CN107245455A - 一种灵芝菌种复壮方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝菌种复壮方法，包括灵芝菌种的制备、一次培养和二次培养。本发明方法进行复壮，菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度和长势好。
Description
技术领域
本发明涉及一种灵芝菌种复壮方法，特别是一种菌丝洁白度好的灵芝复壮方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是一种珍贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属，在我国有两千多年的药用史。灵芝首载于《神农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，是滋补强壮扶正固本的珍贵药物。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，存在于灵芝的子实体、孢子粉和菌丝体中，具有抑制肿瘤、增强机体对自由基清除的能力，故能减少自由基对机体的损伤、有延缓衰老之功效，还可以提高免疫力、抗炎症、降血脂、降血糖等作用。
随着灵芝的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生灵芝已远远不能满足人们的需求。培养基是灵芝赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对灵芝的菌丝生长、产量和活性成分等产生重要的影响。其中，复壮用培养基对后期的成品灵芝的质量影响很大。现有复壮方法中所用的培养基大多数只含有葡萄糖、土豆、蛋白胨等。这样制成的培养基营养不充足，使得复壮过程中菌丝生长状态不好，得到的菌丝洁白度、紧密度和长势不好。
发明内容
本发明的目的，是提供一种灵芝复壮方法。本发明方法进行复壮，菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度和长势好。
本发明是这样实现的。
一种灵芝菌种复壮方法，包括灵芝菌种的制备、一次培养和二次培养。
前述的灵芝菌种复壮方法，具体包括以下步骤：
(1)灵芝菌种的制备：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，置于培养基中培养10～15天，得灵芝菌种；
(2)一次培养：取小米粉，加水拌湿使得小米粉的含水量为50-60％的小米粉培养基，将灵芝菌种置于小米培养基中，于20-30℃下培养8-12天后，得一次培养灵芝菌种；
(3)二次培养：将一次培养灵芝菌种转入装有培养基的试管中，塞入试管塞，于25-28℃培养，待菌丝生长满试管时停止培养，即可。
前述的灵芝菌种复壮方法，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂15-25份、细胞分裂素0.3-0.5份、鱼腥草10-20份、苦参1-10份、九里香1-10份和青天葵5-15份制成。
前述的灵芝菌种复壮方法，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖18-22份、酵母膏3-5份、土豆190-210份、蛋白胨1.8-2.2份、琼脂18-22份、细胞分裂素0.3-0.5份、鱼腥草13-17份、苦参3-7份、九里香3-7份和青天葵8-12份制成。
前述的灵芝菌种复壮方法，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2.0份、琼脂20份、细胞分裂素0.4份、鱼腥草15份、苦参5份、九里香5份和青天葵10份制成。
前述的灵芝菌种复壮方法，所述培养基按下述步骤制备：
(1)取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加6-8倍量水，煎煮2-3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加5-7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
前述的灵芝菌种复壮方法，所述培养基按下述步骤制备：
(1)取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
申请人对灵芝复壮方法进行了大量的研究，部分实验如下：
实验例.菌丝生长情况考察
1材料
1.1灵芝：由山东省寿光市食用菌研究所提供。
1.2对比培养基：
原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、琼脂20kg和细胞分裂素0.4kg。
制作工艺：
(1)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
2试验方法和结果
将灵芝分成2组，本发明组和对照组，本发明组按实施例1进行复壮。对照组复壮方法同实施例1，但灵芝菌种的制备和二次培养时，所用的培养基为上述对比培养基。过程中观察菌丝的生长情况，并作记录。结果见表1和表2。
表1不同复壮培养基上菌丝爬壁情况
表2生长形状观察结果
| 组别 | 菌丝洁白度 | 紧密度 | 菌丝长势 |
| 本发明组 | 洁白 | 紧密 | 很旺盛 |
| 对照组 | 暗辉 | 紧密 | 旺盛 |
由表可知，本发明方法进行复壮后的灵芝菌丝长势好，生长形状优于对照组进行复壮得到的菌丝。
与现有技术相比，用本发明方法进行复壮，菌丝生长状态好，得到的菌丝洁白度、紧密度和长势好。
具体实施方式
实施例1。
培养基原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、琼脂20kg、细胞分裂素0.4kg、鱼腥草15kg、苦参5kg、九里香5kg和青天葵10kg。
培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
(1)灵芝菌种的制备：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，置于培养基中培养13天，得灵芝菌种；
(2)一次培养：取小米粉，加水拌湿使得小米粉的含水量为50-60％的小米粉培养基，将灵芝菌种置于小米培养基中，于20-30℃下培养10天后，得一次培养灵芝菌种；
(3)二次培养：将一次培养灵芝菌种转入装有培养基的试管中，塞入试管塞，于25-28℃培养，待菌丝生长满试管时停止培养，即可。
实施例2.
培养基原料：葡萄糖25kg、酵母膏5kg、土豆220kg、蛋白胨2.5kg、琼脂25kg、细胞分裂素0.5kg、鱼腥草20kg、苦参10kg、九里香10kg和青天葵15kg。
培养基制作方法：
(1)取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加8倍量水，煎煮3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加7倍量水煮沸30分钟，过滤，滤渣加7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，8支用报纸包好，120-122℃下灭菌30min后，冷却至50-60℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置48小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
(1)灵芝菌种的制备：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，置于培养基中培养15天，得灵芝菌种；
(2)一次培养：取小米粉，加水拌湿使得小米粉的含水量为50-60％的小米粉培养基，将灵芝菌种置于小米培养基中，于20-30℃下培养12天后，得一次培养灵芝菌种；
(3)二次培养：将一次培养灵芝菌种转入装有培养基的试管中，塞入试管塞，于25-28℃培养，待菌丝生长满试管时停止培养，即可。
实施例3.
培养基原料：葡萄糖15kg、酵母膏3kg、土豆180kg、蛋白胨1.5kg、琼脂15kg、细胞分裂素0.3kg、鱼腥草10kg、苦参1kg、九里香1kg和青天葵5kg。
培养基制作方法：
(1)取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加6倍量水，煎煮2h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加5倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加5倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20min后，冷却至50-60℃，倾斜5度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
(1)灵芝菌种的制备：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，置于培养基中培养10天，得灵芝菌种；
(2)一次培养：取小米粉，加水拌湿使得小米粉的含水量为50-60％的小米粉培养基，将灵芝菌种置于小米培养基中，于20-30℃下培养8天后，得一次培养灵芝菌种；
(3)二次培养：将一次培养灵芝菌种转入装有培养基的试管中，塞入试管塞，于25-28℃培养，待菌丝生长满试管时停止培养，即可。
Claims (7)
1.一种灵芝菌种复壮方法，其特征在于：包括灵芝菌种的制备、一次培养和二次培养。
2.根据权利要求1所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）灵芝菌种的制备：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，置于培养基中培养10～15天，得灵芝菌种；
（2）一次培养：取小米粉，加水拌湿使得小米粉的含水量为50-60%的小米粉培养基，将灵芝菌种置于小米培养基中，于20-30℃下培养8-12天后，得一次培养灵芝菌种；
（3）二次培养：将一次培养灵芝菌种转入装有培养基的试管中，塞入试管塞，于25-28℃培养，待菌丝生长满试管时停止培养，即可。
3.如权利要求2所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂15-25份、细胞分裂素0.3-0.5份、鱼腥草10-20份、苦参1-10份、九里香1-10份和青天葵5-15份制成。
4.如权利要求3所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖18-22份、酵母膏3-5份、土豆190-210份、蛋白胨1.8-2.2份、琼脂18-22份、细胞分裂素0.3-0.5份、鱼腥草13-17份、苦参3-7份、九里香3-7份和青天葵8-12份制成。
5.如权利要求4所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2.0份、琼脂20份、细胞分裂素0.4份、鱼腥草15份、苦参5份、九里香5份和青天葵10份制成。
6.如权利要求4-5中任一项所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：所述培养基按下述步骤制备：
（1）取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加6-8倍量水，煎煮2-3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
（2）土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加5-7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
（3）B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
（4）C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
7.如权利要求6所述的灵芝菌种复壮方法，其特征在于：所述培养基按下述步骤制备：
（1）取鱼腥草、苦参、九里香和青天葵，加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
（2）土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
（3）B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
（4）C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
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