CN108901629A - 一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法 - Google Patents

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颜廷武
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刘建华
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Abstract

本发明属于灵芝人工培养技术领域，具体涉及一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法。培养基成分包括马铃薯180‑220g、葡萄糖15‑25g、蛋白胨1.5‑2.5g、KH2PO42.5‑3.5g、MgSO41‑2g、维生素B18‑12mg、琼脂15‑25g、水950‑1050mL，pH5.5‑6.5。应用本发明的培养基制备配方所生产的母种培养基菌丝生长速度快、长势强且健壮、菌丝满管时间短。

Description

一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法
技术领域
本发明属于灵芝人工培养技术领域，具体涉及一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法。
背景技术
我国灵芝栽培选用的母种培养基大多引自韩国、日本等地，由于引进母种培养基的产地自然气候和环境差异大，引起母种培养基菌种活性退化、菌丝生长速度过慢、长势弱、产量低、品质差、抗病虫害及杂菌能力差等情况，缺乏适宜我国各产地栽培的母种培养基，我国自主选育的灵芝母种培养基较缺乏。
因此灵芝母种培养基制备技术来解决灵芝母种培养基的一系列问题尤为重要，而灵芝母种培养基各有不同，产量与品质也高低不一，这种情况严重影响其产业发展。在母种培养中，培养基的配方是否优良，直接影响菌丝体的萌发时间、生长速度、长势强弱等指标。因此，对灵芝母种培养基进行优化，筛选出适合灵芝菌丝体生长的最佳母种配方具有一定的理论与实际意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法，应用本发明的培养基制备配方所生产的母种培养基菌丝生长速度快、长势强且健壮、菌丝满管时间短。
本发明是这样实现的，一种灵芝母种培养基，包括马铃薯180-220g、葡萄糖15-25g、蛋白胨1.5-2.5g、KH2PO4 2.5-3.5g、MgSO4 1-2g、维生素B18-12mg、琼脂15-25g、水950-1050mL，pH 5.5-6.5。
进一步地，还包括木屑45-55g。
进一步地，上述培养基具体包括马铃薯200g、木屑50g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、水1000mL，pH 5.5-6.5。
本发明还提供一种灵芝母种培养基的制备方法，包括如下步骤：
1)按照上述的配方称取各个成分；
2)将各个成分混合，搅拌均匀；
3)将培养基装入试管，每个试管中5-6.5mL，用塞子塞紧；
4)高压灭菌锅灭菌35-45min，结束后待温度降至55-65℃时取出，摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，待凝固后即可接种灵芝母种培养基。
本发明还保护一种灵芝母种的培养方法，包括如下步骤：
a)按照上述的配方配置为斜面固体培养基；
b)取灵芝母种活化，活化方法为组织分离法，即在灵芝母种子实体上切一小块子实体组织，用来接种；
c)将活化后的灵芝母种接种在培养基斜面底部，22℃恒温培养7-12d，至培养基表面长满浓密菌丝，放入2-4℃冰箱中保存备用。
进一步地，上述方法还包括扩大培养步骤：将所述步骤c)中的菌丝接种到按照权利要求1或2或3任一所述的配方配置的斜面固体培养基上，22℃恒温培养至培养基表面长满菌丝，重复1-3次。
进一步地，所述灵芝为松杉灵芝、韩芝和赤芝。
与现有技术相比，本发明的优点在于：利用本发明提供的培养基配方及方法制备的母种培养基菌丝生长速度快、长势强且健壮、菌丝满管时间短。
附图说明
图1为本发明三个实施例培养获得菌丝体多糖检测结果；
图2为本发明三个实施例培养获得的菌丝体三萜含量检测结果；
图3为实施例1培养的菌丝照片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
为了解决现有技术中灵芝母种萌发时间短、菌丝生长速度过慢、长势弱、菌种满管时间长、菌丝稀疏不健壮等问题，本发明提供了一种灵芝母种培养方法、培养基及培养基制备方法，接种后菌丝生长速度快、长势强且健壮、菌丝满管时间短。本发明所用材料、药品均为市售。
为了选择最优的灵芝母种培养基，本发明设计了4种不同母种培养基来比较筛选适宜于灵芝的最佳母种培养基配方：A：马铃薯200g(取块茎打泥)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml；B：马铃薯200g，KH2PO4 3g，C:马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，KH2PO4 3g，MgSO41.5g，维生素B1 10mg，琼脂20g，水1000ml；D：马铃薯200g，木屑50g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，KH2PO4 3g，MgSO4 1.5g，维生素B1 10mg，琼脂20g，水1000ml；将培养基装入试管，塞紧，之后用高压灭菌锅灭菌40分钟，待温度降至60℃时取出，摆成斜面，斜面长度约占管长的2/3。将经过活化的松杉灵芝母种分别接种于A、B、C、D 4种母种培养基斜面底部，每种培养基接种9支，置于恒温下培养5d，在菌丝生长前沿做出标记，继续培养24h，测其菌丝生长的长度，观察菌丝生长的浓密度。结果见下表：
从上表可知，C、D母种培养基对松杉灵芝菌丝生长的影响要好于A、B培养基，每天的菌丝速度达到0.586cm和0.583cm，且菌丝长势浓密。因而C、D母种培养基更加适合松杉灵芝的菌丝培养。而添加木屑增加了培养基中木质纤维、松脂类、松香类等物质含量，促进菌丝的快速萌发和健壮生长，因此最终选择D母种培养基。
实施例1、
1、按下述配方称取培养基的各个成分：马铃薯200g、木屑50g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、水1000mL，pH值5.5-6.5。
2、将各个成分混合，搅拌均匀；
3、将液态的培养基装入试管，每个试管中6mL，用塞子塞紧；
4、将试管放入高压灭菌锅灭菌40min，结束后待温度降至60℃时取出，摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，待凝固后即可接种灵芝母种培养基；
5、取松杉灵芝母种活化，活化方法为组织分离法，即在灵芝母种子实体上切一小块子实体组织，用来接种；
6、将活化后的灵芝母种接种在培养基斜面底部，22℃恒温培养10d，至培养基表面长满浓密菌丝，放入2-4℃冰箱中保存备用。
7、将步骤6的培养基中的菌丝接种到上述的配方配置的斜面固体培养基上，22℃恒温培养至培养基表面长满菌丝，重复2次，进行扩大培养，满足生产需要。
实施例2、
1、按下述配方称取培养基的各个成分：马铃薯180g、葡萄糖15g、蛋白胨1.5g、KH2PO4 2.5g、MgSO4 1g、维生素B1 8mg、琼脂15g、水950mL，pH值5.5-6.5.
2、将各个成分混合，搅拌均匀；
3、将液态的培养基装入试管，每个试管中5mL，用塞子塞紧；
4、将试管放入高压灭菌锅灭菌35min，结束后待温度降至55℃时取出，摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，待凝固后即可接种灵芝母种培养基；
5、取韩芝母种活化，活化方法为组织分离法，即在灵芝母种子实体上切一小块子实体组织，用来接种；
6、将活化后的灵芝母种接种在培养基斜面底部，22℃恒温培养10d，至培养基表面长满浓密菌丝，放入2-4℃冰箱中保存备用。
7、将步骤6的培养基中的菌丝接种到上述的配方配置的斜面固体培养基上，22℃恒温培养至培养基表面长满菌丝，重复3次，进行扩大培养，满足生产需要。
实施例3、
1、按下述配方称取培养基的各个成分：马铃薯220g、木屑55g、葡萄糖25g、蛋白胨2.5g、KH2PO4 3.5g、MgSO4 2g、维生素B1 12mg、琼脂25g、水1050mL，pH值5.5-6.5.
2、将各个成分混合，搅拌均匀；
3、将液态的培养基装入试管，每个试管中6.5mL，用塞子塞紧；
4、将试管放入高压灭菌锅灭菌45min，结束后待温度降至65℃时取出，摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，待凝固后即可接种灵芝母种培养基；
5、取赤芝母种活化，活化方法为组织分离法，即在灵芝母种子实体上切一小块子实体组织，用来接种；
6、将活化后的灵芝母种接种在培养基斜面底部，22℃恒温培养10d，至培养基表面长满浓密菌丝，放入2-4℃冰箱中保存备用。
7、将步骤6的培养基中的菌丝接种到上述的配方配置的斜面固体培养基上，22℃恒温培养至培养基表面长满菌丝，重复1次，进行扩大培养，满足生产需要。
实施例1、2、3的灵芝母种培养过程中，测量菌丝的生长速度，见下表：
通过对比可知，松杉灵芝与韩芝和赤芝在该母种培养基下的生长速度均很快，但松杉芝的生长速度要远快与韩芝和赤芝，在培养10天后，松杉芝的生长长度为6.10cm，而韩芝和赤芝为4.60cm和4.70cm，因而，松杉芝生长更加迅速，更适合辽宁东部林区的栽培。
实施例1、2、3的灵芝母种培养过程中，测量菌丝体多糖含量，结果见图1，多糖是灵芝有效成分之一。可以看出松杉灵芝、韩芝和赤芝多糖的含量均呈现呈先升后降趋势。在经过1～2d的适应期后，灵芝菌丝体多糖含量逐步提高增加，在第6天左右菌丝体中多糖含量达到最大，但不同品种间有差异，松杉灵芝多糖含量最高值为120.51mg/g，韩芝多糖含量最高值为110.10mg/g，赤芝介于二者之间。随着时间的增加，多糖含量呈先增加后降低的趋势，并逐渐趋于稳定，这可能是由于培养基中营养物质逐步被灵芝菌丝体吸收消耗，多糖产生量逐渐降低并被菌丝体消耗一部分。
实施例1、2、3的灵芝母种培养过程中，测量菌丝体三萜含量，结果见图2，从图中可以看出，1～2d的适应期时，不同品种灵芝菌丝体中三萜含量几乎一致，松杉灵芝、韩芝和赤芝的三萜含量分别为16.13mg/g、15.62mg/g和15.74mg/g，品种间差异不明显。2～6d菌丝体中三萜含量逐渐增加，6～9d三萜含量基本保持恒定。第6d时，松杉灵芝菌丝体中三萜含量41.00mg/g，第9d时含量达到最高，为43.57mg/g，仅比第6d增加了2.57mg/g。

Claims (7)

1.一种灵芝母种培养基，其特征在于，包括马铃薯180-220g、葡萄糖15-25g、蛋白胨1.5-2.5g、KH2PO4 2.5-3.5g、MgSO4 1-2g、维生素B18-12mg、琼脂15-25g、水950-1050mL，pH5.5-6.5。
2.如权利要求1所述的灵芝母种培养基，其特征在于，还包括木屑45-55g。
3.如权利要求2所述的灵芝母种培养基，其特征在于，包括马铃薯200g、木屑50g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、水1000mL，pH 5.5-6.5。
4.一种灵芝母种培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)按照权利要求1或2或3任一所述的配方称取各个成分；
2)将各个成分混合，搅拌均匀；
3)将培养基装入试管，每个试管中5-6.5mL，用塞子塞紧；
4)高压灭菌锅灭菌35-45min，结束后待温度降至55-65℃时取出，摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，待凝固后即可接种灵芝母种培养基。
5.一种灵芝母种的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)按照权利要求1或2或3任一所述的配方配置为斜面固体培养基；
b)取灵芝母种活化，活化方法为组织分离法，即在灵芝母种子实体上切一小块子实体组织，用来接种；
c)将活化后的灵芝母种接种在培养基斜面底部，22℃恒温培养7-12d，至培养基表面长满浓密菌丝，放入2-4℃冰箱中保存备用。
6.如权利要求5所述的灵芝母种的培养方法，其特征在于，还包括扩大培养步骤：将所述步骤c)中的菌丝接种到按照权利要求1或2或3任一所述的配方配置的斜面固体培养基上，22℃恒温培养至培养基表面长满菌丝，重复1-3次。
7.如权利要求1所述的灵芝母种培养基，其特征在于，所述灵芝为松杉灵芝、韩芝和赤芝。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102870595A (zh) * 2012-09-13 2013-01-16 广东省微生物研究所 一种可实现高原栽培的野生松杉灵芝的人工栽培方法
CN105009930A (zh) * 2014-04-25 2015-11-04 江苏中祥高科技实业有限公司 一种富硒灵芝菌丝体生产方法
CN105660165A (zh) * 2015-12-25 2016-06-15 龙泉市准野生灵芝研究所 准野生赤芝栽培方法
CN105861321A (zh) * 2016-04-20 2016-08-17 广东省微生物研究所 一种白肉灵芝新菌种及其栽培方法和应用
CN106479903A (zh) * 2016-10-14 2017-03-08 北京京诚生物科技有限公司 一种活体灵芝盆景的制作方法
CN106518353A (zh) * 2016-10-27 2017-03-22 广东雄达实业发展有限公司 一种灵芝培养基及其制备方法及灵芝的种植方法
CN106550769A (zh) * 2016-11-25 2017-04-05 邓小坤 灵芝菌棒制作方法
CN107164236A (zh) * 2017-05-24 2017-09-15 贵州黔芝灵绿色农业科技发展有限公司 一种灵芝母种的制作方法
CN107471896A (zh) * 2017-09-11 2017-12-15 锁现民 一种玻璃瓶中快速生产灵芝的工艺

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102870595A (zh) * 2012-09-13 2013-01-16 广东省微生物研究所 一种可实现高原栽培的野生松杉灵芝的人工栽培方法
CN105009930A (zh) * 2014-04-25 2015-11-04 江苏中祥高科技实业有限公司 一种富硒灵芝菌丝体生产方法
CN105660165A (zh) * 2015-12-25 2016-06-15 龙泉市准野生灵芝研究所 准野生赤芝栽培方法
CN105861321A (zh) * 2016-04-20 2016-08-17 广东省微生物研究所 一种白肉灵芝新菌种及其栽培方法和应用
CN106479903A (zh) * 2016-10-14 2017-03-08 北京京诚生物科技有限公司 一种活体灵芝盆景的制作方法
CN106518353A (zh) * 2016-10-27 2017-03-22 广东雄达实业发展有限公司 一种灵芝培养基及其制备方法及灵芝的种植方法
CN106550769A (zh) * 2016-11-25 2017-04-05 邓小坤 灵芝菌棒制作方法
CN107164236A (zh) * 2017-05-24 2017-09-15 贵州黔芝灵绿色农业科技发展有限公司 一种灵芝母种的制作方法
CN107471896A (zh) * 2017-09-11 2017-12-15 锁现民 一种玻璃瓶中快速生产灵芝的工艺

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