丙托溴铵、阿奇霉素、醋酸吡布特罗、强的松龙、无水茶碱、甲基强的松龙琥珀酸钠、克拉霉素、扎鲁司特、富马酸福莫特罗、流感病毒疫苗、甲基强的松龙、阿莫西林三水合物、氟尼缩松、变态反应注射、色甘酸钠、盐酸非索那丁、氟尼缩松/薄荷醇、阿莫西林/克拉维酸钾、左氟沙星、吸入器辅助装置、愈创木酚甘油醚、地塞米松磷酸钠、盐酸莫西沙星、盐酸多西环素、愈创木酚甘油醚/d-甲吗喃、p-麻黄素/cod/氯苯那敏（chlorphenir）、加替沙星、盐酸西替立嗪、糠酸莫米他松、沙美特罗羟萘甲酸盐、苯佐那酯、头孢氨苄、pe/二氢可待因酮/氯苯那敏、盐酸西替立嗪/伪麻黄碱（pseudoephed）、苯福林/cod/异丙嗪、可待因/异丙嗪、头孢罗齐、地塞米松、愈创木酚甘油醚/伪麻黄碱、氯苯那敏/二氢可待因酮、奈多罗米钠、硫酸特布他林、肾上腺素、甲基强的松龙、硫酸间羟异丙肾上腺素。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于COPD的治疗剂的非限制性例子包括下述：硫酸沙丁胺醇/异丙托铵、异丙托溴铵、沙美特罗/氟替卡松、沙丁胺醇、沙美特罗羟萘甲酸盐、丙酸氟替卡松、强的松、无水茶碱、甲基强的松龙琥珀酸钠、孟鲁司特钠、布地奈德、富马酸福莫特罗、曲安缩松、左氟沙星、愈创木酚甘油醚、阿奇霉素、倍氯美松双丙酸酯、盐酸左旋沙丁胺醇、氟尼缩松、头孢曲松钠、阿莫西林三水合物、加替沙星、扎鲁司特、阿莫西林/克拉维酸钾、氟尼缩松/薄荷醇、氯苯那敏/二氢可待因酮、硫酸间羟异丙肾上腺素、甲基强的松龙、糠酸莫米他松、p-麻黄素/cod/氯苯那敏、醋酸吡布特罗、p-麻黄素/氯雷他定、硫酸特布他林、噻托溴铵（tiotropium bromide）、（R,R）-福莫特罗、TgAAT、西洛司特（Cilomilast）、罗氟司特。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于HCV的治疗剂的非限制性例子包括下述：干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α con1、干扰素-α-n1、聚乙二醇化干扰素-α-2a、聚乙二醇化干扰素-α-2b、三氮唑核苷、聚乙二醇干扰素α-2b+三氮唑核苷、熊脱氧胆酸、甘草酸、胸腺法新、马克胺（Maxamine）、VX-497以及通过干扰下述靶用于治疗HCV的任何化合物：HCV聚合酶、HCV蛋白酶、HCV解旋酶、HCV IRES（内部核糖体进入位点）。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于特发性肺纤维化的治疗剂的非限制性例子包括下述：强的松、硫唑嘌呤、沙丁胺醇、秋水仙碱、硫酸沙丁胺醇、地高辛、γ干扰素、甲基强的松龙琥珀酸钠（sod succ）、劳拉西泮、呋塞米、赖诺普利、硝酸甘油、螺内酯、环磷酰胺、异丙托溴铵、放线菌素d、阿替普酶、丙酸氟替卡松、左氟沙星、硫酸间羟异丙肾上腺素、硫酸吗啡、盐酸羟可酮、氯化钾、曲安缩松、无水他克莫司、钙、干扰素-α、氨甲蝶呤、霉酚酸酯、干扰素-γ-1β。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于心肌梗死的治疗剂的非限制性例子包括下述：阿司匹林、硝酸甘油、酒石酸美托洛尔、依诺肝素钠、肝素钠、重硫酸氯吡格雷、卡维地洛、阿替洛尔、硫酸吗啡、琥珀酸美托洛尔、华法林钠、赖诺普利、单硝酸异山梨酯、地高辛、呋塞米、斯伐他汀、雷米普利、替尼普酶、马来酸依那普利、托拉塞米（torsemide）、瑞替普酶、氯沙坦钾、盐酸喹那普利/mag carb、布美他尼、阿替普酶、依那普利拉、盐酸胺碘酮、盐酸替罗非班一水合物、盐酸地尔硫
Figure 693424DEST_PATH_IMAGE011
、卡托普利、依贝沙坦、缬沙坦、盐酸普萘洛尔、福辛普利钠、盐酸利多卡因、表非替得、头孢唑啉钠、硫酸阿托品、氨基已酸、螺内酯、干扰素、盐酸索他洛尔、氯化钾、多库酯钠、盐酸多巴酚丁胺、阿普唑仑、普伐他丁钠、阿托伐他汀钙、盐酸咪达唑、盐酸哌替啶、硝酸异山梨酯、肾上腺素、盐酸多巴胺、比伐卢定、罗苏伐他汀（rosuvastatin）、依泽替米贝/斯伐他汀、阿伐麦布（avasimibe）、卡立泊来德（cariporide）。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于牛皮癣的治疗剂的非限制性例子包括下述：卡泊三醇（calcipotriene）、丙酸氯倍他索、曲安缩松、丙酸卤倍他索、他佐罗汀、氨甲蝶呤、氟轻松、增强型二丙酸倍他米松、醋酸氟轻松、阿昔曲丁、焦油（tar）洗发剂、戊酸倍他米松、糠酸莫米他松、酮康唑、丙吗卡因/氟轻松、戊酸氢化可的松、氟羟可舒松、尿素、倍他米松、丙酸氯倍他索/润滑药（emoll）、丙酸氟替卡松、阿奇霉素、氢化可的松、湿润配方、叶酸、丙缩羟强龙、吡美莫司（pimecrolimus）、煤焦油、双醋二氟松、叶酸依那西普、乳酸、8-甲氧基补骨质素、hc/次五倍子酸铋（bismuth subgal）/znox/resor、乙酸甲基强的松龙、强的松、遮光剂、氯氟舒松、水杨酸、蒽地酚、氯可托龙、煤提取物、煤焦油/水杨酸、煤焦油/水杨酸/硫、去羟米松、地西泮、润滑药、氟轻松/润滑药、矿物油/蓖麻油/na lact、矿物油/花生油、石油/肉豆蔻酸异丙酯、补骨脂素、水杨酸、皂/三溴沙仑、硫柳汞/硼酸、塞来昔布、英夫单抗、环孢菌素、阿来塞普、依法利珠单抗、他克莫司、吡美莫司、PUVA、UVB、柳氮磺吡啶。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于牛皮癣性关节炎的治疗剂的非限制性例子包括下述：氨甲蝶呤、依那西普、洛芬昔布、塞来昔布、叶酸、柳氮磺吡啶、萘普生、来氟洛米、乙酸甲基强的松龙、吲哚美辛、硫酸羟氯喹、强的松、舒林酸、增强型二丙酸倍他米松、英夫单抗、氨甲蝶呤、叶酸盐、曲安缩松、扶他林、二甲基亚砜、吡罗昔康、双氯酚酸钠、酮基布洛芬、美洛昔康、甲基强的松龙、萘普酮、托美汀钠、卡泊三醇、环孢菌素、双氯酚酸钠/米索前列醇、氟轻松、硫酸葡糖胺、硫代苹果酸金钠、重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、布洛芬、利塞膦酸钠、磺胺嘧啶、硫鸟嘌呤、伐地考昔、阿来塞普、依法利珠单抗。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于再狭窄的治疗剂的非限制性例子包括下述：西罗莫司、紫杉醇、依维莫司（everolimus）、他克莫司、ABT-578、扑热息痛。
本发明的抗体或抗体部分可以与之组合用于坐骨神经痛的治疗剂的非限制性例子包括下述：重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、洛芬昔布、盐酸环苯扎林、甲基强的松龙、萘普生、布洛芬、盐酸羟可酮/扑热息痛、塞来昔布、伐地考昔、乙酸甲基强的松龙、强的松、磷酸可待因/扑热息痛、盐酸曲马多/扑热息痛、美他沙酮、美洛昔康、美索巴莫、盐酸利多卡因、双氯酚酸钠、加巴喷丁、地塞米松、卡立普多、酮咯酸氨基丁三酸醇盐、吲哚美辛、扑热息痛、地西泮、萘普酮、盐酸羟可酮、盐酸替扎尼定、双氯酚酸钠/米索前列醇、萘磺酸右丙氧芬/扑热息痛、asa/oxycod/羟可酮ter、布洛芬/二氢可待因酮bit、盐酸曲马多、依托度酸、盐酸丙氧芬、盐酸阿米替林、卡立普多/磷酸可待因/asa、硫酸吗啡、多种维生素、甲氧萘丙酸钠、柠檬酸奥芬那君、替马西泮。
其中抗体或抗原结合部分可以组合用于SLE（狼疮）的治疗剂的优选例子包括下述：NSAIDS，例如，扶他林、萘普生、布洛芬、吡罗昔康、吲哚美辛；COX2抑制剂，例如，塞来昔布、洛芬昔布、伐地考昔；抗疟药，例如，羟氯喹；类固醇，例如，强的松、强的松龙、布地奈德、地塞米松；细胞毒素，例如，硫唑嘌呤、环磷酰胺、霉酚酸酯、氨甲蝶呤；PDE4抑制剂或嘌呤合成抑制剂，例如Cellcept。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与试剂组合，所述试剂例如柳氮磺吡啶、5-氨基水杨酸、奥沙拉嗪、依木兰，以及干扰促炎细胞因子例如IL-1合成、生产或作用的试剂，例如胱天蛋白酶抑制剂，如IL-1β转换酶抑制剂和IL-1ra。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与T细胞发信号抑制剂一起使用，例如酪氨酸激酶抑制剂；或靶向T细胞活化分子的分子，例如CTLA-4-IgG或抗B7家族抗体，抗PD-1家族抗体。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与IL-11或抗细胞因子抗体组合，例如芬突利珠单抗（fonotolizumab）（抗IFNg抗体），或抗受体受体抗体，例如抗IL-6受体抗体和针对B细胞表面分子的抗体。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与下述试剂一起使用：LJP 394（阿贝莫司（abetimus）），耗尽或灭活B细胞的试剂，例如利妥希玛（抗CD20抗体），淋弗斯特（lymphostat）-B（抗BlyS抗体），TNF拮抗剂，例如，抗TNF抗体，D2E7（PCT公开号WO 97/29131；HUMIRA），CA2（REMICADE），CDP 571，TNFR-Ig 构建体（p75TNFRIgG（ENBREL）和p55TNFRIgG（Lenercept））。
本发明的药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或抗体部分。“治疗有效量”指在所需剂量和时间段有效达到所需治疗结果的量。抗体或抗体部分的治疗有效量可以由本领域技术人员来确定，且可以根据下述因素而变，例如个体疾病状态、年龄、性别、和重量，以及抗体或抗体部分在个体中引起所需应答的能力。治疗有效量也是其中治疗有利作用大于抗体或抗体部分的任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”指在所需剂量和时间段有效达到所需预防结果的量。一般地，因为预防剂量在疾病前或疾病早期时在受试者中使用，所以预防有效量将小于治疗有效量。
剂量方案可以进行调整以提供最佳所需应答（例如，治疗或预防应答）。例如，可以施用快速灌注方式，几个分份剂量可以随着时间过去而施用，或剂量可以如治疗情形的紧急状态所指示的按比例减少或增加。为了易于施用和剂量一致，以单位剂型配制肠胃外组合物是特别有利的。如本文使用的，单位剂型指适合作为单一剂量用于待治疗的哺乳动物受试者的物理上不连续单位；每个单位包含与所需药学载体结合的计算为产生所需疗效的预定量的活性化合物。关于本发明的单位剂型的详细说明由下述指示且直接取决于下述：（a）活性化合物的独特特征和待达到的具体治疗或预防作用，和（b）配合这种用于治疗个体中敏感性的活性化合物的领域固有的局限性。
关于本发明的抗体或抗体部分的治疗或预防有效量的示例性、非限制性范围是0.1－20 mg/kg，更优选地，1－10 mg/kg。应当指出剂量值可以依待减轻的状况类型和严重性而变。应进一步理解对于任何特定受试者，根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断，具体剂量方案应当随着时间过去进行调整，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，且不希望限制要求保护的组合物的范围或实践。
对于本领域技术人员将显而易见的是，本文描述的本发明方法的其他合适修改和适应是明显的，且无需背离本发明或本文公开的实施方案的范围使用合适的等同方案即可进行。尽管本发明目前已得到详细描述，但通过参考下述实施例将更清楚地理解本发明，所述实施例被包括仅用于举例说明性目的且不希望限制本发明。
实施例
实施例1：抗人IL 1α单克隆抗体的产生和分离
实施例1.1：鉴定抗人IL 1α抗体的测定
除非另外指出，贯穿实施例1使用下列测定以鉴定和表征抗人IL 1α抗体。
实施例1.1.A：ELISA
如下实施酶联免疫吸附测定以筛选结合人IL 1α的抗体。
将ELISA板（Corning Costar, Acton, MA）用50µL/孔的在磷酸缓冲盐水（PBS）中的5 µg/ml的山羊抗小鼠IgG Fc特异性（Pierce # 31170, Rockford, IL.）于4摄氏度包被过夜。将板用含有0.05% Tween-20的PBS洗涤一次。通过添加200 μL/孔封闭溶液，将板在室温封闭1小时，所述封闭溶液在PBS（BioRad #170-6404, Hercules, CA.）中稀释到2％。封闭后将板用含有0.05% Tween-20的PBS洗涤一次。
将每孔五十微升的小鼠血清或杂交瘤上清液添加到如上所述制备的ELISA板，并于室温温育1小时，所述小鼠血清或杂交瘤上清液稀释在含0.1%牛血清清蛋白（BSA）（Sigma, St. Louis, MO.）的PBS中。用含有0.05% Tween-20的PBS将孔洗涤三次。将五十微升的生物素化的重组纯化的人IL 1α变体（R110Q）添加到各孔，并于室温温育1小时，所述生物素化的重组纯化的人IL 1α变体（R110Q）在含0.1% BSA的PBS中稀释到100ng/mL。用含有0.05% Tween-20的PBS将板洗涤三次。将链霉抗生物素蛋白HRP（Pierce # 21126, Rockland, IL）以1：20000稀释在含0.1% BSA的PBS中；添加50 µL/孔，并将板于室温温育1小时。用含有0.05% Tween-20的PBS将板洗涤三次。将五十微升TMB溶液（Sigma # T0440, St. Louis, MO.）添加到各孔，并于室温温育10分钟。通过添加1N硫酸终止反应。将板在450 nm波长分光光度地读数。
实施例1.1.B：使用BIACORE技术的亲和力确定
BIACORE测定（Biacore, Inc, Piscataway, NJ）用结合、解离速率常数的动力学测量来确定抗体的亲和力。抗体与重组纯化的人IL 1α或重组纯化的人IL 1α变体（R110Q）的结合通过基于表面等离振子共振的测量，用Biacore® 3000仪器（Biacore® AB，Uppsala，瑞典）使用流动HBS-EP（10 mM HEPES [pH 7.4]，150 mM NaCl，3 mM EDTA，和0.005％表面活性剂P20）于25℃进行测定。所有化学试剂都得自Biacore® AB（Uppsala，瑞典）或否则来自如文中所述的不同来源。使用标准胺偶联试剂盒根据制造商的说明书和25 µg/ml时的程序，将在10 mM 乙酸钠（pH 4.5）中稀释的约5000 RU山羊抗小鼠IgG，（Fcγ），片段特异性多克隆抗体（Pierce Biotechnology Inc，Rockford，IL）直接固定化在CM5研究级生物传感器芯片上。生物传感器表面上未反应的部分用乙醇胺封闭。在流动室2和4中的修饰的羧甲基葡聚糖表面用作反应表面。在流动室1和3中不含山羊抗小鼠IgG的未修饰的羧甲基葡聚糖用作参考表面。对于动力学分析，使用Bioevaluation 4.0.1软件，使来源于1：1 Langmuir结合模型的速率方程式同时对所有8次注射（使用总体拟合分析）的结合和解离相拟合。纯化的抗体在HEPES缓冲盐水中进行稀释，以用于在山羊抗小鼠IgG 特异性反应表面上捕获。将作为配体捕获的小鼠抗体（25 μg/ml）以5 μl/分钟的流速注射在反应基质上。结合和解离速率常数，kon（单位M-1s-1）和koff（单位s-1）在25 μl /分钟的连续流速下进行测定。通过在10－200 nM的十个不同抗原浓度下进行动力学结合测量来获得速率常数。随后通过下式由动力学速率常数来计算小鼠抗体和重组纯化的人IL 1α或重组纯化的人IL 1α之间反应的平衡解离常数（单位M）：KD = koff/kon。将结合作为为时间的函数进行记录且计算动力学速率常数。在该测定中，可以测量快达106 M-1s-1的结合速率和慢至10-6 s-1的解离速率。
实施例1.1.C：抗人IL 1α抗体的功能活性
为了检查本发明的抗人IL 1α抗体的功能活性，将抗体用于下列测量抗体抑制IL 1α活性的能力的测定中。
实施例1.1.C1 MRC-5生物测定
MRC-5细胞系是以剂量依赖性方式响应人IL-1α而产生IL-8的人肺成纤维细胞系。MRC-5细胞最初从ATCC获得，且在10% FBS完全MEM中传代培养，并于37℃在5% CO2培养箱中生长。为了确定抗体对IL-1α的中和能力，将抗体（50 µl）添加到96孔板（终浓度1E-7至1E-15 M），并与50 µl IL-1α（终浓度50 pg/mL）于37℃、5% CO2预温育1小时。然后将浓度为1E5/ml的MRC-5细胞添加（100 µl）到所有孔，并将板于37℃在5% CO2培养箱中温育过夜。通过其抑制IL-8生产的能力确定抗体效价。通过ELISA测量人IL-8的生产。
实施例1.2：抗人IL 1α单克隆抗体的生成
如下所述获得抗人IL 1α小鼠单克隆抗体：
实施例1.2.A：用人IL 1α抗原免疫接种小鼠
在第1天时，将与完全弗氏佐剂或Immunoeasy 佐剂（Qiagen, Valencia, CA）混合的20微克重组纯化的人IL 1α（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA）皮下注射到5只6-8周龄的Balb/C、5只C57B/6小鼠和5只AJ小鼠中。在第24、38和49天时，将与不完全弗氏佐剂或Immunoeasy 佐剂混合的20微克重组纯化的人IL 1α变体皮下注射到相同小鼠中。在第84天或第112天或第144天时，用1 μg重组纯化的人IL 1α变体静脉内注射小鼠。
实施例1.2.B：杂交瘤的生成
根据Kohler, G.和Milstein 1975，Nature, 256:495所述确立的方法将从实施例1.2.A所述免疫接种的小鼠获得的脾细胞与SP2/O-Ag-14细胞以5:1的比率融合以生成杂交瘤。将融合产物以2.5x106个脾细胞/孔的密度铺平板在96-孔板中含有重氮丝氨酸和次黄嘌呤的选择培养基中。融合后7-10天，观察到肉眼可见的杂交瘤集落。通过ELISA就针对IL 1α的抗体的存在测试来自含有杂交瘤集落的每个孔的上清液（如实施例1.1.A中所述）。然后将展示IL 1α特异性活性的上清液在针对IL-8的MRC-5生物测定中就中和IL 1α的能力进行测试（如实施例1.1.C中所述）。
实施例1.2.C：抗人IL 1α单克隆抗体的鉴定和表征
通过有限稀释按比例增加和克隆生产结合IL 1α的抗体的杂交瘤，所述抗体根据实施例1.2.B和1.2.C生成，且能够特异性结合IL 1α，且特别是在MRC-5生物测定中IC50值为5nM或小于5nM的那些。
将杂交瘤细胞扩增（expand）到含有10%低IgG胎牛血清（Hyclone #SH30151, Logan, UT）的培养基中。平均起来，如Harlow, E.和Lane, D. 1988 “Antibodies: A Laboratory Manual”所述，通过A蛋白亲和层析收获、浓缩和纯化250 mL每种杂交瘤上清液（衍生自克隆群体）。使用如实施例1.1.C所述的MRC-5生物测定，测定纯化的mAbs抑制IL 1α活性的能力。表7显示来自MRC-5生物测定的关于抗IL 1α mAb 3D12的IC50值。
实施例1.2.D：确定每个鼠抗-人IL 1α mAb的可变区的氨基酸序列
对于每个氨基酸序列确定，遵从生产商的说明书通过离心分离约10 x 106个杂交瘤细胞，且进行加工以用Trizol（Gibco BRL/Invitrogen, Carlsbad, CA.）分离总RNA。根据生产商的说明书，使用SuperScript第一链合成系统（First-Strand Synthesis System）(Invitrogen, Carlsbad, CA)使总RNA进行第一链DNA合成。将寡脱氧胸苷酸（Oligo(dT)）用于引发第一链合成以选择聚腺苷酸+（poly(A)+）RNA。然后用设计用于扩增鼠免疫球蛋白可变区的引物（Ig-Primer Sets, Novagen, Madison, WI）通过PCR扩增第一链cDNA产物。在琼脂糖凝胶上分离PCR产物、切割、纯化且然后用TOPO克隆试剂盒亚克隆到pCR2.1-TOPO载体（Invitrogen, Carlsbad, CA）中，并转化到TOP10化学制成的感受态（chemically competent）大肠杆菌（Invitrogen, Carlsbad, CA）中。在转化体上进行集落PCR以鉴定含有插入片段的克隆。使用QIAprep小量制备试剂盒（Miniprep kit）（Qiagen, Valencia, CA）从含有插入片段的克隆分离质粒DNA。使用M13正向和M13反向引物（Fermentas Life Sciences, Hanover MD）在两条链上对质粒中的插入片段进行测序，以确定可变重链和可变轻链DNA序列。表5描述了实施例1.2.C中所述的抗IL 1α单克隆抗体的可变重链和可变轻链序列。
实施例2：重组抗人IL 1α抗体
实施例2.1：重组嵌合抗人IL 1α抗体的构建和表达
通过在细菌中的同源重组，将编码鼠抗-人IL 1α单克隆抗体3D12的重链恒定区的DNA用编码含有2个铰链区氨基酸突变的人IgG1恒定区的cDNA片段替换。这些突变是在位置234（EU编号）的亮氨酸至丙氨酸的改变和在位置235的亮氨酸至丙氨酸的改变（Lund等人, 1991, J. Immunol., 147:2657）。每个这些抗体的轻链恒定区被人κ恒定区替换。通过连接到pBOS表达质粒中的嵌合重链和轻链cDNAs的共转染在COS细胞中瞬时表达全长嵌合抗体（Mizushima和Nagata, Nucleic Acids Research 1990, Vol 18, pg 5322）。通过A蛋白琼脂糖层析纯化含有重组嵌合抗体的细胞上清液，且通过添加酸缓冲液洗脱结合的抗体。将抗体中和且透析到PBS中。
将编码嵌合3D12（如上所述）的重链cDNA与3D12嵌合轻链cDNA共转染到（两者都连接到pBOS载体中）COS细胞中。通过A蛋白琼脂糖层析纯化含有重组嵌合抗体的细胞上清液，且通过添加酸缓冲液洗脱结合的抗体。将抗体中和且透析到PBS中。然后测试纯化的嵌合抗-人IL 1α单克隆抗体抑制IL 1α诱导的MRC-5细胞产生IL-8的能力，如实施例1.1.C2和1.1.C3所述。
实施例2.2：人源化抗人IL 1α抗体的构建和表达
实施例2.2.1：人抗体构架的选择
使用Vector NTI软件，将每个鼠可变重链和可变轻链基因序列（如表5中所述）分别与44个人免疫球蛋白种系可变重链或46个种系可变轻链序列（得自在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.html的NCBI Ig Blast网站）进行比对。
人源化基于氨基酸序列同源性、CDR簇分析、表达的人抗体中的使用频率和关于人抗体晶体结构的可用信息。考虑对抗体结合、VH-VL配对和其他因素的可能作用，在鼠和人构架残基不同的地方将鼠残基突变为人残基，有少许例外。基于人种系抗体序列或其亚组的分析设计另外的人源化策略，所述人种系抗体序列或其亚组与鼠抗体可变区的实际氨基酸序列具有高程度的同源性，即，序列相似性。
将同源性建模用于鉴定对于鼠抗体序列独特的残基，预测所述残基对于抗体结合部位（CDRs）的结构是至关重要的。同源性建模是计算方法，由此生成蛋白的近似三维坐标。初始坐标的来源和其进一步改善的指导是第二个蛋白，即参考蛋白，所述参考蛋白的三维坐标是已知的，且其序列与第一个蛋白的序列相关。两个蛋白序列中的关系用于生成参考蛋白和需要其坐标的蛋白，即靶蛋白之间的对应性。参考和靶蛋白的一级序列进行比对，其中两个蛋白相同部分的坐标直接从参考蛋白转移到靶蛋白。两个蛋白的错配部分，例如来自残基突变、插入或缺失的坐标从一般的结构模版构建，且能量进行改善以确保与已经转移的模型坐标的一致性。这个计算的蛋白结构可进一步改善或直接用于建模研究中。在该描述中应当非常清楚，模型结构的质量由参考和靶蛋白相关的观点的正确性和构建序列比对的精确性确定。
对于鼠抗体序列3D12，使用BLAST搜索和目视检查的组合来鉴定适当的参考结构。参考和靶氨基酸序列之间25％的序列同一性被认为是尝试履行同源性建模所必需的最低限度。手工构建序列比对，且使用程序Jackal生成模型坐标（参见Petrey, D., Xiang, Z., Tang, C.L., Xie, L., Gimpelev, M., Mitros, T., Soto, C.S., Goldsmith-Fischman, S., Kernytsky, A., Schlessinger, A.等人，2003. Using multiple structure alignments, fast model building, and energetic analysis in fold recognition and homology modeling. Proteins 53 (Suppl. 6): 430–435）。
选择的抗体的鼠和人构架区的一级序列共享相当大同一性。不同的残基位置是用于在人源化序列中包括鼠残基以维持鼠抗体观察到的结合能力的候选物。手工构建在人和鼠序列之间不同的构架残基列表。
给定构架残基将影响抗体的结合性质的可能性依赖于其与CDR残基的接近度。因此，使用模型结构，在鼠和人序列之间不同的残基根据其离CDRs中任何原子的距离分级。落在任何CDR原子的4.5 Å内的那些残基被鉴定为最重要的，且被推荐为用于在人源化抗体中保持鼠残基（即，回复突变）的候选物。
实施例2.2.2：抗人IL 1α mAb 3D12的人源化
将表5中所述来自抗IL-1α抗体3D12的重链CDR序列如下在计算机芯片上（in silico）嫁接到人VH7-4.1和JH6上：（1）将第一个位置上的Q突变为E，以防止N末端焦谷氨酸形成。（2）在这些提议的构建体中没有发现N联糖基化模式（N-{P}-S/T）。（3）将五个回复突变（V2I、G44D、W47R、G49A和Y91F）引入大多数人h3D12VH.1序列中，以产生h3D12VH.1a序列。（4）可以将上面公开的一个、两个、三个、四个或所有五个回复突变引入h3D12VH.1以维持3D12 MAb在人源化后对人IL-1α的亲和力。（5）在后续的亲和力成熟过程中可以从h3D12VH.1a去除这五个回复突变中的一些。
可替代地，将表5中所述来自抗IL-1α抗体3D12的重链CDR序列如下在计算机芯片上（in silico）嫁接到人VH7-4.1和JH6上：（1）将第一个位置上的Q突变为E，以防止N末端焦谷氨酸形成。（2）引入三个VH1共有残基I75T、R82bS和D85E。作为D85E改变的结果，与3D12 VH的同一性也增加。（3）将VH1-2的多态性位置69和88分别保持为M和S，保持与VH1共有序列一致。（4）在这些提议的构建体中没有发现N联糖基化模式（N-{P}-S/T）。（5）将八个回复突变（V2I、G44D、W47R、G49A、V67F、M69F、R71L和Y91F）引入大多数人h3D12VH.2序列中，以产生h3D12VH.2a序列。（6）这八个回复突变可能并不都是维持3D12 MAb在人源化后对人IL-1α的亲和力所必需的。（7）在后续的亲和力成熟过程中可以从h3D12VH.2a去除这八个回复突变中的一些。
将表5中所述来自抗IL-1α抗体3D12的轻链CDR序列在计算机芯片上（in silico）嫁接到人1-33/O18和Jk2或人1-33/O18和Jk4上，具有额外的F73L Vk1共有改变。在这些提议的构建体中没有发现N联糖基化模式（N-{P}-S/T）。在3D12轻链的CDR1中有罕见的半胱氨酸。这个半胱氨酸依然存在于人源化序列中。如果需要，可以在后续的亲和力成熟过程中从h3D12Vk.1、1a、1b、2、2a、或2b中去除CDR中的这个半胱氨酸。有六个回复突变（D1N、S7T、A43T、P44V、F71Y和Y87F）可以引入大多数人h3D12Vk.1序列中。因此，h3D12Vk.1a和2a不具有前两个回复突变。然而，h3D12Vk.1b和2b具有所有六个回复突变。在后续的h3D12VH.1a、1b、2a或2b亲和力成熟过程中可以去除这些回复突变中的一些。
表6是本发明的人源化抗-hIL 1α抗体的VH和VL区氨基酸序列的列表。
表6：人源化3D12 VH/VL变体氨基酸序列的列表
实施例2.2.3：人源化抗体的构建
使用寡核苷酸从头构建上述在计算机芯片上（In silico）构建的人源化抗体。对于每个可变区cDNA，设计各60-80个核苷酸的6个寡核苷酸以在每个寡核苷酸的5’和/或3’末端相互重叠20个核苷酸。在退火反应中，组合所有6个寡核苷酸，煮沸，且在dNTPs的存在下退火。然后添加DNA聚合酶I，大（克列诺（Klenow））片段（New England Biolabs #M0210, Beverley, MA.）以补平重叠寡核苷酸之间的约40bp缺口。然后使用两个最外面的引物进行PCR以扩增整个可变区基因，所述两个最外面的引物含有与修饰的pBOS载体中的多克隆位点互补的突出端序列（Mizushima, S.和Nagata, S. (1990) Nucleic acids Research Vol 18, No. 17）。在琼脂糖凝胶上分离源自每个cDNA组合（assembly）的PCR产物，且切除和纯化对应于预测的可变区cDNA大小的条带。通过在细菌中的同源重组将重可变区符合读框地插入编码含有2个铰链区氨基酸突变的人IgG1恒定区的cDNA片段上。这些突变是在位置234（EU编号）的亮氨酸至丙氨酸的改变和在位置235的亮氨酸至丙氨酸的改变（Lund等人, 1991, J. Immunol., 147:2657）。通过同源重组将轻链可变区与人κ恒定区一起符合读框地插入。分离细菌集落且提取质粒DNA；对cDNA插入片段进行整体测序。将对应于每个抗体的正确人源化重链和轻链共转染到COS细胞中以瞬时生产全长人源化抗-人IL 1α抗体。对于13C5，将含有13C5重链嫁接的cDNA和13C5轻链嫁接的cDNA的pBOS载体共转染到COS细胞中。通过A蛋白琼脂糖层析纯化含有重组嵌合抗体的细胞上清液，且通过添加酸缓冲液洗脱结合的抗体。中和抗体并将其透析到PBS中。人源化抗体描述于表7。
表7. 另外的h3D12 VH/VL变体的氨基酸序列表
Figure 639307DEST_PATH_IMAGE013
实施例2.2.3：人源化IL-1α抗体的表征
使用如实施例1.1.C中所述的MRC-5生物测定确定纯化的人源化抗体抑制IL-1α活性的能力。使用如实施例1.1.B中所述的表面等离振子共振（Biacore®）测量测定人源化抗体与重组人IL 1α的结合亲和力。表8显示来自MRC-5生物测定的IC50值和表5中所述人源化抗体对人IL 1α的亲和力。
表8. 人源化IL-1α抗体的中和能力和结合亲和力
*通过MRC-5生物测定测量的；#通过表面等离振子共振（Biacore）测量的
本发明将分子生物学领域中众所周知的技术整体并入作为参考。这些技术包括，但不限于，在下述出版物中描述的技术：
Figure 248460DEST_PATH_IMAGE015
尽管上文已描述了大量的实施方案和特征，但本领域技术人员将理解，在不背离所附的权利要求中限定的本公开内容或本发明的情况下，可以对所述实施方案和特征进行修改和变化。

Claims (52)

1.包含可变重链多肽和可变轻链多肽的结合蛋白，其中所述可变重链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 37，SEQ ID No.38，SEQ ID No.39，SEQ ID No.40，SEQ ID No.48，SEQ ID No.50，SEQ ID No.52和SEQ ID No.54；且所述可变轻链多肽包含选自下述的氨基酸序列：SED ID No.41，SEQ ID No.42，SEQ ID No.43，SEQ ID No.44，SEQ ID No.45，SEQ ID No.46，SEQ ID No.47，SEQ ID No.49，SEQ ID No.51，SEQ ID No.53和SEQ ID No.55；其中所述结合蛋白能够结合人IL-1α。
2.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述的可变重链多肽和可变轻链多肽：SEQ ID NO.:38和SEQ ID NO.:44，SEQ ID NO.:40和SEQ ID NO.:44，SEQ ID NO.:48和SEQ ID NO.:49，SEQ ID NO.:50和SEQ ID NO.:51，SEQ ID NO.:52和SEQ ID NO.:53，以及 SEQ ID NO.:54和SEQ ID NO.:55。
3.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白选自：免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR嫁接的抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、双特异性抗体、F（ab’）2和Fv。
4.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述重链免疫球蛋白恒定区：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、以及人IgA恒定结构域。
5.根据权利要求1的结合蛋白，另外包含重链恒定区，所述重链恒定区具有选自SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3的氨基酸序列。
6.根据权利要求1的结合蛋白，另外包含轻链恒定区，所述轻链恒定区具有选自SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5的氨基酸序列。
7.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够调节人IL-1α的生物学功能。
8.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够中和人IL-1α。
9.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白对所述靶具有的结合速率常数（Kon）选自：至少约102M-1s-1；至少约103M-1s-1；至少约104M-1s-1；至少约105M-1s-1；以及至少约106M-1s-1，如通过表面等离振子共振测量的。
10.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白对所述靶具有的解离速率常数（Koff）选自：至多约10-3s-1；至多约10-4s-1；至多约10-5s-1；以及至多约10-6s-1，如通过表面等离振子共振测量的。
11.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白对所述靶具有的解离常数（KD）选自：至多约10-7 M；至多约10-8 M；至多约10-9 M；至多约10-10 M；至多约10-11 M；至多约10-12 M；以及至多10-13 M。
12.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述结合蛋白对IL-1α具有的解离常数（KD）选自：1.34x10-9 M；1.35x10-9 M；2.09x10-9 M；2.8x10-11 M；1x10-11 M；3.1x10-11 M；3.2x10-11 M；以及3.3x10-11 M。
13.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白另外包含选自下述的试剂：免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒剂。
14.根据权利要求13的结合蛋白，其中所述试剂是选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记、和生物素的显像剂。
15.根据权利要求13的结合蛋白，其中所述显像剂是选自下述的放射性标记：3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho、和153Sm。
16.根据权利要求13的结合蛋白，其中所述试剂是选自抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素、和细胞凋亡剂的治疗剂或细胞毒剂。
17.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有人糖基化模式。
18.根据权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白是结晶结合蛋白。
19.根据权利要求18的结合蛋白，其中所述结晶结合蛋白是无载体的药学控释结晶结合蛋白。
20.根据权利要求19的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有比所述抗体构建体的可溶性配对物更长的体内半衰期。
21.根据权利要求19的结合蛋白，其中所述结合蛋白保留生物学活性。
22.分离的核酸，其编码根据权利要求1中所述的结合蛋白氨基酸序列。
23.载体，其含有编码根据权利要求1中所述的结合蛋白氨基酸序列的分离的核酸。
24.根据权利要求23的载体，其中所述载体选自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV和pBJ。
25.宿主细胞，其含有根据权利要求23所述的载体。
26.根据权利要求25的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
27.根据权利要求26的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
28.根据权利要求25的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
29.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。
30.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞、鸟类细胞和昆虫细胞的动物细胞。
31.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
32.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述宿主细胞是COS。
33.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。
34.根据权利要求33的宿主细胞，其中所述酵母细胞是啤酒糖酵母。
35.根据权利要求28的宿主细胞，其中所述宿主细胞是昆虫Sf9细胞。
36.产生能够结合IL-1α的蛋白的方法，包括在足以生产能够结合IL-1α的结合蛋白的条件下，在培养基中培养权利要求25中所述的宿主细胞。
37.根据权利要求36的方法生产的蛋白。
38.释放结合蛋白的组合物，所述组合物包含：
（a）制剂，其中所述制剂包含根据权利要求16中所述的结晶结合蛋白，以及成分；以及
（b）至少一种聚合载体。
39.根据权利要求38的组合物，其中所述聚合载体是选自下述的一种或多种的聚合物：聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚（羟丙基）甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、血纤蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化多糖、掺合物及其共聚物。
40.根据权利要求38的组合物，其中所述成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-β-环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
41.治疗哺乳动物的方法，包含步骤：将有效量的根据权利要求38中所述的组合物施用给哺乳动物。
42.药物组合物，包含权利要求1的结合蛋白以及药学可接受的载体。
43.根据权利要求42的药物组合物，其中所述药学可接受的载体起佐剂的作用，用于增加所述结合蛋白的吸收、或分散。
44.根据权利要求43的药物组合物，其中所述佐剂是透明质酸酶。
45.根据权利要求42的药物组合物，另外包含至少一种另外的用于治疗其中IL-1α活性是有害的病症的治疗剂。
46.根据权利要求45的药物组合物，其中所述另外的试剂选自：治疗剂，显像剂，细胞毒剂，血管发生抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；粘附分子阻断剂；抗细胞因子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；环孢菌素；雷帕霉素；FK506；可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂，麻醉药，非类固醇消炎药（NSAID），止痛剂，麻醉剂，镇静剂，局部麻醉剂，神经肌肉阻断剂，抗微生物剂，抗牛皮癣剂，皮质类固醇，促蛋白合成类固醇，促红细胞生成素，免疫接种，免疫球蛋白，免疫抑制剂，生长激素，激素替代药物，放射性药物，抗抑郁药，抗精神病药，刺激剂，哮喘药物治疗，β激动剂，吸入类固醇，口服类固醇，肾上腺素或类似物，细胞因子，和细胞因子拮抗剂。
47.减少人IL-1α活性的方法，包括将人IL-1α与权利要求1的结合蛋白接触，从而减少人IL-1α活性。
48.在患有病症的人受试者中减少人IL-1α活性的方法，在所述病症中，IL-1α活性是有害的，该方法包括：给人受试者施用权利要求1的结合蛋白，从而减少在人受试者中的人IL-1α活性。
49.治疗受试者的疾病或病症的方法，在所述疾病或病症中，IL-1α活性是有害的，其通过下述实现：给受试者施用权利要求1的结合蛋白，从而实现治疗。
50.权利要求49的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、骨关节炎、青少年慢性关节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、全身性红斑狼疮、Crohn氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、甲状腺炎、哮喘、变应性疾病、牛皮癣、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、与器官移植相关的急性或慢性免疫性疾病、肉状瘤病、动脉粥样硬化、弥散性血管内凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、肾病综合征、慢性疲乏综合征、韦格纳氏肉芽肿病、过敏性紫癜、肾显微血管炎、慢性活动性肝炎、葡萄膜炎、脓毒性休克、中毒性休克综合征、脓毒病综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合征、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、中风、原发性胆汁性肝硬变、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏病、散发性多腺性I型缺乏和多腺性II型缺乏、Schmidt氏综合征、成人（急性）呼吸窘迫综合征、秃头、斑秃、血清反应阴性关节病、关节病、Reiter氏病、牛皮癣性关节病、溃疡性结肠炎性关节病、肠病性滑膜炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病、脊椎关节病、动脉粥样化疾病/动脉硬化、特应性变态反应、自身免疫性大疱性疾病、寻常天疱疮、落叶状天疱疮、类天疱疮、线性IgA疾病、自身免疫性溶血性贫血、Coombs阳性溶血性贫血、获得性恶性贫血、青少年性恶性贫血、肌痛脑炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮肤念珠菌病、巨细胞性动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合征、获得性免疫缺陷相关病、乙型肝炎、丙型肝炎、常见的各种免疫缺陷（常见的可变低丙种球蛋白血症）、扩张型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、过早卵巢衰竭、纤维化肺疾病、隐原性纤维化肺泡炎、炎症后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病相关性间质性肺病、混合型结缔组织病相关性肺病、全身性硬皮病相关性间质性肺病、类风湿性关节炎相关性间质性肺病、全身性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多肌炎相关性肺病、Sjögren氏病相关性肺病、强直性脊柱炎相关性肺病、脉管炎性弥散性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药物诱导的间质性肺病、纤维化、放射性纤维化、闭塞性细支气管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴细胞性浸润性肺病、传染后间质性肺病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎（传统自身免疫性或狼疮样肝炎）、2型自身免疫性肝炎（抗LKM抗体肝炎）、自身免疫介导的低血糖、具有黑棘皮症的B型胰岛素耐受性、甲状旁腺机能减退、与器官移植相关的急性免疫性疾病、与器官移植相关的慢性免疫性疾病、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、1型牛皮癣、2型牛皮癣、特发性白细胞减少、自身免疫性嗜中性白细胞减少症、肾脏病NOS、肾小球肾炎、肾显微血管炎、莱姆病、盘状红斑狼疮、特发性男性不育症或NOS、精子自身免疫性、多发性硬化（所有亚型）、交感性眼炎、结缔组织病继发的肺动脉高压、Goodpasture氏综合征、结节性多动脉炎的肺表现、急性风湿热、类风湿性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、Sjörgren氏综合征、Takayasu氏病/动脉炎、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少症、自身免疫性甲状腺病、甲状腺机能亢进、甲状腺肿性自身免疫性甲状腺功能减退（Hashimoto氏病）、萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退、原发性粘液性水肿、晶状体性葡萄膜炎、原发性血管炎、白癜风急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬变、酒精诱导的肝损伤、胆汁郁积、特应性肝病、药物诱导的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、变态反应和哮喘、B群链球菌（GBS）感染、精神障碍（例如，抑郁和精神分裂症）、Th2型和Th1型介导的疾病、急性和慢性痛（不同形式的疼痛）、以及癌症例如肺、乳腺、胃、膀胱、结肠、胰、卵巢、前列腺和直肠癌以及造血恶性肿瘤（白血病和淋巴瘤）、无β脂蛋白血症、手足发绀、急性和慢性寄生或感染过程、急性白血病、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、急性或慢性细菌感染、急性胰腺炎、急性肾功能衰竭、腺癌、心房异位搏动、AIDS痴呆复征、酒精诱导的肝炎、变应性结膜炎、过敏性接触性皮炎、变应性鼻炎、同种异体移植物排斥、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎缩性侧索硬化、贫血、心绞痛、前角细胞变性、抗cd3治疗、抗磷脂综合征、抗受体超敏反应、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、高动脉压、动脉硬化、动静脉瘘、共济失调、心房纤维颤动（持续性或阵发性）、心房扑动、房室传导阻滞、B细胞淋巴瘤、骨移植物排斥、骨髓移植（BMT）排斥、束支传导阻滞、Burkitt氏淋巴瘤、烧伤、心律失常、心脏震晕综合征、心脏肿瘤、心肌病、心肺分流术炎症应答、软骨移植排斥、小脑皮质变性、小脑病症、紊乱性或多源性房性心动过速、化学疗法相关病症、慢性髓细胞性白血病（CML）、慢性酒精中毒、慢性炎性病理学、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性阻塞性肺部疾病（COPD）、慢性水杨酸盐中毒、结肠直肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、接触性皮炎、肺源性心脏病、冠状动脉疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培养物阴性脓毒病、囊性纤维化、细胞因子疗法相关病症、拳击员痴呆、脱髓鞘病、登革出血热、皮炎、皮肤病学状况、多尿症、糖尿病、糖尿病性动脉硬化性疾病、弥漫性Lewy小体病、扩张性充血性心肌病、基底神经节病症、中年唐氏综合征、由阻断CNS多巴胺受体的药物诱导的药物诱导的运动障碍、药物敏感性、湿疹、脑脊髓炎、心内膜炎、内分泌病、会厌炎、EB病毒感染、红斑性肢痛病、锥体外束和小脑病症、家族性嗜血性淋巴组织细胞增多症、胎儿胸腺移植排斥、Friedreich氏共济失调、功能性外周性动脉病症、真菌性脓毒病、气性坏疽病、胃溃疡、肾小球肾炎、任何器官或组织的移植物排斥、革兰氏阴性脓毒病、革兰氏阳性脓毒病、由于细胞内生物的肉芽肿、毛细胞性白血病、Hallerrorden-Spatz病、hashimoto氏甲状腺炎、枯草热、心脏移植排斥、血色素沉着症、血液透析、溶血性尿毒性综合征/血栓溶解性血小板减少性紫癜、出血、肝炎（A）、希氏束心律失常、HIV感染/HIV神经病、何杰金氏病、运动过度性运动障碍、超敏反应、超敏感性肺炎、高血压、运动机能减退性运动障碍、下丘脑-垂体-肾上腺轴评价、特发性Addison氏病、特发性肺纤维化、抗体介导的细胞毒性、虚弱、婴儿型脊髓性肌萎缩、主动脉炎症、流行性感冒a、电离辐射照射、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、缺血性再灌注损伤、缺血性中风、青少年类风湿性关节炎、青少年脊髓性肌萎缩、卡波西氏肉瘤、肾移植排斥、军团杆菌、利什曼病、麻风病、皮层脊髓系统损伤、脂肪水肿、肝移植排斥、淋巴水肿、疟疾、恶性淋巴瘤、恶性组织细胞增多症、恶性黑素瘤、脑膜炎、脑膜炎球菌血症、代谢性/特发性、偏头痛、线粒体多系统病症、混合型结缔组织病、单克隆丙种球蛋白病、多发性骨髓瘤、多系统变性（Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager和Machado-Joseph）、重症肌无力、鸟胞内分支杆菌、结核分支杆菌、骨髓异常增生综合征、心肌梗死、心肌缺血性病症、鼻咽癌、新生儿慢性肺病、肾炎、肾变病、神经变性疾病、神经原性I肌萎缩、嗜中性粒细胞减少性发烧、非何杰金淋巴瘤、腹主动脉及其分支闭塞、闭塞性动脉病症、okt3治疗、睾丸炎/附睾炎、睾丸炎/输精管切除术逆转操作、器官巨大症、骨质疏松症、胰移植排斥、胰癌、恶性肿瘤的肿瘤相关综合征/高钙血症、甲状旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性动脉粥样硬化疾病、外周血管病症、腹膜炎、恶性贫血、卡氏肺囊虫性肺炎、肺炎、POEMS综合征（多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、和皮肤变化综合征）、灌注后综合征、泵后综合征、MI心切开术后综合征、先兆子痫、进行性核上麻痹、原发性肺动脉高压、放射治疗、Raynaud氏现象和疾病、Raynoud氏病、Refsum氏病、常规狭窄QRS心动过速、肾血管性高血压、再灌注损伤、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小体型老年性痴呆、血清反应阴性关节病、中风、镰状细胞贫血、皮肤同种异体移植物排斥、皮肤变化综合征、小肠移植排斥、实体瘤、特殊心律失常、脊髓性共济失调、脊髓小脑变性、链球菌肌炎、小脑结构损伤、亚急性硬化性全脑炎、晕厥、心血管系统梅毒、全身性过敏反应、全身炎症反应综合征、全身发作性青少年类风湿性关节炎、T细胞或FAB ALL、毛细血管扩张、血栓闭塞性脉管炎、血小板减少症、毒性、移植物、创伤/出血、III型超敏反应、IV型超敏反应、不稳定心绞痛、尿毒症、尿脓毒病、荨麻疹、心脏瓣膜疾病、静脉曲张、血管炎、静脉疾病、静脉血栓形成、心室纤维性颤动、病毒和真菌感染、病毒性脑炎/无菌性脑膜炎、病毒相关性噬红细胞综合征、Wernicke-Korsakoff综合征、Wilson氏病、任何器官或组织的异种移植排斥、急性冠状动脉综合征、急性特发性多神经炎、急性炎性脱髓鞘性多发性神经根性神经病、急性缺血、成人Still氏病、斑秃、过敏反应、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、动脉硬化、特应性湿疹、特应性皮炎、自身免疫性皮炎、与链球菌感染相关的自身免疫性病症、自身免疫性肠病、自身免疫性听力丧失、自身免疫性淋巴细胞增生综合征（ALPS）、自身免疫性心肌炎、自身免疫性过早卵巢衰竭、睑炎、支气管扩张、大疱性类天疱疮、心血管病、灾变性抗磷脂综合征、乳糜泻、颈椎关节强硬、慢性缺血、疤痕性类天疱疮、具有多发性硬化风险的临床孤立综合征（CIS）、结膜炎、儿童期发病性精神病、慢性阻塞性肺部疾病（COPD）、泪囊炎、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、糖尿病、椎间盘突出、盘脱垂、药物诱导的免疫性溶血性贫血、心内膜炎、子宫内膜异位、眼内炎、巩膜外层炎、多形性红斑、重型多形性红斑、妊娠期类天疱疮、Guillain-Barré综合征（GBS）、枯草热、Hughes综合征、特发性帕金森氏病、特发性间质性肺炎、IgE介导的变态反应、免疫性溶血性贫血、内含体肌炎、传染性眼炎性疾病、炎性脱髓鞘疾病、炎性心脏病、炎性肾病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、Kussmaul病或Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、网状青斑、黄斑变性、显微镜下多脉管炎、Morbus Bechterev、运动神经元病症、粘膜类天疱疮、多器官衰竭、重症肌无力、脊髓异常增生综合征、心肌炎、神经根障碍、神经病、非甲非乙型肝炎、视神经炎、骨质溶解、少关节的JRA、周围动脉闭塞性疾病（PAOD）、周围血管疾病（PVD）、外周动脉疾病（PAD）、静脉炎、结节性多动脉炎（或结节性动脉外膜炎）、多软骨炎、风湿性多肌痛、白发症、多关节的JRA、多发性内分泌缺陷综合征、多肌炎、风湿性多肌痛（PMR）、泵后综合征、原发性帕金森综合征、前列腺炎、单纯红细胞再生障碍、原发性肾上腺机能不足、复发型视神经脊髓炎、再狭窄、风湿性心脏病、SAPHO（滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎）、硬皮病、继发性淀粉样变性、休克肺、巩膜炎、坐骨神经痛、继发性肾上腺机能不足、聚硅氧烷相关的结缔组织病、Sneddon-Wilkinson皮肤病、关节强硬性脊椎炎、Stevens-Johnson综合征（SJS）、全身性炎症应答综合征、颞动脉炎、弓形体视网膜炎、中毒性表皮坏死松解、横贯性脊髓炎、TRAPS（肿瘤坏死因子受体，I型变态反应，II型糖尿病、荨麻疹、普通型间质性肺炎（UIP）、脉管炎、春季结膜炎、病毒性视网膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada综合征（VKH综合征）、湿黄斑变性和伤口愈合。
51.治疗患有病症的患者的方法，在所述病症中，IL-1α是有害的，所述方法包括在施用第二种试剂之前、同时或之后，施用根据权利要求1的结合蛋白的步骤，其中，所述第二种试剂选自：TNF拮抗剂；TNF受体的可溶性片段；ENBREL；TNF酶拮抗剂；TNF转换酶（TACE）抑制剂；毒蕈碱性受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素γ； perfenidone；化疗剂，氨甲蝶呤；来氟洛米；西罗莫司（sirolimus）（雷帕霉素）或其类似物CCI-779；COX2或cPLA2抑制剂；NSAIDs；免疫调谐剂；p38抑制剂；TPL-2，MK-2和NFkB抑制剂；布地萘德；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素；柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂肪加氧酶抑制剂；美沙拉秦；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1β抗体；抗IL-6抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF的抗体或激动剂；CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配体的抗体；FK506；雷帕霉素；霉酚酸酯；布洛芬；强的松龙；磷酸二酯酶抑制剂；腺苷激动剂；抗凝剂；补体抑制剂；肾上腺素能药；IRAK、NIK、IKK、p38、或MAP激酶抑制剂；IL-1β转换酶抑制剂；TNFα转换酶抑制剂；T细胞发信号抑制剂；金属蛋白酶抑制剂；6-巯基嘌呤；血管紧张素转换酶抑制剂；可溶性细胞因子受体；可溶性p55 TNF受体；可溶性p75 TNF受体；sIL-1RI；sIL-1RII；sIL-6R；抗炎细胞因子；IL-4；IL-10；IL-11；和TGFβ。
52.根据权利要求49的方法，其中经由选自下述的至少一种模式进行给受试者的施用：肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注、阴道、直肠、口腔含化、舌下、鼻内、和经皮。
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