CN104335820A - 一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法 - Google Patents

一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，先选取阔叶树的树枝，将该树枝截成圆柱形的短棒并装于瓶中；向该瓶中灌装营养液后，盖上瓶盖，进行灭菌处理；冷却至常温后接种；然后在一定温度下避光培养。本发明以枝条作为培养基质，并添加了营养液，能给蜜环菌菌种提供足够的营养，缩短菌种的生产周期。同时，通过在合理的时间进行菌丝萌动、长势和污染排查，排出不能萌动、不吃料、长势较弱以及被污染的菌种，有效地提高了菌种的质量，保证了菌种的活力与后劲，为天麻的种植提供了优质菌种。

Description

一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法。
背景技术
天麻又名赤箭、独摇芝、离母、合离草、神草、鬼督邮、木浦、明天麻、定风草、白龙皮等，是兰科天麻属多年生草本植物。根状茎肥厚，无绿叶，蒴果倒卵状椭圆形，常以块茎或种子繁殖。其根茎入药用以治疗头晕目眩、肢体麻木等疾病。由于天麻的应用范围较广，市场需求量大，因而各地都在大量种植天麻。在种植天麻前，需要先要培养好蜜环菌菌材或菌床。
蜜环菌属于担子菌纲、伞菌目、真菌的一属，子实体一般中等大。蜜环菌的营养价值价高，含脂肪5.2％，碳水化合物75.9％，纤维素5.8％，灰分7.5％，热量384千卡。子实体中还含D-苏来醇，维生素A等，对治疗腰腿疼痛、佝偻病、癫痫病有功效。经常食用蜜环菌，可预防视力减退、夜盲、皮肤干燥，并可增强人体对某些呼吸道及消化道传染病的抵抗力。据国外报道，从蜜环菌子实体中分离出的水溶性葡聚糖和多肽葡聚糖，经动物试验，后者对小白鼠肉瘤S-180的抑制率为70％，对艾氏腹水癌的抑制率为80％。蜜环菌的固体发酵制品，蜜环菌片、银蜜片，可代替天麻作药，对高血压椎基底动脉供血不足、美尼尔氏症、植物神经功能紊乱等疾病引起眩晕的病人，治疗效果较好。对肢麻、失眠、耳鸣、中风后遗症等也有一定的疗效。蜜环菌是天麻不可缺少的互惠共生菌，栽培天麻必需蜜环菌的帮助。
蜜环菌菌种的培养有液体深层发酵和固体发酵两种方法。液体深层发酵的工艺流程如下：试管斜面菌种培养(25℃下培养15天)→500ml摇瓶种子培养(24～26℃下振荡培养15天)→500ml摇瓶种子培养(24～26℃下振荡培养5～6天)→5000ml摇瓶种子培养(24～28℃下振荡培养3～4天)→种子罐种子培养(24～28℃下通气培养4～5天)→发酵培养(24～28℃下通气培养7～8天)→发酵液过滤，烘干菌丝体，压片，或将发酵液浓缩制成糖浆。固体发酵的工艺流程如下：斜面菌种培养、一二级摇瓶种子的培养法与深层发酵的基本相同。二级种子培养后，接入用玉米粉、麦麸等配制的固体发酵料中，适温下培养30天，将菌丝体洗净、烘干、压片。采用固体发酵法培养蜜环菌菌种的生产周期较长，一般需要四个月左右，而且生产成本较高。采用液体深层发酵的优点在于，首先，菌种生长均匀，生长速度快。其次，成品率较高，有利用大规模生产。但是，其同样存在一些问题：第一，菌种易老化、活力差、后劲不足、生长缓慢、培养期偏长。第二，成品率偏低。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，以解决现有的培养蜜环菌菌种时，菌种易老化、后劲不足、生长缓慢，培养期偏长等技术问题。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题：
一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，先选取阔叶树的树枝，将该树枝截成圆柱形的短棒并装于瓶中；向该瓶中灌装营养液后，盖上瓶盖，进行灭菌处理；冷却至常温后接种；然后在一定温度下避光培养。
所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法具体包括以下步骤：
(1)基质的准备：采集阔叶树直径为1～3cm的树枝，将其晒干后，用截断机将该树枝截成3～5cm长的短棒；
(2)装瓶：将步骤(1)中所得的短棒装入700～800mL的塑料菌种瓶中，使装料料面距瓶口的高度为2～4cm为宜；
(3)灌装营养液并灭菌：向步骤(2)中所述的塑料菌种瓶中灌装380～420mL营养液，并将瓶盖盖上，在0.1～0.15MPa，120～121℃的环境下灭菌处理2～2.5h；
(4)接种：将步骤(3)中处理后的塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线、接种箱或接种台上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为18～22g原种；
(5)菌种培养：将步骤(4)中接种后的塑料菌种瓶置于培养室内，在22～25℃的温度下避光培养，接种6～8天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
进一步，所述步骤(1)中，阔叶树树枝的直径为2cm，短棒的长度为4cm。
进一步，所述步骤(2)中，塑料菌种瓶的体积为750mL，使装料料面距瓶口的高度为3cm。
进一步，所述步骤(3)中，灭菌处理还可以在100℃，常压下处理8～12h。
所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照97～99：0.5～1.5：0.5～1.5：0.05～0.15：0.04～0.06的重量份配制而成。
进一步，所述步骤(4)中，每瓶塑料菌种瓶接种20g。
本发明的有益效果为：
首先，本发明以枝条作为培养基质，并添加了营养液，能给蜜环菌菌种提供足够的营养，缩短菌种的生产周期。
其次，本发明培养液的原料来源丰富，成本低廉，且配比范围明确，配比合理，在满足蜜环菌菌种生长所需的营养的前提下培养出高品种的蜜环菌菌种。
再次，本发明通过在合理的时间进行菌丝萌动、长势和污染排查，排出不能萌动、不吃料、长势差以及被污染的菌种，有效的提高了菌种的质量。
最后，同传统方法相比，本发明的生产的菌种活力高、不宜退化、后劲足，为天麻的种植提供了优质的蜜环菌菌种。且生产周期显著缩短，有利于进行工业化生产。
具体实施方式
为了方便本领域的技术人员理解，下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。实施例仅仅是对该发明的举例说明，不是对本发明的限定，实施例中未作具体说明的步骤均是已有技术，在此不做详细描述。
实施例一
采集板栗树直径为1cm的树枝，晒干后，用截断机将该树枝截成3cm长的短棒；将该短棒装入700mL的塑料菌种瓶中，使料面距瓶口的高度为4cm；然后向塑料菌种瓶中灌装380mL营养液，并将瓶盖盖上，在0.1MPa，120℃的条件下灭菌处理2h；再将塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为18g原种；接着将塑料菌种瓶置于培养室内，在22℃的温度下避光培养，接种6天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照97：0.5：0.5：0.05：0.04的重量份配制而成。
采用该方法进行培养2150瓶蜜环菌菌种，培养时间为32天，大大缩短了蜜环菌菌种的培养周期。最终得到2073瓶，成品率为96.4％，且菌种活力强生长点长。
实施例二
采集桦槁树直径为3cm的树枝，晒干后，用截断机将该树枝截成5cm长的短棒；将该短棒装入800mL的塑料菌种瓶中，使料面距瓶口的高度为2cm；然后向塑料菌种瓶中灌装420mL营养液，并将瓶盖盖上，在0.15MPa，121℃的条件下灭菌处理2.2h；再将塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为22g原种；接着将塑料菌种瓶置于培养室内，在25℃的温度下避光培养，接种8天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照99：1.5：1.5：0.15：0.06的重量份配制而成。
采用该方法进行培养2150瓶蜜环菌菌种，培养时间为26天，大大缩短了蜜环菌菌种的培养周期。最终得到2077瓶，成品率为96.6％，且菌种活力强生长点长。
实施例三
采集野樱桃树直径为2cm的树枝，晒干后，用截断机将该树枝截成4cm长的短棒；将该短棒装入750mL的塑料菌种瓶中，使料面距瓶口的高度为3cm；然后向塑料菌种瓶中灌装380mL营养液，并将瓶盖盖上，在0.1MPa，121℃的环境下灭菌处理2.5h；再将塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为20g原种；接着将塑料菌种瓶置于培养室内，在25℃的温度下避光培养，接种7天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照98：1：1：0.1：0.05的重量份配制而成。
采用该方法进行培养2150瓶蜜环菌菌种，培养时间为30天，大大缩短了蜜环菌菌种的培养周期。最终得到2085瓶，成品率为97％，且菌种活力强生长点长。
实施例四
采集板栗树直径为1.5cm的树枝，晒干后，用截断机将该树枝截成3.5cm长的短棒；将该短棒装入720mL的塑料菌种瓶中，使料面距瓶口的高度为2.5cm；然后向塑料菌种瓶中灌装390mL营养液，并将瓶盖盖上，在常压，100℃的环境下灭菌处理12h；再将塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为19g原种；接着将塑料菌种瓶置于培养室内，在23℃的温度下避光培养，接种7天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照98：0.7：0.7：0.08：0.05的重量份配制而成。
采用该方法进行培养2150瓶蜜环菌菌种，培养时间为31天，大大缩短了蜜环菌菌种的培养周期。最终得到2071瓶，成品率为96.3％，且菌种活力强生长点长。
实施例五
采集青冈树直径为2.5cm的树枝，晒干后，用截断机将该树枝截成3.5cm长的短棒；将该短棒装入780mL的塑料菌种瓶中，使料面瓶中短棒距瓶口的高度为3.5cm为宜；然后向塑料菌种瓶中灌装410mL营养液，并将瓶盖盖上，在常压，100℃的环境下灭菌处理8h；再将塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为21g原种；接着将塑料菌种瓶置于培养室内，在25℃的温度下避光培养，接种7天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
上述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照98：1.2：1.2：0.12：0.05的重量份配制而成。
采用该方法进行培养2150瓶蜜环菌菌种，培养时间为31天，大大缩短了蜜环菌菌种的培养周期。最终得到2079瓶，成品率为96.7％，菌种活力强生长点长。

Claims (7)

1.一种天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，先选取阔叶树的树枝，将该树枝截成圆柱形的短棒并装于瓶中；向该瓶中灌装营养液后，盖上瓶盖，进行灭菌处理；冷却至常温后接种；然后在一定温度下避光培养。
2.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)基质的准备：采集阔叶树直径为1～3cm的树枝，将其晒干后，用截断机将该树枝截成3～5cm长的短棒；
(2)装瓶：将步骤(1)中所得的短棒装入700～800mL的塑料菌种瓶中，使斜面距瓶口的高度为2～4cm为宜；
(3)灌装营养液并灭菌：向步骤(2)中所述的塑料菌种瓶中灌装380～420mL营养液，并将瓶盖盖上，在0.1～0.15MPa，120～121℃的环境下灭菌处理2～2.5h；
(4)接种：将步骤(3)中处理后的塑料菌种瓶冷却至常温后置于接种线、接种箱或接种台上，进行无菌操作接种，每瓶接种量为18～22g原种；
(5)菌种培养：将步骤(4)中接种后的塑料菌种瓶置于培养室内，在22～25℃的温度下避光培养，接种6～8天后进行菌丝萌动和污染排查，排出不能萌动与被污染的菌种；当菌种吃料到1/3时，进行菌丝长势与排杂观察，排除不吃料和被杂菌感染的菌种；当菌种长到瓶体积的2/3时，再次进行菌丝长势与排杂观察，当菌种长到瓶口时，即可包装出库。
3.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，所述步骤(1)中，阔叶树树枝的直径为2cm，短棒的长度为4cm。
4.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，所述步骤(2)中，塑料菌种瓶的体积为750mL，使料面距瓶口的高度为3cm。
5.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，所述步骤(3)中，灭菌处理还可以在常压，100℃的温度下处理8～12h。
6.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，所述营养液是由水、玉米粉、白糖、磷酸二氢钾和硫酸镁按照97～99：0.5～1.5：0.5～1.5：0.05～0.15：0.04～0.06的重量份配制而成。
7.如权利要求1所述的天麻伴生菌蜜环菌菌种的制作方法，其特征在于，所述步骤(4)中，每瓶塑料菌种瓶接种20g。
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