CN104541938B - 一种灵芝融合培养方法 - Google Patents

一种灵芝融合培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种灵芝融合培养方法,该方法经(1)制作试管培养基、(2)制作母种、(3)扩制母种、(4)制作原种、栽培种等工序后,将栽培种植入椴木栽培袋中,在大棚内培养2~3个月,覆土出芝培养45~50天使子实体产生和生长,待子实体长至12cm至15cm时,将子实体顶端细嫩处切去,取栽培种种菌块2至3cm接种到子实体上,用塑料薄膜覆盖5~7天后除去薄膜继续培养,至灵芝菌盖直径达到15cm~20cm,菌盖厚度达到5cm~8cm即可采收;经烘干包装即可上市销售。本发明的灵芝融合培养方法,在培养灵芝过程中,不会产生孢子粉,能够有效的保证灵芝营养成分。

Description

一种灵芝融合培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌的培养技术领域,具体地说涉及一种灵芝融合培养方法。
背景技术
灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌,其子实体则是进行深加工的主要原料之一。现在众多研究已经证实灵芝具有调节免疫、抗氧化、抗缺氧、抗放射、抗化疗、抗心肌缺血作用和抗衰老作用以及镇静作用、强心、调节血脂作用、降血糖、平喘、保肝等作用,广泛应用于临床对各种疾病的治疗之中。
目前,灵芝的栽培以人工栽培为主,将椴木装袋加套海绵双套环在高压或常压下灭菌,冷却后打开海绵上套环,在无菌环境下将菌种接在椴木上,发菌70~80天,然后将菌段上的塑料薄膜去掉,把菌段埋在地沟中,再覆土2~3cm,15-20天长出原基,空气湿度80%~90%,培养45~50天,长出菌盖,空气湿度保持在85%~95%,菌盖变红,待灵芝开始释放孢子粉时,套上纸袋,收集灵芝孢子粉,待孢子粉收集完后再采摘灵芝。该方法在栽培过程中采收灵芝孢子粉再采摘灵芝,由于孢子粉释放大量灵芝营养成分,使得灵芝子实体营养成分明显降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝融合培养方法,以克服现有技术的栽培过程中灵芝同时产生孢子粉,灵芝营养成分降低的缺陷。
为了实现上述目的,本发明的技术方案是:
一种灵芝融合培养方法,包括如下步骤:
(1)制作试管培养基:将PDA培养基或改良PDA培养基用分装器装入试管中,装量为试管长的1/5,塞上棉塞。置灭菌锅中,在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15min,将试管趁热排放在斜面板上自然冷却;
(2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm~3mm的组织块,接种到试管培养基上,在26℃~28℃条件下培养25d~35d,至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化,制成母种;
(3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管,置26℃~28℃环境中培养,菌丝满管后,作扩制母种;
(4)制作原种:
A1、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料;
B1、装料灭菌:
将培养基料装入原种瓶中,至瓶4/5处,上紧下松,料面压平压实,用生活饮用水洗净瓶身和瓶口,擦干瓶口后,用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C1、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每支试管的扩制母种接5瓶~6瓶;
D1:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满瓶,制成原种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(5)制作栽培种:
A2、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培基料;
B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中,至袋3/5处,上紧下松,料面压平压实,用清水洗净袋身和袋口,擦干袋口后,套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C2、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每瓶原种接45袋~50袋;
D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满袋,制成栽培种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(6)栽培:
(F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中,进行灭菌处理;
(G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室,将栽培种接入栽培袋中接种培养2~3个月,至椴木外表面全部发满菌丝体;所述培养室温度控制在22℃~28℃之间,空气湿度控制在65~70%之间,光照控制在200~300勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中,上面覆土2cm~3cm,培养45~50天,得到子实体;大棚温度控制在25℃~28℃之间,空气湿度控制在80~95%之间,光照控制在2000-4000勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(I)融接:取栽培种菌块,破碎,用保鲜薄膜包好成型,培养5~7天得到菌丝体,备用;
待子实体长至高为12cm~15cm时,将子实体顶端细嫩处切去,取菌丝体菌块2~3cm接种到子实体上,用塑料薄膜覆盖5~7天,待子实体与菌丝体全部融合,去掉塑料薄膜,空气湿度保持在85%~95%,再长40~50天,至灵芝菌盖直径达到15cm~20cm,菌盖厚度达到5cm~8cm,菌丝体全部覆盖整个子实体,孢子粉的营养成分全部留在子实体中,再培养30天左右,待菌盖变红,成熟即可采收;
(7)烘干包装。
作为对上述技术方案的改进,所述PDA培养基,用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15min后过滤,加入17克~20克琼脂,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成。
作为对上述技术方案的改进,所述改良PDA培养基,用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15min后过滤,加入17克~20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成。
作为对上述技术方案的改进,所述的培养基料由69~72重量份数的木屑、25~30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合,按料水比1:1.1加入水后制成,调pH值为5~5.5。
作为对上述技术方案的改进,所述的培养基料由78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合,按料水比1:1.1加入水后制成,调pH值为5~5.5。
作为对上述技术方案的改进,所述灭菌处理,是指常压灭菌或高压灭菌处理;
所述常压灭菌在灭菌锅中进行,温度为100℃,保持6h~8h,停止加热,待温度降到70~80℃时出锅;
所述高压灭菌在高压锅中进行,加热升温至高压锅中压力为0.12~0.15Mpa,保持2~3h,然后停止加热,焖6~8h。
本发明的有益效果在于:与现有技术相比,用本发明的方法在培养灵芝过程中,不会产生孢子粉,能够有效的保证灵芝营养成分。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步地详细说明,但应当说明的是本发明的实施方式不限于此。
实施例1:
(1)用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15min后过滤,加入17克~20克琼脂,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成PDA培养基;
将PDA培养基用分装器装入试管中,装量为试管长的1/5,塞上棉塞。置灭菌锅中,在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15min,将试管趁热排放在斜面板上自然冷却;
(2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm~3mm的组织块,接种到试管培养基上,在26℃~28℃条件下培养25d~35d,至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化,制成母种;
(3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管,置26℃~28℃环境中培养,菌丝满管后,作扩制母种;
(4)制作原种:
A1、制取培养基料:取69~72重量份数的木屑、25~30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合,按料水比1:1.1加入水,调pH值为5~5.5制成培养基料;
B1、装料灭菌:将培养基料装入原种瓶中,至瓶4/5处,上紧下松,料面压平压实,用生活饮用水洗净瓶身和瓶口,擦干瓶口后,用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C1、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每支试管的扩制母种接5瓶~6瓶;
D1:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满瓶,制成原种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(5)制作栽培种:
A2、取培养基料:取69~72重量份数的木屑、25~30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合,按料水比1:1.1加入水,调pH值为5~5.5制成培养基料;
B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中,至袋3/5处,上紧下松,
料面压平压实,用清水洗净袋身和袋口,擦干袋口后,套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理
C2、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每瓶原种接45袋~50袋;
D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满袋,制成栽培种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(6)栽培:
(F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中,进行灭菌处理;
(G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室,将栽培种接入栽培袋中接种培养2~3个月,至椴木外表面全部发满菌丝体;所述培养室温度控制在22℃~28℃之间,空气湿度控制在65~70%之间,光照控制在200~300勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中,上面覆土2cm~3cm,培养45~50天,得到子实体;大棚温度控制在25℃~28℃之间,空气湿度控制在80~95%之间,光照控制在2000-4000勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(I)融接:取栽培种菌块,破碎,用保鲜薄膜包好成型,培养5~7天得到菌丝体,备用;
待子实体长至高为12cm~15cm时,将子实体顶端细嫩处切去,取菌丝体菌块2~3cm接种到子实体上,用塑料薄膜覆盖5~7天,待子实体与菌丝体全部融合,去掉塑料薄膜,空气湿度保持在85%~95%,再长40~50天,至灵芝菌盖直径达到15cm~20cm,菌盖厚度达到5cm~8cm,菌丝体全部覆盖整个子实体,孢子粉的营养成分全部留在子实体中,再培养30天左右,待菌盖变红,成熟即可采收;
(7)烘干包装。
实施例2:
(1)制作试管培养基:
用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15mi n后过滤,加入17克~20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成改良PDA培养基;
将改良PDA培养基用分装器装入试管中,装量为试管长的1/5,塞上棉塞。置灭菌锅中,在0.15MPa(1.5kg/cm2)压力下灭菌15mi n,将试管趁热排放在斜面板上自然冷却;
(2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm~3mm的组织块,接种到试管培养基上,在26℃~28℃条件下培养25d~35d,至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化,制成母种;
(3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管,置26℃~28℃环境中培养,菌丝满管后,作扩制母种;
(4)制作原种:
A1、制取培养基料:取78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合,按料水比1:1.1加入水,调pH值为5~5.5,制成培养基料;
B1、装料灭菌:将培养基料装入原种瓶中,至瓶4/5处,上紧下松,料面压平压实,用生活饮用水洗净瓶身和瓶口,擦干瓶口后,用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C1、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每支试管的扩制母种接5瓶~6瓶;
D1:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满瓶,制成原种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(5)制作栽培种:
A2、制取培养基料:取78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合,按料水比1:1.1加入水,调pH值为5~5.5,制成培养基料;
B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中,至袋3/5处,上紧下松,料面压平压实,用清水洗净袋身和袋口,擦干袋口后,套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C2、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每瓶原种接45袋~50袋;
D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满袋,制成栽培种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(6)栽培:
(F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中,进行灭菌处理;
(G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室,将栽培种接入栽培袋中接种培养2~3个月,至椴木外表面全部发满菌丝体;所述培养室温度控制在22℃~28℃之间,空气湿度控制在65~70%之间,光照控制在200~300勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中,上面覆土2cm~3cm,培养45~50天,得到子实体;大棚温度控制在25℃~28℃之间,空气湿度控制在80~95%之间,光照控制在2000-4000勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(I)融接:取栽培种菌块,破碎,用保鲜薄膜包好成型,培养5~7天得到菌丝体,备用;
待子实体长至高为12cm~15cm时,将子实体顶端细嫩处切去,取菌丝体菌块2~3cm接种到子实体上,用塑料薄膜覆盖5~7天,待子实体与菌丝体全部融合,去掉塑料薄膜,空气湿度保持在85%~95%,再长40~50天,至灵芝菌盖直径达到15cm~20cm,菌盖厚度达到5cm~8cm,菌丝体全部覆盖整个子实体,孢子粉的营养成分全部留在子实体中,再培养30天左右,待菌盖变红,成熟即可采收;
(7)烘干包装。
以上所述仅是本发明较佳的几种实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进,这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种灵芝融合培养方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)制作试管培养基:将PDA培养基或改良PDA培养基用分装器装入试管中,装量为试管长的1/5,塞上棉塞, 置灭菌锅中,在0.15MPa压力下灭菌15min,将试管趁热排放在斜面板上自然冷却;
(2)制作母种:在无菌条件下切取灵芝菌蕾其内部菌柄尖端处直径2mm~3mm的组织块,接种到试管培养基上,在26℃~28℃条件下培养25d~35d,至菌丝长满斜面即进行菌丝纯化,制成母种;
(3)扩制母种:在无菌条件下将母种以1:6进行转管,置26℃~28℃环境中培养,菌丝满管后,作扩制母种;
(4)制作原种:
A1、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培养 基料;
B1、装料灭菌:将培养基料装入原种瓶中,至瓶4/5处,上紧下松,料面压平压实,用生活饮用水洗净瓶身和瓶口,擦干瓶口后,用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C1、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每支试管的扩制母种接5瓶~6瓶;
D1:培养:将接种的原种瓶放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满瓶,制成原种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(5)制作栽培种:
A2、制取培养基料:取木屑、麸皮、石膏、棉籽壳中的几种营养质成分配制成培养 基料;
B2、装料灭菌:将培养基料装入栽培种袋中,至袋3/5处,上紧下松,料面压平压实,用清水洗净袋身和袋口,擦干袋口后,套好颈圈用棉塞封口并包扎牛皮纸,进行灭菌处理;
C2、接种:冷却至28℃以下,在无菌条件下接种,每瓶原种接45袋~50袋;
D2:培养:将接种的栽培种袋放置到培养室中培养39d~42d至菌丝长满袋,制成栽培种;培养室内温度控制在26℃~28℃之间,空气相对湿度65%~70%;
(6)栽培:
(F)菌椴制作:将椴木枝条截段捆扎放入栽培袋中,进行灭菌处理;
(G)接种发菌:将经过灭菌处理的栽培袋移入经消毒处理的接种室,将栽培种接入栽培袋中接种培养2~3个月,至椴木外表面全部发满菌丝体;所述培养室温度控制在22℃~28℃之间,空气湿度控制在65~70%之间,光照控制在200~300勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(H)覆土出芝:将发满菌丝体的椴木脱袋放置到大棚中的垄沟中,上面覆土2cm~3cm,培养45~50天,得到子实体;大棚温度控制在25℃~28℃之间,空气湿度控制在80~95%之间,光照控制在2000-4000勒克斯之间,二氧化碳浓度低于1‰;
(I)融接:取栽培种菌块,破碎,用保鲜薄膜包好成型,培养5~7天得到菌丝体,备用;
待子实体长至高为12cm~15cm时,将子实体顶端细嫩处切去,取菌丝体菌块2~3cm接种到子实体上,用塑料薄膜覆盖5~7天,待子实体与菌丝体全部融合,去掉塑料薄膜,空气湿度保持在85%~95%,再长40~50天,至灵芝菌盖直径达到15cm~20cm,菌盖厚度达到5cm~8cm,菌丝体全部覆盖整个子实体,孢子粉的营养成分全部留在子实体中,再培养30天左右,待菌盖变红,成熟即可采收;
(7)烘干包装。
2.根据权利要求1所述的灵芝融合培养方法,其特征在于:所述PDA培养基,用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15min后过滤,加入17克~20克琼脂,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入葡萄糖20克搅拌均匀后制成。
3.根据权利要求1所述的灵芝融合培养方法,其特征在于:所述改良PDA培养基,用马铃薯200克去皮切片,置容器内加水1000mL,煮沸15mi n后过滤,加入17克~20克琼脂、3克KH2PO4、1.5克MgSO4·7H2O,补水至1000mL,继续加热溶解;待琼脂溶解后,加入20克葡萄糖搅拌均匀后制成。
4.根据权利要求1或2或3所述的灵芝融合培养方法,其特征在于:所述灭菌处理,是指常压灭菌或高压灭菌处理;
所述常压灭菌在灭菌锅中进行,温度为100℃,保持6h~8h,停止加热,待温度降到70~80℃时出锅;
所述高压灭菌在高压锅中进行,加热升温至高压锅中压力为0.12~0.15Mpa,保持2~3h,然后停止加热,焖6~8h。
5.根据权利要求4所述的灵芝融合培养方法,其特征在于:所述的培养基料由69~72重量份数的木屑、25~30重量份数的麸皮、3重量份数的石膏混合,按料水比1:1.1加入水后制成,调pH值为5~5.5。
6.根据权利要求4所述的灵芝融合培养方法,其特征在于:所述的培养基料由78重量份数的棉籽壳、21重量份数的木屑、1重量份数的麸皮混合,按料水比1:1.1加入水后制成,调pH值为5~5.5。
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