CN109311972A - 用于治疗乳糜泻、非乳糜泻麸质敏感和难治性乳糜泻的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于治疗炎性病症，特别是乳糜泻、难治性乳糜泻和非乳糜泻麸质敏感的方法和药物组合物。

Description

用于治疗乳糜泻、非乳糜泻麸质敏感和难治性乳糜泻的方法 和组合物

技术领域

本文公开的组合物和方法涉及炎性病症，特别是乳糜泻、难治性乳糜泻和非乳糜泻麸质敏感的治疗。

背景技术

乳糜泻(CD)是遗传易感个体中由食用麸质所触发的系统性自身免疫疾病(Green和Cellier,2007)。CD导致衰弱症状，包括肠粘膜损伤和潜在的严重医疗并发症。

CD是第一种具有鉴定的抗原即麸质的自身免疫疾病，麸质是一些最常见的谷物(例如小麦、大麦、黑麦)中存在的主要蛋白质。人类缺乏完全消化麸质的酶，在正确的遗传背景下，在转谷氨酰胺酶(tTG)发生脱氨基作用后麸质会在肠和其他器官中触发炎症和自身免疫。CD呈现多种形式，这为治疗带来了挑战。

CD是唯一没有批准用药的常见自身免疫病症。目前，唯一可用的CD控制策略是终生完全回避麸质。即使并非不可能，无处不在的麸质也使得完全回避非常困难。仅仅50mg/天(正常饮食中的含量大于10g/天)就会触发小肠中T细胞的活化并引起肠粘膜损伤(Catassi等人,2007)。因此，超过50％的接受无麸质饮食(GFD)的CD患者仍旧出现活动性疾病以及肠免疫活化和粘膜萎缩(Lee等人,2003；Cranney等人,2007；Hopper等人,2007；Midhagen等人,2003)。大约20％的被诊断患有乳糜泻的个体具有持续症状或贫血，有或没有阳性组织型转谷氨酰胺酶抗体(指示乳糜泻的分子标记物)。

非反应性乳糜泻(NRCD)的定义是存在CD特有的持续体征、症状或实验室异常，尽管持续6至12个月未食用麸质(Rubio-Tapia等人,2013)。目前还没有有效的NRCD治疗方法。

难治性乳糜泻(RCD)的特征在于CD中持续暴露于麸质的罕见但特异性并发症，该并发症影响大约1％的乳糜泻患者(Lebwohl等人,2013)。RCD的特征在于在未食用麸质和存在小肠异常肠上皮内淋巴细胞(IEL)的情况下严重的肠粘膜萎缩和胃肠道症状(Verbeek等人,2008；vanWanrooij等人,2014)。小肠中20％的异常IEL这一截断分割RCD I型(<20％)和RCD II型(RCD-II，20％或更高)。虽然RCD-I可以用类固醇对症治疗，但是对于RCD-I和RCD-II没有批准或治愈性治疗，并且RCD-II在50％的病例中演变成显性淋巴瘤，预后非常差(Nijeboer等人,2015)。

肠病相关T细胞淋巴瘤(EATL)是一种高级系统性T细胞淋巴瘤，几乎完全被视为RCD-II的并发症(Nijeboer等人,2015)。诊断包括成像和组织学，以显示在诸如淋巴结或其他器官的上皮外位置存在恶性T细胞。EATL的治疗依赖于手术切除和化学疗法，但预后非常差，5年存活率低于20％(Nijeboer等人,2015)。

没有典型CD血清学、组织学或遗传标记物且没有经历与小麦过敏相关的免疫球蛋白E(IgE)血清学反应的个体也报告了一些响应于小麦摄取的CD相关症状。已提出术语非乳糜泻麸质敏感(NCGS)来指代这些患者所报告的疾患范围(Lundin和Alaedini,2012)。非乳糜泻麸质敏感目前被理解为在已排除CD和小麦过敏的个体中与以下经历相关的疾患：摄取含有小麦、黑麦和大麦的食品后响应性地出现各种症状，并且在从饮食中去除这些食品后症状消退(Lundin和Alaedini,2012)。

因此，迫切需要针对CD、NRCD、RCD、EATL和NCGS的有效治疗方法。

发明内容

在一个方面，本发明涉及一种治疗有需要的受试者的乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约50-1000mg，优选75-600mg，更优选约75mg、约150mg、约300mg或约600mg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，治疗有效量包括以约2周的间隔施用的6个单位剂量。每个单位剂量可以通过皮下注射或静脉内注射来施用。

在另一方面，本发明涉及一种用于治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的药物组合物或一种用于治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法中的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量待以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约50-1000mg，优选75-600mg，更优选约75mg、约150mg、约300mg或约600mg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。在所述药物组合物的一个实施方案中，治疗有效量包括将以2周的间隔施用的6个单位剂量。每个单位剂量可以通过皮下注射或静脉内注射来施用。

本发明的另一方面涉及一种治疗有需要的受试者的难治性乳糜泻的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约1-50mg/kg，优选约4-16mg/kg，更优选约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg或约16mg/kg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，治疗有效量包括以2周的间隔施用的6个单位剂量，以及任选的在第1周施用的额外负荷剂量。每个单位剂量通过皮下注射或静脉内注射来施用。难治性乳糜泻是I型或II型难治性乳糜泻。

本文还提供了一种用于治疗难治性乳糜泻的药物组合物或一种用于治疗难治性乳糜泻的方法中的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约1-50mg/kg，优选约4-16mg/kg，更优选约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg或约16mg/kg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，治疗有效量包括待以2周的间隔施用的6个单位剂量，以及任选的待在第1周施用的额外负荷剂量。每个单位剂量可以通过皮下注射或静脉内注射来施用。难治性乳糜泻可以是I型或II型。

在本文公开的方法和/或药物组合物的一些实施方案中，抗体可以具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:5-7具有至少80％序列同一性的序列。在某些实施方案中，抗体可具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:8-10具有至少80％序列同一性的序列。在一些实施方案中，抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的序列。在某些实施方案中，抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的序列。

附图说明

图1示出了AMG 714的示意性结构。

图2示出了存在于健康受试者和患有活动性乳糜泻的受试者的肠中的绒毛。

图3示出了乳糜泻和难治性乳糜泻病理生理的简化示意图。

图4示出了RCD-II中的IL-15信号传导的简化示意图。

图5示出了IL-15在乳糜泻和难治性乳糜泻中的多重作用的简化示意图。

具体实施方式

本文公开的组合物和方法涉及通过使用例如治疗有效量的IL-15拮抗剂调节IL-15的活性来治疗胃肠道病症诸如CD、NRCD、RCD、EATL和NCGS。在一些实施方案中，IL-15拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，IL-15可被AMG 714阻断，AMG 714是一种可结合IL-15并抑制IL-15功能的单克隆抗体。

本文提供的药物组合物可包含治疗有效量的重组单克隆抗体或针对IL-15、特别是人IL-15的抗原结合片段。合适的抗体可包括例如鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体和完全人抗体，以及本领域已知的其他抗体形式。在一些实施方案中，抗体可包括但不限于美国专利No.7,247,304、7,329,405、7,153,507、7,597,892、7,585,961和8,345,105中公开的那些，所有这些专利均以引用的方式整体并入本文。可以使用例如国际专利申请No.WO2007/07087384(以引用的方式整体并入本文)中公开的方法，提供重组表达的糖蛋白形式的抗体。

在一个实施方案中，抗体是结合IL-15的完全人单克隆抗体。在一个具体实施方案中，抗体是AMG 714，其具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列。抗体还可包含与SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:4具有约80％、85％、90％、95％或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗体可包括轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10中所示的一个或多个互补决定区(CDR)，或其同源序列(例如，包含与SEQ ID NO:8-10中的任一个具有约80％、85％、90％、95％或更高的同一性的氨基酸序列)。另选地或另外地，抗体可包括重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7中所示的一个或多个CDR，或其同源序列(例如，包含与SEQ ID NO:5-7中的任一个具有约80％、85％、90％、95％或更高的同一性的氨基酸序列。在一个具体实施方案中，结合IL-15或其抗原结合片段的人单克隆抗体包括：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10中所示的所有三个CDR，或其保守氨基酸取代；以及重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7中所示的所有三个CDR，或其保守氨基酸取代。

本文公开的药物组合物可包含治疗有效量的结合IL-15或其抗原结合片段的分离的单克隆抗体和药学上可接受的载体。所述药物组合物可用于治疗或预防与人IL-15过表达相关的病症和/或其中人IL-15诱导的作用的下调或抑制是有益的病症。

本文还提供了一种通过向受试者施用治疗有效量的分离的抗IL-15抗体或其抗原结合片段来治疗或预防与人IL-15过表达相关的病症和/或其中人IL-15诱导的作用的下调或抑制是有益的病症的方法。

可使用本发明公开的方法或组合物来治疗或预防的示例性病症包括但不限于乳糜泻、非反应性乳糜泻、难治性乳糜泻、肠病相关T细胞淋巴瘤和麸质敏感性肠病。可治疗的其他病症包括血管炎、牛皮癣、多发性硬化症、类风湿性关节炎(RA)、炎性病症(例如炎性肠病)、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主病、T细胞淋巴瘤和T细胞白血病。

定义

为方便起见，在此收集本说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

本文使用的冠词“一个/种”是指该冠词的一个/种或多于一个/种(即至少一个/种)语法对象。举例来说，“一个元素”表示一个元素或多于一个元素。

如本文所用，术语“约”意指在20％之内，更优选在10％之内，最优选在5％之内。术语“基本上”意指超出50％，优选超出80％，最优选超出90％或95％。

术语“IL-15”、“IL-15抗原”和“白细胞介素15”在本文中可互换使用，并且包括由细胞天然表达的其任何变体或同种型。白细胞介素15是充当T细胞(特别是肠上皮内淋巴细胞(IEL))和自然杀伤(NK)细胞的有效生长、存活和活化因子的促炎细胞因子。已在多种炎性疾患，包括CD、类风湿性关节炎(RA)和牛皮癣中证实了IL-15的表达增加(Malamut等人,2010)。IL-15被认为是CD免疫病理的中心调控因子和RCD中淋巴瘤形成的非冗余驱动因子。拮抗剂对IL-15的抑制是治疗CD的有吸引力的治疗靶标。通过用于结合IL-15的完全人单克隆抗体靶向IL-15有助于阐明CD中由IL-15促进的信号传导机制，并且已经确立了调节IL-15的下游效应子的优点的实验证明原理(Malamut等人,2010)。

本文提及的术语“抗体”包括完整抗体和其任何抗原(例如IL-15)结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。“抗体”是指至少包含通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链的蛋白质，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH区和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，间插更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，它们按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如效应子细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。

应当理解，术语“抗体”还包括各种抗体修饰和/或衍生形式，包括但不限于抗IL-15抗体或其抗原结合片段(与另外的分子实体诸如一种或多种不同的抗体或其抗原结合片段偶联或连接(例如，双特异性的、三特异性的或多特异性的))、药用剂、肽或蛋白质以及检测剂或标记。术语“抗体”还包括单链抗体、双抗体、结构域抗体、纳米抗体和unibodies。

如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”和“抗原结合片段”(或简称“抗体部分”)是指抗体的选择性结合抗原(例如，IL-15)的一个或多个片段。已显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”内的抗原结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人,Nature 341:544-546(1989))；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)两个或更多个分离的CDR的组合，这些CDR可任选地通过合成接头连接。此外，虽然Fv片段的两个结构域，VL和VH，是由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头来连接，使得它们可以被制成为单个蛋白质链，其中VL区和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人,Science 242:423-426(1988)和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988))。此类单链抗体也涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”和“抗原结合片段”内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并以与完整抗体相同的方式筛查效用。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指对特定表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体。因此，术语“人单克隆抗体”是指显示单一结合特异性并且具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。在一个实施方案中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括与无限增殖化细胞融合的B细胞，所述B细胞获自基因组中包含人重链转基因和轻链转基因的转基因非人动物，例如转基因小鼠。在另一个实施方案中，人单克隆抗体可以由中国仓鼠卵巢(CHO)细胞产生。

如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如(a)从对于人免疫球蛋白基因来说是转基因或转染色体的动物(例如,小鼠)或由它制备的杂交瘤中分离的抗体；(b)从被转化以表达抗体的宿主细胞(例如CHO细胞)，例如从转染瘤中分离的抗体；(c)从重组的组合人抗体文库中分离的抗体；以及(d)通过涉及到将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列上的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，可以对此类重组人抗体进行体外诱变(或当使用对于人Ig序列来说是转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，且因此，重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列尽管衍生自人种系VH序列和VL序列并与之相关，但它们可能在体内并不天然存在于人抗体种系组库中。

如本文所用，“异源抗体”是相对于产生这种抗体的转基因非人生物体定义的。该术语是指这样的抗体，所述抗体具有的氨基酸序列或编码核酸序列与在转基因非人动物以外的生物体中存在的序列相对应，而且通常所述序列来自转基因非人动物物种以外的物种。

如本文所用，“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合IL-15的分离的抗体基本上不含特异性结合IL-15以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合IL-15表位的分离的抗体可能与其他相关细胞因子或来自不同物种的其他IL-15蛋白具有交叉反应性。然而，抗体优选地总是与人IL-15结合。另外，分离的抗体通常基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。在一个具体实施方案中，具有不同IL-15特异性的“分离的”单克隆抗体的组合在明确定义的组合物中组合。

如本文所用，“特异性结合”、“选择性结合”和“选择性地结合”是指与预定抗原结合的抗体或其片段。例如，在一个实施方案中，如果在BIACORE 3000仪器中，采用重组人IL-15作为被分析物而用所述抗体作为配体，根据表面等离振子共振(SPR)技术测定，所述抗体结合的亲和力(K_D)为大约小于10^-7M，诸如大约小于10^-8M、10^-9M或10^-10M甚至更低，并且与预定抗原结合的亲和力比其与预定抗原以外的非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)或密切相关抗原结合的亲和力至少高两倍。短语“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”在本文中可与术语“选择性地结合抗原的抗体”互换使用。

如本文所用，术语“K_D”意指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。

如本文所用的术语“核酸分子”是指DNA和RNA分子。核酸分子可以是单链DNA或双链DNA，但优选是双链DNA。

如本文所用，术语“分离的核酸分子”，对于编码选择性地结合IL-15的抗体或抗体部分(例如VH、VL、CDR3)的核酸，意指其中编码抗体或抗体部分的核苷酸序列不含编码结合IL-15以外的抗原的抗体或抗体部分的其他核苷酸序列的核酸分子，所述其他序列可能天然邻接人基因组DNA中的核酸。

在一个实施方案中，人抗IL-15抗体可具有由SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列或其保守核酸取代(例如，沉默突变)编码的重链可变区(VH)，和/或由SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列或其保守核酸取代(例如，沉默突变)编码的轻链可变区(VL)。抗体还可具有由分别与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3具有约80％、85％、90％、95％或更高同一性的核苷酸序列编码的VH和VL。

在一个实施方案中，抗体可具有包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守氨基酸取代的重链可变区，和/或包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守氨基酸取代的轻链可变区。抗体还可包含与SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:4具有约80％、85％、90％、95％或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗体可包括轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10中所示的一个或多个互补决定区(CDR)，或其同源序列(例如，包含与SEQ ID NO:8-10中的任一个具有约80％、85％、90％、95％或更高同一性的氨基酸序列，或具有其1个或2个或3个或4个氨基酸取代或变化)。抗体可以另选地或另外地包括重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7中所示的一个或多个CDR，或其同源序列(例如，包含与SEQ ID NO:5-7中的任一个具有约80％、85％、90％、95％或更高同一性的氨基酸序列，或具有其1个或2个或3个或4个氨基酸取代或变化)。在一个具体实施方案中，结合IL-15的人单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10中所示的所有三个CDR，或其保守氨基酸取代；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7中所示的所有三个CDR，或其保守氨基酸取代。

本发明的一个实施方案还涵盖SEQ ID NO:1-10中所示的序列的“保守序列修饰”或“保守序列取代”，即不会显着影响或改变由核苷酸序列编码或含有氨基酸序列的抗体的结合特征的核苷酸和氨基酸序列修饰。此类保守序列修饰包括核苷酸和氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术，诸如定点诱变和PCR介导的诱变将修饰引入SEQID NO:1-10中。保守氨基酸取代包括其中残基被具有相似侧链的残基取代的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有以下侧链的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，人抗IL-15抗体中预测的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一残基替换。

另选地，在另一个实施方案中，可以诸如通过饱和诱变沿着全部或部分抗IL-15抗体编码序列随机引入突变，并且可以筛选所得修饰的抗IL-15抗体的结合活性。

因此，由本文公开的(重链和轻链可变区)核苷酸序列编码和/或含有本文公开的(重链和轻链可变区)氨基酸序列(即SEQ ID NO:1-4)的抗体包括由相似序列(已进行保守修饰)编码或含有相似序列的基本上相似的抗体。此外，下文提供了关于如何基于本文公开的部分(即重链和轻链可变区)序列如SEQ ID No:1-4产生此类基本上相似的抗体的论述。

对于核酸，术语“基本同源性”表示，当进行最佳比对和比较时，可以有适当的核苷酸插入或缺失，两个核酸或其指定序列有至少约80％的核苷酸，通常至少约90％至95％，更优选至少约98％至99.5％的核苷酸是相同的。或者，当片段在选择性杂交条件下与链的互补序列杂交时，即存在基本同源性。

对于氨基酸序列，术语“同源性”表示当进行最佳比对或比较时，可以有适当的插入或缺失，两个氨基酸序列之间的同一性程度。

两个序列之间的同一性百分比是这些序列共有的相同位置的数量的函数(即同源性％＝相同位置数量/位置总数x 100)，考虑到空位的数量和每个空位的长度，需要引入它们以实现两个序列的最佳比对。可以使用数学算法完成序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定。

可使用GCG软件包(可从www.gcg.com获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重与1、2、3、4、5或6的长度权重，确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。还可以使用已并入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))算法，使用PAM120权重残基表，12的空位长度罚分和4的空位罚分来确定两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。另外，可以使用已并入GCG软件包(可从www.gcg.com获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重与1、2、3、4、5或6的长度权重来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。

本发明的核酸和蛋白质序列可以进一步用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，以例如鉴定相关序列。可以使用Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403-10(1990)的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行此类搜索。可以用NBLAST程序(得分＝100，字长＝12)进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序(得分＝50，字长＝3)进行BLAST蛋白质搜索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得空位比对用于比较目的，可以如Altschul等人,Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402(1997)中所述使用GappedBLAST。当利用BLAST和GappedBLAST程序时，可以使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。(参见www.ncbi.nlm.nih.gov)。

如本文所用，术语“受试者”包括任何人或非人动物。例如，本发明的方法和组合物可用于治疗患有炎性疾病诸如乳糜泻、难治性乳糜泻、肠病相关T细胞淋巴瘤和非乳糜泻麸质敏感的受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。

对于炎性病症诸如乳糜泻、难治性乳糜泻、麸质敏感性肠病和/或肠病相关T细胞淋巴瘤等的“治疗有效剂量”或“治疗有效量”将优选地使得受试者临床结果得到改善或以其他方式减轻体征和/或症状。例如，治疗有效剂量的AMG-714可以使得接受治疗的患者的临床结果得到改善和/或改善实验室测试结果，例如如本文所述的在临床试验和/或医师评估中要监测的参数。

“单位剂量”是指在一个治疗期中施用于受试者的药物组合物的量，特别地是其中的活性成分(例如抗IL-15抗体，诸如AMG 714)的量。治疗期可以是连续的，例如持续一段时间(例如1小时、2小时)的单次推注的不间断肠胃外施用(例如，皮下或静脉内施用)。治疗期也可以分成两个或更多个子期，这样使得一个单位剂量施用一段时间(12小时、24小时)，每次推注后有休息或恢复时间。

如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，可以将抗体包被在材料中以保护化合物免受酸和其他可能使化合物失活的自然条件的作用。

“药学上可接受的盐”是指保留母体化合物的所需生物活性并且不会产生任何不希望的毒性效应的盐(参见例如Berge,S.M.等人,J.Pharm.Sci.66:1-19(1977))。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸等的那些，以及衍生自无毒有机酸诸如脂族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等的那些。碱加成盐包括衍生自碱土金属诸如钠、钾、镁、钙等的那些，以及衍生自无毒有机胺诸如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等的那些。

在以下小节中更详细地描述了本发明的各个方面。

药物组合物及其制剂

在一个方面，本发明包括一种药物组合物，所述药物组合物具有治疗有效量的治疗抗体或其抗原结合片段(例如，结合IL-15的人单克隆抗体或其抗原结合片段)，所述治疗抗体或其抗原结合片段可与药学上可接受的载体配制在一起。

在一些实施方案中，AMG 714，一种结合白细胞介素15(IL-15)的完全人免疫球蛋白(IgG1κ)单克隆抗体(mAb)，可用于治疗例如乳糜泻、无麸质饮食(GFD)非反应性乳糜泻(NRCD)、非乳糜泻麸质敏感和II型难治性乳糜泻(RCD-II)。

白细胞介素15(IL-15)是一种大约14-15kDa的糖蛋白，它是一种与IL-2结构相似的促炎细胞因子。IL-15对许多免疫相关细胞发挥生物学作用(Fehniger和Caligiuri,2001)。尽管物种之间存在重大差异，但IL-15通常充当NK细胞和记忆表型CD8+T细胞(包括IEL)的发育、稳态和活化因子。它还诱导这些细胞类型产生趋化因子和细胞因子。IL-15有效地刺激单核细胞/巨噬细胞产生促炎细胞因子诸如IL-1、IL-6和TNF-α。已知由滤泡树突状细胞产生的IL-15支持生发中心B细胞增殖和免疫球蛋白类别转换(Park等人,2004；Litinskiy等人,2002)。已显示小鼠中IL-15或IL-15Rα基因的靶向破坏导致NK、NK-T、T细胞受体γδ(TCRγδ+)IEL和记忆CD8+T细胞的丧失(Lodolce等人,1998)。在IL-15敲除小鼠中，这些缺陷能通过施用外源性IL-15来逆转(Kennedy等人,2000)。然而，人NK细胞并不完全依赖于IL-15(Lebrec等人,2013)。

IL-15信使RNA(mRNA)在多种组织和细胞类型中表达。然而，IL-15蛋白的表达受到更多限制并且受到多种转录后控制机制的影响。IL-15蛋白的来源包括单核细胞、巨噬细胞、上皮细胞和成纤维细胞以及骨髓基质细胞(Fehniger和Caligiuri,2001)。IL-15及其受体还在免疫系统之外的一些器官中表达；IL-15在这些系统中的作用尚不清楚。在IL-15和IL-15Rα敲除小鼠免疫系统之外没有任何明显缺陷表明IL-15在任何其他系统中可能不是必需的。

IL-15结合异源三聚体受体，该受体由与IL-2受体(CD122或IL-2/IL-15Rβ)共有的β链；与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-21共有的共同γ链(γC)；以及独特的α链组成。IL-15以高亲和力结合IL-15Rα链，然后IL-15Rα链与IL-2/IL-15Rβ和γC相互作用。IL-15/IL-15Rα复合物与完整受体复合物的其他两种组分的缔合可以以顺式构型发生，其中所有三种受体组分存在于同一细胞上；或者以反式构型发生，其中IL-15/IL-15Rα对位于一个细胞上，而受体β和γC链位于另一个细胞上(Schluns等人,2005)。IL-15还可以在细胞表面上与IL-15Rα缔合，然后被切割成可能刺激CD8+T细胞和NK细胞的可溶性细胞因子/受体复合物(Anthony等人,2015)。

已经在多种炎性病症中证实IL-15的表达增加，这些病症包括RA、牛皮癣、炎性肠病、移植物抗宿主病、实体器官移植排斥(Blaser等人,2005；Conti等人,2003；Gianfrani等人,2005；McInnes和Gracie,2004)和乳糜泻(Gianfrani等人,2005；Meresse等人,2012)。

AMG 714是一种完全人免疫球蛋白(IgG1κ)单克隆抗体，其结合并抑制所有已知形式的IL-15(顺式、反式、与IL-15受体α结合的可溶性IL-15(IL-15Rα))的功能。AMG 714抑制IL-15诱导的T细胞增殖，并显示出对IL-15诱导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生的剂量依赖性抑制。AMG 714的结构在图1中示出。

AMG 714可以通过本领域公知的任何抗体产生方法制得。例如，AMG 714可以由B细胞杂交瘤细胞系制得。AMG 714还可由哺乳动物细胞系诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系制得。如本领域普通技术人员所理解的，重链C-末端赖氨酸可以不存在于由CHO细胞产生的形式中(DickJr.等人,Biotechnol.Bioeng.2008；100:1132–1143)。

在非临床实验中，发现AMG 714识别对人IL-15(hIL-15)与其受体复合物之间相互作用必不可少的表位。AMG 714显示对IL-15诱导的外周血T细胞和表达IL-15受体的细胞系的增殖的剂量依赖性抑制，以及对hIL-15诱导的TNF-α产生的剂量依赖性抑制。发现AMG714在由肠上皮细胞中人IL-15的转基因表达触发的乳糜泻小鼠模型中是有效的。在该模型中，AMG 714预防IEL活化和增殖，以及组织学异常。此外，AMG 714能够在来自患有活动性乳糜泻和RCD-II的小肠外植体的离体培养物中诱导人IEL的凋亡。

由于AMG 714对猕猴IL-15的低结合效力，AMG 714的安全特性已经在使用替代分子Hu714MuXHu的非人灵长类动物(NHP)，具体是食蟹猴的非临床研究中进行了评估。在NHP中，Hu714MuXHu对IL-15的抑制导致一些动物中可逆的NK细胞减少和相关胃肠道感染；但是，在人类中未观察到NK细胞耗尽(Lebrec等人,2013)，并且在人类研究中并没有相应的胃肠炎或肠道感染被报告为常见不良事件(AE)。没有观察到其他毒理学信号。此观察结果与NHP中观察到的NK细胞耗尽之间的差异似乎与人和食蟹猴在NK细胞对IL-15阻断的敏感性方面之间的差异有关。人NK细胞的存活不依赖于IL-15，可能是由于IL-2对人NK细胞的冗余作用。

迄今为止，大约200名受试者已接触AMG 714用于治疗RA和牛皮癣，包括大约140名受试者每两周给药一次，持续12周。已在四项临床试验中研究了AMG 714，包括一项在NHV中的1期研究(30名受试者接受AMG 714，10名接受安慰剂，静脉内[IV]和皮下[SC])；一项在RA中的1期研究(29名受试者接受AMG 714，没有安慰剂，IV)；一项在牛皮癣中的1b/2a期研究(14名患者接受AMG 714，6名接受安慰剂，SC)；以及在RA中的2b期研究(121名受试者接受AMG 714，58名接受安慰剂，SC)。迄今为止，AMG 714具有良好的耐受性，并且其安全特性大体与安慰剂相当，但注射部位反应除外，这在接触AMG 714的受试者中更常见。

在RA临床试验中，AMG 714在1期和2期研究中均在大约60％的患者中表现出反应，而在安慰剂组中有反应的约为30％。AMG 714还使得炎性生物标记物诸如C反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)降低。AMG 714在牛皮癣患者的临床试验中没有表现出反应，这表明AMG 714的作用是选择性的，与广泛的系统性免疫抑制剂有所不同。

AMG 714的PK特征曲线与典型的人免疫球蛋白G1抗体一致，无明显的靶标介导的沉积，半衰期为20至22天。迄今为止，在整个临床项目中仅一名受试者的一份血液样品中报告了AMG 714的免疫原性。

本发明的药物组合物还可以在联合疗法中施用，即与其他剂联合施用。例如，联合疗法可包括本发明的组合物与至少一种或多种另外的治疗剂，诸如抗炎剂、DMARD(疾病调修性抗风湿药物)、免疫抑制剂、化学治疗剂和牛皮癣剂。本发明的药物组合物还可以与放射疗法联合施用。本发明还涵盖与其他抗体，诸如CD4特异性抗体和IL-2特异性抗体共同施用。这种与CD4特异性抗体或IL-2特异性抗体的组合被认为对治疗自身免疫疾病和移植排斥特别有用。

本发明的组合物可通过本领域已知的多种方法施用。如本领域技术人员所理解的，施用途径和/或模式将根据所需的结果而变化。活性化合物可以利用保护化合物免于快速释放的载体，诸如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统制备。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备此类制剂的许多方法通常是本领域技术人员已知的。参见，例如Sustainedand ControlledRelease Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,编,Marcel Dekker,Inc.,NewYork,1978。

为了通过某些施用途径施用本发明的化合物，可能需要用材料包被化合物或将化合物与材料共同施用以防止化合物失活。例如，化合物可以在适当的载体例如脂质体或稀释剂中施用于受试者。药学上可接受的稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常规脂质体(Strejan等人,J.Neuroimmunol.7:27(1984))。

药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这些介质和剂用于药物活性物质的用途在本领域中是已知的。除非任何常规介质或剂与活性化合物不相容，否则它们用于本发明的药物组合物的用途都涵盖在内。补充活性化合物也可以掺入到组合物中。

治疗组合物通常必须在制造和储存条件下是无菌和稳定的。组合物可以被配制成溶液、微乳液、脂质体或适于高药物浓度的其他有序结构。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及它们的合适混合物的溶剂或分散介质。例如，通过使用涂层诸如卵磷脂，通过维持所需的粒径(就分散体而言)以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。

无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物与上面列举的成分中的一者或组合(如果需要)一起掺入适当的溶剂中，然后进行灭菌微滤来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，这些方法产生活性成分粉末加上来自其先前无菌过滤的溶液的任何其他所需成分。

可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。例如，本发明的人抗体可以通过皮下注射每周施用一次或两次，或者通过皮下注射每月施用一次或两次。

特别有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物，以便于施用和保持剂量一致性。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有经计算可与所需药物载体联合产生所需治功效果的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格由下列因素影响并直接取决于下列因素：(a)活性化合物的独特特征和要实现的特定治功效果；以及(b)混配用于治疗个体敏感性的这种活性化合物的技术中固有的局限性。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

对于治疗组合物，本发明的制剂包括适于口服、鼻腔、局部(包括颊面和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外施用的那些。制剂可以方便地以单位剂量形式存在，并且可以通过药学领域已知的任何方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的受试者和特定的施用模式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治功效果的组合物的量。一般来讲，按百分比计，该量的范围将为约0.001％至约90％的活性成分，优选约0.005％至约70％，最优选约0.01％至约30％。

用于本发明组合物的局部或透皮施用的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体混合，并与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

可用于本发明药物组合物的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)以及它们的合适混合物；植物油，诸如橄榄油；以及可注射的有机酯，诸如油酸乙酯。例如，通过使用涂层材料诸如卵磷脂，通过维持所需的粒径(就分散体而言)以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。

这些组合物还可含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过上文的灭菌程序以及通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，可以确保防止微生物的存在。还可能需要在组合物中包含等渗剂，诸如糖、氯化钠等。此外，通过包含延迟吸收的剂诸如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射剂型的延长吸收。

当本发明的化合物作为药物施用于人和动物时，它们可以单独给予或作为药物组合物来给予，所述药物组合物含有例如0.001％至90％(更优选0.005％至70％，诸如0.01％至30％)的活性成分与药学上可接受的载体的组合。

如本文所用，短语“肠胃外施用”和“以肠胃外方式施用”是指肠内施用和局部施用以外的施用模式，通常是通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。在一些实施方案中，可以使用皮下和/或静脉内施用，这些施用模式的某些优点和缺点总结如下。

无论所选的施用途径如何，本发明的化合物(可以以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物通过本领域技术人员已知的常规方法被配制成药学上可接受的剂型。

在不对患者产生毒性的情况下，本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应的活性成分的量。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用特定本发明组合物或其酯、盐或酰胺的活性；施用途径；施用时间；所用特定化合物的排泄速率；治疗持续时间；与所用特定化合物联合施用的其他药物、化合物和/或材料；所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域众所周知的相似因素。具有本领域普通技术的医生或兽医可以容易地确定和开出所需药物组合物的有效量。例如，医生或兽医可以以比实现所需治功效果所需的水平低的水平开始药物组合物中所用的本发明化合物的剂量，并逐渐增加剂量直至达到所需效果。通常，本发明组合物的合适日剂量是有效产生治功效果的最低剂量的化合物的量。这种有效剂量通常取决于上述因素。施用优选通过静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下，优选在靶部位附近施用。如果需要，治疗组合物的有效日剂量可以作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量，在一天中以适当的间隔分开施用，任选地，以单位剂量形式施用。虽然本发明的化合物可以单独施用，但优选将该化合物作为药物制剂(组合物)施用。

治疗组合物可以与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，在一个优选的实施方案中，本发明的治疗组合物可以与一种无针皮下注射装置，诸如在美国专利No.5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4,596,556中公开的装置一起施用。可用于本发明的众所周知的植入物和模块的实例包括：美国专利No.4,487,603，其公开了一种用于以受控速率分配药物的植入式微输注泵；美国专利No 4,486,194，其公开了一种用于透过皮肤施用药品的治疗装置；美国专利No.4,447,233，其公开了一种用于以精确输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利No.4,447,224，其公开了一种用于持续药物递送的变流量植入式输注器件；美国专利No.4,439,196，其公开了一种具有多腔室隔室的渗透药物递送系统；美国专利No.4,475,196，其公开了一种渗透药物递送系统。许多其他这样的植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。

可配制本发明的治疗抗体以帮助体内适当分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了许多高亲水性化合物。为了帮助本发明的治疗化合物穿过BBB(如果需要)，可以将它们配制在例如脂质体中。对于制造脂质体的方法，参见例如美国专利4,522,811；5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含一个或多个选择性转运到特定细胞或器官中的部分，从而增强靶向药物递送(参见,例如V.V.Ranade J.Clin.Pharmacol.29:685(1989)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见，例如Low等人的美国专利5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038(1988))；抗体(P.G.Bloeman等人,FEBSLett.357:140(1995)；M.Owais等人,Antimicrob.Agents Chemother.39:180(1995))；表面活性蛋白A受体(Briscoe等人,Am.J.Physiol.1233:134(1995))，该受体的不同种类可构成本发明的制剂，以及本发明分子的组分；p120(Schreier等人,J.Biol.Chem.269:9090(1994))；还可参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen FEBS Lett.346:123(1994)；J.J.Killion；I.J.Fidler Immunomethods 4:273(1994)。本发明的治疗化合物可以配制在脂质体中；这些脂质体可以包括靶向部分。配制在脂质体中的治疗化合物可以通过推注递送到肿瘤或感染附近的部位。组合物必须是流动的，以使组合物可以容易地吸入注射器中。脂质体组合物在制造和储存条件下可以是稳定的。可以保护脂质体组合物免受微生物诸如细菌和真菌的污染作用。

可以配制本发明的组合物以防止或减少跨胎盘的转运。这可以通过本领域已知的方法完成，例如通过抗体的PEG化或通过使用F(ab)2'片段来完成。可以进一步参考“Cunningham-Rundles C,Zhuo Z,Griffith B,Keenan J.(1992)Biological activitiesof polyethylene-glycol immunoglobulin conjugates.”Resistance to enzymaticdegradation.J Immunol Methods.152:177-190；和Landor M.(1995)Maternal-fetaltransfer of immunoglobulins,Ann Allergy Asthma Immunol 74:279-283。

组合物必须是无菌的和流动的，以使组合物可通过注射器递送。除水之外，载体可以是等渗缓冲盐水溶液、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及它们的合适混合物。例如，通过使用涂层诸如卵磷脂，通过维持所需的粒径(就分散体而言)以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇或山梨糖醇)以及氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的剂，例如单硬脂酸铝或明胶，可以实现可注射组合物的长期吸收。

当活性化合物如上所述得到适当保护时，化合物可以例如利用惰性稀释剂或可同化的食用载体口服施用。

药物组合物治疗乳糜泻和非乳糜泻麸质敏感的用途

乳糜泻是遗传易感个体中由食用麸质所触发的系统性自身免疫疾病(Green和Cellier,2007)。目前，约1％的美国(US)和欧盟(EU)人群受乳糜泻影响，但是只有10％-20％的乳糜泻患者被诊断出来。糜泻是第一种具有鉴定的抗原即麸质的自身免疫疾病，麸质是一些最常见的谷物(例如小麦、大麦、黑麦)中存在的主要蛋白质。现代饮食越来越多地富含麸质，并且麸质还被用作加工食品、化妆品和口服药物的添加剂。麸质是继糖之后的第二种最常见的食品成分，在一些国家，麸质占食品的高达80％。

人类缺乏完全消化麸质的酶，在正确的遗传背景下(即，HLA-DQ2/8，Th1易感免疫系统的存在)，在转谷氨酰胺酶。(tTG)发生脱氨基作用后麸质会在肠和其他器官中触发炎症和自身免疫，转谷氨酰胺酶本身成为自身抗体的靶标。据信，IL-15是适应性免疫反应和先天免疫反应两者的关键介质，适应性免疫反应产生肠外表现，而先天免疫反应引起肠粘膜萎缩和胃肠道症状。

乳糜泻导致衰弱症状和潜在的严重医疗并发症。在许多患者中，源自肠粘膜损伤的胃肠道症状在诊断时在患者报告的症状中占主导。如图2所示，由于粘膜萎缩和隐窝扩大，健康个体(左)肠中存在的正常绒毛(吸收性指状延长)在活动性乳糜泻(右)中丧失。绒毛高度(VH)与肠隐窝深度(CD)的比率，VH:CD比率，是乳糜泻严重程度的主要描述符之一(Taavela等人,2013)。小肠损伤通常导致营养吸收不良，这可导致一系列进一步的临床表现(例如，贫血、骨质减少、儿童无法茁壮成长)。此外，经常出现肠外症状和系统性表现，诸如皮炎、不孕症、神经障碍和骨骼病症(Green和Cellier,2007)。

尽管存在这样相当大的发病率，乳糜泻是唯一没有批准用药的常见自身免疫病症。目前，唯一可用的乳糜泻控制策略是终生完全回避麸质。虽然理论上很简单，但实际上食品、药物、家用物质、化妆品甚至无麸质物品中麸质的普遍存在使得完全回避麸质非常困难，即使并非不可能。

成功维持无麸质饮食(GFD)的主要挑战是谷物粉在食品工业中广泛使用，并且天然存在于大多数食物产品中或作为添加剂存在于大多数食物产品中。虽然可以购买无麸质产品，但是商业制造的无麸质产品可能难以找到，往往不太美味，并且比常规的含麸质食品更昂贵，这有时会阻止患者拥护GFD。此外，许多国家缺乏适当的食物产品标签。即使在具有优质标签指南的国家，标有“无麸质”的食品也可含有麸质。例如，在北欧国家，在为乳糜泻患者指定的无麸质产品中，允许的麸质含量高达百万分之100(ppm)(Gibert等人,2006)。

由于这些原因，乳糜泻患者在食用食品和饮料时经常暴露于麸质污染。这种麸质污染暴露以及相关的生理和心理后果导致社会活动的自我限制和/或所食用的食品种类的减少。因此，GFD给患者带来了相当大的挑战和巨大的负担。Shah等人,(2014)的一项研究发现，乳糜泻和GFD对患者生活质量带来的负担仅次于终末期肾病，肾病是一种需要每周多次透析治疗的疾病。

如上所述，即使并非不可能，无处不在的麸质也使得完全回避非常困难。仅仅50mg/天(正常饮食中的含量大于10g/天)就会触发小肠中T细胞的活化并引起肠粘膜损伤(Catassi等人,2007)。因此，超过50％的接受GFD的乳糜泻患者仍旧出现活动性疾病以及肠免疫活化和粘膜萎缩(Lee等人,2003；Cranney等人,2007；Hopper等人,2007；Midhagen等人,2003)。

尽管试图维持GFD，但仍旧出现症状的患者被认为患有NRCD。NRCD被定义为“存在乳糜泻特有的持续症状、体征或实验室异常，尽管6-12个月内饮食回避麸质”(Rubio-Tapia等人,2013)。患者支持小组和专家一致认为，迫切需要独立于GFD或与GFD联合的替代治疗方案，以改善乳糜泻患者的生活质量。

大量实验数据支持IL-15在CD和RCD的病理生理中的多种作用(Abadie和Jabri等人,2014)，如图5所示。例如，在先天免疫反应中，IL-15是对于破坏肠粘膜的IEL而言必需的、非冗余的生长和活化因子。此外，肠上皮中IL-15的表达对于绒毛萎缩是必需的。此外，在一些患者中，IL-15促进淋巴瘤生成和可能致命的RCD-II的进展(Malamut等人,2010)。

实验数据表明，IL-15也介导适应性免疫反应。例如，IL-15通过抗原递呈细胞(APC)增强脱酰胺麸质肽(DGP)的递呈。此外，IL-15使活化的CD4+T细胞对调节性T细胞的抑制具有抗性。

通过活化IEL，IL-15被认为是粘膜损伤的主要介质，粘膜损伤响应于乳糜泻中麸质暴露而随着发生(Korneychuk等人,2014)。IL-15在肠上皮细胞中的表达对于乳糜泻动物模型中的绒毛萎缩是必需的，并且间接证据表明在人类中也是如此。此外，IL-15使效应子T细胞对调节性T细胞(T_reg)的抑制具有抗性(Abadie和Jabri 2014)，促进对食品抗原的耐受性丧失(DePaolo等人,2011；Korneychuk等人,2014)。

乳糜泻的小鼠模型之一是IL-15转基因小鼠，其中肠上皮细胞的IL-15过表达导致乳糜泻样递呈，包括T细胞和B细胞介导的病理(Yokoyama等人,2009和2011)。在用抗IL-15mAb AMG 714(Malamut等人,2010)或抗IL-15R mAb(Yokoyama等人,2009)处理后，在该动物模型中观察到IEL凋亡。IL-15已被证明是对食品抗原的耐受性丧失中的关键因素(DePaolo等人,2011；Korneychuk等人,2014)。

没有典型CD血清学、组织学或遗传标记物且没有经历与小麦过敏相关的免疫球蛋白E(IgE)血清学反应的个体也报告了一些响应于小麦摄取的CD相关症状。已提出术语非乳糜泻麸质敏感或非乳糜泻麸质敏感(NCGS)来指代这些患者所报告的疾患范围(Lundin和Alaedini,2012)。非乳糜泻麸质敏感目前被理解为在已排除CD和小麦过敏的个体中与以下经历相关的疾患：摄取含有小麦、黑麦和大麦的食品后响应性地出现各种症状，并且在从饮食中去除这些食品后症状消退(Lundin和Alaedini,2012)。这些症状可能伴随着抗麸质抗体的水平的增加。与NCGS相关的大多数症状都是主观性的，包括腹痛、头痛、“脑雾”、手脚刺痛和/或麻木、疲劳和肌肉骨骼痛。然而，据报道，其他症状诸如皮疹和腹泻，以及更严重的神经和精神疾患，包括精神分裂症和小脑性共济失调，也与NCGS有关。

本发明提供了用于通过施用治疗有效量的本文公开的抗IL-15抗体或其抗原结合片段来治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法和组合物。在一些实施方案中，治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段在例如用于治疗CD或NCGS时可以实现以下中的一种或多种：(1)减轻麸质诱导的小肠粘膜形态损伤；(2)降低绒毛高度与隐窝深度(VH:CD)比率；(3)减轻麸质诱导的小肠粘膜炎症，量度为上皮内淋巴细胞(IEL)密度；(4)减轻麸质诱导的小肠粘膜形态损伤，方式为使用Marsh得分的分组分类；(5)减少麸质诱导的血清抗体，方式为测量抗组织型转谷氨酰胺酶抗体(抗tTG IgA)和抗脱酰胺醇溶蛋白肽(抗DGP)IgA和IgG；和/或(6)减轻麸质诱导的临床症状，评估方式为布里斯托尔粪便形式量表(BSFS)和胃肠道症状评定量表(GSRS)和乳糜泻GSRS(CeD-GSRS)。NCGS的其他终点包括特别的症状列表(DiSabatino等人,Clinical Gastroenterology and Hepatology 2015；13:1604–1612)或严重患者报告结果，如视觉模拟量表(VAS)(Elli等人,Nutrients 2016,8,84；doi:10.3390/nu8020084)。

本领域普通技术人员将能够基于诸如受试者的体型、受试者症状的严重程度和所选的特定组合物或施用途径等其他因素来确定此类治疗有效量。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物的量或单位剂量可包括约50-1000mg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述单位剂量可以是：约50-100mg、约100-150mg、约150-200mg、约200-250mg、约250-300mg、约300-350mg、约350-400mg、约400-450mg、约450-500mg、约500-550mg、约550-600mg、约600-700mg、约700-800mg、约800-900mg或约900-1000mg或更高或更低或之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约50-60mg、约60-70mg、约70-80mg、约80-90mg、约90-100mg、约100-110mg、约110。-120mg、约120-130mg、约130-140mg、约140-150mg、约150-160mg、约160-170mg、约170-180mg、约180-190mg、约190-200mg、约200-210mg、约210-220mg、约220-230mg、约230-240mg、约240-250mg、约250-260mg、约260-270mg、约270-280mg、约280-290mg、约290-300mg、约300-310mg、约310-320mg、约320-330mg、约330-340mg、约340-350mg、约350-360mg、约360-370mg、约370-380mg、约380-390mg、约390-400mg、约400-410mg、约410-420mg、约420-430mg、约430-440mg、约440-450mg、约450-460mg、约460-470mg、约470-480mg、约480-490mg、约490-500mg、约500-510mg、约510-520mg、约520-530mg、约530-540mg、约540-550mg、约550-560mg、约560-570mg、约570-580mg、约580-590mg、约590-600mg、约600-610mg、约610-620mg、约630-640mg、约640-650mg、约650-660mg、约660-670mg、约670-680mg、约680-690mg或690-700mg的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约105、约110、约115、约120、约125、约130、约135、约140、约145、约150、约155、约160、约165、约170、约175、约180、约185、约190、约195、约200、约205、约210、约220、约225、约230、约235、约240、约245、约250、约255、约260、约265、约270、约275、约280、约285、约290、约295、约300、约305、约310、约315、约320、约325、约330、约335、约340、约345、约350、约355、约360、约365、约370、约375、约380、约385、约390、约395、约400、约405、约410、约415、约420、约425、约430、约435、约440、约445、约450、约455、约460、约465、约470、约475、约480、约485、约490、约495、约500、约505、约510、约515、约520、约525、约530、约535、约540、约545、约550、约555、约560、约565、约570、约575、约580、约585、约590、约595、约600、约605、约610、约615、约620、约625、约630、约635、约640、约645、约650、约655、约660、约665、约670、约675、约680、约685、约690、约695或约700mg或以上任何两个数值之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物的量或单位剂量可包括约1-50mg/kg(患者体重)的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述单位剂量可以是：约1-10mg/kg、约10-20mg/kg、约20-30mg/kg、约30-40mg/kg或约40-50mg/kg或更高或更低或之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约1-5mg/kg、约5-10mg/kg、约10-15mg/kg、约15-20mg/kg、约20-25mg/kg、约25-30mg/kg、约30-35mg/kg、约35-40mg/kg、约40-45mg/kg或约45-50mg/kg。在一些实施方案中，优选的剂量可包括：约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30、约31、约32、约33、约34、约35、约36、约37、约38、约39、约40、约41、约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、约49或约50mg/kg的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，根据疾病的严重程度和/或治疗的有效性，每位受试者可以接受本文公开的至少一个(例如1-100个)单位剂量。例如，受试者可以接受2-20个单位剂量，这些单位剂量彼此可相同或不同(例如，一个或多个初始单位剂量可以小于或大于后面的单位剂量)。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物可以每1-20周通过皮下或静脉内注射以本文公开的单位剂量施用。在一个实施方案中，皮下施用所述药物组合物。在另一个实施方案中，静脉内施用所述药物组合物。在某些实施方案中，施用可以每1-5、5-10、10-15或15-20周进行。在一些实施方案中，施用可以每1-2、2-4、4-6、6-8、8-10、10-12、12-14、14-16、16-18或18-20周进行。在一些实施方案中，施用可以每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周进行。单位剂量可以相同的间隔(例如，每1-20周)给予。另选地，至少一部分单位剂量以与其他单位剂量不同(例如，缩短或延长)的间隔给予。

在其他方面，本发明涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感，其中所述药物组合物包含抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在其他实施方案中，所述药物组合物包含75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在某些实施方案中，所述药物组合物包含150mg或300mg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在一个实施方案中，每2周皮下施用所述药物组合物。在另一个具体实施方案中，每1、2或4周静脉内施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，每2周静脉内施用所述药物组合物。

在其他方面，本发明涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法，其中所述方法包括施用(例如，皮下施用)抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，所述方法包括施用(例如，皮下施用)75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在某些实施方案中，所述方法包括施用(例如，皮下施用)150mg或300mg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，所述方法包括每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在一个实施方案中，所述方法包括每2周皮下施用。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每1、2或4周静脉内施用，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每2周静脉内施用。

在另一方面，本发明涉及一种治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法，其中所述方法包括施用(例如，皮下施用)抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，所述方法包括施用(例如，皮下施用)75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在某些实施方案中，所述方法包括施用(例如，皮下施用)150mg或300mg的抗IL-15抗体(例如AMG714)。在一些实施方案中，所述方法包括每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在一个实施方案中，所述方法包括每2周皮下施用。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每1、2或4周静脉内施用，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每2周静脉内施用。

在本文所述的药物组合物和方法的具体实施方案中，通过皮下注射每2周一次(q2w)施用150或300mg的抗IL 15抗体(例如AMG714)。

药物组合物治疗难治性乳糜泻的用途

在乳糜泻中持续暴露于麸质的一种罕见但特异性的并发症是难治性乳糜泻(RCD)的发展，难治性乳糜泻影响约1％的乳糜泻患者(Lebwohl等人,2013)。RCD的特征在于在未食用麸质和存在小肠异常IEL的情况下严重的肠粘膜萎缩和胃肠道症状(Verbeek等人,2008；vanWanrooij等人,2014)。

可根据异常IEL的比例和特征对RCD患者进行进一步分类。如通过流式细胞术测定的，具有低异常IEL比例(定义为小于总IEL的20％(每100个上皮细胞中少于20个IEL))的患者被称为I型RCD(RCD-I)。这些异常的IEL通常是多克隆的，并且RCD-I患者发展显性额外上皮淋巴瘤(即肠病相关T细胞淋巴瘤[EATL])的风险并不高，且具有典型的5年存活率(vanWanrooij等人,2014)。为了治疗RCD-I，可以使用皮质类固醇(局部或系统性)、硫唑嘌呤、巯基嘌呤、抗TNF剂或克拉屈滨(Brar等人,2007；Goerres等人,2003)，可实现临床和组织学改善。图3示出了如Schuppan等人描述的乳糜泻和难治性乳糜泻的病理生理。

当异常IEL的比例达到或超过20％时，患者被诊断为II型RCD(RCD-II)。在RCD-II中，IEL通常是单克隆的，并且发展EATL的风险显着增加至大于50％(Nijeboer等人,2015)。由于抗细胞凋亡机制的积累，异常的IEL在没有麸质的情况下增殖，因此术语“难治性”表明该疾病，即非霍奇金氏生长缓慢性上皮内淋巴瘤似乎不依赖于麸质，因为它不响应于最严格的GFD。如图4所示，IL-15被认为是异常IEL转化和维持的主要驱动因子(Meresse等人,2012)。发现用抗IL-15mAb AMG 714阻断IL-15可诱导来自活动性乳糜泻和RCD-II患者的人小肠活检物中的IEL凋亡，这确立了在RCD-II中抑制IL-15的原理的实验证据。(Malamut等人,2010)。此外，在用抗IL-15AMG714(Malamut等人,2010)或抗IL-15受体mAb(Yokoyama等人,2009)处理的乳糜泻动物模型中观察到了IEL凋亡。

在来自发展EATL的RCD-II患者的连续活检物中T细胞受体(TCR)重排组库相似，基于此观察结果异常单克隆IEL已经被证明是EATL的前体。RCD-II被认为是小肠的原位低级T细胞淋巴瘤。对RCD-II中低级IEL增殖的深入研究揭示了这样的特征性表型：存在细胞内CD3而没有表面CD3或TCR，且通常没有CD8表达与CD103表达，这与高级EATL增殖相同。该表型不同于非复发型乳糜泻中IEL的正常表型，并且连同肠活检物中克隆TCR重排的普遍存在一起证实了RCD的诊断并允许继续扩充。

RCD-II的治疗是困难的，因为异常淋巴细胞分散在整个小肠上皮中，并且通常分散在胃和结肠中，因此妨碍了手术的进行。此外，RCD-II没有护理标准。尝试化学疗法对患者来说大多是无效和/或危险的。克拉屈滨(Tack等人,2011a；Tack等人,2011b)和自体骨髓移植已被使用并显示短暂改善消化症状和组织结构，但不改善单克隆增殖。RCD-II的预后很差，在3-10年内会发生死亡，主要是由于顽固性腹泻、EATL或低级淋巴细胞增殖向其他组织(例如皮肤、肺)的罕见传播。

EATL是一种高级系统性T细胞淋巴瘤，几乎完全被视为RCD-II的并发症(Nijeboer等人,2015)。诊断包括成像和组织学，以显示在诸如淋巴结或其他器官的上皮外位置存在恶性T细胞。EATL的治疗依赖于手术切除和化学疗法，但预后非常差，5年存活率低于20％(Nijeboer等人,2015)。

EATL的发生率正在增加，这种增加可能与长期饮食中麸质污染的盛行率上升有关(Sharaiha等人,2012)。可缓解异常IEL的存在、组织学异常和/或症状的有效RCD-II治疗方法仍然是最优先考虑的事项。CD、RCD和ETCL的特征概述总结在下表1中。

表1.乳糜泻、难治性乳糜泻和肠病相关T细胞淋巴瘤的特征

本发明提供了用于通过施用治疗有效量的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG714)或其抗原结合片段来治疗I型或II型难治性乳糜泻的方法和组合物。在一些实施方案中，治疗有效量的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段在例如治疗RCD-I或RCD-II时可以实现以下中的一种或多种：(1)测量免疫反应，方式为定量如流式细胞术评估的异常肠上皮内淋巴细胞(IEL)与总IEL的百分比相比基线的降低；(2)测量免疫反应，方式为定量异常IEL与肠上皮细胞的百分比相比基线的降低；(3)组织学反应：小肠绒毛高度与隐窝深度(VH:CD)比率、Marsh得分或总IEL计数相比基线提高；和/或(4)临床反应：临床症状相比基线发生变化，评估方式为布里斯托尔粪便形式量表(BSFS)和胃肠道症状评定量表(GSRS)，包括乳糜泻GSRS(CeD-GSRS)。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物的量或单位剂量可包括约1-50mg/kg(患者体重)的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述单位剂量可以是：约1-10mg/kg、约10-20mg/kg、约20-30mg/kg、约30-40mg/kg或约40-50mg/kg或更高或更低或之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约1-5mg/kg、约5-10mg/kg、约10-15mg/kg、约15-20mg/kg、约20-25mg/kg。、约25-30mg/kg、约30-35mg/kg、约35-40mg/kg、约40-45mg/kg或约45-50mg/kg。在一些实施方案中，优选的剂量可包括：约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30、约31、约32、约33、约34、约35、约36、约37、约38、约39、约40、约41、约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、约49或约50mg/kg的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物的量或单位剂量可包括约50-1000mg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述单位剂量可以是：约50-100mg、约100-150mg、约150-200mg、约200-250mg、约250-300mg、约300-350mg、约350-400。mg、约400-450mg、约450-500mg、约500-550mg、约550-600mg、约600-700mg、约700-800mg、约800-900mg或约900-1000mg或更高或更低或之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约50-60mg、约60-70mg、约70-80mg、约80-90mg、约90-100mg、约100-110mg、约110-120mg、约120-130mg、约130-140mg、约140-150mg、约150-160mg、约160-170mg、约170-180mg、约180-190mg、约190-200mg、约200-210mg、约210-220mg、约220-230mg、约230-240mg、约240-250mg、约250-260mg、约260-270mg、约270-280mg、约280-290mg、约290-300mg、约300-310mg、约310-320mg、约320-330mg、约330-340mg、约340-350mg、约350-360mg、约360-370mg、约370-380mg、约380-390mg、约390-400mg、约400-410mg、约410-420mg、约420-430mg、约430-440mg、约440-450mg、约450-460mg、约460-470mg、约470-480mg、约480-490mg、约490-500mg、约500-510mg、约510-520mg、约520-530mg、约530-540mg、约540-550mg、约550-560mg、约560-570mg、约570-580mg、约580-590mg、约590-600mg、约600-610mg、约610-620mg、约630-640mg、约640-650mg、约650-660mg、约660-670mg、约670-680mg、约680-690mg或690-700mg的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述量或单位剂量可以是：约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约105、约110、约115、约120、约125、约130、约135、约140、约145、约150、约155、约160、约165、约170、约175、约180、约185、约190、约195、约200、约205、约210、约220、约225、约230、约235、约240、约245、约250、约255、约260、约265、约270、约275、约280、约285、约290、约295、约300、约305、约310、约315、约320、约325、约330、约335、约340、约345、约350、约355、约360、约365、约370、约375、约380、约385、约390、约395、约400、约405、约410、约415、约420、约425、约430、约435、约440、约445、约450、约455、约460、约465、约470、约475、约480、约485、约490、约495、约500、约505、约510、约515、约520、约525、约530、约535、约540、约545、约550、约555、约560、约565、约570、约575、约580、约585、约590、约595、约600、约605、约610、约615、约620、约625、约630、约635、约640、约645、约650、约655、约660、约665、约670、约675、约680、约685、约690、约695或约700mg或以上任何两个数值之间的任何数值的本文公开的抗IL-15抗体(例如AMG 714)或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，根据疾病的严重程度和/或治疗的有效性，每位受试者可以接受本文公开的至少一个(例如1-100个)单位剂量。例如，受试者可以接受2-20个单位剂量，这些单位剂量彼此可相同或不同(例如，一个或多个初始单位剂量可以小于或大于后面的单位剂量)。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物可以每1-20周通过皮下或静脉内注射以本文公开的单位剂量施用。在一个实施方案中，皮下施用所述药物组合物。在另一个实施方案中，静脉内施用所述药物组合物。在某些实施方案中，施用可以每1-5、5-10、10-15或15-20周进行。在一些实施方案中，施用可以每1-2、2-4、4-6、6-8、8-10、10-12、12-14、14-16、16-18或18-20周进行。在一些实施方案中，施用可以每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周进行。单位剂量可以相同的间隔(例如，每1-20周)给予。另选地，至少一部分单位剂量以与其他单位剂量不同(例如，缩短或延长)的间隔给予。在一个实例中，可以在例如第1周或任何其他时间给予一个或多个额外的负荷剂量以增加剂量。

在其他方面，本发明涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗II型难治性乳糜泻患者，例如患有原位小肠T细胞淋巴瘤的患者，其中所述药物组合物包含抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在其他实施方案中，所述药物组合物包含75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一个具体实施方案中，所述药物组合物包含8mg/kg的AMG 714。在一些实施方案中，每1、2或4周施用(例如，静脉内施用)所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，每2周施用(例如，静脉内施用)所述药物组合物。在另一个具体实施方案中，每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，每2周皮下施用所述药物组合物。

在一些方面，本发明涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗II型难治性乳糜泻患者例如患有原位小肠T细胞淋巴瘤的患者的方法，其中所述方法包括施用(例如，静脉内施用)抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，所述方法包括施用(例如，静脉内施用)75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在某些实施方案中，所述方法包括施用(例如，静脉内施用)8mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG714)。在一些实施方案中，所述方法包括每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在一个实施方案中，所述方法包括每2周皮下施用。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每1、2或4周静脉内施用，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每2周静脉内施用。

在另一方面，本发明涉及一种治疗II型难治性乳糜泻患者或患有原位小肠T细胞淋巴瘤的患者的方法，其中所述方法包括施用(例如，静脉内施用)抗IL-15抗体(例如AMG714)。在一些实施方案中，所述方法包括施用(例如，静脉内施用)75mg、150mg、300mg、600mg、4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在某些实施方案中，所述方法包括施用(例如，静脉内施用)8mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在一些实施方案中，所述方法包括每1、2或4周皮下施用所述药物组合物，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在一个实施方案中，所述方法包括每2周皮下施用。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每1、2或4周静脉内施用，直至例如体征和/或症状减轻或消除。在另一个具体实施方案中，所述方法包括每2周静脉内施用。

在本文所述的药物组合物和方法的具体实施方案中，每2周一次(q2w)静脉内施用8mg/kg的抗IL-15抗体(例如AMG 714)。在本文所述的药物组合物和方法的其他具体实施方案中，在第0周、第1周静脉内施用8mg/kg的抗IL 15抗体(例如AMG 714)，此后每2周施用一次(q2w)。

实施例

实施例1：评估AMG714在成人乳糜泻患者中的功效和安全性的2a期、随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究

在示例性临床试验中，AMG 714可以施用于成人CD患者。本研究的主要目的是评估AMG 714在减轻成人CD患者中麸质暴露影响方面的功效。次要目的是评估AMG 714在施用于暴露于麸质激发的成人乳糜泻患者时的安全性和耐受性。探索性目的是评估AMG714的药代动力学(PK)、药效动力学(PD)和PK/PD相关性。

主要结果/终点量度：如通过从基线到第12周VH:CD比率的变化所评估的，麸质诱导的小肠粘膜损伤的减轻。时间范围：基线和12周。VH:CD是小肠绒毛长度相对于隐窝深度的形态测量量度。

次要结果/终点量度：

(1)如通过组织切片中上皮内淋巴细胞(IEL)的计数所测量的，与基线相比第12周时麸质诱导的小肠粘膜炎症的减轻。时间范围：基线和12周。可以对小肠活检物进行处理并用苏木精-伊红染色剂染色，并计算每100个上皮细胞中的IEL数。

(2)与基线(抗脱酰胺醇溶蛋白肽，DGP)和自身抗体(抗转谷氨酰胺酶，ATG)相比，第12周时麸质诱导的血清抗体的减少。时间范围：基线和12周。可以通过ELISA技术，在血清中测量DGP和ATG抗体。

(3)如通过胃肠道症状评定量表(GSRS)所测量的，与基线相比第12周时麸质诱导的临床症状的减轻。时间范围：基线和12周。可以在每次访视时填写GSRS调查问卷(大约每月一次)。

其他结果/终点量度：如通过发生药物相关不良事件的受试者的比例所评估的，AMG 714的安全性和耐受性。时间范围：12周。从筛查到研究结束，可以持续捕获不良事件和严重不良事件。

研究设计

该方案旨在进行2a期、随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究，以评估AMG 714减轻麸质激发期间成人乳糜泻患者中麸质暴露的影响的功效和安全性。

所有受试者以1:1:1的比率随机分组，每两周一次接受150mg或300mg的AMG 714或安慰剂，持续10周。随机化按性别分层。可以通过皮下(SC)注射以双盲方式在临床部位施用研究药物(AMG714或安慰剂)。

除了接受研究药物或安慰剂之外，所有受试者将被要求以单盲方式服用安慰剂麸质或活性麸质。

所有研究受试者可以在基线(第1次访视，第0周/第0天)之前和在12周研究期结束时(仍然进行麸质激发)以及第7次访视(第12周/第84天)之前的5天内进行上胃肠道内窥镜检查和活组织检查，以评估与基线相比VH:CD比率、IEL和Marsh得分的变化。

将持续监测安全性，如果出于安全性原因需要，可能会对受试者进行计划外访视。将通过临床实验室测试、体格检查、生命体征和AE监测，在整个研究过程中评估安全性。

受试者纳入标准：

·在筛查前至少12个月通过肠活组织检查诊断患有乳糜泻

·无麸质饮食持续至少12个月

·乳糜泻血清学阴性

·避孕

排除标准：

·严重的乳糜泻并发症，诸如难治性乳糜泻

·乳糜泻症状

·其他伴随的自身免疫性疾病

·慢性、活动性胃肠疾病

·感染、伴随疾病

·服用违禁药物

在一个实施方案中，为乳糜泻研究选择的给药水平是通过皮下注射(SC)每2周一次(q2w)施用150和300mg。虽然之前没有在乳糜泻中使用AMG 714的经验，也没有对该疾病中潜在的PK/PD关系的任何理解，但迄今为止毒理学和人体研究支持本研究选择的给药方案。在之前的临床试验中研究的最高AMG 714剂量是单次SC剂量700mg和SC剂量300mg，每两周一次，持续12周，迄今未发现安全性信号。

预计该给药方案将提供高于体外使用的AMG 714浓度(10μg/mL)的谷值水平，以诱导活动性乳糜泻患者的活检物中活化的IEL的凋亡(Malamut等人,2010)。

可以通过频繁的PK采样监测血清暴露。可以监测组织效应，在将从整个研究中获得的活检物中测量实验生物标记物。

实施例2：评估AMG 714在患有II型难治性乳糜泻的成人患者中的功效和安全性的2a期研究

在示例性临床试验中，可以在患有II型难治性乳糜泻的成人患者中研究AMG 714的功效和安全性。本研究的主要目的是评估AMG714在治疗成人患者的RCD-II方面的功效。本研究的次要目的是评估AMG 714在施用于患有RCD-II的成人患者时的安全性和耐受性。本研究的探索性目的是评估AMG 714的药代动力学(PK)、药效动力学(PD)和PK/PD相关性。

主要结果/终点量度包括免疫反应，例如与基线相比异常小肠肠上皮内淋巴细胞(表面CD3-细胞内CD3+)％的减少。时间范围：基线和12周。与基线相比异常肠上皮内淋巴细胞百分比的减少可以在小肠活检物收集后例如通过流式细胞术来测量。

次要结果/终点量度：

(1)组织学反应：如通过肠活检物中绒毛高度与隐窝深度(VH:CD)比率所测量的，与基线相比小肠形态的改善。时间范围：基线和12周。

(2)临床反应：如通过胃肠道症状评定量表(GSRS)所测量的，与基线相比临床症状的变化。时间范围：基线和12周。

其他结果/终点量度包括安全性和耐受性：如通过不良事件通用术语标准(CTCAE)所评估的，发生治疗相关不良事件的参与者的数量。时间范围：12周。可以收集和分析不良事件的频率和性质。

研究设计

该方案旨在进行2a期、随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究，以评估AMG 714治疗患有RCD-II的成人患者的功效和安全性。

符合研究入选标准的所有受试者可以2:1的比率随机分组，每2周接受8mg/kg的AMG 714或安慰剂，10周内共7次，并在第12周评估主要终点。可以在120分钟内通过静脉内(IV)输注以双盲方式在临床部位施用AMG 714或安慰剂。

从随机化前6个月到最终研究访视(第9次访视，第16周/第112天)，预期受试者将保持遵守严格的无麸质饮食(GFD)。

最终研究剂量将在第7次访视(第10周/第70天)时施用。研究结束功效访视将在第8次访视(第12周/第84天)时进行。最后一次研究访视将在第9次访视的最后一剂研究药物后6周(第16周/第112天)进行。

所有研究受试者可以在基线之前(即在第1次访视，第0周/第0天之前)和在第8次访视(第12周/第84天)的7天内进行上胃肠道内窥镜检查与粘膜活组织检查，以评估与基线相比异常和反常IEL、VH:CD比率、TCR克隆性、Marsh得分和总IEL计数的变化。

可以持续监测安全性，如果需要，可以出于安全性原因对受试者进行计划外访视。将通过临床实验室测试、体格检查、生命体征和AE监测，在整个研究过程中评估安全性。

受试者纳入标准：

·确诊2型难治性乳糜泻(RCD-II)

·如通过流式细胞术所评估的，异常上皮内淋巴细胞(IEL)大于20％

·无麸质饮食持续至少6个月

·避孕

排除标准：

·肠病相关T细胞淋巴瘤(EATL)

·感染

·免疫抑制

·临床上显着的并存病

建议的剂量为8mg/kg IV，持续10周，每2周一次(q2w)，在第1周给予额外剂量，该剂量可以导致RCD-II特有的推定蛋白丢失性肠病(基于RCD-II患者中的白蛋白水平，可预计蛋白质丢失高达40％)以及更大的靶器官区域(小肠，与更局部化的关节相比)。

本公开的各个方面可以单独使用，组合使用，或者以未在前面描述的实施方案中具体讨论的各种布置使用，因此其应用不限于前述描述中陈述的或附图中示出的组件的细节和布置。例如，一个实施例中描述的方面可以以任何方式与其他实施方案中描述的方面组合。此外，本文使用的措辞和术语是出于说明目的，而不应被视为有限制作用。

在权利要求中使用序数术语诸如“第一”、“第二”、“第三”等来修饰权利要求元素，本身并不意味着一个权利要求元素较之另一个权利要求元素的任何优先权、优先级或顺序，也不意味着执行一方法的各动作的时间顺序，而是仅用作将具有特定名称的一个权利要求元素与具有相同名称的另一个元素(但是使用了序数术语)区分的标签以便区分权利要求元素。

此外，本文使用的措辞和术语是出于说明目的，而不应被视为有限制作用。本文中“包括”、“包含”或“具有”、“含有”、“涉及”及其变型的使用旨在涵盖其后列出的项目和项目等同物以及附加项目。“基本上由……组成”意味着包含其后列出的项目，并且对不实质性影响本发明的基本和新颖特性的未列出的项目开放。

以引用的方式并入

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本文提及的所有出版物、专利和序列数据库条目据此以引用的方式整体并入，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指出以引用方式并入。

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Claims (30)

1.一种治疗有需要的受试者的乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约50-1000mg，优选75-600mg，更优选约75mg、约150mg、约300mg或约600mg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO:5-7的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:5-7具有至少80％序列同一性的序列。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:8-10具有至少80％序列同一性的序列。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的序列。

5.如权利要求3所述的方法，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQID NO:4的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的序列。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述治疗有效量包括以约2周的间隔施用的6个单位剂量。

7.如权利要求1或6所述的方法，其中每个单位剂量通过皮下注射或静脉内注射来施用。

8.一种用于治疗乳糜泻或非乳糜泻麸质敏感的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量待以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约50-1000mg，优选75-600mg，更优选约75mg、约150mg、约300mg或约600mg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:5-7具有至少80％序列同一性的序列。

10.如权利要求8或9所述的药物组合物，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:8-10具有至少80％序列同一性的序列。

11.如权利要求8或9所述的药物组合物，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的序列。

12.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的序列。

13.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述治疗有效量包括待以约2周的间隔施用的6个单位剂量。

14.如权利要求8或13所述的药物组合物，其中每个单位剂量通过皮下注射或静脉内注射来施用。

15.一种治疗有需要的受试者的难治性乳糜泻的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约1-50mg/kg，优选约4-16mg/kg，更优选约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg或约16mg/kg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:5-7具有至少80％序列同一性的序列。

17.如权利要求15或16所述的方法，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:8-10具有至少80％序列同一性的序列。

18.如权利要求15或16所述的方法，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的序列。

19.如权利要求17所述的方法，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的序列。

20.如权利要求15所述的方法，其中所述治疗有效量包括以2周的间隔施用的6个单位剂量，以及任选的在第1周施用的额外负荷剂量。

21.如权利要求15或20所述的方法，其中每个单位剂量通过皮下注射或静脉内注射来施用。

22.如权利要求15所述的方法，其中所述难治性乳糜泻是I型或II型。

23.一种用于治疗难治性乳糜泻的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的抗IL-15抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗有效量包括1-20个单位剂量，每个单位剂量以约1-12周的间隔施用，每个单位剂量独立地包含约1-50mg/kg，优选约4-16mg/kg，更优选约4mg/kg、约8mg/kg、约12mg/kg或约16mg/kg的所述抗IL-15抗体或其抗原结合片段。

24.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:5-7的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:5-7具有至少80％序列同一性的序列。

25.如权利要求23或24所述的药物组合物，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8-10的一个或多个互补决定区，或与SEQ ID NO:8-10具有至少80％序列同一性的序列。

26.如权利要求23或24所述的药物组合物，其中所述抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的序列。

27.如权利要求25所述的药物组合物，其中所述抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的序列。

28.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述治疗有效量包括待以2周的间隔施用的6个单位剂量，以及任选的待在第1周施用的额外负荷剂量。

29.如权利要求23或28所述的药物组合物，其中每个单位剂量通过皮下注射或静脉内注射来施用。

30.如权利要求23所述的方法，其中所述难治性乳糜泻是I型或II型。