CN107641600A - 适于低温出菇的平菇jk02菌株及其栽培方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种适于低温出菇的平菇菌株JK02及栽培方法。该菌株属于糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)，保藏于中国科学院微生物研究所，保藏号CGMCC No.13878。本发明提供的平菇JK02菌株，出菇温度3‑30℃，较亲本2026出菇温度更低，冬季出菇产量高；本发明提供的栽培配方，含有10‑30%的光合细菌培养液、10‑50%的沼渣，可以提高菌丝生长速度，提高抗木霉能力，提高产量，延后出菇高峰期。

Description

适于低温出菇的平菇JK02菌株及其栽培方法和应用

技术领域

本发明涉及食用菌技术领域，具体涉及一种适于低温出菇的平菇JK02菌株、由该菌株获得的孢子、菌丝体、子实体及利用其生产平菇的方法和应用。

背景技术

平菇(Pleurotus ostreatus)是目前栽培量最大的食用菌品种，现有平菇品种随着使用时间的延长、传代次数增加，不同程度出现菌种退化现象，具体表现在抗性下降、畸形菇增多、产量下降，需要不断进行优良品种的选育。杂交育种是传统育种方法，在优良亲本特性比较了解的情况下，相对容易得到优良菌株。此外，进行抗污染、高产栽培配方的研究，也可以提高产量。

平菇科佳1号和平菇2026是平菇主栽品种，已经有10多年的栽培历史。科佳1号属于广温品种，可以在5-32℃出菇，最适出菇温度8~28℃，原基多、高产、抗逆；平菇2026属于低温品种，可在4~28℃出菇，最适出菇温度8~25℃，原基中等、高产、优质。经过多年的传代栽培，这些菌种不同程度出现菌株退化，表现在：畸形菇增多，抗性、产量、品种均有所下降。在亲本相对了解的基础上，收集科佳1号和平菇2026孢子，进行单孢杂交育种，可得到不同出菇温度、不同原基数的一系列杂交菌株。其中，低温出菇菌株可以在冬季其它食用菌品种和蔬菜产量较低的情况下获得较高产量，弥补市场紧缺，具有很高的商品价值。

目前，平菇栽培多为农户栽培，栽培原料以棉籽壳、玉米芯为主，一般采用大袋栽培、多茬采收方式。栽培污染问题是平菇栽培的技术难点，尤其二茬菇后烂袋会严重影响产量。进行平菇抗污染、高产配方的研究，具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明提供了一种适于低温出菇的平菇JK02菌株及抗污染、高产栽培的方法，用以解决目前平菇品种存在的低温出菇产量低，多茬出菇污染率高，采收品质下降等问题。

本发明采用如下技术方案：

一种适于低温出菇的平菇菌株，名称为平菇JK02，其是通过平菇科佳1号和平菇2026作为亲本杂交，经系统选育获得，属于糙皮刺耳(Pleurotus ostreatus)，保藏于中国科学院微生物研究所，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.13878，保藏日期为2017年6月14日。

所述平菇JK02菌株的获得方法包括以下步骤：

（1）选择亲本菌株：选取平菇科佳1号和平菇2026为亲本，采用常规的杂交育种方法获得a个杂合子；

（2）栽培与筛选：把获得的a个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株。

一种上述平菇JK02菌株作为亲本在进行杂交育种中的应用。

一种由上述平菇JK02菌株获得的平菇孢子，所述平菇孢子通过培养所述平菇JK02菌株得到。

一种由上述的平菇JK02菌株获得的平菇菌丝体，所述平菇菌丝体通过培养所述平菇JK02菌株得到。

一种由上述的平菇JK02菌株获得的平菇子实体，所述平菇子实体通过培养所述平菇JK02菌株得到。

所述的平菇子实体，其栽培方法为：将所述平菇JK02菌株接种至栽培培养基上，培养温度为20-25℃，出菇温度3-30℃。

所述的平菇子实体栽培时，栽培培养基包括含水量为64-66%的栽培料；所述栽培料包括栽培干料和光合细菌培养液；所述光合细菌培养液的质量为栽培干料的5～20％；所述栽培干料包括如下质量百分比的组分：10～50％的沼渣、5～15％的麸皮、3～8％的豆饼粉、1～5％的玉米粉、1～3％的石灰、0.1～0.4%的复合肥，其余成分为玉米芯、棉籽壳或木屑；所述栽培培养基的pH 7.0～8.0。所述复合肥中，N∶P∶K=26∶8∶6，总养分≥40%。

一种上述的平菇子实体在食品加工中的应用。

一种用于培养所述平菇JK02菌株的栽培培养基，其包括含水量为64-66%的栽培料；所述栽培料包括栽培干料和光合细菌培养液；所述光合细菌培养液的质量为栽培干料的5～20％；所述栽培干料包括如下质量百分比的组分：10～50％的沼渣、5～15％的麸皮、3～8％的豆饼粉、1～5％的玉米粉、1～3％的石灰、0.1～0.4%的复合肥，其余成分为玉米芯、棉籽壳或木屑；所述栽培培养基的pH 7.0～8.0。

本发明所述平菇JK02的形态特征如下：子实体大小中等，原基数32～40个，菌盖直径2～8cm，黑灰色，扁半球形，平展后扇形；菌肉白色，厚；菌褶白色，细腻；菌柄侧生、短，内实、白色，长1～3厘米，粗0.6～2.0厘米；孢子印白色，孢子近圆柱形，光滑无色。菌丝培养温度20～25℃，出菇温度3～30℃。该菌株适应性强，高产优质，性能稳定，适合多种培养料栽培。

本发明所述的栽培培养基，还适用于平菇JK02及其它平菇品种，例如科佳1号、2026、江都71、抗3等。

平菇子实体的具体栽培过程可参考现有技术，下面也给出一种具体过程，包括如下步骤：

1）栽培种制备：将所述平菇JK02 PDA试管种无菌条件下接入灭菌的17cm×33cm菌袋栽培种培养基中，20-25℃培养25～35天满袋。所述栽培种培养基为：棉籽壳60%、玉米芯26%、麸皮10%、玉米面3%、石膏1%。

2）栽培发菌：将上步栽培种，接入灭菌的栽培培养基中，菌袋24cm×43cm，20～25℃培养满袋。

3）出菇管理：菌袋现原基后，开袋，加强温度、湿度、通风管理，保持湿度80～90%、温度3～30℃及良好的通风，进行子实体采摘。

本发明的有益效果在于：

本发明提供的平菇JK02，生长快、抗病能力强，出菇整齐，产量高；出菇温度3～30℃，与其它平菇品种相比，具有出菇温度低、产量高的优势。在华北平原冬季雾霾、低温气候条件下，可实现较高平菇产量，弥补市场紧缺，具有很高应用价值。

本发明提供的平菇栽培配方，具有菌丝生长速度快、抗污染、出菇后劲足、产量高的特点，而且原料便宜，有效解决了多茬出菇污染烂袋的问题，非常适合平菇多茬栽培。不仅很好的解决了沼渣的利用问题，而且降低了平菇原料成本，提高了产量。

附图说明

图1 实施例4的冬季出菇实验中菌袋生长情况。

图2 实施例4的冬季出菇实验中低温出菇情况。

图3 平菇JK02子实体的形态特征。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例所用各种培养基的配方如下：

PDA培养基：每1L培养基用马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g；

栽培种培养基：棉籽壳60%、玉米芯26%、麸皮10%、玉米面3%、石膏1%。

玉米芯为主料的栽培培养基：50～80％的玉米芯、0～30％的棉籽壳、5～15％的麸皮、3～8％的豆饼粉、3-5％的玉米粉、0.1～0.4％的复合肥、1～3%的石灰。

实施例1杂交获得菌株平菇JK02

采用杂交育种方法获取平菇JK02。

具体步骤如下：

1）选择亲本菌株：选取平菇菌株科佳1号和2026为亲本，这两个亲本的子实体都能在市场上购买到；

2）配制母种培养基、栽培种培养基和玉米芯为主料的栽培培养基：各培养基配方已经给出，在此不再赘述；

3）采用常规的杂交育种方法获得杂合子200个；

4）栽培与筛选：把获得的杂合子根据常规的方法进行栽培试验，通过系统筛选，从200个杂合子中，获得60个生长速度快、木质素和纤维素酶活性高、抗木霉的杂合子。把获得的杂合子根据常规的方法进行冬季和夏季栽培出菇试验，通过系统筛选，从60个杂合子中，获得一个目标菌株JK02，该菌株菌丝生长快、抗性强、产量高、出菇温度低，符合春秋和冬季食用菌栽培的需要。

实施例2菌株拮抗实验及酯酶同工酶真实性分析

对峙培养试验

本发明平菇JK02分别于两个亲本菌株科佳1号、2026进行对峙培养，所用培养基为PDA培养基。

方法为平菇JK02和科佳1号，平菇JK02和2026在PDA平板培养基上分别对峙接种和培养，接种点相距4cm，25℃恒温培养7天。

结果表明，在对峙培养菌落交界处，平菇JK02与科佳1号、平菇JK02与2026拮抗线明显，说明平菇JK02是与科佳1号、2026不同的平菇菌株。

平菇JK02菌株酯酶同工酶法真实性分析

根据中华人民共和国农业行业标准《食用菌菌种真实性鉴定酯酶同工酶法》和已有的文献报道，对平菇JK02和两个亲本菌株进行同工酶条带比对。结果表明，平菇JK02菌株是与科佳1号、2026具有不同的同工酶条带，因此平菇JK02菌株为不同于两个亲本的平菇菌株。

实施例3 抗木霉试验

绿色木霉（Trichodermaviride）是平菇栽培过程中的主要病菌。以我单位分离保藏的绿色木霉为指示剂，进行对峙培养。通过观察菌落生长和拮抗带的宽度来判断抗病能力，拮抗带越窄，抗病性越强。

菌种活化：将平菇菌株和绿色木霉菌株分别在PDA培养基中25℃活化培养，长满皿后备用。作为菌种使用前，用直径0.5cm的打孔器制备菌饼，备用。

抗木霉能力测定方法：

使用直径90mm的定量培养皿，每皿用定量蠕动泵定量加入35mL PDA培养基，凝固。相距中心2cm接入直径0.5cm的平菇JK02菌饼，25℃培养3天后，相对方向距离中心2cm处接入绿色木霉菌饼，25℃继续培养4天。测量对峙方向平菇JK02拮抗带的宽度、菌落生长宽度，并且持续观察抑制带的颜色、大小变化。

平菇与木霉对峙培养，平菇菌落生长快、拮抗带比较窄的为抗木霉能力强的菌株。结果（表1）表明，平菇JK02在对峙方向菌落宽度3.9cm，拮抗带宽度4.4mm，说明具有较强的抗绿色木霉能力。

表1 平菇JK02抗木霉情况

。

实施例4栽培实验

本发明平菇JK02在平菇栽培企业进行冬、夏两季的栽培出菇试验，对培养周期、污染率及生物学效率进行对比，总结出本发明平菇JK02菌株的优势和特点。

采用常规熟料栽培方法。栽培配方为：玉米芯50%，棉籽壳35%，麸皮10%，石灰2%，石膏1%，复合肥0.2%，pH7.5。采用24cm×43cm的菌袋栽培，装料量0.85kg，每个菌种栽培2000袋。冬季栽培在2013年10月到2014年2月进行，夏季栽培在2014年4月到8月进行。

所述复合肥中，N∶P∶K=26∶8∶6，总养分≥40%。

（1）冬季出菇试验

冬季出菇试验结果见表2。由表可知，2026、科佳1号和平菇JK02成袋率均较高，平菇JK02原基数36～40，适合作为小黑平菇品种，而且成袋率、生物学转化率比较高。

表2 冬季出菇情况

。

此外，通过测定1月1日到1月31日雾霾、低温天气下的产量（见表3），低温平菇品种2026出现卷边、长腿等现象；平菇JK02能够耐受2～5℃的低温，菇形美观（图2），而且菌袋中部不容易起原基（图1），低温产量较高，具有较高的经济价值。菌袋中部起原基是不耐低温的一种表现，会影响产量和采摘。

表3 2014年1月1日至31日出菇情况

。

（2）夏季出菇试验

夏季出菇试验结果见下表4。由表4可知，所选出菇品种均有较高的抗性，成袋率差别不大；2026夏季高温不出菇；科佳1号和平菇JK02原基数32～38个，最高出菇温度29～31℃，适合用作小平菇，过高出菇温度会造成子实体叶片变薄、产量下降。

表4 夏季出菇情况

。

本发明所述平菇JK02的形态特征如图3。

子实体大小中等，原基数32～40个，菌盖直径2～8cm，黑灰色，扁半球形，平展后扇形；菌肉白色，厚；菌褶白色，细腻；菌柄侧生、短，内实、白色，长1～3厘米，粗0.6～2.0厘米；孢子印白色，孢子近圆柱形，光滑无色。菌丝培养温度20～25℃，出菇温度3～30℃。该菌株适应性强，高产优质，性能稳定，适合多种培养料栽培。

实施例5 抗木霉污染栽培原料筛选

木霉是平菇栽培中危害最大的病原真菌之一。筛选抗木霉污染栽培配方直接关系着成袋率的高低、烂袋率和产量。

a.能够促进平菇生长、抑制木霉生长的栽培原料筛选

为了筛选能够为平菇提供一定营养、促进平菇生长，同时抑制木霉等杂菌生长的营养补充剂成分，以PDA培养基为基础培养基，加入不同营养成分，接入平菇、木霉菌株进行菌丝培养，筛选符合要求的营养补充剂成分。

PDA培养基成分为（L）：土豆200g，蔗糖20g，琼脂12g，水1000ml，pH自然。

光合细菌培养液

PDA培养基中加入5%、10%、20%的光合细菌培养液，调pH值7.5，制成含有上述培养基的无菌培养皿，接入平菇JK02、2026和木霉，25℃培养3天，测定生长速度。

所述光合细菌可以在市场买到，光合细菌培养液制备方法为将光和细菌光照培养5天，pH8.5。

光合细菌培养基配方（L）：磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，硫酸铵1g，乙酸钠1g，酵母膏1g，柠檬酸铁0.005g，自来水或蒸馏水1000ml。

由表5结果可知，光合细菌培养液可以显著促进平菇菌丝生长，强烈抑制木霉生长。

表5 光合细菌对菌株生长的影响（mm/d）

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沼渣

PDA培养基中加入10%、20%、30%、40%、50%的沼渣煮汁液，制成含有上述培养基的无菌培养皿，接入平菇JK02、2026和木霉，25℃培养3天，三次重复。测定生长速度，结果如表6所示。其中，沼渣为养牛场沼气罐排出的废渣。

结果表明，沼渣基本不影响平菇的生长速度，而且菌丝浓白，具有促进平菇菌丝生长的作用。添加少量的沼渣就可以强烈抑制木霉生长，含有10%的沼渣煮汁液，木霉生长速度为3.8mm/d，达到30%的沼渣煮汁液，木霉不能生长，而木霉在PDA培养基上生长速度为22.9mm/d。

表6 沼液对菌株生长的影响（mm/d）

。

实施例6 抗木霉污染栽培配方筛选

平菇主要为农户栽培，最常用为发酵料栽培。由于华北地区近年来棉籽壳价格飞涨，为了降低成本，玉米芯成为栽培主料。本试验按照平菇常规发酵料栽培方法进行，时间为2016年10月至2017年3月，采用24cm×43cm的栽培袋，装料量850/袋，品种为平菇JK02和2026。

栽培配方分别为：

常规配方：玉米芯80%、玉米粉3%、棉籽壳0.8%、豆饼粉5%，麸皮8%、石灰3%、尿素0.2%；配方总含水量为64-66%，pH7.5。

抗污染配方1：栽培干料（质量分数：沼渣15%，玉米芯65%、玉米粉3%、棉籽壳0.8%、豆饼粉5%，麸皮8%、石灰3%、尿素0.2%），干料质量10%的光合细菌培养液；配方总含水量为64-66%，pH7.5。

抗污染配方2：栽培干料（质量分数：沼渣30%，玉米芯50%、玉米粉3%、棉籽壳0.8%、豆饼粉5%，麸皮8%、石灰3%、尿素0.2%）、干料质量15%的光合细菌培养液；配方总含水量为64-66%，pH7.5。

抗污染配方3：栽培干料（沼渣50%，玉米芯30%、玉米粉3%、棉籽壳0.8%、豆饼粉5%，麸皮8%、石灰3%、尿素0.2%）、干料质量10%的光合细菌培养液；配方总含水量为64-66%，pH7.5。

按照常规栽培管理出菇。工序包括翻堆发酵、装袋、接种、发菌、打孔通气、出菇等。

结果见表7、表8。

由表7可知，添加沼渣和光合细菌培养液的配方生长速度更快，污染率更低。配方1和配方2相比较，说明光合细菌培养液与沼渣联合应用，具有协同增效作用。配方3未发现木霉污染，说明可以完全抑制木霉污染。

表7 平菇在不同栽培配方菌丝的生长情况

。

由表8可知，添加沼渣和光合细菌培养液的配方第一茬菇产量会较对照下降，但接下来的2-4茬菇产量会较对照增加，说明配方1、2、3具有营养缓释作用。以配方3生物学转化率最高，其次是配方1，再其次为配方2。配方1与配方2相比，说明光合细菌培养液可以提高产量。

此外，平菇JK02菌株产量普遍高于2026。

添加沼渣和光合细菌培养液可以推迟出菇高峰期这一特性，在生产上可以用于特定市场时间段出菇，以提高产值。

表8 平菇在不同栽培配方上的出菇产量（g/d袋）

。

以上描述仅为本发明的实施例，谅能理解，在不偏离本发明构思的前提下，对本发明的简单修改和替换皆应包含在本发明的技术构思之内。

Claims (10)

1.一种适于低温出菇的平菇JK02菌株，其特征在于，所述平菇菌株的保藏编号为CGMCCNo.13878。

2.根据权利要求1所述的适于低温出菇的平菇JK02菌株，其特征在于，所述菌株的获得方法包括以下步骤：

（1）选择亲本菌株：选取平菇科佳1号和平菇2026为亲本，采用常规的杂交育种方法获得a个杂合子；

（2）栽培与筛选：把获得的a个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株。

3.一种权利要求1所述平菇JK02菌株作为亲本在进行杂交育种中的应用。

4.一种由权利要求1所述平菇JK02菌株获得的平菇孢子，其特征在于，所述平菇孢子通过培养所述平菇JK02菌株得到。

5.一种由权利要求1所述的平菇JK02菌株获得的平菇菌丝体，其特征在于，所述平菇菌丝体通过培养所述平菇JK02菌株得到。

6.一种由权利要求1所述的平菇JK02菌株获得的平菇子实体，其特征在于，所述平菇子实体通过培养所述平菇JK02菌株得到。

7.根据权利要求6所述的平菇子实体，其特征在于，其栽培方法为：将所述平菇JK02菌株接种至栽培培养基上，培养温度为20-25℃，出菇温度3-30℃。

8.根据权利要求7所述的平菇子实体，其特征在于，所述栽培培养基包括含水量为64-66%的栽培料；所述栽培料包括栽培干料和光合细菌培养液；所述光合细菌培养液的质量为栽培干料的5～20％；所述栽培干料包括如下质量百分比的组分：10～50％的沼渣、5～15％的麸皮、3～8％的豆饼粉、1～5％的玉米粉、1～3％的石灰、0.1～0.4%的复合肥，其余成分为玉米芯、棉籽壳或木屑；所述栽培培养基的pH 7.0～8.0。

9.一种用于培养权利要求1所述平菇JK02菌株的栽培培养基，其特征在于，其包括含水量为64-66%的栽培料；所述栽培料包括栽培干料和光合细菌培养液；所述光合细菌培养液的质量为栽培干料的5～20％；所述栽培干料包括如下质量百分比的组分：10～50％的沼渣、5～15％的麸皮、3～8％的豆饼粉、1～5％的玉米粉、1～3％的石灰、0.1～0.4%的复合肥，其余成分为玉米芯、棉籽壳或木屑；所述栽培培养基的pH 7.0～8.0。

10.一种如权利要求6所述的平菇子实体在食品加工中的应用。