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Abstract

本发明公开了一种野生干巴菌原生态种植方法，具体通过自然干巴菌菌种分离、二级栽培种的制备及培育、选择干巴菌的生长环境、栽培种侵染扩繁及正常管理来完成。本发明方法从自然界采集，经实验室驯化、培养，制造驯化种，再进行种植，长出野生干巴菌，既修复了原来的松林和生态，保证了野生干巴菌品质，又大大提高了产量，有利于野生干巴菌的人工生态扩繁。

Description

一种野生干巴菌原生态种植方法
技术领域
本发明属于食用菌人工栽培技术领域，涉及一种野生干巴菌原生态种植方法。
背景技术
干巴菌是云南省特有的珍稀野生食用菌，中国其他省份及国外都无法生长，学名绣球菌，也叫对花菌、马牙菌等，它生长在滇中及滇西的山林松树间，产于七八月雨季，至今仍未实现人工种殖。由于受自然环境条件的制约，产量相当有限，至今仍未实现人工栽培。干巴菌含粗蛋白24.15％，粗纤维8.45％，总糖量3.1％，100g含维生素C1.10mg，维生素A16.0mg，B族维生素1.2mg；含有18种氨基酸和人体必需的8种氨基酸；从干巴菌中还发现一系列新的对联三苯类色素，具有高度抗氧化活性；干巴菌中含有的多种微量元素铁、钾、纳、磷、钙，特别是人体普遍缺乏的硒元素，其含量高达4603.59μg/100g，属于罕见的富硒珍贵野生菌，硒有抑制肿瘤细胞增殖和提高机体免疫功能。干巴菌营养丰富，香味独特，一直以来都处于供不应求状况。
目前，市场的供应完全依赖于采集野生资源，在利益的驱使下，野生干巴菌被过度采收，促使野生干巴菌自然资源遭到严重破坏，产量和质量逐年下降，价格连年攀升，因此开发一种野生干巴菌原生态种植技术是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种野生干巴菌原生态种植方法，实现了利用自然环境人工干预制种，并培育野生干巴菌的生态种植技术。
本发明具体通过以下技术方案实现：
一种野生干巴菌原生态种植方法，具体包括以下步骤：
1)自然干巴菌菌种分离：
选择5～7月自然环境条件下生长的干巴菌子实体，接种于菌种分离培养皿中，经过纯化、鉴定、基因测序，确定为干巴菌菌种，该菌种为一级种；
2)二级栽培种的制备：
所述的二级栽培种分为固体二级种和液体二级种，具体为：
固体二级种：将固体培养基在121℃灭菌1.5～2小时待温度下降到室温，无菌条件下接入经纯化的干巴菌一级种；
液体二级种：将液体培养基高压蒸汽121℃灭菌0.5～1.0小时，冷至室温，接种一级种，在湿度60％～80％条件下摇床发酵培养5～15天；
3)固体二级栽培种的培育：
在温度15℃～26℃，湿度60％～80％条件下，培养18～32天，培养基呈现白色菌丝整齐排列，生长饱满，子实体菌肉整齐聚合为一体；
4)选择具有野生干巴菌的生态土壤，土壤PH4.0～7.5，有机质1.0以上；
5)固体二级栽培种侵染扩繁：在松树根周围选点，形成人工菌丝浸染，根据松树生长年龄，选株行距2米×2米＝166株/亩，株行距2米×3米＝111株/亩，株行距1.5米×2米＝222株/亩，株行距1.5米×3米＝148株/亩，每亩以200穴点至250穴点栽培；穴点直径10cm，深10～12cm，覆土2～3cm。
6)接种后穴点覆盖遮阴网，适期观察干湿度、昆虫危害；
7)采收。
所述的固体培养基通过以下方法制备：选颗粒饱满苦荞或甜荞15％～40％，浸泡36～75小时，按固体栽培种配松针1％～5％、松树皮5％～10％、松木屑5％～15％，棉籽壳15％～50％，玉米芯15％～30％，麦麸10％～25％，石膏粉0.1％～1.5％，PH5.0～7.5，瓶装或袋装。
所述的液体培养基通过在PDA培养基中加入质量分数1％～15％的松针浸汁和质量分数0.1％～0.5％的石膏粉制得。
所述的干巴菌的生长环境为光照度250～850Lux，海拔1300～2350米，年均温度12.5℃～26℃的松林地环境。
步骤(5)所述的栽培种侵染具体为：
1)液体菌种浸染：每一个浸染点注射10～40毫升液体栽培种，分为灌根法和侧根注射法。
2)固体栽培种浸染：①断根法：采用直径14cm干巴菌打孔器在松树周围距主干60～80cm处打10～12cm深孔，接固体栽培种每穴100～200克；②须根、侧根接种法：露出地面的松树根，用干巴菌打孔器打孔接种，每穴100～200克，孔穴深度10～12cm。
本发明的有益效果为：通过本项发明，为野生干巴菌后期进行仿生态种植打下基础，可以对产量及质量进行控制。实现了来自自然界的食用菌经驯化、培养后再回到自然种植突破。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
实施例1
选宜良县汤池镇(松树林200亩)，进行野生干巴菌的原生态种植，具体通过以下方法：
1)菌种分离培养基：PDA培养基中加入质量分数1％～15％的松针浸汁制作成母种分离培养基。
2)自然干巴菌菌种分离：选择在5月至7月自然环境条件下生长的干巴菌子实体，接种于菌种分离培养皿中，经过纯化、鉴定、基因测序，确定为干巴菌菌种，供制备袋或瓶装培养基培养菌丝体用，该菌种为一级种。
3)二级栽培种制备：选颗粒饱满苦荞或甜荞15％～40％，浸泡36～75小时，配松针1％～5％、松树皮5％～10％、松木屑5％～15％，棉籽壳15％～50％，玉米芯15％～30％，麦麸10％～25％，石膏粉0.1％～1.5％，PH5.0～7.5，瓶装或袋装。121℃灭菌1.5～2小时。待温度下降到室温，无菌条件下接入经纯化的干巴菌一级种。
4)培养条件：经接种的栽培种放到温度15℃～26℃，湿度60％～80％，培养18～32天，袋装或瓶装培养基呈现白色菌丝整齐排列，生长至满袋，满瓶，其状如子实体的菌肉整齐聚合为一体。
5)菌丝分泌黑色素在15℃～28℃，湿度65％～85％，培养时间为15～30天，白色菌丝体分泌黑色素，从点到面逐渐转黑，至全袋或整瓶变成黑色菌丝体，随培养时间延长，菌丝体黑色素不断增加，留用作为栽培种。
6)于2013年6月20日接种固体种，栽培面积6亩，采用干巴菌专用打孔器打穴，每穴接种固体培养基200克，每亩行株距1.1米×1.5米，该地在松林茂盛，每亩中240个点穴，当年遇干旱季节，接种后两周采取遮阴管理，当年干巴菌收入少，亩共收干巴菌1公斤(2009～2013年是云南干旱期)。2014年5月进入雨季，6～8月共收获干巴菌50～60公斤，每公斤市场价1000元，2014年收入6～7万元。
实施例2
选宜良县汤池镇(松树林1亩)，进行野生干巴菌的原生态种植，具体通过以下方法：
1)菌种分离培养基：PDA培养基中加入质量分数1％～15％的松针浸汁制作成母种分离培养基。
2)自然干巴菌菌种分离：选择在5月至7月自然环境条件下生长的干巴菌子实体，接种于菌种分离培养皿中，经过纯化、鉴定、基因测序，确定为干巴菌菌种，供制备袋或瓶装培养基培养菌丝体用，该菌种为一级种。
3)二级栽培种制备：PDA培养基中加入质量分数1％～15％的松针浸汁，质量分数0.1％～0.5％的石膏粉，高压蒸汽121℃灭菌0.5～1.0小时，灭菌完毕后，待冷至室温时，接种一级种，湿度60％～80％，摇床发酵培养5～15天，作为液体二级栽培种。
4)培养条件：经接种的栽培种放到温度15℃～26℃，湿度60％～80％，培养18～32天，袋装或瓶装培养基呈现白色菌丝整齐排列，生长至满袋，满瓶，其状如子实体的菌肉整齐聚合为一体。
5)菌丝分泌黑色素在15℃～28℃，湿度65％～85％，培养时间为15～30天，白色菌丝体分泌黑色素，从点到面逐渐转黑，至全袋或整瓶变成黑色菌丝体，随培养时间延长，菌丝体黑色素不断增加，留用作为栽培种。
6)于2013年6月20日接种液体种，每穴接种液体菌种40毫升，当年干旱液体菌种受影响，当年仅为接种穴的20％。2014年液体菌种接种的200穴，60％的穴点均收获干巴菌。

Claims (5)

1.一种野生干巴菌原生态种植方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)自然干巴菌菌种分离：选择5～7月自然环境条件下生长的干巴菌子实体，接种于菌种分离培养皿中，经过纯化、鉴定、基因测序，确定为干巴菌菌种，该菌种为一级种；
2)二级栽培种的制备：
将固体培养基在121℃灭菌1.5～2小时待温度下降到室温，无菌条件下接入经纯化的干巴菌一级种；
3)固体二级栽培种的培育：在温度15℃～26℃，湿度60％～80％条件下，培养18～32天，培养基呈现白色菌丝整齐排列，生长饱满，子实体菌肉整齐聚合为一体；
4)选择具有野生干巴菌的生态土壤，土壤PH4.0～7.5，有机质1.0以上；
5)二级栽培种侵染：在松树根周围选点，形成人工菌丝浸染，根据松树生长年龄，选株行距2米×2米＝166株/亩，株行距2米×3米＝111株/亩，株行距1.5米×2米＝222株/亩，株行距1.5米×3米＝148株/亩，每亩以111穴点至250穴点栽培；穴点直径10cm，深10～12cm，覆土2～3cm，每亩以111穴点至250穴点栽培；
6)接种后穴点覆盖遮阴网，适期观察干湿度、昆虫危害；
7)采收。
2.根据权利要求1所述的一种野生干巴菌原生态种植方法，其特征在于：所述的固体培养基通过以下方法制备：选颗粒饱满苦荞或甜荞15％～40％，浸泡36～75小时，按固体栽培种配松针1％～5％、松树皮5％～10％、松木屑5％～15％，棉籽壳15％～50％，玉米芯15％～30％，麦麸10％～25％，石膏粉0.1％～1.5％，PH5.0～7.5，瓶装或袋装。
3.根据权利要求1所述的一种野生干巴菌原生态种植方法，其特征在于：所述的干巴菌的生长环境为光照度250～850Lux，海拔1300～2350米，年均温度12.5℃～26℃的松林地环境。
4.根据权利要求1所述的一种野生干巴菌原生态种植方法，其特征在于：步骤(5)所述的点穴栽培具体为：采用直径14cm干巴菌打孔器在松树周围距主干60～80cm处打10～12cm深孔，接固体栽培种每穴100～200克。
5.根据权利要求1所述的一种野生干巴菌原生态种植方法，其特征在于：步骤(5)所述的点穴栽培具体还为：露出地面的松树根，用干巴菌打孔器打孔接种，每穴100～200克，孔穴深度10～12cm，覆土2～3cm。
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