CN103749151B - 一种皱盖假芝的人工栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种皱盖假芝的人工栽培方法。它包括母种制作、原种制作、生产种制作、接种栽培和出芝管理等步骤。本发明的生长周期：接种30-35天后菌丝长满袋，后熟15天后，第50±5天出小原基，第65±5天第一次修芝，第80±5天第二次修芝，2-3天后通气，刺激菌盖的形成，25-35天后子实体成熟。产量：每个菇袋每潮出芝30-40克之间。总体生物转化率约在10-20%之间。因此本发明的皱盖假芝的人工栽培方法能够实现皱盖假芝的人工栽培，获得皱盖假芝的子实体，为皱盖假芝研究和商业开发奠定坚实的基础。
Description
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种皱盖假芝的人工栽培方法。
背景技术：
皱盖假芝是一种珍稀药用真菌，俗称血芝、乌芝、假芝，因其子实体碰伤后会有血样分泌物流出而被称“血芝”。拉丁名：Amauroderma rude(Berk.)Pat.分类学上属非褶菌目、灵芝科、假芝属。
担子果一年生，有柄，木栓质。菌盖近圆形或近肾形，宽3-10cm，厚5-7mm，表面有辐射状深皱纹并有细绒毛，灰褐色或褐色，往往有不明显环纹，无似漆样光泽；边缘锐，波浪状，多瓣裂；菌肉呈暗灰黄色，厚2-4mm，菌管长2-3mm，颜色比菌肉深；孔面黑褐色；管口近圆形，每毫米3-4个。菌柄偏生，圆柱形，往往弯曲，下部似假根状，有时分叉，长4-12cm，粗3-10mm，与菌盖同色，有细微绒毛。
菌丝系统三体型：生殖菌丝透明，薄壁，直径3-4.5μm；骨架菌丝淡黄褐色，厚壁到实心，波曲状，具树状分枝，分枝末端形成鞭毛状无色缠绕菌丝；缠绕菌丝无色到微带淡黄色，厚壁，分枝，直径1.5-2μm。
担孢子近球形，双层壁，外壁无色透明，平滑，内壁小刺不明显，近无色或淡黄褐色，8.7-11×8.7-10μm。
生境：生于林中地上或腐木上
分布：中国(福建、海南、云南、贵州等省区)、澳大利亚、南非等地。
功效：传统中医认为，皱盖假芝性平、味甘，有消积化瘀、消炎止血功效。对小白鼠肉瘤抑制率为80％。Chunwei Jiao等(Anticancer Activity of Amauroderma rude，PLOS ONE，2013)研究发现，皱盖假芝的水提物对多种肿瘤细胞都有较好的生长抑制效果，并且在同样的施用浓度下，抑制效果优于其他食药用菌，包括灵芝。在抗病毒方面，皱盖假芝也有一定效果。
发明内容：
本发明的目的是提供一种皱盖假芝的人工栽培方法，利用本发明的方法可以实现皱盖假芝的人工栽培，大量获得皱盖假芝的子实体，为皱盖假芝的研究和商业开发奠定坚实的基础。
本发明的皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：
将皱盖假芝母种在无菌条件下接种到装有原种培养基的袋中，于适温下遮光培养，直至菌丝吃满料即得原种，原种在无菌条件下接种到装有生产种培养基的袋中，于适温下遮光培养，直至菌丝吃满料即得生产种，将生产种在无菌条件下接种到装有栽培料培养基的袋中，于适温下，空气相对湿度为60-70％避光培养，待菌丝长满栽培料培养基后，继续遮光后熟培养至菌丝完成后熟期，然后打开袋口，去除老种块，进行出芝管理，控制温度在25±1℃之间，空气相对湿度85-90％之间，光照为100-200lux，通过控制通气量使二氧化碳含量刚出芝时控制在2000～3000ppm之间，待假芝出原基后调整温度25±1℃之间，空气相对湿度85-90％之间，光照200-300lux，继续保持二氧化碳含量在2000～3000ppm之间，在菌柄伸长期结束，进入菌盖生长期时，调整温度25±1℃之间，空气相对湿度90-95％之间，光照200-300lux，通过控制通气量保持二氧化碳含量在300～1200ppm，培养直至收获子实体；
所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱77～79％、小米19～21％和CaCO31～2％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60％，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳83-89％、麸皮10-15％和CaCO31-2％组成，或者由棉籽壳45-55％、木屑25-35％、麸皮15-20％、CaCO31-2％和CaSO41-2％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60％，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳25-45％，木屑40-70％，麸皮4-15％和CaCO31-2％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60％，由此得到栽培料培养基。
优选，所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱78％、小米20％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到原种培养基。
优选，所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳89％、麸皮10％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到生产种培养基。
优选，所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳30％，木屑58％，麸皮10％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到栽培料培养基。
所述的皱盖假芝母种优选是将皱盖假芝菌种无菌接种至装有PDA培养基的试管斜面上，于适温下遮光培养，直至菌丝长满斜面，得到皱盖假芝母种。
本发明的生长周期：接种30-35天后菌丝长满袋，后熟15天后，第50±5天出小原基，第65±5天第一次修芝，第80±5天第二次修芝，2-3天后通气，刺激菌盖的形成，25-35天后子实体成熟。产量：每个菇袋每潮出芝30-40克之间。总体生物转化率约在10-20％之间。
因此本发明的皱盖假芝的人工栽培方法能够实现皱盖假芝的人工栽培，获得皱盖假芝的子实体，为皱盖假芝研究和商业开发奠定坚实的基础。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1、PDA培养基，每升是这么配制的：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂(煮沸20～30分钟)，能被玻璃棒戳破即可，用八层纱布过滤，加热，加20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入20g葡萄糖，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，121℃灭菌20分钟左右后，倒试管斜面，冷却后贮存备用。
2、原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱78％、小米20％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到原种培养基，将原种培养基装入13cm×25cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋中，用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，再在袋口套上塑料环，并扣上环盖，制得原种菌包，折合每个原种菌包装干料300g。
3、生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳89％、麸皮10％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到生产种培养基，将生产种培养基装入15cm×30cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋中，用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，再在袋口套上塑料环，并扣上环盖，制得生产种菌包，折合每个生产种菌包装干料350g。
4、栽培料培养基：基础料按质量分数100％计，由棉籽壳30％，木屑58％，麸皮10％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到栽培料培养基，将栽培料培养基装入17cm×35cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋中，用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，再在袋口套上塑料环，并扣上环盖，制得栽培菌包，折合每个栽培菌包装干料420g。
A、皱盖假芝母种的制作：野生皱盖假芝子实体经采集、组织分离、纯化，获得皱盖假芝菌种(也可以直接用保藏的皱盖假芝菌种)，将皱盖假芝菌种无菌接至斜面试管的PDA培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，直至菌丝长满斜面(约7天左右)即得皱盖假芝母种。
B、原种的制作：将皱盖假芝母种无菌接入原种菌包中，接种时确保母种料块埋入原种料中，然后置于25℃培养箱中恒温暗培养，至菌丝吃满料后(约20天左右)即得原种；
C、生产种的制作：将原种无菌接入生产种菌包中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，至菌丝吃满料后即得生产种。
D、接种栽培：将生产种无菌接入栽培菌包中，在25±1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养，待栽培菌包中的菌丝长满栽培料后(大约30-35d)，继续遮光后熟培养15d至菌丝完成后熟期，切下套环及老种块；
E、出芝管理：然后调节维持温度在25±1℃之间、湿度在85-90％之间、光照100～200lux之间，不通气，保持CO2含量在2000ppm～3000pm之间至长出原基，维持温度在25±1℃之间、空气相对湿度在85-90％之间、光照在200-300lux之间，不通气，继续保持CO2含量在2000ppm～3000pm之间，待菌柄伸长期结束并进入菌盖生长期时，通气，维持温度在25±1℃之间，湿度在90-95％之间，光照在200-300lux之间，通气，保持CO2含量300～1200ppm之间，至菌盖的白边完全变灰黑时，采摘，子实体平均鲜重约38.3g/个，干重10.2g/个，直径平均为8cm。
实施例2：
本实施例与实施例1基本相同，只是原种培养基、生产种培养基和栽培料培养基不同。
所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱77％、小米21％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳83％、麸皮15％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳45％，木屑40％，麸皮14％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到栽培料培养基。
由此得到皱盖假芝的子实体，子实体平均鲜重约39.2g/个，干重10.5g/个，直径平均为8.5cm。
实施例3：
本实施例与实施例1基本相同，只是原种培养基、生产种培养基和栽培料培养基不同。
所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱79％、小米20％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳45％、木屑35％、麸皮17％、CaCO32％和CaSO41％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳25％，木屑70％，麸皮4％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到栽培料培养基。
由此得到皱盖假芝的子实体，子实体平均鲜重约37.6g/个，干重9.9g/个，直径平均为7.8cm。
实施例4：
本实施例与实施例1基本相同，只是原种培养基、生产种培养基和栽培料培养基不同。
所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱79％、小米19％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳55％、木屑27％、麸皮15％、CaCO31％和CaSO42％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳25％，木屑59％，麸皮15％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到栽培料培养基。
由此得到皱盖假芝的子实体，子实体平均鲜重约38.5g/个，干重10.3g/个，直径平均为8.2cm。
实施例5：
本实施例与实施例1基本相同，只是原种培养基、生产种培养基和栽培料培养基不同。
所述的原种培养基：基础料按质量分数100％计，由高粱79％、小米19％和CaCO32％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳52％、木屑25％、麸皮20％、CaCO31％和CaSO42％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60％，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100％计，由棉籽壳25％，木屑59％，麸皮15％和CaCO31％组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55％，由此得到栽培料培养基。
由此得到皱盖假芝的子实体，子实体平均鲜重约39.4g/个，干重10.6g/个，直径平均为8.7cm。
Claims (5)
1.一种皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：
将皱盖假芝母种在无菌条件下接种到装有原种培养基的袋中，于适温下遮光培养，直至菌丝吃满料即得原种，原种在无菌条件下接种到装有生产种培养基的袋中，于适温下遮光培养，直至菌丝吃满料即得生产种，将生产种在无菌条件下接种到装有栽培料培养基的袋中，于适温下，空气相对湿度为60-70%避光培养，待菌丝长满栽培料培养基后，继续遮光后熟培养至菌丝完成后熟期，然后打开袋口，去除老种块，进行出芝管理，控制温度在25±1℃之间，空气相对湿度85-90%之间，光照为100-200lux，通过控制通气量使二氧化碳含量刚出芝时控制在2000～3000ppm之间，待假芝出原基后调整温度25±1℃之间，空气相对湿度85-90%之间，光照200-300lux，继续保持二氧化碳含量在2000～3000ppm之间，在菌柄伸长期结束，进入菌盖生长期时，调整温度25±1℃之间，空气相对湿度90-95%之间，光照200-300lux，通过控制通气量保持二氧化碳含量在300～1200ppm，培养直至收获子实体；
所述的原种培养基：基础料按质量分数100%计，由高粱77～79%、小米19～21%和CaCO31～2%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60%，由此得到原种培养基；
所述的生产种培养基，基础料按质量分数100%计，由棉籽壳83-89%、麸皮10-15%和CaCO31-2%组成，或者由棉籽壳45-55%、木屑25-35%、麸皮15-20%、CaCO31-2%和CaSO41-2%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60%，由此得到生产种培养基；
所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100%计，由棉籽壳25-45%，木屑40-70%，麸皮4-15%和CaCO31-2%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55～60%，由此得到栽培料培养基。
2.根据权利要求1所述的皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，所述的原种培养基：基础料按质量分数100%计，由高粱78%、小米20%和CaCO32%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60%，由此得到原种培养基。
3.根据权利要求1所述的皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，所述的生产种培养基，基础料按质量分数100%计，由棉籽壳89%、麸皮10%和CaCO31%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为55%，由此得到生产种培养基。
4.根据权利要求1所述的皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，所述的栽培料培养基，基础料按质量分数100%计，由棉籽壳30%，木屑58%，麸皮10%和CaCO32%组成，将上述配料混合均匀得基础料，然后加入水，使含水量为60%，由此得到栽培料培养基。
5.根据权利要求1所述的皱盖假芝的人工栽培方法，其特征在于，所述的皱盖假芝母种是将皱盖假芝菌种无菌接种至装有PDA培养基的试管斜面上，于适温下遮光培养，直至菌丝长满斜面，得到皱盖假芝母种。
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