CN104541938A - 一种灵芝融合培养方法 - Google Patents

一种灵芝融合培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种灵芝融合培养方法，该方法经(1)制作试管培养基、(2)制作母种、(3)扩制母种、(4)制作原种、栽培种等工序后，将栽培种植入椴木栽培袋中，在大棚内培养2～3个月，覆土出芝培养45～50天使子实体产生和生长，待子实体长至12cm至15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取栽培种种菌块2至3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5～7天后除去薄膜继续培养，至灵芝菌盖直径达到15cm～20cm，菌盖厚度达到5cm～8cm即可采收；经烘干包装即可上市销售。本发明的灵芝融合培养方法，在培养灵芝过程中，不会产生孢子粉，能够有效的保证灵芝营养成分。

Description

一种灵芝融合培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌的培养技术领域，具体地说涉及一种灵芝融合培养方法。
背景技术
灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，其子实体则是进行深加工的主要原料之一。现在众多研究已经证实灵芝具有调节免疫、抗氧化、抗缺氧、抗放射、抗化疗、抗心肌缺血作用和抗衰老作用以及镇静作用、强心、调节血脂作用、降血糖、平喘、保肝等作用，广泛应用于临床对各种疾病的治疗之中。
目前，灵芝的栽培以人工栽培为主，将椴木装袋加套海绵双套环在高压或常压下灭菌，冷却后打开海绵上套环，在无菌环境下将菌种接在椴木上，发菌70～80天，然后将菌段上的塑料薄膜去掉，把菌段埋在地沟中，再覆土2～3cm，15-20天长出原基，空气湿度80％～90％，培养45～50天，长出菌盖，空气湿度保持在85％～95％，菌盖变红，待灵芝开始释放孢子粉时，套上纸袋，收集灵芝孢子粉，待孢子粉收集完后再采摘灵芝。该方法在栽培过程中采收灵芝孢子粉再采摘灵芝，由于孢子粉释放大量灵芝营养成分，使得灵芝子实体营养成分明显降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝融合培养方法，以克服现有技术的栽培过程中灵芝同时产生孢子粉，灵芝营养成分降低的缺陷。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种灵芝融合培养方法，包括如下步骤：
(1)制作试管培养基：将PDA培养基或改良PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15min，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
(2)制作母种：在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm～3mm的组织块，接种到试管培养基上，在26℃～28℃条件下培养25d～35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
(3)扩制母种：在无菌条件下将母种以1：6进行转管，置26℃～28℃环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
(4)制作原种：
A1、制取培养基料：取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
B1、装料灭菌：
将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C1、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶～6瓶；
D1：培养：将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(5)制作栽培种：
A2、制取培养基料：取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
B2、装料灭菌：将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C2、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋～50袋；
D2：培养：将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(6)栽培：
(F)菌椴制作：将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
(G)接种发菌：将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2～3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22℃～28℃之间，空气湿度控制在65～70％之间，光照控制在200～300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(H)覆土出芝：将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土2cm～3cm，培养45～50天，得到子实体；大棚温度控制在25℃～28℃之间，空气湿度控制在80～95％之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(I)融接：取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5～7天得到菌丝体，备用；
待子实体长至高为12cm～15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝体菌块2～3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5～7天，待子实体与菌丝体全部融合，去掉塑料薄膜，空气湿度保持在85％～95％，再长40～50天，至灵芝菌盖直径达到15cm～20cm，菌盖厚度达到5cm～8cm，菌丝体全部覆盖整个子实体，孢子粉的营养成分全部留在子实体中，再培养30天左右，待菌盖变红，成熟即可采收；
(7)烘干包装。
作为对上述技术方案的改进，所述PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15min后过滤，加入17克～20克琼脂，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成。
作为对上述技术方案的改进，所述改良PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15min后过滤，加入17克～20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成。
作为对上述技术方案的改进，所述的培养基料由69～72重量份数的木屑、25～30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1：1.1加入水后制成，调pH值为5～5.5。
作为对上述技术方案的改进，所述的培养基料由78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合，按料水比1：1.1加入水后制成，调pH值为5～5.5。
作为对上述技术方案的改进，所述灭菌处理，是指常压灭菌或高压灭菌处理；
所述常压灭菌在灭菌锅中进行，温度为100℃，保持6h～8h，停止加热，待温度降到70～80℃时出锅；
所述高压灭菌在高压锅中进行，加热升温至高压锅中压力为0.12～0.15Mpa，保持2～3h，然后停止加热，焖6～8h。
本发明的有益效果在于：与现有技术相比，用本发明的方法在培养灵芝过程中，不会产生孢子粉，能够有效的保证灵芝营养成分。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步地详细说明，但应当说明的是本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
(1)用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15min后过滤，加入17克～20克琼脂，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成PDA培养基；
将PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15min，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
(2)制作母种：在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm～3mm的组织块，接种到试管培养基上，在26℃～28℃条件下培养25d～35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
(3)扩制母种：在无菌条件下将母种以1：6进行转管，置26℃～28℃环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
(4)制作原种：
A1、制取培养基料：取69～72重量份数的木屑、25～30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1：1.1加入水，调pH值为5～5.5制成培养基料；
B1、装料灭菌：将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C1、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶～6瓶；
D1：培养：将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(5)制作栽培种：
A2、取培养基料：取69～72重量份数的木屑、25～30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1：1.1加入水，调pH值为5～5.5制成培养基料；
B2、装料灭菌：将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，
料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理
C2、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋～50袋；
D2：培养：将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(6)栽培：
(F)菌椴制作：将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
(G)接种发菌：将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2～3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22℃～28℃之间，空气湿度控制在65～70％之间，光照控制在200～300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(H)覆土出芝：将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土2cm～3cm，培养45～50天，得到子实体；大棚温度控制在25℃～28℃之间，空气湿度控制在80～95％之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(I)融接：取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5～7天得到菌丝体，备用；
待子实体长至高为12cm～15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝体菌块2～3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5～7天，待子实体与菌丝体全部融合，去掉塑料薄膜，空气湿度保持在85％～95％，再长40～50天，至灵芝菌盖直径达到15cm～20cm，菌盖厚度达到5cm～8cm，菌丝体全部覆盖整个子实体，孢子粉的营养成分全部留在子实体中，再培养30天左右，待菌盖变红，成熟即可采收；
(7)烘干包装。
实施例2：
(1)制作试管培养基：
用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15mi n后过滤，加入17克～20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成改良PDA培养基；
将改良PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15mi n，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
(2)制作母种：在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm～3mm的组织块，接种到试管培养基上，在26℃～28℃条件下培养25d～35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
(3)扩制母种：在无菌条件下将母种以1：6进行转管，置26℃～28℃环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
(4)制作原种：
A1、制取培养基料：取78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合，按料水比1：1.1加入水，调pH值为5～5.5，制成培养基料；
B1、装料灭菌：将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C1、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶～6瓶；
D1：培养：将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(5)制作栽培种：
A2、制取培养基料：取78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合，按料水比1：1.1加入水，调pH值为5～5.5，制成培养基料；
B2、装料灭菌：将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C2、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋～50袋；
D2：培养：将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(6)栽培：
(F)菌椴制作：将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
(G)接种发菌：将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2～3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22℃～28℃之间，空气湿度控制在65～70％之间，光照控制在200～300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(H)覆土出芝：将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土2cm～3cm，培养45～50天，得到子实体；大棚温度控制在25℃～28℃之间，空气湿度控制在80～95％之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(I)融接：取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5～7天得到菌丝体，备用；
待子实体长至高为12cm～15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝体菌块2～3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5～7天，待子实体与菌丝体全部融合，去掉塑料薄膜，空气湿度保持在85％～95％，再长40～50天，至灵芝菌盖直径达到15cm～20cm，菌盖厚度达到5cm～8cm，菌丝体全部覆盖整个子实体，孢子粉的营养成分全部留在子实体中，再培养30天左右，待菌盖变红，成熟即可采收；
(7)烘干包装。
以上所述仅是本发明较佳的几种实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种灵芝融合培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)制作试管培养基：将PDA培养基或改良PDA培养基用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.15MPa压力下灭菌15min，将试管趁热排放在斜面板上自然冷却；
(2)制作母种：在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm～3mm的组织块，接种到试管培养基上，在26℃～28℃条件下培养25d～35d，至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化，制成母种；
(3)扩制母种：在无菌条件下将母种以1：6进行转管，置26℃～28℃环境中培养，菌丝满管后，作扩制母种；
(4)制作原种：
A1、制取培养基料：取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
B1、装料灭菌：将培养基料装入原种瓶中，至瓶4/5处，上紧下松，料面压平压实，用生活饮用水洗净瓶身和瓶口，擦干瓶口后，用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C1、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每支试管的扩制母种接5瓶～6瓶；
D1：培养：将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满瓶，制成原种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(5)制作栽培种：
A2、制取培养基料：取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料；
B2、装料灭菌：将培养基料装入栽培种袋中，至袋3/5处，上紧下松，料面压平压实，用清水洗净袋身和袋口，擦干袋口后，套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸，进行灭菌处理；
C2、接种：冷却至28℃以下，在无菌条件下接种，每瓶原种接45袋～50袋；
D2：培养：将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d～42d至菌丝长满袋，制成栽培种；培养室内温度控制在26℃～28℃之间，空气相对湿度65％～70％；
(6)栽培：
(F)菌椴制作：将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中，进行灭菌处理；
(G)接种发菌：将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室，将栽培种接入栽培袋中接种培养2～3个月，至椴木外表面全部发满菌丝体；所述培养室温度控制在22℃～28℃之间，空气湿度控制在65～70％之间，光照控制在200～300勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(H)覆土出芝：将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中，上面覆土2cm～3cm，培养45～50天，得到子实体；大棚温度控制在25℃～28℃之间，空气湿度控制在80～95％之间，光照控制在2000-4000勒克斯之间，二氧化碳浓度低于1‰；
(I)融接：取栽培种菌块，破碎，用保鲜薄膜包好成型，培养5～7天得到菌丝体，备用；
待子实体长至高为12cm～15cm时，将子实体顶端细嫩处切去，取菌丝体菌块2～3cm接种到子实体上，用塑料薄膜覆盖5～7天，待子实体与菌丝体全部融合，去掉塑料薄膜，空气湿度保持在85％～95％，再长40～50天，至灵芝菌盖直径达到15cm～20cm，菌盖厚度达到5cm～8cm，菌丝体全部覆盖整个子实体，孢子粉的营养成分全部留在子实体中，再培养30天左右，待菌盖变红，成熟即可采收；
(7)烘干包装。
2.根据权利要求1所述的灵芝融合培养方法，其特征在于：所述PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15min后过滤，加入17克～20克琼脂，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成。
3.根据权利要求1所述的灵芝融合培养方法，其特征在于：所述改良PDA培养基，用马铃薯200克去皮切片，置容器内加水1000mL，煮沸15mi n后过滤，加入17克～20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O，补水至1000mL，继续加热溶解；待琼脂溶解后，加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成。
4.根据权利要求1或2或3所述的灵芝融合培养方法，其特征在于：所述灭菌处理，是指常压灭菌或高压灭菌处理；
所述常压灭菌在灭菌锅中进行，温度为100℃，保持6h～8h，停止加热，待温度降到70～80℃时出锅；
所述高压灭菌在高压锅中进行，加热升温至高压锅中压力为0.12～0.15Mpa，保持2～3h，然后停止加热，焖6～8h。
5.根据权利要求4所述的灵芝融合培养方法，其特征在于：所述的培养基料由69～72重量份数的木屑、25～30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合，按料水比1：1.1加入水后制成，调pH值为5～5.5。
6.根据权利要求4所述的灵芝融合培养方法，其特征在于：所述的培养基料由78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合，按料水比1：1.1加入水后制成，调pH值为5～5.5。
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