CN102786333B - 桑黄袋料栽培培养基及采用该培养基栽培桑黄子实体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，为了解决目前野生桑黄资源的不足，人工栽培中袋料栽培存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌的问题，本发明提供一种桑黄袋料栽培培养基及采用该培养基栽培桑黄子实体的方法，所述的桑黄袋料栽培培养基由营养料与水混合后装袋制成，然后在温度110~135℃，压力0.05~0.25MPa，灭菌30~180min，其中营养料与水的质量比为1：1.8~2.5。采用本发明的桑黄袋料培养基配方，可以提供桑黄子实体生长所摄取的营养物质，培养的桑黄子实体近似野生桑黄、质量稳定，同时本发明的培养方式简单，可用于具有药用价值的桑黄子实体规模化栽培。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及桑黄袋料培养培养基配方以及采用该培养基规模化栽培桑黄子实体的方法。
背景技术
桑黄，担子菌亚门，层菌纲，多孔菌目，多孔菌科，针层孔菌类真菌。学名
Phellinus Linteus，中文名裂蹄针层孔菌，俗称桑臣、桑黄菇等；是寄生于桑树等阔叶树的一种药用真菌，素有“森林黄金”之美称。据《药性论》记载：味甘辛，无毒。《全国中草药汇编》则记载桑黄具有“利五脏，软坚，排毒，止血，活血和胃止泻”等功效，是目前国际公认的生物抗癌领域中有效率最佳的药用真菌。
目前，由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，桑黄在自然界中形成子实体困难，造成天然的桑黄数量非常稀少，自然界中可供药用的资源有限，加之国内外市场对桑黄的需求量越来越大，致使国内各产地药农掠夺性采集，子实体无法大量形成，难以成为稳定的工业产品来源，对桑黄产业的发展十分不利，因此通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。但是桑黄人工栽培极其困难，存在着培养条件苛刻、生长周期长的问题。
目前栽培的人工栽培主要有两种，一种是以桑树、杨树、栎树的段木栽培为主，段木栽培需要大量的木材资源，资源浪费比较严重，难以规模化栽培；另一种是袋料栽培，但是存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。
申请号为200410041704.X的中国专利公开了一种桑黄人工高产栽培方法及桑黄子实体的应用，该发明采用袋料栽培，为了解决培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。在培养基中添加了生长素，生长素的添加没有从根本上解决培养基的问题，而且生长素的添加对桑黄的品质有影响，同时不利于桑黄的天然生长。
发明内容
为了解决目前野生桑黄资源的不足，人工栽培中袋料栽培存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌的问题，本发明提供一种桑黄袋料栽培培养基，采用桑黄袋料培养基配方，可以提供桑黄子实体生长所摄取的营养物质；
同时本发明提供一种采用该培养基规模化栽培桑黄子实体的方法，本发明培养的桑黄子实体近似野生桑黄、质量稳定，同时本发明的培养方式简单，可用于具有药用价值的桑黄子实体规模化栽培。
为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：一种桑黄袋料栽培培养基，所述的桑黄袋料栽培培养基由营养料与水混合后装袋制成，然后在温度110~135℃，压力0.05~0.25MPa，灭菌30-180min，其中营养料与水的质量比为1：1.8~2.5。如果高温灭菌不彻底，当采用桑黄袋料栽培培养基栽培桑黄子实体时，杂菌会从袋装培养基的中部或底部发生。
所述的桑黄袋料栽培培养基的营养料由以下组份混合制成，各组分的质量百分比为：桑枝木屑40~80%，桑叶粉5~20%，谷粒10~30%，糖0.5~2%，生石灰1%~5%，KH2PO40.1%~2%，MgSO40.1~2%。
选用生石灰不仅可以灭菌，给桑黄菌提供一个良好的生长环境，还可以为培养基提供Ca2+元素，而且成本比石膏粉低。
谷粒选自玉米粒、麦粒、稻谷中一种。相对于目前常用的米糠或麦麸，可以提供更加充足的营养，使桑黄菌生长状况更好；桑黄菌的母种目前大都采用谷粒培养的，转接后对菌种来说更容易适应环境；选用谷粒取代了目前常用的另一种基材-棉籽壳，可以避免棉籽壳中的有害成分棉酚进入桑黄子实体中，从而提高桑黄的品质。
作为优选，糖选为蔗糖或者葡萄糖。
由于桑黄以桑树长出来的子实体为佳，因此利用桑枝木屑、桑叶粉为基材进行培养，能够提供最佳生长营养条件，提高其品质；同时充分利用蚕桑废弃资源，有利于环保和可持续开发利用。虽然桑树枝木段培养基上桑黄菌丝生长良好，菌蕾出现时间早，但是桑树长得慢，资源有限，如果都用桑树段木的话，不仅无法形成规模化培养，而且不环保，因此菌袋是发展趋势。
本发明的桑黄袋料栽培培养基的组成成分解决了袋装培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。
一种采用桑黄袋料栽培培养基栽培桑黄子实体的方法为以下步骤：
a）桑黄菌袋培养基的菌丝体培养方法：在无菌环境中往桑黄菌袋培养基中接入桑黄母种，接种量为桑黄菌袋培养基质量的5~20%，将接种后的桑黄菌袋培养基置于25~30℃恒温中培养，空气湿度50~80%，桑黄菌袋培养基湿度50~60%，光照强度10-30lux，通风换气次数1~5次/天，每次的时间5~30min，培养时间60-90天；
b）采用菌袋培养基规模化栽培桑黄子实体的方法：将步骤a）长满菌丝体的菌袋的一端埋入土中，埋入土中的菌袋长度菌袋长度的1/3~1/2，另一端裸露在外面，栽培3~9天后在桑黄菌袋培养基的袋子上划开切口出菇，作为优选，采用环割方式划开切口出菇，切口为半月形，切口长度约为袋料周长的三分之一，面积2-9cm2，数量为2~8个，培养温度25~30℃，土壤湿度40~75%，空气湿度85~98%，光照强度20~200lux，通风换气次数1~8次/天，每次的时间5~30min，7~10天后即可形成桑黄子实体，培养时间75天~4年。因为桑黄是多年生的，75天就可以长到成品的大小，以后的生长很缓慢，但是年限越长，桑黄子实体药用效果越好。作为优选，栽培6天后采用环割方式出菇，切口为半月型，约5cm2，栽培温度28℃，土壤湿度60%，空气湿度95%。
作为优选，从桑黄菌袋培养基的袋子上划开切口出菇到形成桑黄子实体期间要采取变温处理，调节昼夜温差，刺激利于子实体的形成和生长。一般从桑黄菌袋培养基的袋子上划开切口出菇到形成小的桑黄子实体的7~10内，采用通风换气等方法，调节昼夜温差，使昼夜温差控制在10℃以上。作为优选，白天温度控制在25~30℃左右，夜晚控制在12~18℃左右。桑黄子实体形成后可恢复常温培养温度25~30℃。
桑黄母种来源于从野外采集来的野生桑黄子实体，经过菌种鉴定后，采用常规方法分离纯化得到桑黄菌株，接种到母种培养基中培养，获得桑黄母种。
一般桑黄菌丝开始萌发时杂菌也就开始生长。因此接入桑黄母菌时要在无菌环境中，如果接种室消毒不严或者操作时带进杂菌，会造成杂菌感染，还有原种是否有杂菌感染等。若是原种本身有杂菌，接种后菌种培养基表面全是杂菌，若是接种操作不当，只是部分袋装培养基表面滋生杂菌，而不是全部感染杂菌。 桑黄菌丝对温度的变化很敏感，试验说明，菌丝的生长速度随温度的升高而加快，到28℃时最快，随后随温度的升高生长速度逐渐降低；但是菌袋放在28℃下培养，大量的菌袋堆在发菌室中，杂菌繁殖快，菌棒极易被污染，将菌袋放在26℃的条件下培养可减少污染。因此作为优选，菌丝生长阶段温度应控制在26℃。同样菌丝生长阶段对于湿度和通风、光照也有要求。
在桑黄子实体形成和分化阶段同样要求有适当的温度、湿度、光线和通气条件。避免强日光直射，否则子实体很难分化或不分化。桑黄要求有良好的通气条件，对二氧化碳非常敏感，如果通气不良，会使子实体发育畸形。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
（1）采用本发明的袋料培养基可快速、规模化栽培桑黄子实体，近似野生桑黄，并且质量稳定；
（2）本发明培养方式简单，可用于具有药用价值的桑黄子实体大规模培养。
（3）本发明可以充分利用桑枝、桑叶等资源，能够有效减少段木资源的浪费，利于环保。
具体实施方法：
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。所用原料均可市购，桑黄母种是采用常规方法分离纯化得到桑黄菌株，接种到母种培养基中培养，获得桑黄母种。
实施例1
配置本发明中所述的桑黄子实体培养基1千克，每千克中营养料各组份重量为：桑枝木屑720克，桑叶粉100克，玉米颗粒100克，蔗糖10克，生石灰50克，KH2PO410克，MgSO410克；按配方搅拌均匀，加水1.8千克，拌好后装袋，袋装培养基通过高压灭菌，灭菌条件：压力0.15MPa，温度112℃，时间180min，得到桑黄袋料栽培培养基。
将桑黄母种在无菌室中接种于上述桑黄袋料栽培培养基中，接种量10%，将接种后的菌棒培养温度26℃，空气湿度75%，袋料湿度50%，光照强度20lux，通风换气次数2次/天，每次10min，培养时间75天；
将长满菌丝体的菌袋下面三分之一埋入土中，三分之二裸露在外面，对菌袋栽培3天后采用环割方式出菇，切口5个，面积约2cm2，出菇后采用通风换气方法，调节昼夜温差，白天温度控制在26℃左右，夜晚控制在15℃左右，5天后桑黄子实体形成，然后栽培温度26℃，空气湿度95%，光照强度100lux，通风换气次数3次，每次20min，培养时间90天，培养结束后可获得桑黄子实体35克。
实施例2：
配置本发明中所述的桑黄子实体培养基1千克，每千克中营养料各组份重量为：桑枝木屑700克，桑叶粉100克，麦粒135克，葡萄糖15克，生石灰20克，KH2PO415克，MgSO415克；按配方搅拌均匀，加水2.5千克，拌好后装袋，袋装培养基通过高压灭菌，灭菌条件：压力0.05MPa，温度121℃，时间120min，得到桑黄袋料栽培培养基。
将桑黄母种在无菌室中接种于上述桑黄袋料栽培培养基中，接种量15%，将接种后的菌棒培养温度28℃，空气湿度65%，袋料湿度55%，光照强度10lux，通风换气次数3次/天，，每次30min，培养时间60天；
将长满菌丝体的菌袋下面二分之一埋入土中，其余裸露在外面，对菌袋进行栽培，栽培5天后采用环割方式出菇，切口3个，面积5cm2，出菇后采用通风换气方法，调节昼夜温差，白天温度控制在28℃左右，夜晚控制在15℃左右。7天后桑黄子实体形成，然后栽培温度28℃，空气湿度90%，光照强度120lux，通风换气次数5次，每次10min，培养时间100天。培养结束后可获得桑黄子实体30克。
实施例3：
配置本发明中所述的桑黄子实体培养基1千克，每千克中营养料各组份重量为：桑枝木屑650克，桑叶粉100克，稻谷200克，蔗糖10克，生石灰15克，KH2PO415克，MgSO410克；按配方搅拌均匀，加水2.3千克，拌好后装袋，袋装培养基通过高压灭菌，灭菌条件：压力0.15MPa，温度128℃，时间90min，得到桑黄袋料栽培培养基。
将桑黄母种在无菌室中接种到上述桑黄袋料栽培培养基中，接种量20%，将接种后的菌棒培养温度26℃，空气湿度70%，袋料湿度60%，光照强度15lux，通风换气次数5次/天，每次10min，培养时间80天；
将长满菌丝体的菌袋下面三分之一埋入土中，其余裸露在外面，对菌袋进行栽培，栽培9天后采用环割方式出菇，切口4个，面积9cm2，出菇后采用通风换气方法，调节昼夜温差，白天温度控制在25℃左右，夜晚控制在14℃左右。10天后桑黄子实体形成，然后栽培温度25℃，空气湿度95%，光照强度80lux，通风换气次数4次/天，每次20min，培养时间105天。培养结束后可获得桑黄子实体32克。
实施例1、实施例2和实施例3培养出的桑黄子实体呈马蹄形，质地坚硬，单层片大而质优，子实体呈深黄至浅咖啡色，近似野生桑黄，根据报道是目前桑黄子实体规模化种植唯一成功的实例。
以上所述仅为本发明的具体实施例，但本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在本发明的领域内，所作的变化或修饰皆涵盖在本发明的专利范围之中。
Claims (6)
1. 一种桑黄袋料栽培培养基，其特征在于：所述的桑黄袋料栽培培养基由营养料与水混合后装袋制成，然后在温度110～135℃，压力0.05～0.25Mpa，灭菌30～180min，其中营养料与水的质量比为1：1.8～2.5，所述的桑黄袋料栽培培养基的营养料由以下组分混合制成，各组分的质量百分比为：桑枝木屑40～80%，桑叶粉5～20%，谷粒10～30%，糖0.5～2%，生石灰1%～5%，KH2PO40.1%～2%，MgSO40.1～2%。
2. 根据权利要求1所述的桑黄袋料栽培培养基，其特征在于：谷粒选自玉米粒、麦粒、稻谷中一种。
3. 根据权利要求1所述的桑黄袋料栽培培养基，其特征在于：糖选为蔗糖或者葡萄糖。
4. 一种采用如权利要求1至3中任一所述的桑黄袋料栽培培养基栽培桑黄子实体的方法，其特征在于：所述的方法为以下步骤：
a）桑黄菌袋培养基的菌丝体培养方法：在无菌环境中往桑黄菌袋培养基中接入桑黄母种，接种量为桑黄菌袋培养基质量的5～20%，将接种后的桑黄菌袋培养基置于25～30℃恒温中培养，空气湿度50～80%，桑黄菌袋培养基湿度50～60%，光照强度10-30lux，通风换气次数1～5次/天，每次的时间5～30min，培养时间60-90天；
b）采用菌袋培养基规模化栽培桑黄子实体的方法：将步骤a）长满菌丝体的菌袋的1/3～1/2埋入土中，栽培3～9天后在桑黄菌袋培养基的袋子上划开切口出菇，切口2～8个，培养温度25～30℃，土壤湿度40～75%，空气湿度85～98%，光照强度20～200lux，通风换气次数1～8次/天，每次的时间5～30min，培养时间75天～4年。
5. 根据权利要求4所述的采用桑黄袋料栽培培养基栽培桑黄子实体的方法，其特征在于：步骤b）中在桑黄菌袋培养基的袋子上采用环割方式划开切口出菇，切口为半月型。
6. 根据权利要求4或5所述的采用桑黄袋料栽培培养基栽培桑黄子实体的方法，其特征在于：步骤b）中从桑黄菌袋培养基的袋子上划开切口出菇到形成子实体期间调节昼夜温差，昼夜温差控制在10℃以上。
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