CN107164236A - 一种灵芝母种的制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灵芝母种的制作方法，取灵芝组织片，接种到灭菌后的试管培养基上，直至菌丝长满斜面，即得。用本发明方法的到的母种，可使后期灵芝菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度好。

Description

一种灵芝母种的制作方法
技术领域
本发明涉及一种灵芝母种的制作方法，特别是一种灵芝多糖含量高的灵芝母种制作方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是一种珍贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属，在我国有两千多年的药用史。灵芝首载于《神农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，是滋补强壮扶正固本的珍贵药物。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，存在于灵芝的子实体、孢子粉和菌丝体中，具有抑制肿瘤、增强机体对自由基清除的能力，故能减少自由基对机体的损伤、有延缓衰老之功效，还可以提高免疫力、抗炎症、降血脂、降血糖等作用。
随着灵芝的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生灵芝已远远不能满足人们的需求。培养基是灵芝赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对灵芝的菌丝生长、产量和活性成分等产生重要的影响。其中，灵芝母种用培养基对后期的成品灵芝的质量影响很大。现有技术中制作灵芝母种所用的培养基大多数只含有葡萄糖、土豆、蛋白胨等。这样制成的培养基营养不充足，使得后期菌丝生长状态不好，得到的菌丝洁白度、紧密度和长势不好。
发明内容
本发明的目的，是提供一种灵芝母种的制作方法。用本发明方法的到的母种，可使后期灵芝菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度好。
本发明是这样实现的。
一种灵芝母种的制作方法，取灵芝组织片，接种到灭菌后的试管培养基上，直至菌丝长满斜面，即得。
前述的灵芝母种的制作方法中，取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养25d-35d，至菌丝长满斜面，即得。
前述的灵芝母种的制作方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-5份、土豆泥150-250份、蛋白胨1-5份、琼脂15-35份、维生素E1-10份、维生素B11-10份、山楂25-35份、麦芽1-10份、丹参5-15份、黄芪20-30份、豆粕45-55份、枇杷枝20-40份、玉米芯20-40份、酒糟10-20份、石膏10-30份、茶渣25-45份、桑树条35-45份、食盐5-15份和水900-1100份制成。
前述的灵芝母种的制作方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏1.5-2.5份、土豆泥180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂20-24份、维生素E 3-7份、维生素B1 3-7份、山楂28-32份、麦芽2-8份、丹参8-12份、黄芪22-28份、豆粕48-52份、枇杷枝25-35份、玉米芯25-35份、酒糟12-18份、石膏15-25份、茶渣30-40份、桑树条38-42份、食盐8-12份和水950-1050份制成。
前述的灵芝母种的制作方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏2份、土豆泥200份、蛋白胨1-2份、琼脂22份、维生素E5份、维生素B15份、山楂30份、麦芽5份、丹参10份、黄芪25份、豆粕50份、枇杷枝30份、玉米芯30份、酒糟15份、石膏20份、茶渣35份、桑树条40份、食盐10份和水1000份制成。
前述的灵芝母种的制作方法中，所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40-60％的水煮沸20-30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30-50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20-30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24-48h后，取出，保存，即得。
前述的灵芝母种的制作方法中，所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
申请人对灵芝母种的制备进行了大量的研究，部分如下：
实验例.菌丝生长情况考察
1材料
1.1灵芝子实体：同一批灵芝子实体，由贵州黔芝灵绿色农业科技发展有限公司提供。
1.2培养基1：按实施例1进行制作。
1.3培养基2：
原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、琼脂20kg和细胞分裂素0.4kg。
制作工艺：
(1)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
2试验方法和结果
将同一批灵芝子实体平均分成2组，即处理组1和处理组2。
处理组1：按实施例1的方法制备灵芝母种，将得到的灵芝母种分别转接入各复壮培养基试管中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，继续置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，即得复壮后的菌丝。过程中观察菌丝的生长情况，并作记录。
处理2：处理方法同实施例1，但制备灵芝母种时，采用的培养基为培养基2。
记录结果见表1和表2。
表1不同复壮培养基上菌丝爬壁情况
表2生长形状观察结果
组别 菌丝洁白度 紧密度 菌丝长势
处理组1 洁白 紧密 很旺盛
处理组2 暗辉 紧密 旺盛
由表可知，本发明方法得到的灵芝母种，可使得后期的灵芝菌丝长势好。
与现有技术相比，用本发明方法的到的母种，可使后期灵芝菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度好。具体实施方式
实施例1。
培养基原料：葡萄糖20kg、酵母膏2kg、土豆泥200kg、蛋白胨1-2kg、琼脂22kg、维生素E 5kg、维生素B15kg、山楂30kg、麦芽5kg、丹参10kg、黄芪25kg、豆粕50kg、枇杷枝30kg、玉米芯30kg、酒糟15kg、石膏20kg、茶渣35kg、桑树条40kg、食盐10kg和水1000kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
母种制作方法：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养30d，至菌丝长满斜面，即得。
实施例2.
培养基原料：葡萄糖25kg、酵母膏2.5kg、土豆泥220kg、蛋白胨2.5kg、琼脂24kg、维生素E 7kg、维生素B17kg、山楂32kg、麦芽8kg、丹参12kg、黄芪28kg、豆粕52kg、枇杷枝35kg、玉米芯35kg、酒糟18kg、石膏25kg、茶渣40kg、桑树条42kg、食盐12kg和水1050kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量60％的水煮沸30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干48h后，取出，保存，即得。
母种制作方法：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养35d，至菌丝长满斜面，即得。
实施例3.
培养基原料：葡萄糖15kg、酵母膏1.5kg、土豆泥180kg、蛋白胨1.5kg、琼脂20kg、维生素E 3kg、维生素B13kg、山楂28kg、麦芽2kg、丹参8kg、黄芪22kg、豆粕48kg、枇杷枝25kg、玉米芯25kg、酒糟12kg、石膏15kg、茶渣30kg、桑树条38kg、食盐8kg和水950kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40％的水煮沸20分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24h后，取出，保存，即得。
母种制作方法：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养25d，至菌丝长满斜面，即得。
实施例4.
培养基原料：葡萄糖30kg、酵母膏5kg、土豆泥250kg、蛋白胨5kg、琼脂35kg、维生素E10kg、维生素B110kg、山楂35kg、麦芽10kg、丹参15kg、黄芪30kg、豆粕55kg、枇杷枝40kg、玉米芯40kg、酒糟20kg、石膏30kg、茶渣45kg、桑树条45kg、食盐15kg和水1100kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量55％的水煮沸28分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热45min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌28分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干40h后，取出，保存，即得。
母种制作方法：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养25d，至菌丝长满斜面，即得。
实施例5.
培养基原料：葡萄糖10kg、酵母膏1kg、土豆泥150kg、蛋白胨1kg、琼脂15kg、维生素E1kg、维生素B11kg、山楂25kg、麦芽1kg、丹参5kg、黄芪20kg、豆粕45kg、枇杷枝20kg、玉米芯20kg、酒糟10kg、石膏10kg、茶渣25kg、桑树条35kg、食盐5kg和水900kg。
培养基制作方法：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量43％的水煮沸24分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热37min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌23分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干30h后，取出，保存，即得。
母种制作方法：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养25d，至菌丝长满斜面，即得。

Claims (7)

1.一种灵芝母种的制作方法，其特征在于：取灵芝组织片，接种到灭菌后的试管培养基上，直至菌丝长满斜面，即得。
2.如权利要求1所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：取野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒、洗净后吸干水分，菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于试管斜面培养基上，培养，在26℃～28℃条件下培养25d-35d，至菌丝长满斜面，即得。
3.如权利要求2所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-5份、土豆泥150-250份、蛋白胨1-5份、琼脂15-35份、维生素E1-10份、维生素B1 1-10份、山楂25-35份、麦芽1-10份、丹参5-15份、黄芪20-30份、豆粕45-55份、枇杷枝20-40份、玉米芯20-40份、酒糟10-20份、石膏10-30份、茶渣25-45份、桑树条35-45份、食盐5-15份和水900-1100份制成。
4.如权利要求3所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏1.5-2.5份、土豆泥180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂20-24份、维生素E 3-7份、维生素B1 3-7份、山楂28-32份、麦芽2-8份、丹参8-12份、黄芪22-28份、豆粕48-52份、枇杷枝25-35份、玉米芯25-35份、酒糟12-18份、石膏15-25份、茶渣30-40份、桑树条38-42份、食盐8-12份和水950-1050份制成。
5.如权利要求4所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏2份、土豆泥200份、蛋白胨1-2份、琼脂22份、维生素E 5份、维生素B1 5份、山楂30份、麦芽5份、丹参10份、黄芪25份、豆粕50份、枇杷枝30份、玉米芯30份、酒糟15份、石膏20份、茶渣35份、桑树条40份、食盐10份和水1000份制成。
6.如权利要求4或5所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40-60%的水煮沸20-30分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热30-50min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌20-30分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24-48h后，取出，保存，即得。
7.如权利要求6所述的灵芝母种的制作方法，其特征在于：所述培养基这样制作：土豆泥、山楂、丹参、黄芪、枇杷枝、桑树条、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50%的水煮沸25分钟，滤渣弃去，滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、琼脂，边加边搅拌，加完后，继续加热40min，加入维生素E和维生素B1，搅拌均匀后，分装，硅胶塞密封，包好，120-122度下灭菌25分钟后，冷却至50-60度，倾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
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