CN105724049A - 一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法 - Google Patents

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钟石
李有贵
计东风
陈伟国
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    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms

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Abstract

本发明公开了一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法，A、从桑树采集获得野生桑黄子实体，经过菌株分离纯化后接种到培养基中培养获得纯化桑黄菌种；B、将桑黄菌种接种至人工袋料中，培养出桑黄子实体；C、经过人工种植后，在无菌条件下从人工种植桑黄子实体中分离获得纯化的桑黄菌株；D、将人工桑黄子实体中分离获得的桑黄菌株接种到野外桑树上，在自然条件下生长出桑黄子实体；E、继而从自然条件下桑树上生长出桑黄子实体分离纯化得到纯化的桑黄母种，完成人工栽培菌种活性复壮。本发明的优点是：可实现菌种活性的自然恢复提高，为桑黄工厂化生产提供稳定可靠的菌种来源，稳定产品质量，使得桑黄的人工栽培得以持续发展。

Description

一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法
技术领域
本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法。
背景技术
桑黄(Phllinuslinteus)是寄生于桑树等阔叶树的一种珍贵药用真菌。早在1968年日本学者TetsuroIkekawa等已经发现桑黄具有显著的抗肿瘤活性。现代药理学研究表明，桑黄活性物质通过细胞周期阻滞、诱导凋亡等方式抑制肿瘤细胞的增殖。在我国桑黄的研究起步较晚，近几年由于受到许多学者、企业家的关注，研究开发热情空前高涨。2013年10月17日-19日由杭州市科协主办的“海峡两岸灵芝桑黄专题研讨会”在杭州召开。2013年10月22日中国食品科技网报道“桑黄的功效与作用”，综述了桑黄的7大药用价值。2014年5月15日《今日早报》以“桑黄抗肿瘤作用可能比灵芝强”为题进行了专题报道。桑黄的保健价值正逐渐被消费者接受，具有很大的市场空间。由于野生桑黄资源濒临枯竭，因此开展仿野生条件进行桑黄人工栽培具有显著的市场效应。
桑黄菌种在人工栽培生产应用中，经多次无性繁殖和其他条件的影响，常常出现老化和退化现象，接种后菌丝生长缓慢，纤细，菌丝稀疏，栽培出的桑黄会出现变形、变小而畸形，这是目前制约桑黄产业化发展的一大瓶颈。影响桑黄菌种退化的因素很多，简单的可以分为两大类：一类是菌种的遗传特性造成菌种的退化(内因)；另一类是培养条件、操作环节、环境因素导致的菌种退化(外因)。已报道的桑黄复壮技术基本上只是改变培养基的组成，延缓菌种的衰老，并不能从根本上解决菌种衰退问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法，能够有效解决菌种衰退的问题。
为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法，依次包括以下步骤：
A、从桑树采集获得野生桑黄子实体，经过菌株分离纯化后接种到培养基中培养获得纯化桑黄菌种；
B、将桑黄菌种接种至人工袋料中，培养出桑黄子实体；
C、经过人工种植后，在无菌条件下从人工种植桑黄子实体中分离获得纯化的桑黄菌株；
D、将人工桑黄子实体中分离获得的桑黄菌株接种到野外桑树上，在自然条件下生长出桑黄子实体；
E、继而从自然条件下桑树上生长出桑黄子实体分离纯化得到纯化的桑黄母种，完成人工栽培菌种活性复壮。
与现有技术相比，本发明的优点是：经野外环境、桑树寄主进行桑黄菌种复壮，可实现菌种活性的自然恢复提高，从根本上解决桑黄菌种退化问题，为桑黄工厂化生产提供稳定可靠的菌种来源，稳定产品质量，使得桑黄的人工栽培得以持续发展。
具体实施方式
一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法，依次包括以下步骤：
A、野生桑黄子实体的采集：选取新鲜、形态完整，尚未木质化，无破损的子实体，4℃保存，24h内进行分离；
B、桑黄菌种的分离、纯化：在无菌操作台中用无菌水冲洗子实体表面去除杂质，75％酒精进行子实体表面消毒，用解剖刀切取桑黄2×5mm组织块放置在固体平板培养基中，于20-30℃恒温培养箱中培养。待桑黄菌丝开始生长后，挑取顶端生长旺盛的菌丝体进一步纯化培养，以获得纯化的桑黄菌株；
本发明所使用的桑黄菌(Inonotuslinteus)来自浙江省农业科学院蚕桑所，是从浙江省桐庐县桑树上寄生的野生桑黄子实体分离纯化菌株，该菌株经过ITS分子生物学鉴定后，于2015年10月23日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11407，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编100101。本发明保藏提供的生物材料为桑黄S9，分类命名为：桑黄Inonotuslinteus；
分离培养基：土豆200克，白砂糖20克，硫酸镁1.5克，磷酸二氢钾1.5克，复合维生素0.4克，琼脂20克，水1000毫升，双抗1％，pH自然；
原种、栽培种培养基配方：马铃薯200克，白砂糖20克，MgSO41.5克，KH2PO41.5克，水1000毫升；
原种是由母种液体接种发酵培养而成，栽培种则由原种放大发酵而成，本发明中桑黄菌种活化后，在无菌条件下将母种接种到液体培养基上培养，20℃-30℃震荡培养获得桑黄原种；待菌丝成熟后在无菌条件下接种至液体发酵罐中，20℃-30℃培养获得栽培种；
C、桑黄人工栽培：方法同专利“一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，申请号：201511009405.2”，经过4-5代人工培养后，进行菌种复壮；
D、人工栽培桑黄菌株的分离纯化：选取新鲜，形状规则且生长旺盛的人工袋料栽培的桑黄子实体，在实验室无菌条件下进行子实体的分离纯化，获得纯种桑黄菌株。分离纯化方法及分离培养基见步骤A、B；
E、桑黄菌种野生环境复壮：将经过人工培养使用几代后的桑黄菌种4-5月份接种至桑树上，按正常的桑园管理模式，自然条件下进行桑黄菌种的复壮，待接种处长出新鲜桑黄子实体后，再进行桑黄菌种分离纯化(方法同步骤A、B)，可获得复壮的高活性桑黄菌种。
本发明采用的桑黄返野生环境复壮培养技术，通过野生桑黄子实体分离纯化——桑黄人工栽培生产使用——返野生环境复壮，整个循环实现可持续发展，防止大多数微生物在人工栽培方面出现的因菌种衰老退化引起的产品畸形等问题，从根本上解决桑黄菌种退化问题，为实现桑黄子实体工厂化生产提供稳定可靠的菌种来源，保证桑黄产业化生产提供品质一致的产品。
以上所述仅为本发明的具体实施例，但本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在本发明的领域内，所作的变化或修饰皆涵盖在本发明的专利范围之中。

Claims (1)

1.一种桑树寄生的桑黄菌种返野生环境复壮培养方法，其特征在于：依次包括以下步骤：
A、从桑树采集获得野生桑黄子实体，经过菌株分离纯化后接种到培养基中培养获得纯化桑黄菌种；
B、将桑黄菌种接种至人工袋料中，培养出桑黄子实体；
C、经过人工种植后，在无菌条件下从人工种植桑黄子实体中分离获得纯化的桑黄菌株；
D、将人工桑黄子实体中分离获得的桑黄菌株接种到野外桑树上，在自然条件下生长出桑黄子实体；
E、继而从自然条件下桑树上生长出桑黄子实体分离纯化得到纯化的桑黄母种，完成人工栽培菌种活性复壮。
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