CN111149618B - 一种乌芝新菌种及人工栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种乌芝新菌种，所述乌芝新菌种为乌芝（Amauroderma rugosum）XLZ001，保藏编号为CCTCC NO：M20191076。乌芝（Amauroderma rugosum）XLZ001的人工栽培方法，包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理；该人工栽培方法实现了乌芝的高效栽培，降低栽培成本和难度，更加贴近生产应用顺应市场需求。

Description

一种乌芝新菌种及人工栽培方法

技术领域

本发明涉及一种灵芝菌种，具体涉及一种乌芝新菌种及人工栽培方法。

背景技术

灵芝在我国拥有悠久的药用历史，长期被人们运用于气管炎、肝炎、高血压、肿瘤、免疫力紊乱等病症的辅助治疗，现代药理和临床研究结果也表明灵芝含有抑制肿瘤和调节免疫的活性成分。自1984年建立灵芝科以来，目前全世界已报道的灵芝科大型真菌共200余种，我国有记载的灵芝有103种，其中14种已被人们利用，赤芝和紫芝是目前利用较为广泛的两种灵芝。

乌芝（Amaurodermarugosum），又名黑假芝，属于真菌门，层菌纲，非褶菌目，灵芝科，灵芝属，因其幼嫩子实体在硬物触划损伤后会分泌出如血一样的物质，因此又称为血灵芝，香血灵芝。乌芝的生长环境要求极其苛刻，常生于雨水充足，林木资源丰富的北回归线附近，且必须生长在台湾省相思树的枯死部位，十分稀有珍贵。乌芝极具食药用价值，其含有较高的粗多糖，矿物元素含量丰富，总黄酮和总三萜含量较高，与赤灵芝和紫灵芝相比，具有超强抗氧化性和显著抗衰老作用。除此之外，乌芝具有抗癌的主要成分麦角甾醇，在防癌抗癌方面具有一定优势；不仅如此，乌芝在消炎、抗病毒、抗肿瘤、提高免疫活性等发面也极具潜力，在马来西亚还作为治疗神经性癫痫的良药。野生乌芝在我国主要分布在广西的梧州、贺州、象州、平南，尤以大瑶山附近的乌芝最多，另外在广东的云浮也有少量的分布。

近年来，乌芝潜在的药用价值越来越受到人们的关注，具有较强的市场开发价值。但是，乌芝自然生长环境及其苛刻，产量较低，又因长期过度采摘，致使野生资源濒临枯竭，因此，乌芝的供应已不能满足人们对其开发利用的需求。目前，市场出现的所谓乌芝鱼龙混杂，实现纯种优质乌芝的人工栽培顺应市场需求，迫在眉睫。

目前，世界范围内对假芝属真菌驯化栽培的研究报道较少，乌芝的人工培育还处于起步阶段，缺乏成熟配套高产高效的培育方法，而关于乌芝的专利申请主要侧重于以乌芝为材料或添加剂制成保健品或药品，或者是少量的已有乌芝菌种的栽培方法。申请号为CN201610122344.9的中国专利公开了现有的一种乌芝子实体的培养方法，该专利具体公开了通过母种、摇瓶种、发酵种得到乌芝液体菌丝，再将乌芝液体菌丝接种到乌芝培养基菌包中，待菌丝长满菌包，获得乌芝生产菌包；待菌丝长满菌袋后，成熟7-15天后，转移至出芝房进行层架式筐栽出芝管理，待子实体原基形成后，继续培养得到可采收的乌芝子实体。但是，该专利中乌芝液体菌丝的获得需要经过母种、摇瓶种和发酵种三重培养，其中发酵灭菌是为了改善培养基，使其更适宜菌丝生长，但是摇瓶培养和发酵灭菌的过程会增加培养时间；此另一方面，乌芝菌丝生长的最佳pH值为5-5.5，而该专利中的乌芝培养基菌包中加入碳酸钙和石灰，碳酸钙和石灰为碱性添加剂，加入量需严格控制，否则会破坏乌芝培养所需的弱酸性环境。因此，上述培养基的成分和配制方式都有可能使得培养基稳定性下降，工厂化生产时均一性难以把控。申请号为CN201410697916.7的中国专利公开了一种血灵芝的培育方法，该专利具体公开了关于乌芝培养的斜面培养、摇瓶培养和发酵罐培养、菌棒培养四个技术环节，尤其是公开了由相思树木材颗粒、青冈树和/或桦树木材颗粒、五节芒草粉、玉米粉、小麦粉、黄豆粉、麦麸、蔗糖、石灰和余量水制备而成菌棒培养基配方。但是，该专利中也存在发酵灭菌的较为繁琐的培养过程，同时也在菌棒培养基中加入了碱性的石灰，存在如上述“一种乌芝子实体的培养方法”专利同样的问题，此外，该专利中还以相思树木材颗粒为主要原料，然而相思树基本不是经济林，多为生态保护林、天然林及景区林木，以这样的原材料栽培乌芝，必然是不环保、不可持续的，且成本会高。

本申请是在福州市仓山区建新镇台湾省相思林下采集并经过分离驯化的乌芝新菌种，经研究，未见关于该菌种的研究报道。

发明内容

针对以上不足，本发明提供一种乌芝新菌种及人工栽培方法，分离纯化鉴定出优质的乌芝新菌种，并使用简易的培养配方配合后期出菇管理，实现了乌芝的高效人工栽培，降低栽培成本和难度，更加绿色环保，符合可持续发展战略，更加贴近生产应用顺应市场需求。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：

本发明的乌芝新菌种采自福州市仓山区建新镇台湾省相思林下，经鉴定为乌芝新菌种，并通过对子实体部分进行组织分离获得原始菌株，命名为乌芝（Amaurodermarugosum） XLZ001，已于2019年12月20日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC，地址为：武汉市武昌区八一路武汉大学），保藏编号为CCTCC NO：M20191076。

本发明的乌芝菌种经生物分子学鉴定，且经过NCBI的ITS、18S和28S认证，获得基因Genbank号，分别为ITS:MN744354.1 18S:MN744357.1 28S:MN744361.1，确定其为乌芝新菌种。

本发明还提供一种乌芝新菌种的人工栽培方法，包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理。

优选的，所述固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20-30%、麦麸20-30%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.1-0.2%、蔗糖0.2-0.5%、石膏1-2%、含水量60-65%、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

优选的，所述栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10-30%、麦麸10-30%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.05-0.1%、蔗糖0.1-0.5%、石膏1-2%、含水量60-65%、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

优选的，所述固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20-30%、麦麸20-30%、台湾省相思树叶或树枝粉末1-5%、磷酸二氢钾0.1-0.2%、蔗糖0.2-0.5%、石膏1-2%、含水量60-65%、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

优选的，所述栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10-30%、麦麸10-30%、台湾省相思树叶或树枝粉末1-5%、磷酸二氢钾0.05-0.1%、蔗糖0.1-0.5%、石膏1-2%、含水量60-65%、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

优选的，所述禾本科植物为类芦、芦苇、五节芒、斑茅、蒲苇、芦竹、竹子中的一种或多种混合物。

本发明提供的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，具体步骤如下：

（1）组织分离纯化获得菌种：无菌水清洗野生的新鲜乌芝子实体，用手术刀从掰开的面切下干净无污染内部组织并将分离的乌芝子实体组织接种于母种培养基上，将接种后的培养皿放置24-28℃恒温培养培养7-10天，进而获得分离纯化的菌种；所述母种培养基按质量百分比计为马铃薯13-18%、琼脂1-2%、葡萄糖1-2%、鱼蛋白胨0.5-1%、磷酸二氢钾0.1-0.2%、余量为水；

（2）母种制备：采用相同的母种培养基，制备试管斜面，将经过组织分离纯化获得的菌种接入试管斜面，在24-28℃恒温培养接种的试管，进而获得母种；

（3）固体原种制备：无菌条件下将母种接入装有原种培养基的灭菌菌袋中，在20-28℃条件下培养至菌丝长满菌袋；

（4）栽培及出芝管理：取得固体原种接入装有栽培料的灭菌菌袋中，封口，将接好菌的菌袋转入消毒后的培养室培养架上，避光培养，在温度为20-28℃，空气相对湿度为70-80%的条件下再次进行发菌管理至菌丝长满菌袋；将菌丝发育成熟的菌袋移入出菇室进行出菇管理，出菇管理时菌丝与空气充分接触，温度为20-22℃，空气相对湿度为100-120%，提供散射光和充足的氧气，待原基形成后继续培养增加菌盖厚度，完成采收。

优选的，所述步骤（1）中将分离的乌芝子实体组织切成边长0.2-0.5cm左右的小块接入母种培养基；所述步骤（2）中将分离将经过组织分离纯化获得的菌种切成边长0.2-0.5cm左右的小块接入试管斜面。

优选的，所述步骤（3）和步骤（4）中灭菌菌袋为聚乙烯塑料袋，分别转入固体原种培养基或栽培料后封口，于121-125℃灭菌6小时以上或者采用100℃常压蒸汽灭菌16小时以上，待料温降至60℃以下出灶。

本发明的乌芝（Amauroderma rugosum） XLZ001子实体具有以下形态特征：

菌盖呈现为肾形、半圆形或圆形，直径为5-20cm，厚度为0.5-2.0cm，表面为灰褐色至黑色，有假芝属特性的无漆样光泽，具有显著的同心环纹，菌盖下表面前期呈现白色，为软木栓质，硬物触碰后快速呈现出血红色，后逐渐变为黑褐色或黑色，成熟后呈现暗灰色；边缘顿；干燥后质量明显减轻，其由软木栓质变硬为木质。

菌柄偏生、中生、侧生，为圆柱形，颜色与菌盖一致，不同芝之间长度差异较大，通常5-15cm，直径0.25-1.5cm，有时存在分叉，表面有细微绒毛或近光滑，菌柄长度与二氧化碳浓度密切相关，二氧化碳浓度高时菌柄显著增长，这一特性与灵芝相同。

栽培料中菌丝生长长呈现白色，长至中后期会有黑色斑块出现，并分泌棕黑色汁液。

皮壳构造由交错的薄壁菌丝构成，淡褐色。

担孢子形态为近球形，双层壁。

菌丝系统三体型：生殖菌丝直径2.8-4.2μm，无色、薄壁，呈波浪状，骨架菌丝粗为3.6~5.5 μm，微淡黄褐色，厚壁，呈树状分支，分支末端形成鞭毛状无色缠绕菌丝。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明提供一种乌芝新菌种，该菌种来自于福州市仓山区建新镇台湾省相思林下，该乌芝新菌种在抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等领域具有巨大的开发潜力，具备生长适宜温度范围较广、后熟期短、生长速度较快、抗逆性与抗病性强等适合工厂化大规模栽培的优点。

2、本发明提供了一种适用于乌芝新菌种和其它现有乌芝菌种的人工栽培方法，在本发明中经过组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备、栽培及出芝管理四个技术过程进行乌芝的栽培，无需对培养基进行发酵灭菌制备发酵种，避免由于发酵而破坏培养基的稳定性和发菌成功率等问题，同时能够大大缩短了制种时间，相较于具有发酵种制备过程的栽培方法而言，简化了操作步骤，但不影响乌芝的品质，能够提高人工栽培乌芝的产量，具有简化、高效、易于工厂化、规模化操作的优点。

3、本发明在固体原种培养基和栽培料中均加入石膏使得固体原种培养基和栽培料的pH值维持在5.5左右，而乌芝菌丝生长的最佳pH值为5-5.5，由于固体原种的制备以及栽培过程中均存在发菌过程，因此固体原种培养基与栽培料的配方通过石膏调节pH值为5.5的弱酸性，更加适宜乌芝菌丝的生长；另一方面在本发明中固体原种培养基与栽培料成分基本相同，只是营养和氮源适当增加，在促进营养生长及菌丝活力的同时，能够维持固体原种制备和栽培出芝的两个发菌过程中生长环境的相似性及稳定性，本发明在固体原种培养基和栽培料各成分的用量上分别针对两个发菌过程进行了调整，其一是在固体原种制备中的发菌过程，菌丝无需后熟，长满即可，以更多的芒萁、麦麸、磷酸二氢钾和蔗糖，提供更充足的营养和氮源，以获得更长速更快且旺盛的菌种。其二是在栽培及出芝管理中的发菌过程，菌丝需后熟且还要出芝的生长状况，适当减少芒萁、麦麸、磷酸二氢钾和蔗糖的添加量降低氮源等营养，能促进缩短后熟期及促进子实体的成长，本发明中固体原种制备、栽培及出芝管理中的两个发菌过程相较于现有技术中乌芝接种培养中唯一的发菌过程，能够保证乌芝根据其不同时期的生长特性，更好的获得对应时期需要的养分比例。

4、本发明中提供了一种利用芒萁、麦麸、鱼蛋白胨、磷酸二氢钾、蔗糖、石膏、水以及基料制备成的适合制备固体原种的培养基以及适合于原种栽培长出乌芝的栽培料，克服了现有技术中人工栽培乌芝培养基料成分过于复杂，需要使用大量的台湾省相思木及其他阔叶树木材等生产实践成本过高的问题。本发明使用了相对简易的栽培料配方配合后期相应的出菇管理，实现了乌芝的高效人工栽培，满足工厂化大量栽培的原料供给，降低栽培成本和难度，更加贴近生产应用，顺应市场需求和可持续生产要求。

具体实施方式

下面结合具体实施例来对本发明进行详细的说明。

实施例1

一种适用于乌芝XLZ001新菌种及其它现有乌芝菌种的栽培方法，包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理，具体步骤如下：

（1）组织分离纯化获得菌种：无菌水清洗野生的新鲜乌芝子实体，用手术刀从掰开的面里切下内部组织并将分离的乌芝子实体组织切成边长0.2cm左右的小块接入母种培养基上，在24℃恒温培养接种后的培养皿7-10天，进而获得分离纯化的菌种；所述母种培养基按质量百分比计为马铃薯13%、琼脂2%、葡萄糖2%、鱼蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.2%、余量为水；

其中，配置母种培养基时，将马铃薯洗净去皮切成片，加入一定量的水煮沸半小时，用布过滤去马铃薯块，加入葡萄糖、鱼蛋白胨、磷酸二氢钾、琼脂，加热煮沸，使物质溶化，过滤分装至试管中，棉塞封口，报纸包好后灭菌，灭菌条件为121-123℃高压灭菌30min，灭菌完毕，倒培养皿；

（2）母种制备：采用相同的母种培养基，制备试管斜面，将经过组织分离纯化获得的菌种切成边长0.2cm左右的小块接入试管斜面接入试管斜面，在24℃恒温培养接种的试管，进而获得母种；

（3）固体原种制备：无菌条件下将母种接入装有固体原种培养基的灭菌菌袋中，在20℃条件下培养至菌丝长满菌袋；所述原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁25%、麦麸25%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.5%、石膏2%、含水量65%、五节芒作为基料补足余量；

（4）栽培及出芝管理：栽培及出芝管理包括发菌管理、出芝管理、采收及采收后管理；所述栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁25%、麦麸20%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.5%、石膏2%、含水量65%、五节芒作为基料补足余量；

发菌管理：取得固体原种接入装有栽培料的灭菌菌袋中，封口，将接好菌的菌袋转入消毒后的培养室的培养架上；将培养架用消毒水擦拭消毒，然后整个培养室用甲醛或臭氧熏蒸灭菌；空气湿度控制在70%，避光培养，每天通风换气1次；在菌丝生长期温度控制在20℃；根据菌袋长度，培养30-60天至菌丝长满，菌丝整体浓密洁白，表面出现黑褐色斑块即可；

出菇管理：将菌丝发育成熟的菌袋移入出菇室进行出菇管理，菌袋一边开袋，保温保湿，使菌丝与空气充分接触，控制环境空气相对湿度在100%，培养温度20℃，提供散射光和充足的氧气，每天通风换气两次，当子实体边缘无白色边，呈现灰褐色后，再等待一周时间使其增加其菌盖厚度，之后便可完成采收，从出现原基到采收子实体需要25-40天；

采收及采收后管理：采收子实体时，用刀从基部将乌芝子实体切下，装入塑料袋中避光保存。

优选的，所述步骤（3）和步骤（4）中灭菌菌袋为聚乙烯塑料袋，分别转入固体原种培养基或栽培料后封口，于121-125℃灭菌6小时以上或者采用100℃常压蒸汽灭菌16小时以上，待料温降至60℃以下出灶。

实施例2

一种适用于乌芝XLZ001新菌种及其它现有乌芝菌种的栽培方法，包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理，具体步骤如下：

（1）组织分离纯化获得菌种：无菌水清洗野生的新鲜乌芝子实体，用手术刀从掰开的面里切下内部组织并将分离的乌芝子实体组织切成边长0.5cm左右的小块接入母种培养基上，在28℃恒温培养接种后的培养皿7-10天，进而获得分离纯化的菌种；所述母种培养基按质量百分比计为马铃薯18%、琼脂1%、葡萄糖1%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.1%、余量为水；

其中，配置母种培养基时，将马铃薯洗净去皮切成片，加入一定量的水煮沸半小时，用布过滤去马铃薯块，加入葡萄糖、鱼蛋白胨、磷酸二氢钾、琼脂，加热煮沸，使物质溶化，过滤分装至试管中，棉塞封口，报纸包好后灭菌，灭菌条件为121-123℃高压灭菌30min，灭菌完毕，倒培养皿；

（2）母种制备：采用相同的母种培养基，制备试管斜面，将经过组织分离纯化获得的菌种切成边长0.5cm左右的小块接入试管斜面接入试管斜面，在28℃恒温培养接种的试管，进而获得母种；

（3）固体原种制备：无菌条件下将母种接入装有固体原种培养基的灭菌菌袋中，在28℃条件下培养至菌丝长满菌袋；所述原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20%、麦麸20%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.2%、石膏1.2%、含水量60%、斑茅作为基料补足余量；

（4）栽培及出芝管理：栽培及出芝管理包括发菌管理、出芝管理、采收及采收后管理；所述栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10%、麦麸10%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.1%、石膏1%、含水量60%、斑茅作为基料补足余量；

发菌管理：取得固体原种接入装有栽培料的灭菌菌袋中，封口，将接好菌的菌袋转入消毒后的培养室的培养架上；将培养架用消毒水擦拭消毒，然后整个培养室用甲醛或臭氧熏蒸灭菌；空气湿度控制在80%，避光培养，每天通风换气2次；在菌丝生长期温度控制在28℃；根据菌袋长度，培养30-60天至菌丝长满，菌丝整体浓密洁白，表面出现黑褐色斑块即可；

出菇管理：将菌丝发育成熟的菌袋移入出菇室进行出菇管理，菌袋一边开袋，保温保湿，使菌丝与空气充分接触，控制环境空气相对湿度在120%，培养温度22℃，提供散射光和充足的氧气，每天通风换气两次，当子实体边缘无白色边，呈现灰褐色后，再等待一周时间使其增加其菌盖厚度，之后便可完成采收，从出现原基到采收子实体需要25-40天；

采收及采收后管理：采收子实体时，用刀从基部将乌芝子实体切下，装入塑料袋中避光保存。

优选的，所述步骤（3）和步骤（4）中灭菌菌袋为聚乙烯塑料袋，分别转入固体原种培养基或栽培料后封口，于121-125℃灭菌6小时以上或者采用100℃常压蒸汽灭菌16小时以上，待料温降至60℃以下出灶。

实施例3

一种适用于乌芝XLZ001新菌种及其它现有乌芝菌种的栽培方法，包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理，具体步骤如下：

（1）组织分离纯化获得菌种：无菌水清洗野生的新鲜乌芝子实体，用手术刀从掰开的面里切下内部组织并将分离的乌芝子实体组织切成边长0.4cm左右的小块接入母种培养基上，在26℃恒温培养接种后的培养皿8天，进而获得分离纯化的菌种；所述母种培养基按质量百分比计为马铃薯15%、琼脂1%、葡萄糖2%、鱼蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.2%、余量为水；

其中，配置母种培养基时，将马铃薯洗净去皮切成片，加入一定量的水煮沸半小时，用布过滤去马铃薯块，加入葡萄糖、鱼蛋白胨、磷酸二氢钾、琼脂，加热煮沸，使物质溶化，过滤分装至试管中，棉塞封口，报纸包好后灭菌，灭菌条件为121-123℃高压灭菌30min，灭菌完毕，倒培养皿；

（2）母种制备：采用相同的母种培养基，制备试管斜面，将经过组织分离纯化获得的菌种切成边长0.4cm左右的小块接入试管斜面接入试管斜面，在26℃恒温培养接种的试管，进而获得母种；

（3）固体原种制备：无菌条件下将母种接入装有固体原种培养基的灭菌菌袋中，在24℃条件下培养至菌丝长满菌袋；所述固体原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁30%、麦麸30%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.3%、石膏1.5%、含水量62%、芦竹或竹子作为基料补足余量；

（4）栽培及出芝管理：栽培及出芝管理包括发菌管理、出芝管理、采收及采收后管理；所述栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁30%、麦麸20%、鱼蛋白胨1%、磷酸二氢钾0.05%、蔗糖0.4%、石膏1.3%、含水量62%、芦竹或竹子作为基料补足余量；

发菌管理：取得固体原种接入装有栽培料的灭菌菌袋中，封口，将接好菌的菌袋转入消毒后的培养室的培养架上；将培养架用消毒水擦拭消毒，然后整个培养室用甲醛或臭氧熏蒸灭菌；空气湿度控制在75%，避光培养，每天通风换气2次；在菌丝生长期温度控制在24℃；根据菌袋长度，培养30-60天至菌丝长满，菌丝整体浓密洁白，表面出现黑褐色斑块即可；

出菇管理：将菌丝发育成熟的菌袋移入出菇室进行出菇管理，菌袋一边开袋，保温保湿，使菌丝与空气充分接触，控制环境空气相对湿度在110%，培养温度21℃，提供散射光和充足的氧气，每天通风换气两次，当子实体边缘无白色边，呈现灰褐色后，再等待一周时间使其增加其菌盖厚度，之后便可完成采收，从出现原基到采收子实体需要25-40天；

采收及采收后管理：采收子实体时，用刀从基部将乌芝子实体切下，装入塑料袋中避光保存。

优选的，所述步骤（3）和步骤（4）中灭菌菌袋为聚乙烯塑料袋，分别转入固体原种培养基或栽培料后封口，于121-125℃灭菌6小时以上或者采用100℃常压蒸汽灭菌16小时以上，待料温降至60℃以下出灶。

实施例4

实施例4与实施例1的区别在于：实施例4中固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁30%、麦麸30%、台湾省相思树叶或树枝粉末5%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.5%、石膏2%、含水量65%、五节芒作为基料补足余量；

栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁20%、麦麸20%、台湾省相思树叶或树枝粉末5%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.3%、石膏2%、含水量65%、五节芒作为基料补足余量。

实施例5

实施例5与实施例2的区别在于：实施例5中固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20%、麦麸20%、台湾省相思树叶或树枝粉末1%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.2%、石膏1%、含水量60%、斑茅作为基料补足余量；

栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10%、麦麸10%、台湾省相思树叶或树枝粉末1%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.1%、石膏1%、含水量60%、斑茅作为基料补足余量。

实施例6

实施例6与实施例3的区别在于：实施例6中固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁25%、麦麸25%、台湾省相思树叶或树枝粉末3%、磷酸二氢钾0.1%、蔗糖0.3%、石膏1%、含水量63%、芦竹或竹子作为基料补足余量；

栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁20%、麦麸20%、台湾省相思树叶或树枝粉末3%、磷酸二氢钾0.05%、蔗糖0.2%、石膏1%、含水量63%、芦竹或竹子作为基料补足余量。

本发明提供的适用于乌芝（Amauroderma rugosum） XLZ001新菌种的栽培方法，适用且不限于本乌芝新菌种的人工栽培，对其他乌芝菌种也适用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种乌芝新菌种，其特征在于：所述乌芝新菌种为乌芝(Amauroderma rugosum)XLZ001，保藏编号为CCTCC NO：M20191076。

2.如权利要求1所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：适用于乌芝XLZ001新菌种的栽培方法包括组织分离纯化获得菌种、母种制备、固体原种制备和栽培及出芝管理；

(1)组织分离纯化获得菌种：无菌水清洗野生的新鲜乌芝子实体，用手术刀从掰开的面切下干净无污染内部组织并将分离的乌芝子实体组织接种于母种培养基上，将接种后的培养皿放置24-28℃恒温培养7-10天，进而获得分离纯化的菌种；所述母种培养基按质量百分比计为马铃薯13-18％、琼脂1-2％、葡萄糖1-2％、鱼蛋白胨0.5-1％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、余量为水；

(2)母种制备：采用相同的母种培养基，制备试管斜面，将经过组织分离纯化获得的菌种接入试管斜面，在24-28℃恒温培养接种的试管，进而获得母种；

(3)固体原种制备：无菌条件下将母种接入装有原种培养基的灭菌菌袋中，在20-22℃条件下培养至菌丝长满菌袋；

(4)栽培及出芝管理：取得固体原种接入装有栽培料的灭菌菌袋中，封口，将接好菌的菌袋转入消毒后的培养室培养架上，避光培养，在温度为20-28℃，空气相对湿度为70-80％的条件下再次进行发菌管理至菌丝长满菌袋；将菌丝发育成熟的菌袋移入出菇室进行出菇管理，出菇管理时菌丝与空气充分接触，温度为20-22℃，空气相对湿度为100-120％，提供散射光和充足的氧气，待原基形成后继续培养增加菌盖厚度，完成采收。

3.如权利要求2所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20-30％、麦麸20-30％、鱼蛋白胨1％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、蔗糖0.2-0.5％、石膏1-2％、含水量60-65％、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

4.如权利要求3所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10-30％、麦麸10-30％、鱼蛋白胨1％、磷酸二氢钾0.05-0.1％、蔗糖0.1-0.5％、石膏1-2％、含水量60-65％、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

5.如权利要求2所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述固体原种制备过程中原种培养基的原料组成按质量百分比计为芒萁20-30％、麦麸20-30％、台湾相思树叶或树枝粉末1-5％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、蔗糖0.2-0.5％、石膏1-2％、含水量60-65％、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

6.如权利要求5所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述栽培及出芝管理过程中栽培料的原料组成按质量百分比计为芒萁10-30％、麦麸10-30％、台湾相思树叶或树枝粉末1-5％、磷酸二氢钾0.05-0.1％、蔗糖0.1-0.5％、石膏1-2％、含水量60-65％、基料补足余量；所述基料为禾本科植物。

7.如权利要求3至6任一所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述禾本科植物为类芦、芦苇、五节芒、斑茅、蒲苇、芦竹、竹子中的一种或多种混合物。

8.如权利要求7所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述步骤(1)中将分离的乌芝子实体组织切成边长0.2-0.5cm左右的小块接入母种培养基；所述步骤(2)中将分离将经过组织分离纯化获得的菌种切成边长0.2-0.5cm左右的小块接入试管斜面。

9.如权利要求7所述的一种乌芝新菌种的人工栽培方法，其特征在于：所述步骤(3)和步骤(4)中灭菌菌袋为聚乙烯塑料袋，分别转入固体原种培养基或栽培料后封口，于121-125℃灭菌6小时以上或者采用100℃常压蒸汽灭菌16小时以上，待料温降至60℃以下出灶。