CN107950288A - 一种草菇的栽培工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及草菇的栽培工艺。本发明主要是利用含麸液体培养基选择优良菌种，采取高压蒸汽灭菌，接种量10%，在32℃的条件下固定在200r/min的摇床培养144h，进行草菇液体菌种发酵培养，培养后的液体菌种在无菌条件下接种至100%菌渣的栽培袋中栽培。本发明的草菇液体菌种配方及熟料栽培工艺，培育高质量的草菇液体菌种，利用价格低廉的麦麸加入培养基培养菌种，利用废料菌渣栽培，变废为宝，实现了高效生产，大大节省了经济成本。
Description
技术领域
本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及草菇的栽培工艺。
背景技术
草菇(Volvariellavolvacea)是一种生长于热带和亚热带的腐生真菌，属于真菌界(Fungi)，担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，伞菌目(Agaricales)，光柄菇科(Pluteaceae)，小包脚菇属(Volvariella)。草菇又名兰花菇、苞脚菇，起源于我国南方地区，是一种重要的热带亚热带菇类，是世界上第三大栽培食用菌，我国草菇产量居世界之首，主要分布于华南地区。草菇不仅味美而且营养价值丰富。鲜菇肉质肥嫩，爽口；干菇芳香浓郁，是宴席珍品。其含有的蛋白质高于一般的蔬菜，因此备受青睐。鲜草菇含蛋白质2.68％、脂肪2.21％、碳水化合物2.60％，还含有维生素B、C、D、K、烟酸等。草菇蛋白质中含有17种氨基酸,其中含有人体必需的8种氨基酸。草菇也有防癌、降低胆固醇和血压的功效。草菇的维生素C含量高，能促进人体新陈代谢，提高机体免疫力，增强抗病能力。它还具有解毒作用，如铅、砷、苯进入人体时，可与其结合，形成抗坏血元，随小便排出。草菇还含有一种异种蛋白物质，有消灭人体癌细胞的作用。所含粗蛋白含量超过香菇，其他营养成分与木质类食用菌也大体相当，同样具有抑制癌细胞生长的作用，特别是对消化道肿瘤有辅助治疗作用，能加强肝肾的活力。同时能够减慢人体对碳水化合物的吸收，是糖尿病患者的良好食品。
草菇适宜的生长温度为28～38℃，是现有食用菌中最高的。全年平均生物学效率仅为10％(稻草培养基)～25％(废棉培养基)，由于近年来废棉价格大幅度上涨，在原料中掺假导致平均生物学效率下降到20％以下，在食用菌品种中是最低的。再加上常规的菇房栽培过程中，菌种易退化、病虫害严重、菇房高温闷湿、劳动强度大、产品质量不稳定、废渣浪费严重等问题相对于其他菇种的栽培更为突出，草菇的工厂化栽培已经到了势在必行的程度。
CN 101692771 B披露了一种涉及草菇栽培方法，该发明的培养料的成分中包含有7～8份鲜玉米衣、2～3份鲜玉米须，将鲜玉米衣、鲜玉米须用粉碎揉丝机同时加工，分别将玉米衣加工成柔丝状，将玉米须切短拉断，同时将两种加工后的原料充分混合，培养料的水份控制在65～70％；培养料加工完成后，即可用于草菇栽培或装进贮存器、贮存间中压实密封保存。本发明利用甜玉米加工后的废料周年生产无公害草菇，变废为宝，资源循环利用，可节约用水资源，减少污水排放，保护生态环境，降低生产成本，提升产品的质量，增加了经济效益。其生物转化率为26.6％。
CN 104206177 B公开了一种草菇的栽培方法，包括以下步骤：(1)准备培养基；(2)制备菌包，将培养基装袋，灭菌，然后接种，培养得到菌丝；(3)出菇管理：a、将步骤(2)中制得的菌包从中部切断，再将切断后的菌包切面朝上置入筐中，覆盖薄膜；b、1～2天后掀开薄膜并喷水，喷水至筐内积水1～3cm深；(4)采收。本发明草菇的栽培方法，将菌包从中部横向切断，可刺激草菇原基在切面整齐形成；将菌包置入筐内进行出菇管理，操作更为方便，提高工作效率；框内灌水可很好维持菇房环境湿度，减少喷水的工作量，避免直接喷水于培养料上造成菇蕾萎缩和死菇的现象；通过框内灌水调节湿度的方法易于掌握，便于推广。其生物学转化率最高达到了31.8％。
CN 104521570 B发明了一种草菇栽培方法，是将香菇柄脚应用到草菇栽培中的技术。该发明与现有技术相比的优势在于：一是香菇柄脚浸出液是纯天然营养液，含有种类丰富的生物活性物质，添用香菇柄脚浸泡料与栽培原料拌和进行堆置发酵，可提高发酵效果，发酵料对草菇菌丝的生长有促进效应，表现为菌丝长势旺、抗杂菌能力强；二是每潮菇采收后，用香菇柄脚浸出液复壮菌丝效果好，对草菇原基的形成及子实体的生长有促进作用，可明显提高产量，并且克服了长期使用杀虫剂、杀菌剂及化学合成类肥料而造成草菇品质下降的问题，提升了草菇的质量。其总生物学效率达到了40.5％。
以上的专利中所披露的方法，采用了不同种类的培养料，使草菇在生长过程，生物转化率相较于传统的废棉培养基培养大大提高。但是关于病虫害问题以及草菇产品质量稳定问题，上述文件并未披露，甚至并未解决，例如：CN104206177B第0041段披露：实施例1、2和3中，后期虽然也有少量菌棒出现霉菌，但互相感染不明显，蔓延慢，整体污染率低。显然，该方法中仍然不可避免会出现霉菌感染的现象。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明通过对液体菌种培育的改进，使培育出的液体菌种具备菌球数量多、直径小、密度大、菌丝粗壮等特点；而且液体菌种菌龄一致、生长周期短、出菇整齐、上市早、接种简便、成本低；采用了特定的栽培料，使减少了环境污染并对菌渣进行了再利用，而且还使草菇的病虫害明显减少；
本发明所提供的草菇的栽培工艺，包括如下步骤：
S1：草菇液体菌种发酵：
(1)试管接种：将草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，接种量为10％；优选步骤(1)中的草菇菌种为草菇V99；
步骤(1)的试管斜面的培养基，各原料的配比如下：土豆20％，蔗糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，琼脂2.2％，蛋白胨0.4％；
(2)活化培养：将步骤(1)中接种的草菇菌种于在32℃下发酵培养至菌丝长满；活化中培养基中包括：蔗糖2％，蛋白胨0.2％，酵母膏0.2％，KH2PO4 0.3％，MgSO4 0.15％，VB10.01％；
(3)培养液体菌种：从活化的试管斜面上取10块5mm×5mm大小的母种菌片，在无菌操作条件下将菌片接种到装有含麸液体培养基的三角瓶中；然后于32℃的条件下，将三角瓶固定在200r/min的摇床上培养144h，得液体菌种；
含麸液体培养基的制作方法是，取麦麸置于入水中，加热煮沸20min后，用纱布过滤得到麦麸水解液，将所需其他原料(蔗糖2％、蛋白胨0.2％、酵母膏0.2％、KH2PO4 0.3％、MgSO4 0.15％、VB1 0.01％)加入到麦麸水解液中，加热搅拌直至完全融化，将所得培养液分装至三角瓶中，灭菌，具体是在高压蒸汽灭菌锅在121℃0.15MPa下灭菌20min；
S2：准备栽培料：
选取100％杏鲍菇菌渣作为栽培料；将栽培料装入规格为32.5cm×18.5cm栽培袋中，并且调节栽培料的含水量至65％，pH为10，加入石灰；然后将准备好的栽培袋置于灭菌室内灭菌；石灰的用量为杏鲍菇菌渣总重量的0.5-1.2％；
上述步骤中，调节栽培料含水量时，含水量的测定方法为：称重取10g待测样品装入培养皿中，将培养皿放入微波炉内，加热5分钟，使水分充分蒸发后取出培养皿，称重加热后的样品获得干重，计算含水量；
灭菌室内灭菌的方法如下：
第一次真空压力0.000-0.060mpq，进蒸汽到66℃，14-16min；
第二次真空压力0.020-0.50mpq，平均温度66-50.8℃，14-16min；
升温到平均温度50.8-100℃，9-11min，保温平均温度到100℃，持续20min；
升温到平均温度100-115℃，2-4min，压力0.050mpq-0.106mpq，保温持续到平均温度115℃，19-21min，压力0.106mpq；
升温到平均温度115-123℃，持续3-5min，压力0.106-0.130mpq；
灭菌，平均温度123℃，压力0.130mpq，200min；闷置30min；排气60min；保压200min；降温到70-90℃，10min；开始自动排气和手动排气；
S3：接种栽培
将液体菌种在无菌接种箱内用接种箱转管制备试管种，将保藏的草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，32℃下培养至菌丝长满，然后将长满菌丝的栽培袋置于23-28℃的黑暗环境中，放置24h后进行出菇管理。
本发明的有益效果在于，采用本发明的工艺对草菇栽培，其创新与优势之
处是：
(1)本发明在在培养时间144h、接种量为10％时，利用麦麸含量4％的培养基培养出的草菇菌丝体最好。培育出的液体菌种具备菌球数量多、直径小、密度大、菌丝粗壮等特点；而且液体菌种菌龄一致、生长周期短、出菇整齐、上市早、接种简便、成本低；
(2)本发明利用了麦麸制备培养基，麦麸作为农副产品具有营养丰富且价格低的优势，它含有丰富的营养物质且菌丝生长时易于利用，在配置培养基时可以加入适当的麦麸，能够促进菌丝的生长，变废为宝，节省成本；
(3)本发明的优势在于菌种在反应器内可人为控制生长条件，菌丝生长分裂迅速，菌龄整齐，培养周期短；当接入固体培养料，接种点多，萌发快，可减少污染；萌发点多、缩短出菇周期；
(4)采用草菇液体深层培养制种方式，能提高自动化程度，降低劳动强度，保证菌种的稳定性和草菇产品的质量，出菇周期短，生产成本降低，增加经济效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
草菇的栽培工艺，包括如下步骤：
S1：草菇液体菌种发酵：
(1)试管接种：将草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，接种量为10％；优选步骤(1)中的草菇菌种为草菇V99；
步骤(1)的试管斜面的培养基，各原料的配比如下：土豆20％，蔗糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，琼脂2.2％，蛋白胨0.4％；
(2)活化培养：将步骤(1)中接种的草菇菌种于在32℃下发酵培养至菌丝长满；活化中培养基中包括：蔗糖2％，蛋白胨0.2％，酵母膏0.2％，KH2PO4 0.3％，MgSO4 0.15％，VB10.01％；
(3)培养液体菌种：从活化的试管斜面上取10块5mm×5mm大小的母种菌片，在无菌操作条件下将菌片接种到装有含麸液体培养基的三角瓶中；然后于32℃的条件下，将三角瓶固定在200r/min的摇床上培养144h，得液体菌种；
含麸液体培养基的制作方法是，取麦麸置于入水中，加热煮沸20min后，用纱布过滤得到麦麸水解液，将所需其他试剂蔗糖2％，蛋白胨0.2％，酵母膏0.2％，KH2PO4 0.3％，MgSO4 0.15％，VB1 0.01％加入到麦麸水解液中，加热搅拌直至完全融化，将所得培养液分装至三角瓶中，灭菌，具体是在高压蒸汽灭菌锅在121℃0.15MPa下灭菌20min；
S2：准备栽培料：
选取100％杏鲍菇菌渣作为栽培料；将栽培料装入规格为32.5cm×18.5cm栽培袋中，并且调节栽培料的含水量至65％，pH为10，加入石灰；然后将准备好的栽培袋置于灭菌室内灭菌；
上述步骤中，调节栽培料含水量时，含水量的测定方法为：称重取10g待测样品装入培养皿中，将培养皿放入微波炉内，加热5分钟，使水分充分蒸发后取出培养皿，称重加热后的样品获得干重，计算含水量；
灭菌室内灭菌的方法如下：
第一次真空压力0.000-0.060mpq，进蒸汽到66℃，约15min；第二次真空压力0.020-0.50mpq，平均温度66-50.8℃，约15min；升温到平均温度50.8-100℃，约10min，保温平均温度到100℃，持续20min；升温到平均温度100-115℃，约3min，压力0.050mpq-0.106mpq，保温持续到平均温度115℃，20min，压力0.106mpq；升温到平均温度115-123℃，持续4min，压力0.106-0.130mpq；灭菌，平均温度123℃，压力0.130mpq，200min；闷置30min；排气60min；保压200min；降温到70-90℃，10min；开始自动排气和手动排气；
S3：接种栽培
将液体菌种在无菌接种箱内用接种箱转管制备试管种，将保藏的草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，32℃下培养至菌丝长满，然后将长满菌丝的栽培袋置于23-28℃的黑暗环境中，放置24h后进行出菇管理。
对比例
对比例与实施例1的区别及结果如下表所示：
从以上表格中的数据可以看出：
培养时间、接种量、麦麸含量3个因素对草菇菌丝体生物量影响的大小依次为培养时间>麦麸含量>接种量。比较水平之间k值得大小，可知草菇菌丝体生长的最佳条件组合为培养时间144h，接种量10％，麦麸含量4％。
根据配方不同设计配方梯度试验，每种栽培料的含水量调至65％，将pH值调为10，栽培袋选用32.5cm×18.5cm规格，每袋约装0.75kg。加入石灰的多少决定栽培料的pH值，每次少加石灰，拌匀后用pH试纸检测，逐步加石灰，将pH值调整到10左右即可。本次配方投料的石灰含量在0.5-1.5kg范围内。
各配方投料量见表，每个配方设计12个重复。
结论分析：
接完种后，
(1)菌丝萌发速度对比：
5天内观察菌丝萌发的速度，1-5是最快萌发菌丝的，从接种后4小时开始萌发菌丝；
1-4与1-3的速度大体相同，从接种后8小时开始萌发菌丝；
而1-2及1-1菌丝萌发速度缓慢，在1-5的菌丝长出1cm后才开始萌发。
(2)生长速度对比：
生长速度最快的是1-5，栽培料配方为杏鲍菇菌渣100％。
而1-1，玉米芯含量为100％时，菌丝生长速度非常缓慢。
具体表现在，相同的时间段内，1-5的菌丝体长度是1-1菌丝体速度的2倍；可以得出以下结论：随着杏鲍菇菌渣所占比例的不断增加，菌丝的生长速度是不断加快的。5种不同配比的栽培料，其长满菌丝的时间也不同，对比所有的重复试验后，可以看出：1-5长满菌丝平均需要20天左右，1-4长满菌丝需要25天左右，1-3长满菌丝需要30天，而1-2在40天左右的时候才长满菌丝。本次试验中未得出1-1长满菌丝所需要的天数，由于时间太长，栽培袋内所有的菌丝被青霉及黑霉所覆盖。
出菇结果：因时间限制，只统计第一潮菇的结果。菌丝扭结最快的是1-5，依次是1-4、1-3、1-2。最终出菇最多的是1-5，差不多每一个栽培料在第一潮菇都能产出10个左右的草菇。1-4及1-3差不多的产量，平均每袋栽培料能产6、7个草菇。而1-2的产量不太多，大约只有3、4个草菇。
实施例1中的生物转化率计算
计算公式：生物转化率＝鲜菇重/培养料干重×100％，
计算该培养基料栽培草菇生物转化率为8.3％。
实施例2
同实施例1一种草菇液体菌种的配方及孰料栽培工艺，不同之处在于采用固体菌种的栽培袋。
选用表1玉米芯：杏鲍菇菌渣＝1:1的配方，设置pH＝10，计算方法与表1相同。栽培袋选用32.5cm×18.5cm规格，每袋约装0.6kg，且栽培料中间打孔。固体种采用的是备好的试管种，共用19支试管种。液体种采用备好的摇瓶液体菌种，共用600ml。设置6种不同的试验，每个试验10个重复。具体设置参见表2-3。
表2-3固液接种及接种量不同
注：每个试验装10袋，共60袋。
接种：按照表3内的说明进行接种，在接种箱内进行操作，灭菌处理同1.3相同。
菌丝的培养、出菇管理、采摘管理等与实施例相同。
结果显示固体菌种的栽培袋生长速度慢，菌丝只能从上往下长，而液体菌种的栽培袋可以迅速的发满整个袋中。固体菌种的栽培袋中，3-1生长速度最快，18天左右可以发满菌袋，3-2生长速度较3-1稍慢，大概在20天可以发满菌丝，3-3生长速度最慢，需要用25天才可以发满菌丝。液体菌种栽培袋，接种后的第二天就能够看出菌丝向外萌发，3-10生长速度最慢20天菌丝发满袋，3-20和3-30生长速度差不多，大约都是在15天就可以发满菌袋，从经济的角度考虑，最好选用液体接种，并且接种量不宜过多。
出菇结果：固体种栽培料总的出菇量不如液体种栽培料的出菇量多。3-1出菇量较多，每袋栽培料约出10个草菇，3-2比3-1稍微少一点，每袋出8、9个草菇，3-3出菇量较少，每袋出5、6个菇体。3-1的出菇量虽然较多，但是所用的试管种是最多的，并且3-2的出菇量也没差多少，所以采用3-2的接种量最为合适。液体种栽培料出菇量是最多的，3-20的出菇量最多，大约每袋可以出菇15个左右，3-30的出菇量跟3-20的差不多，每袋可出12个，3-10的出菇量最少，但是也跟3-1、3-2一样，每袋出9、10个草菇。可以看出在液体种接种的试验中，不是接种量越多，菌丝生长速度越快，出菇量越多，当接种量过多后，会影响菌丝的生长速度。随着菌种量的增大，菌丝满袋时间提前，接种量增大，菌丝迅速占领料面，形成优势菌群，菌丝分解培养料时间长，转化营养多，是接种量越多生物学效率越高的原因。生产中，不适度地加大用种量并不能显示出明显的增产效应，其原因与菌种生活力不断衰退，从而增加杂菌污染机会有关。
杂菌污染情况：3-1有1袋绿霉污染，其他试验种类未出现污染杂菌现象。
结果分析，本发明液体菌种与熟料栽培工艺和固体菌种与常规配方栽培工艺的对比优势如下表所示：
Claims (9)
1.草菇的栽培工艺，包括如下步骤：
S1：草菇液体菌种发酵：
（1）试管接种：将草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，接种量为10%；
（2）活化培养：将步骤（1）中接种的草菇菌种于在32℃下发酵培养至菌丝长满；
（3）培养液体菌种：从活化的试管斜面上取10块5mm×5mm大小的母种菌片，在无菌操作条件下将菌片接种到装有含麸液体培养基的三角瓶中；然后于32℃的条件下，将三角瓶固定在200r/min的摇床上培养144h，得液体菌种；
S2：准备栽培料：
选取100%杏鲍菇菌渣作为栽培料；将栽培料装入栽培袋中，并且调节栽培料的含水量至65%，pH为10，加入石灰；然后将准备好的栽培袋置于灭菌室内灭菌；
S3：接种栽培
将液体菌种在无菌接种箱内用接种箱转管制备试管种，将保藏的草菇菌种在无菌操作的条件下接种到试管斜面，32℃下培养至菌丝长满，然后将长满菌丝的栽培袋置于23-28℃的黑暗环境中，放置24h后进行出菇管理。
2.根据权利要求书1所述的草菇的栽培工艺，其特征在于，步骤（1）中的草菇菌种为草菇V99。
3.根据权利要求书1所述的草菇的栽培工艺，其特征在于，步骤（1）的试管斜面的培养基，各原料的配比如下：土豆20%，蔗糖2%，KH2PO40.3%，MgSO40.15%，琼脂2.2%，蛋白胨0.4%。
4.根据权利要求书1所述草菇的栽培工艺，其特征在于，步骤（2）活化中，培养基中包括：蔗糖2%，蛋白胨0.2%，酵母膏0.2%，KH2PO4 0.3%，MgSO4 0.15%，VB1 0.01%。
5.根据权利要求书1所述草菇的栽培工艺，其特征在于，步骤（3）中，含麸液体培养基的制作方法是，取麦麸置于入水中，加热煮沸20min后，用纱布过滤得到麦麸水解液，取蔗糖2%、蛋白胨0.2%、酵母膏0.2%、KH2PO4 0.3%、MgSO4 0.15%、VB1 0.01%加入到麦麸水解液中，加热搅拌直至完全融化，将所得培养液分装至三角瓶中，灭菌。
6.根据权利要求书5所述草菇的栽培工艺，其特征在于，灭菌步骤中，在高压蒸汽灭菌锅在121℃0.15MPa下灭菌20min。
7.根据权利要求书5所述草菇的栽培工艺，其特征在于，S2中，灭菌室内灭菌的方法如下：
第一次真空压力0.000-0.060mpq，进蒸汽到66℃， 14-16min；
第二次真空压力0.020-0.50mpq，平均温度66-50.8℃，14-16min；
升温到平均温度50.8-100℃，9-11min，保温平均温度到100℃，持续20min；
升温到平均温度100-115℃， 2-4min，压力0.050mpq-0.106mpq，保温持续到平均温度115℃，19-21min，压力0.106mpq；
升温到平均温度115-123℃，持续3-5min，压力0.106-0.130mpq；
灭菌，平均温度123℃，压力0.130mpq，200min；闷置30min；排气60min；保压200min；降温到70-90℃，10min；开始自动排气和手动排气。
8.根据权利要求书5所述草菇的栽培工艺，其特征在于，S2中，栽培袋规格为32.5cm×18.5cm。
9.根据权利要求书5所述草菇的栽培工艺，其特征在于，S2中，调节栽培料含水量时，含水量的测定方法为：称重取10g待测样品装入培养皿中，将培养皿放入微波炉内，加热5分钟，使水分充分蒸发后取出培养皿，称重加热后的样品获得干重，计算含水量。
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