CN107125027A - 一种灵芝的栽培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灵芝的栽培方法，包括：A.栽培种的制作，B.出芝管理。所述方法栽培得到的灵芝品质好，灵芝中的有效成分三萜酸类化合物含量高。

Description

一种灵芝的栽培方法
技术领域
本发明涉及一种灵芝的栽培方法，特别是一种三萜酸类化合物含量高的灵芝的栽培方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是一种珍贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属，在我国有两千多年的药用史。灵芝首载于《神农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，是滋补强壮扶正固本的珍贵药物。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，存在于灵芝的子实体、孢子粉和菌丝体中，具有抑制肿瘤、增强机体对自由基清除的能力，故能减少自由基对机体的损伤、有延缓衰老之功效，还可以提高免疫力、抗炎症、降血脂、降血糖等作用。
随着灵芝的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生灵芝已远远不能满足人们的需求。培养基是灵芝赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对灵芝的菌丝生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中灵芝用的培养基中常以棉籽壳、木屑等为原料，这些原料常占总量的50％-80％，是主要原料，麸皮等原料所占比例较少，通常在10％-20％，但是这些原料本身营养成分少，不利于产出灵芝的品质保证。特别是不能保证灵芝中三萜酸类化合物的含量，使得最终得到的灵芝中三萜酸类化合物含量低。
发明内容
本发明的目的，是提供一种灵芝的栽培方法。所述方法栽培得到的灵芝品质好，灵芝中的有效成分三萜酸类化合物含量高。
本发明是这样实现的。
一种灵芝的栽培方法，包括：A.栽培种的制作，B.出芝管理。
前述的栽培方法，具体包括以下步骤：
(1)选取菌盖肥大、已成熟的灵芝，将菌盖剪下，用70-80％的乙醇进行表面灭菌，得灭菌后的菌体；
(2)将灭菌后的菌体切成1-2立方厘米的小块，出去表面的菌肉，放入装有培养基的培养皿中，在室温下培养6-10h后，得组织块；
(3)将组织块用纸包好麻烦给保温箱中，并使温度保持在25-30℃之间，待形成菌落后，出去杂菌，转入装有基质的试管中培养20-30天，培养温度为26℃～28℃，得灵芝栽培种；
(4)按行距为80-90cm，株距为30-50cm，进行灵芝栽培，栽培时间为4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之间，湿度为85-90％，待菌盖颜色由浅黄边城红褐色，菌盖周围白色的生长圈消失，菌管内散有孢子粉时，进行采收，即可。
前述的灵芝的栽培方法，所述步骤(2)中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-5份、土豆泥150-250份、蛋白胨1-5份、琼脂15-35份、维生素E1-10份、维生素B11-10份、山楂25-35份、麦芽1-10份、丹参5-15份、黄芪20-30份、豆粕45-55份、枇杷枝20-40份、玉米芯20-40份、酒糟10-20份、石膏10-30份、茶渣25-45份、桑树条35-45份、食盐5-15份和水900-1100份制成。
前述的灵芝的栽培方法，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏1.5-2.5份、土豆泥180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂20-24份、维生素E 3-7份、维生素B13-7份、山楂28-32份、麦芽2-8份、丹参8-12份、黄芪22-28份、豆粕48-52份、枇杷枝25-35份、玉米芯25-35份、酒糟12-18份、石膏15-25份、茶渣30-40份、桑树条38-42份、食盐8-12份和水950-1050份制成。
前述的灵芝的栽培方法，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏2份、土豆泥200份、蛋白胨1-2份、琼脂22份、维生素E 5份、维生素B15份、山楂30份、麦芽5份、丹参10份、黄芪25份、豆粕50份、枇杷枝30份、玉米芯30份、酒糟15份、石膏20份、茶渣35份、桑树条40份、食盐10份和水1000份制成。
前述的灵芝的栽培方法，所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40-60％的水煮沸20-30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30-50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20-30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24-48h后，取出，保存，即得。
前述的灵芝的栽培方法，所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
前述的灵芝的栽培方法，所述步骤(3)中，所述基质主要由按重量份计算红糖1-10份、薏仁粉30-40份、稻谷壳50-60份、小麦10-20份、小米10-20份和中药渣30-40份混匀，即得。
前述的灵芝的栽培方法，所述基质主要由按重量份计算红糖5份、薏仁粉35份、稻谷壳55份、小麦15份、小米15份和中药渣35份混匀，即得。
前述的灵芝的栽培方法，所述中药渣主要由按重量份计算的鸭跖草30-40份、地骨皮30-40份和知母20-30份按下述方法制备：取鸭跖草、地骨皮和知母，加8-10倍量水，煎煮1.5-2.5h后，过滤，收集滤液，取滤渣，干燥后，粉碎成粗颗粒，即得。
申请人对灵芝的栽培方法进行了大量的研究，部分如下：
实验例.三萜酸类化合物含量测定
1测定项目：
1.1灵芝1：按实施例1进行栽培，采收得到灵芝1。
1.2灵芝2：栽培方法同实施例1，但培养基中不含山楂、麦芽、丹参、黄芪、豆粕、枇杷枝。
2仪器和试剂
紫外可见分光光度计：北京普析；SB2200超声波清洗器：Shanghai B ranson公司；4001N型电子天平：上海民桥精密科技仪器有限公司；95％乙醇、无水乙醇、香草醛、高氯酸、冰醋酸均为国产分析纯；熊果酸对照品：芜湖甙尔塔医药科技有限公～DELTA(甙尔塔)天然有机化合物信息中心。
3方法与分析
3.1对照品溶液的制备
准确称取105℃干燥至恒重的熊果酸对照品1.00mg，置于100mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。得质量浓度为100g/mL的对照品溶液。
3.2供试品溶液1的制备
取灵芝1，将粉碎，于50℃干燥，称取约1.00g置于150mL磨口锥型瓶中，加入25mL的95％乙醇，超声提取20min，抽滤，滤渣再用25mL 95％乙醇超声提取20min，合并滤液置于100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，制得供试品溶液1。
3.3供试品溶液2的制备
取灵芝2，将粉碎，于50℃干燥，称取约1.00g置于150mL磨口锥型瓶中，加入25mL的95％乙醇，超声提取20min，抽滤，滤渣再用25mL 95％乙醇超声提取20min，合并滤液置于100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，制得供试品溶液2。
3.4测定波长的确定
经紫外扫描，熊果酸在548nm波长处有最大吸收，空白无干扰。故确定波长为548nm。
3.5标准曲线的绘制
准确吸取熊果酸对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别置于5个已编号的5mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却，各加入5％香草醛冰乙酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，随行空白，将容量瓶放人60～70℃水浴中加热15min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，摇匀。在548nm波长处测定吸光度值，以熊果含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝0.0291+0.0066X，R2＝0.9995，结果表明，熊果酸在(20-100ug范围内，熊果酸含量与其吸光度值呈良好的线性关系。
3.6稳定性实验
分别准确吸取供试品溶液1和供试品溶液2各0.4mL，置于5mL容量瓶中，按“3.5”项方法操作，每间隔10min测其吸光度值，结果表明：在显色20-60min内，供试品溶液1和供试品溶液2稳定性比较好。
3.7精密度实验
分别吸取同一份供试品溶液1和供试品溶液2各0.4mL，共5份，按3.5”项方法测定吸光度值，RSD＝1.33％和RSD＝1.28。表明该方法精密度好。
3.8重复性实验
准确称取同一批灵芝1和灵芝2各5份，按“3.2”和“3.3”项方法制得5份供试品溶液1和5份供试品溶液2，分别吸取供试品溶液1和供试品溶液2，0.4mL，按“3.5”项方法测定吸光度值，RSD＝1.50％和1.53％。表明本方法重复性好。
3.9含量测定
分别准确称取灵芝1和灵芝2，各平行分成5份，按上述方法制得5份供试品溶液1和5份供试品溶液2，分别吸取供试品溶液1和供试品溶液2各0.4mL，按上述方法测定吸光度值并计算其总三萜酸含量。结果取平均值，结果如表1所示。
表1 总三萜酸含量测定结果
由表可知，本发明方法栽培得到的灵芝，最终采收的灵芝中总三萜酸的含量较高。灵芝品质好。
与现有技术相比，本发明方法栽培得到的灵芝品质好，灵芝中的有效成分三萜酸类化合物含量高。
实施例1。
培养基原料：葡萄糖20kg、酵母膏2kg、土豆泥200kg、蛋白胨1-2kg、琼脂22kg、维生素E 5kg、维生素B15kg、山楂30kg、麦芽5kg、丹参10kg、黄芪25kg、豆粕50kg、枇杷枝30kg、玉米芯30kg、酒糟15kg、石膏20kg、茶渣35kg、桑树条40kg、食盐10kg和水1000kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
基质原料：红糖5kg、薏仁粉35kg、稻谷壳55kg、小麦15kg、小米15kg和中药渣35kg。
中药渣的制备：取鸭跖草35kg、地骨皮35kg和知母25kg，加9倍量水，煎煮2h后，过滤，收集滤液，取滤渣，干燥后，粉碎成粗颗粒，即得。
基质制作方法：取红糖、薏仁粉、稻谷壳、小麦、小米和中药渣，混匀，即得。
灵芝的栽培方法：
(1)选取菌盖肥大、已成熟的灵芝，将菌盖剪下，用70-80％的乙醇进行表面灭菌，得灭菌后的菌体；
(2)将灭菌后的菌体切成1-2立方厘米的小块，出去表面的菌肉，放入装有培养基的培养皿中，在室温下培养8h后，得组织块；
(3)将组织块用纸包好麻烦给保温箱中，并使温度保持在25-30℃之间，待形成菌落后，出去杂菌，转入装有基质的试管中培养25天，培养温度为26℃～28℃，得灵芝栽培种；
(4)按行距为80-90cm，株距为30-50cm，进行灵芝栽培，栽培时间为4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之间，湿度为85-90％，待菌盖颜色由浅黄边城红褐色，菌盖周围白色的生长圈消失，菌管内散有孢子粉时，进行采收，即可。
实施例2.
培养基原料：葡萄糖25kg、酵母膏2.5kg、土豆泥220kg、蛋白胨2.5kg、琼脂24kg、维生素E 7kg、维生素B17kg、山楂32kg、麦芽8kg、丹参12kg、黄芪28kg、豆粕52kg、枇杷枝35kg、玉米芯35kg、酒糟18kg、石膏25kg、茶渣40kg、桑树条42kg、食盐12kg和水1050kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量60％的水煮沸30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干48h后，取出，保存，即得。
基质原料：红糖10kg、薏仁粉40kg、稻谷壳60kg、小麦20kg、小米20kg和中药渣40kg。
中药渣的制备：取鸭跖草40kg、地骨皮40kg和知母30kg，加10倍量水，煎煮2.5h后，过滤，收集滤液，取滤渣，干燥后，粉碎成粗颗粒，即得。
基质制作方法：取红糖、薏仁粉、稻谷壳、小麦、小米和中药渣，混匀，即得。
灵芝的栽培方法：
(1)选取菌盖肥大、已成熟的灵芝，将菌盖剪下，用70-80％的乙醇进行表面灭菌，得灭菌后的菌体；
(2)将灭菌后的菌体切成1-2立方厘米的小块，出去表面的菌肉，放入装有培养基的培养皿中，在室温下培养10h后，得组织块；
(3)将组织块用纸包好麻烦给保温箱中，并使温度保持在25-30℃之间，待形成菌落后，出去杂菌，转入装有基质的试管中培养30天，培养温度为26℃～28℃，得灵芝栽培种；
(4)按行距为80-90cm，株距为30-50cm，进行灵芝栽培，栽培时间为4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之间，湿度为85-90％，待菌盖颜色由浅黄边城红褐色，菌盖周围白色的生长圈消失，菌管内散有孢子粉时，进行采收，即可。
实施例3.
培养基原料：葡萄糖15kg、酵母膏1.5kg、土豆泥180kg、蛋白胨1.5kg、琼脂20kg、维生素E 3kg、维生素B13kg、山楂28kg、麦芽2kg、丹参8kg、黄芪22kg、豆粕48kg、枇杷枝25kg、玉米芯25kg、酒糟12kg、石膏15kg、茶渣30kg、桑树条38kg、食盐8kg和水950kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40％的水煮沸20分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24h后，取出，保存，即得。
基质原料：红糖1kg、薏仁粉30kg、稻谷壳50kg、小麦10kg、小米10kg和中药渣30kg。
中药渣的制备：取鸭跖草30kg、地骨皮30kg和知母20kg，加8倍量水，煎煮1.5h后，过滤，收集滤液，取滤渣，干燥后，粉碎成粗颗粒，即得。
基质制作方法：取红糖、薏仁粉、稻谷壳、小麦、小米和中药渣，混匀，即得。
灵芝的栽培方法：
(1)选取菌盖肥大、已成熟的灵芝，将菌盖剪下，用70-80％的乙醇进行表面灭菌，得灭菌后的菌体；
(2)将灭菌后的菌体切成1-2立方厘米的小块，出去表面的菌肉，放入装有培养基的培养皿中，在室温下培养6h后，得组织块；
(3)将组织块用纸包好麻烦给保温箱中，并使温度保持在25-30℃之间，待形成菌落后，出去杂菌，转入装有基质的试管中培养20天，培养温度为26℃～28℃，得灵芝栽培种；
(4)按行距为80-90cm，株距为30-50cm，进行灵芝栽培，栽培时间为4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之间，湿度为85-90％，待菌盖颜色由浅黄边城红褐色，菌盖周围白色的生长圈消失，菌管内散有孢子粉时，进行采收，即可。

Claims (10)

1.一种灵芝的栽培方法，其特征在于：包括：A.栽培种的制作，B.出芝管理。
2.如权利要求1所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
选取菌盖肥大、已成熟的灵芝，将菌盖剪下，用70-80%的乙醇进行表面灭菌，得灭菌后的菌体；
将灭菌后的菌体切成1-2立方厘米的小块，出去表面的菌肉，放入装有培养基的培养皿中，在室温下培养6-10h后，得组织块；
将组织块用纸包好麻烦给保温箱中，并使温度保持在25-30℃之间，待形成菌落后，出去杂菌，转入装有基质的试管中培养20-30天，培养温度为26℃～28℃，得灵芝栽培种；
按行距为80-90cm，株距为30-50cm，进行灵芝栽培，栽培时间为4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之间，湿度为85-90%，待菌盖颜色由浅黄边城红褐色，菌盖周围白色的生长圈消失，菌管内散有孢子粉时，进行采收，即可。
3.如权利要求2所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-5份、土豆泥150-250份、蛋白胨1-5份、琼脂15-35份、维生素E1-10份、维生素B1 1-10份、山楂25-35份、麦芽1-10份、丹参5-15份、黄芪20-30份、豆粕45-55份、枇杷枝20-40份、玉米芯20-40份、酒糟10-20份、石膏10-30份、茶渣25-45份、桑树条35-45份、食盐5-15份和水900-1100份制成。
4.如权利要求3所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏1.5-2.5份、土豆泥180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂20-24份、维生素E 3-7份、维生素B1 3-7份、山楂28-32份、麦芽2-8份、丹参8-12份、黄芪22-28份、豆粕48-52份、枇杷枝25-35份、玉米芯25-35份、酒糟12-18份、石膏15-25份、茶渣30-40份、桑树条38-42份、食盐8-12份和水950-1050份制成。
5.如权利要求4所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏2份、土豆泥200份、蛋白胨1-2份、琼脂22份、维生素E 5份、维生素B15份、山楂30份、麦芽5份、丹参10份、黄芪25份、豆粕50份、枇杷枝30份、玉米芯30份、酒糟15份、石膏20份、茶渣35份、桑树条40份、食盐10份和水1000份制成。
6.如权利要求4或5所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40-60%的水煮沸20-30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30-50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20-30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24-48h后，取出，保存，即得。
7.如权利要求6所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50%的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
8.如权利要求2所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述基质主要由按重量份计算红糖1-10份、薏仁粉30-40份、稻谷壳50-60份、小麦10-20份、小米10-20份和中药渣30-40份混匀，即得。
9.如权利要求8所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述基质主要由按重量份计算红糖5份、薏仁粉35份、稻谷壳55份、小麦15份、小米15份和中药渣35份混匀，即得。
10.如权利要求8或9所述的灵芝的栽培方法，其特征在于：所述中药渣主要由按重量份计算的鸭跖草30-40份、地骨皮30-40份和知母20-30份按下述方法制备：取鸭跖草、地骨皮和知母，加8-10倍量水，煎煮1.5-2.5h后，过滤，收集滤液，取滤渣，干燥后，粉碎成粗颗粒，即得。
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