CN102342219A - 一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法。其步骤：A、拌料：按照培养基配方称取培养料，干拌均匀；B、装瓶：将混拌均匀的干培养料装进菌种瓶；C、装筐灌水：将装满的菌种瓶装入灭菌周转筐，整筐浸入水池中，灌水；D、预灭菌：将灌满水的菌种瓶进行预灭菌；E、出灶：将预灭菌的菌种瓶整筐运出灭菌灶；F、封口：用瓶塞、瓶盖、棉塞、牛皮纸菌种常用封口物，将菌种瓶口塞紧密封；G、二次灭菌：将封口好的菌种瓶再次运进灭菌灶，进行常压或高压灭菌；H、冷却、接种，整个生产过程中菌种瓶需要保持直立状态。本发明可以增加蜜环菌菌种生产中装瓶的速度，防止污染封口物，减少菌种杂菌感染，便于工厂化生产。

Description

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法

技术领域

本发明涉及食药用真菌菌种技术领域，更具体涉及一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，适用于对小口径的瓶装蜜环菌菌种生产过程中装瓶和灭菌，广泛适用于蜜环菌菌种等喜湿性食用菌菌种生产中的应用。

背景技术

蜜环菌Armillaria mellea又名榛蘑、臻蘑、蜜蘑、栎蘑、草蘑、根索蕈、蜜环蕈、栎蕈。属于担子菌纲、伞菌目、白蘑科、蜜环菌属，是著名是食药兼用真菌，是天麻不可缺少的互慧共生菌，栽培天麻必需蜜环菌的帮助。

蜜环菌菌种是人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体和菌索。菌种质量的好坏直接影响栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种才能获得高产和优质的产品，因此生产优良的菌种是食用菌栽培的一个极其重要的环节。蜜环菌菌丝(菌索)生长需要适宜的营养，培养基要求含氮量略高，含水量65-70％，pH值4.8-5.2，此时菌丝浓白、菌索旺盛，生长快速，菌种外观和在天麻栽培中实际应用的效果都达到最佳。

蜜环菌菌种在生产中有液体培养菌种和固体培养菌种等形式。生产中根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种分为母钟、原种和栽培种。液体培养菌种多用于医药用菌丝体及代谢产物的生产，在天麻栽培等使用的蜜环菌菌种，多使用固体菌种。

固体蜜环菌菌种的原种和栽培种都使用瓶装或袋装生产，是在杂木屑、枝条、麦麸、玉米粉等配制的固体培养料上接种培养，待菌丝和菌索长满培养基即成生产用蜜环菌菌种。固体菌种培养需要根据蜜环菌生物学特性选择培养基，主要是先将杂木屑、枝条、麦麸、玉米粉等原料按照比例配制，混拌均匀，调节含水量至65％-70％等，装入菌种瓶，用棉塞等物封口，高压或常压灭菌后接入菌种，培养至菌丝和菌索长满菌瓶为止。蜜环菌菌丝和菌索生长需要水分较大，一般要求培养基含水量在68％左右，所以生产中会出现培养料太湿，不易装瓶，且培养料容易粘在袋身和瓶壁，极易引起污染。生产中也有先装瓶，后再加水的措施，但往往难以掌握加水的数量，加水量非多即少。加水少则蜜环菌生长不适，菌索生长不旺，菌种使用效果和外观都受到影响。加水多则灭菌时水分溢出，污染棉塞等封口物，培养时棉塞等封口物易感染杂菌，引起菌种污染。且这种生产速度慢，费工费时。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，方法易行，操作简便，增加蜜环菌菌种生产中装瓶的速度，降低了菌种瓶口污染，使瓶装蜜环菌菌种生产更容易操作。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施。

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

A、拌料：按照培养基配方称取各培养料，干拌至各配料混合均匀；

B、装瓶：将混拌均匀的干培养料装进菌种瓶，培养料要装满至菌种瓶口处；

C、装筐灌水：将装满培养料的菌种瓶装入灭菌周转筐，整筐放入水池中，用挡板压住，池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，直至灌满为止；

D、预灭菌：将灌满水的菌种瓶整筐运入灭菌灶或灭菌柜内，通蒸汽加温，温度升至95-105℃时，保持此温度1-2小时后，停止加温；

E、出灶：将预灭菌的菌种瓶整筐运出灭菌灶或灭菌柜，进行冷却至85℃以下；

F、封口：给冷却至85℃以下的菌种瓶进行封口操作，用封口物将菌种瓶口塞紧密封；封口物可为瓶塞、瓶盖、棉塞、牛皮纸等；

G、二次灭菌：将封口好的菌种瓶再次整筐运进灭菌灶或灭菌柜，通入蒸汽加温，进行常压(0.1MPa，97-103℃，10-16小时)或高压灭菌(0.12-0.15MPa，123-129℃，2-4小时)；时间结束后停止加温。

H、冷却、接种、培养等其他操作与常规菌种生产技术相似(参照农业部行业标准NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》)，整个生产过程中菌种瓶需要保持直立状态，防止瓶内水份打湿封口物而后期造成杂菌污染。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种蜜环菌菌种。

所述的培养基为杂木屑10-85％、杂木枝条(提前预湿)1-85％、小麦麸10-25％、玉米粉1-5％、石膏粉0.5-2％、白糖0.5-2％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、硫酸镁0.1-0.2％等各原料的混合物，此时pH值为6.5-7.0左右，所述的培养基中可以不需要杂木枝条、玉米粉、石膏粉、白糖、磷酸二氢钾、硫酸镁；所述的培养基中不可缺少的为杂木屑、小麦麸。

所述的拌料指将称取的干的培养料混拌均匀，可以采用人工拌匀或机械拌匀。

所述的装瓶指将混拌均匀的干培养料装进菌种瓶，可以采用人工装瓶或机械装瓶。

所述的装筐灌水指将装入灭菌周转筐的整筐装满干培养料的菌种瓶的侵入水池中，自然灌水，灌满为止。此时培养基含水量为75-76％，pH值为6.5-7.0。

所述的预灭菌指将灌满水的菌种瓶整筐运入灭菌灶或灭菌柜，温度升至95-105℃，保持1-2小时。经试验，预灭菌时间和温度具有一定的对应性(见表1)，即温度为95℃，需保持2小时；温度为100℃，需保持1.5小时；温度为105℃，需保持1小时。此时培养基含水量正好降至蜜环菌菌丝和菌索生长最适宜的68％左右。(该试验采用生产实际中常用的500ml盐水瓶，和实施例1中的培养基，pH值自然。)

表1：培养基含水量、pH值与预灭菌所需时间、温度变化情况表

单位：℃、小时、％

所述的出灶指将预灭菌的菌种瓶整筐运出灭菌灶或灭菌柜，进行冷却至85℃以下。此时培养基含水量为68％左右，pH值为5.5-6.5。

所述的封口指给冷却至85℃以下的菌种瓶进行封口操作，可以采用瓶塞、瓶盖、棉塞、牛皮纸等菌种常用封口物。

所述的二次灭菌指将封口好的菌种瓶再次进灶，通入蒸汽加温，进行常压(0.1MPa，97-103℃，10-16小时)或高压灭菌(0.12-0.15MPa，123-129℃，2-4小时)；以达到灭菌效果为准。二次灭菌时间和温度具有一定的对应性，即常压灭菌时，温度为97℃，需保持16小时；温度为100℃，需保持14小时；温度为103℃，需保持10小时，高压灭菌时，温度为123℃，需保持4小时，温度为126℃，需保持3小时，温度为129℃，需保持2小时。此时培养基才能灭菌彻底。

二次灭菌冷却后，此时培养基含水量降为68％左右，pH值降为4.8-5.2，适宜蜜环菌菌丝和菌索生长要求。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

本发明使用干培养料装瓶，与常规的湿料装瓶相比，干料装瓶速度快很多，利于工厂化大批量生产。

本发明使用整筐菌种瓶浸入水池中自然灌水，灌满为止，灌水期间工人可以继续从事其他作业，节约工人加水的时间。

本发明将灌满水的菌种瓶进行预灭菌，主要是让菌种瓶内多余的水份蒸发，使培养基含水量达到68％左右的蜜环菌菌丝和菌索生长的适宜范围，防止了水份过多而打湿封口物，后期造成杂菌污染。

本发明在菌种瓶出灶、适当冷却后进行封口操作，此时瓶口已干，不会污染封口物。

本发明使用二次灭菌，将封口好的菌种瓶再次进灶，进行常压或高压灭菌，此时瓶内培养基水份适宜，不会因瓶内水份沸腾而污染封口物。且培养基pH经过灭菌已经自然下降到4.8-5.2的蜜环菌菌丝和菌索生长适宜范围。

本发明中冷却、接种、培养等其他操作与常规菌种操作相似，整个过程中菌种瓶需要保持站立状态，防止了瓶内水份打湿封口物而后期造成杂菌污染。

具体实施方式：

实施例1：

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

将杂木屑78％、小麦麸20％、石膏粉1％、白糖1％，干拌均匀，人工装入500ml盐水瓶中，培养料装满至盐水瓶瓶口为止，再将装满的盐水瓶装入灭菌周转筐中，整筐浸入水池中，用挡板压住，让池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，灌水30min后，取出周转筐，整筐运入灭菌灶，灶内通入水蒸汽加温，温度升至97℃后，保持温度2小时后，停止加温，整筐运出灭菌灶进行冷却，冷却至85℃以下后，用棉塞对盐水瓶进行封口，将盐水瓶口塞紧，封口好后再次整筐运入灭菌灶，灶内通入水蒸汽加温，温度升至100℃，保持14小时，再运出灭菌灶，运进冷却室冷却，冷却至25℃以下后按照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，整个生产过程中盐水瓶保持站立。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种天麻生产用蜜环菌菌种。

实施例2：

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

将杂木屑80％、小麦麸15％、玉米粉3％、石膏粉1％、白糖1％，干拌均匀，人工装入500ml盐水瓶中，培养料装满至盐水瓶瓶口为止，再将装满的盐水瓶装入灭菌周转筐中，整筐浸入水池中，用挡板压住，让池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，灌水50分钟后，取出周转筐，整筐运入灭菌灶，灶内通入水蒸汽加温，温度升至101℃后，保持温度1.5小时后，停止加温，整筐运出灭菌灶进行冷却，冷却至85℃以下后，用塑料瓶塞对盐水瓶进行封口，将盐水瓶口塞紧，封口好后再次整筐运入灭菌灶，灶内通入水蒸汽加温，温度升至99℃，保持1.5小时，再运出灭菌灶，运进冷却室冷却，冷却至25℃以下后按照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，整个生产过程中盐水瓶保持站立。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种天麻生产用蜜环菌菌种。

实施例3：

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

将杂木屑80％、小麦麸15％、玉米粉3％、石膏粉1％、白糖1％，干拌均匀，用装瓶机装入500ml盐水瓶中，培养料装满至盐水瓶瓶口为止，再将装满的盐水瓶装入灭菌周转筐中，整筐浸入水池中，用挡板压住，让池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，灌水60分钟后，取出周转筐，整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至105℃后，保持温度1小时后，停止加温，整筐运出高压灭菌柜进行冷却，冷却至85℃以下后，用棉塞对盐水瓶进行封口，将盐水瓶口塞紧，封口好后再次整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至128℃，保持2.5小时，再运出高压灭菌柜，运进冷却室冷却，冷却至25℃以下后按照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，整个生产过程中盐水瓶保持站立。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种天麻生产用蜜环菌菌种。

实施例4：

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

将杂木屑82.7％、小麦麸10％、玉米粉5％、石膏粉1％、白糖1％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％，干拌均匀，用装瓶机装入500ml盐水瓶中，培养料装满至盐水瓶瓶口为止，再将装满的盐水瓶装入灭菌周转筐中，整筐浸入水池中，用挡板压住，让池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，灌水60分钟后，取出周转筐，整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至100℃后，保持温度1.5小时后，停止加温，整筐运出高压灭菌柜进行冷却，冷却至85℃以下后，用棉塞对盐水瓶进行封口，将盐水瓶口塞紧，封口好后再次整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至126℃，保持3小时，再运出高压灭菌柜，运进冷却室冷却，冷却至25℃以下后按照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，整个生产过程中盐水瓶保持站立。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种天麻生产用蜜环菌菌种。

实施例5：

一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

将杂木枝条(提前预湿)73％、杂木屑10％、小麦麸10％、玉米粉5％、石膏粉1％、白糖1％，干拌均匀，人工装入600ml菌种瓶中，培养料装满至菌种瓶瓶口2cm处，再将菌种瓶装入灭菌周转筐中，整筐浸入水池中，用挡板压住，让池水自然流进菌种瓶中，自然灌水，灌水30分钟后，取出周转筐，整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至100℃后，保持温度1.5小时后，停止加温，整筐运出高压灭菌柜进行冷却，冷却至85℃以下后，用双层牛皮纸对广口瓶进行封口，将广口瓶封严，封口好后再次整筐运入高压灭菌柜，灭菌柜内通入水蒸汽加温，温度升至126℃，保持3小时，再运出高压灭菌柜，运进冷却室冷却，冷却至25℃以下后按照NY/T528-2010《食用菌菌种生产技术规程》标准要求进行接种培养等操作管理，整个生产过程中盐水瓶保持站立。至菌丝和菌索长满盐水瓶后，得到一种天麻生产用蜜环菌菌种。

Claims (1)

1.一种瓶装蜜环菌菌种的制备方法，其步骤是：

A、拌料：按照培养基配方称取培养料，干拌，各配料要混合均匀；

所述的培养基为杂木屑10-85%、杂木枝条1-85%、小麦麸10-25%、玉米粉1-5%、石膏粉0.5-2%、白糖0.5-2%、磷酸二氢钾0.1-0.2%、硫酸镁0.1-0.2%；

B、装瓶：将混拌均匀的干培养料装进菌种瓶，至装满至瓶口处；

C、装筐灌水：将装满的菌种瓶装入灭菌周转筐，整筐浸入水池中，用挡板压住，对菌种瓶进行自然灌水，直至灌满为止；

D、预灭菌：将灌满水的菌种瓶整筐运入灭菌灶或灭菌柜，温度升至95-105℃，保持1-2小时；

E、出灶：将预灭菌的菌种瓶整筐运出灭菌灶或灭菌柜，进行冷却至85℃以下；

F、封口：给冷却至85℃以下的菌种瓶进行封口操作，用封口物将菌种瓶口塞紧密封；封口物为瓶塞、瓶盖、棉塞、牛皮纸；

G、二次灭菌：将封口好的菌种瓶再次运进灭菌灶，进行常压：0.1MPa，97-103℃，10—16小时，或高压灭菌：0.12-0.15MPa，123-129℃，2—4小时；

H、冷却、接种、培养，整个生产过程中菌种瓶保持直立状态，防止了瓶内水份打湿封口物后期造成杂菌污染。