TW202003577A

TW202003577A - 用於在未曾接受過治療之個體治療癌症的標靶性TGF-β抑制之給藥方案

Info

Publication number: TW202003577A
Application number: TW108116801A
Authority: TW
Inventors: 勞利歐傑佛; 巴瓦伯沙曼艾爾; 伊莎貝爾杜沙特; 優利亞維格美斯特; 阿卡許坎德瓦; 歐雷夫克里史坦森
Original assignee: 德商馬克專利公司
Priority date: 2018-05-15
Filing date: 2019-05-15
Publication date: 2020-01-16
Also published as: CN112118858A; US20210061899A1; MX2020011638A; KR20210009339A; JP2021523096A; SG11202011148VA; WO2019222252A1; CA3096844A1; EP3813868A1; BR112020021082A2; AU2019271065A1; EP3813868A4

Abstract

本發明係關於利用雙功能性融合蛋白進行標靶性TGF-β抑制之給藥方案，其係用於未曾接受過治療之患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中。

Description

用於在未曾接受過治療之個體治療癌症的標靶性TGF-β抑制之給藥方案

本發明大體上係關於利用雙功能性融合蛋白進行標靶性TGF-β抑制之給藥方案，其係用於未曾接受過治療之患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中。

計劃性死亡1 (PD-1)/PD-L1軸線係一種腫瘤免疫逃避之重要機制。長期感測抗原之效應T細胞呈現藉由PD-1表現標記之耗盡表型，此係腫瘤細胞藉由上調PD-L1 所處之狀態。另外，在腫瘤微環境中，骨髓細胞、巨噬細胞、實質細胞及T細胞上調PD-L1。阻斷該軸線使此等T細胞中之效應功能恢復。

以引用之方式併入本文中之美國專利申請公開案第US 20150225483 A1號描述一種雙功能性融合蛋白，其將抗計劃性死亡配位體1 (PD-L1)抗體與作為TGFβ中和「陷阱」之II型腫瘤生長因子β受體(TGFβRII)之可溶性細胞外域組合成單分子。具體而言，蛋白質為雜四聚體，其由抗PD-L1之兩條免疫球蛋白輕鏈及包含抗PD-L1之重鏈經由可撓性甘胺酸-絲胺酸連接子基因融合於人類TGFβRII之細胞外域的兩條重鏈組成(參見圖1)。此抗PD-L1/TGFβ陷阱分子經設計以靶向腫瘤微環境中免疫抑制之兩個主要機制。美國專利申請公開案第US 20150225483 A1號描述在基於患者重量之劑量下陷阱分子之投與。

肺癌係美國癌症死亡之主要原因，且引起之癌症死亡比組合之乳癌、前列腺癌及結腸直腸癌多。非小細胞肺癌佔所有肺癌之大約80%。據估計，2018年僅僅在美國就有234,030例新的肺癌及支氣管癌，且154,050人將死於肺癌(Siegel, 2018)。在歐洲，預測2017年有275,700例由肺癌引起之死亡(Malvezzi, 2017)。據估計，2012年全世界診斷出1800萬例新的肺癌，佔新診斷癌症總數之約13% (Ferlay, 2012)。免疫檢查點抑制劑已顯示在非小細胞肺癌(NSCLC)患者中改善之治療結果；然而，仍有空間進一步提高益處。

本發明提供用於投與靶向PD-L1及TGFβ之雙功能性蛋白質之改良給藥方案。具體而言，與體重無關(與BW無關)之給藥方案及相關劑型可用作抗腫瘤及抗癌療法，該等給藥方案包括投與至少500 mg (例如1200 mg、2400 mg)雙功能性蛋白質，以多種給藥頻率投與。與BW無關之給藥方案確保所有患者無論其體重如何，其在腫瘤位點均具有足夠藥物暴露。

本發明之雙功能性蛋白質(抗PD-L1/TGFβ陷阱分子)包括第一多肽及第二多肽。第一多肽包括∶(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段(例如可溶性片段)。第二多肽至少包括結合PD-L1之抗體之輕鏈可變區，其中第一多肽之重鏈與第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點(例如本文所述之任一抗體或抗體片段)。因為本發明之雙功能性蛋白質結合於兩個標靶：(1) PD-L1，其主要結合膜；及(2) TGFβ，其可溶於血液及間質中，所以與BW無關之給藥方案需要不僅在腫瘤位點有效抑制PD-L1，且亦足夠抑制TGFβ之劑量。

在一個態樣中，本發明提供一種在未曾接受過治療之個體中治療癌症或抑制腫瘤，例如非小細胞肺癌(例如晚期非小細胞肺癌)、黑色素瘤、胰臟癌、結腸直腸癌(例如預治療之結腸直腸癌(CRC))、卵巢癌、神經膠母細胞瘤、胃癌(例如預治療之復發性或難治性不可切除性IV期胃癌)、膽道癌、食道癌(鱗狀細胞癌或腺癌)、頭或頸部腺瘤及頭或頸部鱗癌之方法。在一個態樣中，本發明提供一種治療具有高PD-L1表現之NSCLC之方法，其係藉由向有需要之個體投與本發明中描述之抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。在某些實施例中，本發明提供一種在未曾接受過治療之有需要之個體中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法，其係藉由每兩週向該個體投與1200 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ陷阱分子一次。在某些其他實施例中，本發明提供一種在未曾接受過治療之有需要之個體中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法，其係藉由每三週向該個體投與2400 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ陷阱分子一次。

本發明亦提供一種促進TGFβ局部耗盡之方法。該方法包括投與上述蛋白質，其中該蛋白質結合溶液中之TGFβ，結合細胞表面上之PD-L1，且將結合之TGFβ攜帶至細胞(例如癌細胞)中。

本發明亦提供一種抑制細胞(例如癌細胞或免疫細胞)中SMAD3磷酸化之方法，該方法包括將腫瘤微環境中之細胞暴露於上述蛋白質。

「TGFβRII」或「TGFβ受體II」意謂具有野生型人類TGFβ受體2型同功異型物A序列(例如NCBI參考序列(RefSeq)寄存編號NP_001020018之胺基酸序列(SEQ ID NO: 8))之多肽，或具有野生型人類TGFβ受體2型同功異型物B序列(例如NCBI參考序列RefSeq寄存編號NP_003233之胺基酸序列(SEQ ID NO: 9))或具有與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9之胺基酸序列實質上一致之序列的多肽。TGFβRII可保留TGFβ與野生型序列結合之活性的至少0.1%、0.5%、1%、5%、10%、25%、35%、50%、75%、90%、95%或99%。表現之TGFβRII之多肽缺乏信號序列。

「能夠結合TGFβ之TGFβRII之片段」意謂保留野生型受體或對應野生型片段之至少一些TGFβ結合活性(例如至少0.1%、0.5%、1%、5%、10%、25%、35%、50%、75%、90%、95%或99%)的NCBI RefSeq寄存編號NP_001020018 (SEQ ID NO: 8)或NCBI RefSeq寄存編號NP_003233(SEQ ID NO: 9)之任何部分，或與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9實質上一致之長度為至少20個(例如至少30個、40個、50個、60個、70個、80個、90個、100個、110個、120個、130個、140個、150個、160個、175個或200個)胺基酸的序列。通常，此類片段為可溶性片段。例示性此類片段為具有SEQ ID NO: 10之序列的TGFβRII胞外結構域。能夠結合TGFβ之人類TGFβRII之某些其他例示性片段由SEQ ID NO: 50、51、52、53或54之序列表示。

「未曾接受過治療」係指個體或患者先前未曾接受過針對其晚期/IV期NSCLC之全身治療。

「PD-L1陽性」或「PD-L1+」指示如例如藉由Dako IHC 22C3 PharmDx分析或藉由VENTANA PD-L1 (SP263)分析所測定，≥1% PD-L1陽性腫瘤細胞。

「PD-L1高」或「高PD-L1」係指如藉由PD-L1 IHC 73-10分析(Dako)所測定，≥80% PD-L1陽性腫瘤細胞，或如藉由Dako IHC 22C3 PharmDx分析所測定，腫瘤比例評分(TPS)≥50% (TPS係此項技術中與IHC 22C3 PharmDx分析相關之術語，其描述具有部分或完整膜染色(例如針對PD-L1染色)之活腫瘤細胞之百分比)。IHC 73-10與IHC 22C3分析在其相應截止值下選擇類似患者群體。在某些實施例中，VENTANA PD-L1 (SP263)分析與22C3 PharmDx分析(參見Sughayer等人,Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. , (2018))高度一致，亦可用於確定PD-L1高表現水準。

「實質上一致」意謂展示與參考胺基酸序列至少50%、理想地60%、70%、75%或80%、更理想85%、90%或95%及最理想99%胺基酸序列一致性之多肽。比較序列之長度一般為至少10個胺基酸，理想地至少15個連續胺基酸，更理想至少20個、25個、50個、75個、90個、100個、150個、200個、250個、300個或350個連續胺基酸，且最理想全長胺基酸序列。

「患者」意謂人類或非人類動物(例如哺乳動物)。「患者」、「個體」、「有需要之患者」及「有需要之個體」在本發明中可互換使用，且係指罹患可使用本發明中所提供之方法及組合物藉由投與來治療之疾病或病狀或者易患上該疾病或病狀的活有機體。

如本發明中所用，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」及其他語法上同等物包括緩解、緩和、改善或預防疾病、病狀或症狀；預防其他症狀；改善或預防症狀之根本代謝病因；抑制疾病或病狀，例如阻止疾病或病狀之發展；減輕疾病或病狀；引起疾病或病狀消退；減輕疾病或病狀所引起之病狀；或終止疾病或病狀之症狀，且意欲包括預防。該等術語進一步包括達成治療益處及/或預防益處。治療益處意謂根除或改善所治療之根本病症。此外，藉由根除或改善與根本病症相關之一或多種生理症狀以使得在患者中觀測到改善來實現治療益處，但該患者仍可能罹患該根本病症。

「癌症」意謂晚期/IV期非小細胞肺癌(NSCLC)。

在整個本說明書之實施方式及申請專利範圍中，詞語「包含(comprise)」及該詞語之其他形式諸如「包含(comprising)」及「包含(comprises)」意謂包括(但不限於)，且並不意欲排除例如其他組分。

「共同投與」意謂本文所述之組合物同時投與，在即將投與其他療法時投與，或在剛剛投與其他療法之後投與。本發明之蛋白質及組合物可單獨投與患者，或可與第二、第三或第四治療劑共同投與患者。共同投與意謂包括個別或組合地(超過一種治療劑)同時或相繼投與蛋白質或組合物。

術語「一種」不意謂限制為單數。在某些實施例中，術語「一種」可指複數形式。如本發明通篇所用，除非上下文以另外方式明確規定，否則單數形式「一種(a/an)」及「該」包括複數個參考物。因此，舉例而言，對「一種組合物」之提及包括複數種此類組合物，以及單一組合物。

「復原」調配物係藉由將凍乾調配物溶解於水性載劑中，使得雙功能性分子溶解於復原調配物中而製備之調配物。復原調配物適合於靜脈內投與(IV)有需要之患者。

術語「約」係指在製備調配物及治療疾病或病症時不改變藥劑功效的藥劑濃度或量之任何最小改變。在實施例中，術語「約」可包括指定數值或數據點±15%。

範圍可在本發明中表示為「約」一個特定值及/或至「約」另一特定值。當表示此類範圍時，另一個態樣包括一個特定值及/或至其他特定值。類似地，當藉由使用前綴「約」將值表示為近似值時，應瞭解特定值形成另一態樣。進一步瞭解範圍中之每一者的端點在相對於其他端點及獨立於其他端點時均為重要的。亦應瞭解本發明中揭示大量值，且除該值本身之外，各值亦揭示為「約」特定值。亦應瞭解在本申請案通篇中，數據以多個不同形式提供且此數據表示端點及起點以及該等數據點之任何組合之範圍。舉例而言，若揭示特定數據點「10」及特定數據點「15」，則應瞭解視為揭示大於、大於或等於、小於、小於或等於及等於10與15以及在10與15之間。亦應瞭解亦揭示兩個特定單元之間的各單元。舉例而言，若揭示10及15，則亦揭示11、12、13及14。

「等張」調配物係滲透壓基本上與人類血液相同之調配物。等張調配物之滲透壓將一般為約250至350 mOsmol/KgH₂ O。術語「高滲透壓」用於描述滲透壓超過人類血液之調配物。等張性可使用例如蒸氣壓或冰冷凍型滲透計量測。

術語「緩衝劑」係指當添加至水溶液時能夠保護溶液對抗添加酸或鹼時或用溶劑稀釋時pH值之變化的一或多種組分。除磷酸鹽緩衝液之外，可使用甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝液及其類似物，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。

「酸」為在水溶液中產生氫離子之物質。「醫藥學上可接受之酸」包括在其調配濃度及方式下無毒之無機酸及有機酸。

「鹼」為在水溶液中產生羥基離子之物質。「醫藥學上可接受之鹼」包括在其調配濃度及方式下無毒之無機鹼及有機鹼。

「凍乾保護劑」為一種分子，其與所關注之蛋白質組合時阻止或減少該蛋白質在凍乾及隨後儲存時的化學及/或物理不穩定性。

「防腐劑」係減少細菌作用且可視情況添加至本文中之調配物的試劑。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)調配物之產生。潛在防腐劑之實例包括十八烷基二甲基苄基氯化銨、氯化六羥季銨、氯化苯甲烴銨(烷基苄基二甲基氯化銨之混合物，其中烷基為長鏈化合物)及苄索氯銨。其他類型之防腐劑包括芳族醇(諸如苯酚)、丁醇及苄醇、對羥苯甲酸烷基酯(諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇及間甲酚。

「界面活性劑」係含有疏水性部分(例如烷基鏈)與親水性部分(例如羧基及羧酸酯基)兩者之表面活性分子。界面活性劑可添加至本發明之調配物。適用於本發明之調配物的界面活性劑包括(但不限於)聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)；脫水山梨糖醇酯及衍生物；曲拉通(Triton)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-、肉豆蔻基-、亞油醇基-或硬脂醯基-磺基甜菜鹼；月桂基-、肉豆蔻基-、亞油醇基-或硬脂醯基-肌胺酸；亞油醇基-、肉豆蔻基-或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺基丙基-、椰油醯胺基丙基-、亞油醯胺基丙基-、肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺基丙基)；肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺丙基-或異硬脂醯胺基丙基-二甲胺；甲基椰油醯基牛磺酸鈉或甲基油醇牛磺酸二鈉；及MONAQUAT^TM 系列(Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.)；聚乙二醇、聚丙二醇，及乙二醇與丙二醇之共聚物(例如Pluronics, PF68等)。

本發明之其他實施例及細節呈現於下文。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2018年5月15日申請之美國臨時專利申請案第62/671,963號及2019年2月13日申請之美國臨時專利申請案第62/804,931號的益處及優先權，其全部揭示內容以引用的方式併入本文中。序列表

本申請案含有序列表，其已呈ASCII格式以電子方式提交且以全文引用的方式併入本文中。該ASCII複本創建於2019年5月3日，命名為EMD-007WO_SL_ST25.txt且大小為75,847位元組。與體重無關之給藥方案

由本文所述之雙功能性抗PD-L1/TGFβ陷阱分子的多種臨床前及臨床評估之結果獲悉，已研發出包括向未曾接受過治療之患者投與至少500 mg該等分子的與體重無關之給藥方案。兩項研究對分子之安全性、耐受性及藥物動力學進行研究，且包括對獲自所治療患者之血液的外周血單核細胞上PD-L1標靶佔有率之評估以及對TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之濃度的量測。此等評估係基於來自總共350名個體(實體腫瘤中1、3、10及20 mg/kg之劑量遞增群組，及所選腫瘤類型中3 mg/kg、10 mg/kg、500mg及1200 mg之擴增群組)之資料。PK/ 功效模型 ( 小鼠模型 )

亦進行實驗以確定腫瘤模型中抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之功效。來自EMT-6異種移植物之功效結果用於建立PK/功效模型。小鼠中建立之PK模型用於模擬功效實驗設置之抗PD-L1/TGFβ陷阱血漿暴露。表1中報導估計參數。估計KC50值為55.3 µg/mL。此值表示可實現抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之最大抗腫瘤活性之50%的平均血漿濃度。

該模型之基礎診斷學曲線圖未顯示模型誤設。該模型預測能夠捕捉腫瘤體積分佈。條件加權殘值通常分配0平均值及1方差，無傾向。接著PK/功效模型用於在不同劑量下使用人類預測濃度-時間曲線模擬腫瘤生長抑制(TGI)。

表1∶EMT-6異種移植小鼠中抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之小鼠PK/功效模型參數

基於 PD-L1 佔有率之反應分析 ( 小鼠模型中 )

使用功效實驗，分析小鼠中之反應，且藉由腫瘤消退或腫瘤停滯進行分選，且基於整合之PK/RO模型預測PK及PD-L1受體佔有率(RO)。該方法證明達到腫瘤消退需要引起腫瘤中PD-L1 RO超過95%的介於40與100 µg/mL之間的抗PD-L1/TGFβ陷阱分子血漿濃度。達到腫瘤停滯需要引起外周中PD-L1 RO超過95%的介於10與40 µg/mL之間的抗PD-L1/TGFβ陷阱分子血漿濃度。

在小鼠中之反應分析及預測PK/RO產生圖7A至圖7C，該等圖概述小鼠中抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之PK/RO/功效。在40 µg/mL之血漿濃度下實現95%之PD-L1 RO，其中預期/估計TGI僅僅約65%。濃度增加至超過40 µg/mL額外增加腫瘤生長抑制。在約100 µg/mL之平均血漿濃度下實現95%之腫瘤生長抑制。

基於下文描述之群體PK模型，維持約100 µg/mL之平均濃度需要每兩週投與一次至少500 mg之均一劑量，而維持約100 µg/mL之C_谷需要每兩週投與一次約1200 mg之均一劑量。在某些實施例中，向個體投與約1200 mg至約3000 mg(例如約1200、約1300、約1400、約1500、約1600、約1700、約1800、約1900、約2000、約2100、約2200、約2300、約2400等)本發明之蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)。在某些實施例中，每兩週向個體投與一次約1200 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。在某些實施例中，每三週向個體投與一次約2400 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。

在實施例中，約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg等)具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物投與個體。在某些實施例中，約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg等)包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物投與個體。

在某些實施例中，每兩週向個體投與一次約1200 mg具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週向個體投與一次約2400 mg具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每兩週向個體投與一次約1200 mg包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週向個體投與一次約2400 mg包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。建立與體重無關之給藥方案

由臨床及臨床前資料獲悉，已建立新的用於投與抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之與體重無關之給藥方案，以實現暴露較小之變化性，減小給藥誤差，減少劑量製備所需之時間，且與mg/kg給藥相比減少藥物消耗，因此有助於良好治療結果。根據一個實施例，無論患者體重如何，均可投與至少500 mg之均一劑量。根據另一個實施例，無論患者體重如何，均可投與至少1200 mg之均一劑量。根據另一個實施例，無論患者體重如何，均可投與2400 mg之均一劑量。通常，重複投與此類劑量，諸如每兩週一次或每3週一次。例如，可每兩週投與一次1200 mg之均一劑量，或可每三週投與一次2400 mg之均一劑量。人類中藥物動力學 (PK) 分析取樣

藉由下文描述之實驗提供確定抗PD-L1/TGFβ陷阱之最佳均一劑量的藥物動力學分析之一實例。

在第一劑量開始之前及在第一劑量之後的以下時間點收集用於藥物動力學(PK)資料分析之血清樣品∶緊接地在輸注之後第1天及開始輸注之後4小時；在第1天輸注結束之後至少24小時的第2天；以及在第8天及第15天。在給藥前所選後續給藥時刻、輸注結束及輸注結束之後2至8小時，在第15天、第29天、第43天收集樣品。對於第57天、第71天及第85天之隨後時間點，收集或將收集給藥前樣品，接著每6週一次PK取樣，直至12週，接著每12週一次PK取樣。在擴增期，進行稀少PK取樣。

上述PK資料用於產生群體PK模型及模擬可能給藥方案。模擬方法稱為全接近模型，描述於Gastonguay, M.,Full Covariate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodology and 42 Case Studies , (2011) 第20頁, Abstract 2229中，應用於自模擬獲得之群體模型資料，以獲得具有以下特徵之參數∶具有線性消去之二室PK模型、關於CL、V1及V2之IIV、組合之累加及比例殘餘誤差、關於CL及V1之完全共變數模型。最終模型中包括以下基線共變數∶年齡、體重、性別、人種、白蛋白、CRP、血小板計數、eGFR、肝損傷、ECOG評分、腫瘤尺寸、腫瘤類型及先前生物製劑治療。獲得本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)之藥物動力學之典型參數估計值的以下估計值∶清除率(CL) 0.0177 L/h (6.2%)、中樞分佈體積(V1) 3.64 L (8.81%)、周邊分佈體積(V2) 0.513 L (25.1%)及室間清除率(Q) 0.00219 L/h (17.8%)。CL之患者間變化性為22%，V1為20%，且V2為135%。體重為CL與V1之相關共變數。為證實均一給藥法，探索該給藥策略對本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)之暴露變化性的影響。具體而言，進行模擬以比較使用每兩週一次1200 mg之均一給藥方法對比每兩週一次17.65 mg/kg (對應於68 kg個體每兩週一次1200 mg)或每兩週一次15 mg/kg (對應於80 kg個體1200 mg)之根據BW調整之給藥方法的暴露分佈。進一步進行模擬以比較使用每兩週一次500 mg之均一給藥方法對比每兩週一次7.35 mg/kg (對應於68 kg個體每兩週一次500 mg)之根據BW調整之給藥方法的暴露分佈。另外，進行模擬以評估以下每三週一次之均一劑量∶1200 mg、1400、mg、1600 mg、1800 mg、2000 mg、2200 mg、2400 mg、2600 mg、2800 mg、3000 mg。

使用以下模擬方法∶使用最終PK模型方差-協方差矩陣，自參數估計值之多變數常態分佈獲取N=200組參數估計值。對於各參數估計值，自$OMEGA多變數常態分佈獲取200個IIV估計值，得到總計40000 (200×200)個主題。在置換向對初始數據集(N=380)重新取樣，產生40000組匹配共變數，且產生穩態暴露量度(AUC、C_avg 、C_谷及C_max )用於各給藥方案。

模擬顯示在寬BW範圍中，與固定給藥相比，基於BW之給藥的暴露變化性略微較高。針對68 kg中值體重，17.65 mg/kg及1200 mg均一劑量或7.35 mg/kg及500 mg均一劑量下暴露分佈之一實例分別展示在圖6A及6E中。模擬亦顯示在患者群體中在重量分位數中暴露分佈之相反傾向∶低重量患者在固定給藥下具有較高暴露，而高重量患者在基於BW調整之給藥下具有較高暴露。在人類中建立有效劑量 / 給藥方案 ∶ 根據每 2 週一次 (q2w) 給與抗 PD-L1/TGF β 陷阱在二線非小細胞肺癌 (2L NSCLC) 中之初步劑量 - 反應

藉由下文描述之臨床研究建立抗PD-L1/TGFβ陷阱之治療功效的一實例。

將患有未針對PD-L1進行選擇之晚期NSCLC的在一線標準治療後(先前未進行免疫療法)進展之患者隨機化，以接受每兩週一次(q2w) 500 mg或1200 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ陷阱(每群組n=40)，直至疾病進展、毒性不可接受或退出試驗。主要目標係根據實體腫瘤反應評估標準1.1版(RECIST v1.1)評估最佳總反應(BOR)。其他目標包括劑量探索及安全性/耐受性評定。腫瘤細胞PD-L1表現水準(Ab純系73-10 (Dako) [＞80% = ＞50%具有22C3])之特徵在於PD-L1 ＜1%、≥1% (PD-L1+)或≥80% (PD-L1高)。可在75名患者中評估腫瘤細胞PD-L1表現。

截至分析時資料截止，80名患者接受抗PD-L1/TGFβ陷阱，中值為11.9週(範圍，2-66.1)，其中中值隨訪為51.1週。十名患者保持繼續治療。經研究者評估之經證實總反應率(ORR)為23.8% (500 mg ORR，20.0%；1200 mg ORR，27.5%)，其中在兩個劑量中看到18例部分反應(PR)，且在1200 mg下看到1例完全反應(CR)。如表2中所示，在PD-L1表現水準中觀測到臨床活性∶在1200 mg下，PD-L1+中ORR為37.0%，且PD-L1高患者中為85.7%。最常見治療相關不良事件(TRAE)為瘙癢(20.0%)、斑狀丘疹(18.8%)及食慾降低(12.5%)。23名患者中出現3級TRAE(28.8%)，且2名患者中出現4級TRAE。八名患者(500 mg，n=2；1200 mg，n=6)由於TRAE中斷治療。未出現治療相關之死亡。

表2∶在每2週一次用500 mg或1200 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱治療之2L NSCLC患者中觀測到之反應率

此等結果證明抗PD-L1/TGFβ陷阱單一療法具有良好耐受性，且顯示在PD-L1子組中之功效，其中在1200 mg下PD-L1+及PD-L1高患者中ORR分別為37.0%及85.7%。在較高PD-L1腫瘤細胞表現下反應率顯著改良(例如在1200 mg治療患者)的情況下，預期作為2L治療所觀測到的抗PD-L1/TGFβ陷阱之此有前景活性在未曾接受過治療之PD-L1高晚期NSCLC患者中轉變為一線(1L)療法或作為一線(1L)療法增加。建立多種給藥頻率之給藥方案

已建立多種給藥頻率之資料方案，以允許較不頻繁投與及/或允許給藥時程與相伴藥物治療配合。具體而言，上述初步群體PK模擬及模擬方法已用於模擬多種給藥方案之暴露及基於暴露比較方案。

基於此等模擬，典型個體維持約100 µg/mL之平均濃度需要每兩週一次投與至少500 mg之均一劑量，而維持約100 µg/mL之C_谷需要每兩週一次投與約1200 mg之均一劑量。

基於C_avg 之模擬，每兩週一次1200 mg等於每三週一次1800 mg，而對於C_谷，每兩週一次1200 mg等於每三週一次2800 mg。且對於C_avg ，每兩週一次500 mg等於每三週一次750 mg；對於C_谷，每兩週一次500 mg等於每三週一次1,167 mg。作為癌症標靶之TGFβ

本發明允許藉由使用繫栓至靶向在某些腫瘤細胞或免疫細胞之外表面上發現之細胞免疫檢查點受體之抗體部分的可溶性細胞介素受體(TGFβRII)捕捉TGFβ，使腫瘤微環境中之TGFβ局部減少。針對免疫檢查點蛋白之本發明之抗體部分的一實例為抗PD-L1。此雙功能性分子在本文中有時稱為「抗體-細胞介素陷阱」，係準確有效的，因為抗受體抗體及細胞介素陷阱以物理方式連接。所得到之益處(例如投與呈分開分子形式之抗體及受體)部分係因為細胞介素在局部環境中主要經由自分泌及旁分泌功能發揮作用。抗體部分將細胞介素陷阱引導至其最有效之腫瘤微環境，藉由中和局部免疫抑制性自分泌或旁分泌作用，發揮效力。此外，在抗體之標靶在抗體結合時內化之狀況下，提供有效清除細胞介素/細胞介素受體複合物之機制。顯示PD-L1之抗體介導之標靶內化，顯示抗PD-L1/TGFβ陷阱具有與抗PD-L1類似之內化速率。此係與使用抗TGFβ抗體不同之益處，因為首先，抗TGFβ抗體可能不完全中和；且其次，抗體可充當延長細胞介素半衰期之載劑。

實際上，如下所述，用抗PD-L1/TGFβ陷阱進行之治療因同時阻斷腫瘤細胞上之PD-L1與免疫細胞上之PD-1之間的相互作用及中和腫瘤微環境中之TGFβ而引發協同抗腫瘤作用。不受理論束縛，此可能歸因於由同時阻斷兩種主要免疫逃避機制且此外單分子實體耗盡腫瘤微環境中之TGFβ所產生的協同效應。此耗盡藉由以下來達成：(1)抗PD-L1靶向腫瘤細胞；(2)TGFβ陷阱結合腫瘤微環境中之TGFβ自分泌/旁分泌；以及(3)經由PD-L1受體介導之內吞作用破壞結合之TGFβ。此外，TGFβRII與Fc之C端(IgG之結晶片段)融合比將TGFβRII置於Fc之N端的TGFβRII-Fc有效若干倍。

TGFβ已因為其作為癌症之分子雙重人格(Jekyll and Hyde)的反常作用而成為略微可疑標靶(Bierie等人, Nat. Rev. Cancer, 2006; 6:506-20)。如一些其他細胞介素，TGFβ活性視發育階段及環境而定。實際上，TGFβ可充當腫瘤啟動子或腫瘤抑制子，影響腫瘤起始、進展及癌轉移。TGFβ之此雙重作用下之機制仍然不明確(Yang等人, Trends Immunol. 2010; 31:220-227)。雖然已假定Smad依賴性信號傳導介導TGFβ信號傳導之生長抑制，同時與Smad無關之路徑有助於其促腫瘤作用，但亦存在資料顯示Smad依賴性路徑與腫瘤進展有關(Yang等人, Cancer Res. 2008; 68:9107-11)。

已深入地研究TGFβ配位體與受體作為治療標靶。存在三種配位體同功異型物TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3，均以均二聚體之形式存在。亦存在三種TGFβ受體(TGFβR)，其稱為TGFβR I型、II型及III型(López-Casillas等人, J Cell Biol. 1994; 124:557-68)。TGFβRI為信號傳導鏈且無法結合配位體。TGFβRII以高親和力結合配位體TGFβ1及TGFβ3，而非TGFβ2。TGFβRII/TGFβ複合物募集TGFβRI，形成信號傳導複合物(Won等人, Cancer Res. 1999; 59:1273-7)。TGFβRIII為TGFβ與其信號傳導受體結合之正調控劑，且以高親和力結合所有3種TGFβ同功異型物。在細胞表面上，TGFβ/TGFβRIII複合物結合TGFβRII且接著募集TGFβRI，其取代TGFβRIII形成信號傳導複合物。

雖然三種不同TGFβ同功異型物均經由相同受體傳導信號，但已知其在活體內具有不同表現模式及不重疊功能。三種不同TGF-β同功異型物剔除小鼠具有不同表型，此表明大量非補償功能(Bujak等人, Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95)。雖然無TGFβ1小鼠具有血細胞生成及血管生成缺陷，且無TGFβ3小鼠顯示肺部發育及缺陷性齶發育，但無TGFβ2小鼠展示多種發育異常，最顯著為多種心臟畸形(Bartram等人, Circulation. 2001; 103:2745-52；Yamagishi等人, Anat Rec. 2012; 295:257-67)。此外，表明TGFβ在局部缺血及再灌注損傷之後心肌損傷之修復中起主要作用。在成人心臟中，心肌細胞分泌TGFβ，其充當自分泌以維持自發跳動速率。重要的是，心肌細胞分泌之70%-85% TGFβ為TGFβ2 (Roberts等人, J Clin Invest. 1992; 90:2056-62)。儘管心臟毒性問題由用TGFβRI激酶抑制劑進行之治療引起，但本案申請者已觀測到在猴中抗PD-L1/TGFβ陷阱缺乏毒性，包括心臟毒性。

中和TGFβ之治療方法包括使用TGFβ受體之胞外結構域作為可溶性受體陷阱及中和抗體。在受體陷阱方法中，可溶性TGFβRIII似乎為顯而易見之選擇，因為其結合所有三種TGFβ配位體。然而，TGFβRIII係一種用於生物治療劑研發之極複雜蛋白質，其在自然界中呈280-330 kD葡糖胺聚糖(GAG)-糖蛋白存在，其中細胞外域具有762個胺基酸殘基。缺乏GAG之可溶性TGFβRIII可在昆蟲細胞中產生，且顯示為一種有效TGFβ中和劑(Vilchis-Landeros等人, Biochem J 355:215, 2001)。雖然TGFβRIII之兩個分開結合域(內皮因子相關及尿調素相關)可獨立地表現，但其顯示親和力比可溶性TGFβRIII低20至100倍，且降低很多之中和活性(Mendoza等人, Biochemistry. 2009; 48:11755-65)。另一方面，TGFβRII之細胞外域長度僅僅為136個胺基酸殘基，且可作為25-35 kD之糖基化蛋白質產生。重組可溶性TGFβRII進一步顯示以200 pM之K_D 結合TGFβ1，其極其類似於細胞上全長TGFβRII之50 pM之K_D (Lin等人 J Biol Chem. 1995; 270:2747-54)。測試可溶性TGFβRII-Fc作為抗癌劑，且顯示抑制腫瘤模型中建立之鼠類惡性間皮瘤生長(Suzuki等人, Clin. Cancer Res., 2004; 10:5907-18)。因為TGFβRII不結合TGFβ2且TGFβRIII以比TGFβRII低之親和力結合TGFβ1及TGFβ3，所以TGFβRIII之內皮因子結構域與TGFβRII之細胞外域的融合蛋白在細菌中產生且在基於細胞之分析中顯示比TGFβRII或TGFβRIII更有效地抑制TGFβ1及TGFβ2之信號傳導(Verona等人, Protein Eng Des Sel. 2008; 21:463-73)。

中和TGFβ配位體之所有三種同功異型物的再一方法係篩選全中和抗TGFβ抗體，或阻斷受體與TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3結合之抗受體抗體。GC1008係一種對TGFβ之所有同功異型物具有特異性之人類抗體，其處於晚期惡性黑色素瘤或腎細胞癌患者中之I/II期研究中(Morris等人, J Clin Oncol 2008; 26:9028 (Meeting abstract))。雖然發現治療安全且具有良好耐受性，但僅僅觀測到有限臨床功效，且因此在未進一步表徵免疫作用下難以解釋抗TGFβ療法之重要性(Flavell等人, Nat Rev Immunol. 2010; 10:554-67)。臨床中亦測試TGFβ-同功異型物特異性抗體。在2期臨床試驗中測試美泊珠單抗(Metelimumab)(對TGFβ1具有特異性之抗體)，作為預防青光眼手術之過度術後結疤的治療；且在3期研究中在眼睛手術之後發現樂地單抗(Lerdelimumab)(對TGFβ2具有特異性之抗體)安全但改善結疤之效力低(Khaw等人, Ophthalmology 2007; 114:1822-1830)。阻斷受體與所有三種TGFβ同功異型物結合之抗TGFβRII抗體，諸如抗人類TGFβRII抗體TR1及抗小鼠TGFβRII抗體MT1，亦在小鼠模型中顯示針對原發性腫瘤生長及癌轉移之一些治療功效(Zhong等人, Clin Cancer Res. 2010; 16:1191-205)。然而，在抗體TR1 (LY3022859)之近期I期研究中，由於細胞介素釋放不可控，故認為超出25 mg(均一劑量)之劑量遞增係不安全的，儘管預防性治療(Tolcher等人, Cancer Chemother Pharmacol 2017; 79:673-680)。迄今，絕大部分關於靶向TGFβ之抗癌治療，包括常常極具毒性之TGFβ信號傳導之小分子抑制劑的研究主要處於臨床前階段中且所獲得之抗腫瘤功效有限(Calone等人, Exp Oncol. 2012; 34:9-16；Connolly等人, Int J Biol Sci. 2012; 8:964-78)。

本發明之抗體-TGFβ陷阱為含有能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體II (TGFβRII)之至少一部分的雙功能性蛋白質。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽為能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體2型同功異型物A (SEQ ID NO: 8)之可溶性部分。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 8之至少胺基酸73-184。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 8之胺基酸24-184。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽為能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體2型同功異型物B (SEQ ID NO: 9)之可溶性部分。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 9之至少胺基酸48-159。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 9之胺基酸24-159。在某些實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 9之胺基酸24-105。在某些例示性實施例中，TGFβ陷阱多肽含有SEQ ID NO: 10、50、51、52、53或54之序列。

在另一實施例中，本發明之抗體-TGFβ陷阱為WO 2018/205985中揭示之融合蛋白中之一者。在一些實施例中，融合蛋白為此公開案之表2中列出的構築體中之一者，諸如其構築體9或15。在其他實施例中，具有此公開案之SEQ ID NO: 11之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序列的抗體[分別對應於本發明之SEQ ID NO: 61及62]經由連接序列(G₄ S)_x G與該公開案之SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15 [分別對應於本發明之SEQ ID NO: 50及51]之TGFβRII細胞外域序列融合，其中x為4-5。作用機制

利用治療性抗體靶向T細胞抑制檢查點進行去抑制之方法係密集研究領域(評述參見Pardoll, Nat Rev Cancer. 2012; 12:253-264)。在一種方法中，抗體部分或其抗原結合片段靶向T細胞上之T細胞抑制檢查點受體蛋白質，諸如∶CTLA-4、PD-1、BTLA、LAG-3、TIM-3或LAIR1。在另一方法中，抗體部分靶向抗原呈現細胞及腫瘤細胞上之反受體(針對其自身免疫逃避，新增此等反受體中之一些)，諸如∶PD-L1 (B7-H1)、B7-DC、HVEM、TIM-4、B7-H3或B7-H4。

本發明涵蓋經由抗體部分或其抗原結合片段靶向T細胞抑制檢查點以去抑制之抗體TGFβ陷阱。為此，申請者已測試TGFβ陷阱與靶向多種T細胞抑制檢查點受體蛋白質之抗體，諸如抗PD-1、抗PD-L1、抗TIM-3及抗LAG3組合之抗腫瘤功效。

計劃性死亡1 (PD-1)/PD-L1軸線係一種腫瘤免疫逃避之重要機制。長期感測抗原之效應T細胞呈現藉由PD-1表現標記之耗盡表型，此係腫瘤細胞藉由上調PD-L1 所處之狀態。另外，在腫瘤微環境中，骨髓細胞、巨噬細胞、實質細胞及T細胞上調PD-L1。阻斷該軸線使此等T細胞中之效應功能恢復。抗PD-L1/TGFβ陷阱亦結合TGFβ (1、2及3同功異型物)，TGFβ係一種在腫瘤微環境中由包括細胞凋亡嗜中性粒細胞、骨髓衍生之抑制細胞、T細胞及腫瘤的細胞產生之抑制性細胞介素。可溶性TGFβRII對TGFβ之抑制以與CD8+ T細胞抗腫瘤作用之增加相關的方式減少惡性間皮瘤。由活化CD4+ T細胞及Treg細胞產生之TGFβ1的缺乏已顯示抑制腫瘤生長，且保護小鼠以防自發性癌症。因此，TGFβ對於腫瘤免疫逃避而言似乎為重要的。

TGFβ對正常上皮細胞具有生長抑制作用，充當上皮細胞穩態之調控劑，且其充當早期癌發生期間之腫瘤抑制因子。當腫瘤進展至惡性病時，TGFβ對腫瘤之生長抑制作用經由一或多個TGFβ路徑信號傳導組分之突變或經由致癌再程式化而消失。在喪失對TGFβ抑制之敏感性時，腫瘤繼續產生高水準TGFβ，接著高水準TGFβ用於促進腫瘤生長。TGFβ細胞介素在與腫瘤階段相關之多種癌症類型中過度表現。腫瘤微環境中之許多類型細胞產生TGFβ，包括腫瘤細胞自身、不成熟骨髓細胞、調控T細胞及基質纖維母細胞；此等細胞總體上在細胞外基質中產生大量TGFβ。TGFβ信號傳導藉由促進癌轉移、刺激血管生成及遏制先天性及適應性抗腫瘤免疫而促成腫瘤進展。作為廣泛免疫抑制因子，TGFβ直接下調活化細胞毒性T細胞及NK細胞之效應功能，且有效誘發天然CD4+ T細胞分化成免疫抑制性調節T細胞(Treg)表型。另外，TGFβ將巨噬細胞及嗜中性粒細胞極化成與免疫抑制性細胞介素產生相關的傷口癒合表型。作為治療策略，中和TGFβ活性能夠藉由恢復有效抗腫瘤免疫、阻斷癌轉移及抑制血管生成來控制腫瘤生長。

將此等路徑PD-1或PD-L1及TGFβ組合作為一種抗腫瘤方法係引人注目的。同時PD-1及TGFβ阻斷可恢復促發炎細胞介素。抗PD-L1/TGFβ陷阱包括例如人類TGFβ受體TGFβRII之細胞外域經由甘胺酸/絲胺酸連接子共價接合至完全人類IgG1抗PD-L1抗體之各重鏈之C端。考慮到PD-1/PD-L1類別之新興景象，其中反應明顯但效應量仍有增加空間，假定共同靶向互補免疫調節步驟將提高腫瘤反應。一種類似之TGF靶向劑福萊索單抗(fresolimumab)係靶向TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之單株抗體，其顯示在具有黑色素瘤之個體中I期試驗中之腫瘤反應的初始證據。

在某些實施例中，本發明提供實驗，證明抗PD-L1/TGFβ陷阱(陷阱對照「抗PDL-1(mut)/TGFβ陷阱」)之TGFβRII部分引發抗腫瘤活性。舉例而言，皮下植入Detroit 562人類咽癌模型後，當以25 µg、76 µg或228 µg投與時，抗PDL-1(mut)/TGFβ陷阱引發腫瘤體積之劑量依賴性減少(圖5)。

在某些實施例中，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質同時結合於PD-L1與TGFβ (圖2)。

在某些實施例中，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)在活體外抑制PD-L1及TGFβ依賴性信號傳導。在某些實施例中，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質在活體外經由阻斷PD-L1介導之免疫抑制而增強T細胞效應功能，如藉由超級抗原刺激後IL-2誘導分析所量測(圖3)。在大約100 ng/ml下，本發明之蛋白質在活體外誘導IL-2水準顯著增加(圖3)。

在某些實施例中，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)在活體內引起血液中TGFβ耗盡。JH小鼠中正位植入之EMT-6乳癌細胞用55 µg或164 µg或492 µg本發明之蛋白質處理有效且特定地耗盡TGFβ1 (圖4A)、TGFβ2 (圖4B)及TGFβ3 (圖4C)。此外，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質佔據PD-L1標靶，支持如下概念：本發明之蛋白質與EMT-6腫瘤系統中之受體結合模型相配(圖4D)。

在某些實施例中，本發明提供實驗，證明本發明之蛋白質有效、特異性且同時結合於PD-L1及TGFβ，在多種小鼠模型中具有有效抗腫瘤活性，遏制腫瘤生長及癌轉移，以及延長存活且賦予長期保護性抗腫瘤免疫性。

在下文描述確定活體內抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之作用機制的一實例∶

在人類首次I期劑量遞增研究中，除監測抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之藥物動力學之外，亦研究尤其針對TGFβ細胞介素之作用機制。

患者用抗PD-L1/TGFβ陷阱分子治療，該分子經靜脈內以約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約3 mg/kg、約10 mg/kg或約20 mg/kg之5個劑量水準每兩週投與一次，對樣品進行PK分析，長達第85天。在CD3+PBMC中，藉由流動式細胞量測術，自給藥前、第2天(D2)、D15及D43收集之患者血液量測PD-L1標靶佔有率。此外，在此等時間點以及D8之額外時間點，使用分析證實之Luminex基於珠粒及ECLIA之多重免疫分析，量測TGFβ1-3及促發炎細胞介素之血液含量。在一個態樣中，患者可用抗PD-L1/TGFβ陷阱分子治療，該分子經靜脈內以包括上述劑量之6個劑量水準，以約30 mg/kg或約40 mg/kg之劑量每兩週投與。對樣品進行以6個劑量水準治療之患者的PK分析，直至第6劑之後。在CD3+PBMC中，藉由流動式細胞量測術，自給藥前、第2天(D2)、D15、D43及長達D85收集之患者血液量測PD-L1標靶佔有率。此外，在此等時間點以及例如D8之額外時間點，使用分析證實之Luminex基於珠粒及ECLIA之多重免疫分析，量測TGFβ1-3及促發炎細胞介素之血液含量。

結果指示在第一週期期間抗PD-L1/TGFβ陷阱分子PK暴露以大致劑量比例方式在3至20 mg/kg之間增加，在治療之頭85天內無顯著累積。在整個給藥時間間隔中維持之3 mg/kg至20 mg/kg下PD-L1標靶佔有率約80%。進一步在0.3至20 mg/kg下IFN誘導小(D2為1.7倍)但顯著 (p=0.001，n=19)。在所有時間點，針對1至20 mg/kg劑量水準，血液中TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之水準分別減少最少99%、92%及91%。在0.3 mg/kg之較低劑量下，TGFβ1 -3水準在D2及D8耗盡，而非D15。此外，藥物PK水準與TGFβ捕獲之間存在進一步強烈相關性。因此，在1 mg/kg或更高之藥物劑量水準下實現TGFβ1-3完全捕獲。抗PD-L1抗體

本發明可包括此項技術中描述之任何抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。抗PD-L1抗體可購得，例如29E2A3抗體(Biolegend，目錄號329701)。抗體可為單株、嵌合、人類化或人類的。抗體片段包括Fab、F(ab’)2、scFv及Fv片段，其進一步詳細描述於下文中。

例示性抗體描述於PCT公開案WO 2013/079174中。此等抗體可包括包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列之重鏈可變區多肽，其中∶ (a)該HVR-H1序列為X₁ YX₂ MX₃ (SEQ ID NO: 21)； (b)該HVR-H2序列為SIYPSGGX₄ TFYADX₅ VKG (SEQ ID NO: 22)； (c)該HVR-H3序列為IKLGTVTTVX₆ Y (SEQ ID NO: 23)；此外其中：X₁ 為K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X₂ 為V、R、K、L、M或I；X₃ 為H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X₄ 為F或I；X₅ 為S或T；X₆ 為E或D。

在一實施例中，X₁ 為M、I或S；X₂ 為R、K、L、M或I；X₃ 為F或M；X₄ 為F或I；X₅ 為S或T；X₆ 為E或D。

在另一實施例中，X₁ 為M、I或S；X₂ 為L、M或I；X₃ 為F或M；X₄ 為I；X₅ 為S或T；X₆ 為D。

在另一實施例中，X₁ 為S；X₂ 為I；X₃ 為M；X₄ 為I；X₅ 為T；X₆ 為D。

在另一態樣中，根據下式，多肽進一步包括並置於HVR之間的可變區重鏈構架序列∶(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。

在另一態樣中，構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系構架序列。

在另一態樣中，至少一個構架序列為以下： HC-FR1為EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24)； HC-FR2為WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25)； HC-FR3為RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26)； HC-FR4為WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)。

在另一態樣中，重鏈多肽進一步與包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之可變區輕鏈組合，其中∶ (a)該HVR-L1序列為TGTX₇ X₈ DVGX₉ YNYVS (SEQ ID NO: 28)； (b)該HVR-L2序列為X₁₀ VX₁₁ X₁₂ RPS (SEQ ID NO: 29)； (c)該HVR-L3序列為SSX₁₃ TX₁₄ X₁₅ X₁₆ X₁₇ RV (SEQ ID NO: 30)；此外其中：X₇ 為N或S；X₈ 為T、R或S；X₉ 為A或G；X₁₀ 為E或D；X₁₁ 為I、N或S；X₁₂ 為D、H或N；X₁₃ 為F或Y；X₁₄ 為N或S；X₁₅ 為R、T或S；X₁₆ 為G或S；X₁₇ 為I或T。

在另一實施例中，X₇ 為N或S；X₈ 為T、R或S；X₉ 為A或G；X₁₀ 為E或D；X₁₁ 為N或S；X₁₂ 為N；X₁₃ 為F或Y；X₁₄ 為S；X₁₅ 為S；X₁₆ 為G或S；X₁₇ 為T。

在另一實施例中，X₇ 為S；X₈ 為S；X₉ 為G；X₁₀ 為D；X₁₁ 為S；X₁₂ 為N；X₁₃ 為Y；X₁₄ 為S；X₁₅ 為S；X₁₆ 為S；X₁₇ 為T。

在另一態樣中，根據下式，多肽進一步包括並置於HVR之間的可變區輕鏈構架序列∶(LC-FR1MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。

在另一態樣中，輕鏈構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系構架序列。

在另一態樣中，輕鏈構架序列為λ輕鏈序列。

在另一態樣中，至少一個構架序列為以下： LC-FR1為QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31)； LC-FR2為WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32)； LC-FR3為GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33)； LC-FR4為FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34)。

在另一實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體或抗原結合片段，其中∶ (a)重鏈包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中進一步：(i)該HVR-H1序列為X₁ YX₂ MX₃ (SEQ ID NO: 21)；(ii)該HVR-H2序列為SIYPSGGX₄ TFYADX₅ VKG (SEQ ID NO: 22)；(iii)該HVR-H3序列為IKLGTVTTVX₆ Y (SEQ ID NO: 23)，且； (b)輕鏈包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，其中進一步：(iv)該HVR-L1序列為TGTX₇ X₈ DVGX₉ YNYVS (SEQ ID NO: 28)；(v)該HVR-L2序列為X₁₀ VX₁₁ X₁₂ RPS (SEQ ID NO: 29)；(vi)該HVR-L3序列為SSX₁₃ TX₁₄ X₁₅ X₁₆ X₁₇ RV (SEQ ID NO: 30)；其中：X₁ 為K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X₂ 為V、R、K、L、M或I；X₃ 為H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X₄ 為F或I；X₅ 為S或T；X₆ 為E或D；X₇ 為N或S；X₈ 為T、R或S；X₉ 為A或G；X₁₀ 為E或D；X₁₁ 為I、N或S；X₁₂ 為D、H或N；X₁₃ 為F或Y；X₁₄ 為N或S；X₁₅ 為R、T或S；X₁₆ 為G或S；X₁₇ 為I或T。

在一實施例中，X₁ 為M、I或S；X₂ 為R、K、L、M或I；X₃ 為F或M；X₄ 為F或I；X₅ 為S或T；X₆ 為E或D；X₇ 為N或S；X₈ 為T、R或S；X₉ 為A或G；X₁₀ 為E或D；X₁₁ 為N或S；X₁₂ 為N；X₁₃ 為F或Y；X₁₄ 為S；X₁₅ 為S；X₁₆ 為G或S；X₁₇ 為T。

在另一實施例中，X₁ 為M、I或S；X₂ 為L、M或I；X₃ 為F或M；X₄ 為I；X₅ 為S或T；X₆ 為D；X₇ 為N或S；X₈ 為T、R或S；X₉ 為A或G；X₁₀ 為E或D；X₁₁ 為N或S；X₁₂ 為N；X₁₃ 為F或Y；X₁₄ 為S；X₁₅ 為S；X₁₆ 為G或S；X₁₇ 為T。

在另一實施例中，X₁ 為S；X₂ 為I；X₃ 為M；X₄ 為I；X₅ 為T；X₆ 為D；X₇ 為S；X₈ 為S；X₉ 為G；X₁₀ 為D；X₁₁ 為S；X₁₂ 為N；X₁₃ 為Y；X₁₄ 為S；X₁₅ 為S；X₁₆ 為S；X₁₇ 為T。

在另一態樣中，重鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列∶(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列∶(LC-FR1 MHVR-L1 )-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。

在另一態樣中，構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系序列。

在另一態樣中，一或多個重鏈構架序列如下： HC-FR1為EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24)； HC-FR2為WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25)； HC-FR3為RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26)； HC-FR4為WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)。

在另一態樣中，輕鏈構架序列為λ輕鏈序列。

在另一態樣中，一或多個輕鏈構架序列如下： LC-FR1為QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31)； LC-FR2為WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32)； LC-FR3為GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33)； LC-FR4為FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34)。

在另一態樣中，重鏈可變區多肽、抗體或抗體片段進一步包括至少C_H 1結構域。

在更特定態樣中，重鏈可變區多肽、抗體或抗體片段進一步包括C_H 1、C_H 2及C_H 3結構域。

在另一態樣中，可變區輕鏈、抗體或抗體片段進一步包括C_L 結構域。

在另一態樣中，抗體進一步包括C_H 1、C_H 2、C_H 3及C_L 結構域。

在另一特定態樣中，抗體進一步包括人類或鼠類恆定區。

在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。

在另一特定態樣中，人類或鼠類恆定區為lgG1。

在另一實施例中，本發明提供一種包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體，其中∶ (a)重鏈包括分別具有與SYIMM (SEQ ID NO: 35)、SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36)及IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37)至少80%總序列一致性之HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且 (b)輕鏈包括分別具有與TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38)、DVSNRPS (SEQ ID NO: 39)及SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40)至少80%總序列一致性之HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3。

在一特定態樣中，序列一致性為81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。

在另一實施例中，本發明提供一種包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體，其中∶ (a)重鏈包括分別具有與MYMMM (SEQ ID NO: 41)、SIYPSGGITFYADSVKG (SEQ ID NO: 42)及IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37)至少80%總序列一致性之HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且 (b)輕鏈包括分別具有與TGTSSDVGAYNYVS (SEQ ID NO: 43)、DVSNRPS (SEQ ID NO: 39)及SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40)至少80%總序列一致性之HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3。

在另一態樣中，在根據本發明之抗體或抗體片段中，與HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3之序列相比，至少如下藉由下劃線突出之彼等胺基酸保持不變∶ (a) HVR中-H1 SY IM M (SEQ ID NO: 35)， (b) HVR中-H2SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36)， (c) HVR中-H3IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37)；且進一步其中，與HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之序列相比，至少如下藉由下劃線突出之彼等胺基酸保持不變∶ (a) HVR-L1 TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38) (b) HVR-L2D VSNRPS (SEQ ID NO: 39) (c) HVR-L3SS YTSSSTRV (SEQ ID NO: 40)。

在另一態樣中，重鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列∶(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列∶(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。

在另一態樣中，構架序列係來源於人類生殖系序列。

在另一態樣中，輕鏈構架序列係來源於λ輕鏈序列。

在另一特定態樣中，抗體進一步包括人類或鼠類恆定區。

在某些實施例中，本發明提供一種包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMVWRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADWKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 44)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSN RPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 45)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO:45至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 44至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 45至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 44且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 45。

在某些實施例中，本發明提供一種包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGLEVWSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARIKLGTVTTVDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 46)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNR PSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 47)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 46至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 47至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 46且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 47。

在另一實施例中，抗體結合於人類、小鼠或食蟹獼猴PD-L1。在一特定態樣中，抗體能夠阻斷人類、小鼠或食蟹獼猴PD-L1與相應人類、小鼠或食蟹獼猴PD-1受體之間的相互作用。

在另一實施例中，抗體以5×10^-9 M或更少、較佳2×10^-9 M或更少之KD及甚至更佳1×10^-9 M或更少之KD結合於人類PD-L1。

在另一實施例中，本發明係關於抗PD-L1抗體或其抗原結合片段，其結合於包括人類PD-L1之殘基Y56及D61之功能性抗原決定基。

在一特定態樣中，功能性抗原決定基進一步包括人類PD-L1之E58、E60、Q66、R113及M115。

在一更特定態樣中，抗體結合於構形抗原決定基，包括人類PD-L1之殘基54-66及112-122。

在某些實施例中，本發明係關於抗PD-L1抗體或其抗原結合片段，其與如本文所述之根據本發明之抗體交叉競爭結合於PD-L1。

在某些實施例中，本發明提供包括上述抗PD-L1抗體中之任一者與至少一種醫藥學上可接受之載劑組合的蛋白質及多肽。

在某些實施例中，本發明提供經分離之核酸，其編碼如本文所述之多肽或抗PD-L1抗體或其抗原結合片段之輕鏈或重鏈可變區序列。在某些實施例中，本發明提供經分離之核酸，其編碼抗PD-L1抗體之輕鏈或重鏈可變區序列，其中： (a)重鏈包括分別具有與SYIMM (SEQ ID NO: 35)、SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36)及IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37)至少80%序列一致性之HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，或 (b)輕鏈包括分別具有與TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38)、DVSNRPS (SEQ ID NO: 39)及SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40)至少80%序列一致性之HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3序列。

在另一態樣中，重鏈之核酸序列為∶

且輕鏈之核酸序列為∶

(SEQ ID NO: 49)。

可用於抗PD-L1/TGFβ陷阱中之其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利申請公開案US 2010/0203056中。在本發明之一個實施例中，抗體部分為YW243.55S70。在本發明之另一實施例中，抗體部分為MPDL3289A。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 12)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 13)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 12至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 12且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 13。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 14)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 13)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 14至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 13至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 14且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 13。

可用於抗PD-L1/TGFβ陷阱中之其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利申請公開案US 2018/0334504中。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 55)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 56)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 55至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 56至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 55且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 56。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈可變區序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 57)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO: 58)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 57至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 58至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 57且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 58。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 59)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 60)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 59至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 60至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 59且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 60。

在某些實施例中，本發明提供包括重鏈及輕鏈序列之抗PD-L1抗體部分，其中∶ (a)重鏈序列具有與以下重鏈序列至少85%序列一致性： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGA (SEQ ID NO: 61)，且 (b)輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少85%序列一致性： DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 62)。

在多種實施例中，重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少86%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少86%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少87%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少87%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少88%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少88%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少89%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少89%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少90%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少90%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少91%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少91%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少92%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少92%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少93%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少93%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少94%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少94%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少95%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少95%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少96%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少96%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少97%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少97%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少98%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少98%序列一致性；重鏈序列具有與SEQ ID NO: 61至少99%序列一致性且輕鏈序列具有與SEQ ID NO: 62至少99%序列一致性；或重鏈序列包含SEQ ID NO: 61且輕鏈序列包含SEQ ID NO: 62。

可用於抗PD-L1/TGFβ陷阱中之其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利公開案US 7,943,743中。

在本發明之一個實施例中，抗PD-L1抗體為MDX-1105。

在某些實施例中，抗PD-L1抗體為MEDI-4736。恆定區

本發明之蛋白質及肽可包括免疫球蛋白之恆定區或恆定區之片段、類似物、變異體、突變體或衍生物。在某些實施例中，恆定區來源於人類免疫球蛋白重鏈，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他類別。在某些實施例中，恆定區包括CH2結構域。在某些實施例中，恆定區包括CH2及CH3結構域，或包括鉸鏈-CH2-CH3。可替代地，恆定區可包括鉸鏈區、CH2結構域及/或CH3結構域之全部或一部分。

在一個實施例中，恆定區含有減少對Fc受體之親和力或降低Fc效應功能之突變。舉例而言，恆定區可含有消除IgG重鏈恆定區內之糖基化位點的突變。在一些實施例中，恆定區在與IgG1之Leu234、Leu235、Gly236、Gly237、Asn297或Pro331對應之胺基酸位置含有突變、缺失或插入(胺基酸係根據EU命名編號)。在一特定實施例中，恆定區在與IgG1之Asn297對應之胺基酸位置含有突變。在替代實施例中，恆定區在與IgG1之Leu281、Leu282、Gly283、Gly284、Asn344或Pro378對應之胺基酸位置含有突變、缺失或插入。

在一些實施例中，恆定區含有來源於人類IgG2或IgG4重鏈之CH2結構域。較佳地，CH2結構域含有消除CH2結構域內之糖基化位點的突變。在一個實施例中，突變改變IgG2或IgG4重鏈之CH2結構域內Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內的天冬醯胺。較佳地，突變使天冬醯胺變成麩醯胺酸。可替代地，突變改變Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內之苯丙胺酸與天冬醯胺。在一個實施例中，Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列經Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16)胺基酸序列置換。Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內之天冬醯胺與IgG1之Asn297相對應。

在另一實施例中，恆定區包括CH2結構域及鉸鏈區之至少一部分。鉸鏈區可來源於免疫球蛋白重鏈，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他類別。較佳地，鉸鏈區來源於人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他合適類別。更佳地，鉸鏈區來源於人類IgG1重鏈。在一個實施例中IgG1鉸鏈區之Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17))胺基酸序列中的半胱胺酸改變。在某些實施例中，Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17))胺基酸序列經Pro-Lys-Ser-Ser-Asp-Lys (SEQ ID NO: 18)胺基酸序列置換。在某些實施例中，恆定區包括來源於第一抗體同型之CH2結構域及來源於第二抗體同型之鉸鏈區。在某些實施例中，CH2結構域來源於人類IgG2或IgG4重鏈，而鉸鏈區來源於改變之人類IgG1重鏈。

靠近Fc部分與非Fc部分之接面的胺基酸之改變可顯著增加Fc融合蛋白之血清半衰期(PCT公開案WO 0158957，其揭示內容以引用的方式併入本文中)。因此，本發明之蛋白質或多肽的接面區可含有改變，相對於免疫球蛋白重鏈及紅血球生成素之天然存在之序列，該等改變較佳處於接合點之約10個胺基酸內。此等胺基酸變化會導致疏水性增加。在一個實施例中，恆定區來源於其中C端離胺酸殘基經置換之IgG序列。較佳地，IgG序列之C端離胺酸經非離胺酸胺基酸，諸如丙胺酸或白胺酸置換，進一步增加血清半衰期。在另一實施例中，恆定區來源於其中靠近恆定區C端之Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列改變從而消除潛在接面T細胞抗原決定基之IgG序列。舉例而言，在一個實施例中，Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列經Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20)胺基酸序列置換。在其他實施例中，Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)區段內之胺基酸經其他胺基酸，諸如甘胺酸或脯胺酸置換。使靠近IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他免疫球蛋白類別分子之C端的Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)區段發生胺基酸取代的詳細方法已描述於美國專利公開案第20030166877號，其揭示內容以引用的方式併入本文中。

適用於本發明之鉸鏈區可來源於IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及其他免疫球蛋白類別。IgG1鉸鏈區具有三個半胱胺酸，其中兩個參與免疫球蛋白之兩個重鏈之間的二硫鍵。此等相同半胱胺酸允許Fc部分之間形成有效及一致之二硫鍵鍵結。因此，本發明之鉸鏈區來源於IgG1，例如人類IgG1。在一些實施例中，人類IgG1鉸鏈區域內之第一半胱胺酸突變成另一胺基酸，較佳絲胺酸。IgG2同型鉸鏈區具有四個二硫鍵，在重組系統中分泌期間該等二硫鍵往往促進寡聚及可能不正確之二硫鍵鍵結。合適鉸鏈區可來源於IgG2鉸鏈；頭兩個半胱胺酸各較佳突變成另一胺基酸。已知IgG4之鉸鏈區低效地形成鏈間二硫鍵。然而，適用於本發明之鉸鏈區可來源於IgG4鉸鏈區，較佳含有增強來源於重鏈之部分之間的二硫鍵正確形成的突變(Angal S等人, (1993) Mol. Immunol., 30:105-8)。

根據本發明，恆定區可含有來源於不同抗體同型之CH2及/或CH3結構域及鉸鏈區，亦即混雜恆定區。舉例而言，在一個實施例中，恆定區含有來源於IgG2或IgG4之CH2及/或CH3結構域及來源於IgG1之突變鉸鏈區。可替代地，來自另一IgG子類別之突變鉸鏈區用於混雜恆定區。舉例而言，可使用允許兩個重鏈之間有效二硫鍵鍵結之IgG4鉸鏈的突變形式。突變鉸鏈亦可來源於IgG2鉸鏈，其中頭兩個半胱胺酸各突變成另一胺基酸。此類混雜恆定區之組裝已描述於美國專利公開案第20030044423號中，其揭示內容以引用的方式併入本文中。

根據本發明，恆定區可含有一或多個本文所述之突變。Fc部分中突變之組合可具有延長雙功能性分子之血清半衰期及增加雙功能性分子之活體內效力的累加或協同效應。因此，在一例示性實施例中，恆定區可含有(i)來源於其中Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列經Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20)胺基酸序列置換之IgG序列之區域；(ii)代替離胺酸之C端丙胺酸殘基；(iii)來源於不同抗體同型之CH2結構域及鉸鏈區，例如IgG2 CH2結構域及改變之IgG1鉸鏈區；以及(iv)消除來源於IgG2之CH2結構域內的糖基化位點的突變，例如Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16)胺基酸序列代替來源於IgG2之CH2結構域內的Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列。抗體片段

本發明之蛋白質及多肽亦可包括抗體之抗原結合片段。例示性抗體片段包括scFv、Fv、Fab、F(ab’)₂ 及單域VHH片段，諸如駱駝科來源之彼等片段。

單鏈抗體片段亦稱為單鏈抗體(scFv)，其為通常結合抗原或受體之重組多肽；此等片段含有抗體可變重鏈胺基酸序列(V_H )之至少一種片段繫栓至抗體可變輕鏈序列(V_L )之至少一種片段，有或無一或多個互連連接子。此類連接子可為短的可撓性肽，其經選擇以確保一旦連接V_L 及V_H 結構域，即發生V_L 及V_H 結構域之適當三維摺疊，從而維持單鏈抗體片段所源於之完全抗體的標靶分子結合特異性。一般而言，V_L 或V_H 序列之羧基端藉由此類肽連接子與互補V_L 及V_H 序列之胺基酸端共價連接。單鏈抗體片段可由分子選殖、抗體噬菌體呈現文庫或類似技術產生。此等蛋白質可在真核細胞或原核細胞，包括細菌中產生。

單鏈抗體片段含有具有本說明書中所描述之完全抗體之可變區或CDR中之至少一個的胺基酸序列，但缺乏彼等抗體之恆定域中的一些或全部。此等恆定域非抗原結合所需的，但構成完全抗體之結構的主要部分。因此，單鏈抗體片段可克服一些與使用含有一部分或全部恆定域之抗體相關的問題。舉例而言，單鏈抗體片段往往沒有生物分子與重鏈恆定區之間的不希望之相互作用或其他不合需要之生物活性。另外，單鏈抗體片段顯著小於完全抗體，且因此可具有比完全抗體更大之毛細管滲透性，允許單鏈抗體片段更有效地定位及結合於標靶抗原結合位點。另外，抗體片段可在原核細胞中相對大規模地產生，因此促進其產生。此外，單鏈抗體片段之相對小的尺寸使得其比完全抗體更不可能在接受者中刺激免疫反應。

亦可存在具有與完全抗體相同或可比較結合特徵之抗體片段。此類片段可含有一個或兩個Fab片段或F(ab’)₂ 片段。抗體片段可含有完全抗體之全部六個CDR，不過含有此類區域之少於全部，諸如三個、四個或五個CDR之片段亦為功能性的。醫藥組合物

本發明亦提供含有治療有效量之本文所述之蛋白質的醫藥組合物。組合物可調配用於多種藥物遞送系統。為正確調配，組合物中亦可包括一或多種生理學上可接受之賦形劑或載劑。適用於本發明之調配物可見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第17版, 1985。關於藥物遞送方法之簡短評述，參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。

在一個態樣中，本發明提供一種用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物，其包括500 mg-2400 mg包括第一多肽及第二多肽之蛋白質，該第一多肽包括∶(a)至少結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1(PD-L1)之抗體之重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，該第二多肽至少包括結合PD-L1之抗體之輕鏈可變區，且第一多肽之重鏈及第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。

在某些實施例中，本發明之蛋白質產物包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，本發明之蛋白質產物包括包含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。

在本發明之某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約500 mg至約2400 mg劑量(例如約500 mg至約2300 mg、約500 mg至約2200 mg、約500 mg至約2100 mg、約500 mg至約2000 mg、約500 mg至約1900 mg、約500 mg至約1800 mg、約500 mg至約1700 mg、約500 mg至約1600 mg、約500 mg至約1500 mg、約500 mg至約1400 mg、約500 mg至約1300 mg、約500 mg至約1200 mg、約500 mg至約1100 mg、約500 mg至約1000 mg、約500 mg至約900 mg、約500 mg至約800 mg、約500 mg至約700 mg、約500 mg至約600 mg、約600 mg至2400 mg、約700 mg至2400 mg、約800 mg至2400 mg、約900 mg至2400 mg、約1000 mg至2400 mg、約1100 mg至2400 mg、約1200 mg至2400 mg、約1300 mg至2400 mg、約1400 mg至2400 mg、約1500 mg至2400 mg、約1600 mg至2400 mg、約1700 mg至2400 mg、約1800 mg至2400 mg、約1900 mg至2400 mg、約2000 mg至2400 mg、約2100 mg至2400 mg、約2200 mg至2400 mg或約2300 mg至2400 mg)本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括約500至約2000 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括約500 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括500 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括1200 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括約2400 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，靜脈內藥物遞送調配物可包括2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽))。

在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)本發明之蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)。在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。

在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg、約1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg或約2400 mg本發明之蛋白質(例如包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的抗PD-L1/TGFβ陷阱)。

用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的本發明之靜脈內藥物遞送調配物可含於袋、筆或注射器中。在某些實施例中，袋可連接至包含管及/或針之通道。在某些實施例中，調配物可為凍乾調配物或液體調配物。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥(凍乾)且含於約12-60個小瓶中。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥且可在一個小瓶中含有約45 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，在一個小瓶中可含有約40 mg至約100 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，將來自12、27或45個小瓶之冷凍乾燥調配物合併以獲得含有治療劑量之蛋白質的靜脈內藥物調配物。在某些實施例中，調配物可為如下蛋白質產物之液體調配物：具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物，且以約250毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶(例如約250毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1900毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1800毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1700毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1600毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1500毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1400毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1300毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1200毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1100毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1000毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約900毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約800毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約700毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約600毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約500毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約400毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約300毫克/小瓶、約300毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約400毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約500毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約600毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約700毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約800毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約900毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1000毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1100毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1200毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1300毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1400毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1500毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1600毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1700毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1800毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶或約1900毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶)儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且以約600毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且以約1200毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且以約1800毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且以約250毫克/小瓶儲存。

本發明提供一種液體水性醫藥調配物，其包括治療有效量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱)於緩衝溶液中，形成用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的調配物。

用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的此等組合物可藉由習知殺菌技術殺菌，或可無菌過濾。所得水溶液可封裝以按原樣使用，或凍乾，經凍乾之製劑在投與之前與無菌水性載劑組合。製劑之pH值典型地在3與11之間，更佳在5與9之間或在6與8之間，且最佳在7與8之間，諸如7至7.5。呈固體形式之所得組合物可以多個單次劑量單元封裝，各單元含有固定量之以上提及之藥劑。呈固體形式之組合物亦可以靈活的數量封裝於容器中。

在某些實施例中，本發明提供在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的使用具有延長存放期之調配物，該調配物包括本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))，以及甘露糖醇、單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、聚山梨醇酯80、水及氫氧化鈉。

在某些實施例中，製備用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的水性調配物，其包括本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)於pH緩衝溶液中。本發明之緩衝劑的pH值可在約4至約8，例如約4至約8、約4.5至約8、約5至約8、約5.5至約8、約6至約8、約6.5至約8、約7至約8、約7.5至約8、約4至約7.5、約4.5至約7.5、約5至約7.5、約5.5至約7.5、約6至約7.5、約6.5至約7.5、約4至約7、約4.5至約7、約5至約7、約5.5至約7、約6至約7、約4至約6.5、約4.5至約6.5、約5至約6.5、約5.5至約6.5、約4至約6.0、約4.5至約6.0、約5至約6或約4.8至約5.5範圍內，或可具有約5.0至約5.2之pH值。亦希望上述pH值之中間範圍為本發明之一部分。舉例而言，意欲包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限之值範圍。控制pH值在此範圍內之緩衝劑實例包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、丁二酸鹽(諸如丁二酸鈉)、葡糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽及其他有機酸緩衝劑。

在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的調配物包括含有檸檬酸鹽及磷酸鹽之緩衝系統以維持pH值在約4至約8範圍內。在某些實施例中，pH值範圍可為約4.5至約6.0，或約pH 4.8至約5.5，在約5.0至約5.2之pH範圍內。在某些實施例中，緩衝系統包括單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉及/或二水合磷酸二氫鈉。在某些實施例中，緩衝系統包括約1.3 mg/ml檸檬酸(例如1.305 mg/ml)、約0.3 mg/ml檸檬酸鈉(例如0.305 mg/ml)、約1.5 mg/ml二水合磷酸氫二鈉(例如1.53 mg/ml)、約0.9 mg/ml二水合磷酸二氫鈉(例如0.86)及約6.2 mg/ml氯化鈉(例如6.165 mg/ml)。在某些實施例中，緩衝系統包括約1至1.5 mg/ml檸檬酸、約0.25至約0.5 mg/ml檸檬酸鈉、約1.25至約1.75 mg/ml二水合磷酸二鈉、約0.7至約1.1 mg/ml二水合磷酸二氫鈉及6.0至6.4 mg/ml氯化鈉。在某些實施例中，調配物之pH值用氫氧化鈉調整。

調配物中亦可包括充當張力劑且可使抗體穩定的多元醇。添加至調配物中之多元醇的量可根據調配物之所需等張性而改變。在某些實施例中，水性調配物可具有等張性。多元醇添加量亦可根據多元醇之分子量來改變。舉例而言，相較於二醣(諸如海藻糖)，可添加較低量之單醣(例如甘露糖醇)。在某些實施例中，可作為張力劑用於調配物中之多元醇為甘露糖醇。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約5至約20 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約7.5至約15 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約10至約14 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇濃度可為約12 mg/ml。在某些實施例中，調配物中可包括多元醇山梨糖醇。

亦可將清潔劑或界面活性劑添加至調配物中。例示性清潔劑包括非離子型清潔劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamers)(例如泊洛沙姆188)。清潔劑添加量致使經調配之抗體聚集減低及/或使微粒在調配物中之形成最少及/或減少吸附。在某些實施例中，調配物可包括界面活性劑聚山梨醇酯。在某些實施例中，調配物可含有清潔劑聚山梨醇酯80或Tween 80。Tween 80為用於描述聚氧化乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯的術語(參見Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 第4版, 1996)。在某些實施例中，調配物可含有約0.1 mg/mL與約10 mg/mL之間，或約0.5 mg/mL與約5 mg/mL之間的聚山梨醇酯80。在某些實施例中，調配物中可添加約0.1%聚山梨醇酯80。凍 乾調配物

用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的凍乾調配物包括抗PD-L1/TGFβ陷阱分子及凍乾保護劑。凍乾保護劑可為糖，例如雙醣。在某些實施例中，凍乾保護劑可為蔗糖或麥芽糖。凍乾調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑、增積劑及/或防腐劑中之一或多者。

適用於穩定凍乾藥品之蔗糖或麥芽糖的量可為至少1:2蛋白質與蔗糖或麥芽糖之重量比。在某些實施例中，蛋白質與蔗糖或麥芽糖重量比可為1:2至1:5。

在某些實施例中，調配物在凍乾之前的pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼來設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，醫藥學上可接受之鹼可為氫氧化鈉。

在凍乾之前，含有本發明之蛋白質之溶液的pH值可調整在約6至約8之間。在某些實施例中，凍乾藥品之pH值範圍可為約7至約8。

在某些實施例中，鹽或緩衝劑組分可以約10 mM-約200 mM之量添加。鹽及/或緩衝劑為醫藥學上可接受的，且來源於多種已知酸(無機及有機)與「成鹼」金屬或胺。在某些實施例中，緩衝劑可為磷酸鹽緩衝液。在某些實施例中，緩衝劑可為甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝液，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。

在某些實施例中，可添加「增積劑」。「增積劑」為一種化合物，其使凍乾混合物之質量增加且促成凍乾餅狀物之物理結構(例如促進基本上均一凍乾餅狀物之產生，維持開放的孔隙結構)。例示性增積劑包括甘露糖醇、甘胺酸、聚乙二醇及山梨糖醇。本發明之凍乾調配物可含有此類增積劑。

防腐劑可視情況添加至本文中之調配物以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)調配物之產生。

在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的凍乾藥品可用水性載劑復原。本文所關注之水性載劑為醫藥學上可接受(例如對於投與人類而言安全且無毒)且適用於在凍乾之後製備液體調配物的水性載劑。例示性稀釋劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。

在某些實施例中，本發明之凍乾藥品係用符合美國藥典之無菌注射用水(SWFI)或符合美國藥典0.9%氯化鈉注射液進行復原。在復原期間，凍乾粉末溶解成溶液。

在某些實施例中，本發明之凍乾蛋白質產物用約4.5 mL注射用水復原且用0.9%鹽水溶液(氯化鈉溶液)稀釋。液體調配物

在實施例中，本發明之蛋白質產物調配成液體調配物，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中。液體調配物可以10 mg/mL濃度呈現於美國藥典/歐洲藥典I型50R小瓶中，該小瓶用橡膠塞封閉且用鋁褶密封蓋密封。塞子可由符合美國藥典及歐洲藥典之彈性體製成。在某些實施例中，小瓶可填充有約61.2 mL蛋白質產物溶液以便允許可抽出60 mL體積。在某些實施例中，液體調配物可用0.9%鹽水溶液稀釋。在某些實施例中，小瓶可含有約61.2 mL約20 mg/mL至約50 mg/mL(例如約20 mg/mL、約25 mg/mL、約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL或約50 mg/mL)蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽))溶液，以便允許可抽出60 mL體積，用於向個體遞送約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物))。

在某些實施例中，小瓶可含有約61.2 mL約20 mg/mL至約50 mg/mL(例如約20 mg/mL、約25 mg/mL、約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL或約50 mg/mL)蛋白質產物溶液(具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)，以便允許可抽出60 mL體積，用於向未曾接受過治療之個體遞送約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)蛋白質產物。

在某些實施例中，本發明之用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的液體調配物可與穩定化水準之糖組合製備成10 mg/mL濃度溶液。在某些實施例中，液體調配物可在水性載劑中製備。在某些實施例中，穩定劑可以不大於可能引起靜脈內投藥非所需或不適合之黏度的量添加。在某些實施例中，糖可為雙醣，例如蔗糖。在某些實施例中，液體調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑及防腐劑中之一或多者。

在某些實施例中，液體調配物之pH值可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，鹼可為氫氧化鈉。

除聚集之外，去醯胺化為肽及蛋白質在醱酵、收穫/細胞澄清、純化、原料藥/藥品儲存期間及在樣品分析期間可能產生的常見產物變異體。去醯胺化為蛋白質損失NH₃ ，從而形成可進行水解之丁二醯亞胺中間物。丁二醯亞胺中間物引起親本肽減少17 u質量。隨後水解，引起18 u質量增加。丁二醯亞胺中間物由於在水性條件下不穩定而難以分離。因此，當增加1 u質量時，去醯胺化通常為可偵測的。天冬醯胺之去醯胺化產生天冬胺酸或異天冬胺酸。影響去醯胺化速率之參數包括pH值、溫度、溶劑介電常數、離子強度、初始序列、局部多肽構形及三級結構。與肽鏈中之Asn相鄰之胺基酸殘基影響去醯胺化速率。蛋白質序列中繼Asn之後的Gly及Ser使得更易於去醯胺化。

在某些實施例中，本發明之用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的液體調配物可保存在防止蛋白質產物發生去醯胺化之pH值及濕氣的條件下。

本文所關注之水性載劑為醫藥學上可接受(例如對於投與人類而言安全且無毒)且適用於製備液體調配物的水性載劑。例示性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。

在特定情況下，諸如當患者在移植之後在醫院，經由IV途徑接受所有藥物時，靜脈內(IV)調配物可為較佳投與途徑。在某些實施例中，在投與之前液體調配物用0.9%氯化鈉溶液稀釋。在某些實施例中，用於注射之稀釋之藥品具有等張性且適合於藉由靜脈內輸注來投與。

在某些實施例中，鹽或緩衝劑組分可以10 mM-200 mM之量添加。鹽及/或緩衝劑為醫藥學上可接受的，且來源於多種已知酸(無機及有機)與「成鹼」金屬或胺。在某些實施例中，緩衝劑可為磷酸鹽緩衝液。在某些實施例中，緩衝劑可為甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝液，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。

防腐劑可視情況添加至本文中之調配物以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)調配物之產生。治療癌症或抑制腫瘤生長之方法

在一個態樣中，本發明提供一種在未曾接受過治療之有需要之個體中治療癌症或抑制腫瘤生長的方法，該方法包括向該個體投與至少500 mg劑量之包括第一多肽及第二多肽之蛋白質。第一多肽包括∶(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段。第二多肽至少包括結合PD-L1之抗體之輕鏈可變區，且第一多肽之重鏈與第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。

在某些實施例中，本發明之治療癌症或抑制腫瘤生長之方法包括向未曾接受過治療之個體投與包括兩種肽之蛋白質，其中第一多肽包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，且第二多肽包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在某些實施例中，蛋白質為抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。

在一實施例中，根據本文所揭示之方法治療的未曾接受過治療之個體未曾接受過本發明之雙功能性蛋白質(抗PD-L1/TGFβ陷阱分子)之先前療法。在一些實施例中，待根據本發明之方法治療的未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者不具有表皮生長因子受體(EGFR)敏化(活化)突變、退行性淋巴瘤激酶(ALK)易位、ROS1突變或BRAF V600E突變。

在某些實施例中，本發明之治療癌症或抑制腫瘤生長之方法包括以如下劑量向未曾接受過治療之個體投與蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱分子(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)：約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200、約1300、約1400、約1500、約1600、約1700、約1800、約1900、約2000、約2100、約2200、約2300、約2400、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)。在某些實施例中，每兩週一次向未曾接受過治療之個體投與約1200 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。在某些實施例中，每三週一次向未曾接受過治療之個體投與約2400 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱分子。在某些實施例中，每兩週一次向未曾接受過治療之個體投與約1200 mg具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向未曾接受過治療之個體投與約2400 mg具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向未曾接受過治療之個體投與約2400 mg具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。

在某些實施例中，投與未曾接受過治療之個體的劑量可為約500 mg、約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg、1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、2100 mg、約2200 mg、約2300 mg或約2400 mg。

在某些實施例中，投與未曾接受過治療之個體的劑量可每兩週投與一次。在某些實施例中，投與未曾接受過治療之個體的劑量可每三週投與一次。在某些實施例中，蛋白質可藉由靜脈內投與，例如利用預填充袋、預填充筆或預填充注射器投與。在某些實施例中，經靜脈內自250 ml鹽水袋投與蛋白質，且靜脈內灌注可持續約一小時(例如50至80分鐘)。在某些實施例中，袋連接至包含管及/或針之通道。

在一些實施例中，NSCLC展現鱗狀或非鱗狀組織學。舉例而言，在一實施例中，該方法治療鱗狀NSCLC。在一些實施例中，該方法治療非鱗狀NSCLC。

在某些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC (例如具有高PD-L1表現之NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由靜脈內投與約至少500 mg (例如約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或更多)抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC(例如具有高PD-L1表現之NSCLC(例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由靜脈內投與約至少500 mg (例如約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或更多)抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療，其包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。

在某些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC(例如具有高PD-L1表現之NSCLC(例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由靜脈內投與約1200 mg-約2400 mg (例如約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約2400 mg、約1400 mg至約2400 mg、約1500 mg至約2400 mg、約1600 mg至約2400 mg、約1700 mg至約2400 mg、約1800 mg至約2400 mg、約1900 mg至約2400 mg、約2000 mg至約2400 mg、約2100 mg至約2400 mg、約2200 mg至約2400 mg或約2300 mg至約2400 mg)抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC(例如具有高PD-L1表現之NSCLC(例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由靜脈內投與約1200 mg-約2400 mg (例如約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約2400 mg、約1400 mg至約2400 mg、約1500 mg至約2400 mg、約1600 mg至約2400 mg、約1700 mg至約2400 mg、約1800 mg至約2400 mg、約1900 mg至約2400 mg、約2000 mg至約2400 mg、約2100 mg至約2400 mg、約2200 mg至約2400 mg或約2300 mg至約2400 mg)抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療，該抗PD-L1/TGFβ陷阱包括包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。

在一些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC(例如具有高PD-L1表現之NSCLC(例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由每2週以約1200 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有晚期NSCLC(例如具有高PD-L1表現之NSCLC(例如鱗狀或非鱗狀NSCLC))的個體或患者藉由每3週以約2400 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。

在某些實施例中，待治療之癌症為PD-L1陽性。舉例而言，在某些實施例中，待治療之癌症展現高PD-L1表現。在一些實施例中，舉例而言，PD-L1高可定義為如藉由73-10分析所測定，≥80% PD-L1陽性腫瘤細胞。在一些實施例中，PD-L1高可定義為如藉由PD-L1 IHC 22C3 PharmDx分析所測定，腫瘤比例評分(TPS)≥50%。兩種分析在其相應截止值下選擇類似患者群體。在某些實施例中，VENTANA PD-L1 (SP263)分析與22C3 PharmDx分析(參見Sughayer等人,Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. , (2018))高度一致，亦可用於確定PD-L1高表現水準。

偵測例如癌症或腫瘤上之生物標記物，諸如PD-L1的方法係此項技術中常規的，且涵蓋於本文中。非限制性實例包括免疫組織化學、免疫螢光法及螢光活化細胞分選(FACS)。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)的個體或患者藉由以約至少500 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)的個體或患者藉由每2週以約1200 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)的個體或患者藉由每3週以約2400 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。

在一些實施例中，待治療的未曾接受過治療之個體或患者不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變。舉例而言，在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)但不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變的個體或患者藉由以約至少500 mg (例如約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或更多)之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱來治療。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)但不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變的個體或患者藉由每2週以約1200 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。在一些實施例中，未曾接受過治療之患有高PD-L1晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)但不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變的個體或患者藉由每3週以約2400 mg之劑量靜脈內投與抗PD-L1/TGFβ陷阱一次來治療。

在一些實施例中，本文所揭示之治療方法引起個體或患者之疾病反應或改善個體或患者之存活。在一些實施例中，舉例而言，疾病反應可為完全反應、部分反應或穩定疾病。在一些實施例中，舉例而言，改善之存活可為無進展存活期(PFS)或總存活率。在一些實施例中，確定相對於開始用本發明之抗PD-L1/TGFβ陷阱治療前之時段的改善(例如PFS)。確定癌症或腫瘤療法之疾病反應(例如完全反應、部分反應或穩定疾病)及患者存活(例如PFS、總存活率)的方法係此項技術中常規的且涵蓋於本文中。在一些實施例中，疾病反應係在治療患者進行患病區域(例如覆蓋自胸廓入口至恥骨聯合之較大範圍之區域的胸部/腹部及骨盆)之增強型電腦斷層掃描(CT)或磁共振成像(MRI)之後根據RECIST 1.1評估。遞送裝置

在一個態樣中，本發明提供一種用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置，其中該裝置包括包含約500 mg-約3000 mg包括第一多肽及第二多肽之蛋白質之調配物，該第一多肽包括∶(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，該第二多肽至少包括結合PD-L1之抗體之輕鏈可變區，且第一多肽之重鏈與第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。

在某些實施例中，裝置可為袋、筆或注射器。在某些實施例中，袋可連接至包含管及/或針之通道。

在本發明之某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置可包括約500 mg至約3000 mg (例如約500 mg至約3000 mg、約500 mg至約2900 mg、約500 mg至約2800 mg、約500 mg至約2700 mg、約500 mg至約2600 mg、約500 mg至約2500 mg、約500 mg至約2400 mg、約500 mg至約2300 mg、約500 mg至約2200 mg、約500 mg至約2100 mg、約500 mg至約2000 mg、約500 mg至約1900 mg、約500 mg至約1800 mg、約500 mg至約1700 mg、約500 mg至約1600 mg、約500 mg至約1500 mg、約500 mg至約1400 mg、約500 mg至約1300 mg、約500 mg至約1200 mg、約500 mg至約1100 mg、約500 mg至約1000 mg、約500 mg至約900 mg、約500 mg至約800 mg、約500 mg至約700 mg、約500 mg至約600 mg、約600 mg至約3000 mg、約700 mg至約3000 mg、約800 mg至約3000 mg、約900 mg至約3000 mg、約1000 mg至約3000 mg、約1100 mg至約3000 mg、約1200 mg至約3000 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg或約2900 mg至約3000 mg)本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，藥物遞送裝置可包括約500至約1200 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)。在某些實施例中，藥物遞送裝置可包括約500 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。

在某些實施例中，藥物遞送裝置包括約1200 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，其包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1200 mg或約2400 mg劑量之如下蛋白質產物：具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。

在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1200 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)；或具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於在未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者中治療癌症或抑制腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置可包括約500 mg、約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg、約1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg或約2400 mg本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ陷阱，例如具有包含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。蛋白質產生

抗體-細胞介素陷阱蛋白一般以重組方式，使用含有經工程改造以表現該蛋白質之核酸的哺乳動物細胞產生。雖然合適細胞株及蛋白質產生方法之一實例描述於US 20150225483 A1之實例1及2中，但多種合適載體、細胞株及蛋白質產生方法已用於產生基於抗體之生物藥劑，且可用於合成此等抗體-細胞介素陷阱蛋白。治療適應症

本申請案中所描述之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白質(例如包含包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽)以及所揭示之包含該等抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白的靜脈內藥物遞送調配物及遞送裝置可用於在未曾接受過治療之患者中治療癌症或減少腫瘤生長。例示性癌症包括非小細胞肺癌(NSCLC)、黑色素瘤、胰臟癌、結腸直腸癌(例如預先治療之結腸直腸癌(CRC))、卵巢癌、神經膠母細胞瘤、胃癌(例如預先治療之復發性或難治性不可切除性IV期胃癌)、膽道癌、食道癌(鱗狀細胞癌或腺癌)、頭或頸部腺瘤及頭或頸部鱗狀癌。在一特定實施例中，所治療之癌症為晚期NSCLC (例如鱗狀或非鱗狀晚期NSCLC)。

待用抗PD-L1/TGFβ陷阱治療之癌症或腫瘤可基於腫瘤中PD-L1及/或TGFβ之表現或表現升高、其表現水準與預後或疾病進展之相關性及關於腫瘤對靶向PD-L1及TGFβ之治療之敏感性的臨床前及臨床經驗來選擇。此類癌症或腫瘤包括(但不限於)結腸直腸癌、乳癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、前列腺癌、腎癌、子宮頸癌、膀胱癌、頭頸部癌、肝癌、非小細胞肺癌、晚期非小細胞肺癌、黑色素瘤、梅克爾細胞癌及間皮瘤。舉例而言，在一特定實施例中，患有PD-L1陽性(例如高PD-L1)晚期NSCLC之未曾接受過治療之患者根據本發明之方法進行治療。

在一些實施例中，待根據本發明之方法治療的未曾接受過治療之癌症(例如具有高PD-L1表現之NSCLC)患者不具有表皮生長因子受體(EGFR)敏化(活化)突變、退行性淋巴瘤激酶(ALK)易位、ROS1突變或BRAF V600E突變。實例

雖然現大體上描述本發明，但參考以下實例更容易理解，該等實例僅出於說明本發明之某些態樣及實施例之目的而包括，且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。實例1∶靜脈內藥物調配物之包裝

抗PD-L1/TGFβ陷阱之調配物製備為凍乾調配物或液體調配物。為製備凍乾調配物，將冷凍乾燥之抗PD-L1/TGFβ陷阱殺菌且儲存於一次性玻璃小瓶中。接著若干此類玻璃小瓶包裝於套組中以向經診斷患有癌症或腫瘤之個體遞送與特定體重無關之劑量。視劑量需求而定，套組含有12-60小瓶。可替代地，調配物製備且包裝成液體調配物，且以250毫克/小瓶至1000毫克/小瓶儲存。舉例而言，調配物為液體調配物且以600毫克/小瓶儲存或以250毫克/小瓶儲存。在另一實例中，抗PD-L1/TGFβ陷阱調配為10 mg/mL溶液且供應在美國藥典/歐洲藥典I型小瓶中，填充至允許可抽出60 mL(600 mg/60 mL)體積，且以遵從美國藥典及歐洲藥典之漿液格式用橡膠塞封閉，用鋁褶密封蓋密封。

向經診斷患有晚期NSCLC之個體靜脈內投與含有500 mg至2400 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱之調配物。舉例而言，兩週內向個體靜脈內投與1200 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱一次，或三週內投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ陷阱一次。自鹽水袋經靜脈內投與。向個體投與之抗PD-L1/TGFβ陷阱之量與個體體重無關。實例2：未曾接受過治療之晚期NSCLC患者群組的與BW無關之給藥方案

在一例示性實施例中，1200 mg與BW無關之劑量每兩週投與晚期非小細胞肺癌(NSCLC)癌症患者一次。靜脈內投與約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即50分鐘至80分鐘)。在一例示性實施例中，2400 mg與BW無關之劑量每三週投與晚期非小細胞肺癌(NSCLC)癌症患者一次。靜脈內投與約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即50分鐘至80分鐘)。為減輕潛在輸注相關反應，前兩次輸注，在各劑量抗PD-L1/TGFβ陷阱前大約30至60分鐘投與抗組胺劑及撲熱息痛(paracetamol)(乙醯胺苯酚)之術前用藥(例如25-50 mg苯海拉明(diphenhydramine)及500-650 mg撲熱息痛[乙醯胺苯酚] IV或口服同等物)。若在前兩次輸注期間觀測到級別≥2之輸注反應，則不停止術前用藥。不允許類固醇作為術前用藥。

以下描述用於此實例中之患者的入選標準。患者： - ≥ 18歲 - 組織學上證實在腫瘤細胞上具有高PD-L1表現之晚期NSCLC的診斷 - 針對其晚期NSCLC，先前未曾接受過全身療法治療(允許完成用細胞毒性化學療法、生物療法及/或輻射治療作為新輔助/輔助療法之部分治療，只要療法在診斷出轉移性疾病前至少6個月結束即可) - 基於RECIST 1.1具有可量測疾病(參見Eisenhauer等人, EJC. 2009; 45:228-247) - 具有至少3個月之預期壽命 - 已將腫瘤物質(小於6個月)存檔或產生新鮮生檢以確定PD-L1表現 - 東部腫瘤協作組效能狀態(Eastern Cooperative Oncology Group performance status)為0至1 - 具有足夠器官功能及預期壽命≥3個月 - 具有如下定義之足夠血液功能：絕對嗜中性白血球計數(ANC)≥1.5×10⁹ /L，血小板計數≥100×10⁹ /L，及Hgb≥9 g/dL - 具有如下定義之足夠肝功能：總膽紅素水準≤正常上限(ULN)，AST水準≤1.5×ULN，及ALT水準≤1.5×ULN。對於腫瘤使肝臟受累之參與者，天冬胺酸胺基轉移酶(AST)≤5.0×ULN，丙胺酸轉胺酶(ALT)≤5.0×ULN，及膽紅素≤3.0×ULN為可接受的 - 具有如下定義之足夠腎功能：肌酐≤1.5×ULN或計算肌酐清除率＞30 mL/min；以及 - 具有如下定義之足夠凝血功能：除非參與者正接受抗凝血療法，否則國際標準化比值(INR)或凝血酶原時間(PT)≤1.5×ULN，且除非參與者正接受抗凝血療法，否則活化部分凝血活酶時間(aPTT)≤1.5×ULN。

所選患者未患在接受免疫刺激劑時可能惡化之活性肺結核或自體免疫性疾病。所選患者未曾接受過抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CD137或抗細胞毒性T淋巴球相關抗原-4 (CTLA-4)抗體(包括伊派利單抗(ipilimumab))或任何其他特異性地靶向T細胞共刺激或檢查點路徑之抗體或藥物的先前療法。實例3：用抗PD-L1/TGFβ陷阱治療晚期NSCLC患者

目標∶此研究之目的係評估抗PD-L1/TGFβ陷阱作為具有PD-L1腫瘤表現之晚期非小細胞肺癌(NSCLC)之患者的一線(1L)治療是否改善無進展存活(PFS)時間及/或最佳總反應(BOR)。在此NSCLC患者群組中使用抗PD-L1/TGFβ陷阱之基本原理為抗PD-L1/TGFβ陷阱靶向PD-L1及TGFβ，腫瘤微環境中免疫抑制之兩個主要機制。臨床前資料表明抗PD-L1/TGFβ陷阱在小鼠腫瘤模型中強烈增強抗腫瘤活性及延長存活，超過單獨PD-L1抗體阿維魯單抗(avelumab)或TGFβ陷阱對照之作用。因此，已知抑制腫瘤免疫活化之分子TGF-β之同時中和可刺激患者中之臨床反應。

研究設計∶此研究評估疾病反應及存活主要終點，以便評定抗PD-L1/TGFβ陷阱作為具有高PD-L1腫瘤表現之晚期NSCLC之患者的一線治療的臨床益處。出於此研究之目的，如藉由Dako 73-10分析所測定，PD-L1高係≥80% PD-L1陽性腫瘤細胞。如藉由根據當地實驗室法規進行之PD-L1 Dako IHC 22C3 PharmDx分析所測定，在研究招收前腫瘤比例評分(TPS)≥50%之患者亦符合條件。Dako 73-10分析與Dako IHC 22C3 PharmDx分析在其相應截止值下選擇類似患者群體。大約300名未曾針對晚期NSCLC接受過先前治療之患者(未曾接受過治療之患者)招收在此研究中。在此研究中之患者符合實例2中描述之患者的入選標準，未曾針對晚期NSCLC接受過先前全身療法治療(未曾接受過治療之患者)，且不具有表皮生長因子受體(EGFR)敏化(活化)突變、退行性淋巴瘤激酶(ALK)易位、ROS1突變或BRAF V600E突變，其中靶向療法經地方批准。根據如下腫瘤組織學(鱗狀對比非鱗狀)及吸菸史將患者分層∶鱗狀病史、非鱗狀病史及從不吸菸、非鱗狀病史及曾經吸菸。每兩週向患者靜脈內投與1200 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ陷阱一次，或每三週2400 mg一次。繼續治療，直至根據實體腫瘤反應評估標準1.1版(RECIST v1.1)證實疾病進展(PD)，毒性不可接受，或長達24個月。在PD之情況下，若患者之東部腫瘤協作組效能狀態(ECOG PS)保持穩定，且若參與者得益於繼續之治療，則可越過PD之初始測定或PD證實繼續治療。經歷穩定疾病(SD)、部分反應(PR)或完全反應(CR)之患者將繼續治療，直至24個月結束，不過額外治療係可能的。

在整個治療中，經由記錄、報導及分析基線醫學病狀、不良事件(AE)、體檢發現，包括生命徵象、ECOG效能狀態及實驗室測試來評估安全性。

功效評估∶對抗PD-L1/TGFβ陷阱之腫瘤反應藉由CT掃描或MRI來評估。在隨後就診時重複基線時進行之掃描。一般而言，在基線時偵測到之病變在隨後腫瘤評估就診時使用相同成像方法及較佳相同成像設備追蹤。若關於標靶病變滿足RECIST 1.1，則根據RECIST 1.1，皮膚癌轉移可用作標靶病變，使用卡尺來量測。

結果∶目標腫瘤反應藉由總反應率(ORR)評估，總反應率定義為達到完全反應(CR)或部分反應(PR)之最佳總反應(BOR)的參與者數目除以分析群體中之參與者數目。無進展存活期定義為自隨機化至如根據RECIST 1.1評估目標疾病進展(PD)之第一次記載日期或由於任何原因造化之死亡(以先發生者為準)的時間。預期用抗PD-L1/TGFβ陷阱治療在未曾接受過治療的具有高PD-L1狀態之晚期NSCLC患者中產生初始臨床活性。在治療之前及之後自獲自投與抗PD-L1/TGFβ陷阱之患者的血液及腫瘤樣品評估腫瘤生物標記物。經治療之患者展現疾病反應(例如部分反應、完全反應、穩定疾病)及/或改善存活(例如無進展存活期及/或總存活率)。

概言之，上述實例提供包括抗PD-L1/TGFβ陷阱之治療方案，用於治療未曾接受過治療之患者中具有高PD-L1表現之晚期NSCLC。序列 SEQ ID NO: 1 所分泌之抗PD-L1λ輕鏈之肽序列

SEQ ID NO: 2 抗PDL1之分泌重鏈之肽序列

SEQ ID NO: 3 抗PDL1/TGFβ陷阱之分泌重鏈之肽序列

SEQ ID NO: 4 自抗PD-L1λ輕鏈之轉譯起始密碼子至轉譯終止密碼子的DNA序列(在VL前之前導序列為來自尿激酶纖維蛋白溶酶原活化物之信號肽)

SEQ ID NO: 5 自轉譯起始密碼子至轉譯終止密碼子之DNA序列(mVK SP前導∶小寫加下劃線；VH∶大寫字母；具有K至A突變之IgG1m3∶小寫字母；(G4S)x4-G (SEQ ID NO: 11)連接子∶粗體大寫字母；TGFβRII∶粗體加下劃線小寫字母；兩個終止密碼子∶粗體加下劃線大寫字母)

SEQ ID NO: 6 抗PD-L1(mut)/TGFβ陷阱之分泌λ輕鏈之多肽序列，具有突變A31G、D52E、R99Y

SEQ ID NO: 7 抗PD-L1(mut)/TGFβ陷阱之分泌重鏈之多肽序列

SEQ ID NO: 8 人類TGFβRII同功異型物A前驅多肽(NCBI RefSeq寄存編號: NP_001020018)

SEQ ID NO: 9 人類TGFβRII同功異型物B前驅多肽(NCBI RefSeq寄存編號: NP_003233)

SEQ ID NO: 10 人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 11 (Gly₄ Ser)₄ Gly連接子

SEQ ID NO: 12 抗PD-L1抗體MPDL3289A之分泌重鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 13 抗PD-L1抗體MPDL3289A之分泌輕鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 14 抗PD-L1抗體YW243.55S70之分泌重鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 50 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 51 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 52 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 53 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 54 突變之人類TGFβRII同功異型物B細胞外域多肽

SEQ ID NO: 55 抗PD-L1抗體之重鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 56 抗PD-L1抗體之輕鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 57 抗PD-L1抗體之重鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 58 抗PD-L1抗體之輕鏈可變區之多肽序列

SEQ ID NO: 59 抗PD-L1抗體之重鏈之多肽序列

SEQ ID NO: 60 抗PD-L1抗體之輕鏈之多肽序列

SEQ ID NO: 61 抗PD-L1抗體之重鏈之多肽序列

SEQ ID NO: 62 抗PD-L1抗體之輕鏈之多肽序列

以引用之方式併入

本文所提及之專利文獻及科學論文中之每一者的全部揭示內容以引用之方式併入以達成所有目的。同等物

在不偏離本發明精神或基本特徵之情況下，本發明可以其他特定形式體現。因此，前述實施例應在所有方面視為說明性的而非限制本文所述之揭示內容。不同實施例及多種揭示方法步驟之多種結構要素可呈多種組合及排列利用，且全部此類變體均視為本發明之形式。因此，本發明之範疇由隨附申請專利範圍而非前述描述指示，且本文意欲涵蓋申請專利範圍同等物之意義及範圍內之所有變化。

圖1為包括一種抗PD-L1抗體經由(Gly₄ Ser)₄ Gly (SEQ ID NO: 11)連接子與TGFβ受體II之兩個細胞外域(ECD)融合的抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之示意圖。

圖2展示證明抗PD-L1/TGFβ陷阱同時結合於PD-L1與TGFβ兩者之兩步ELISA之圖。

圖3為顯示抗PD-L1/TGFβ陷阱誘發IL-2水準顯著增加之圖。

圖4A為顯示回應於抗PD-L1/TGFβ陷阱之TGFβ1活體內耗盡的圖。線形圖表示未處理之同型對照及三個不同劑量，如圖例中所指示。圖4B為顯示回應於抗PD-L1/TGFβ陷阱之TGFβ2活體內耗盡的圖。線形圖表示未處理之同型對照及三個不同劑量，如圖例中所指示。圖4C為顯示回應於抗PD-L1/TGFβ陷阱之TGFβ3活體內耗盡的圖。線形圖表示未處理之同型對照及三個不同劑量，如圖例中所指示。圖4D為顯示抗PD-L1/TGFβ陷阱對PD-L1之佔有支持EMT-6腫瘤系統中之受體結合模型的圖。

圖5為顯示Detroit 562異種移植模型中抗PD-L1/TGFβ陷阱對照(抗PD-L1(mut)/TGFβ)之抗腫瘤功效的圖。

圖6A為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(1200 mg)對比基於mg/kg之給藥(17.65 mg/kg)的整個群體之C_avg 分佈之盒鬚圖。圖6B為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(1200 mg)對比基於mg/kg之給藥(17.65 mg/kg)的整個群體之暴露AUC分佈之盒鬚圖。圖6C為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(1200 mg)對比基於mg/kg之給藥(17.65 mg/kg)的整個群體之C_谷分佈之盒鬚圖。圖6D為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(1200 mg)對比基於mg/kg之給藥(17.65 mg/kg)的整個群體之C_max 分佈之盒鬚圖。

圖6E為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(500 mg)對比基於mg/kg之給藥(7.35 mg/kg)的整個群體之C_avg 分佈之盒鬚圖。圖6F為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(500 mg)對比基於mg/kg之給藥(7.35 mg/kg)的整個群體之暴露AUC分佈之盒鬚圖。圖6G為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(500 mg)對比基於mg/kg之給藥(7.35 mg/kg)的整個群體之C_谷分佈之盒鬚圖。圖6H為68 kg中值體重之模擬群體中針對固定(500 mg)對比基於mg/kg之給藥(7.35 mg/kg)的整個群體之C_max 分佈之盒鬚圖。

圖7A至圖7C為展示在與小鼠中腫瘤停滯相關之劑量及時程下抗PD-L1/TGFβ陷阱分子之預測PK及PD-L1受體佔有率(「RO」)的圖。圖7A為顯示預測血漿濃度對比時間之圖。圖7B為顯示PBMC中預測PD-L1 RO對比時間之圖。圖7C為顯示腫瘤中預測PD-L1 RO對比時間之圖。

圖8為治療方案之示意圖。圖中使用之縮寫∶NSCLC=非小細胞肺癌；Q2W=每2週；Q3W=每3週；BOR=最佳總體反應；DOR=反應持續時間；OS=總存活率；以及R*=隨機化。PD-L1高表示如藉由PD-L1 IHC 73-10分析(Dako)所測定，≥80% PD-L1陽性腫瘤細胞，或如藉由Dako IHC 22C3 PharmDx所測定，TPS≥50%；兩種分析在其相應截止值下選擇類似患者群體。

Claims

一種在未曾接受過治療之有需要個體中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法，該方法包含向該個體投與至少500 mg劑量之包含第一多肽及第二多肽之蛋白質，其中該第一多肽包含：(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且其中該第一多肽之該重鏈與該第二多肽之該輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
如請求項1之方法，其中該第一多肽包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
如請求項1或2之方法，其中該劑量為500 mg至2400 mg。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該劑量為1200 mg至3000 mg。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量為1200 mg。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量為2400 mg。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量每兩週投與一次或每三週投與一次。
如請求項7之方法，其中該劑量為每兩週投與一次1200 mg。
如請求項7之方法，其中該劑量為每三週投與一次2100 mg。
如請求項7之方法，其中該劑量為每三週投與一次2400 mg。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該晚期NSCLC展現鱗狀或非鱗狀組織學。
如請求項1至11中任一項之方法，其中該癌症展現高PD-L1表現。
如請求項1至12中任一項之方法，其中該個體不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變。
如請求項1至13中任一項之方法，其中該治療使該個體產生疾病反應或改善該個體之存活。
如請求項14之方法，其中該疾病反應為完全反應、部分反應或穩定疾病。
如請求項14之方法，其中該存活為無進展存活期(PFS)。
如請求項1至16中任一項之方法，其中該蛋白質係藉由靜脈內投藥進行投與。
如請求項17之方法，其中該靜脈內投藥係用包括包含該蛋白質之調配物的預填充袋、預填充筆或預填充注射器進行。
如請求項18之方法，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
一種靜脈內藥物遞送調配物，其用於在未曾接受過治療之有需要癌症患者中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法中，該調配物包含500 mg至3000 mg包含第一多肽及第二多肽之蛋白質；其中該第一多肽包含：(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且其中該第一多肽之該重鏈與該第二多肽之該輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
如請求項20使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該第一多肽包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
如請求項20或21使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含1200 mg至2400 mg該蛋白質。
如請求項20或21使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含1200 mg該蛋白質。
如請求項20或21使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含2400 mg該蛋白質。
如請求項20至22中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物每兩週一次或每三週一次投與該患者。
如請求項25使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中每兩週投與包含1200 mg該蛋白質之調配物一次。
如請求項25使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中每三週投與包含2400 mg該蛋白質之調配物一次。
如請求項20至27中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物係含於袋、筆或注射器中。
如請求項28使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
如請求項20至29中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物為凍乾調配物或液體調配物。
一種藥物遞送裝置，其用於在未曾接受過治療之有需要癌症患者中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法中，該裝置包括包含500 mg至3000 mg蛋白質的調配物，該蛋白質包含第一多肽及第二多肽；其中該第一多肽包含：(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且其中該第一多肽之該重鏈與該第二多肽之該輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
如請求項31使用之藥物遞送裝置，其中該第一多肽包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
如請求項31或32使用之藥物遞送裝置，其包含1200 mg至2400 mg該蛋白質。
如請求項31或32使用之藥物遞送裝置，其包含1200 mg該蛋白質。
如請求項31或32使用之藥物遞送裝置，其包含2400 mg該蛋白質。
如請求項31至33中任一項使用之藥物遞送裝置，其中該調配物每兩週一次或每三週一次投與該患者。
如請求項36使用之藥物遞送裝置，其中每兩週投與包含1200 mg該蛋白質之調配物一次。
如請求項36使用之藥物遞送裝置，其中每三週投與包含2400 mg該蛋白質之調配物一次。
如請求項31至38中任一項使用之藥物遞送裝置，其中該裝置為袋、筆或注射器。
如請求項39使用之藥物遞送裝置，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
如請求項20至30中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物或如請求項31至40中任一項使用之藥物遞送裝置，其中該晚期NSCLC展現鱗狀或非鱗狀組織學。
如請求項41使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項41使用之藥物遞送裝置，其中該癌症展現高PD-L1表現。
如請求項41至42中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項41至42中任一項使用之藥物遞送裝置，其中該患者不具有EGFR敏化突變、ALK易位、ROS1突變或BRAF V600E突變。
如請求項41至43中任一項使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項41至43中任一項使用之藥物遞送裝置，其中該治療使該患者產生疾病反應或改善該患者之存活。
如請求項44使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項44使用之藥物遞送裝置，其中該疾病反應為完全反應、部分反應或穩定疾病。
如請求項44使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項44使用之藥物遞送裝置，其中該存活為無進展存活期(PFS)。
一種抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其包含第一多肽及第二多肽，其用於在未曾接受過治療之有需要癌症患者中治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)或抑制腫瘤生長之方法中，該方法包含向該患者投與500 mg至3000 mg該蛋白質；其中該第一多肽包含：(a)結合於人類蛋白質計劃性死亡配位體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段，其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且其中該第一多肽之該重鏈與該第二多肽之該輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
如請求項47使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中該第一多肽包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
如請求項47或48使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中向該患者投與1200 mg至2400 mg該蛋白質。
如請求項47或48使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中向該患者投與1200 mg該蛋白質。
如請求項47或48使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中向該患者投與2400 mg該蛋白質。
如請求項47至49中任一項使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中該蛋白質每兩週一次或每三週一次投與該患者。
如請求項50使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中每兩週投與1200 mg該蛋白質一次。
如請求項51使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中每三週投與2400 mg該蛋白質一次。
如請求項47至54中任一項使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中該蛋白質含於袋、筆或注射器中。
如請求項55使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
如請求項47至56中任一項使用之抗PD-L1/TGFβ陷阱蛋白，其中該蛋白質包含於凍乾調配物或液體調配物中。