BR112020021082A2 - regimes de dosagem para inibição de tgf-b direcionada para uso no tratamento de câncer em indivíduos sem tratamento prévio - Google Patents

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Abstract

"REGIMES DE DOSAGEM PARA INIBIÇÃO DE TGF-B DIRECIONADA PARA USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER EM INDIVÍDUOS SEM TRATAMENTO PRÉVIO". A presente invenção refere-se a regimes de dosagem para inibição de TGF-B direcionada com uma proteína de fusão bifuncional para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em pacientes sem tratamento prévio.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "REGI- MES DE DOSAGEM PARA INIBIÇÃO DE TGF-B DIRECIONADA
PARA USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER EM INDIVÍDUOS SEM TRATAMENTO PRÉVIO". REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de e prioridade para o Pedido de Patente Provisório dos EUA Nº. 62/671.963, depositado em 15 de maio de 2018; e para o Pedido de Patente Provisório dos EUA Nº. 62/804.931, depositado em 13 de fevereiro de 2019, as divulga- ções completas dos quais são incorporadas aqui por referência.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIA
[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e é aqui incorpo- rada por referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 3 de maio de 2019, é denominada EMD-007WO_SL_ST25.txt e tem 75.847 bytes de tamanho.
CAMPO DA INVENÇÃO
[003] A presente invenção refere-se de forma geral a regimes de dosagem para inibição de TGF-β direcionada com uma proteína de fusão bifuncional para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em pacientes sem tratamento prévio.
ANTECEDENTES
[004] O eixo morte programada 1 (PD-1)/PD-L1 é um mecanismo importante para a evasão imune do tumor. As células T efetoras croni- camente detectando antígeno assumem um fenótipo exaurido marca- do por expressão de PD-1, um estado em que as células tumorais se acoplam por regulação positiva de PD-L1. Além disso, no microambi- ente tumoral, células mieloides, macrófagos, células parenquimatosas e células T regulam positivamente PD-L1. Bloquear o eixo restaura a função efetora nessas células T.
[005] A Publicação de Pedido de Patente dos EUA Nº. US 20150225483 A1, aqui incorporada por referência, descreve uma pro- teína de fusão bifuncional que combina um anticorpo Ligante de Morte Antiprogramada 1 (PD-L1) com o domínio extracelular solúvel de re- ceptor tipo II de fator beta de crescimento tumoral (TGFβRII) como uma "Armadilha" neutralizante de TGFβ em uma única molécula. Es- pecificamente, a proteína é um heterotetrâmero, que consiste nas du- as cadeias leves de imunoglobulina de anti-PD-L1, e duas cadeias pe- sadas compreendendo a cadeia pesada de anti-PD-L1 geneticamente fundida através de um ligante glicina-serina flexível ao domínio extra- celular do TGFβRII humano (ver Figura 1). Esta molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é projetada para ter como alvo dois principais meca- nismos de imunossupressão no microambiente tumoral. A Publicação do Pedido de Patente dos EUA Nº. US 20150225483 A1 descreve a administração da molécula de armadilha em doses baseadas no peso do paciente.
[006] Câncer de pulmão é a principal causa de morte por câncer nos EUA e resulta em mais mortes por câncer do que câncer de ma- ma, câncer de próstata e câncer colorretal combinados. Câncer de pulmão de células não pequenas é responsável por aproximadamente 80% dos casos de câncer de pulmão. Estima-se que, em 2018, have- ria 234.030 novos casos de câncer de pulmão e brônquios e que
154.050 pessoas morreriam de câncer de pulmão apenas nos EUA (Siegel, 2018). Na EU, foram previstas 275.700 mortes por câncer de pulmão em 2017 (Malvezzi, 2017). Em todo o mundo, estima-se que 1,8 milhões de novos casos de câncer de pulmão foram diagnostica- dos em 2012, aproximadamente 13% do total de todos os novos cân- ceres diagnosticados (Ferlay, 2012). Os inibidores de ponto de verifi- cação imune mostraram melhora no resultado do tratamento em paci- entes com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC); no entanto, há espaço para melhorar ainda mais os benefícios.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[007] A presente invenção fornece regimes de dosagem melho- rados para administração de proteínas bifuncionais direcionadas a PD- L1 e TGFβ. Especificamente, regimes de dosagem independentes de peso corporal (independentes de BW) e e formas de dosagem relacio- nadas envolvendo a administração de pelo menos 500 mg (por exem- plo, 1200 mg, 2400 mg) da proteína bifuncional administrada em várias frequências de dosagem podem ser usadas como um terapica antitu- mor e anticâncer. O regime de dosagem independente de BW garante que todos os pacientes, independentemente de seu peso corporal, te- rão exposição adequada ao medicamento no sítio tumoral.
[008] A proteína bifuncional da presente descrição (molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) inclui um primeiro e um segundo polipep- tídeo. O primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo menos uma região variá- vel de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína hu- mana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ) (por exemplo, um fragmento solúvel). O segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD-L1, em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combi- nadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1 (por exemplo, qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo des- critos neste documento). Uma vez que a proteína bifuncional da pre- sente descrição se liga a dois alvos, (1) PD-L1, que é amplamente li- gado à membrana, and (2) TGF, que é solúvel em sangue e no inters- tício, o regime de dosagem independente de BW requer uma dose que seja eficaz não apenas para inibir PD-L1 no sítio do tumor, mas tam-
bém suficiente para inibir TGFβ.
[009] Em um aspecto, a descrição fornece um método de tratar câncer ou inibir um tumor, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas (por exemplo, câncer de pulmão de células não peque- nas avançado), melanoma, câncer pancreático, câncer colorretal (por exemplo, câncer colorretal pré-tratado (CRC)), câncer de ovário, glioblastoma, câncer gástrico (por exemplo, câncer gástrico estágio IV irressecável reecorrente ou refratário pré-tratado), câncer do trato bili- ar, câncer esofágico (carcinoma de células escamosas ou adenocarci- noma), adenoma da cabeça ou do pescoço, e carcinoma escamoso da cabeça ou do pescoço em um paciente sem tratamento prévio. Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de tratar NSCLC com alta expressão de PD-L1, administrando uma molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ descrita na presente descrição a um paciente em necessidade do mesmo. Em determinadas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratar câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado (por exemplo, NSCLC com alta ex- pressão de PD-L1) ou inibir crescimento tumoral em um paciente sem tratamento prévio em necessidade do mesmo administrando 1200 mg de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ da presente descri- ção uma vez a cada duas semanas ao paciente. Em determinadas ou- tras modalidades, a presente invenção fornece um método de tratar câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) ou inibir crescimento tumoral em um paciente sem tratamento prévio em necessidade do mesmo administrando 2400 mg de uma molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ da presente descrição uma vez a cada três semanas ao paciente.
[0010] A descrição também apresenta um método de promover depleção local de TGFβ. O método inclui administrar uma proteína descrita acima, em que a proteína liga TGFβ na solução, liga PD-L1 em uma superfície celular, e transporta o TGFβ ligado na célula (por exemplo, uma célula de câncer).
[0011] A descrição também apresenta um método de inibir fosfori- lação de SMAD3 em uma célula (por exemplo, uma célula de câncer ou uma célula imune), o método incluindo expor a célula no microam- biente tumoral a uma proteína descrita acima.
[0012] Outras modalidades e detalhes da descrição são apresen- tados neste documento abaixo.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0013] A Figura 1 é um desenho esquemático de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ incluindo um anticorpo anti-PD-L1 fundido a dois domínios extracelulares (ECD) de Receptor II de TGFβ através de um ligante (Gly4Ser)4Gly (SEQ ID NO: 11).
[0014] A Figura 2 apresenta um gráfico de um ELISA em duas etapas demonstrando que armadilha anti-PD-L1/TGFβ simultaneamen- te se liga a ambos PD-L1 e TGFβ .
[0015] A Figura 3 é um gráfico mostrando que armadilha anti-PD- L1/TGFβ induz um aumento significativo nos níveis de IL-2.
[0016] A Figura 4A é um gráfico mostrando depleção in vivo de TGFβ1 em resposta à armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Gráficos de linha representam sem tratamento prévio, controle de isótipo, e três diferen- tes doses, como indicado na legenda. A Figura 4B é um gráfico mos- trando depleção in vivo de TGFβ 2 em resposta à armadilha anti-PD- L1/TGFβ. Gráficos de linha representam sem tratamento prévio, con- trole de isótipo e três diferentes doses, como indicado na legenda. A Figura 4C é um gráfico mostrando depleção in vivo de TGFβ3 em res- posta à armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Gráficos de linha representam sem tratamento prévio, controle de isótipo e três diferentes doses, co- mo indicado na legenda. A Figura 4D é um gráfico mostrando que a ocupação de PD-L1 pela armadilha anti-PD-L1/TGFβ suporta um mo- delo de ligação a receptor no sistema de tumor EMT-6.
[0017] A Figura 5 é um gráfico mostrando eficácia antitumoral de controle de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (anti-PD-L1(mut)/TGFβ) em modelo de xenoenxerto Detroit 562.
[0018] A Figura 6A é um diagrama de caixa de distribuição Cavg para toda uma população para uma dosagem fixa (1200 mg) versus dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simu- lada de peso corporal médio de 68 kg. A Figura 6B é um diagrama de caixa de distribuição de exposição AUC para toda uma população para uma dosagem fixa (1200 mg) versus dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg. A Figura 6C é um diagrama de caixa de distribuição Ctrough para toda uma população para uma dosagem fixa (1200 mg) versus dosa- gem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg. A Figura 6D é um diagrama de caixa de distribuição Cmax para toda uma população para uma dosagem fixa (1200 mg) versus dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg.
[0019] A Figura 6E é um diagrama de caixa de distribuição Cavg para toda uma população para uma dosagem fixa (500 mg) versus do- sagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg. A Figura 6F é um diagrama de caixa de distribuição de exposição AUC para toda uma população para uma dosagem fixa (500 mg) versus dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg. A Figura 6G é um diagrama de caixa de distribuição Ctrough para toda uma população para uma dosagem fixa (500 mg) versus dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada de pe- so corporal médio de 68 kg. A Figura 6H é um diagrama de caixa de distribuição Cmax para toda uma população para uma dosagem fixa (500 mg) versus dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada de peso corporal médio de 68 kg.
[0020] As Figuras 7A–7C são gráficos mostrando a PK e ocupação de receptor PD-L1 ("RO") previstas de moléculas de armadilha anti- PD-L1/TGFβ em doses e cronogramas associados com estase tumoral em camundongos. A Figura 7A é um gráfico mostrando a concentra- ção de plasma prevista vs. tempo. A Figura 7B é um gráfico mostrando a RO de PD-L1 prevista vs. tempo em PBMC. A Figura 7C é um gráfi- co mostrando a RO de PD-L1 prevista vs. tempo em tumor.
[0021] A Figura 8 é um diagrama esquemático do regime terapêu- tico. Abreviações usadas na figura: NSCLC = câncer de pulmão de cé- lulas não pequenas; Q2W= a cada 2 semanas; Q3W= a cada 3 sema- nas; BOR = melhor resposta geral; DOR = duração da resposta; OS = sobrevivência geral; e R* = randomização. PD-L1 alto representa ≥ 80% de células tumorais PD-L1 positivas conforme determinado pelo ensaio PD-L1 IHC 73-10 (Dako), ou TPS ≥ 50% conforme determinado pelo ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx; ambos ops ensaios selecionam uma população de pacientes similar em seus respectivos pontos de cortes.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0022] "TGFβRII" or "Receptor II de TGFβ" significa um polipeptí- deo tendo uma sequência de Isoforma A Tipo 2 de Receptor de TGFβ humano de tipo selvagem uma sequência (por exemplo, a sequência de aminoácido da Sequência de Referência NCBI (RefSeq) Acesso Nº. NP_001020018 (SEQ ID NO: 8)), ou um polipeptídeo tendo a sequên- cia de Isoforma B Tipo 2 de Receptor de TGFβ humano de tipo selva- gem sequência (por exemplo, a sequência de aminoácido de RefSeq NCBI Acesso Nº. NP_003233 (SEQ ID NO: 9)) ou tendo uma sequên- cia substancialmente idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID
NO: 8 ou de SEQ ID NO: 9. O TGFβRII pode reter pelo menos 0,1%, 0,5%, 1%, 5%, 10%, 25%, 35%, 50%, 75%, 90%, 95%, ou 99% da ati- vidade de ligação a TGFβ da sequência de tipo selvagem. O polipeptí- deo de TGFβRII expresso não possui sequência sinal.
[0023] "Fragmento de TGFβRII capaz de ligar TGFβ" significa qualquer porção de RefSeq NCBI Acesso Nº. NP_001020018 (SEQ ID NO: 8) ou de RefSeq NCBI Acesso Nº. NP_003233 (SEQ ID NO: 9), ou uma sequência substancialmente idêntica à SEQ ID NO: 8 ou SEQ ID NO: 9 que tem pelo menos 20 (por exemplo, pelo menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 175, ou 200) amino- ácidos de comprimento que mantém pelo menos parte da atividade de ligação a TGFβ (por exemplo, pelo menos 0,1%, 0,5%, 1%, 5%, 10%, 25%, 35%, 50%, 75%, 90%, 95% ou 99%) do receptor de tipo selva- gem ou do fragmento de tipo selvagem correspondente. Tipicamente, tal fragmento é um fragmento solúvel. Tal fragmento exemplificativo é um domínio extracelular de TGFβRII tendo a sequência de SEQ ID NO: 10. Determinados outros fragmentos exemplificativos de TGFβRII humano capazes de ligar TGFβ são representados pela sequência de SEQ ID NOs: 50, 51, 52, 53, ou 54.
[0024] "Sem tratamento prévio" refere-se a pacientes que não re- ceberam tratamento sistêmico prévio para seu NSCLC avança- do/Estágio IV. Em várias modalidades da presente descrição, os paci- entes sem tratamento prévio não receberam terapia prévia com um anticorpo anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-CD137, ou antígeno 4 associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4) (incluindo ipilimumab), ou qualquer outro anticorpo ou fármaco direcionado especificamente à coestimulação de células T ou vias de ponto de verificação. Em várias modalidades da presente descrição, pacientes sem tratamento prévio são selecionados para tratamento de primeira linha (1L) da presente invenção.
[0025] "PD-L1 positivo" ou "PD-L1+" indica ≥ 1% de células tumo- rais PD-L1 positivas conforme determinado, por exemplo, pelo ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx ou pelo ensaio VENTANA PD-L1 (SP263).
[0026] "PD-L1 alto" ou "alto PD-L1" refere-se a ≥ 80% de células tumorais PD-L1 positivas conforme determinado pelo ensaio de PD-L1 IHC 73-10 (Dako), ou pontuação de proporção tumoral (TPS) ≥ 50% conforme determinado pelo ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx (TPS é um termo da técnica relacionado ao ensaio IHC 22C3 PharmDx, que descreve a porcentagem de células tumorais viáveis com coloração de membrana parcial ou completa (por exemplo, coloração para PD-L1)). Ambos os ensaios IHC 73-10 e IHC 22C3 selecionam uma população de pacientes similar em seus respectivos pontos de corte. Em determi- nadas modalidades, ensaio VENTANA PD-L1 (SP263), que tem alta concordância com ensaio 22C3 PharmDx (ver Sughayer et al., Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol., (2018)), pode também ser usado para determinar alto nível de expressão de PD-L1.
[0027] "Substancialmente idêntico" significa um polipeptídeo exi- bindo pelo menos 50%, desejavelmente 60%, 70%, 75% ou 80%, mais desejavelmente 85%, 90% ou 95%, e mais desejavelmente 99% de identidade de sequência de aminoácido com uma sequência de ami- noácido de referência. O comprimento das sequências de comparação será geralmente pelo menos 10 aminoácidos, desejavelmente pelo menos 15 aminoácidos contíguos, mais desejavelmente pelo menos 20, 25, 50, 75, 90, 100, 150, 200, 250, 300 ou 350 aminoácidos contí- guos, e mais desejavelmente a sequência de aminoácido de compri- mento total.
[0028] "Paciente" significa um animal humano ou não humano (por exemplo, um mamífero). "Paciente", "indivíduo", "paciente em necessi- dade do mesmo" e "indivíduo em necessidade do mesmo" são usados indistintamente na descrição, e referem-se a um organismo vivo que sofre ou tem propensão a uma doença ou condição que pode ser tra- tada por administração usando os métodos e composições fornecidos nesta descrição.
[0029] Os termos "tratar", "tratando" ou "tratamento" e outros equi- valentes gramaticais como usados nesta descrição, incluem aliviar, diminuir, melhorar ou prevenir uma doença, condição ou sintomas, prevenir sintomas adicionais, melhorar ou prevenir as causas metabó- licas subjacentes dos sintomas, inibir a doença ou condição, por exemplo, interromper o desenvolvimento da doença ou condição, alivi- ar a doença ou condição, causar a regressão da doença ou condição, aliviar uma condição causada pela doença ou condição, ou interrom- per os sintomas da doença ou afecção, e são destinados a incluir profi- laxia. Os termos incluem ainda alcançar um benefício terapêutico e/ou um benefício profilático. Por benefício terapêutico, entende-se a erra- dicação ou melhora do distúrbio subjacente que está sendo tratado. Além disso, um benefício terapêutico é alcançado com a erradicação ou melhora de um ou mais dos sintomas fisiológicos associados ao distúrbio subjacente, tal que uma melhora seja observada no paciente, apesar de o paciente ainda poder estar sofrendo com o distúrbio sub- jacente.
[0030] O termo "câncer" significa câncer de pulmão de células não pequenas avançado/Estágio IV (NSCLC). NSCLC Avançado/Estágio IV é utilizado de acordo com seu significado simples e comum, e refe- re-se aos estágios IVA ou IVB de NSCLC, caracterizados, por exem- plo, por metástase para um ou mais sítios. Dessa forma, em várias modalidades, o câncer é um NSCLC metastático.
[0031] Ao longo da descrição e reivindicações desta especificação, a palavra "compreendem" e outras formas da palavra, tais como "com- preendendo" e "compreende", significa incluindo, mas sem limitação, e não se destina a excluir, por exemplo, outros componentes.
[0032] Por "coadministrar", entende-se que uma composição des- crita neste documento é administrada ao mesmo tempo, imediatamen- te antes, ou logo após a administração de terapias adicionais. A prote- ína e a composição da presente descrição podem ser administradas sozinhas ou podem ser coadministradas com um segundo, terceiro ou quarto agente(s) terapêutico(s) a um paciente. A coadministração pre- tende incluir administração simultânea ou sequencial da proteína ou composição individualmente ou em combinação (mais de um agente terapêutico).
[0033] O termo "um/uma" não é para limitar como singular. Em de- terminadas modalidades, o termo "um/uma" pode se referir a uma for- ma plural. Conforme usado ao longo desta descrição, as formas singu- lares "um," "uma", "o" e "a" incluem referência no plural, a menos que o contexto dite claramente o contrário. Dessa forma, por exemplo, uma referência a "uma composição" inclui uma pluralidade de tais composi- ções, bem como uma única composição.
[0034] Uma formulação "reconstituída" é aquela que foi preparada por dissolução de uma formulação liofilizada em um veículo aquoso, tal que a molécula bifuncional seja dissolvida na formulação reconstitu- ída. A formulação reconstituída é adequada para administração intra- venosa (IV) a um paciente em necessidade da mesma.
[0035] O termo "cerca de" refere-se a qualquer alteração mínima na concentração ou quantidade de um agente que não altera a eficácia do agente na preparação de uma formulação e no tratamento de uma doença ou distúrbio. Em modalidades, o termo "cerca de" pode incluir ±15% de um valor numérico ou ponto de dados especificado.
[0036] Intervalos podem ser expressos nesta descrição como de "cerca de" um valor particular e/ou a "cerca de" outro valor particular. Quando tal intervalo é expresso, outro aspecto inclui de um valor es- pecífico e/ou a outro valor específico. Da mesma forma, quando os valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente "cerca de", entende-se que o valor particular forma outro aspecto. En- tende-se ainda que os pontos finais de cada um dos intervalos são significativos tanto em relação ao outro ponto final, como independen- temente do outro ponto final. Entende-se também que há um número de valores descritos nesta descrição, e que cada valor é também di- vulgado como "cerca de" tal valor particular além do próprio valor em si. Entende-se também que em todo o pedido, os dados são forneci- dos em vários formatos diferentes e que esses dados representam pontos finais e pontos de partida e intervalos para qualquer combina- ção dos pontos de dados. Por exemplo, se um determinado ponto de dados "10" e um determinado ponto de dados "15" são descritos, en- tende-se que maior que, maior que ou igual a, menor que, menor que ou igual a, e igual a 10 e 15 são considerados descritos, bem como entre 10 e 15. Entende-se também que cada unidade entre duas uni- dades particulares também são descritas. Por exemplo, se 10 e 15 são descritos, então 11, 12, 13, e 14 são também descritos.
[0037] Uma formulação "isotônica" é aquela que tem essencial- mente a mesma pressão osmótica do sangue humano. As formulações isotônicas geralmente terão uma pressão osmótica de cerca de 250 a 350 mOsmoles/KgH2O. O termo "hipertônico" é usado para descrever uma formulação com uma pressão osmótica acima do sangue huma- no. A isotonicidade pode ser medida usando um osmômetro do tipo pressão de vapor ou congelamento, por exemplo.
[0038] O termo "agente tamponante" refere-se a um ou mais com- ponentes que, quando adicionados a uma solução aquosa, são capa- zes de proteger a solução contra variações de pH ao adicionar ácido ou álcali, ou mediante diluição com um solvente. Além de tampões de fosfato, podem ser usados tampões de glicinato, carbonato, citrato e similares, em cujo caso, íons de sódio, potássio ou amônio podem servir como contraíon.
[0039] Um "ácido" é uma substância que produz íons de hidrogê- nio em solução aquosa. Um "ácido farmaceuticamente aceitável" inclui ácidos inorgânicos e orgânicos que não são tóxicos na concentração e na forma como são formulados.
[0040] Uma "base" é uma substância que produz íons de hidroxil em solução aquosa. "Bases farmaceuticamente aceitáveis" incluem bases inorgânicas e orgânicas que não são tóxicas na concentração e na forma como são formuladas.
[0041] Um "lioprotetor" é uma molécula que, quando combinada com uma proteína de interesse, evita ou reduz a instabilidade química e/ou física da proteína após a liofilização e posterior armazenamento.
[0042] Um "conservante" é um agente que reduz a ação bacteria- na e pode ser opcionalmente adicionado às formulações aqui apresen- tadas. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a pro- dução de uma formulação multiuso (dose múltipla). Exemplos de con- servantes potenciais incluem cloreto de octadecildimetilbenzilamônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de clore- tos de alquilbenzildimetilamônio em que os grupos alquil são compos- tos de cadeia longa) e cloreto de benzetônio. Outros tipos de conser- vantes incluem álcoois aromáticos, tais como fenol, álcool butílico e benzílico, alquil parabenos, tais como metil ou propil parabeno, cate- col, resorcinol, ciclohexanol, 3pentanol, e m-cresol.
[0043] Um "tensoativo" é uma molécula de superfície ativa conten- do tanto uma porção hidrofóbica (por exemplo, cadeia alquil) quanto uma porção hidrofílica (por exemplo, grupos carboxil e carboxilato). O tensoativo pode ser adicionado às formulações da invenção. Tensoati- vos adequados para uso nas formulações da presente invenção inclu- em, mas sem limitação, polissorbatos (por exemplo, polissorbatos 20 ou 80); poloxâmeros (por exemplo, poloxâmero 188); ésteres de sorbi-
tano e derivados; Triton; laurel sulfato de sódio; octil glicosídeo de só- dio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetadina; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; laurami- dopropil-cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmi- dopropil-, ou isoestearamidopropilbetaína (por exemplo, lauroamido- propil); miristamidopropil-, palmidopropil-, ou isoestearamidopropil- dimetilamina; metil cocoil de sódio, ou metil oleil-taurato dissódico; e a série MONAQUATTM (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.), polietile- noglicol, polipropil glicol, e copolímeros de etileno e propilenoglicol (por exemplo, Pluronics, PF68 etc.). Regime de Dosagem Independente de Peso Corporal
[0044] Regimes de dosagem independentes de peso corporal en- volvendo a administração a pacientes sem tratamento prévio de pelo menos 500 mg das moléculas bifuncionais de armadilha anti-PD- L1/TGFβ neste documento foram desenvolvidos, informados pelos re- sultados de uma variedade de avaliações pré-clínicas e clínicas das moléculas. Dois estudos investigaram a segurança, tolerabilidade e farmacocinética das moléculas, e incluíram avaliações de ocupação alvo de PD-L1 em células mononucleares do sangue periférico obtidas do sangue de pacientes tratados e medidas das concentrações de TGFβ1, TGFβ2 e TGFβ3. Essas avaliações foram baseadas em dados de um total de 350 indivíduos (coortes de escalonamento de dose de 1, 3, 10 e 20 mg/kg em tumores sólidos, e coortes de expansão de 3 mg/kg, 10 mg/kg, 500 mg, e 1200 mg em tipos de tumor selecionados). Modelo de PK/Eficácia (Modelo de Camundongo)
[0045] Experimentos também foram conduzidos para determinar a eficácia da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em um modelo de tumor. Os resultados de eficácia de xenoenxertos EMT-6 foram usados para estabelecer o modelo de PK/Eficácia. O modelo de PK estabele- cido em camundongos foi usado para simular a exposição ao plasma de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para as configurações do experimento de eficácia. Os parâmetros estimados são relatados na Tabela 1. O valor estimado de KC50 foi de 55,3 µg/ml. Esse valor representa as concentrações plasmáticas médias para que 50% da atividade antitu- moral máxima da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ pudesse ser alcançada.
[0046] Os gráficos de diagnóstico básico do modelo não revelaram nenhuma especificação incorreta do modelo. As previsões do modelo são capazes de capturar as distribuições de volume tumoral. Os resí- duos condicionais ponderados são normalmente distribuídos com uma média 0 e variância 1 sem tendência. O modelo de PK/Eficácia foi en- tão usado para simular a inibição de crescimento tumoral (TGI) usando os perfis de concentração-tempo humanos previstos em diferentes do- ses. Tabela 1: Parâmetros de modelo de PK/eficácia de camundongo para molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em camundongos com xeno- enxerto EMT-6 Parâmetros Estimativa Padrão CV % % IIV Kg (h-1) 0,068 0,0005 0,82 40 Ktr (h-1) 0,055 0,0024 4,4 76 KC50 (ng/ml) 55324,6 522,3 4,4 232 Kmax 2 0,09 1 93 Linha de base (mm3) 88,3 0,87 1 47 Análise de Resposta com Base na Ocupação de PD-L1 (em um mode- lo de camundongo)
[0047] Usando os experimentos de eficácia, as respostas em ca- mundongos foram analisadas e classificadas por regressão tumoral ou estase tumoral, e ocupação do receptor de PD-L1 e PK (RO) foram previstas com base no modelo de PK/RO integrado. A abordagem de- monstrou que uma concentração plasmática de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ entre 40 e 100 µg/ml associada a uma RO de PD-L1 acima de 95% no tumor é necessária para alcançar a regressão tumo- ral. A concentração plasmática de molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ entre 10 e 40 µg/ml associada a uma RO de PD-L1 acima de 95% na periferia é necessária para atingir a estase tumoral.
[0048] A análise de resposta e PK/RO prevista em camundongos levam às Figuras 7A-7C, que resumem a PK/RO/Eficácia para a molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em camundongos. 95% de RO de PD-L1 são alcançados em uma concentração plasmática de 40 µg/ml com um TGI esperado/estimado de apenas cerca de 65%. Aumentar a concentração acima de 40 µg/ml resulta em um aumento adicional na inibição de crescimento tumoral. 95% de inibição de crescimento tumo- ral são alcançados na concentração plasmática média de cerca de 100 µg/ml.
[0049] Com base no modelo PK de população descrito abaixo, uma dose fixa de pelo menos 500 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma concentração média de cerca de 100 µg/ml, enquanto uma dose fixa de cerca de 1200 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma Ctrough de cerca de 100 µg/ml. Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400, cerca de 1500, cerca de 1600, cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, etc.) de um produto de proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD- L1/TGFβ) são administrados a um indivíduo. Em determinadas moda- lidades, cerca de 1200 mg de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg de molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a ca- da três semanas.
[0050] Em modalidades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, etc.) do pro- duto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo. Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, etc.) do produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui um primeiro polipeptídeo compreendendo as sequências de aminoáci- do de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo compre- endendo as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40 são administrados a um indivíduo.
[0051] Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg do pro- duto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalida- des, cerca de 2400 mg do produto de proteína com um primeiro poli- peptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três sema- nas. Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg do produto de proteína que inclui um primeiro polipeptídeo compreendendo as se- quências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo compreendendo as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40 são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg do produto de proteína que inclui um primeiro polipeptídeo compreenden- do as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo compreendendo as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas. Estabelecimento de Regime de Dosagem Independente de Peso Cor- poral
[0052] Informado pelos dados clínicos e pré-clínicos, um novo re- gime de dosagem independente de peso corporal para a administra- ção de moléculas de armadilha anti-PD-L1/TGFβ foi criado para atingir menor variabilidade na exposição, reduzir erros de dosagem, reduzir o tempo necessário para a preparação da dose e reduzir o desperdício de fármaco em relação à dosagem de mg/kg, facilitando resultados favoráveis do tratamento. De acordo com uma modalidade, uma dose fixa de pelo menos 500 mg pode ser administrada, independentemente do peso corporal do paciente. De acordo com outra modalidade, uma dose fixa de pelo menos 1200 mg pode ser administrada, independen- temente do peso corporal do paciente. De acordo com outra modalida- de, uma dose fixa de 2400 mg pode ser administrada, independente- mente do peso corporal do paciente. Tipicamente, tais doses seriam administradas repetidamente, tal como uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada 3 semanas, por exemplo. Por exemplo, uma dose fixa de 1200 mg pode ser administrada uma vez a cada duas sema- nas, ou uma dose fixa de 2400 mg pode ser administrada uma vez a cada três semanas. Amostragem de Análise Farmacocinética (PK) em Seres Humanos
[0053] Um exemplo de análise farmacocinética para determinar a dose fixa ideal da armadilha anti-PD-L1/TGFβ é fornecido pelos expe- rimentos descritos abaixo.
[0054] Amostras de soro para análise de dados farmacocinéticos (PK) foram coletadas antes do início da primeira dose e nos seguintes pontos de tempo após a primeira dose: no Dia 1 imediatamente após a infusão e 4 horas após o início da infusão; no Dia 2 pelo menos 24 ho- ras após o término da infusão no Dia 1; e nos Dias 8 e 15. Em ocasi- ões de dosagem subsequentes selecionadas, pré-dose, final da infu- são e 2 a 8 horas após o final da infusão, amostras foram coletadas nos dias 15, 29, 43. Para pontos de tempo posteriores nos dias 57, 71 e 85, as amostras de pré-dose foram ou deveriam ser coletadas se- guidas por uma amostragem PK a cada 6 semanas até 12 semanas e, então, uma amostragem PK a cada 12 semanas. Na fase de expan- são, amostragem de PK esparsa foi realizada.
[0055] Os dados de PK descritos acima foram usados para produ- zir um modelo PK de população e para realizar simulações de possí- veis regimes de dosagem. Método de modelagem, conhecido como modelo de abordagem completa, descrito em Gastonguay, M., Full Co- variate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Sig- nificance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodo- logy and 42 Case Studies, (2011) p. 20, Resumo 2229, foi aplicado aos dados do modelo populacional obtidos nas simulações para obter parâmetros tendo as seguintes características: modelo PK de 2 com- partimentos com eliminação linear, IIV em CL, V1 e V2, erro residual proporcional e aditivo combinado, modelo de covariável completo em CL e V1. As seguintes covariáveis de linha de base foram incluídas no modelo final: idade, peso, sexo, raça, albumina, CRP, contagem de plaquetas, eGFR, insuficiência hepática, pontuação ECOG, tamanho de tumor, tipo de tumor e tratamento prévio com biológicos. As seguin- tes estimativas de estimativas de parâmetros típicos de farmacocinéti-
ca da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD- L1/TGFβ) foram obtidas: depuração (CL) 0,0177 L/h (6,2%), volume central de distribuição (V1) 3,64 L (8,81%), volume de distribuição peri- férico (V2) 0,513 L (25,1%), e depuração intercompartimental (Q) 0,00219 L/h (17,8%). A variabilidade interpaciente foi de 22% para CL, 20% para V1 e 135% para V2. O peso corporal foi uma covariável re- levante em CL e V1. Para apoiar a abordagem de dosagem plana, foi explorado o impacto da estratégia de dosagem na variabilidade de ex- posição da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ). Especificamente, simulações foram realizadas para comparar a distribuição de exposição usando uma abordagem de do- sagem plana de 1200 mg uma vez a cada duas semanas versus uma abordagem de dosagem ajustada a BW de 17,65 mg/kg uma vez a ca- da duas semanas (correspondente a 1200 mg uma vez a cada duas semanas para um indivíduo de 68 kg ou 15 mg/kg uma vez a cada du- as semanas (correspondente a 1200 mg para um indivíduo de 80 kg). Simulações adicionais foram realizadas para comparar a distribuição de exposição usando uma abordagem de dosagem plana de 500 mg uma vez a cada duas semanas versus uma abordagem de dosagem ajusta a BW de 7,35 mg/kg uma vez a cada duas semanas (corres- pondente a 500 mg uma vez a cada duas semanas para um indivíduo de 68 kg). Além disso, foram realizadas simulações para avaliar as se- guintes doses fixas em uma vez a cada três semanas: 1200 mg, 1400, mg, 1600 mg, 1800 mg, 2000 mg, 2200 mg, 2400 mg, 2600 mg, 2800 mg, 3000 mg.
[0056] A seguinte metodologia para simulações foi usada: N = 200 conjuntos de estimativas de parâmetros foram extraídos de distribui- ção normal multivariada de estimativas de parâmetros, usando a ma- triz de variância-covariância de modelo PK final. Para cada estimativa de parâmetro, estimativas de 200 IIV foram extraídas da distribuição normal multivariada $OMEGA, resultando em um total de 40.000 (200 x 200) indivíduos. O conjunto de dados original (N = 380) foi reamos- trado com substituição para gerar 40.000 conjuntos de covariáveis correspondentes e métricas de exposição em estado estacionário (AUC, Cavg, Ctrough e Cmax) foram geradas para cada regime de dosa- gem.
[0057] Simulações mostraram que em um amplo espectro de BW, a variabilidade na exposição é ligeiramente maior para a dosagem ba- seada em BW em comparação com a dosagem fixa. Um exemplo de distribuição de exposição a 17,65 mg/kg e 1200 mg de dose fixa, ou 7,35 mg/kg e 500 mg de dose fixa para um peso corporal médio de 68 kg é mostrado nas Figuras 6A e 6E, respectivamente. As simulações também mostraram a tendência oposta na distribuição da exposição entre os quartis de peso na população de pacientes: pacientes de bai- xo peso têm maior exposição com dosagem fixa, ao passo que pacien- tes de alto peso têm maior exposição com dosagem de ajustada a BW. Estabelecimento de Dose Eficaz/Regime de Dosagem em Seres Hu- manos: dose-resposta preliminar em câncer de pulmão de células não pequenas de 2ª linha (2L NSCLC) após dosagem uma vez a cada 2 semanas (q2w) armadilha anti-PD-L1/TGFβ
[0058] Um exemplo da eficácia terapêutica da armadilha anti-PD- L1/TGFβ é estabelecido pelo estudo clínico descrito abaixo.
[0059] Pacientes com NSCLC avançado não selecionados para PD-L1 que progrediram após o tratamento padrão de 1ª linha (sem imunoterapia anterior) foram randomizados para receber a armadilha anti-PD-L1/TGFβ da presente descrição a 500 mg ou 1200 mg (n = 40 por coorte) uma vez a cada duas semanas (q2w), até a progressão da doença, toxicidade inaceitável ou retirada do estudo. O objetivo princi- pal foi avaliar a melhor resposta geral (BOR) de acordo com os Crité- rios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos versão 1.1 (RE-
CIST v1.1). Outros objetivos incluíram a exploração da dose e avalia- ção de segurança/tolerabilidade. Os níveis de expressão de PD-L1 de células tumorais (Ab clone 73-10 (Dako) [>80% => 50% com 22C3]) foram caracterizados como PD-L1 <1%, ≥1% (PD-L1+), ou ≥80% (PD- L1 – alto). A expressão de PD-L1 em células tumorais foi avaliada em 75 pacientes.
[0060] Como ponto de corte de dados no momento da análise, 80 pacientes receberam armadilha anti-PD-L1/TGFβ por uma média de 11,9 semanas (intervalo, 2-66,1), com uma média de seguimento até 51,1 semanas. Dez pacientes permanecem no tratamento. A taxa de resposta geral confirmada (ORR) avaliada pelo investigador foi de 23,8% (500 mg ORR, 20,0%; 1200 mg ORR, 27,5%), com 18 respos- tas parciais (PR) observadas em ambos os níveis de dose, e 1 respos- ta completa (CR) observada em 1200 mg. Conforme mostrado na Ta- bela 2, a atividade clínica foi observada em todos os níveis de expres- são de PD-L1: ORR foi de 37,0% em PD-L1+ e 85,7% em pacientes com PD-L1-alto a 1200 mg. Os eventos adversos relacionados ao tra- tamento (TRAEs) mais comuns foram prurido (20,0%), exantema ma- culopapular (18,8%) e diminuição do apetite (12,5%). TRAEs de grau 3 ocorreram em 23 pacientes (28,8%), e TRAEs de grau 4 ocorreram em 2 pacientes. Oito pacientes (500 mg, n = 2; 1200 mg, n = 6) desconti- nuaram o tratamento devido a TRAEs. Nenhuma morte relacionada ao tratamento ocorreu. Tabela 2: Taxa de resposta observada em pacientes com 2L NSCLC tratados com 500 mg ou 1200 mg de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada 2 semanas ORR 500 mg 1200 mg Total Todos, n, % 8/40, 20,0 11/40, 27,5 19/80, 23,8 PD-L1+ (≥1%) pts, n, % 6/31, 19,4 11/27, 40,7 17/58, 29,3 pd-l1 alto (≥80%) pts, n, % 2/6, 33,3 6/7, 85,7 8/13, 62,0
[0061] Esses resultados demonstram que monoterapia com arma-
dilha anti-PD-L1/TGFβ foi bem tolerada e mostrou eficácia nos sub- grupos de PD-L1, com uma ORR de 1200 mg de 37,0% e 85,7% em pacientes com PD-L1+ e PD-L1-alto, respectivamente. Dadas as taxas de resposta significativamente melhoradas na expressão de células tumorais com PD-L1 mais alto (por exemplo, pacientes tratados com 1200 mg), espera-se que esta atividade promissora da armadilha anti- PD-L1/TGFβ observada como um tratamento de 2L traduza ou aumen- te como uma terapia de primeira linha (1L) em pacientes com NSCLC avançado PD-L1-alto sem tratamento prévio. Estabelecimento de Regime de Dosagem com Várias Freqüências de Dosagem
[0062] Regimes de dados com várias frequências de dosagem fo- ram criados para permitir a administração menos frequente e/ou para permitir a coordenação de cronogramas de dosagem com medicações concomitantes. Especificamente, a metodologia de simulação e mode- lagem de PK populacional preliminar descrita foi usada para simular exposições para vários regimes de dosagem e para comparar regimes com base na exposição.
[0063] Com base nessas simulações, uma dose fixa de pelo me- nos 500 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma concentração média de cerca de 100 µg/ml para um indivíduo típico, enquanto uma dose fixa de cerca de 1200 mg admi- nistrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter um Ctrough de cerca de 100 µg/ml.
[0064] Com base em simulações para Cavg, 1200 mg uma vez a cada duas semanas é equivalente a 1800 mg uma vez a cada três semanas, enquanto para Ctrough, 1200 mg uma vez a cada duas sema- nas é equivalente a 2800 mg uma vez a cada três semanas. E para Cavg, 500 mg uma vez a cada duas semanas é equivalente a 750 mg uma vez a cada três semanas; para Ctrough, 500 mg uma vez a cada duas semanas é equivalente a 1,167 mg uma vez a cada três sema- nas. TGFβ como Alvo de Câncer
[0065] A descrição atual permite a redução localizada em TGFβ em um microambiente tumoral pela captura do TGFβ usando um re- ceptor de citocina solúvel (TGFβRII) acoplado a uma porção de anti- corpo que tem como alvo um receptor de ponto de verificação imune celular encontrado na superfície externa de certas células tumorais ou células imunes. Um exemplo de uma porção de anticorpo da descrição para uma proteína de ponto de verificação imune é anti-PD-L1. Essa molécula bifuncional, às vezes chamada neste documento de "armadi- lha de anticorpo-citocina", é eficaz justamente porque a armadilha de citocina e anticorpo antirreceptor estão fisicamente ligados. A vanta- gem resultante (em relação, por exemplo, à administração do anticor- po e do receptor como moléculas separadas) é em parte porque as citocinas funcionam predominantemente no ambiente local por meio de funções autócrinas e parácrinas. A porção de anticorpo direciona a armadilha de citocina para o microambiente tumoral onde pode ser mais eficaz, neutralizando os efeitos imunossupressores autócrinos ou parácrinos locais. Além disso, nos casos em que o alvo do anticorpo é internalizado após a ligação do anticorpo, é fornecido um mecanismo eficaz para a depuração do complexo citocina/receptor de citocina. A internalização de alvo mediada por anticorpo foi demonstrada para PD-L1, e a armadilha anti-PD-L1/TGFβ mostrou ter uma taxa de inter- nalização similar a anti-PD-L1. Esta é uma vantagem distinta em rela- ção ao uso de um anticorpo anti-TGFβ porque, primeiramente, um an- ticorpo anti-TGFβ pode não ser completamente neutralizante; em se- gundo lugar, o anticorpo pode atuar como um veículo, estendendo a meia-vida da citocina.
[0066] De fato, conforme descrito abaixo, o tratamento com a ar-
madilha anti-PD-L1/TGFβ evoca um efeito antitumoral sinérgico devido ao bloqueio simultâneo da interação entre PD-L1 em células tumorais e PD-1 em células imunes, e a neutralização de TGFβ no microambi- ente tumoral. Sem ser limitado pela teoria, isso presumivelmente é de- vido a um efeito sinérgico obtido a partir do bloqueio simultâneo dos dois principais mecanismos de escape imune, e além disso, a deple- ção de TGFβ no microambiente tumoral por uma única entidade mole- cular. Essa depleção é alcançada por (1) anti-PD-L1 direcionado a cé- lulas tumorais; (2) ligação do TGFβ autócrino/parácrino no microambi- ente tumoral pela armadilha de TGFβ; e (3) destruição do TGFβ ligado através da endocitose mediada por receptor de PD-L1. Além disso, o TGFβRII fundido ao C-terminal de Fc (fragmento de cristalização de IgG) foi várias vezes mais potente do que TGFβRII-Fc que coloca o TGFβRII no N-terminal de Fc.
[0067] O TGFβ tem sido um alvo um tanto questionável na imuno- terapia de câncer por causa de seus papéis paradoxais como o Jekyll e Hyde molecular de câncer (Bierie et al., Nat. Rev. Cancer, 2006; 6:506-20). Como algumas outras citocinas, a atividade de TGFβ é de- pendente do estágio de desenvolvimento e do contexto. De fato, o TGFβ pode atuar tanto como promotor tumoral quanto supressor tumo- ral, afetando o início, progressão e metástase do tumor. Os mecanis- mos subjacentes a este papel duplo de TGFβ permanecem obscuros (Yang et al., Trends Immunol, 2010; 31:220–227). Embora tenha sido postulado que a sinalização dependente de Smad medeia a inibição do crescimento de sinalização de TGFβ, enquanto as vias independen- tes de Smad contribuem para seu efeito de promoção de tumor, há também dados que mostram que as vias dependentes de Smad estão envolvidas na progressão tumoral (Yang et al., Cancer Res, 2008; 68: 9107-11).
[0068] Ambos o ligante e o receptor de TGFβ foram estudados in-
tensamente como alvos terapêuticos. Existem três isoformas de ligan- te, TGFβ1, 2 e 3, todas de que existem como homodímeros. Existem também três receptores de TGFβ (TGFβR), que são chamados de TGFβR tipo I, II e III (López-Casillas et al., J Cell Biol, 1994; 124:557- 68). TGFβRI é a cadeia de sinalização e não pode se ligar a ligante. O TGFβRII se liga ao ligante TGFβ1 e 3, mas não a TGFβ2, com afinida- de alta. O complexo TGFβRII/TGFβ recruta TGFβRI para formar o complexo de sinalização (Won et al., Cancer Res. 1999; 59:1273-7). O TGFβRIII é um regulador positivo da ligação de TGFβ a seus recepto- res de sinalização e se liga a todas as 3 isoformas de TGFβ com afini- dade alta. Na superfície celular, o complexo TGFβ/TGFβRIII se liga a TGFβRII e, em seguida, recruta TGFβRI, que desloca TGFβRIII para formar o complexo de sinalização.
[0069] Embora as três diferentes isoformas de TGFβ sinalizem através do mesmo receptor, elas são conhecidas por apresentarem padrões de expressão diferencial e funções não sobrepostas in vivo. Os três diferentes camundongos nocaute de isoforma de TGFβ têm fenótipos distintos, indicando inúmeras funções não compensadas (Bujak et al., Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95). Enquanto os camun- dongos nulos para TGFβ1 apresentam defeitos de hematopoiese e vasculogênese e camundongos nulos para TGFβ3 apresentam desen- volvimento pulmonar e palatogênese defeituosa, camundongos nulos para TGFβ2 apresentam várias anormalidades de desenvolvimento, sendo as mais proeminentes várias deformidades cardíacas (Bartram et al., Circulation. 2001; 103: 2745-52; Yamagishi et al., Anat Rec. 2012; 295: 257-67). Além disso, o TGFβ está implicado em desempe- nhar um papel importante na reparação do dano do miocárdico após lesão de isquemia e reperfusão. Em um coração adulto, os cardiomió- citos secretam TGFβ, que atua como um autócrino para manter a taxa de batimentos espontâneos. É importante notar que 70-85% do TGFβ secretado por cardiomiócitos é TGFβ2 (Roberts et al., J Clin Invest, 1992; 90: 2056-62). Apesar das preocupações de cardiotoxicidade le- vantadas pelo tratamento com inibidores de quinase de TGFβRI, os atuais requerentes observaram uma falta de toxicidade, incluindo car- diotoxicidade, para armadilha anti-PD-L1/TGFβ em macacos.
[0070] Abordagens terapêuticas para neutralizar TGFβ incluem usar os domínios extracelulares de receptores de TGFβ como armadi- lhas de receptor solúvel e anticorpos neutralizantes. Na abordagem da armadilha de receptor, o TGFβRIII solúvel pode parecer a escolha ób- via, uma vez que se liga a todos os três ligantes de TGFβ. No entanto, o TGFβRIII, que ocorre naturalmente como uma glicoproteína de glu- cosaminoglicano (GAG) de 280-330 kD, com domínio extracelular de 762 aminoácido resíduos, é uma proteína muito complexa para o de- senvolvimento bioterapêutico. O TGFβRIII solúvel desprovido de GAG pode ser produzido em células de inseto e mostrou-se um potente agente neutralizante de TGFβ (Vilchis-Landeros et al, Biochem J 355:215, 2001). Os dois domínios de ligação separados (o relacionado à endoglina e o relacionado à uromodulina) de TGFβRIII poderiam ser expressos de forma independente, mas mostraram ter afinidades 20 a 100 vezes menores que as de TGFβRIII solúvel, e atividade neutrali- zante muito reduzida (Mendoza et al., Biochemistry. 2009; 48:11755- 65). Por outro lado, o domínio extracelular de TGFβRII tem apenas 136 resíduos de aminoácido de comprimento e pode ser produzido como uma proteína glicosilada de 25-35 kD. O TGFβRII solúvel re- combinante mostrou ainda ligar TGFβ1 com uma KD de 200 pM, que é bastante similar à KD de 50 pM para o TGFβRII de comprimento total em células (Lin et al., J Biol Chem, 1995; 270:2747-54). TGFβRII-Fc solúvel foi testado como um agente anticâncer e mostrou inibir o cres- cimento de mesotelioma maligno de murino estabelecido em um mo- delo de tumor (Suzuki et al., Clin. Cancer Res., 2004; 10:5907-18).
Como TGFβRII não liga TGFβII, e TGFβRIII liga TGFβ1 e 3 com me- nor afinidade do que TGFβRII, uma proteína de fusão do domínio de endoglina de TGFβRIII e domínio extracelular de TGFβRII foi produzi- da em bactérias e mostrou inibir a sinalização de TGFβRII e 2 em en- saios baseados em células de forma mais eficaz do que TGFβRII ou RIII (Verona et al., Protein Eng Des Sel, 2008; 21:463-73).
[0071] Ainda outra abordagem para neutralizar todas as três iso- formas dos ligantes de TGFβ é a triagem de um anticorpo anti-TGFβ pan-neutralizante, ou um anticorpo antirreceptor que bloqueia a liga- ção do receptor a TGFβ1, 2 e 3. GC1008, um anticorpo humano espe- cífico para todas as isoformas de TGFβ, estava em um estudo de Fase I/II em pacientes com melanoma maligno avançado ou carcinoma de células renais (Morris et al., J Clin Oncol 2008; 26:9028 (Resumo da Reunião)). Embora o tratamento tenha sido considerado seguro e bem tolerado, apenas limitada eficácia clínica foi observada, e, portanto, foi difícil interpretar a importância da terapia anti-TGFβ sem uma posterior caracterização dos efeitos imunológicos (Flavell et al., Nat Rev Immu- nol, 2010; 10:554-67). Também foram testados na clínica anticorpos específicos da isoforma de TGFβ. Metelimumab, um anticorpo especí- fico para TGFβ1 foi testado no ensaio clínico de Fase 2 como um tra- tamento para prevenir cicatrizes pós-operatórias excessivas para ci- rurgia de glaucoma; e Lerdelimumab, um anticorpo específico para TGFβ2, foi considerado seguro, mas ineficaz na melhora da cicatriz após cirurgia ocular em um estudo de Fase 3 (Khaw et al., Ophthalmo- logy 2007; 114:1822–1830). Anticorpos anti-TGFβRII que bloqueiam a ligação do receptor a todas as três isoformas de TGFβ, tais como o anticorpo anti-TGFβRII humano TR1 e anticorpo de TGFβRII antica- mundongo MT1, também demonstraram alguma eficácia terapêutica contra crescimento tumoral primário e metástase em modelos de ca- mundongo (Zhong et al., Clin Cancer Res, 2010; 16:1191-205). No en-
tanto, em um estudo recente de Fase I do anticorpo TR1 (LY3022859), o aumento da dose além de 25 mg (dose fixa) foi considerado inseguro devido à liberação descontrolada de citocinas, apesar do tratamento profilático (Tolcher et al., Cancer Chemother Pharmacol 2017; 79:673- 680). Até o momento, a grande maioria dos estudos sobre tratamento anticâncer direcionado a TGFβ, incluindo inibidores de pequenas mo- léculas de sinalização de TGFβ que muitas vezes são bastante tóxi- cos, estão principalmente em estágio pré-clínico e a eficácia antitumo- ral obtida tem sido limitada (Calone et al., Exp Oncol,2012; 34:9-16; Connolly et al., Int J Biol Sci,2012; 8:964-78).
[0072] A armadilha de anticorpo-TGFβ da descrição é uma proteí- na bifuncional contendo pelo menos porção de um Receptor II de TGFβ humano (TGFβRII) que é capaz de ligar TGFβ . Em determina- das modalidades, o polipeptídeo de armadilha de TGFβ é uma porção solúvel da Isoforma A Tipo 2 do Receptor de TGFβ humano (SEQ ID NO: 8) que é capaz de ligar TGFβ. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo de armadilha de TGFβ contém pelo menos aminoácidos 73-184 de SEQ ID NO: 8. Em determinadas modalidades, o polipeptí- deo de armadilha de TGFβ contém aminoácidos 24-184 de SEQ ID NO: 8. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo de armadilha de TGFβ é uma porção solúvel da Isoforma B Tipo 2 do Receptor de TGFβ humano (SEQ ID NO: 9) que é capaz de ligar TGFβ. Em deter- minadas modalidades, o polipeptídeo de armadilha de TGFβ contém pelo menos aminoácidos 48-159 de SEQ ID NO: 9. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo de armadilha de TGFβ contém aminoáci- dos 24-159 de SEQ ID NO: 9. Em determinadas modalidades, o poli- peptídeo de armadilha de TGFβ contém aminoácidos 24-105 de SEQ ID NO: 9. Em determinadas modalidades exemplificativas, o polipeptí- deo de armadilha de TGFβ contém a sequência de SEQ ID NOs: 10, 50, 51, 52, 53, ou 54.
[0073] Em outra modalidade, a armadilha de anticorpo-TGFβ da descrição é uma das proteínas de fusão descritas no WO 2018/205985. Em algumas modalidades, a proteína de fusão é um dos constructos listados na Tabela 2 desta publicação, tal como constructo 9 ou 15 do mesmo. Em outras modalidades, o anticorpo tendo a se- quência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 12 desta publicação [correspondente a SEQ ID NO: 61 e 62, respectivamente, da presente descrição] é fundido por meio de uma sequência de ligação (G4S)xG, em que x é 4-5, à se- quência de domínio extracelular de TGFβRII de SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 15 da referida publicação [correspondente a SEQ ID NO: 50 e 51, respectivamente, da presente descrição]. Mecanismos de Ação
[0074] A abordagem de direcionamento de pontos de verificação de inibição de células T para desinibição com anticorpos terapêuticos é uma área de intensa investigação (para revisão, ver Pardoll, Nat Rev Cancer, 2012; 12:253-264). Em uma abordagem, uma porção de anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo tem como alvo proteínas do receptor de ponto de verificação de inibição de células T na célula T, como, por exemplo: CTLA-4, PD-1, BTLA, LAG-3, TIM-3 ou LAIR1. Em outra abordagem, a porção de anticorpo tem como alvo os contrarreceptores em células apresentadoras de antígeno e células tumorais (que cooptam alguns desses contrarreceptores para sua pró- pria evasão imune), tal como, por exemplo: PD-L1 (B7-H1), B7-DC, HVEM, TIM-4, B7-H3, ou B7-H4.
[0075] A descrição contempla armadilhas de anticorpo TGFβ que têm como alvo, por meio de sua porção de anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, pontos de verificação de inibição de cé- lulas T para desinibição. Por fim, os requerentes testaram a eficácia antitumoral da combinação de uma armadilha de TGFβ com anticorpos direcionados a várias proteínas de receptor de ponto de verificação de inibição de células T, tais como anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-TIM-3 e an- ti-LAG3.
[0076] O eixo de morte programada 1 (PD-1)/PD-L1 é um meca- nismo importante para a evasão imune tumoral. As células T efetoras cronicamente detectando antígeno assumem um fenótipo exaurido marcado pela expressão de PD-1, um estado em que as células tumo- rais se acoplam pela regulação positiva de PD-L1. Além disso, no mi- croambiente tumoral, células mieloides, macrófagos, células paren- quimatosas e células T regulam positivamente o PD-L1. Bloquear o eixo restaura a função efetora nessas células T. A armadilha anti-PD- L1/TGFβ também liga TGFβ (isoformas 1, 2, e 3), que é uma citocina inibidora produzida no microambiente tumoral por células incluindo neutrófilos apoptóticos, células supressoras derivadas de mieloide, cé- lulas T e tumor. A inibição de TGFβ por TGFβRII solúvel reduziu o me- sotelioma maligno de uma maneira que foi associado a aumento dos efeitos antitumorais de células T CD8+. A ausência de TGFβ1 produzi- do por células T CD4+ e células Treg ativadas demonstrou inibir o crescimento tumoral, e proteger camundongos do câncer espontâneo. Dessa forma, TGFβ parece ser importante para a evasão imune tumo- ral.
[0077] TGFβ tem efeitos inibidores de crescimento em células epi- teliais normais, funcionando como regulador da homeostase de células epiteliais, e atua como supressor tumoral durante a carcinogênese ini- cial. À medida que os tumores evoluem para a malignidade, os efeitos inibidores de crescimento de TGFβ no tumor são perdidos por muta- ção em um ou mais componentes de sinalização da via de TGFβ ou por reprogramação oncogênica. Após a perda de sensibilidade à inibi- ção de TGFβ, o tumor continua a produzir níveis altos de TGFβ, que então servem para promover o crescimento tumoral. A citocina de
TGFβ é superexpressa em vários tipos de câncer com correlação com o estágio do tumor. Muitos tipos de células no microambiente tumoral produzem TGFβ incluindo as próprias células tumorais, células mieloi- des imaturas, células T reguladoras, e fibroblastos estromais; essas células geram coletivamente um grande reservatório de TGFβ na ma- triz extracelular. A sinalização de TGFβ contribui para a progressão tumoral ao promover metástases, estimulando a angiogênese, e su- primindo a imunidade antitumoral inata e adaptativa. Como um fator amplamente imunossupressor, o TGFβ desregula diretamente a fun- ção efetora de células T citotóxicas ativadas e células NK e induz po- tentemente a diferenciação de células T CD4+ sem tratamento prévio para o fenótipo de células T reguladoras imunossupressoras (Treg). Além disso, o TGFβ polariza macrófagos e neutrófilos a um fenótipo de cicatrização de feridas que está associado à produção de citocinas imunossupressoras. Como estratégia terapêutica, a neutralização da atividade de TGFβ tem o potencial de controlar o crescimento tumoral, restaurando a imunidade antitumoral eficaz, bloqueando metástases, e inibindo a angiogênese.
[0078] Combinar essas vias, PD-1 ou PD-L1, e TGFβ, é atraente como uma abordagem antitumoral. O bloqueio concomitante de PD-1 e TGFβ pode restaurar citocinas pró-inflamatórias. Armadilha anti-PD- L1/TGFβ inclui, por exemplo, um domínio extracelular do receptor de TGFβ humano TGFβRII covalentemente unido por meio de um ligante de glicina/serina ao terminal C de cada cadeia pesada do anticorpo anti-PD-L1 de IgG1 totalmente humana. Dada a imagem emergente para a classe de PD-1/PD-L1, em que as respostas são aparentes, mas com espaço para aumento no tamanho do efeito, assume-se que o codirecionamento de uma etapa de modulação imune complementar irá melhorar a resposta tumoral. Um agente de direcionamento de TGF similar, fresolimumab, que é um anticorpo monoclonal direcionado a
TGFβ1, 2 e 3, mostrou evidência inicial de resposta tumoral em um estudo de Fase I em indivíduos com melanoma.
[0079] Em determinadas modalidades, a presente descrição forne- ce experimentos, que demonstraram que a porção TGFβRII da armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ (o controle de armadilha "armadilha anti-PDL- 1(mut)/TGFβ") evocou atividade antitumoral. Por exemplo, após im- plantação subcutânea em um modelo de carcinoma faríngeo humano Detroit 562, a armadilha anti-PDL-1(mut)/TGFβ provocou uma redução dependente da dose no volume do tumor quando administrada a 25 µg, 76 µg ou 228 µg (Figura 5).
[0080] Em determinadas modalidades, a presente descrição forne- ce experimentos, que demonstraram que a proteína da presente des- crição simultaneamente se ligou a ambos PD-L1 e TGFβ (Figura 2).
[0081] Em determinadas modalidades, a presente descrição forne- ce experimentos, que demonstraram que a proteína da presente des- crição (por exemplo armadilha anti-PD-L1/TGFβ) inibiu a sinalização dependente de PD-L1 e TGFβ in vitro. Em determinadas modalidades, a presente descrição fornece experimentos, que demonstraram que a proteína da presente descrição aprimorou a função efetora de células T in vitro através do bloqueio da inibição imune mediada por PD-L1, conforme medido por um ensaio de indução de IL-2 após estimulação de superantígenos (Figura 3). A aproximadamente 100 ng/ml, a proteí- na da presente descrição induziu um aumento significativo nos níveis de IL-2 in vitro (Figura 3).
[0082] Em certas modalidades, a presente descrição fornece expe- rimentos, que demonstraram que a proteína da presente descrição (por exemplo armadilha anti-PD-L1/TGFβ) causou depleção de TGFβ do sangue in vivo. O tratamento de células de câncer de mama EMT-6 implantadas ortotopicamente em camundongos JH com 55 µg, ou 164 µg, ou 492 µg da proteína da presente descrição resultou na depleção eficiente e específica de TGFβ1 (Figura 4A), TGFβ2 (Figura 4B) e TGFβ3 (Figura 4C). Além disso, a presente descrição fornece experi- mentos, que demonstraram que a proteína da presente descrição ocu- pou o alvo de PD-L1, apoiando a noção de que a proteína da presente descrição se encaixa em um modelo de ligação a receptor no sistema de tumor EMT-6 (Figura 4D).
[0083] Em determinadas modalidades, a presente descrição forne- ce experimentos, que demonstraram que a proteína da presente des- crição de forma eficiente, específica e simultânea ligada a PD-L1 e TGFβ possuía potente atividade antitumoral em diversos modelos de camundongos, suprimiu crescimento tumoral e metástase, bem como estendeu a sobrevida e conferiu imunidade antitumoral protetora de longo prazo.
[0084] Um exemplo de determinação do mecanismo de ação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ in vivo é descrito abaixo:
[0085] Em um estudo de escalonamento de dose de fase I em se- res humanos primeiramente, além de monitorar a farmacocinética da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, o mecanismo de ação, parti- cularmente contra as citocinas de TGFβ, foi investigado.
[0086] Os pacientes foram tratados com molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ intravenosamente administrada a 5 níveis de dose de cerca de 0,3, cerca de 1, cerca de 3, cerca de 10 ou cerca de 20 mg/kg uma vez a cada duas semanas, as análises de PK foram reali- zadas a partir de amostras até o dia 85. A ocupação do alvo de PD-L1 foi medida em PBMCs CD3+ por citometria de fluxo do sangue do pa- ciente coletado na pré-dose, Dia 2 (D2), D15 e D43. Além disso, os níveis sanguíneos de citocinas TGFβ1-3 e pró-inflamatórias foram me- didos nesses pontos de tempo com um ponto de tempo adicional em D8 usando imunoensaios multiplex com base em esferas Luminex e ECLIA analiticamente validados. Em um aspecto, os pacientes podem ser tratados com molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ administra- da intravenosamente em 6 níveis de dose, incluindo os descritos aci- ma, em uma dose de cerca de 30 mg/kg ou cerca de 40 mg/kg a cada duas semanas. As análises de PK de pacientes tratados em 6 níveis de dose podem ser realizadas a partir de amostras até após a 6ª dose. A ocupação de alvo de PD-L1 também pode ser medida em PBMCs CD3+ por citometria de fluxo do sangue do paciente coletado na pré- dose, Dia 2 (D2), D15, D43 e até D85. Além disso, os níveis sanguí- neos de TGFβ1-3 e citocinas pró-inflamatórias podem ser medidos nesses pontos de tempo com um ponto de tempo adicional, por exem- plo, em D8, usando imunoensaios multiplex com base em esferas Lu- minex e ECLIA analiticamente validados.
[0087] Os resultados indicaram que a exposição PK da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ durante o primeiro ciclo aumentou de maneira aproximadamente proporcional à dose entre 3 a 20 mg/kg, sem acúmulo significativo dentro dos primeiros 85 dias de tratamento. Houve cerca de 80% de ocupação de alvo de PD-L1 com 3 mg/kg–20 mg/kg, que foi mantida ao longo do intervalo de dosagem. Houve ain- da uma pequena (1,7 vezes em D2), mas significativa indução de IFNγ em 0,3–20 mg/kg (p = 0,001, n = 19). Os níveis de TGFβ1, TGFβ2 e TGFβ3 no sangue foram reduzidos em um mínimo de 99%, 92% e 91%, respectivamente, em todos os pontos de tempo para níveis de dose de 1–20 mg/kg. Na dose mais baixa de 0,3 mg/kg, os níveis de TGFβ 1–3 foram depletados em D2 e D8, mas não em D15. Além dis- so, havia ainda uma forte correlação entre os níveis de PK de fármaco e o aprisionamento de TGFβ. Dessa forma, o aprisionamento completo de TGFβ1-3 foi alcançado com um nível de dose de fármaco de 1 mg/kg ou acima. Anticorpos Anti-PD-L1
[0088] A descrição pode incluir qualquer anticorpo anti-PD-L1, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, descrito na técnica. Anti- corpos anti-PD-L1 são comercialmente disponíveis, por exemplo, o anticorpo 29E2A3 (Biolegend, Cat. No. 329701). Os anticorpos podem ser monoclonais, quimérico, humanizados ou humanos. Fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, F(ab’)2, scFv e Fv, que são des- critos em mais detalhes abaixo.
[0089] Anticorpos exemplificativos são descritos na Publicação PCT WO 2013/079174. Esses anticorpos podem incluir um polipeptí- deo de região variável de cadeia pesada incluindo uma sequência de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que: (a) a sequência de HVR-H1 é X1YX2MX3 (SEQ ID NO: 21); (b) a sequência de HVR-H2 é SIYPSGGX4TFYADX5VKG (SEQ ID NO: 22); (c) a sequência de HVR-H3 é IKLGTVTTVX6Y (SEQ ID NO: 23); adicionalmente em que: X1 é K, R, T, Q, G, A, W, M, I, ou S; X2 é V, R, K, L, M, ou I; X3 é H, T, N, Q, A, V, Y, W, F, ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D.
[0090] Em uma modalidade, X1 é M, I, ou S; X2 é R, K, L, M, ou I; X3 é F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D.
[0091] Em outra modalidade, X1 é M, I, ou S; X2 é L, M, ou I; X3 é F ou M; X4 é I; X5 é S ou T; X6 é D.
[0092] Ainda em outra modalidade, X1 é S; X2 é I; X3 é M; X4 é I; X5 é T; X6 é D.
[0093] Em outro aspecto, o polipeptídeo ainda inclui sequências de quadro de cadeia pesada de região variável justapostas entre as HVRs, de acordo com a fórmula: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR- H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4).
[0094] Ainda em outro aspecto, as sequências de quadro são deri- vadas de sequências de quadro de consenso humanas ou sequências de quadro de linhagens germinativas humanas.
[0095] Ainda em um aspecto adicional, pelo menos uma das se- quências de quadro é a seguinte: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).
[0096] Ainda em um aspecto adicional, o polipeptídeo de cadeia pesada é ainda combinado com uma cadeia leve de região variável incluindo uma HVR-L1, HVR-L2, e HVR-L3, em que: (a) a sequência de HVR-L1 é TGTX7X8DVGX9YNYVS (SEQ ID NO: 28); (b) a sequência de HVR-L2 é X10VX11X12RPS (SEQ ID NO: 29); (c) a sequência de HVR-L3 é SSX13TX14X15X16X17RV (SEQ ID NO: 30); adicionalmente em que: X7 é N ou S; X8 é T, R, ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é I, N ou S; X12 é D, H ou N; X13 é F ou Y; X14 é N ou S; X15 é R, T ou S; X16 é G ou S; X17 é I ou T.
[0097] Em outra modalidade, X7 é N ou S; X8 é T, R, ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.
[0098] Ainda em outra modalidade, X7 é S; X8 é S; X9 é G; X10 é D; X11 é S; X12 é N; X13 é Y; X14 é S; X15 é S; X16 é S; X17 é T.
[0099] Ainda em um aspecto adicional, a cadeia leve ainda inclui sequências de quadro de cadeia leve de região variável justapostas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (LC-FR1MHVR-L1)-(LC- FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4).
[00100] Ainda em um aspecto adicional, as sequências de quadro de cadeia leve são derivadas de sequências de quadro de consenso humanas ou sequências de quadro de linhagens germinativas huma- nas.
[00101] Ainda em um aspecto adicional, as sequências de quadro de cadeia leve são sequências de cadeia leve lambda.
[00102] Ainda em um aspecto adicional, pelo menos uma das se- quências de quadro é a seguinte: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); LC-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).
[00103] Em outra modalidade, a descrição fornece um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação a antígeno incluindo uma sequên- cia de região variável de cadeia pesada e cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, HVR-H2, e HVR-H3, em que ainda: (i) a sequência de HVR-H1 é X1YX2MX3 (SEQ ID NO: 21); (ii) a sequência de HVR-H2 é SIYPSGGX4TFYADX5VKG (SEQ ID NO: 22); (iii) a sequência de HVR-H3 é IKLGTVTTVX6Y (SEQ ID NO: 23), e; (b) a cadeia leve inclui uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que ain- da: (iv) a sequência de HVR-L1 é TGTX7X8DVGX9YNYVS (SEQ ID NO: 28); (v) a sequência de HVR-L2 é X10VX11X12RPS (SEQ ID NO: 29); (vi) a sequência de HVR-L3 é SSX13TX14X15X16X17RV (SEQ ID NO: 30); em que: X1 é K, R, T, Q, G, A, W, M, I, ou S; X2 é V, R, K, L, M, ou I; X3 é H, T, N, Q, A, V, Y, W, F, ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D; X7 é N ou S; X8 é T, R, ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é I, N, ou S; X12 é D, H, ou N; X13 é F ou Y; X14 é N ou S; X15 é R, T, ou S; X16 é G ou S; X17 é I ou T.
[00104] Em uma modalidade, X1 é M, I, ou S; X2 é R, K, L, M, ou I;
X3 é F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D; X7 é N ou S; X8 é T, R, ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11is N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.
[00105] Em outra modalidade, X1 é M, I, ou S; X2 é L, M, ou I; X3 é F ou M; X4 é I; X5 é S ou T; X6 é D; X7 é N ou S; X8 é T, R, ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.
[00106] Ainda em outra modalidade, X1 é S; X2 é I; X3 é M; X4 é I; X5 é T; X6 é D; X7 é S; X8 é S; X9 é G; X10 é D; X11 é S; X12 é N; X13 é Y; X14 é S; X15 é S; X16 é S; X17 é T.
[00107] Em um aspecto adicional, a região variável de cadeia pesa- da inclui uma ou mais sequências de quadro justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)- (HVR-H3)-(HC-FR4), e as regiões variáveis de cadeia leve incluem uma ou mais sequências de quadro justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1 MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC- FR4).
[00108] Ainda em um aspecto adicional, as sequências de quadro são derivadas de sequências de quadro de consenso humanas ou se- quências de linhagens germinativas humanas.
[00109] Ainda em um aspecto adicional, uma ou mais das sequên- cias de quadro de cadeia pesada são as seguintes: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).
[00110] Ainda em um aspecto adicional, as sequências de quadro de cadeia leve são sequências de cadeia leve lambda.
[00111] Ainda em um aspecto adicional, uma ou mais das sequên-
cias de quadro de cadeia leve são as seguintes: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); LC-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).
[00112] Ainda em um aspecto adicional, o polipeptídeo de região variável de cadeia pesada, anticorpo ou fragmento de anticorpo ainda inclui pelo menos um domínio CH1.
[00113] Em um aspecto mais específico, o polipeptídeo de região variável de cadeia pesada, anticorpo ou fragmento de anticorpo ainda inclui um domínio CH1, CH2 e CH3.
[00114] Ainda em um aspecto adicional, a cadeia leve de região va- riável, anticorpo ou fragmento de anticorpo ainda inclui um domínio CL.
[00115] Ainda em um aspecto adicional, o anticorpo ainda inclui um domínio CH1, CH2, CH3 e CL.
[00116] Ainda em um aspecto específico adicional, o anticorpo ain- da inclui uma região constante humana ou de murino.
[00117] Ainda em um aspecto adicional, a região constante humana é selecionada do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4.
[00118] Ainda em um aspecto específico adicional, a região cons- tante humana ou de murino é lgG1.
[00119] Ainda em outra modalidade, a descrição apresenta um anti- corpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região variável de ca- deia pesada e cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, tendo pelo menos 80% de identidade de sequência ge- ral com SYIMM (SEQ ID NO: 35), SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36), e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente, e (b) a cadeia leve inclui uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma
HVR-L3, tendo pelo menos 80% de identidade de sequência geral com TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39), e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.
[00120] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.
[00121] Ainda em outra modalidade, a descrição apresenta um anti- corpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região variável de ca- deia pesada e cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, tendo pelo menos 80% de identidade de sequência geral com MYMMM (SEQ ID NO: 41), SIYPSGGITFYADSVKG (SEQ ID NO: 42), e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente, e (b) a cadeia leve inclui uma HVR-L1, uma HVR-L2, e uma HVR-L3, tendo pelo menos 80% de identidade de sequência geral com TGTSSDVGAYNYVS (SEQ ID NO: 43), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39), e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.
[00122] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100%.
[00123] Ainda em um aspecto adicional, no anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com a descrição, em comparação com as se- quências de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, pelo menos aqueles amino- ácidos permanecem inalterados que são destacados sublinhados co- mo segue: (a) em HVR-H1 SYIMM (SEQ ID NO: 35), (b) em HVR-H2 SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36), (c) em HVR-H3 IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37); e adicionalmente em que, em comparação com as sequências de HVR-L1, HVR-L2, e HVR-L3, pelo menos aqueles aminoácidos per-
manecem inalterados que são destacados sublinhados como segue: (a) HVR-L1 TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38) (b) HVR-L2 DVSNRPS (SEQ ID NO: 39) (c) HVR-L3 SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40).
[00124] Em outro aspecto, a região variável de cadeia pesada inclui uma ou mais sequências de quadro justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC- FR4), e as regiões variáveis de cadeia leve incluem uma ou mais se- quências de quadro justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1)-(HVR- L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4).
[00125] Ainda em outro aspecto, as sequências de quadro são deri- vadas de sequências de linhagens germinativas humanas.
[00126] Ainda em um aspecto adicional, uma ou mais das sequên- cias de quadro de cadeia pesada são as seguintes: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).
[00127] Ainda em um aspecto adicional, as sequências de quadro de cadeia leve são derivadas de uma sequência de cadeia leve lamb- da.
[00128] Ainda em um aspecto adicional, uma ou mais das sequên- cias de quadro de cadeia leve são as seguintes: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); LC-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).
[00129] Ainda em um aspecto específico adicional, o anticorpo ain- da inclui uma região constante humana ou de murino.
[00130] Ainda em um aspecto adicional, a região constante humana é selecionada do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4.
[00131] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta um anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região variável de cadeia pesada e cadeia leve, em que: (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMVWRQAPGKGLE
WVSSIYPSGGITFYADWKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARIKLGTVTTVDYWGQGTLV TVSS (SEQ ID NO: 44), e (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAP
KLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 45).
[00132] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe-
lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO:45; a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a se- quência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 45; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 45.
[00133] Em determinadas modalidades, a descrição fornece um an- ticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região variável de ca- deia pesada e cadeia leve, em que: (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGL
EVWSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAI YYCARIKLGTVTTVDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 46), e (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAP
KLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 47).
[00134] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se-
quência com a SEQ ID NO:47; a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a se- quência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 47; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 47.
[00135] Em outra modalidade, o anticorpo se liga a PD-L1 humana, de camundongo ou de macaco cinomolgo. Em um aspecto específico, o anticorpo é capaz de bloquear a interação entre PD-L1 humana, de camundongo ou de macaco cinomolgo e os respectivos receptores de PD-1 humana, de camundongo ou de macaco cinomolgo.
[00136] Em outra modalidade, o anticorpo se liga a PD-L1 humana com uma KD de 5x10-9 M ou menos, preferencialmente com uma KD de 2x10-9 M ou menos, e ainda mais preferido com uma KD de 1x10- 9 M ou menos.
[00137] Ainda em outra modalidade, a descrição refere-se a um an- ticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga a um epítopo funcional incluindo resíduos Y56 e D61 de PD-L1 humana.
[00138] Em um aspecto específico, o epítopo funcional ainda inclui E58, E60, Q66, R113 e M115 de PD-L1 humana.
[00139] Em um aspecto mais específico, o anticorpo se liga a um epítopo conformacional, incluindo resíduos 54-66 e 112-122 de PD-L1 humana.
[00140] Em determinadas modalidades, a descrição refere-se a um anticorpo anti-PD-L1, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que compete de forma cruzada para ligação a PD-L1 com um anticor- po de acordo com a descrição como descrito neste documento.
[00141] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta pro- teínas e polipeptídeos incluindo qualquer um dos anticorpos anti-PD- L1 descritos acima em combinação com pelo menos um veículo far- maceuticamente aceitável.
[00142] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta um ácido nucleico isolado codificando a polipeptídeo, ou uma sequência de região variável de cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-PD-L1, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como des-
crito neste documento. Em determinadas modalidades, a descrição fornece um ácido nucleico isolado codificando uma sequência de regi- ão variável de cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-PD- L1, em que: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3 sequência tendo pelo menos 80% de identidade de se- quência com SYIMM (SEQ ID NO: 35), SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36), e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente, ou (b) a cadeia leve inclui uma sequência HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 tendo pelo menos 80% de identidade de sequência com TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39), e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.
[00143] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100%.
[00144] Em um aspecto adicional, a sequência de ácido nucleico para a cadeia pesada é:
(SEQ ID NO: 48) e a sequência de ácido nucleico para a cadeia leve é: (SEQ ID NO: 49).
[00145] Anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos adicionais que po-
dem ser usados em um Armadilha anti-PD-L1/TGFβ são descritos na publicação de pedido de patente dos EUA US 2010/0203056. Em uma modalidade da descrição, a porção de anticorpo é YW243,55S70. Em outra modalidade da descrição, a porção de anticorpo é MPDL3289A.
[00146] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região va- riável de cadeia pesada e cadeia leve, em que: (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00147] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve compreen-
de SEQ ID NO: 13.
[00148] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região va- riável de cadeia pesada e cadeia leve, em que: (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00149] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 13; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 13.
[00150] Anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos adicionais que po- dem ser usados em um Armadilha anti-PD-L1/TGFβ são descritos na publicação de pedido de patente dos EUA US 2018/0334504.
[00151] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região va- riável de cadeia pesada e cadeia leve, em que (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00152] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 56; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 56.
[00153] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de região va-
riável de cadeia pesada e cadeia leve, em que (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00154] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 58; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 58.
[00155] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de cadeia pesada e de cadeia leve, em que (a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada:
(b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00156] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se-
quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 60; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 60.
[00157] Em determinadas modalidades, a descrição apresenta uma porção de anticorpo anti-PD-L1 incluindo uma sequência de cadeia pesada e de cadeia leve, em que
(a) a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: (b) a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve:
[00158] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 86% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 86% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 87% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 87% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 88% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 88% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 89% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 89% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 90% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe-
lo menos 91% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 91% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 92% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 92% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 93% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 93% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 94% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 94% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 95% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 96% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 96% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 97% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 97% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 98% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 98% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem pe- lo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem pelo menos 99% de identidade de se- quência com a SEQ ID NO: 62; ou a sequência de cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve compreen- de SEQ ID NO: 62.
[00159] Outros anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos adicionais que podem ser usados em um Armadilha anti-PD-L1/TGFβ são descri- tos na publicação de patente dos EUA US 7.943,.743.
[00160] Em uma modalidade da descrição, o anticorpo anti-PD-L1 é MDX-1105.
[00161] Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é MEDI-4736. Região Constante
[00162] As proteínas e peptídeos da descrição podem incluir uma região constante de uma imunoglobulina ou um fragmento, análogo, variante, mutante ou derivado da região constante. Em determinadas modalidades, a região constante é derivada de uma cadeia pesada de imunoglobulina humana, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, ou ou- tras classes. Em determinadas modalidades, a região constante inclui um domínio CH2. Em determinadas modalidades, a região constante inclui domínios CH2 e CH3 ou inclui dobradiça-CH2-CH3. Alternativa- mente, a região constante pode incluir toda ou uma porção da região de dobradiça, o domínio CH2 e/ou o domínio CH3.
[00163] Em uma modalidade, a região constante contém uma mu- tação que reduz a afinidade com um receptor Fc ou reduz a função efetora de Fc. Por exemplo, a região constante pode conter uma mu- tação que elimina o sítio de glicosilação dentro da região constante de uma cadeia pesada de IgG. Em algumas modalidades, a região cons- tante contém mutações, exclusões ou inserções em uma posição de aminoácido correspondente a Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 ou Pro331 de IgG1 (aminoácidos são numerados de acordo com a nomenclatura EU). Em uma modalidade particular, a região constante contém uma mutação em uma posição de aminoácido cor- respondente a Asn297 de IgG1. Em modalidades alternativas, a região constante contém mutações, exclusões, ou inserções em uma posição de aminoácido correspondente a Leu281, Leu282, Gly283, Gly284,
Asn344, ou Pro378 de IgG1.
[00164] Em algumas modalidades, a região constante contém um domínio CH2 derivado de uma cadeia pesada de IgG2 ou IgG4 huma- na. Preferencialmente, o domínio CH2 contém uma mutação que eli- mina o sítio de glicosilação dentro do domínio CH2. Em uma modali- dade, a mutação altera a asparagina dentro da sequência de aminoá- cido Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) dentro do domínio CH2 da cadeia pesada de IgG2 ou IgG4. Preferencialmente, a mutação altera a asparagina para uma glutamina. Alternativamente, a mutação altera ambas a fenilalanina e a asparagina dentro da sequência de aminoá- cido Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15). Em uma modalidade, a se- quência de aminoácido Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) é substituí- da por uma sequência de aminoácido Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16). A asparagina dentro da sequência de aminoácido Gln-Phe-Asn- Ser (SEQ ID NO: 15) corresponde a Asn297 de IgG1.
[00165] Em outra modalidade, a região constante inclui um domínio CH2 e pelo menos uma porção de uma região de dobradiça. A região de dobradiça pode ser derivada de uma cadeia pesada de imunoglo- bulina, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, ou outras classes. Prefe- rencialmente, a região de dobradiça é derivada de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 humana, ou outras classes adequadas. Mais preferencialmente, a região de dobradiça é derivada de uma cadeia pesada de IgG1 hu- mana. Em uma modalidade, a cisteína na sequência de aminoácido Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17) da região de dobradiça de IgG1 é alterada. Em determinadas modalidades, a sequência de ami- noácido Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17) é substituída por uma sequência de aminoácido Pro-Lys-Ser-Ser-Asp-Lys (SEQ ID NO: 18). Em determinadas modalidades, a região constante inclui um do- mínio CH2 derivado de um primeiro isótopo de anticorpo e uma região de dobradiça derivada de um segundo isótopo de anticorpo. Em de-
terminadas modalidades, o domínio CH2 é derivado de uma cadeia pesada de IgG2 ou IgG4 humana, enquanto a região de dobradiça é derivada de uma cadeia pesada de IgG1 humana alterada.
[00166] A alteração de aminoácidos próximo à junção da porção Fc e e da porção não Fc pode significativamente aumentar a meia-vida sérica da proteína de fusão Fc (Publicação PCT WO 0158957, a des- crição da qual é aqui incorporada por referência). Por conseguinte, a região de junção de uma proteína ou polipeptídeo da presente descri- ção pode conter alterações que, em relação às sequências de ocor- rência natural de uma cadeia pesada de imunoglobulina e eritropoieti- na, preferencialmente encontram-se dentro de cerca de 10 aminoáci- dos do ponto de junção. Essas alterações de aminoácido podem cau- sar um aumento na hidrofobicidade. Em uma modalidade, a região constante é derivada de uma sequência de IgG em que o resíduo de lisina C-terminal é substituído. Preferencialmente, a lisina C-terminal de uma sequência de IgG é substituída por um aminoácido não lisina, tal como alanina ou leucina, para aumentar ainda mais a meia-vida sérica. Em outra modalidade, a região constante é derivada de uma sequência de IgG em que a sequência de aminoácido Leu-Ser-Leu- Ser (SEQ ID NO: 19) próximo ao terminal C da região constante é alte- rada para eliminar potenciais epítopos de célula T juncionais. Por exemplo, em uma modalidade, a sequência de aminoácido Leu-Ser- Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) é substituída por uma sequência de aminoá- cido Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20). Em outras modalidades, os aminoácidos dentro do segmento Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) são substituídos por outros aminoácidos, tais como glicina ou prolina. Métodos detalhados de gerar substituições de aminoácido do segmen- to Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) próximo ao terminal C de uma IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, ou outra molécula da classe de imunoglobuli- na foram descritos na Publicação de Patente dos EUA Nº.
20030166877, a descrição da qual é aqui incorporada por referência.
[00167] Regiões de dobradiça adequadas para a presente descri- ção podem ser derivadas de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, e outras classes de imunoglobulina. A região de dobradiça de IgG1 tem três cisteínas, duas das quais estão envolvidas em ligações dissulfeto entre as duas cadeias pesadas da imunoglobulina. Essas mesmas cisteínas permi- tem formação de ligação dissulfeto eficiente e consistente entre por- ções Fc. Portanto, uma região de dobradiça da presente descrição é derivada de IgG1, por exemplo, IgG1 humana. Em algumas modalida- des, a primeira cisteína dentro da região de dobradiça de IgG1 huma- na é mutada em outro aminoácido, preferencialmente serina. A região de dobradiça de isótipo de IgG2 tem quatro ligações dissulfeto que tendem a promover oligomerização e possivelmente ligação dissulfeto incorreta durante a secreção em sistemas recombinantes. Uma região de dobradiça adequada pode ser derivada de uma dobradiça de IgG2; as duas primeiras cisteínas são, cada uma, preferencialmente muta- das em outro aminoácido. A região de dobradiça de IgG4 é conhecida por formar ligações intercadeia dissulfeto de forma ineficiente. Porém, uma região de dobradiça adequada para a presente descrição pode ser derivada da região de dobradiça de IgG4, preferencialmente con- tendo uma mutação que potencializa a correta formação de ligações dissulfeto entre porções derivadas de cadeia pesada (Angal S, et al. (1993) Mol. Immunol., 30:105-8).
[00168] De acordo com a presente descrição, a região constante pode conter domínios CH2 e/ou CH3 e uma região de dobradiça que são derivados de diferentes isótipos de anticorpo, isto é, uma região constante híbrida. Por exemplo, em uma modalidade, a região cons- tante contém domínios CH2 e/ou CH3 derivados de IgG2 ou IgG4 e uma região de dobradiça mutante derivada de IgG1. Alternativamente, uma região de dobradiça mutante de outra subclasse de IgG é usada em uma região constante híbrida. Por exemplo, uma forma mutante da dobradiça de IgG4 que permite ligação dissulfete eficiente entre as du- as cadeias pesadas pode ser usada. Uma dobradiça mutante pode também ser derivada de uma dobradiça de IgG2 em que as duas pri- meiras cisteínas são, cada uma, mutadas em outro aminoácido. O con- junto de tais regiões constantes híbridas foi descrito na Publicação de Patente dos EUA Nº. 20030044423, a descrição da qual é aqui incor- porada por referência.
[00169] De acordo com a presente descrição, a região constante pode conter uma ou mais mutações descritas neste documento. As combinações de mutações na porção Fc podem ter efeitos aditivos ou sinérgicos na meia-vida sérica prolongada e elevada potência in vivo da molécula bifuncional. Dessa forma, em uma modalidade exemplifi- cativa, a região constante pode conter (i) uma região derivada de uma sequência de IgG em que a sequência de aminoácido Leu-Ser-Leu- Ser (SEQ ID NO: 19) é substituída por uma sequência de aminoácido Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20); (ii) um resíduo de alanina C-terminal em vez de lisina; (iii) um domínio CH2 e uma região de dobradiça que são derivados de diferentes isótipos de anticorpo, por exemplo, um domínio CH2 de IgG2 e uma região de dobradiça de IgG1 alterada; e (iv) uma mutação que elimina o sítio de glicosilação dentro do domínio CH2 derivado de IgG2, por exemplo, uma sequência de aminoácido Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16) em vez da sequência de aminoácido Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) dentro do domínio CH2 derivado de IgG2. Fragmentos de Anticorpo
[00170] As proteínas e polipeptídeos da descrição podem também incluir fragmentos de ligação a antígeno de anticorpos. Fragmentos de anticorpo exemplificativos incluem scFv, Fv, Fab, F(ab’)2, e fragmentos VHH de domínio único, tais como aqueles de origem em camelídeo.
[00171] Fragmentos de anticorpo de cadeia simples, também co- nhecidos como anticorpos de cadeia simples (scFvs), são polipeptí- deos recombinantes que tipicamente ligam antígenos ou receptores; esses fragmentos contêm pelo menos um fragmento de uma sequên- cia de aminoácido de cadeia pesada variável de anticorpo (VH) preso a pelo menos um fragmento de uma sequência de cadeia leve variável de anticorpo (VL) com ou sem um ou mais ligantes de interconexão. Esse ligante pode ser um peptídeo curto e flexível selecionado para garantir que o dobramento tridimensional adequado dos domínios VL e VH ocorra uma vez que eles estejam ligados de modo a manter a es- pecificidade de ligação da molécula alvo de todo o anticorpo do qual o fragmento de anticorpo de cadeia simples é derivado. Geralmente, o terminal carboxil da sequência VL ou VH é covalentemente ligado por tal ligante de peptídeo ao terminal de aminoácido de uma sequência de VL e V complementar. Fragmentos de anticorpo de cadeia simples podem ser gerados por clonagem molecular, biblioteca de exibição de fago de anticorpo ou técnicas similares. Essas proteínas podem ser produzidas tanto em células eucarióticas quanto em células procarióti- cas, incluindo bactérias.
[00172] Fragmentos de anticorpo de cadeia simples contêm se- quências de aminoácido tendo pelo menos uma das regiões variáveis ou CDRs dos anticorpos inteiros descritos nesta especificação, mas não possuem alguns ou todos os domínios constantes desses anticor- pos. Esses domínios constantes não são necessários para ligação a antígeno, mas constituem uma parte importante da estrutura dos anti- corpos inteiros. Fragmentos de anticorpo de cadeia simples podem, portanto, superar alguns dos problemas associados ao uso de anticor- pos contendo parte ou todo um domínio constante. Por exemplo, frag- mentos de anticorpo de cadeia simples tendem a ser livres de intera- ções indesejadas entre moléculas biológicas e a região constante de cadeia pesada, ou outra atividade biológica indesejada. Além disso, fragmentos de anticorpo de cadeia simples são consideravelmente menores do que os anticorpos inteiros e podem, portanto, ter maior permeabilidade capilar do que os anticorpos inteiros, permitindo que fragmentos de anticorpo de cadeia simples localizem e se liguem a sítios de ligação a antígeno alvo de forma mais eficiente. Além disso, fragmentos de anticorpo podem ser produzidos em escala relativamen- te grande em células procarióticas, facilitando assim sua produção. Além disso, o tamanho relativamente pequeno dos fragmentos de anti- corpo de cadeia simples os torna menos prováveis do que os anticor- pos inteiros de provocar uma resposta imune em um receptor.
[00173] Fragmentos de anticorpo que têm as mesmas característi- cas de ligação ou características de ligação comparáveis àquelas do anticorpo inteiro também podem estar presentes. Tais fragmentos po- dem conter um ou ambos os fragmentos Fab ou os fragmentos F(ab’)2. Os fragmentos de anticorpo podem conter todas as seis CDRs do anti- corpo inteiro, embora os fragmentos contendo menos do que todas essas regiões, tal como três, quatro ou cinco CDRs, também sejam funcionais. Composições Farmacêuticas
[00174] A presente descrição também apresenta composições far- macêuticas que contêm uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína aqui descrita. A composição pode ser formulada para uso em uma variedade de sistemas de distribuição de fármaco. Um ou mais excipientes ou veículos fisiologicamente aceitáveis podem tam- bém ser incluídos na composição para formulação adequada. Formu- lações adequadas para uso na presente descrição são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Filadélfia, Pa., 17ª edição, 1985. Para uma breve revisão dos métodos de entrega de fármaco, ver, por exemplo, Langer (Science 249:1527-
1533, 1990).
[00175] Em um aspecto, a presente descrição fornece uma formu- lação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) que inclui 500 mg a 2400 mg de uma proteína incluindo um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, o primeiro polipeptí- deo inclui: (a) pelo menos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Pro- gramada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), o segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD-L1, e a cadeia pesada do primeiro poli- peptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combina- das, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
[00176] Em determinadas modalidades, um produto de proteína da presente descrição inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determi- nadas modalidades, um produto de proteína da presente descrição inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40.
[00177] Em determinadas modalidades da presente descrição, a formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um méto- do de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expres- são de PD-L1) pode incluir dose de cerca de 500 mg a cerca de 2400 mg (por exemplo, cerca de 500 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1200 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1100 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 900 mg, cerca de 500 mg a cerca de 800 mg, cerca de 500 mg a cerca de 700 mg, cerca de 500 mg a cerca de 600 mg, cerca de 600 mg a 2400 mg, cerca de 700 mg a 2400 mg, cerca de 800 mg a 2400 mg, cerca de 900 mg a 2400 mg, cerca de 1000 mg a 2400 mg, cerca de 1100 mg a 2400 mg, cerca de 1200 mg a 2400 mg, cerca de 1300 mg a 2400 mg, cerca de 1400 mg a 2400 mg, cerca de 1500 mg a 2400 mg, cerca de 1600 mg a 2400 mg, cerca de 1700 mg a 2400 mg, cerca de 1800 mg a 2400 mg, cerca de 1900 mg a 2400 mg, cerca de 2000 mg a 2400 mg, cerca de 2100 mg a 2400 mg, cerca de 2200 mg a 2400 mg, ou cerca de 2300 mg a 2400 mg) de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo po- lipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir dose de cerca de 500 a cerca de 2000 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD- L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptí- deo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1)). Em de- terminadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intrave- noso pode incluir dose de cerca de 500 mg de um produto de proteína da presente descrição com um primeiro polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determi- nadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir 500 mg dose de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir dose de cerca de 1200 mg de um produto de proteína da presente descrição com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação de entre- ga de fármaco intravenoso pode incluir dose de 1200 mg de uma pro- teína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1)). Em determina- das modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir dose de cerca de 2400 mg de um produto de proteína da presente descrição com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir dose de 2400 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso pode incluir dose de 2400 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD- L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo compreen- dendo as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo compreendendo as sequências de aminoá- cido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40)).
[00178] Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento pré- vio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) pode incluir cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de
3000 mg, cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg, ou cerca de 3000 mg) de um produto de proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ). Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um mé- todo de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta ex- pressão de PD-L1) pode incluir cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de
2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg, ou cerca de 3000 mg) de um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um pri- meiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreen- de as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40.
[00179] Em determinadas modalidades, a formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento pré- vio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) pode incluir cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cerca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cerca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg, cerca de 825 mg, cerca de 850 mg, cerca de 875 mg, cer- ca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1025 mg, cerca de 1050 mg, cerca de 1075 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1125 mg, cerca de 1150 mg, cerca de 1175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1225 mg, cerca de 1250 mg, cerca de 1275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1325 mg, cerca de 1350 mg, cerca de 1375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1425 mg, cerca de 1450 mg, cerca de 1475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1525 mg, cerca de 1550 mg, cerca de 1575 mg, cerca de
1600 mg, cerca de 1625 mg, cerca de 1650 mg, cerca de 1675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1725 mg, cerca de 1750 mg, cerca de 1775 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1825 mg, cerca de 1850 mg, cerca de 1875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1925 mg, cerca de 1950 mg, cerca de 1975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2025 mg, cerca de 2050 mg, cerca de 2075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2125 mg, cerca de 2150 mg, cerca de 2175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2225 mg, cerca de 2250 mg, cerca de 2275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2325 mg, cerca de 2350 mg, cerca de 2375 mg, ou cerca de 2400 mg da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ compreendendo um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40).
[00180] A formulação de entrega de fármaco intravenoso da pre- sente descrição para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento pré- vio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) pode estar contida em uma bolsa, uma caneta ou uma seringa. Em determinadas modalidades, a bolsa pode ser conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha. Em determinadas modalidades, a formula- ção pode ser uma formulação liofilizada ou uma formulação líquida. Em determinadas modalidades, a formulação pode ser criodessecada (liofilizada) e contida em cerca de 12-60 frascos. Em determinadas modalidades, a formulação pode ser criodessecada e cerca de 45 mg da formulação criodessecada pode estar contida em um frasco. Em determinadas modalidades, os cerca de 40 mg a cerca de 100 mg de formulação criodessecada pode estar contida em um frasco. Em de- terminadas modalidades, formulação criodessecada de 12, 27, ou 45 frascos são combinadas para obter uma dose terapêutica da proteína na formulação de fármaco intravenoso.
Em determinadas modalida- des, a formulação pode ser uma formulação líquida de um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de ami- noácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40, e armazenada como cerca de 250 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco (por exemplo, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1900 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1800 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1700 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1600 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1500 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1400 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1300 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1200 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1100 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1000 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 900 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 800 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 700 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 600 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 500 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 400 mg/frasco, cerca de 250 mg/frasco a cerca de 300 mg/frasco, cerca de 300 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 400 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 500 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 600 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 700 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 800 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 900 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1000 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1100 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1200 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1300 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1400 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1500 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1600 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1700 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, cerca de 1800 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, ou cerca de 1900 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco). Em determinadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada como cerca de 600 mg/frasco. Em determinadas modalidades, a formulação pode ser uma formula- ção líquida e armazenada como cerca de 1200 mg/frasco. Em deter- minadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada como cerca de 1800 mg/frasco. Em determinadas mo- dalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazena- da como cerca de 250 mg/frasco.
[00181] Esta descrição fornece uma formulação farmacêutica aquo- sa líquida incluindo uma quantidade terapeuticamente eficaz da prote- ína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ) em uma solução tamponada formando uma formulação para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paci- ente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1).
[00182] Essas composições para uso em um método de tratar cân- cer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tra- tamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) podem ser esterilizadas por técnicas convencionais de esterilização, ou podem ser esterilizadas por filtração. As soluções aquosas resul- tantes podem ser embaladas para uso como estão, ou liofilizadas, a preparação liofilizada sendo combinada com um veículo aquoso estéril antes da administração. O pH das preparações será tipicamente entre 3 e 11, mais preferencialmente entre 5 e 9 ou entre 6 e 8, e mais pre-
ferencialmente entre 7 e 8, tal como 7 a 7,5. As composições resultan- tes em forma sólida podem ser embaladas em múltiplas unidades de dose única, cada uma contendo uma quantidade fixa do agente ou agentes mencionados acima. A composição em forma sólida pode também ser embalada em um recipiente para quantidade flexível.
[00183] Em determinadas modalidades, a presente descrição forne- ce para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tu- moral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exem- plo, NSCLC com alta expressão de PD-L1), uma formulação com uma vida de prateleira estendida incluindo uma proteína da presente des- crição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, inclu- indo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1)), em combinação com manitol, mono- hidrato de ácido cítrico, citrato de sódio, di-hidrato de fosfato dissódico, di-hidrogenofosfato di-hidrato de de sódio, cloreto de sódio, polissorba- to 80, água e hidróxido de sódio.
[00184] Em determinadas modalidades, uma formulação aquosa para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) é preparada incluindo uma pro- teína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptí- deo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40) em uma solução tamponada com pH. O tampão desta invenção pode ter um pH variando de cerca de 4 a cerca de 8, por exemplo, de cerca de 4 a cerca de 8, de cerca de 4,5 a cerca de 8, de cerca de 5 a cerca de 8, de cerca de 5,5 a cerca de 8, de cerca de 6 a cerca de 8, de cerca de 6,5 a cerca de 8, de cerca de 7 a cerca de 8, de cerca de 7,5 a cerca de 8, de cerca de 4 a cerca de 7,5, de cerca de 4,5 a cerca de 7,5, de cerca de 5 a cerca de cerca de 7,5, de cerca de 5,5 a cerca de 7,5, de cerca de 6 a cerca de 7,5, de cerca de 6,5 a cerca de 7,5, de cerca de 4 a cerca de 7, de cerca de 4,5 a cerca de 7, de cerca de 5 a cerca de 7, de cerca de 5,5 a cerca de 7, de cerca de 6 a cerca de 7, de cerca de 4 a cerca de 6,5, de cerca de 4,5 a cerca de 6,5, de cerca de 5 a cerca de 6,5, de cerca de 5,5 a cerca de 6,5, de cerca de 4 a cerca de 6,0, de cerca de 4,5 a cerca de 6,0, de cerca de 5 a cerca de 6, ou de cerca de 4,8 a cerca de 5,5, ou pode ter um pH de cerca de 5,0 a cerca de 5,2. Faixas intermediárias aos pHs cita- dos acima são também destinadas a fazer parte da descrição. Por exemplo, faixas de valores usando uma combinação de qualquer um dos valores citados acima como limites superiores e/ou inferiores de- vem ser incluídas. Exemplos de tampões que irão controlar o pH den- tro desta faixa incluem acetato (por exemplo, acetato de sódio), succi- nato (tal como succinato de sódio), gluconato, histidina, citrato e outros tampões de ácido orgânico.
[00185] Em determinadas modalidades, a formulação para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paci- ente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) inclui um sistema de tampão que contém citrato e fosfato para manter o pH em uma faixa de cerca de 4 a cerca de 8. Em determinadas modalidades, a faixa de pH pode ser de cerca de 4,5 a cerca de 6,0, ou de cerca de pH 4,8 a cerca de 5,5, ou em uma faixa de pH de cerca de 5,0 a cerca de 5,2. Em determinadas modalidades, o sistema de tampão inclui monohidrato de ácido cítrico, citrato de sódio, di-hidrato fosfato dissódico, e/ou di-hidrogenofosfato di-hidrato de sódio. Em determinadas modalidades, o sistema de tam- pão inclui cerca de 1,3 mg/ml de ácido cítrico (por exemplo, 1,305 mg/ml), cerca de 0,3 mg/ml de citrato de sódio (por exemplo, 0,305 mg/ml), cerca de 1,5 mg/ml de di-hidrato fosfato dissódico (por exem- plo, 1,53 mg/ml), cerca de 0,9 mg/ml de di-hidrogenofosfato di-hidrato de sódio (por exemplo, 0,86), e cerca de 6,2 mg/ml de cloreto de sódio (por exemplo, 6,165 mg/ml). Em determinadas modalidades, o sistema de tampão inclui cerca de 1-1,5 mg/ml de ácido cítrico, cerca de 0,25 a cerca de 0,5 mg/ml de citrato de sódio, cerca de 1,25 a cerca de 1,75 mg/ml de di-hidrato fosfato dissódico, cerca de 0,7 a cerca de 1,1 mg/ml de di-hidrogenofosfato di-hidrato de sódio, e 6,0 to 6,4 mg/ml de cloreto de sódio. Em determinadas modalidades, o pH da formulação é ajustado com hidróxido de sódio.
[00186] Um poliol, que atua como um tonificante e pode estabilizar o anticorpo, também pode ser incluído na formulação. O poliol é adici- onado à formulação em uma quantidade que pode variar em relação à isotonicidade desejada da formulação. Em determinadas modalidades, a formulação aquosa pode ser isotônica. A quantidade de poliol adici- onada pode também ser alterada em relação ao peso molecular do poliol. Por exemplo, uma menor quantidade de um monossacarídeo (por exemplo, manitol) pode ser adicionada, em comparação com um dissacarídeo (tal como trealose). Em certas modalidades, o poliol que pode ser usado na formulação como um agente de tonicidade é mani- tol. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser cerca de 5 a cerca de 20 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser cerca de 7,5 a cerca de 15 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser cerca de 10 a cerca de 14 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser cerca de 12 mg/ml. Em determina- das modalidades, o poliol sorbitol pode ser incluído na formulação.
[00187] Um detergente ou tensoativo também pode ser adicionado à formulação. Detergentes exemplificativos incluem detergentes não iônicos, tais como polissorbatos (por exemplo, polissorbatos 20, 80 etc.) ou poloxâmeros (por exemplo, poloxâmero 188). A quantidade de detergente adicionado é tal que reduz a agregação do anticorpo formu- lado e/ou minimiza a formação de particulados na formulação e/ou re- duz a adsorção. Em determinadas modalidades, a formulação pode incluir um tensoativo que é um polissorbato. Em determinadas modali- dades, a formulação pode conter o detergente polissorbato 80 ou Tween 80. Tween 80 é um termo usado para descrever monooleato de polioxietileno (20) sorbitano (ver Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4ª edição, 1996). Em determinadas modali- dades, a formulação pode conter entre cerca de 0,1 mg/ml e cerca de 10 mg/ml de polissorbato 80, ou entre cerca de 0,5 mg/ml e cerca de 5 mg/ml. Em determinadas modalidades, cerca de 0,1% de polissorbato 80 pode ser adicionado na formulação. Formulação Liofilizada
[00188] A formulação liofilizada para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) da presente descrição inclui a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e um lioprotetor. O lioprotetor pode ser açúcar, por exemplo, dissacarí- deos. Em determinadas modalidades, o licoprotetor pode ser sacarose ou maltose. A formulação liofilizada também pode incluir um ou mais de um agente tamponante, um tensoativo, um agente de volume e/ou um conservante.
[00189] A quantidade de sacarose ou maltose útil para estabilização do produto de fármaco liofilizado pode ser em uma razão em peso de pelo menos 1:2 proteína para sacarose ou maltose. Em determinadas modalidades, a razão em peso de proteína para sacarose ou maltose pode ser de 1:2 a 1:5.
[00190] Em determinadas modalidades, o pH da formulação, antes da liofilização, pode ser definido pela adição de uma base e/ou ácido farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, o ácido farmaceuticamente aceitável pode ser ácido clorídrico. Em determina- das modalidades, a base farmaceuticamente aceitável pode ser hidró- xido de sódio.
[00191] Antes da liofilização, o pH da solução contendo a proteína da presente descrição pode ser ajustado entre cerca de 6 a cerca de
8. Em determinadas modalidades, a faixa de pH para o produto de fármaco liofilizado pode ser de cerca de 7 a cerca de 8.
[00192] Em determinadas modalidades, um sal ou componentes de tampão podem ser adicionados em uma quantidade de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM. Os sais e/ou tampões são farmaceuticamente aceitáveis e são derivados de vários ácidos conhecidos (inorgânicos e orgânicos) com metais ou aminas "formadores de bases". Em determi- nadas modalidades, o tampão pode ser tampão de fosfato. Em deter- minadas modalidades, o tampão pode ser glicinato, carbonato, tam- pões de citrato, em cujo caso, íons de sódio, potássio ou amônio po- dem servir como contraíons.
[00193] Em determinadas modalidades, um "agente de volume" po- de ser adicionado. Um "agente de volume" é um composto que adicio- na massa a uma mistura liofilizada e contribui para a estrutura física da torta liofilizada (por exemplo, facilita a produção de uma torta liofilizada essencialmente uniforme que mantém uma estrutura de poros aber- tos). Agentes de volume ilustrativos incluem manitol, glicina, polietile- noglicol e sorbitol. As formulações liofilizadas da presente invenção podem conter tais agentes de volume.
[00194] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado a for- mulações aqui para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conser-
vante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação mul- tiuso (dose múltipla).
[00195] Em determinadas modalidades, o produto de fármaco liofili- zado para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) pode ser constituído com um veículo aquoso. O veículo aquoso de interesse aqui é aquele que é farmaceuticamente aceitável (por exemplo, seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida, após a liofilização. Diluentes ilustrativos inclu- em água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada com pH (por exemplo solução salina tamponada com fosfato), solução salina estéril, solução de Ringer ou solução de dextrose.
[00196] Em determinadas modalidades, o produto de fármaco liofili- zado da descrição atual é reconstituído com Água Estéril para Injeção, USP (SWFI) ou 0,9% de Injeção de Cloreto de Sódio, USP. Durante a reconstituição, o pó liofilizado se dissolve em uma solução.
[00197] Em determinadas modalidades, o produto de proteína liofili- zado da presente descrição é constituído para cerca de 4,5 ml de água para injeção e diluído com 0,9% de solução salina (solução de cloreto de sódio). Formulação Líquida
[00198] Em modalidades, um produto de proteína da presente des- crição é formulado como uma formulação líquida para uso em um mé- todo de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta ex- pressão de PD-L1). A formulação líquida pode ser apresentada a uma concentração de 10 mg/ml em um frasco USP/Ph Eur tipo I 50R fecha- do com uma rolha de borracha e selado com um fecho de alumínio crimpado.
A rolha pode ser feita de elastômero de acordo com USP e Ph Eur.
Em determinadas modalidades, os frascos podem ser preen- chidos com cerca de 61,2 ml da solução de produto de proteína de modo a permitir um volume extraível de 60 ml.
Em determinadas mo- dalidades, a formulação líquida pode ser diluída com 0,9% de solução salina.
Em determinadas modalidades, os frascos podem conter cerca de 61,2 ml da solução de produto de proteína (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo po- lipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1)) de cerca de 20 mg/ml a cerca de 50 mg/ml (por exemplo, cerca de 20 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 30 mg/ml, cerca de 35 mg/ml, cer- ca de 40 mg/ml, cerca de 45 mg/ml ou cerca de 50 mg/ml) a fim de permitir um volume extraível de 60 ml para entregar cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de
2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg, ou cerca de 3000 mg) do produ- to de proteína (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de ami- noácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40)) a um indivíduo.
[00199] Em determinadas modalidades, os frascos podem conter cerca de 61,2 ml da solução de produto de proteína (produto de prote- ína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoá- cido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40) de cerca de 20 mg/ml a cerca de 50 mg/ml (por exemplo, cerca de 20 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 30 mg/ml, cerca de 35 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 45 mg/ml ou cerca de 50 mg/ml) a fim de permitir um volume extraível de 60 ml para entregar cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg, ou cerca de 3000 mg) do produ- to de proteína a um indivíduo sem tratamento prévio.
[00200] Em determinadas modalidades, a formulação líquida para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) da descrição pode ser preparada como uma solução com concentração de 10 mg/ml em combinação com um açúcar em níveis estabilizantes. Em determinadas modalidades, a for- mulação líquida pode ser preparada em um veículo aquoso. Em de- terminadas modalidades, um estabilizador pode ser adicionado em uma quantidade não superior à que pode resultar em uma viscosidade indesejável ou inadequada para administração intravenosa. Em deter- minadas modalidades, o açúcar pode ser dissacarídeos, por exemplo, sacarose. Em determinadas modalidades, a formulação líquida tam- bém pode incluir um ou mais de um agente tamponante, um tensoativo e um conservante.
[00201] Em determinadas modalidades, o pH da formulação líquida pode ser definido pela adição de uma base e/ou ácido farmaceutica- mente aceitável. Em determinadas modalidades, o ácido farmaceuti- camente aceitável pode ser ácido clorídrico. Em determinadas modali- dades, a base pode ser hidróxido de sódio.
[00202] Além da agregação, a desamidação é uma variante de pro- duto comum de peptídeos e proteínas que pode ocorrer durante a fer- mentação, colheita/clarificação celular, purificação, armazenamento de substância de fármaco/produto de fármaco e durante a análise de amostras. A desamidação é a perda de NH3 de uma proteína formando um intermediário de succinimida que pode sofrer hidrólise. O interme- diário de succinimida resulta em uma diminuição de massa de 17 u do peptídeo de origem. A hidrólise subsequente resulta em um aumento de massa de 18 u. O isolamento do intermediário de succinimida é di- fícil devido à instabilidade em condições aquosas. Dessa forma, a de- samidação é tipicamente detectável como um aumento de massa de 1 u. A desamidação de uma asparagina resulta em ácido aspártico ou isoaspártico. Os parâmetros que afetam a taxa de desamidação inclu- em pH, temperatura, constante dielétrica do solvente, força iônica, se-
quência primária, conformação local de polipeptídeo e estrutura terciá- ria. Os resíduos de aminoácido adjacentes a Asn na cadeia de peptí- deo afetam as taxas de desamidação. Gly e Ser após Asn em sequên- cias de proteínas resultam em uma maior susceptibilidade à desami- dação.
[00203] Em determinadas modalidades, a formulação líquida para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) da presente descrição pode ser preser- vada em condições de pH e umidade para evitar a desaminação do produto de proteína.
[00204] O veículo aquoso de interesse aqui é aquele que é farma- ceuticamente aceitável (seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Os veículos ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada com pH (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), solução salina estéril, solução de Ringer ou solução de dextrose.
[00205] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado a for- mulações aqui para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conser- vante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação mul- tiuso (dose múltipla).
[00206] As formulações intravenosas (IV) podem ser a via de admi- nistração preferida em casos particulares, tal como quando um pacien- te está no hospital após o transplante recebendo todos as fármacos por via IV. Em determinadas modalidades, a formulação líquida é dilu- ída com solução de cloreto de sódio a 0,9% antes da administração. Em determinadas modalidades, o produto de fármaco diluído para in- jeção é isotônico e adequado para administração por infusão intrave- nosa.
[00207] Em determinadas modalidades, um sal ou componentes de tampão podem ser adicionados em uma quantidade de 10 mM - 200 mM. Os sais e/ou tampões são farmaceuticamente aceitáveis e são derivados de vários ácidos conhecidos (inorgânicos e orgânicos) com metais ou aminas "formadores de bases". Em determinadas modalida- des, o tampão pode ser tampão de fosfato. Em determinadas modali- dades, o tampão pode ser glicinato, carbonato, tampões de citrato, em cujo caso, íons de sódio, potássio ou amônio podem servir como con- traíons.
[00208] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado às formulações aqui para reduzir a ação bacteriana. A adição de um con- servante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação multiuso (dose múltipla).
[00209] O veículo aquoso de interesse aqui é aquele que é farma- ceuticamente aceitável (seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Ve- ículos ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bac- teriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada com pH (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), solução salina esté- ril, solução de Ringer ou solução de dextrose.
[00210] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado a for- mulações aqui para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conser- vante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação mul- tiuso (dose múltipla). Método de Tratar Câncer ou Inibir Crescimento Tumoral
[00211] Em um aspecto, a presente descrição fornece um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um indivíduo sem tratamento prévio em necessidade do mesmo, o método incluindo ad- ministrar ao indivíduo uma dose de pelo menos 500 mg de uma prote- ína incluindo um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo. O primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo menos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um frag- mento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Cres- cimento (TGFβ). O segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma regi- ão variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD-L1, e a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antí- geno que liga PD-L1.
[00212] Em determinadas modalidades, o método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral da presente descrição envolve adminis- trar a um indivíduo sem tratamento prévio uma proteína incluindo dois peptídeos, em que o primeiro polipeptídeo inclui a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 3, e o segundo polipeptídeo inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a proteína é uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ.
[00213] Em uma modalidade, o indivíduo sem tratamento prévio tra- tado de acordo com os métodos descritos neste documento não rece- beram terapia prévia com a proteína bifuncional da presente descrição (molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ). Em algumas modalidades, o paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os méto- dos da presente descrição não tem uma mutação selecionada de mu- tação de sensibilização (ativação) de receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), translocação de quinase de linfoma anaplásico (ALK), mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E.
[00214] Em determinadas modalidades, o método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral da presente descrição envolve adminis- trar a um indivíduo sem tratamento prévio uma proteína (por exemplo,
uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um pri- meiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreen- de as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40)) em uma dose de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg,
cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg, ou cerca de 3000 mg). Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são adminis- trados a um indivíduo sem tratamento prévio uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg de molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo sem tratamento prévio uma vez a cada três semanas. Em determina- das modalidades, cerca de 1200 mg de um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo sem tratamento prévio uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg de um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo sem tratamento prévio uma vez a cada três semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg de um produto de proteína com um primeiro poli- peptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40 são administra- dos a um indivíduo sem tratamento prévio uma vez a cada três sema- nas.
[00215] Em determinadas modalidades, a dose administrada a um indivíduo sem tratamento prévio pode ser cerca de 500 mg, cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cerca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cer- ca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg,
cerca de 825 mg, cerca de 850 mg, cerca de 875 mg, cerca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1025 mg, cerca de 1050 mg, cerca de 1075 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1125 mg, cerca de 1150 mg, cerca de 1175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1225 mg, cerca de 1250 mg, cerca de 1275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1325 mg, cerca de 1350 mg, cerca de 1375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1425 mg, cerca de 1450 mg, cerca de 1475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1525 mg, cerca de 1550 mg, cerca de 1575 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1625 mg, cerca de 1650 mg, cerca de 1675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1725 mg, cerca de 1750 mg, cerca de 1775 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1825 mg, cerca de 1850 mg, 1875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1925 mg, cerca de 1950 mg, cerca de 1975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2025 mg, cerca de 2050 mg, cerca de 2075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2125 mg, cerca de 2150 mg, cerca de 2175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2225 mg, cerca de 2250 mg, cerca de 2275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2325 mg, cerca de 2350 mg, cerca de 2375 mg, ou cerca de 2400 mg.
[00216] Em determinadas modalidades, a dose administrada a um indivíduo sem tratamento prévio pode ser administrada uma vez a ca- da duas semanas. Em determinadas modalidades, a dose administra- da a um indivíduo sem tratamento prévio pode ser administrada uma vez a cada três semanas. Em determinadas modalidades, a proteína pode ser administrada por administração intravenosa, por exemplo, com uma bolsa pré-preenchida, uma caneta pré-preenchida ou uma seringa pré-preenchida. Em determinadas modalidades, a proteína é administrada intravenosamente a partir de uma bolsa de 250 ml de so- lução salina, e a infusão intravenosa pode ser por cerca de uma hora (por exemplo, 50 a 80 minutos). Em determinadas modalidades, a bol- sa é conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
[00217] Em algumas modalidades, o NSCLC apresenta histologia escamosa ou não escamosa. Por exemplo, em uma modalidade, o método trata squamous NSCLC. Em algumas modalidades, o método trata NSCLC não escamoso.
[00218] Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expres- são de PD-L1) são tratados administrando intravenosamente pelo me- nos 500 mg (por exemplo, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, ou more) de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptí- deo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um se- gundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expressão de PD-L1) são tratados administrando intravenosamente pelo menos 500 mg (por exemplo, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, ou more) de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40.
[00219] Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expres- são de PD-L1) são tratados administrando intravenosamente cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 2400 mg, ou cerca de 2300 mg a cerca de 2400 mg) de armadilha anti- PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tra- tamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expressão de PD-L1) são tratados admi- nistrando intravenosamente cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 2400 mg, ou cerca de 2300 mg a cerca de 2400 mg) de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que com- preende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40.
[00220] Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expressão de PD-L1) são tratados administrando intravenosamente armadilha anti- PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com NSCLC avançado sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) com alta expressão de PD-L1) são tratados administrando intravenosamente armadilha anti- PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 2400 mg uma vez a cada 3 semanas.
[00221] Em determinadas modalidades, o câncer a ser tratado é PD-L1 positivo. Por exemplo, em determinadas modalidades, o câncer a ser tratado apresenta alta expressão de PD-L1 ("alto PD-L1" ou "PD- L1 alto").
[00222] Métodos de detecção de um biomarcador, tal como PD-L1, por exemplo, em um câncer ou tumor, são rotineiros na técnica e aqui contemplados. Exemplos não limitantes incluem imuno-histoquímica, imunofluorescência e classificação de células ativadas por fluorescên- cia (FACS). Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com PD-L1 alto, NSCLC avançado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso avançado) sem tratamento prévio são tratados por adminis- tração intravenosa de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de pelo menos 500 mg. Em algumas modalidades, indivíduos ou pacien- tes com PD-L1 alto, NSCLC avançado (por exemplo, NSCLC escamo- so ou não escamoso avançado) sem tratamento prévio são tratados por administração intravenosa de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com PD-L1 alto, NSCLC avan- çado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso avançado) sem tratamento prévio são tratados por administração intravenosa de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 2400 mg uma vez a cada 3 semanas.
[00223] Em algumas modalidades, o indivíduo ou paciente sem tra- tamento prévio a ser tratado não tem uma mutação selecionada de mutação de sensibilização de EGFR, translocação de ALK, mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E. Por exemplo, em algumas mo- dalidades, indivíduos ou pacientes com PD-L1 alto, NSCLC avançado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso avançado) sem tratamento prévio, mas que não têm uma mutação selecionada de mu- tação de sensibilização de EGFR, translocação de ALK, mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E, são tratados administrando intra- venosamente armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de pelo me- nos 500 mg (por exemplo, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg,
cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, ou more). Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com PD-L1 alto, NSCLC avançado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não esca- moso avançado) sem tratamento prévio que não têm uma mutação selecionada de mutação de sensibilização de EGFR, translocação de ALK, mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E são tratados ad- ministrando intravenosamente armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com PD-L1 alto, NSCLC avan- çado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não escamoso) sem trata- mento prévio que não têm uma mutação selecionada de mutação de sensibilização de EGFR, translocação de ALK, mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E são tratados administrando intravenosamen- te armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 2400 mg uma vez a cada 3 semanas.
[00224] Em algumas modalidades, os métodos de tratamento aqui descritos resultam em uma resposta à doença ou sobrevivência melho- rada do indivíduo ou paciente. Em algumas modalidades, por exemplo, a resposta à doença pode ser uma resposta completa, uma resposta parcial, ou uma doença estável. Em algumas modalidades por exem- plo, a sobrevivência melhorada poderia ser sobrevivência livre de pro- gressão (PFS) ou sobrevivência geral. Em algumas modalidades, a melhoria (por exemplo, em PFS) é determinada em relação a um perí- odo anterior ao início do tratamento com uma armadilha anti-PD- L1/TGFβ da presente descrição. Métodos para determinar a resposta à doença (por exemplo, resposta completa, resposta parcial ou doença estável) e sobrevivência do paciente (por exemplo, PFS, sobrevivência geral) para a terapia de câncer ou tumor são rotineiros na técnica e são contemplados neste documento. Em algumas modalidades, a res-
posta à doença é avaliada de acordo com RECIST 1,1 após submeter o paciente tratado a tomografia computadorizada (TC) com contraste ou imageamento por ressonância magnética (MRI) da área afetada (por exemplo, tórax/abdômen e pelve cobrindo a área da extensão su- perior da entrada torácica à sínfise púbica). Dispositivo de Entrega
[00225] Em um aspecto, a presente descrição fornece um dispositi- vo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1), em que o dispositivo inclui uma formulação compreendendo cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg de uma proteína incluindo um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, o primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), o segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD-L1, e a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
[00226] Em determinadas modalidades, o dispositivo pode ser uma bolsa, uma caneta ou uma seringa. Em determinadas modalidades, a bolsa pode ser conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
[00227] Em determinadas modalidades da presente descrição, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1)
pode incluir cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2900 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2800 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2700 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2600 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2500 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2400 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2300 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2200 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2100 mg, cerca de 500 mg a cerca de 2000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1900 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1800 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1700 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1600 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1500 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1400 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1300 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1200 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1100 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 900 mg, cerca de 500 mg a cerca de 800 mg, cerca de 500 mg a cerca de 700 mg, cerca de 500 mg a cerca de 600 mg, cerca de 600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, ou cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg) de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptí-
deo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um se- gundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40). Em determinadas modali- dades, o dispositivo de entrega de fármaco pode incluir dose de cerca de 500 a cerca de 1200 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro poli- peptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1). Em determinadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco pode incluir dose de cerca de 500 mg da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40).
[00228] Em determinadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco inclui dose de cerca de 1200 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40). Em determi- nadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paci- ente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) inclui dose de cerca de 2400 mg de uma proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD- L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteí- na com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40). Em determinadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) inclui cerca de 1200 mg ou dose de cerca de 2400 mg do produto de proteína com um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40.
[00229] Em determinadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) inclui dose de cerca de 1200 mg da proteína da presente descrição (por exemplo, armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compre-
ende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoá- cido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40)). Em determinadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) inclui dose de cerca de 2400 mg da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40)). Em deter- minadas modalidades, o dispositivo de entrega de fármaco para uso em um método de tratar câncer ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC com alta expressão de PD-L1) pode incluir cerca de 500 mg, cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cerca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cer- ca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg, cerca de 825 mg, cerca de 850 mg, cerca de 875 mg, cerca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1025 mg, cerca de 1050 mg, cerca de 1075 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1125 mg, cerca de 1150 mg, cerca de 1175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1225 mg, cerca de 1250 mg, cerca de 1275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1325 mg, cerca de 1350 mg, cerca de 1375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1425 mg, cerca de 1450 mg, cerca de 1475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1525 mg, cerca de 1550 mg, cerca de 1575 mg, cerca de 1600 mg,
cerca de 1625 mg, cerca de 1650 mg, cerca de 1675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1725 mg, cerca de 1750 mg, cerca de 1775 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1825 mg, cerca de 1850 mg, cerca de 1875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1925 mg, cerca de 1950 mg, cerca de 1975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2025 mg, cerca de 2050 mg, cerca de 2075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2125 mg, cerca de 2150 mg, cerca de 2175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2225 mg, cerca de 2250 mg, cerca de 2275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2325 mg, cerca de 2350 mg, cerca de 2375 mg, ou cerca de 2400 mg da proteína da presente descrição (por exemplo, armadilha anti-PD-L1/TGFβ, por exemplo, um produto de proteína com um pri- meiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 35, 36, e 37, e um segundo polipeptídeo que compreen- de as sequências de aminoácido de SEQ ID NOs: 38, 39, e 40). Produção de Proteína
[00230] As proteínas de armadilha anticorpo-citocina são geralmen- te produzidas de forma recombinante, usando células de mamífero contendo um ácido nucleico projetado para expressar a proteína. Em- bora um exemplo de uma linhagem celular adequada e método de produção de proteína seja descrito nos Exemplos 1 e 2 da US 20150225483 A1, uma grande variedade de vetores adequados, linha- gens celulares e métodos de produção de proteína foram usados para produzir produtos biofarmacêuticos à base de anticorpos e podem ser usados na síntese dessas proteínas de armadilha anticorpo-citocina. Indicações Terapêuticas
[00231] As proteínas de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descritas no pedido (por exemplo, incluindo um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptí- deo que inclui a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1), bem co- mo as formulações de entrega de fármaco intravenoso e dispositivos de entrega compreendendo as referidas proteínas de armadilha anti- PD-L1/TGFβ descritos, podem ser usadas para tratar câncer ou redu- zir crescimento tumoral em um paciente sem tratamento prévio. Cân- ceres exemplificativos incluem câncer de pulmão de células não pe- quenas (NSCLC), melanoma, câncer pancreático, câncer colorretal (por exemplo, câncer colorretal pré-tratado (CRC)), câncer de ovário, glioblastoma, câncer gástrico (por exemplo, câncer gástrico estágio IV irressecável reecorrente ou refratário pré-tratado), câncer do trato bili- ar, câncer esofágico (carcinoma de células escamosas ou adenocarci- noma), adenoma da cabeça ou do pescoço, e carcinoma escamoso da cabeça ou do pescoço. Em uma modalidade específica, o câncer tra- tado é NSCLC avançado (por exemplo, NSCLC escamoso ou não es- camoso avançado).
[00232] O câncer ou tumor a ser tratado com uma armadilha anti- PD-L1/ TGFβ pode ser selecionado com base na expressão ou ex- pressão elevada de PD-L1 e/ou TGFβ no tumor, na correlação de seus níveis de expressão com prognóstico ou progressão da doença, e ex- periência pré-clínica e clínica sobre a sensibilidade do tumor a trata- mentos direcionados a PD-L1 e TGFβ. Esses cânceres ou tumores incluem, mas sem limitação, colorretal, de mama, de ovário, pancreáti- co, gástrico, de próstata, renal, cervical, de bexiga, de cabeça e pes- coço, de fígado, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas avançado, melanoma, carcinoma de células de Merkel e mesotelioma. Por exemplo, em uma modalida- de específica, um paciente sem tratamento prévio com um NSCLC avançado PD-L1 positivo (por exemplo, PD-L1 alto) é tratado de acor- do com os métodos da presente descrição.
[00233] Em algumas modalidades, o paciente com câncer sem tra- tamento prévio (por exemplo, NSCLC avançado (isto é, NSCLC metas- tático)) com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os métodos da presente descrição não tem uma mutação selecionada de mutação de sensibilização (ativação) de receptor do fator de cresci- mento epidérmico (EGFR), translocação de quinase de linfoma ana- plásico (ALK), mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E. Em al- gumas modalidades, o paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC avançado (isto é, NSCLC metastático)) com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os métodos da pre- sente descrição não tem mutação de sensibilização (ativação) de re- ceptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR). Em algumas moda- lidades, o paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC avançado (isto é, NSCLC metastático)) com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os métodos da presente descrição não tem translocação de quinase de linfoma anaplásico (ALK). Em al- gumas modalidades, o paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC avançado (isto é, NSCLC metastático)) com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os métodos da pre- sente descrição não tem mutação de ROS1. Em algumas modalida- des, o paciente com câncer sem tratamento prévio (por exemplo, NSCLC avançado (isto é, NSCLC metastático)) com alta expressão de PD-L1) a ser tratado de acordo com os métodos da presente descrição não tem mutação de BRAF V600E.
EXEMPLOS
[00234] A descrição sendo agora geralmente descrita será mais fa- cilmente compreendida por referência aos exemplos a seguir, que são incluídos apenas para fins de ilustração de certos aspectos e modali- dades da presente descrição, e não se destinam a limitar o escopo da descrição de qualquer forma. EXEMPLO 1: Embalagem de Formulação de Fármaco Intravenoso
[00235] A formulação de Armadilha anti-PD-L1/TGFβ é preparada como uma formulação liofilizada ou uma formulação líquida. Para pre-
parar a formulação liofilizada, Armadilha anti-PD-L1/TGFβ criodesse- cado é esterilizado e armazenado em frascos de vidro descartáveis. Vários desses frascos de vidro são então embalados em um kit para entregar uma dose específica independente de peso corporal a um paciente com diagnóstico de câncer ou tumor. Dependendo da neces- sidade de dosagem, o kit contém 12-60 frascos. Alternativamente, a formulação é preparada e embalada como uma formulação líquida e armazenada como 250 mg/frasco a 1000 mg/frasco. Por exemplo, a formulação é uma formulação líquida e armazenada como 600 mg/frasco ou armazenada como 250 mg/frasco. Em outro exemplo, a Armadilha anti-PD-L1/TGFβ é formulada como 10 mg/ml de solução e é fornecida em frascos USP/Ph Eur tipo I preenchidos para permitir um volume extraível de 60 ml (600 mg/60 ml) e fechados com rolhas de borracha em formato de soro em conformidade com USP e Ph Eur com fecho de alumínio crimpado.
[00236] Um indivíduo diagnosticado com NSCLC avançado é admi- nistrado por via intravenosa com uma formulação contendo 500 mg a 2400 mg de Armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Por exemplo, o indivíduo é administrado por via intravenosa com 1200 mg de Armadilha anti-PD- L1/TGFβ uma vez a cada duas semanas ou 2,400 mg de Armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada três semanas. A administração in- travenosa é de uma bolsa de solução salina. A quantidade de Armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ administrada a um indivíduo é independente do peso corporal do indivíduo. EXEMPLO 2: Regime de dosagem independente de BW de uma coor- te de paciente com NSCLC avançado sem tratamento prévio
[00237] Em uma modalidade exemplificativa, a dose independente de BW de 1200 mg é administrada a pacientes de câncer com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado uma vez a cada duas semanas. A administração é realizada por via intravenosa por cerca de uma hora (-10 minutos/+20 minutos, ou seja, 50 minutos a 80 minutos). Em uma modalidade exemplificativa, a dose indepen- dente de BW de 2,400 mg é administrada a pacientes de câncer com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado uma vez a cada três semanas. A administração é realizada por via intrave- nosa por cerca de uma hora (-10 minutos/+20 minutos, ou seja, 50 mi- nutos a 80 minutos). A fim de mitigar possíveis reações relacionadas à infusão, uma pré-medicação com anti-histamínico e com paracetamol (acetaminofeno) (por exemplo, 25-50 mg de difenidramina e 500-650 mg de paracetamol [acetaminofeno] IV ou equivalente oral) aproxima- damente 30 a 60 minutos antes de cada dose de Armadilha anti-PD- L1/TGFβ é administrada para as 2 primeiras infusões. Se forem obser- vadas reações à infusão de Grau 2 durante as duas primeiras infu- sões, a pré-medicação não é interrompida. Esteroides como pré- medicação não são permitidos.
[00238] O que segue descreve os critérios de inclusão para pacien- tes usados neste exemplo. Pacientes: - Ter ≥ 18 anos - Diagnóstico histologicamente confirmado de NSCLC avançado com alta expressão de PD-L1 em células tumorais - Não receberam tratamento de terapia sistêmica anterior para seu NSCLC avançado (conclusão do tratamento com quimiotera- pia citotóxica, terapia biológica e/ou radiação como parte da terapia neoadjuvante/adjuvante é permitido desde que a terapia tenha sido concluída pelo menos 6 meses antes do diagnóstico de doença metas- tática) - Ter doença mensurável com base no RECIST 1.1 (ver Ei- senhauer et al., EJC. 2009; 45: 228-247) - Ter expectativa de vida de pelo menos 3 meses - Ter material tumoral de arquivo (menos de 6 meses de idade) ou produzir biópsias frescas para determinar a expressão de PD-L1 - Ter Status de Desempenho do Eastern Cooperative Onco- logy Group (ECOG PS) de 0 a 1 - Ter função de órgãos adequada e expectativa de vida de ≥ 3 meses - Ter função hematológica adequada definida por contagem absoluta de neutrófilos (ANC) ≥ 1,5 x 109/l, contagem de plaquetas ≥ 100 x 109/l, e Hgb ≥ 9 g/dl - Ter função hepática adequada definida por um nível de bilirrubina total ≤ o limite superior do normal (ULN), um nível AST ≤ 1,5 X ULN, e um nível ALT ≤ 1,5 X ULN. Para participantes com envolvi- mento hepático em seu tumor, aspartato aminotransferase (AST) ≤ 5,0 x ULN, alanina aminotransferase (ALT) ≤ 5,0 x ULN, e bilirrubina ≤ 3,0 x ULN é aceitável - Ter função renal adequada definida por creatinina ≤ 1,5 × ULN ou depuração de creatinina calculada > 30 ml/min; e - Ter função de coagulação adequada definida como razão normalizada internacional (INR) ou tempo de protrombina (TP) ≤ 1,5 × ULN, a menos que o participante esteja recebendo terapia anticoagu- lante, e tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) ≤ 1,5 x ULN, a menos que o participante esteja recebendo terapia anticoagulante.
[00239] Os pacientes selecionados não têm tuberculose ativa ou uma doença autoimune que possa deteriorar ao receber um agente imunoestimulador. Os pacientes selecionados não receberam terapia anterior com um anticorpo anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti- CD137, ou antígeno-4 associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4) (incluindo ipilimumab), ou qualquer outro anticorpo ou fármaco especi- ficamente direcionado à coestimulação de células T ou vias de ponto de verificação.
EXEMPLO 3: Tratamento de pacientes com NSCLC avançado com Armadilha anti-PD-L1/TGFβ
[00240] Objetivo: o objetivo deste estudo é avaliar se a armadilha anti-PD-L1/TGFβ melhora o tempo de sobrevivência livre de progres- são (PFS) e/ou a melhor resposta geral (BOR) como tratamento de primeira linha (1L) para pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado com expressão tumoral de PD-L1. A justificativa para usar a armadilha anti-PD-L1/TGFβ nessa coorte de pacientes com NSCLC é que a armadilha anti-PD-L1/TGFβ tem como alvo PD-L1 e TGFβ, dois mecanismos principais de imunossupressão no microambiente tumoral. Os dados pré-clínicos sugerem que a Ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ aumenta fortemente a atividade antitumoral e prolonga a sobrevivência em modelos tumorais de camundongo acima do efeito de anticorpo anti-PD-L1 avelumab ou de Armadilha TGFβ controle isoladamente. Assim, a neutralização simultânea de TGF-β, uma molécula conhecida por inibir a ativação imune de tumor, pode estimular a resposta clínica nos pacientes.
[00241] Projeto do estudo: Este estudo avalia a resposta à doença e os pontos finais primários de sobrevivência para avaliar o benefício clínico de uma Armadilha anti-PD-L1/TGFβ como tratamento de pri- meira linha para pacientes com NSCLC avançado com alta expressão tumoral de PD-L1. Para os fins deste estudo, PD-L1 alto é ≥ 80% de células tumorais PD-L1 positivas conforme determinado pelo ensaio Dako 73-10. Pacientes com pontuação de proporção de tumor (TPS) ≥ 50%, conforme determinado pelo ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx de PD-L1 realizado de acordo com os regulamentos laboratoriais locais antes da inscrição no estudo também são elegíveis. Tanto o ensaio Dako 73-10 quanto o ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx selecionam uma população de pacientes similar em seus respectivos pontos de corte. Aproximadamente 300 pacientes que não receberam tratamento prévio para seu NSCLC avançado (pacientes sem tratamento prévio) estão incluídos neste estudo. Os pacientes neste estudo atendem aos critérios de inclusão de pacientes descritos no Exemplo 2, não recebe- ram tratamento de terapia sistêmica anterior para seu NSCLC avança- do (pacientes sem tratamento prévio) e não têm mutação de sensibili- zação (ativação) do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), translocação de linfoma quinase anaplásico (ALK), mutação de ROS1, ou mutação de BRAF V600E, em que a terapia direcionada é aprovada localmente. Os pacientes são estratificados de acordo com o histórico de histologia tumoral (escamoso versus não escamoso) e tabagismo: histórico de escamoso, histórico de não escamoso e nunca fumou, histórico de não escamosa e fumou alguma vez. Os pacientes são administrados por via intravenosa com uma dose de Armadilha anti-PD-L1/TGFβ de 1200 mg uma vez a cada duas semanas, ou 2400 mg uma vez a cada três semanas. O tratamento é continuado até a confirmação da doença progressiva (PD) de acordo com os Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos versão 1,1 (RECIST 1,1), toxicidade inaceitável, ou por até 24 meses. No caso de PD, o tratamento pode continuar após a determinação inicial de PD ou PD confirmada se o status de desempenho do Eastern Cooperative Onco- logy Group (ECOG PS) do paciente permanecer estável, e se o parti- cipante se beneficiar da continuação do tratamento. Pacientes que apresentarem doença estável (SD), resposta parcial (PR) ou resposta completa (CR) continuarão o tratamento até o final de 24 meses, em- bora seja possível tratamento adicional.
[00242] Durante o tratamento, a segurança é avaliada por meio do registro, relatório e análise das condições médicas básicas, eventos adversos (AEs), descobertas do exame físico, incluindo sinais vitais, status de desempenho ECOG e testes laboratoriais.
[00243] Avaliações de Eficácia: A resposta tumoral a Armadilha an-
ti-PD-L1/TGFβ é avaliada por tomografia computadorizada ou MRI. Varreduras realizadas na linha de base são repetidas nas visitas sub- sequentes. Em geral, as lesões detectadas na linha de base são se- guidas utilizando a mesma metodologia de imageamento e preferenci- almente o mesmo equipamento de imageamento nas visitas subse- quentes de avaliação do tumor. As metástases cutâneas podem ser usadas como lesões alvo de acordo com RECIST 1,1 usando medi- ções por paquímetro, se cumprirem RECIST 1,1 para lesões alvo.
[00244] Resultados: A resposta tumoral objetiva é avaliada pela ta- xa de resposta global (ORR), definida como o número de participantes que atingiram uma melhor resposta global (BOR) de resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR) dividido pelo número de participantes na população de análise. Sobrevivência livre de progressão é definida como o tempo decorrido desde a randomização até a data da primeira documentação de progressão objetiva da doença (PD) avaliada de acordo com RECIST 1,1 ou morte por qualquer causa, o que ocorrer primeiro. É contemplado que o tratamento com Armadilha anti-PD- L1/TGFβ resulta em atividade clínica inicial em pacientes com NSCLC avançado e sem tratamento prévio com status elevado de PD-L1. Os biomarcadores tumorais são avaliados antes e após o tratamento em amostras de sangue e tumor obtidas de pacientes que são administra- dos com a armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Os pacientes tratados apre- sentam resposta à doença (por exemplo, resposta parcial, resposta completa, doença estável) e/ou sobrevivência melhorada (por exem- plo, sobrevivência livre de progressão e/ou sobrevivência geral).
[00245] Em suma, os exemplos descritos acima proveem regimes de tratamento envolvendo Armadilha anti-PD-L1/TGFβ para tratar NSCLC avançado com alta expressão de PD-L1 em pacientes sem tratamento prévio.
SEQUÊNCIAS SEQ ID NO: 1 Sequência de peptídeo da cadeia leve lambda anti-PD-L1 secretada
SEQ ID NO: 2 Sequência de peptídeo da cadeia H secretada de anti-PDL1
SEQ ID NO: 3 Sequência de peptídeo da cadeia H secretada de Armadilha anti- PDL1/TGFβ
SEQ ID NO: 4 Sequência de DNA do códon de iniciação de tradução ao códon de parada de tradução da cadeia leve lambda anti-PD-L1 (a sequência líder precedendo a VL é o peptídeo sinal de ativador de uroquinase- plasminogênio)
SEQ ID NO: 5 Sequência de DNA do códon de iniciação de tradução ao códon de parada de tradução (mVK SP líder: caixa-baixa sublinhado; VH: caixa- alta; IgG1m3 com mutação em K a A: letras em caixa-baixa; ligante (G4S)x4-G (SEQ ID NO: 11): letras em caixa-alta e negrito; TGFβRII: letras em caixa-baixa sublinhadas e em negrito; dois códons de para- da: letras em caixa-alta sublinhadas e em negrito)
SEQ ID NO: 6 Sequência de polipeptídeo da cadeia leve lambda secretada de Arma- dilha anti-PD-L1(mut)/ TGFβ, com mutações em A31G, D52E, R99Y
SEQ ID NO: 7 Sequência de polipeptídeo da cadeia pesada secretada de Armadilha anti-PD-L1(mut)/ TGFβ
SEQ ID NO: 8 Polipeptídeo Precursor de Isoforma A de TGFβRII Humano (RefSeq NCBI Acesso Nº.: NP_001020018)
SEQ ID NO: 9 Polipeptídeo Precursor de Isoforma B de TGFβRII Humano (RefSeq NCBI Acesso Nº.: NP_003233)
SEQ ID NO: 10 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII Humano
SEQ ID NO: 11 Ligante (Gly4Ser)4Gly
SEQ ID NO: 12 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia pesada secre- tada de anticorpo anti-PD-L1 MPDL3289A
SEQ ID NO: 13 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia leve secretada de anticorpo anti-PD-L1 MPDL3289A
SEQ ID NO: 14 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia pesada secre- tada de anticorpo anti-PD-L1 YW243.55S70
SEQ ID NO: 50 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII Humano Truncado
SEQ ID NO: 51 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII Humano Truncado
SEQ ID NO: 52 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII Humano Truncado
SEQ ID NO: 53 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII
Humano Truncado
SEQ ID NO: 54 Um Polipeptídeo de Domínio Extracelular de Isoforma B de TGFβRII Humano Mutado
SEQ ID NO: 55 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia pesada de an- ticorpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 56 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia leve de anti- corpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 57 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia pesada de an- ticorpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 58 Sequência de polipeptídeo da região variável de cadeia leve de anti- corpo anti-PD-1
SEQ ID NO: 59 Sequência de polipeptídeo da cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 60 Sequência de polipeptídeo da cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 61 Sequência de polipeptídeo da cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1
SEQ ID NO: 62 Sequência de polipeptídeo da cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA
[00246] Toda a descrição de cada um dos documentos de patente e artigos científicos aqui referidos é incorporada por referência para to- dos os fins.
EQUIVALENTES
[00247] A descrição pode ser incorporada em outras formas especí- ficas sem se afastar do espírito ou características essenciais da mes- ma. As modalidades acima devem, portanto, ser consideradas em to- dos os aspectos ilustrativas, em vez de limitar a descrição aqui descri- ta. Vários elementos estruturais das diferentes modalidades e várias etapas do método descritas podem ser utilizadas em várias combina- ções e permutações, e todas essas variantes devem ser consideradas formas da descrição. O escopo da descrição é assim indicado pelas reivindicações anexas e não pela descrição acima, e pretende-se que todas as alterações dentro do significando e faixa de equivalência das reivindicações sejam ali abrangidas.

Claims (57)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratar câncer de pulmão de células não pe- quenas (NSCLC) avançado ou inibir crescimento tumoral em um paci- ente sem tratamento prévio em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma dose de pelo menos 500 mg de uma proteína compreendendo um primeiro po- lipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD- L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que a dose é 500 mg a 2400 mg.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é 1200 mg a 3000 mg.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é 1200 mg.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é 2400 mg.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é administrada uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dose é 1200 mg, administrada uma vez a cada duas semanas.
9. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dose é 2100 mg, administrada uma vez a cada três semanas.
10. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dose é 2400 mg, administrada uma vez a cada três semanas.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o NSCLC avançado apre- senta histologia escamosa ou não escamosa.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o câncer apresenta alta expressão de PD-L1.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o paciente não tem uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação de sensibili- zação de EGFR, translocação de ALK, uma mutação de ROS1, e mu- tação de BRAF V600E.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o tratamento resulta em uma resposta à doença ou sobrevivência melhorada do paciente.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracteriza- do pelo fato de que a resposta à doença é uma resposta completa, uma resposta parcial ou uma resposta estável.
16. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracteriza- do pelo fato de que a sobrevivência é sobrevivência livre de progres- são (PFS).
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 16, caracterizado pelo fato de que a proteína é administrada por administração intravenosa.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracteriza- do pelo fato de que a administração intravenosa é realizada com uma bolsa pré-preenchida, uma caneta pré-preenchida ou uma seringa pré- preenchida compreendendo uma formulação compreendendo a prote- ína.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
20. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso em um método de tratar câncer de pulmão de células não peque- nas (NSCLC) avançado ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio em necessidade do mesmo, carac- terizada pelo fato de que a formulação compreendendo 500 mg a 3000 mg de uma proteína compreendendo um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo; em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFΒRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD- L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
21. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que o primeiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1.
22. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizada pelo fato de que compreende 1200 mg a 2400 mg da proteína.
23. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizada pelo fato de que compreende 1200 mg da proteína.
24. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizada pelo fato de que compreende 2400 mg da proteína.
25. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracte- rizada pelo fato de que a formulação é administrada ao paciente uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.
26. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizada pelo fato de que uma formulação compreendendo 1200 mg da proteína é administrada uma vez a cada duas semanas.
27. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizada pelo fato de que uma formulação compreendendo 2400 mg da proteína é administrada uma vez a cada três semanas.
28. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 27, caracte- rizada pelo fato de que a formulação está contida em uma bolsa, uma caneta ou uma seringa.
29. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
30. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 29, caracte- rizada pelo fato de que a formulação é uma formulação liofilizada ou uma formulação líquida.
31. Dispositivo de entrega de fármaco para uso em um mé- todo de tratar câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma formulação compreendendo 500 mg a 3000 mg de uma proteína compreendendo um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo; em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD- L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
32. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que o primeiro poli- peptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1.
33. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compre- ende 1200 mg a 2400 mg da proteína.
34. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compre- ende 1200 mg da proteína.
35. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compre- ende 2400 mg da proteína.
36. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 33, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada ao paciente uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.
37. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que uma formula- ção compreendendo 1200 mg da proteína é administrada uma vez a cada duas semanas.
38. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que uma formula- ção compreendendo 2400 mg da proteína é administrada uma vez a cada três semanas.
39. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 38, caracterizado pelo fato de que o dispositivo é uma bolsa, uma caneta ou uma seringa.
40. Dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a bolsa é co- nectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
41. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, como definida em qualquer uma das reivindicações 20 a 30, ou dispositivo de entrega de fármaco para uso, como definido qualquer uma das reivindicações 31 a 40, caracterizado pelo fato de que o NSCLC avançado apresenta histologia escamosa ou não escamosa.
42. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 41, ou dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o câncer apresenta alta expressão de PD-L1.
43. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 41 ou 42, ou dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 41 ou 42, carac- terizado pelo fato de que o paciente não tem uma mutação seleciona- da do grupo que consiste em mutação de sensibilização de EGFR, translocação de ALK, mutação de ROS1, e mutação de BRAF V600E.
44. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 43, ou dis- positivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 43, caracterizado pelo fato de que o tratamen- to resulta em uma resposta à doença ou sobrevivência melhorada do paciente.
45. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 44, ou dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a resposta à doença é uma resposta completa, uma resposta parcial ou uma resposta estável.
46. Formulação de entrega de fármaco intravenoso para uso, de acordo com a reivindicação 44, ou dispositivo de entrega de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a sobrevivência é sobrevivência livre de progressão (PFS).
47. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ compreenden- do um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo para uso em um método de tratar câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) avançado ou inibir crescimento tumoral em um paciente com câncer sem tratamento prévio em necessidade do mesmo, caracteri- zada pelo fato de que o método compreende administrar 500 mg a 3000 mg da proteína ao paciente; em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) Receptor II de Fator β de Transformação de Crescimento humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de ligar Fator β de Transformação de Crescimento (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que liga PD- L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que liga PD-L1.
48. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 47, caracterizada pelo fato de que o pri- meiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 1.
49. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizada pelo fato de que 1200 mg a 2400 mg da proteína são administrados ao paciente.
50. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizada pelo fato de que 1200 mg da proteína são administrados ao paciente.
51. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizada pelo fato de que 2400 mg da proteína são administrados ao paciente.
52. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, caracterizada pelo fato de que a proteína é administrada ao paciente uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.
53. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 50, caracterizada pelo fato de que 1200 mg da proteína são administrados uma vez a cada duas semanas.
54. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que 2400 mg da proteína são administrados uma vez a cada três semanas.
55. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 54, caracterizada pelo fato de que a proteína está contida em uma bolsa, uma caneta ou uma seringa.
56. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 55, caracterizada pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal compreendendo um tubo e/ou uma agulha.
57. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 56, caracterizada pelo fato de que a proteína é compreendida em uma formulação liofili- zada ou uma formulação líquida.
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