CN112118858A - 用于未经治疗对象中癌症治疗的靶向tgf-β抑制的给药方案 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及用双功能融合蛋白靶向TGF‑β抑制的剂量方案，用于治疗未经治疗患者中的癌症或抑制所述患者中肿瘤生长的方法。

Description

用于未经治疗对象中癌症治疗的靶向TGF-Β抑制的给药方案
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年5月15日提交的美国临时专利申请第62/671,963号和2019年2月13日提交的美国临时专利申请第62/804,931号的权益和优先权，其全部公开内容通过引用纳入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表，并通过引用全文纳入本文。在2019年5月3日创建的所述ASCII拷贝命名为EMD-007WO_SL_ST25.txt，大小为75,847字节。
技术领域
本公开总体涉及靶向TGF-β抑制的剂量方案，采用双功能融合蛋白，用于未经治疗患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法。
背景技术
程序性死亡1(PD-1)/PD-L1轴是肿瘤免疫逃逸的重要机制。长期感应抗原的效应T细胞呈现由PD-1表达为标志的衰竭表型，在这种状态下肿瘤细胞通过上调PD-L1与之结合。另外，在肿瘤微环境中，骨髓细胞，巨噬细胞，实质细胞和T细胞上调PD-L1。阻断该轴会恢复这些T细胞中的效应功能。
美国专利申请公开号US 20150225483 A1，其通过引用纳入本文，记载了一个双功能融合蛋白，将抗程序性死亡配体1(PD-L1)抗体与作为TGFβ中和“阱”的肿瘤生长因子贝塔受体II型(TGFβRII)可溶性胞外域组合成一个单分子。具体地，该蛋白是一个异四聚体，由两条抗-PD-L1免疫球蛋白轻链和两条重链构成，所述重链包含通过柔性甘氨酸-丝氨酸接头遗传融合的抗-PD-L1重链和人TGFβRII胞外域(见图1)。此抗-PD-L1/TGFβ阱分子被设计为靶向肿瘤微环境中的两个主要免疫抑制机制。美国专利申请公开号US20150225483A1记载了按照基于患者体重的剂量进行该阱分子给药。
肺癌是美国癌症死亡的主要原因，造成的癌症死亡超过了乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌的总和。非小细胞肺癌在所有的肺癌中占比约80％。据估计在2018年有234,030例新发肺癌和支气管癌，仅在美国就有154,050人死于肺癌(Siegel，2018)。在欧盟，2017年预测有275,700例死亡是由于肺癌(Malvezzi，2017)。在全世界，2012年估算有180万例肺癌新病例确诊，约占全部癌症新病例确诊的13％(Ferlay，2012)。免疫检查点抑制剂在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中显示出预后改善，然而，仍有进一步提高获益的空间。
发明内容
本公开提供了施用靶向PD-L1和TGFβ的双功能蛋白的改良给药方案。具体地，涉及以各种给药频率给予至少500mg(例如1200mg、2400mg)所述双功能蛋白的非体重依赖性(非BW依赖性)给药方案和相关剂型可用作抗肿瘤和抗癌疗法。非BW依赖性给药方案确保所有患者，无论其体重如何，都在肿瘤部位有足够的药物暴露。
本公开的双功能蛋白(抗PD-L1/TGFβ阱分子)包括第一和第二多肽。第一多肽包括：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段(例如可溶性片段)。第二多肽至少包括结合PD-L1的抗体轻链可变区，其中，第一多肽的重链和第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点(例如，本文所述的任何抗体或抗体片段)。由于本公开的双功能蛋白与两个靶标结合：(1)PD-L1，其大多与膜结合，和(2)TGFβ，其在血液和间质中为可溶形式，非BW依赖性给药方案需要不仅能在肿瘤位点抑制PD-L1且能抑制TGF-的剂量。
在一方面，本公开提供治疗未经治疗的患者中癌症或抑制所述患者中肿瘤的方法，例如以下癌症或肿瘤：非小细胞肺癌(例如晚期非小细胞肺癌)、黑素瘤、胰腺癌、结直肠癌(例如经预治疗的结直肠癌(CRC))、卵巢癌、胶质母细胞瘤、胃癌(例如，经预治疗的复发性或难治性不可切除的IV期胃癌)、胆道癌、食道癌(鳞状细胞癌或腺癌)、头颈部腺瘤、和头颈部鳞状细胞癌。在一个方面，本发明提供治疗具有高PD-L1表达的NSCLC的方法，通过对有需要的患者给予本公开所述的抗PD-L1/TGFβ阱分子。在一些实施方式中，本发明提供了治疗有需要的未经治疗的患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，通过每两周一次对患者给予1200mg本公开所述的抗PD-L1/TGFβ阱分子。在一些其它实施方式中，本发明提供了治疗有需要的未经治疗的患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，通过每三周一次对患者给予2400mg本公开所述的抗PD-L1/TGFβ阱分子。
本公开还包括一种促进TGFβ局部消减的方法。该方法包括上述蛋白给药，该蛋白结合溶液中的TGFβ，结合细胞表面的PD-L1，并将结合的TGFβ带入细胞(例如癌细胞)内。
本公开还包括抑制细胞(例如癌细胞或免疫细胞)中SMAD3磷酸化的方法，该方法包括令肿瘤微环境中的细胞暴露于上述蛋白。
本公开的其他实施方式和详细内容可见后文。
附图说明
图1是抗PD-L1/TGFβ阱分子的示意图，包括一个抗PD-L1抗体与两个TGFβ受体II胞外域(ECD)通过(Gly4Ser)4Gly(SEQ ID NO:11)接头融合。
图2显示两步ELISA，显示抗PD-L1/TGFβ阱分子与PD-L1和TGFβ都结合。
图3显示抗PD-L1/TGFβ阱分子诱导IL-2水平的急剧升高。
图4A显示响应抗PD-L1/TGFβ阱的TGFβ1体内消减。线图表示无处理
Figure BDA0002778147970000031
同型对照和三种不同剂量，如图例中所示。图4B显示响应抗PD-L1/TGFβ阱的TGFβ2体内消减。线图表示无处理、同型对照和三种不同剂量，如图例中所示。图4C显示响应抗PD-L1/TGFβ阱的TGFβ3体内消减。线图表示无处理、同型对照和三种不同剂量，如图例中所示。图4D显示抗PD-L1/TGFβ阱分子对PD-L1的占用支持EMT-6肿瘤系统中的受体结合模型。
图5显示抗-PD-L1/TGFβ阱分子(抗-PD-L1(mut)/TGFβ)在Detroit 562异种移植模型中的抗肿瘤效力。
图6A是固定剂量(1200mg)对比mg/kg体重剂量(17.65mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C平均分布箱形图。图6B是固定剂量(1200mg)对比mg/kg体重剂量(17.65mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体暴露AUC分布箱形图。图6C是固定剂量(1200mg)对比mg/kg体重剂量(17.65mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C谷分布箱形图。图6D是固定剂量(1200mg)对比mg/kg体重剂量(17.65mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C最大分布箱形图。
图6E是固定剂量(500mg)对比mg/kg体重剂量(7.35mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C平均分布箱形图。图6F是固定剂量(500mg)对比mg/kg体重剂量(7.35mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体暴露AUC分布箱形图。图6G是固定剂量(500mg)对比mg/kg体重剂量(7.35mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C谷分布箱形图。图6H是固定剂量(500mg)对比mg/kg体重剂量(7.35mg/kg)在68kg中位体重模拟群体中的全群体C最大分布箱形图。
图7A-7C显示小鼠肿瘤停滞相关剂量和方案中抗PD-L1/TGFβ阱分子的预测的PK和PD-L1受体占用(“RO”)。图7A是显示预测血浆浓度与时间的图。图7B是显示PBMC中预测PD-L1 RO与时间的图。图7C是显示肿瘤中预测PD-L1 RO与时间的图。
图8是治疗方案的示意图。图中所用的缩写：NSCLC＝非小细胞肺癌；Q2W＝每两周；Q3W＝每三周；BOR＝总体最佳疗效；DOR＝缓解持续时间；OS＝总生存期；和R*＝随机化。PD-L1高表示据PD-L1HC73-10检测(Dako)测定≥80％PD-L1阳性肿瘤细胞，或据Dako IHC 22C3PharmDx检测测定TPS≥50％；两个检测在各自临界值选取相似的患者群。
具体实施方式
“TGFβRII”或“TGFβ受体II”指具有野生型人TGFβ受体2型同种型A序列(例如NCBI参考序列(RefSeq)登录号NP_001020018(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列)的多肽，或具有野生型人TGFβ受体2型同种型B序列(例如NCBI参考序列(RefSeq)登录号NP_003233(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列)的多肽，或具有与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的氨基酸序列基本相同序列的多肽。TGFβRII可保留野生型序列TGFβ结合活性的至少0.1％、0.5％、1％、5％、10％、25％、35％、50％、75％、90％、95％或99％。表达的TGFβRII多肽没有信号序列。
“能结合TGFβ的TGFβRII片段”指NCBI RefSeq登录号NP_001020018(SEQ ID NO:8)或NCBI RefSeq登录号NP_003233(SEQ ID NO:9)的任何部分，或与SEQ ID NO:8或SEQ IDNO:9的氨基酸序列基本相同的序列，其长度为至少20(例如至少30,40,50,60,70,80,90,100,110,120,130,140,150,160,175,或200)个氨基酸，并保留至少一些野生型受体或对应的野生型片段的TGFβ结合活性(例如至少0.1％,0.5％,1％,5％,10％,25％,35％,50％,75％,90％,95％,或99％)。通常，这些片段是可溶性片段。示例性片段之一是具有SEQ IDNO:10序列的TGFβRII胞外域。能结合TGFβ的人TGFβII的其它示范性片段如SEQ ID NO:50,51,52,53,或54的序列所示。
“未经治疗”指对于其晚期/四期NSCLC未接受过先前系统性治疗的患者。在本公开的各实施方式中，未经治疗的患者没有接受过抗-PD-1、抗-PD-L1、抗-PD-L2、抗-CD137或抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体(包括伊匹单抗)、或其他任何特异性靶向T细胞协同刺激或检查点通路的抗体或药物先前治疗。在本公开的各实施方式中，选择未经治疗的患者进行本发明的一线(1L)治疗。
“PD-L1阳性”或“PD-L1+”表示例如通过Dako IHC 22C3 PharmDx检测或VENTANAPD-L1(SP263)检测测定≥1％PD-L1阳性肿瘤细胞。
“PD-L1高”或“高PD-L1”指PD-L1 IHC 73-10检测(Dako)测定≥80％PD-L1阳性肿瘤细胞，或Dako IHC 22C3 PharmDx检测测定肿瘤比例评分(TPS)≥50％(TPS是IHC 22C3检测相关术语，描述具有部分或完全膜染色(例如PD-L1染色)的活肿瘤细胞百分数)。IHC 73-10和Dako IHC 22C3检测在各自临界值选取相似的患者群。在一些实施方式中，也可用与22C3 PharmDx检测高度相关的VENTANA PD-L1(SP263)检测测定PD-L1高表达水平(见Sughayer等，Appl.Immunohistochem.Mol.Morphol.,(2018))。
“基本相同”表示多肽与参照氨基酸序列显示至少50％，优选60％、70％、75％或80％，更优选85％、90％或95％，最优选99％的氨基酸序列相同性。比较序列的长度一般至少10个氨基酸，优选至少15个连续氨基酸，至少20、25、50、75、90、100、150、200、250、300或350个连续氨基酸更好，最好是全长氨基酸序列。
“患者”表示人或非人动物(例如哺乳动物)。“患者”，“对象”，“有需要的患者”和“有需要的对象”在本公开中可互换使用，指患有或易患可通过使用本公开中提供的方法和组合物给药来治疗的疾病或病症的活生物体。
本公开中使用的术语“治疗”、“疗法”或其他语法上的等同形式包括减轻，缓解，改善或预防疾病、病况或症状，预防其他症状，改善或预防症状潜在的代谢原因，抑制疾病或病况，例如，阻止疾病或病况的发展，缓解疾病或状况，引起疾病或状况消退，缓解由疾病或病况引起的状况或停止疾病或病况的症状，并旨在包括预防。该术语还包括实现治疗获益和/或预防获益。治疗获益是指根除或改善所治疗的潜在疾病。此外，通过根除或改善与潜在病症相关的一种或多种生理症状来实现治疗益处，由此在患者中观察到改善，尽管患者仍然可能患有潜在病症。
术语“癌症”可指晚期/IV(四)期非小细胞肺癌(NSCLC)。晚期/四期NSCLC根据其普通的含义使用，指NSCLC的IVA或IVB期，其特征例如转移到一个或多个部位。在一些实施方式中，癌症是转移性NSCLC。
在本申请文本的整个说明书和权利要求书中，词语“包括”和该词的其他形式，例如“含有”和“包含”，意味着包括但不限于，并且不旨在排除例如其他组分。
“共同给药”和“共同给予”是指本文所述的组合物在给予另外疗法的同时、临近其前或紧接其后给予。本公开的蛋白质和组合物可以单独给予，或者可以与第二、第三或第四治疗剂共同给予患者。共同给予意在包括以单独或组合(多于一种治疗剂)的形式同时或依次给予蛋白质或组合物。
术语“一”并不意味着限制为单数。在某些实施方式中，术语“一”可以指复数形式。如本文全文所用的单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数指代对象，除非文本中另有明确说明。因此，例如，提及“组合物”包括多种这样的组合物，以及单一组合物。
“复溶的”制剂是通过将冻干制剂溶解在水性载体中制备的制剂，使得双功能分子溶解在复溶的制剂中。复溶的制剂适合于对有需要的患者静脉内给药(IV)。
术语“约”是指在制剂的制备以及在疾病或病症的治疗中不改变药物效力的药物浓度或量的任何最小改变。在实施方式中，术语“约”可包括指定数值或数据点的±15％。
本公开中，范围可以表示为从“约”一个具体值开始和/或至“约”另一个具体值终止。当表达这样的范围时，另一方面包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当使用先行词“约”表示数值为近似值时，应理解，具体数值构成了另一个方面。还应理解的是，每个范围的端点值在与另一个端点值相关以及独立于另一个端点值的情况下都是有意义的。还应理解，本公开公开了多个数值，并且每个数值在本公开中除了作为该数值本身公开之外，还作为“约”该具体数值来公开。还应理解，在整个申请中，以多种不同格式提供数据，并且该数据代表了各种终点和起点以及数据点任意组合而成的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点“15”，则应理解为视为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于和等于10和15以及10至15之间。还应理解，也公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则也公开了11、12、13和14。
“等渗”制剂是与人血液具有基本相同的渗透压的制剂。等渗制剂通常具有约250至350mOsmol/KgH2O的渗透压。术语“高渗”用于描述渗透压高于人血液的制剂。例如，可以使用蒸气压或冰冻型渗透压计测量等渗性。
术语“缓冲剂”是指一种或多种组分，当加入到水溶液中，当加入酸或碱时，或在用溶剂稀释时，能够保护溶液免于pH变化。除磷酸盐缓冲液外，还可以使用甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐缓冲液等，在这种情况下，钠离子、钾离子或铵离子可用作反离子。
“酸”是在水溶液中产生氢离子的物质。“药学上可接受的酸”包括在其配制浓度和方式上无毒的无机和有机酸。
“碱”是在水溶液中产生氢氧根离子的物质。“药学上可接受的碱”包括在其配制浓度和方式上无毒的无机和有机碱。
“冻干保护剂”是当与感兴趣的蛋白质结合时，防止或减少冻干和随后储存时蛋白质的化学和/或物理不稳定性的分子。
“防腐剂”是降低细菌作用的物质，并且可以任选地添加至本文的制剂中。添加防腐剂可以，例如，促进复用(multi-use)(多剂量)制剂的生产。可用防腐剂的示例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵，六甲基氯化铵，苯扎氯铵(烷基苄基二甲基氯化铵的混合物，其中烷基为长链化合物)和苄索氯铵。其他类型的防腐剂包括芳族醇如苯酚，丁醇和苄醇，对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯，儿茶酚，间苯二酚，环己醇，3-戊醇和间甲酚。
“表面活性剂”是含有疏水部分(例如烷基链)和亲水部分(例如羧基和羧酸酯/盐基团)的表面活性分子。可以将表面活性剂添加到本发明的制剂中。适用于本发明制剂的表面活性剂包括但不限于聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；脱水山梨糖醇酯和衍生物；曲通(Triton)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；十二烷基-、肉豆蔻酰基-、亚油基-或硬脂基-磺基丁二烯(sulfobetadine)；十二烷基-、肉豆蔻酰基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-，肉豆蔻基-或十六烷基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-椰油酰胺丙基-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰氨丙基-，棕榈胺酰丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基-牛磺酸钠，或甲基油酰基-牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(蒙钠工业公司(MonaIndustries,Inc.)，新泽西州帕特森(Paterson,N.J.))，聚乙二醇，聚丙二醇，以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如Pluronics，PF68等)。
非体重依赖性给药方案
根据分子的各种临床前和临床评估的结果，已经开发出了与体重无关的给药方案，该方案涉及对未经治疗的患者给予至少500mg的本文所述的双功能抗PD-L1/TGFβ阱分子。有两项研究考察了该分子的安全性，耐受性和药代动力学，包括评估了从接受治疗的患者血液中获得的外周血单核细胞上的PD-L1目标占用率，并测量了TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3的浓度。这些评估基于来自总共350名对象的数据(实体肿瘤中1，3，10和20mg/kg的剂量递增组，以及选择的肿瘤类型中3mg/kg，10mg/kg，500mg和1200mg的扩展组)。
PK/功效模型(小鼠模型)
还实验确定了抗PD-L1/TGFβ阱分子在肿瘤模型中的功效。用来自EMT-6异种移植体的功效结果建立PK/功效模型。在小鼠中建立的PK模型用于模拟抗PD-L1/TGFβ阱血浆暴露以进行功效实验设置。估测参数见表1。估测KC50值为55.3μg/mL。该值表示可获得抗PD-L1/TGFβ阱分子最大抗肿瘤活性50％的平均血浆浓度。
该模型的基本诊断图显示没有模型错误。模型预测能够获取肿瘤体积分布。条件加权残差通常以0均值和1方差分布而没有趋势。然后使用PK/功效模型采用不同剂量的人预测浓度-时间曲线来模拟肿瘤生长抑制(TGI)。
表1：EMT-6异种移植小鼠中抗PD-L1/TGFβ阱分子的小鼠PK/功效模型参数
参数 估值 标准差 CV％ ％IIV
K<sub>g</sub>(h<sup>-1</sup>) 0.068 0.0005 0.82 40
K<sub>tr</sub>(h<sup>-1</sup>) 0.055 0.0024 4.4 76
KC<sub>50</sub>(mg/ml) 55324.6 522.3 4.4 232
K<sub>最大</sub> 2 0.09 1 93
基线(mm<sup>3</sup>) 88.3 0.87 1 47
基于PD-L1占用率的效果分析(在小鼠模型中)
使用功效实验，分析了小鼠中的效果并通过肿瘤消退或肿瘤停滞进行分选，并且基于整合PK/RO模型预测了PK和PD-L1受体占用(RO)。该方法表明，要达到肿瘤消退需要40至100μg/mL的抗PD-L1/TGFβ阱分子血浆浓度，该浓度关联瘤内PD-L1 RO高于95％。达到肿瘤停滞状态需要10至40μg/mL的抗PD-L1/TGFβ阱分子血浆浓度，该浓度关联外周PD-L1 RO高于95％。
小鼠中的效果分析和预测PK/RO见图7A-7C，其总结了抗PD-L1/TGFβ阱分子在小鼠中的PK/RO/功效。在血浆浓度为40μg/mL时达到95％的PD-L1 RO，预期/估测TGI仅为约65％。将浓度升至高于40μg/mL会导致肿瘤生长抑制的进一步增强。在平均血浆浓度为约100μg/mL时实现95％的肿瘤生长抑制。
基于下面描述的群体PK模型，需要每两周给予一次至少500mg的统一剂量(flatdose)以维持约100μg/mL的平均浓度，需要每两周给予一次约1200mg的统一剂量以维持约100μg/mL的C谷。在某些实施方式中，向对象给予约1200mg至约3000mg(例如，约1200，约1300，约1400，约1500，约1600，约1700，约1800，约1900，约2000，约2100，约2200，约2300，约2400等)的本公开蛋白质产物(例如抗PD-L1/TGFβ阱)。在某些实施方式中，每两周一次向对象给予约1200mg的抗PD-L1/TGFβ阱分子。在某些实施方式中，每三周一次向对象给予约2400mg的抗PD-L1/TGFβ阱分子。
在某些实施方式中，向对象给予约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg等)的蛋白质产物，该蛋白质产物具有第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:3，所述第二多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在某些实施方式中，向对象给予约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg等)的蛋白质产物，该蛋白质产物具有第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:35、36和37，所述第二多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:38、39和40。
在某些实施方式中，将约1200mg具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物每两周一次给予对象。在某些实施方式中，将约2400mg具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物每三周一次给予对象。在某些实施方式中，将约1200mg具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物每两周一次给予对象。在某些实施方式中，将约2400mg具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物每三周一次给予对象。
建立非体重依赖性给药方案
根据临床和临床前数据，已开发出一种新的非体重依赖性给药方案，用于抗PD-L1/TGFβ阱分子的给药，以降低暴露差异，减少给药误差，减少进行剂量准备所需的时间，与mg/kg剂量相比可减少药物浪费，从而促进实现良好的治疗效果。根据一个实施方式，不论患者的体重如何，可以给予至少500mg的统一剂量。根据另一个实施方式，不论患者的体重如何，可以给予至少1200mg的统一剂量。根据另一个实施方式，不论患者的体重如何，可以给予至少2400mg的统一剂量。通常，这些剂量可以重复给药，例如每两周一次或每三周一次。例如，可以每两周一次给予1200mg的统一剂量，或者可以每三周一次给予2400mg的统一剂量。
人中的药代动力学(PK)分析取样
通过下述实验提供确定抗PD-L1/TGFβ阱最佳统一剂量的药代动力学分析实例。
在第一剂量开始前和第一剂量后的下列时间点收集用于药代动力学(PK)数据分析的血清样品：在输注后即刻第1天和输注开始后4小时；在第1天输注结束后至少24小时的第2天；以及在第8天和第15天。在第15、29、43天，在给药前、输注结束时和输注结束后2至8小时的选定后续给药时机收集样品。对于第57，71和85天的后续时间点，收集或计划收集给药前样品，然后每6周一次PK取样直至12周，然后每12周一次PK取样。在延展阶段，进行稀疏PK取样。
上述PK数据用于生成群体PK模型并进行可能的给药方案模拟。将称为全方案模型(full approach model)(见Gastonguay,M.，全协变量模型作为方法的替代方案，依赖于关于协变量效应的推论的统计显著性：方法学和42个案例研究综述(Full Covariate Modelsas an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance forInferences about Covariate Effects:A Review of Methodology and 42 CaseStudies)，(2011)，第20页，摘要2229)的建模方法应用于由模拟获得的群体模型数据以获得具有以下特征的参数：具有线性消除的二室PK模型，CL，V1和V2的IIV，组合的加和和比例残差，CL和V1的全协变量模型。以下基线协变量包括在最终模型中：年龄，体重，性别，种族，白蛋白，CRP，血小板计数，eGFR，肝损伤，ECOG评分，肿瘤大小，肿瘤类型和生物制剂先前治疗。获得了本公开的蛋白质(例如抗PD-L1/TGFβ阱)的以下药代动力学典型参数估值：清除率(CL)0.0177L/h(6.2％)，中央分布体积(V1))3.64升(8.81％)，外周分布体积(V2)0.513升(25.1％)，室间清除率(Q)0.00219升/小时(17.8％)。CL的患者间差异为22％，V1为20％，V2为135％。体重是CL和V1的相关协变量。为了支持统一给药方案，研究了给药策略对本公开蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱)暴露差异的影响。具体而言，进行模拟以比较暴露分布，采用每两周一次1200mg的统一剂量给药方法，对比每两周一次17.65mg/kg(对应于68kg对象每两周一次1200mg)或每两周一次15mg/kg(对应于80kg对象1200mg)的BW调整给药方案。进行进一步模拟以比较每两周一次500mg统一剂量给药方案对比每两周一次7.35mg/kg(对应于68kg对象每两周一次500mg)的BW调整给药方案的暴露分布。另外，进行模拟以评估以下每三周一次统一剂量：1200mg，1400mg，1600mg，1800mg，2000mg，2200mg，2400mg，2600mg，2800mg，3000mg。
使用以下模拟方法：使用最终PK模型方差-协方差矩阵，从参数估测值的多元正态分布中抽取N＝200组参数估测值。对于每个参数估测，从$OMEGA多变量正态分布中抽取200个IIV估测值，得到总共40000(200×200)个主题。对原始数据集(N＝380)进行重新替换取样生成每种给药方案的40000组匹配的协变量和稳态暴露指标(AUC，C平均，C谷和C最大)。
模拟显示，与固定剂量相比，宽BW范围的基于BW给药的暴露差异略高。图6A和6E分别显示了对于中位体重68kg，17.65mg/kg和1200mg统一剂量或7.35mg/kg和500mg统一剂量的暴露分布的示例。模拟还显示患者群体中四分位体重的暴露分布的相反趋势：低体重患者采用固定剂量具有较高暴露，而高体重患者采用BW调整剂量具有较高暴露。
建立人的有效剂量/给药方案：每2周一次(q2w)给予抗PD-L1/TGFβ阱，二线非小细胞肺癌(2L NSCLC)中的初步剂量-效果
通过下述临床研究来建立抗PD-L1/TGFβ阱的疗效的实例。
一线标准治疗(无预先免疫治疗)后进展且未筛选PD-L1的晚期NSCLC患者被随机分配为接受本公开的抗PD-L1/TGFβ阱治疗，剂量为500mg或1200mg(每组n＝40)，每两周一次(q2w)，直到出现疾病进展、不可接受的毒性或试验停止为止。主要目标是根据《实体瘤疗效评估标准1.1版》(RECIST v1.1)中的效果评估标准来评估总体最佳疗效(BOR)。其他目标包括剂量探索和安全性/耐受性评估。肿瘤细胞PD-L1表达水平(Ab克隆73-10(Dako)[>80％＝>50％具有22C3])表征为PD-L1<1％，≥1％(PD-L1+)或≥80％(PD-L1-高)。在75例患者中，肿瘤细胞PD-L1的表达可评估。
截至分析时的截止数据，有80名患者接受了抗PD-L1/TGFβ阱治疗，中位时间为11.9周(范围2-66.1)，中位随访时间为51.1周。十名患者仍在接受治疗。研究者评估的经证实的总缓解率(ORR)为23.8％(500mg ORR，20.0％；1200mg ORR，27.5％)，其中，两种剂量水平都观察到18个部分缓解(PR)，而1200mg有1个完全缓解(CR)。如表2所示，观察了不同PD-L1表达水平的临床活性：1200mg在PD-L1+患者中ORR为37.0％，在PD-L1高的患者中为85.7％。最常见的治疗相关不良事件(TRAE)是瘙痒症(20.0％)，斑丘疹(18.8％)和食欲减退(12.5％)。23例患者发生3级TRAE(占28.8％)，2例患者发生4级TRAE。八名患者(500mg，n＝2；1200mg，n＝6)由于TRAE停药。没有发生与治疗相关的死亡。
表2：每2周一次用500mg或1200mg抗PD-L1/TGFβ阱治疗的2L NSCLC患者中观察到的响应率
Figure BDA0002778147970000131
这些结果表明，抗PD-L1/TGFβ阱单一疗法具有良好的耐受性，并且在PD-L1亚组之间都显示出疗效，在PD-L1+和PD-L1高的患者中，1200mg的ORR分别为37.0％和85.7％。鉴于较高PD-L1肿瘤细胞表达情形下响应率显著提高(例如接受1200mg治疗的患者)，作为2L治疗观察到的抗PD-L1/TGFβ阱的这种活性有望在未经治疗的PD-L1-高型晚期NSCLC患者中转化或提升作为一线(1L)治疗。
建立具有不同给药频率的给药方案
创建了具有各种给药频率的数据方案以允许较低频率的给药和/或允许给药计划与伴随用药相协调。具体地，前述初步群体PK建模和模拟方法被用于模拟各种给药方案的暴露并基于暴露来进行方案之间的比较。
基于这些模拟，对于一般对象，需要每两周给予一次至少500mg的统一剂量以维持约100μg/mL的平均浓度，需要每两周给予一次约1200mg的统一剂量以维持约100μg/mL的C谷。
基于C平均的模拟，每两周一次1200mg相当于每三周一次1800mg，而对于C谷，每两周一次1200mg相当于每三周一次2800mg。对于C平均来说，每两周一次500mg相当于每三周一次750mg；对于C谷来说，每两周一次500mg相当于每三周一次1,167mg。
TGFβ作为癌症靶标
本公开允许通过使用与抗体部分系连的可溶性细胞因子受体(TGFβRII)捕获TGFβ从而在肿瘤微环境中局部降低TGFβ，所述抗体部分靶向某些肿瘤细胞或免疫细胞外表面上的细胞免疫检查点受体。本公开抗体部分的一个例子是针对免疫检查点蛋白的如抗PD-L1。该双功能分子，有时在本文中亦称“抗体-细胞因子阱”，是确实有效的，因为抗受体抗体与细胞因子阱物理连接。由此产生的优势(例如相对于所述抗体和所述受体分开给药)部分归因于细胞因子通过自泌和旁泌作用成为局部环境中的主要作用。抗体部分将细胞因子阱引向肿瘤微环境，细胞因子阱在此可通过中和局部免疫抑制性自泌或旁泌作用而表现得最为有效。此外，当抗体的靶标一旦被抗体结合即被内化，则由此提供了清除细胞因子/细胞因子受体复合物的有效机制。PD-L1显示有抗体介导的靶标内化作用，抗PD-L1/TGFβ阱显示出与抗PD-L1相似的内化率。与使用抗TGFβ抗体相比，这是一个明显的优势，因为首先抗TGFβ抗体可能不是完全中和性的；其次，抗体可以作为载体来延长细胞因子的半衰期。
事实上，如下所述，由于阻断肿瘤细胞上PD-L1和免疫细胞上PD-1之间相互作用的同时中和肿瘤微环境中TGFβ，抗PD-L1/TGFβ阱的治疗引发了协同抗肿瘤作用。不受理论的束缚，推测这缘于同时阻断两种主要的免疫逃逸机制而获得的协同作用以及肿瘤微环境中单分子体对TGFβ的消减。所述消减来自：(1)抗PD-L1靶向肿瘤细胞；(2)肿瘤微环境中的TGFβ自泌/旁泌被TGFβ阱所结合；和(3)被结合的TGFβ通过PD-L1受体介导的内吞作用被破坏。并且，TGFβRII融合于Fc(IgG的结晶片段)的C末端比将TGFβRII置于Fc的N末端的TGFβRII-Fc强数倍。
TGFβ由于其作为癌症“分子双面体”(“Jekyll and Hyde”)的自相矛盾作用在癌症免疫治疗中曾经是有些质疑的靶标(Bierie等，Nat.Rev.Cancer，2006；6：506-20)。就像其他有些细胞因子，TGFβ活性具有发育阶段和背景依赖性。实际上，TGFβ既可以作为肿瘤促进者也可以作为肿瘤抑制者来影响肿瘤的发生、发展和转移。TGFβ双重作用的潜在机制尚不清楚(Yang等，Trends Immunol。2010；31：220-227)。尽管有推测认为Smad依赖性信号传导介导TGFβ信号传导的生长抑制，而非Smad依赖性通路参与促肿瘤作用，但也有数据表明Smad依赖性通路参与了肿瘤的发展(Yang等，Cancer Res.2008；68：9107-11)。
TGFβ配体和受体都作为治疗靶标被深入研究。有三种配体同种型：TGFβ1、2和3，都是均二聚体。还存在三种TGFβ受体(TGFβR)，称为I，II和III型TGFβR(López-Casillas等人，J Cell Biol.1994；124：557-68)。TGFβRI是信号传导链，不结合配体。TGFβRII高亲合力地结合配体TGFβ1和3，对TGFβ2则不然。TGFβRII/TGFβ复合物募集TGFβRI形成信号传导复合物(Won等，Cancer Res.1999；59:1273-7)。TGFβRIII是TGFβ与其信号传导受体结合的正向调节物，并以高亲和性结合全部3种TGFβ同种型。在细胞表面上，TGFβ/TGFβRIII复合物结合TGFβRII，然后募集TGFβRI取代TGFβRIII形成信号传导复合物。
尽管三种不同的TGFβ同种型均通过同一受体传导信号，但已知它们在体内具有差异表达模式和不重叠的功能。敲除了三种不同TGF-β同种型的小鼠具有不同的表型，表明它们有许多非代偿行的功能(Bujak等，Cardiovasc Res.2007；74:184-95)。TGFβ1缺失的小鼠有造血和血管生成缺陷，TGFβ3缺失小鼠表现出肺部发育和颚发育缺陷，TGFβ2缺失小鼠表现出各种发育异常，最突出的是多发性心脏畸形(Bartram等人，Circulation，2001；103：2745-52；Yamagishi等人，Anat Rec.2012；295：257-67)。此外，TGFβ还在缺血和再灌注损伤后的心肌损伤修复中起重要作用。在成人心脏中，心肌细胞分泌TGFβ作为自泌物维持自发搏动速率。重要的是，心肌细胞分泌的TGFβ的70-85％是TGFβ2(Roberts等，J ClinInvest.1992；90：2056-62)。尽管TGFβRI激酶抑制剂治疗引起心脏毒性问题，但本申请的申请人发现抗PD-L1/TGFβ阱在猴中没有毒性，包括心脏毒性。
中和TGFβ的治疗方法包括采用TGFβ受体的胞外域作为可溶性受体阱和中和抗体。在受体阱捕获方法中，可溶性TGFβRIII似乎是显然的选择，因为它结合所有三种TGFβ配体。然而，TGFβRIII的天然形式是280-330kD的葡糖胺聚糖(GAG)-糖蛋白，具有762个氨基酸残基的胞外域，对于生物治疗开发来说是非常复杂的蛋白质。可在昆虫细胞中产生去GAG的可溶性TGFβRIII并显示是有效的TGFβ中和剂(Vilchis-Landeros等，Biochem J.355:215,2001)。TGFβRIII的两个独立的结合域(内皮糖蛋白相关和尿调节蛋白相关)可以独立表达，但显示亲和力比可溶性TGFβRIII低20至100倍，中和活性大大降低(Mendoza等，Biochemistry.，2009；48：11755-65)。另一方面中，TGFβRII的胞外域长度仅为136个氨基酸残基，可以25-35kD糖蛋白的形式生产。重组可溶性TGFβRII还显示以200pM的KD结合TGFβ1，这与细胞上全长TGFβRII的50pM的KD相当近似(Lin等人，J Biol Chem.1995；270：2747-54)。对可溶性TGFβRII-Fc进行了作为抗癌剂的测试，在肿瘤模型中表现为能够抑制建成的鼠恶性间皮瘤的生长(Suzuki等，Clin Cancer Res.2004；10:5907-18)。由于TGFβRII不结合TGFβ2，TGFβRIII结合TGFβ1和3的亲和力低于TGFβRII，于是在细菌中生产TGFβRIII的内皮糖蛋白结构域与TGFβRII胞外域的融合蛋白，该蛋白在细胞实验中表现为抑制TGFβ1和2的信号传导，比TGFβRII或RIII更有效(Verona等，Protein Eng Des Sel.2008；21:463-73)。
中和TGFβ配体所有三种同种型的另一种方法是筛选泛中和性抗TGFβ抗体，或阻断受体与TGFβ1、2和3结合的抗受体抗体。GC1008是对全部TGFβ同种型特异的人抗体，已进入晚期恶性黑素瘤或肾细胞癌患者的I/II期研究(Morris等，J Clin Oncol 2008；26：9028(会议摘要))。尽管发现该治疗是安全且耐受性良好的，但仅观察到有限的临床疗效，因此在未进一步表征免疫学作用的情况下难以解释抗TGFβ治疗的重要性(Flavell等，Nat RevImmunol.2010；10：554-67)。也有TGFβ同种型特异性抗体进入临床试验。麦特丽珠单抗(Metelimumab)是TGFβ1的特异性抗体，已在预防青光眼手术后瘢痕过多的2期临床试验中；在一项3期研究中，发现TGFβ2特异性抗体勒德立木单抗(lerdelimumab)是安全的，但在改善眼部手术后的瘢痕形成方面无效(Khaw等人，Ophthalmology 2007；114：1822-1830)。阻断受体与全部三种TGFβ同种型结合的抗TGFβRII抗体，例如抗人TGFβRII抗体TR1和抗小鼠TGFβRII抗体MT1，也在小鼠模型中表现出对原发性肿瘤生长和转移有一定治疗功效(Zhong等，Clin Cancer Res.2010；16:1191-205)。然而，在最近一项抗体TR1(LY3022859)的I期研究中，尽管是预防性治疗，超过25mg的更高剂量(统一剂量)因为细胞因子释放失控被认为不安全(Tolcher等，Cancer Chemother Pharmacol 2017；79:673-680)。迄今为止，绝大多数对TGFβ靶向抗癌治疗的研究，包括通常具有相当毒性的TGFβ信号传导小分子抑制剂，大多数处于临床前阶段，并且抗肿瘤效果非常有限(Calone等,Exp Oncol.2012；34:9-16；Connolly等,Int J Biol Sci.2012；8:964-78)。
本公开的抗体-TGFβ阱是双功能蛋白，其包含能够结合TGFβ的人TGFβ受体II(TGFβRII)的至少部分。在一些实施方式中，TGFβ阱多肽是能够结合TGFβ的2型人TGFβ受体同种型A(SEQ ID NO:8)的可溶性部分。在某些实施方式中，TGFβ阱多肽包含至少SEQ ID NO:8的氨基酸73-184。在某些实施方式中，TGFβ阱多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸24-184。在一些实施方式中，TGFβ阱多肽是能够结合TGFβ的2型人TGFβ受体同种型B(SEQ ID NO:9)的可溶性部分。在某些实施方式中，TGFβ阱多肽包含至少SEQ ID NO:9的氨基酸48-159。在某些实施方式中，TGFβ阱多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸24-159。在某些实施方式中，TGFβ阱多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸24-105。在某些示例性实施方式中，TGFβ阱多肽包含SEQ ID NO:10、50、51、52、53或54的序列。
另一实施方式中，本公开的抗体-TGFβ阱是WO 2018/205985中公开的融合蛋白之一。在一些实施方式中，融合蛋白是在该公开中表2列出的构建体之一，例如其中的构建体9或15。在其他实施方式中，具有该公开中SEQ ID NO:11所示重链序列和SEQ ID NO:12所示轻链序列的抗体[分别对应于本公开的SEQ ID NO:61和62]通过连接序列(G4S)xG(其中x为4-5)与该公开中SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15所示TGFβRII胞外域序列[分别对应于本公开的SEQ ID NO:50和51]融合。
作用机制
用治疗性抗体靶向T细胞抑制检查点来去抑制(dis-inhibition)是一个被深入研究的领域(综述可见Pardoll,Nat Rev Cancer.2012；12:253-264)。方案之一中，抗体部分或其抗原结合片段靶向T细胞上的T细胞抑制检查点受体蛋白，例如：CTLA-4、PD-1、BTLA、LAG-3、TIM-3或LAIR1。另一方案中，抗体部分靶向抗原呈递细胞和肿瘤细胞(它们选择这些反受体中的某些用于它们自身的免疫逃逸)上的反受体(counter-receptor)，例如：PD-L1(B7-H1)、B7-DC、HVEM、TIM-4、B7-H3或B7-H4。
本公开考虑通过其抗体部分或其抗原结合片段靶向T细胞抑制检查点的抗体TGFβ阱来去抑制。为此，申请人测试了TGFβ阱与靶向多种T细胞抑制哨点受体蛋白的抗体(例如抗PD-1、抗PD-L1、抗TIM-3和抗LAG3)联合的抗肿瘤效果。
程序性死亡1(PD-1)/PD-L1轴是肿瘤免疫逃逸的重要机制。长期感应抗原的效应T细胞呈现由PD-1表达为标志的衰竭表型，在这种状态下肿瘤细胞通过上调PD-L1参与进来。另外，在肿瘤微环境中，骨髓细胞，巨噬细胞，实质细胞和T细胞上调PD-L1。阻断该轴可恢复这些T细胞中的效应功能。抗PD-L1/TGFβ阱还结合TGFβ(1、2和3同种型)，TGFβ是在肿瘤微环境中由凋亡性中性粒细胞、髓样抑制细胞、T细胞和肿瘤等细胞产生的抑制性细胞因子。可溶性TGFβRII抑制TGFβ降低恶性间皮瘤，降低的方式与CD8+T细胞抗肿瘤作用增强关联。已经显示，活化CD4+T细胞和Treg细胞产生的TGFβ1的缺失可抑制肿瘤生长，并保护小鼠免于自发性癌症。因此，TGFβ对于肿瘤免疫逃逸看来是重要的。
TGFβ对正常上皮细胞具有生长抑制作用，起着上皮细胞稳态调节剂作用，并且在早期癌症发生过程中起着抑瘤作用。随着肿瘤向恶性发展，TGFβ对肿瘤的生长抑制作用由于一种或多种TGFβ通道信号传导成分的突变或致癌性重编程而丧失。一旦失去对TGFβ抑制的敏感性，肿瘤就会继续产生高水平的TGFβ，从而促进肿瘤的生长。TGFβ细胞因子在多种癌症类型中过表达，与肿瘤分期相关。肿瘤微环境中许多类型的细胞都会产生TGFβ，包括肿瘤细胞本身，未成熟的骨髓细胞，调节性T细胞和基质成纤维细胞；这些细胞在细胞外基质中共同产生TGFβ的大储库。TGFβ信号传导通过促进转移，刺激血管生成以及抑制先天性和适应性抗肿瘤免疫促进肿瘤进展。作为一种广泛的免疫抑制因子，TGFβ直接下调活化的细胞毒性T细胞和NK细胞的效应功能，并有效诱导原初CD4+T细胞分化为免疫抑制调节性T细胞(Treg)表型。另外，TGFβ使巨噬细胞和嗜中性粒细胞极化为愈创表型，该表型与免疫抑制细胞因子的产生有关。作为一种治疗策略，TGFβ活性的中和具有通过恢复有效的抗肿瘤免疫力，阻断转移和抑制血管生成来控制肿瘤生长的潜力。
联合这些通路，PD-1或PD-L1和TGFβ，作为抗肿瘤方法是有吸引力的。相伴的PD-1和TGFβ阻断可以恢复促炎性细胞因子。抗PD-L1/TGFβ阱包括例如人TGFβ受体TGFβRII的胞外域经由甘氨酸/丝氨酸接头共价连接于完全人IgG1抗PD-L1抗体各条重链的C末端。鉴于PD-1/PD-L1类的新兴蓝图，其中响应明显但具有增加效应大小的空间，据信，共同靶向互补免疫调节步骤将改善肿瘤响应。一种类似的TGF-靶向剂弗瑞索单抗(fresolimumab)是一种针对TGFβ1、2和3的单克隆抗体，在一项针对黑素瘤患者的I期试验中显示出了肿瘤反应的初步证据。
在某些实施方式中，本公开提供实验表明抗PD-L1/TGFβ阱的TGFβRII部分(阱对照“抗-PDL-1(mut)/TGFβ阱”)引起抗肿瘤活性。例如，在Detroit562人咽癌模型中皮下植入后，当以25μg，76μg或228μg的剂量给药时，抗PDL-1(mut)/TGFβ阱引起肿瘤体积的剂量依赖性减小(图5)。
在某些实施方式中，本公开提供实验表明本公开的蛋白质同时结合PD-L1和TGFβ(图2)。
在某些实施方式中，本公开提供实验表明，在体外，本公开的蛋白质(例如抗PD-L1/TGFβ阱)抑制PD-L1和TGFβ依赖性信号传导。在某些实施方式中，本公开提供实验表明，在体外，本公开的蛋白质通过阻断PD-L1介导的免疫抑制增强T细胞效应功能，例如超抗原刺激后的IL-2诱导检测所测定的(图3)。在约100ng/ml时，本公开的蛋白质在体外诱导IL-2水平的显著增加(图3)。
在某些实施方式中，本公开提供实验表明，在体内，本公开的蛋白质(例如抗PD-L1/TGFβ阱)引起血液中TGFβ的消减。用55μg，164μg或492μg本公开的蛋白质处理JH小鼠中原位植入的EMT-6乳腺癌细胞有效且特异性地消减TGFβ1(图4A)，TGFβ2(图4B)和TGFβ3(图4C)。此外，本公开提供实验表明本公开的蛋白质占用PD-L1靶标，支持这一观点即本公开的蛋白质契合EMT-6肿瘤系统中的受体结合模型(图4D)。
在某些实施方式中，本公开提供实验表明本公开的蛋白有效且特异性地同时结合PD-L1和TGFβ，在多种小鼠模型中具有有效的抗肿瘤活性，抑制了肿瘤的生长和转移，延长生存期并赋予长期的保护性抗肿瘤免疫力。
确定抗PD-L1/TGFβ阱分子在体内作用机制的实例如下：
在首次人类的I期剂量递增研究中，除了监测抗PD-L1/TGFβ阱分子的药代动力学外还研究了作用机理，尤其是针对TGFβ细胞因子的作用机理。
按每两周一次约0.3，约1，约3，约10或约20mg/kg的5剂量水平静脉内给予抗PD-L1/TGFβ阱分子治疗患者，取样进行PK分析，直到第85天。通过流式细胞术由给药前、第2天(D2)、D15和D43收集的患者血液测量CD3+PBMC中的PD-L1靶标占用。此外，使用经过分析验证的基于Luminex珠和ECLIA的多重免疫测定法，在这些时间点以及在D8的另一个时间点测量了TGFβ1-3和促炎性细胞因子的血液水平。一方面，可以用抗PD-L1/TGFβ阱分子以6剂量水平静脉内给药治疗患者，包括上述剂量，按照每两周约30mg/kg或约40mg/kg的剂量。可由直至第6剂量之后的样品进行6剂量水平治疗患者的PK分析。还可以通过流式细胞术从给药前、第2天(D2)、D15、D43和直至D85收集的患者血液中测量CD3+PBMC中的PD-L1靶标占用。此外，使用经过分析验证的基于Luminex珠和ECLIA的多重免疫测定法，在这些时间点以及例如在D8的另一个时间点测量了TGFβ1-3和促炎性细胞因子的血液水平。
结果表明，在第一个周期中，在3-20mg/kg，抗PD-L1/TGFβ阱分子的PK暴露以大致与剂量成正比的方式增加，在前85天的治疗中没有明显的积累。在3mg/kg-20mg/kg，PD-L1靶标占用率约80％，且保持整个给药间期。在0.3–20mg/kg，还有小(D2为1.7倍)但显著的IFNγ诱导(p＝0.001，n＝19)。在剂量水平为1-20mg/kg的所有时间点，血液中TGFβ1，TGFβ2β和TGFβ3的水平分别至少降低了99％，92％和91％。在0.3mg/kg的较低剂量，D2和D8的TGFβ1-3水平衰减，但D15则没有。此外，药物PK水平与TGFβ捕获之间存在强相关性。因此，1mg/kg或更高的药物剂量水平实现完全TGFβ1-3捕获。
抗PD-L1抗体
本公开可包括本领域记载的任何抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。抗PD-L1抗体是可购得的，例如29E2A3抗体(Biolegend，批号329701)。抗体可以是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。抗体片段包括Fab、F(ab’)2、scFv和Fv片段，详见后文。
示例性抗体可见PCT公开文本WO 2013/079174。这些抗体可包含含有HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列的重链可变区多肽，其中：
(a)HVR-H1序列是X1YX2MX3(SEQ ID NO:21)；
(b)HVR-H2序列是SIYPSGGX4TFYADX5VKG(SEQ ID NO:22)；
(c)HVR-H3序列是IKLGTVTTVX6Y(SEQ ID NO:23)；
并且其中：X1是K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X2是V、R、K、L、M或I；X3是H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X4是F或I；X5是S或T；X6是E或D。
实施方式之一中，X1是M、I或S；X2是R、K、L、M或I；X3是F或M；X4是F或I；X5是S或T；X6是E或D。
另一个实施方式中，X1是M、I或S；X2是L、M或I；X3是F或M；X4是I；X5是S或T；X6是D。
另一个实施方式中，X1是S；X2是I；X3是M；X4是I；X5是T；X6是D。
另一方面中，所述多肽还包含位于HVR之间的可变区重链框架序列，如下所示：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。
另一个方面，所述框架序列源自人共有框架序列或人种系框架序列。
另一方面中，所述框架序列至少之一如下所述：
HC-FR1是EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:24)；
HC-FR2是WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:25)；
HC-FR3是RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:26)；
HC-FR4是WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)。
另一方面中，重链多肽进一步与包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的可变区轻链组合，其中：
(a)HVR-L1序列是TGTX7X8DVGX9YNYVS(SEQ ID NO:28)；
(b)HVR-L2序列是X10VX11X12RPS(SEQ ID NO:29)；
(c)HVR-L3序列是SSX13TX14X15X16X17RV(SEQ ID NO:30)；
并且其中：X7是N或S；X8是T、R或S；X9是A或G；X10是E或D；X11是I、N或S；X12是D、H或N；X13是F或Y；X14是N或S；X15是R、T或S；X16是G或S；X17是I或T。
另一实施方式中，X7是N或S；X8是T、R或S；X9是A或G；X10是E或D；X11是N或S；X12是N；X13是F或Y；X14是S；X15是S；X16是G或S；X17是T。
另一实施方式中，X7是S；X8是S；X9是G；X10是D；X11是S；X12是N；X13是Y；X14是S；X15是S；X16是S；X17是T。
另一方面中，所述轻链还包含位于HVR之间的可变区轻链框架序列，如下所示：(LC-FR1MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
另一方面中，所述轻链框架序列源自人共有框架序列或人种系框架序列。
另一方面中，所述轻链框架序列是λ轻链序列。
另一方面中，所述框架序列至少其一如下所述：
LC-FR1是QSALTQPASVSGSPGQSITISC(SEQ ID NO:31)；
LC-FR2是WYQQHPGKAPKLMIY(SEQ ID NO:32)；
LC-FR3是GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC(SEQ ID NO:33)；
LC-FR4是FGTGTKVTVL(SEQ ID NO:34)。
另一实施方式中，本公开提供抗PD-L1抗体或包含重链和轻链可变区序列的抗原结合片段，其中：
(a)所述重链包括HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，并且其中：(i)HVR-H1序列是X1YX2MX3(SEQID NO:21)；(ii)HVR-H2序列是SIYPSGGX4TFYADX5VKG(SEQ ID NO:22)；(iii)HVR-H3序列是IKLGTVTTVX6Y(SEQ ID NO:23)，且；
(b)所述轻链包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，并且其中：(iv)HVR-L1序列是TGTX7X8DVGX9YNYVS(SEQ ID NO:28)；(v)HVR-L2序列是X10VX11X12RPS(SEQ ID NO:29)；(vi)HVR-L3序列是SSX13TX14X15X16X17RV(SEQ ID NO:30)；其中：X1是K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X2是V、R、K、L、M或I；X3是H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X4是F或I；X5是S或T；X6是E或D；X7是N或S；X8是T，R或S；X9是A或G；X10是E或D；X11是I，N或S；X12是D、H或N；X13是F或Y；X14是N或S；X15是R、T或S；X16是G或S；X17是I或T。
实施方式之一中，X1是M、I或S；X2是R、K、L、M或I；X3是F或M；X4是F或I；X5是S或T；X6是E或D；X7是N或S；X8是T，R或S；X9是A或G；X10是E或D；X11是N或S；X12是N；X13是F或Y；X14是S；X15是S；X16是G或S；X17是T。
另一实施方式中，X1是M、I或S；X2是L、M或I；X3是F或M；X4是I；X5是S或T；X6是D；X7是N或S；X8是T、R或S；X9是A或G；X10是E或D；X11是N或S；X12是N；X13是F或Y；X14是S；X15是S；X16是G或S；X17是T。
另一实施方式中，X1是S；X2是I；X3是M；X4是I；X5是T；X6是D；X7是S；X8是S；X9是G；X10是D；X11是S；X12是N；X13是Y；X14是S；X15是S；X16是S；X17是T。
另一方面中，所述重链可变区包含如下所示位于HVR之间的一个或多个框架序列：
(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，并且所述轻链可变区包含如下所示位于HVR之间的一个或多个框架序列：(LC-FR1MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
另一方面中，所述框架序列源自人共有框架序列或人种系序列。
另一方面中，所述重链框架序列中一个或多个如下所述：
HC-FR1是EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:24)；
HC-FR2是WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:25)；
HC-FR3是RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:26)；
HC-FR4是WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)。
另一方面中，所述轻链框架序列是λ轻链序列。
另一方面中，所述轻链框架序列中一个或多个如下所述：
LC-FR1是QSALTQPASVSGSPGQSITISC(SEQ ID NO:31)；
LC-FR2是WYQQHPGKAPKLMIY(SEQ ID NO:32)；
LC-FR3是GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC(SEQ ID NO:33)；
LC-FR4是FGTGTKVTVL(SEQ ID NO:34)。
另一方面中，重链可变区多肽、抗体或抗体片段还包含至少CH1结构域。
在一更具体的方面中，重链可变区多肽、抗体或抗体片段还包含CH1、CH2和CH3结构域。
另一方面中，可变区轻链、抗体或抗体片段还包含CL结构域。
另一方面中，抗体还包括CH1、CH2、CH3和CL结构域。
另一更具体的方面中，抗体还包含人或鼠恒定区。
在另一个方面中，人恒定区选自下组：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。
在一更具体的方面中，人或鼠恒定区是lgG1。
另一实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链包括HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，它们分别与SYIMM(SEQ ID NO:35)、SIYPSGGITFYADTVKG(SEQ ID NO:36)和IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80％总体序列相同性，且
(b)所述轻链包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，它们分别与TGTSSDVGGYNYVS(SEQ ID NO:38)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)和SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80％总体序列相同性。
在一个具体方面，所述序列相同性是81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
另一实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链包括HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，它们分别与MYMMM(SEQ ID NO:41)、SIYPSGGITFYADSVKG(SEQ ID NO:42)和IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80％总体序列相同性，且
(b)所述轻链包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，它们分别与TGTSSDVGAYNYVS(SEQ ID NO:43)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)和SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80％总体序列相同性。
在一个具体方面，所述序列相同性是81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
另一方面中，本公开的抗体或抗体片段中，相比HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的序列，至少如下所示以下划线突出显示的那些氨基酸保持不变：
(a)在HVR-H1中：SYIMM(SEQ ID NO:35)，
(b)在HVR-H2中：SIYPSGGITFYADTVKG(SEQ ID NO:36)，
(c)在HVR-H3中：IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)；
并且其中，相比HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的序列，至少如下所示以下划线突出显示的那些氨基酸保持不变：
(a)HVR-L1 TGTSSDVGGYNYVS(SEQ ID NO:38)
(b)HVR-L2 DVSNRPS(SEQ ID NO:39)
(c)HVR-L3 SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)。
另一方面中，所述重链可变区包含如下所示位于HVR之间的一个或多个框架序列：
(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，并且所述轻链可变区包含如下所示位于HVR之间的一个或多个框架序列：
(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
另一方面中，所述框架序列源自人种系序列。
另一方面中，所述重链框架序列中一个或多个如下所述：
HC-FR1是EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:24)；
HC-FR2是WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:25)；
HC-FR3是RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:26)；
HC-FR4是WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)。
另一方面中，所述轻链框架序列源自λ轻链序列。
另一方面中，所述轻链框架序列中一个或多个如下所述：
LC-FR1是QSALTQPASVSGSPGQSITISC(SEQ ID NO:31)；
LC-FR2是WYQQHPGKAPKLMIY(SEQ ID NO:32)；
LC-FR3是GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC(SEQ ID NO:33)；
LC-FR4是FGTGTKVTVL(SEQ ID NO:34)。
另一更具体的方面中，抗体还包含人或鼠恒定区。
在另一个方面中，人恒定区选自下组：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMVWRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADWKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:44)，并且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL(SEQ ID NO:45)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:44具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:44具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:45具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:44具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:44具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:45具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:44，轻链序列包含SEQ ID NO:45。
在某些实施方式中，本公开提供一种抗PD-L1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGLEVWSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARIKLGTVTTVDYWG QGTLVTVSS(SEQ ID NO:46)，并且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL(SEQ ID NO:47)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:46具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:46具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:47具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:46具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:46具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:47具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:46，轻链序列包含SEQ ID NO:47。
另一实施方式中，所述抗体结合人、小鼠或猕猴PD-L1。在一具体方面中，抗体能够阻断人、小鼠或猕猴PD-L1与相应人、小鼠或猕猴PD-1受体之间的相互作用。
另一实施方式中，抗体以5x10-9M或更低KD、优选以2x10-9M或更低KD、甚至更优选以1x10-9M或更低KD结合人PD-L1。
另一实施方式中，本公开涉及抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其结合包含人PD-L1残基Y56和D61的功能性表位。
在一具体方面中，所述功能性表位还包含人PD-L1的E58、E60、Q66、R113和M115。
在一更具体的方面中，所述抗体结合包含人PD-L1残基54-66和112-122的构象表位。
在某些实施方式中，本公开涉及抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段与本文所述的本公开抗体交叉竞争结合PD-L1。
在某些实施方式中，本公开包括包含任何上述抗PD-L1抗体的蛋白质和多肽，其与至少一种药学上可接受的运载体组合。
在某些实施方式中，本公开包括一种分离的核酸，其编码本文所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的多肽、或轻链或重链可变区序列。在某些实施方式中，本公开提供一种分离的核酸，其编码抗PD-L1抗体的轻链或重链可变区序列，其中：
(a)所述重链包括HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列，它们分别与SYIMM(SEQ ID NO:35)、SIYPSGGITFYADTVKG(SEQ ID NO:36)和IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80％序列相同性，或
(b)所述轻链包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3序列，它们分别与TGTSSDVGGYNYVS(SEQ IDNO:38)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)和SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80％序列相同性。
在一个具体方面，所述序列相同性是81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
另一方面，重链的核酸序列是：
Figure BDA0002778147970000291
(SEQ ID NO:48)
并且轻链的核酸序列是：
Figure BDA0002778147970000301
(SEQ ID NO:49)。
可用于抗PD-L1/TGFβ阱的其它示例性抗-PD-L1抗体可见美国专利申请公开US2010/0203056。本公开的实施方式之一中，抗体部分是YW243.55S70。在另一实施方式中，抗体部分是MPDL3289A。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:12)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:13)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:12具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:12具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:13具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:12具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:12具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:12，轻链序列包含SEQ ID NO:13。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:14)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:13)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:14具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:14具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:13具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:14具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:14具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:13具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:14，轻链序列包含SEQ ID NO:13。
可用于抗PD-L1/TGFβ阱的其它示例性抗-PD-L1抗体可见美国专利申请公开US2018/0334504。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO:55)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:56)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:55具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:55具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:56具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:55具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:55具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:56具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:55，轻链序列包含SEQ ID NO:56。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:57)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:58)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:57具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:57具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:58具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:57具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:57具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:58具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:57，轻链序列包含SEQ ID NO:58。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ IDNO:59)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:60)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:59具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:59具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:60具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:59具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:59具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:60具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:59，轻链序列包含SEQ ID NO:60。
在某些实施方式中，本公开包括一种抗PD-L1抗体部分，其包含重链和轻链序列，其中：
(a)所述重链序列与以下重链序列具有至少85％序列相同性：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGA(SEQ IDNO:61)，且
(b)所述轻链序列与以下轻链序列具有至少85％序列相同性：
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:62)。
在各种实施方式中，重链序列与SEQ ID NO:61具有至少86％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少86％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少87％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少87％的序列相同性；重链序列与SEQ IDNO:61具有至少88％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少88％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少89％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少89％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少90％的序列相同性，轻链序列与SEQID NO:62具有至少90％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少91％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少91％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少92％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少92％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少93％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少93％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少94％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少94％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少95％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少95％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少96％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少96％的序列相同性；重链序列与SEQID NO:61具有至少97％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少97％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少98％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少98％的序列相同性；重链序列与SEQ ID NO:61具有至少99％的序列相同性，轻链序列与SEQ ID NO:62具有至少99％的序列相同性；或重链序列包含SEQ ID NO:61，轻链序列包含SEQ ID NO:62。
可用于抗PD-L1/TGFβ阱的其它示例性抗-PD-L1抗体可见美国专利公开US 7,943,743。
在本公开实施方式之一中，抗PD-L1抗体是MDX-1105。
在一些实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI-4736。
恒定区
本公开的蛋白质和肽可包括免疫球蛋白的恒定区或恒定区片段、类似物、变体、突变体或衍生物。在某些实施方式中，恒定区源自人免疫球蛋白重链，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他类。在某些实施方式中，恒定区包括CH2结构域。另些实施方式中，恒定区包括CH2和CH3结合域或包括铰链-CH2-CH3。或者，恒定区可包括全部或部分铰链区、CH2结构域和/或CH3结构域。
实施方式之一中，恒定区包含降低对Fc受体亲和力或降低Fc效应功能的突变。例如，恒定区可包含消除IgG重链恒定区中糖基化位点的突变。一些实施方式中，恒定区含有氨基酸位置对应于IgG1的Leu234、Leu235、Gly236、Gly237、Asn297或Pro331的突变、缺失或插入(氨基酸根据EU命名法编号)。具体实施方式之一中，恒定区在对应于IgG1Asn297的氨基酸位置含有突变。另一实施方式中，恒定区含有氨基酸位置对应于IgG1的Leu281、Leu282、Gly283、Gly284、Asn344或Pro378的突变、缺失或插入。
一些实施方式中，恒定区含有源自人IgG2或IgG4重链的CH2结构域。优选地，CH2结构域包含消除CH2结构域中糖基化位点的突变。实施方式之一中，突变改变IgG2或IgG4重链CH2结构域内Gln-Phe-Asn-Ser(SEQ ID NO:15)氨基酸序列内的天冬酰胺。优选地，突变将天冬酰胺变成谷氨酰胺。或者，突变改变Gln-Phe-Asn-Ser(SEQ ID NO:15)氨基酸序列内苯丙氨酸和天冬酰胺两者。在实施方式之一中，Gln-Phe-Asn-Ser(SEQ ID NO:15)氨基酸序列被Gln-Ala-Gln-Ser(SEQ ID NO:16)氨基酸序列取代。Gln-Phe-Asn-Ser(SEQ ID NO:15)氨基酸序列内的天冬酰胺对应于IgG1的Asn297。
另一实施方式中，恒定区包括CH2结构域和至少部分铰链区。铰链区可以是源自免疫球蛋白重链例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他类。优选地，铰链区源自人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他合适的类。更优选地，铰链区源自人IgG1重链。实施方式之一中，IgG1铰链区Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys(SEQ ID NO:17)氨基酸序列中的半胱氨酸被改变。在某些实施方式中，Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys(SEQ ID NO:17)氨基酸序列被Pro-Lys-Ser-Ser-Asp-Lys(SEQ ID NO:18)氨基酸序列取代。在某些实施方式中，恒定区包括源自第一抗体同种型的CH2结构域和源自第二抗体同种型的铰链区。在某些实施方式中，CH2结构域源自人IgG2或IgG4重链，而铰链区源自经改变的人IgG1重链。
Fc部分与非Fc部分连接处附近的氨基酸改变会显著提高Fc融合蛋白的血清半衰期(PCT公开文本WO 01/58957，其公开内容通过引用纳入本文)。因此，本公开的蛋白质或多肽的连接区可含有相对于免疫球蛋白重链和促红细胞生成素天然序列的改变，优选距连接点约10个氨基酸以内。这些氨基酸改变会引起疏水性增强。实施方式之一中，恒定区源自IgG序列，其中C末端的赖氨酸残基被替换。优选地，IgG序列的C末端赖氨酸被替换成非赖氨酸的氨基酸(例如丙氨酸或亮氨酸)以进一步提高血清半衰期。另一实施方式中，恒定区源自IgG序列，其中，恒定区C末端附近的Leu-Ser-Leu-Ser(SEQ ID NO:19)氨基酸序列具有消除潜在接合性T细胞表位的改变。例如，实施方式之一中，Leu-Ser-Leu-Ser(SEQ ID NO:19)氨基酸序列被Ala-Thr-Ala-Thr(SEQ ID NO:20)氨基酸序列取代。其他实施方式中，Leu-Ser-Leu-Ser(SEQ ID NO:19)段内的氨基酸被例如甘氨酸或脯氨酸等其他氨基酸替换。在IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或他类免疫球蛋白分子的C-末端附近产生Leu-Ser-Leu-Ser(SEQ IDNO:19)段氨基酸取代的方法可详见美国专利公开文本20030166877，其公开内容通过引用纳入本文。
本公开的适宜铰链区可源自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及其他免疫球蛋白类别。IgG1铰链区有三个半胱氨酸，其中两个参与免疫球蛋白两重链之间的二硫键。这些半胱氨酸使得Fc部分之间二硫键的形成高效且一致。因此，本公开的铰链区之一源自IgG1，例如，人IgG1。优选实施方式中，人IgG1铰链区内的第一个半胱氨酸突变为其他氨基酸，优选丝氨酸。IgG2同种型铰链区有四个二硫键，它们倾向于促成重组系统分泌期间的寡聚化和可能不正确的二硫键。适宜的铰链区可源自IgG2铰链，优选其中前两个半胱氨酸各自突变成其他氨基酸。已知IgG4的铰链区形成链间二硫键不大有效。然而，本公开的合适铰链区可以源自IgG4铰链区，优选含有增强重链衍生部分之间正确形成二硫键的突变(Angal S等，(1993)Mol.Immunol.,30:105-8)。
根据本公开，恒定区可包含源自不同抗体同种型的CH2和/或CH3结构域和铰链区，即杂交(hybrid)恒定区。例如，实施方式之一中，恒定区含有源自IgG2或IgG4的CH2和/或CH3结构域和源自IgG1的突变铰链区。或者，杂交恒定区中可采用源自其他IgG亚类的突变铰链区。例如，可以采用能够有效形成两重链间二硫键的IgG4铰链突变形式。突变型铰链也可源自IgG2铰链，其中前两个半胱氨酸各自突变成其他氨基酸。杂交恒定区的组装可见美国专利公开20030044423，其公开内容通过引用纳入本文。
根据本公开，恒定区可包含一处或多处本文所述的突变。Fc部分中突变的组合对延长血清半衰期和提高双功能分子体内效力具有累加或协同效应。因此，示例性实施方式之一中，恒定区可包含(i)衍生自IgG序列的区域，其中Leu-Ser-Leu-Ser(SEQ ID NO:19)氨基酸序列被Ala-Thr-Ala-Thr(SEQ ID NO:20)氨基酸序列替换；(ii)C-末端丙氨酸残基代替赖氨酸；(iii)衍生自不同抗体同种型的CH2结构域和铰链区，例如IgG2CH2结构域和改变的IgG1铰链区；和(iv)消除IgG2衍生的CH2结构域内的糖基化位点的突变，例如IgG2衍生的CH2结构域内的Gln-Ala-Gln-Ser(SEQ ID NO:16)氨基酸序列而不是Gln-Phe-Asn-Ser(SEQID NO:15)氨基酸序列。
抗体片段
本公开的蛋白质和多肽还可包括抗体的抗原结合片段。示例性抗体片段包括scFv、Fv、Fab、F(ab’)2和单域VHH片段，例如来自骆驼科动物的那些。
单链抗体片段，也称为单链抗体(scFv)，是重组多肽，它们通常结合抗原或受体；这些片段包含用或不用一个或多个互连接头相连的至少一个抗体可变轻链序列(VL)片段和至少一个抗体可变重链氨基酸序列(VH)片段。这样的接头可以是短的柔性肽，选来确保VL和VH结构域相连后正确的三维折叠，从而保留作为单链抗体片段来源的全抗体的靶分子结合特异性。通常，VL或VH序列的羧基末端通过这样的肽接头共价连接至互补VL和VH序列的氨基酸末端。单链抗体片段可通过分子克隆、抗体噬菌体文库展示或类似技术来产生。这些蛋白质可以在真核细胞中也可以在原核细胞(包括细菌)中生产。
单链抗体片段包含具有本文所述完整抗体可变区或CDR中至少其一的氨基酸序列，但缺失那些抗体的全部或部分恒定域。这些恒定域对于抗原结合来说不是必需的，但是构成完整抗体结构的主要部分。因此，单链抗体片段可以克服采用包含部分或全部恒定区的抗体相关的一些问题。例如，单链抗体片段倾向于没有生物分子与重链恒定区之间不希望有的相互作用或其他不希望有的生物活性。此外，单链抗体片段比完整抗体小得多，因此可具有比完整抗体更高的毛细血管通透性，这令单链抗体片段能够更高效地寻址并结合至靶抗原结合位点。并且，抗体片段可以在原核细胞中以相对大的规模产生，从而促进其生产。此外，单链抗体片段相对较小使得它们比完整抗体更不会在接受者中引发免疫反应。
还可以有与完整抗体具有相同或相当的结合特征的抗体片段。这样的片段可含有一个或两个Fab片段或F(ab’)2片段。抗体片段可包含完整抗体的全部六个CDR，但包含少于全部这些区域、例如含三、四或五个CDR的片段同样具有功能。
药物组合物
本公开还包括包含治疗有效量的本文所述的蛋白质的药物组合物。所述组合物可配制成适用于多种药物递送系统。组合物中还可包含一种或多种生理学上可接受的赋形剂或运载体以制成合适的制剂。可用于本公开的合适制剂可见《雷明顿药物科学》第17版，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Mack Publishing Company)，1985。关于药物递送方法的综述可见例如Langer(Science 249:1527-1533,1990)。
在一个方面，本公开提供了用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂，其包含500mg-2400mg的包含第一多肽和第二多肽的蛋白质，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，所述第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，并且第一多肽的重链和第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
在某些实施方式中，本公开的蛋白质产物包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，本公开的蛋白质产物包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQ IDNO:35、36和37的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列。
在本公开的某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂可包含约500mg至约2400mg剂量(例如，约500mg至约2300mg，约500mg至约2200mg，约500mg至约2100mg，约500mg至约2000mg，约500mg至约1900mg，约500mg至约1800mg，约500mg至约1700mg，约500mg至约1600mg，约500mg至约1500mg，约500mg至约1400mg，约500mg至约1300mg，约500mg至约1200mg，约500mg至约1100mg，约500mg至约1000mg，约500mg至约900mg，约500mg至约800mg，约500mg至约700mg，约500mg至约600mg，约600mg至2400mg，约700mg至2400mg，约800mg至2400mg，约900mg至2400mg，约1000mg至2400mg，约1100mg至2400mg，约1200mg至2400mg，约1300mg至2400mg，约1400mg至2400mg，约1500mg至2400mg，约1600mg至2400mg，约1700mg至2400mg，约1800mg至2400mg，约1900mg至2400mg，约2000mg至2400mg，约2100mg至2400mg，约2200mg至2400mg，或约2300mg至2400mg)的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含约500至约2000mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含约500mg剂量的包含第一多肽和第二多肽的本公开的蛋白质产物，其中第一多肽包含SEQID NO:3的氨基酸序列，且第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含500mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含约1200mg剂量的包含第一多肽和第二多肽的本公开的蛋白质产物，其中第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，且第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含1200mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含约2400mg剂量的包含第一多肽和第二多肽的本公开的蛋白质产物，其中第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，且第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含2400mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))。在某些实施方式中，静脉内药物递送制剂可包含2400mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽))。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂可包含约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg至约3000mg，约1200mg至约2900mg，约1200mg至约2800mg，约1200mg至约2700mg，约1200mg至约2600mg，约1200mg至约2500mg，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约2900mg或约3000mg)的本公开的蛋白质产物(例如抗PD-L1/TGFβ阱)。在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂可包含约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg至约3000mg，约1200mg至约2900mg，约1200mg至约2800mg，约1200mg至约2700mg，约1200mg至约2600mg，约1200mg至约2500mg，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约2900mg或约3000mg)的蛋白质产物，其具有包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂可包含约525mg，约550mg，约575mg，约600mg，约625mg，约650mg，约675mg，约700mg，约725mg，约750mg，约775mg，约800mg，约825mg，约850mg，约875mg，约900mg，约925mg，约950mg，约975mg，约1000mg，约1025mg，约1050mg，约1075mg，约1100mg，约1125mg，约1150mg，约1175mg，约1200mg，约1225mg，约1250mg，约1275mg，约1300mg，约1325mg，约1350mg，约1375mg，约1400mg，约1425mg，约1450mg，约1475mg，约1500mg，约1525mg，约1550mg，约1575mg，约1600mg，约1625mg，约1650mg，约1675mg，约1700mg，约1725mg，约1750mg，约1775mg，约1800mg，约1825mg，约1850mg，约1875mg，约1900mg，约1925mg，约1950mg，约1975mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg或约2400mg的本公开的蛋白质(例如，抗-PD-L1/TGFβ阱)，其包含具有SEQID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和具有SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽。
本公开的用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的静脉内药物递送制剂可以包含在袋、笔或注射器中。在某些实施方式中，袋可以连接包括管和/或针的通道。在某些实施方式中，制剂可以是冻干制剂或液体制剂。在某些实施方式中，制剂可以冷冻干燥(冻干)并包含在约12-60个小瓶中。在某些实施方式中，制剂可以是冷冻干燥的，并且约45mg的冷冻干燥制剂可以包含在一个小瓶中。在某些实施方式中，约40mg-约100mg的冷冻干燥制剂可以包含在一个小瓶中。在某些实施方式中，将来自12，27或45个小瓶的冷冻干燥制剂合并以获得静脉内药物制剂中治疗剂量的蛋白质。在某些实施方式中，制剂可以是蛋白质产物的液体制剂，该产物具有包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物，并储存为约250mg/小瓶至约2000mg/小瓶(例如，约250mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1900mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1800mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1700mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1600mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1500mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1400mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1300mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1200mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1100mg/小瓶，约250mg/小瓶至约1000mg/小瓶，约250mg/小瓶至约900mg/小瓶，约250mg/小瓶至约800mg/小瓶，约250mg/小瓶至约700mg/小瓶，约250mg/小瓶至约600mg/小瓶，约250mg/小瓶至约500mg/小瓶，约250mg/小瓶至约400mg/小瓶，约250mg/小瓶至约300mg/小瓶，约300mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约400mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约500mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约600mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约700mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约800mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约900mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1000mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1100mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1200mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1300mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1400mg/小时小瓶至约2000mg/小瓶，约1500mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1600mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1700mg/小瓶至约2000mg/小瓶，约1800mg/小瓶至约2000mg/小瓶，或约1900mg/小瓶至约2000mg/小瓶)。在某些实施方式中，制剂可以是液体制剂并储存为约600mg/小瓶。在某些实施方式中，制剂可以是液体制剂并储存为约1200mg/小瓶。在某些实施方式中，制剂可以是液体制剂并储存为约1800mg/小瓶。在某些实施方式中，制剂可以是液体制剂并储存为约250mg/小瓶。
本公开提供了液体水性药物制剂，其于缓冲溶液中包含治疗有效量的本公开的蛋白质(例如，抗-PD-L1/TGFβ阱)而形成制剂，该制剂用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法。
这些用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的组合物可用常规灭菌技术灭菌或可进行无菌过滤。所得水性溶液可包装成原样使用(“use as-is”)型产品或冻干，冻干制剂在给药之前与无菌水性运载体合并。制剂的pH通常在3至11之间，5至9之间或6至8之间更好，7至8之间例如7至7.5之间最好。得到的固体形式的组合物可以包装成多个单剂量单位，每个单剂量单位含有固定量的上述一种或多种药剂。固体形式的组合物也可以包装在容器中以获得灵活的量。
在某些实施方式中，本公开提供了用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的具有延长的保质期的制剂，所述制剂包括本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽))和甘露醇，柠檬酸一水合物，柠檬酸钠，二水合磷酸氢二钠，二水合磷酸二氢钠，氯化钠，聚山梨醇酯80，水和氢氧化钠。
在某些实施方式中，本公开用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的水性制剂制备成在pH缓冲溶液中包含本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽)；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物)。本发明的缓冲液的pH可以为约4至约8，例如约4至约8，约4.5至约8，约5至约8，约5.5至约8，约6至约8，约6.5至约8，约7至约8，约7.5至约8，约4至约7.5，约4.5至约7.5，约5至约7.5，约5.5至约7.5，约6至约7.5，约6.5至约7.5，约4至约7，约4.5至约7，约5至约7，约5.5至约7，约6至约7，约4至约6.5，约4.5至约6.5，约5至约6.5，约5.5至约6.5，约4至约6.0，约4.5至约6.0，约5至约6，或约4.8至约5.5，或可具有约5.0至约5.2的pH。上述pH的中间范围也是本公开的一部分。例如，旨在包括使用任何上述值的组合作为上限和/或下限的值范围。将pH控制在该范围内的缓冲剂的示例包括乙酸盐(例如乙酸钠)，琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)，葡糖酸盐，组氨酸，柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的制剂包括含有柠檬酸盐和磷酸盐、将pH维持在约4至约8的范围内的缓冲系统。在某些实施方式中，pH范围可以为约4.5至约6.0，或约pH4.8至约5.5，或在约5.0至约5.2的pH范围内。在某些实施方式中，缓冲系统包括柠檬酸一水合物，柠檬酸钠，二水合磷酸氢二钠和/或二水合磷酸二氢钠。在某些实施方式中，缓冲系统包含约1.3mg/ml的柠檬酸(例如，1.305mg/ml)，约0.3mg/ml的柠檬酸钠(例如，0.305mg/ml)，约1.5mg/ml的二水合磷酸氢二钠(例如，1.53mg/ml)，约0.9mg/ml的二水合磷酸二氢钠(例如，0.86)，和约6.2mg/ml的氯化钠(例如，6.165mg/ml)。在某些实施方式中，缓冲系统包含约1-1.5mg/ml的柠檬酸，约0.25至约0.5mg/ml的柠檬酸钠，约1.25至约1.75mg/ml的二水合磷酸氢二钠，约0.7至约1.1mg/ml的二水合磷酸二氢钠，和6.0至6.4mg/ml的氯化钠。在某些实施方式中，用氢氧化钠调节制剂的pH。
用作调理剂并可稳定抗体的多元醇也可包括在制剂中。多元醇加入到制剂中的量可以根据制剂的所需等渗性而不同。在某些实施方式中，水性制剂可以是等渗的。加入的多元醇的量也可以相对于多元醇的分子量而改变。例如，与二糖(例如海藻糖)相比，可以加入较低量的单糖(例如甘露醇)。在某些实施方式中，可以在制剂中用作张力剂的多元醇是甘露醇。在某些实施方式中，甘露醇浓度可为约5至约20mg/ml。在某些实施方式中，甘露醇浓度可为约7.5至约15mg/ml。在某些实施方式中，甘露醇浓度可为约10至约14mg/ml。在某些实施方式中，甘露醇浓度可为约12mg/ml。在某些实施方式中，制剂中可包含多元醇山梨糖醇。
清洁剂或表面活性剂也可以加入到制剂中。示例性清洁剂包括非离子清洁剂，例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20，80等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。加入的清洁剂的量使得它减少配制的抗体的聚集和/或使制剂中颗粒的形成最小化和/或减少吸附。在某些实施方式中，制剂可包括表面活性剂聚山梨醇酯。在某些实施方式中，制剂可含有清洁剂聚山梨醇酯80或吐温80。吐温80用于表示聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯(参见Fiedler，《辅料百科》(Lexikon der Hilfsstoffe)，Editio Cantor Verlag Aulendorf出版，第4版，1996)。在某些实施方式中，制剂可含有约0.1mg/mL至约10mg/mL，或约0.5mg/mL至约5mg/mL的聚山梨醇酯80。在某些实施方式中，可以在制剂中加入约0.1％的聚山梨醇酯80。
冻干制剂
本公开的用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的冻干制剂包含抗PD-L1/TGFβ阱分子和冻干保护剂。冻干保护剂可以是糖，例如二糖。在某些实施方式中，冻干保护剂可以是蔗糖或麦芽糖。冻干制剂还可包含缓冲剂，表面活性剂，填充剂和/或防腐剂中的一种或多种。
可用于稳定冻干药物产品的蔗糖或麦芽糖的量可以是至少1:2的蛋白质与蔗糖或麦芽糖重量比。在某些实施方式中，蛋白质与蔗糖或麦芽糖的重量比可以为1:2至1:5。
在某些实施方式中，在冻干之前，可以通过添加药学上可接受的酸和/或碱来设定制剂的pH。在某些实施方式中，药学上可接受的酸可以是盐酸。在某些实施方式中，药学上可接受的碱可以是氢氧化钠。
在冻干之前，含有本公开的蛋白质的溶液的pH可以调节为约6至约8之间。在某些实施方式中，冻干药物产品的pH范围可以为约7至约8。
在某些实施方式中，可以约10mM-约200mM的量加入盐或缓冲组分。盐和/或缓冲剂是药学上可接受的，并且衍生自各种已知酸(无机和有机)与“成碱”金属或胺。在某些实施方式中，缓冲液可以是磷酸盐缓冲液。在某些实施方式中，缓冲液可以是甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐缓冲液，在这些情况下，钠离子、钾离子或铵离子可以用作反离子。
在某些实施方式中，可以添加“填充剂”。“填充剂”是这样一种化合物，它增加冻干混合物的量并有助于冻干块体的物理结构(例如，有助于生产保持开孔结构的基本上均匀的冻干饼体)。示例性填充剂包括甘露醇，甘氨酸，聚乙二醇和山梨糖醇。本发明的冻干制剂可含有此类填充剂。
可任选地将防腐剂加入本文的制剂中以减少细菌作用。添加防腐剂可以，例如，促进复用(多剂量)制剂的生产。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的冻干药物产品可以用水性运载体来复溶。本文所关注的水性运载体是药学上可接受的(例如对人给药安全无毒)并且可在冻干后用于制备液体制剂。示例性稀释剂包括无菌注射用水(SWFI)，抑菌性注射用水(BWFI)，pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)，无菌盐水溶液，林格氏溶液或右旋糖溶液。
在某些实施方式中，本公开的冻干药物产品用无菌注射用水，USP(SWFI)或0.9％氯化钠注射液，USP重建。在复溶过程中，冻干粉末溶解成溶液。
在某些实施方式中，本公开的冻干蛋白质产物溶于约4.5mL注射用水并用0.9％盐水溶液(氯化钠溶液)稀释。
液体制剂
一些实施方式中，将本公开的蛋白质产物配制成用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的液体制剂。液体制剂可以10mg/mL浓度存在于USP/Ph Eur I型50R小瓶中，小瓶用橡皮塞封口并用铝卷边包封来密封。塞子可以由符合USP和Ph Eur的弹性体制成。在某些实施方式中，小瓶可以填充有约61.2mL的蛋白质产物溶液，以允许有60mL的可提取体积。在某些实施方式中，液体制剂可以用0.9％盐水溶液稀释。在某些实施方式中，小瓶可含有约61.2mL的约20mg/mL至约50mg/mL(例如，约20mg/mL，约25mg/mL，约30mg/mL，约35mg/mL，约40mg/mL，约45mg/mL或约50mg/mL)蛋白质产物(例如抗PD-L1/TGFβ阱)(例如，具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物)的溶液，以允许有60mL的可提取体积用于递送约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg至约3000mg，约1200mg至约2900mg，约1200mg至约2800mg，约1200mg至约2700mg，约1200mg至约2600mg，约1200mg至约2500mg，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约2900mg，或约3000mg)的蛋白质产物(例如抗PD-L1/TGFβ阱，如具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物)至对象。
在某些实施方式中，小瓶可含有约61.2mL的约20mg/mL至约50mg/mL(例如，约20mg/mL，约25mg/mL，约30mg/mL，约35mg/mL，约40mg/mL，约45mg/mL或约50mg/mL)的蛋白质产物(例如抗PD-L1/TGFβ阱，如具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物)的溶液，以允许有60mL的可提取体积用于递送约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg至约3000mg，约1200mg至约2900mg，约1200mg至约2800mg，约1200mg至约2700mg，约1200mg至约2600mg，约1200mg至约2500mg，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约2900mg，或约3000mg)的蛋白质产物至未经治疗的对象。
在某些实施方式中，本公开的用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的液体制剂可以制备成10mg/mL浓度的溶液，并与稳化水平的糖组合。在某些实施方式中，液体制剂可以制备在水性运载体中。在某些实施方式中，可以加入稳定剂，其加量不大于可能导致粘度对静脉内给药来说不合适或不理想的量。在某些实施方式中，糖可以是二糖，例如蔗糖。在某些实施方式中，液体制剂还可包含缓冲剂、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种。
在某些实施方式中，在冻干之前，可以通过添加药学上可接受的酸和/或碱来设定制剂的pH。在某些实施方式中，药学上可接受的酸可以是盐酸。在某些实施方式中，碱可以是氢氧化钠。
除聚集外，脱酰胺是肽和蛋白质的常见产物变体，可发生于发酵、收获/细胞澄清、纯化、药物/药物产品储存期间和样品分析期间。脱酰胺作用是蛋白质中丢失NH3形成可水解的琥珀酰亚胺中间体。琥珀酰亚胺中间体导致亲本肽质量减少17u。随后的水解导致质量增加18u。由于在水性条件下的不稳定性，难以分离琥珀酰亚胺中间体。因此，脱酰胺通常可测知为1u质量增加。天冬酰胺脱酰胺形成天冬氨酸或异天冬氨酸。影响脱酰胺速率的参数包括pH，温度，溶剂介电常数，离子强度，一级序列，局部多肽构象和三级结构。肽链中与Asn相邻的氨基酸残基影响脱酰胺速率。蛋白质序列中Asn后的Gly和Ser导致更易脱酰胺。
在某些实施方式中，本公开用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的液体制剂可以在pH和湿度条件下保存以防止蛋白质产物脱氨基。
本文所关注的水性运载体是药学上可接受的(对人给药安全无毒)并且可用于制备液体制剂。示例性运载体包括无菌注射用水(SWFI)，抑菌性注射用水(BWFI)，pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)，无菌盐水溶液，林格氏溶液或右旋糖溶液。
可任选地将防腐剂加入本文的制剂中以减少细菌作用。添加防腐剂可以，例如，促进复用(多剂量)制剂的生产。
特定情况下，静脉内(IV)制剂可以是优选的给药途径，例如当患者在移植后在医院中通过IV途径接受所有药物时。在某些实施方式中，在给药前用0.9％氯化钠溶液稀释液体制剂。在某些实施方式中，用于注射的稀释药物产品是等渗的并且适于通过静脉内输注给药。
在某些实施方式中，盐或缓冲组分可以约10mM-约200mM的量加入。盐和/或缓冲剂是药学上可接受的，并且衍生自各种已知酸(无机和有机)与“成碱”金属或胺。在某些实施方式中，缓冲液可以是磷酸盐缓冲液。在某些实施方式中，缓冲液可以是甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐缓冲液，在这种情况下，钠离子、钾离子或铵离子可以用作反离子。
可任选地将防腐剂加入本文的制剂中以减少细菌作用。添加防腐剂可以，例如，促进复用(多剂量)制剂的生产。
本文所关注的水性运载体是药学上可接受的(对人给药安全无毒)并且可用于制备液体制剂。示例性运载体包括无菌注射用水(SWFI)，抑菌性注射用水(BWFI)，pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)，无菌盐水溶液，林格氏溶液或右旋糖溶液。
可任选地将防腐剂加入本文的制剂中以减少细菌作用。添加防腐剂可以，例如，促进复用(多剂量)制剂的生产。
治疗癌症或抑制肿瘤生长的方法
在一个方面，本公开提供治疗有需要的未经治疗的对象中癌症或抑制所述对象中肿瘤生长的方法，该方法包括向对象给予至少500mg的蛋白质的剂量，该蛋白质包括第一多肽和第二多肽。所述第一多肽包括：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段。所述第二多肽至少包括结合PD-L1的抗体轻链可变区，并且第一多肽的重链和第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
在某些实施方式中，本公开的治疗癌症或抑制肿瘤生长的方法包括向未经治疗的对象给予包含两种肽的蛋白质，其中第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，蛋白质是抗PD-L1/TGFβ阱分子。
在一些实施方式中，根据本文公开的方法治疗的未经治疗的对象在用本公开的双功能蛋白(抗PD-1/TGFβ阱分子)治疗前未接受过先前治疗。在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的NSCLC)患者不具有选自表皮生长因子受体(EGFR)致敏(激活)突变、间变性淋巴瘤激酶(ALK)易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的突变。
在某些实施方式中，本公开治疗癌症或抑制肿瘤生长的方法包括对未经治疗的对象给予蛋白质(例如抗PD-L1/TGFβ阱(如具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物))，其剂量为约1200mg至约3000mg(例如，约1200mg至约3000mg，约1200mg至约2900mg，约1200mg至约2800mg，约1200mg至约2700mg，约1200mg至约2600mg，约1200mg至约2500mg，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约2900mg或约3000mg)。在某些实施方式中，每两周一次向未经治疗的对象给予约1200mg的抗PD-L1/TGFβ阱分子。在某些实施方式中，每三周一次向未经治疗的对象给予约2400mg的抗PD-L1/TGFβ阱分子。在某些实施方式中，每两周一次给予未经治疗的对象约1200mg具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物。在某些实施方式中，每三周一次给予未经治疗的对象约2400mg具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物。在某些实施方式中，每三周一次给予未经治疗的对象约2400mg具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物。
在某些实施方式中，给予未经治疗对象的剂量可以是约500mg，约525mg，约550mg，约575mg，约600mg，约625mg，约650mg，约675mg，约700mg，约725mg，约750mg，约775mg，约800mg，约825mg，约850mg，约875mg，约900mg，约925mg，约950mg，约975mg，约1000mg，约1025mg，约1050mg，约1075mg，约1100mg，约1125mg，约1150mg，约1175mg，约1200mg，约1225mg，约1250mg，约1275mg，约1300mg，约1325mg，约1350mg，约1375mg mg，约1400mg，约1425mg，约1450mg，约1475mg，约1500mg，约1525mg，约1550mg，约1575mg，约1600mg，约1625mg，约1650mg，约1675mg，约1700mg，约1725mg，约1750mg，约1775mg，约1800mg，约1825mg，约1850mg，1875mg，约1900mg，约1925mg，约1950mg，约1975mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，或约2400mg。
在某些实施方式中，给予未经治疗对象的剂量可以每两周给予一次。在某些实施方式中，给予未经治疗对象的剂量可以每三周给予一次。在某些实施方式中，蛋白质可以通过静脉内给药，例如用预填充袋、预填充笔或预填充注射器给药。在某些实施方式中，蛋白质从250ml盐水袋静脉内给予，并且静脉内输注可以持续约1小时(例如，50至80分钟)。在某些实施方式中，袋连接包括管和/或针的通道。
在一些实施方式中，NSCLC显示鳞状或非鳞状组织学。例如在一个实施方式中，所述方法治疗鳞状NSCLC。在一些实施方式中，所述方法治疗非鳞状NSCLC。
在某些实施方式中，通过静脉内给予至少500mg(例如，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg或更多)的抗PD-L1/TGFβ阱治疗具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者，其中该阱分子包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，通过静脉内给予至少500mg(例如，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg或更多)的抗PD-L1/TGFβ阱治疗具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者，其中该阱分子包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQID NO:35、36和37的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列。
在某些实施方式中，具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的患者通过静脉内给予约1200mg-约2400mg(例如，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约2400mg，约1400mg至约2400mg，约1500mg至约2400mg，约1600mg至约2400mg，约1700mg至约2400mg，约1800mg至约2400mg，约1900mg至约2400mg，约2000mg至约2400mg，约2100mg至约2400mg，约2200mg至约2400mg，或约2300mg至约2400mg)的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗，其中该阱分子包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在某些实施方式中，具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过静脉内给予约1200mg-约2400mg(例如，约1200mg至约2400mg，约1200mg至约2300mg，约1200mg至约2200mg，约1200mg至约2100mg，约1200mg至约2000mg，约1200mg至约1900mg，约1200mg至约1800mg，约1200mg至约1700mg，约1200mg至约1600mg，约1200mg至约1500mg，约1200mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约2400mg，约1400mg至约2400mg，约1500mg至约2400mg，约1600mg至约2400mg，约1700mg至约2400mg，约1800mg至约2400mg，约1900mg至约2400mg，约2000mg至约2400mg，约2100mg至约2400mg，约2200mg至约2400mg，或约2300mg至约2400mg)的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗，其中该阱分子包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列，所述第二多肽包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列。
在某些实施方式中，具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过每两周一次静脉内给予约1200mg的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。在某些实施方式中，具有晚期NSCLC例如PD-L1高表达的NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过每三周一次静脉内给予约2400mg的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。
在一些实施方式中，接受治疗的癌症为PD-L1阳性。例如，在某些实施方式中，接受治疗的癌症表现出高PD-L1表达(“高PD-L1”或“PD-L1高”)。
检测例如癌症或肿瘤上的生物标志物例如PD-L1的方法是本领域常规的并且纳入本文。非限制性实例包括免疫组织化学，免疫荧光和荧光活化细胞分选(FACS)。在某些实施方式中，具有高PD-L1的晚期NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过静脉内给予至少500mg剂量的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。在某些实施方式中，具有高PD-L1的晚期NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过每两周一次静脉内给予约1200mg剂量的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。在某些实施方式中，具有高PD-L1的晚期NSCLC(如鳞状或非鳞状晚期NSCLC)的未经治疗的对象或患者通过每三周一次静脉内给予约2400mg剂量的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。
在一些实施方式中，未经治疗的对象或患者不具有选自EGFR致敏突变、ALK易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的突变。或例如，在一些实施方式中，有高PD-L1的晚期NSCLC(例如鳞状或非鳞状晚期NSCLC)但没有选自以下突变：EGFR致敏突变，ALK易位，ROS1突变和BRAF V600E突变的未经治疗的对象或患者通过静脉内给予至少500mg(例如约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约1900mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg或更多)的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。在某些实施方式中，具有高PD-L1的晚期NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)但没有选自以下突变：EGFR致敏突变、ALK易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的未经治疗的对象或患者通过每两周一次静脉内给予约1,200mg剂量的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。在某些实施方式中，具有高PD-L1的晚期NSCLC(如鳞状或非鳞状NSCLC)但没有选自以下突变：EGFR致敏突变、ALK易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的未经治疗的对象或患者通过每三周一次静脉内给予约2400mg剂量的抗PD-L1/TGFβ阱来治疗。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法导致对象或患者疾病缓解或生存期改善。例如，在一些实施方式中，疾病缓解可以是完全缓解，部分缓解或病情稳定。例如，在一些实施方式中，提高的生存期可以是无进展生存期(PFS)或总生存期。在一些实施方式中，改善(例如PFS方面)相对于开始用本公开抗PD-L1/TGFβ阱治疗之前的时期来确定。确定针对癌症或肿瘤治疗的疾病缓解(例如，完全缓解，部分缓解或病情稳定)和患者生存期(例如，PFS，总生存期)的方法在本领域中是常规的，并且纳入本文。在一些实施方式中，接受治疗的患者在患病区域(例如，覆盖胸膜入口至耻骨联合的上方范围的胸部/腹部和骨盆)接受相差增强计算机断层摄影(CT)或磁共振显影(MRI)之后，根据RECIST 1.1评估疾病缓解。
递送装置
在一个方面，本公开提供用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置，其中该装置包括制剂，该制剂包含约500mg-30000mg的包含第一多肽和第二多肽的蛋白质，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，并且第一多肽的重链和第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
在某些实施方式中，该装置可以是袋、笔或注射器。在某些实施方式中，袋可以连接包括管和/或针的通道。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置可包含约500mg至约3000mg(例如，约500mg至约3000mg，约500mg至约2900mg，约500mg至约2800mg，约500mg至约2700mg，约500mg至约2600mg，约500mg至约2500mg，约500mg至约2400mg，约500mg至约2300mg，约500mg至约2200mg，约500mg至约2100mg，约500mg至约2000mg，约500mg至约1900mg，约500mg至约1800mg，约500mg至约1700mg，约500mg至约1600mg，约500mg至约1500mg，约500mg至约1400mg，约1200mg至约1300mg，约1300mg至约3000mg，约1400mg至约3000mg，约1500mg至约3000mg，约1600mg至约3000mg，约1700mg至约3000mg，约1800mg至约3000mg，约1900mg至约3000mg，约2000mg至约3000mg，约2100mg至约3000mg，约2200mg至约3000mg，约2300mg至约3000mg，约2400mg至约3000mg，约2500mg至约3000mg，约2600mg至约3000mg，约2700mg至约3000mg，约2800mg至约3000mg mg，约2900mg至约3000mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，约1500mg，约1600mg，约1700mg，约1800mg，约500mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg，约2400mg，约2500mg，约2600mg，约2700mg，约2800mg，约3,000mg或约3000mg)的本公开的蛋白质(例如抗PD-L1/TGFβ阱，其具有包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物)。在某些实施方式中，药物递送装置可包含约500至约1200mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，其包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽)。在某些实施方式中，药物递送装置可包含约500mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，其包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的第二多肽；或包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物)。
在某些实施方式中，药物递送装置可包含约1200mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，其包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽，和包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物)。在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置包括约2400mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，其包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物)。在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置包括约1200mg或约2400mg剂量的蛋白质产物，其具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物。
在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置包括约1200mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，(例如包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物))。在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达的NSCLC)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置包括约2400mg剂量的本公开的蛋白质(例如，抗PD-L1/TGFβ阱，(例如包括包含SEQID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽；或具有包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:38、39和40的第二多肽的蛋白质产物))。在某些实施方式中，用于未经治疗癌症(例如具有高PD-L1表达)患者中癌症治疗或肿瘤生长抑制的方法的药物递送装置可包含约500mg，约525mg，约550mg，约575mg，约600mg，约625mg，约650mg，约675mg，约700mg，约725mg，约750mg，约775mg，约800mg，约825mg，约850mg，约875mg，约900mg，约925mg，约950mg，约975mg，约1000mg，约1025mg，约1050mg，约1075mg，约1100mg，约1125mg，约1150mg，约1175mg，约1200mg，约1225mg，约1250mg，约1275mg，约1300mg，约1325mg，约1350mg，约1375mg，约1400mg，约1425mg，约1450mg，约1475mg，约1500mg，约1525mg，约1550mg，约1575mg，约1600mg，约1625mg，约1650mg，约1675mg，约1700mg，约1725mg，约1750mg，约1775mg，约1800mg，约1825mg，约1850mg，约1875mg，约1900mg，约1925mg，约1950mg，约1975mg，约2000mg，约2100mg，约2200mg，约2300mg或约2400mg的本公开的蛋白质(例如，抗-PD-L1/TGFβ阱)，例如包含具有SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的第一多肽和具有SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的第二多肽的蛋白质产物。
蛋白质生产
抗体-细胞因子阱蛋白质一般采用包含经工程改造以表达所述蛋白质的核酸的哺乳动物细胞通过重组技术来生产。尽管在US20150225483A1的实施例1和2中描述了合适的细胞系和蛋白质生产方法的一个例子，但是已有大量合适的载体、细胞系和蛋白质生产方法用来生产基于抗体的生物药物并可以用于合成本文的抗体-细胞因子阱蛋白。
治疗适应症
本申请中描述的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白(例如，包括包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的第一多肽和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第二多肽)以及包括所述抗-PD-L1/TGFβ阱蛋白的本公开的静脉药物递送制剂和递送装置可用于治疗未经治疗的患者中的癌症或降低所述患者中的肿瘤生长。示例性癌症包括非小细胞肺癌(NSCLC)，黑素瘤，胰腺癌，结直肠癌(例如，经预治疗的结直肠癌(CRC))，卵巢癌，胶质母细胞瘤，胃癌(例如，经预治疗的复发性或难治性不可切除的IV期胃癌)，胆道癌，食道癌(鳞状细胞癌或腺癌)，头颈部腺瘤，以及头颈部鳞状癌。在一个具体实施方式中，治疗的癌症是晚期NSCLC(例如鳞状或非鳞状晚期NSCLC)。
用抗PD-L1/TGFβ阱治疗的癌症或肿瘤可基于肿瘤中PD-L1和/或TGFβ的表达或升高的表达、它们的表达水平与预后或疾病进展的相关性、以及关于肿瘤对于PD-L1和TGFβ靶向治疗的敏感性的临床前和临床经验来选择。这些癌症或肿瘤包括但不限于，结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、宫颈癌、膀胱癌、头颈部癌、肝癌、非小细胞肺癌、晚期非小细胞肺癌、黑素瘤、梅克尔细胞癌和间皮瘤。例如，在具体实施方式中，用本公开的方法治疗具有PD-L1阳性(例如高PD-L1)的晚期NSCLC的未经治疗的患者。
在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的晚期NSCLC(即转移性NSCLC))患者不具有选自表皮生长因子受体(EGFR)致敏(激活)突变、间变性淋巴瘤激酶(ALK)易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的突变。在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的晚期NSCLC(即转移性NSCLC))患者不具有表皮生长因子受体(EGFR)致敏(激活)突变。在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的晚期NSCLC(即转移性NSCLC))患者不具有间变性淋巴瘤激酶(ALK)易位突变。在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的晚期NSCLC(即转移性NSCLC))患者不具有ROS1突变。在一些实施方式中，接受本公开所述方法治疗的未经治疗的癌症(例如，具有高PD-L1表达的晚期NSCLC(即转移性NSCLC))患者不具有BRAFV600E突变。
实施例
以上是对本公开的一般性说明，参考以下实施例将更容易理解，所述实施例仅用于说明本公开的某些方面和实施方式，无意于以任何方式限制本公开的范围。
实施例1：静脉内药物制剂包装
抗-PD-L1/TGFβ阱制剂制备成冻干制剂或液体制剂。为了制备冻干制剂，将冷冻-干燥的抗-PD-L1/TGFβ阱分子灭菌并存放于一次性使用(single-use)玻璃瓶中。然后将几个这样的玻璃药瓶包装在试剂盒中，用于向诊断为患有癌症或肿瘤的对象递送特定非体重依赖性剂量。根据剂量要求，该试剂盒包含12-60个小瓶。或者，制备制剂并包装为液体制剂，并按250mg/瓶至1000mg/瓶储存。例如，制剂是液体制剂并按600mg/瓶储存，或按250mg/瓶储存。在另一个实例中，将抗-PD-L1/TGFβ阱分子制备成10mg/mL的溶液，装于USP/Ph Eurtype I小瓶中提供，小瓶中的装量允许有60mL(600mg/60mL)的可提取体积，遵守USP和PhEur要求用橡胶塞以血清格式封口并用铝卷边包封来密封。
对一名诊断为晚期非小细胞肺癌的对象静脉内给予含500mg至2400mg抗-PD-L1/TGFβ阱分子的制剂。例如，对该对象静脉内给予1200mg抗-PD-L1/TGFβ阱，两周内给药一次，或给予2400mg抗-PD-L1/TGFβ阱，三周内给药一次。通过盐水袋进行静脉内给药。抗-PD-L1/TGFβ阱分子给药量不依赖于对象的体重。
实施例2：未经治疗的晚期NSCLC患者组的非BW依赖性剂量方案
在一个示例性实施方式中，每两周一次向患有晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的对象给予1200mg的非BW依赖性剂量。静脉内给药持续约1小时(-10分钟/+20分钟，即50分钟至80分钟)。在一个示例性实施方式中，每三周一次向患有晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的对象给予2400mg的非BW依赖性剂量。静脉内给药持续约1小时(-10分钟/+20分钟，即50分钟至80分钟)。为了减轻潜在的输液相关反应，对于前2次输注，每剂量抗-PD-L1/TGFβ阱分子用药前约30至60分钟给予抗组胺药和扑热息痛(对乙酰氨基酚)(例如，25-50mg苯海拉明和500-650mg扑热息痛[对乙酰氨基酚]静脉内或口服等效物)的预先用药。如果在前两次输注期间看到≥2级输液反应，不停止预先用药。禁止使用类固醇作为预先用药。
下面是该实施例中患者的纳入标准。患者：
-年龄≥18岁
-组织学确认的晚期NSCLC诊断，伴肿瘤细胞高表达PD-L1
-未接受过针对晚期NSCLC的在先的系统性治疗(只要在转移性疾病诊断之前至少6个月完成治疗，已完成的细胞毒性化疗、生物疗法或放疗作为新辅助/辅助治疗的一部分是允许的)
-有依据RECIST 1.1版(见Eisenhauer等，EJC.2009；45:228-247)可测量的疾病
-有至少三个月的预期寿命
-有肿瘤档案材料(6个月以内)或取新鲜活检鉴定PD-L1的表达
-东部合作肿瘤小组(ECOG PS)表现状态为0-1
-有足够的的器官功能和≥3个月的预期寿命
-有足够的血液学功能，定义为中性粒细胞绝对数(ANC)≥1.5×109/L，血小板计数≥100×109/L，血红蛋白(Hgb)≥9g/dL
-有足够的肝功能，定义为总胆红素水平≤正常值上限(ULN)，AST水平≤1.5×ULN，ALT水平≤1.5×ULN。对于肝脏受累于肿瘤的对象，天冬氨酸转氨酶(AST)≤5.0×ULN，丙氨酸转氨酶(ALT)≤5.0×ULN，且胆红素≤3.0是可接受的
-具有充足的肾功能，其特征为肌酐≤1.5×ULN，或算得肌酐清除率>30mL/分钟，和
-有足够的凝血功能，定义为国际标准化比率(INR)或凝血酶原时间(PT)≤1.5×ULN，除非参试者正在接受抗凝血剂治疗；且活化部分凝血活酶时间(aPTT)≤1.5×ULN，除非参试者正在接受抗凝血剂治疗。
选择的患者没有接受免疫刺激剂可能会恶化的自身免疫性疾病或活动性结核病。选择的患者没有接受过抗-PD-1、抗-PD-L1、抗-PD-L2、抗-CD137或抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体(包括伊匹单抗)或其他任何特异性靶向T细胞协同刺激或检查点通路的抗体或药物先前治疗。
实施例3：用抗-PD-L1/TGFβ阱分子治疗晚期非小细胞肺癌患者
目的：该研究的目的是评估抗-PD-L1/TGFβ阱作为治疗PD-L1肿瘤高表达型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的一线疗法是否改善无进展生存期(PFS)时间和/或总体最佳疗效(BOR)。在此NSCLC患者组中使用抗-PD-L1/TGFβ阱的基本原理为，抗-PD-L1/TGFβ阱靶向肿瘤微环境中两个主要免疫抑制机制：PD-L1和TGFβ。临床前数据表明，在小鼠肿瘤模型中，与单独使用抗PD-L1抗体阿维鲁单抗或单独使用TGFβ阱对照相比，抗-PD-L1/TGFβ阱强有力地提高了抗肿瘤活性并延长了生存期。因此，同时中和肿瘤免疫激活的抑制因子TGF-β，或许能促进患者的临床缓解。
研究设计：此研究测评了疾病缓解和生存期主要终点，从而评估抗-PD-L1/TGFβ阱作为PD-L1肿瘤高表达型晚期NSCLC患者的一线治疗方案的临床获益。就该研究的目的而言，PD-L1高指据Dako 73-10检测测定≥80％PD-L1阳性肿瘤细胞。在研究入组前按当地实验室规定进行的PD-L1 Dako IHC 22C3 PharmDx检测测定肿瘤比例评分(TPS)≥50％的患者也是符合条件的。Dako 73-10检测和Dako IHC 22C3 PharmDx检测在各自临界值选取相似的患者群。在此研究中招募了约300名未接受过晚期NSCLC先前治疗的患者(患者为未经治疗的)。本研究中患者符合实例2中描述的患者纳入标准，未接受过晚期NSCLC的先前系统性治疗(患者为未经治疗的)，无表皮生长因子(EGFR)敏感(激活)突变、无间变型淋巴瘤激酶(ALK)易位、无ROS1突变或BRAF V600E突变，靶向治疗在当地得到批准。患者如下所述根据肿瘤组织学(鳞状与非鳞状)和吸烟史分型：鳞状史，非鳞状史且从不吸烟，非鳞状史有吸烟史。患者接受抗-PD-L1/TGFβ阱静脉内给药，剂量为每两周一次1200mg或每三周一次2400mg。治疗持续至根据《实体瘤疗效评估标准1.1版》(RECIST 1.1)确认的进展性疾病(PD)，出现不可接受的毒性，或长达24个月。在PD的情况下，如果患者的东部合作肿瘤小组表现状态(ECOG PS)表现稳定，或参试者能从后续治疗中获益，则治疗可以在首次测出PD或确认PD后继续。出现病情稳定(SD)、部分缓解(PR)或完全缓解(CR)的患者持续治疗，直至24个月的终点，尽管可能有其他治疗。
在整个治疗过程中，通过记录、报告和分析医学基线状况、不良事件、体检发现(包括生命体征、ECOG表现状态和实验室检查)持续评估安全性。
疗效评估：通过CT扫描或MRI评估抗-PD-L1/TGFβ阱的肿瘤疗效。在随后的访视中重复进行基线扫描。通常，在随后的肿瘤评估访视时使用相同的成像方法并且优选相同的成像设备跟踪在基线处检测到的病灶。使用卡尺测量皮肤转移的指标，如果它们满足RECIST 1.1关于靶病变的标准则可以用作RECIST 1.1的靶病变。
结果：客观肿瘤疗效通过总缓解率(ORR)来评估，定义为达到完全缓解(CR)或部分缓解(PR)的总体最佳疗效(BOR)的参试者数除以在此分析群中的参试者数。无进展生存期定义为从随机分组到根据RECIST 1.1评估的客观疾病进展(PD)的首次记录日或到任何原因所致死亡的时间，取二者中先发生的那个。据信，抗-PD-L1/TGFβ阱治疗对未经治疗的PD-L1高表达型晚期NSCLC患者有初步临床活性。在治疗前后，由接受抗-PD-L1/TGFβ阱给药患者的血液和肿瘤样本测定肿瘤生物标志物。接受治疗的患者表现出疾病缓解(如部分缓解、完全缓解、病情稳定)和/或生存期(如无进展生存期和/或总生存期)改善。
综上，上述实例为治疗未经治疗的PD-L1高表达型晚期NSCLC患者提供了包含抗-PD-L1/TGFβ阱的治疗方案。
序列
SEQ ID NO:1
分泌的抗PD-L1λ轻链的肽序列
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:2
分泌的抗PDL1的H链的肽序列
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:3
分泌的抗PDL1/TGFβ阱H链的肽序列
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:4
抗PD-L1λ轻链从翻译起始密码子到翻译终止密码子的DNA序列(VL之前的前导序列是来自尿激酶纤溶酶原激活物的信号肽)
atgagggccctgctggctagactgctgctgtgcgtgctggtcgtgtccgacagcaagggcCAGTCCGCCCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCCCCTGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGCACCGGCACCTCCAGCGACGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATGATCTACGACGTGTCCAACCGGCCCTCCGGCGTGTCCAACAGATTCTCCGGCTCCAAGTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCAGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCTCCTCCTACACCTCCTCCAGCACCAGAGTGTTCGGCACCGGCACAAAAGTGACCGTGCTGggccagcccaaggccaacccaaccgtgacactgttccccccatcctccgaggaactgcaggccaacaaggccaccctggtctgcctgatctcagatttctatccaggcgccgtgaccgtggcctggaaggctgatggctccccagtgaaggccggcgtggaaaccaccaagccctccaagcagtccaacaacaaatacgccgcctcctcctacctgtccctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggctccaccgtggaaaagaccgtcgcccccaccgagtgctcaTGA
SEQ ID NO:5
从翻译起始密码子至翻译终止密码子的DNA序列(mVK SP前导序列：小写下划线；VH：大写字母；含K至A突变的IgG1m3：小写字母；(G4S)x4-G(SEQ ID NO:11)接头：粗体大写字母；TGFβRII：粗体下划线小写字母；两个终止密码子：粗体下划线大写字母)
Figure BDA0002778147970000661
Figure BDA0002778147970000671
SEQ ID NO:6
分泌的抗PD-L1(mut)/TGFβ阱λ轻链的多肽序列，具有突变A31G，D52E，R99Y
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:7
分泌的抗PD-L1(mut)/TGFβ阱重链的多肽序列
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:8
人TGFβRII同种型A前体多肽(NCBI RefSeq登录号：NP_001020018)
MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCNRTAHPLRHINNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSTWETGKTRKLMEFSEHCAIILEDDRSDISSTCANNINHNTELLPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQNTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKTEKDIFSDINLKHENILQFLTAEERKTELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLTRHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLHSDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNILVKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSVDDLANSGQVGTARYMAPEVLESRMNLENVESFKQTDVYSMALVLWEMTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKVREHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPSFWLNHQGIQMVCETLTECWDHDPEARLTAQCVAERFSELEHLDRLSGRSCSEEKIPEDGSLNTTK
SEQ ID NO:9
人TGFβRII同种型B前体多肽(NCBI RefSeq登录号：NP_003233)
MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSTWETGKTRKLMEFSEHCAIILEDDRSDISSTCANNINHNTELLPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQNTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKTEKDIFSDINLKHENILQFLTAEERKTELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLTRHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLHSDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNILVKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSVDDLANSGQVGTARYMAPEVLESRMNLENVESFKQTDVYSMALVLWEMTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKVREHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPSFWLNHQGIQMVCETLTECWDHDPEARLTAQCVAERFSELEHLDRLSGRSCSEEKIPEDGSLNTTK
SEQ ID NO:10
人TGFβRII同种型B胞外域多肽
IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:11
(Gly4Ser)4Gly接头
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG
SEQ ID NO:12
分泌的抗PD-L1抗体MPDL3289A重链可变区的多肽序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:13
分泌的抗PD-L1抗体MPDL3289A轻链可变区的多肽序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO:14
分泌的抗PD-L1抗体YW243.55S70重链可变区的多肽序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:50
截短的人TGFβRII同种型B胞外域多肽
GAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:51
截短的人TGFβRII同种型B胞外域多肽
VKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:52
截短的人TGFβRII同种型B胞外域多肽
VTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:53
截短的人TGFβRII同种型B胞外域多肽
LCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:54
突变的人TGFβRII同种型B胞外域多肽
VTDNAGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
SEQ ID NO:55
抗PD-L1抗体重链可变区的多肽序列
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSS
SEQ ID NO:56
抗PD-L1抗体轻链可变区的多肽序列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:57
抗PD-L1抗体重链可变区的多肽序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:58
抗PD-L1抗体轻链可变区的多肽序列
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:59
抗PD-L1抗体重链的多肽序列
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLEYIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:60
抗PD-L1抗体轻链的多肽序列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:61
抗PD-L1抗体重链的多肽序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGA
SEQ ID NO:62
抗PD-L1抗体轻链的多肽序列
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
通过引用纳入
本文提及的每篇专利文献和科学论文的全部公开内容通过援引纳入本文用于所有目的。
等同形式
在不脱离本公开的精神或基本特征的情况下，本公开可以其他特定形式实施。因此，前述实施例在所有方面都被认为是说明性的而不是限制本文所述的公开内容。不同实施例中的各种结构元件和所述各种方法步骤可以任意组合排列而所有这些变型都应视为本公开的方式。因此由附加的权利要求而不是前面描述指示发明的范围，并且因此意味着包含与权利要求等同含义和范围之内的所有改变。
序列表
<110> 默克专利有限公司（MERCK PATENT GMBH）
<120> 用于未经治疗对象中癌症治疗的靶向TGF-Β抑制的给药方案
<130> EMD-007WO
<150> 62/671,963
<151> 2018-05-15
<150> 62/804,931
<151> 2019-02-13
<160> 62
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 1
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 2
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 2
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 3
<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 3
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
465 470 475 480
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
485 490 495
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
500 505 510
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
515 520 525
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
530 535 540
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
545 550 555 560
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
565 570 575
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
580 585 590
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600 605
<210> 4
<211> 711
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多核苷酸
<400> 4
atgagggccc tgctggctag actgctgctg tgcgtgctgg tcgtgtccga cagcaagggc 60
cagtccgccc tgacccagcc tgcctccgtg tctggctccc ctggccagtc catcaccatc 120
agctgcaccg gcacctccag cgacgtgggc ggctacaact acgtgtcctg gtatcagcag 180
caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacgacgtgt ccaaccggcc ctccggcgtg 240
tccaacagat tctccggctc caagtccggc aacaccgcct ccctgaccat cagcggactg 300
caggcagagg acgaggccga ctactactgc tcctcctaca cctcctccag caccagagtg 360
ttcggcaccg gcacaaaagt gaccgtgctg ggccagccca aggccaaccc aaccgtgaca 420
ctgttccccc catcctccga ggaactgcag gccaacaagg ccaccctggt ctgcctgatc 480
tcagatttct atccaggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ctgatggctc cccagtgaag 540
gccggcgtgg aaaccaccaa gccctccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 600
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctacagctg ccaggtcaca 660
cacgagggct ccaccgtgga aaagaccgtc gcccccaccg agtgctcatg a 711
<210> 5
<211> 1887
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多核苷酸
<400> 5
atggaaacag acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg ctccacaggc 60
gaggtgcagc tgctggaatc cggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc cctgagactg 120
tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agctacatca tgatgtgggt gcgacaggcc 180
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtcctcc atctacccct ccggcggcat caccttctac 240
gccgacaccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgggaca actccaagaa caccctgtac 300
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggatcaag 360
ctgggcaccg tgaccaccgt ggactactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcctcc 420
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 780
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtgct ggcggcggag gaagcggagg aggtggcagc 1440
ggtggcggtg gctccggcgg aggtggctcc ggaatccctc cccacgtgca gaagtccgtg 1500
aacaacgaca tgatcgtgac cgacaacaac ggcgccgtga agttccctca gctgtgcaag 1560
ttctgcgacg tgaggttcag cacctgcgac aaccagaagt cctgcatgag caactgcagc 1620
atcacaagca tctgcgagaa gccccaggag gtgtgtgtgg ccgtgtggag gaagaacgac 1680
gaaaacatca ccctcgagac cgtgtgccat gaccccaagc tgccctacca cgacttcatc 1740
ctggaagacg ccgcctcccc caagtgcatc atgaaggaga agaagaagcc cggcgagacc 1800
ttcttcatgt gcagctgcag cagcgacgag tgcaatgaca acatcatctt tagcgaggag 1860
tacaacacca gcaaccccga ctgataa 1887
<210> 6
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 6
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 7
<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 7
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr
20 25 30
Met Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
465 470 475 480
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
485 490 495
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
500 505 510
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
515 520 525
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
530 535 540
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
545 550 555 560
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
565 570 575
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
580 585 590
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600 605
<210> 8
<211> 592
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp
20 25 30
Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn
35 40 45
Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
50 55 60
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
65 70 75 80
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
85 90 95
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
100 105 110
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
115 120 125
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
145 150 155 160
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
165 170 175
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln Val
180 185 190
Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu Gly Val Ala Ile Ser Val Ile
195 200 205
Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser
210 215 220
Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys Leu Met Glu Phe Ser Glu His
225 230 235 240
Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys
245 250 255
Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp
260 265 270
Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu
275 280 285
Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu Thr Val Ala Val Lys Ile Phe
290 295 300
Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser
305 310 315 320
Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu
325 330 335
Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe
340 345 350
His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Thr Arg His Val Ile Ser
355 360 365
Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala
370 375 380
His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile
385 390 395 400
Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu
405 410 415
Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr
420 425 430
Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg
435 440 445
Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser Arg Met Asn Leu Glu Asn Val
450 455 460
Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr Ser Met Ala Leu Val Leu Trp
465 470 475 480
Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu
485 490 495
Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu His Pro Cys Val Glu Ser Met
500 505 510
Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe
515 520 525
Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu
530 535 540
Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala
545 550 555 560
Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser
565 570 575
Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
580 585 590
<210> 9
<211> 567
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu
165 170 175
Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn
180 185 190
Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys
195 200 205
Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg
210 215 220
Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu
225 230 235 240
Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu
260 265 270
Thr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys
275 280 285
Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile
290 295 300
Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln
305 310 315 320
Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr
325 330 335
Leu Thr Arg His Val Ile Ser Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser
340 345 350
Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys
355 360 365
Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn
370 375 380
Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu
385 390 395 400
Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser
405 410 415
Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser
420 425 430
Arg Met Asn Leu Glu Asn Val Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr
435 440 445
Ser Met Ala Leu Val Leu Trp Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val
450 455 460
Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu
465 470 475 480
His Pro Cys Val Glu Ser Met Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly
485 490 495
Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met
500 505 510
Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg
515 520 525
Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu
530 535 540
Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp
545 550 555 560
Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
565
<210> 10
<211> 136
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
1 5 10 15
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
20 25 30
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
35 40 45
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
50 55 60
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
65 70 75 80
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
100 105 110
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
115 120 125
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
130 135
<210> 11
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 11
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 12
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 13
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 14
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 15
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 15
Gln Phe Asn Ser
1
<210> 16
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 16
Gln Ala Gln Ser
1
<210> 17
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 17
Pro Lys Ser Cys Asp Lys
1 5
<210> 18
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 18
Pro Lys Ser Ser Asp Lys
1 5
<210> 19
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 19
Leu Ser Leu Ser
1
<210> 20
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 20
Ala Thr Ala Thr
1
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Lys, Arg, Thr, Gln, Gly, Ala, Trp, Met, Ile或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Val, Arg, Lys, Leu, Met或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> His, Thr, Asn, Gln, Ala, Val, Tyr, Trp, Phe或Met
<400> 21
Xaa Tyr Xaa Met Xaa
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Phe或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Ser或Thr
<400> 22
Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Xaa Thr Phe Tyr Ala Asp Xaa Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Glu或Asp
<400> 23
Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Xaa Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 24
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 25
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 26
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 27
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Thr, Arg或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Ala或Gly
<400> 28
Thr Gly Thr Xaa Xaa Asp Val Gly Xaa Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Glu或Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Ile, Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asp, His或Asn
<400> 29
Xaa Val Xaa Xaa Arg Pro Ser
1 5
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Phe或Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Arg, Thr或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Gly或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Ile或Thr
<400> 30
Ser Ser Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val
1 5 10
<210> 31
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 31
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys
20
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 32
Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 33
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 33
Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 34
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
1 5 10
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 35
Ser Tyr Ile Met Met
1 5
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 36
Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 37
Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 38
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 39
Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 40
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val
1 5 10
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 41
Met Tyr Met Met Met
1 5
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 42
Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成肽
<400> 43
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 44
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Val Trp Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Trp Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 45
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 46
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 46
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr
20 25 30
Met Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Val Trp
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 47
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 48
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 来自人Fab文库的合成多核苷酸
<400> 48
atggagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgctag ctccagcgag 60
gtgcagctgc tggaatccgg cggaggactg gtgcagcctg gcggctccct gagactgtct 120
tgcgccgcct ccggcttcac cttctccagc tacatcatga tgtgggtgcg acaggcccct 180
ggcaagggcc tggaatgggt gtcctccatc tacccctccg gcggcatcac cttctacgcc 240
gacaccgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 300
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgcccg gatcaagctg 360
ggcaccgtga ccaccgtgga ctactggggc cagggcaccc tggtgacagt gtcctccgcc 420
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 720
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcacg ggatgagctg 1140
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260
gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380
aagagcctct ccctgtcccc gggtaaa 1407
<210> 49
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 来自人Fab文库的合成多核苷酸
<400> 49
atggagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cttaagccag 60
tccgccctga cccagcctgc ctccgtgtct ggctcccctg gccagtccat caccatcagc 120
tgcaccggca cctccagcga cgtgggcggc tacaactacg tgtcctggta tcagcagcac 180
cccggcaagg cccccaagct gatgatctac gacgtgtcca accggccctc cggcgtgtcc 240
aacagattct ccggctccaa gtccggcaac accgcctccc tgaccatcag cggactgcag 300
gcagaggacg aggccgacta ctactgctcc tcctacacct cctccagcac cagagtgttc 360
ggcaccggca caaaagtgac cgtgctgggc cagcccaagg ccaacccaac cgtgacactg 420
ttccccccat cctccgagga actgcaggcc aacaaggcca ccctggtctg cctgatctca 480
gatttctatc caggcgccgt gaccgtggcc tggaaggctg atggctcccc agtgaaggcc 540
ggcgtggaaa ccaccaagcc ctccaagcag tccaacaaca aatacgccgc ctcctcctac 600
ctgtccctga cccccgagca gtggaagtcc caccggtcct acagctgcca ggtcacacac 660
gagggctcca ccgtggaaaa gaccgtcgcc cccaccgagt gctca 705
<210> 50
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe
1 5 10 15
Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr
20 25 30
Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys
35 40 45
Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu
50 55 60
Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile
65 70 75 80
Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn
100 105 110
Thr Ser Asn Pro Asp
115
<210> 51
<211> 115
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr
1 5 10 15
Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile
20 25 30
Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp
35 40 45
Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr
50 55 60
His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys
65 70 75 80
Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser
85 90 95
Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser
100 105 110
Asn Pro Asp
115
<210> 52
<211> 122
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe
1 5 10 15
Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser
20 25 30
Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val
35 40 45
Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys
50 55 60
His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe
85 90 95
Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe
100 105 110
Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
115 120
<210> 53
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys
1 5 10 15
Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln
20 25 30
Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu
35 40 45
Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu
50 55 60
Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro
65 70 75 80
Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp
85 90 95
Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
100 105 110
<210> 54
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 54
Val Thr Asp Asn Ala Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe
1 5 10 15
Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser
20 25 30
Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val
35 40 45
Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys
50 55 60
His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe
85 90 95
Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe
100 105 110
Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
115 120
<210> 55
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 55
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asp
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Gly Gly Trp Leu Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 56
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Tyr His
20 25 30
Ser Asn Gln Lys His Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 57
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 58
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His
20 25 30
Gly Thr His Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 59
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asp
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Gly Gly Trp Leu Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Tyr His
20 25 30
Ser Asn Gln Lys His Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 61
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Ala
435 440 445
<210> 62
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 62
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His
20 25 30
Gly Thr His Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (57)

1.一种治疗有需要的未经治疗的患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，所述方法包括对所述患者给予至少500mg的蛋白质的剂量，所述蛋白质包含第一多肽和第二多肽，
其中，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，
其中，所述第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，且
其中，所述第一多肽的重链和所述第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述剂量为500mg至2400mg。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述剂量为1200mg-3000mg。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述剂量为1200mg。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述剂量为2400mg。
7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述剂量每两周给予一次或每三周给予一次。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述剂量为1200mg，每两周给予一次。
9.如权利要求7所述的方法，其中，所述剂量为2100mg，每三周给予一次。
10.如权利要求7所述的方法，其中，所述剂量为2400mg，每三周给予一次。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述晚期NSCLC表现出鳞状或非鳞状组织学。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述癌症表现出高PD-L1表达。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述患者不具有选自EGFR致敏突变、ALK易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的突变。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述治疗导致所述患者疾病缓解或生存期改善。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述疾病缓解是完全缓解、部分缓解或病情稳定。
16.如权利要求14所述的方法，其中，所述生存期是无进展生存期(PFS)。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述蛋白质通过静脉内给药来给予。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述静脉内给药使用包含含有所述蛋白质的制剂的预填充袋、预填充笔或预填充注射器进行。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述袋连接包括管和/或针的通道。
20.一种静脉内药物递送制剂，用于治疗有需要的未经治疗的癌症患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，所述制剂包含500mg–3000mg的蛋白质，其包含第一多肽和第二多肽；
其中，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，
其中，所述第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，且
其中，所述第一多肽的重链和所述第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
21.如权利要求20所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
22.如权利要求20或21所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其包含1200mg至2400mg所述蛋白质。
23.如权利要求20或21所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其包含1200mg所述蛋白质。
24.如权利要求20或21所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其包含2400mg所述蛋白质。
25.如权利要求20-22中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，每两周一次或每三周一次对所述患者给予所述制剂。
26.如权利要求25所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，每两周给予一次包含1200mg所述蛋白质的制剂。
27.如权利要求25所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，每三周给予一次包含2400mg所述蛋白质的制剂。
28.如权利要求20-27中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，所述制剂包含在袋、笔或注射器中。
29.如权利要求28所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，所述袋连接包括管和/或针的通道。
30.如权利要求20-29中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，其中，所述制剂是冻干制剂或液体制剂。
31.一种药物递送装置，用于治疗有需要的未经治疗的癌症患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，所述装置包含制剂，所述制剂包含500mg–3000mg的蛋白质，其包含第一多肽和第二多肽；
其中，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，
其中，所述第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，且
其中，所述第一多肽的重链和所述第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
32.如权利要求31所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述第一多肽包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列，并且所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
33.如权利要求31或32所述的所述用途的药物递送装置，其包含1200mg至2400mg所述蛋白质。
34.如权利要求31或32所述的所述用途的药物递送装置，其包含1200mg所述蛋白质。
35.如权利要求31或32所述的所述用途的药物递送装置，其包含2400mg所述蛋白质。
36.如权利要求31-33中任一项所述的所述用途的药物递送装置，其中，每两周一次或每三周一次对所述患者给予所述制剂。
37.如权利要求36所述的所述用途的药物递送装置，其中，每两周给予一次包含1200mg所述蛋白质的制剂。
38.如权利要求36所述的所述用途的药物递送装置，其中，每三周给予一次包含2400mg所述蛋白质的制剂。
39.如权利要求31-38中任一项所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述装置是袋、笔或注射器。
40.如权利要求39所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述袋连接包括管和/或针的通道。
41.如权利要求20-30中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，或权利要求31-40中任一项所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述晚期NSCLC表现出鳞状或非鳞状组织学。
42.如权利要求41所述的所述用途的静脉内药物递送制剂或权利要求41所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述癌症表现出高PD-L1表达。
43.如权利要求41-42中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂或权利要求41-42中任一项所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述患者不具有选自EGFR致敏突变、ALK易位、ROS1突变和BRAF V600E突变的突变。
44.如权利要求41-43中任一项所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，或权利要求41-43中任一项所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述治疗导致所述患者疾病缓解或生存期改善。
45.如权利要求44所述的所述用途的静脉内药物递送制剂，或权利要求44所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述疾病缓解是完全缓解、部分缓解或病情稳定。
46.如权利要求44所述的所述用途的静脉内药物递送制剂或权利要求44所述的所述用途的药物递送装置，其中，所述生存期是无进展生存期(PFS)。
47.一种抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，用于治疗有需要的未经治疗的癌症患者中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)或抑制所述患者中肿瘤生长的方法，所述方法包含对所述患者给予500mg–3000mg所述蛋白；
其中，所述第一多肽包含：(a)至少重链可变区，所述重链可变区是结合人蛋白程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体重链可变区；和(b)能够结合转化生长因子β(TGFβ)的人转化生长因子β受体II(TGFβRII)或其片段，
其中，所述第二多肽至少包含结合PD-L1的抗体轻链可变区，且
其中，所述第一多肽的重链和所述第二多肽的轻链在组合时形成结合PD-L1的抗原结合位点。
48.如权利要求47所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，所述第一多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
49.如权利要求47或48所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，对所述患者给予1200mg至2400mg所述蛋白。
50.如权利要求47或48所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，对所述患者给予1200mg所述蛋白。
51.如权利要求47或48所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，对所述患者给予2400mg所述蛋白。
52.如权利要求47-49中任一项所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，每两周一次或每三周一次对所述患者给予所述蛋白。
53.如权利要求50所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，每两周一次对所述患者给予1200mg所述蛋白。
54.如权利要求51所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，每三周一次对所述患者给予2400mg所述蛋白。
55.如权利要求47-54中任一项所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，所述蛋白包含在袋、笔或注射器中。
56.如权利要求55所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，所述袋连接包括管和/或针的通道。
57.如权利要求47-56中任一项所述的所述用途的抗PD-L1/TGFβ阱蛋白，其中，所述蛋白包含在冻干制剂或液体制剂中。
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