CN107881118A - 浅黄色金针菇jk05菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种浅黄色金针菇JK05菌株，保藏编号为CGMCCNo.13879，以及由所述菌株获得的孢子、菌丝体和子实体，所述菌株在杂交育种中的应用以及所述子实体在食品加工中的应用；本发明还提供了所述菌种的培养方法以及用于培养所述子实体的栽培培养基，用以解决目前黄色金针菇生产中存在的颜色深、品相差，培养过程中“吐水”严重，不适合工厂化立瓶栽培等问题。

Description

浅黄色金针菇JK05菌株及其应用

技术领域

本发明属于食用菌技术领域，具体涉及浅黄色金针菇JK05菌株及其应用。

背景技术

金针菇学名为毛柄金钱菌(Flammulinavelutiper(Fr.)Sing)，它富含多种营养，既是一种美味食品，又是较好的保健食品，具有补肝、益肠胃、抗癌的功效，在日常蔬菜消费中占有重要地位。金针菇品种按照子实体颜色分为黄色金针菇品种和白色金针菇品种。黄色金针菇品种一般为农户栽培，相对于白色金针菇品种具有抗性强、生长快、菌柄粗、耐高温、风味和口感好的特点，比如杂19、苏6等；白色金针菇品种主要为工厂化栽培，颜色洁白、商品性好。

黄色金针菇营养丰富、口感脆爽，是我国传统的金针菇品种。有研究表明，黄色金针菇蛋白质、赖氨酸等含量远高于白色金针菇，这也许是黄色金针菇风味、口感优于白色金针菇的原因。但黄色金针菇外观深黄、基部褐色重，影响了部分消费者消费需求；农户栽培的黄金针菇品相较差，不能实现周年稳定的供应，也影响了大型餐饮业对黄色金针菇的需求。如能培养浅黄色的金针菇品种，并实现工厂化栽培，则可以提高黄色金针菇品质，节省劳动力，扩大黄色金针菇的市场。

黄色金针菇品种栽培料培养过程中，“吐水”现象十分严重，农户栽培中采取菌棒横放、解口，让黄色的水自然流出的方法解决。所谓“吐水”，就是菌棒发满菌后，由于菌丝的密集生长，将菌棒中的水挤出而形成的“吐水”现象。工厂化栽培中采用塑料瓶立放出菇，黄色金针菇品种产生的黄色的不能正常流出，需要人工将黄色的水倒出，否则会造成部分原基缺氧而死。本发明人小范围的试验表明，现有的黄色金针菇品种工厂化出菇产量低均较低，非常需要选育不“吐水”、产量高、颜色浅的黄色金针品种。

发明内容

本发明的目的是提供一种浅黄色金针菇JK05菌株、由所述菌株获得的孢子、菌丝体和子实体，所述菌株在杂交育种中的应用以及所述子实体在食品加工中的应用；本发明还提供了所述菌种的培养方法以及用于培养所述子实体的栽培培养基，用以解决目前黄色金针菇生产中存在的颜色深、品相差，培养过程中“吐水”严重，不能工厂化立瓶栽培等问题。

本发明采用如下技术方案：

一种浅黄色金针菇JK05菌株，其是通过白色品种台厂白和黄色品种杂19作为亲本杂交，经系统选育获得，属于金针菇（Flammulinavelutipes），保藏于中国科学院微生物研究所，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.13879，保藏日期为2017年6月14日。

所述菌株的获得方法包括以下步骤：

（1）选择亲本菌株：选取菌株台厂白和杂19为亲本，采用常规的杂交育种方法获得a个杂合子；

（2）栽培与筛选：把获得的a个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株金杂9；

（3）收集金杂9菌株的孢子，进行自交，获得b个杂合子；

（4）栽培与筛选：把获得的b个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株JK05。

所述浅黄色金针菇JK05菌株的培养方法为：原种液体种、栽培种的培养温度均为14~25℃。

所述浅黄色金针菇JK05菌株作为亲本在杂交育种的应用。

一种浅黄色金针菇孢子，其为通过培养所述浅黄色金针菇JK05菌株得到的孢子。

一种浅黄色金针菇菌丝体，其为通过培养所述浅黄色金针菇JK05菌株得到的菌丝体。

一种浅黄色金针菇子实体，其为通过栽培所述浅黄色金针菇JK05菌株得到的子实体。形态特征如下：子实体整体淡黄色，基部浅褐色。分枝数平均405个；菌盖半球形，厚，不易开伞，菌盖直径3.88mm-4.54mm，平均4.13mm；菌柄长度12.6cm-18.5cm，平均16.8cm，直径3.28-3.45mm，平均3.36mm，大小均匀，基部无绒毛，不黏连；孢子印白色；枝干挺拔，肉质脆嫩。

一种用于栽培所述浅黄色金针菇子实体的栽培培养基，按质量百分比计，其包括35~38％的栽培培养料和62~65％的水，所述栽培培养料按质量百分比计，包括刨花木屑10~15%、10~25％的米糠、5~15％的麸皮、5~10％的豆饼粉、30~50％的玉米芯、3~5％的玉米粉、3~8％的棉籽壳、3~8％的甜菜渣、1~3%的碳酸钙以及0.3~0.8%的贝化石。

栽培培养基中，所述刨花木屑为长3~8cm，宽1~3mm，厚0.5~1.8mm，具有使栽培料蓬松的作用。

子实体的具体栽培过程可参考现有技术，下面也给出一种具体过程，包括如下步骤：

1）液体菌种制备：将所述浅黄色金针菇JK05 PDA试管种无菌条件下接入含有液体种培养基的三角瓶中，在温度25℃、转速140r/min的摇床培养4-7d，当液体培养基充满菌丝球的时候摇菌结束；

2）发菌：将上步所得的浅黄色金针菇液体菌种在无菌条件下接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于培养室内暗培养；前期培养温度18-20℃，后期培养温度12-16℃，湿度55-65％。待菌丝长满栽培瓶后，刮除瓶口表层菌丝进行搔菌，以刺激出菇；

3）子实体形成：将搔菌后的栽培瓶移入生育室，初始温度18℃，按天数递减，最后保持在8-10℃进行培养，湿度85～95％。当子实体高出瓶口2-3cm时进行套筒，每天照射8h150lux光，连续照2天。CO₂浓度2000～9000ppm，随着子实体生长逐步升高，待菌柄达到16-18cm长，采收。

其中，液体种培养基（1L）：大豆粉3.3g，蔗糖20g，七水硫酸镁0.5g，硫酸氢二钾0.7g，加水定容至1L。pH=6.2-6.5。

一种浅黄色金针菇子实体在食品加工中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明提供的浅黄色金针菇JK05，与常用的杂19、苏6等黄色金针菇品种相比，颜色较浅，基部褐色短，发菌基本不“吐水”，工厂化栽培培养及栽培周期短、出菇整齐、产量高，大大提高了生产效率。与白色金针菇相比，口感脆爽、菌柄粗且挺直、风味足。提供了浅黄色金针菇JK05的栽培配方，通过加入刨花木屑和适当降低栽培料含水量，使栽培料蓬松透气，减轻了“吐水”现象。金针菇JK05抗木霉和抗铜绿假单胞菌能力强，在金针菇工厂化栽培过程中，可以减轻病害，有广阔的应用前景。综上所述，浅黄色金针菇JK05具有黄色金针菇的风味特点，白色金针菇的不“吐水”的出菇特点，适合工厂化立瓶栽培，填补了高品质浅黄色金针菇的工厂化产品空白，市场前景广阔。

附图说明

图1为所述浅黄色金针菇JK05菌株ISSR法真实性分析。

图2所述浅黄色金针菇JK05菌株工厂化栽培出菇形态特征。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例所用各种培养基的配方如下：

母种培养基（PDA培养基）：每1L培养基用马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g；

液体种培养基（1L）：大豆粉3.3g，蔗糖20g，七水硫酸镁0.5g，硫酸氢二钾0.7g，加水定容至1L。pH=6.2-6.5；

栽培培养基：刨花木屑10~15%、10~25％的米糠、5~15％的麸皮、5~10％的豆饼粉、30~50％的玉米芯、3~5％的玉米粉、3~8％的棉籽壳、3~8％的甜菜渣、1~3%的碳酸钙、0.3~0.8%的贝化石。

所述刨花木屑为长3~8cm，宽1~3mm，厚0.5~1.8mm，具有使栽培料蓬松的作用。

实施例1杂交获得金针菇JK05

采用杂交育种方法获取金针菇菌株JK05。

具体步骤如下：

1）选择亲本菌株：选取菌株台厂白和杂19为亲本，这两个亲本的子实体都能在市场上购买到。

2）配制母种培养基、液体种培养基和栽培培养基：各培养基配方已经给出，在此不再赘述。

3）采用常规的杂交育种方法获得200个杂合子（F1代）。

4）栽培与筛选：把获得的杂合子根据常规的方法进行栽培试验，通过系统筛选，从200个杂合子（F1代）中，获得一个目标菌株金杂9，该菌株菌丝生长快、抗性强、出菇早、产量高、颜色浅黄、菌柄较粗、不易开伞。

5）收集金杂9菌株的孢子，进行自交，方法同上，获得80个杂合子（F2代）。

6）栽培与筛选：把获得的杂合子（F2代）根据常规的方法进行栽培试验，通过系统筛选，从80个杂合子（F2代）中，获得一个目标菌株JK05，该菌株菌丝生长较快、出菇早、产量高，子实体颜色浅黄、菌柄较粗、不易开伞、出菇一致，不易“吐水”，符合工厂化立瓶栽培的需要。

实施例2菌株拮抗实验及ISSR真实性分析

本发明浅黄色金针菇JK05和两个亲本菌株台厂白、杂19为试验材料，所用培养基为PDA培养基。

金针菇JK05和台厂白，JK05和杂19在平板培养基上分别对峙接种和培养，接种点相距4cm，25℃恒温培养15天。结果表明，在对峙培养菌落交界处，JK05与台厂白、JK05与杂19拮抗线明显，说明JK05是与台厂白、杂19为不同的金针菇菌株。

金针菇JK05菌株ISSR法真实性分析

为了证明JK05菌株与亲本台厂白、杂19以及现有的白色金针菇品种F21和日金的差异，进行了菌株真实性分析。根据中华人民共和国农业行业标准《食用菌菌种真实性鉴定 ISSR法》和已有的文献报道，由15条引物中筛选到8条存在明显扩增差异、多态性高、重现性好的引物。引物的名称、序列见表1，聚类分析结果见图1。

表1 引物

。

从聚类分析结果可以看出，金针菇JK05和台厂白、杂19、F21、日金差异明显，属于不同菌株。

实施例3 抗病性试验

绿色木霉（Trichodermaviride）和致病性铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa）是金针菇栽培过程中的主要病害。以我单位分离保藏的金针菇致病菌绿色木霉和铜绿假单胞菌为指示剂，进行对峙培养。通过观察菌落生长和拮抗带的宽度来判断抗病能力，拮抗带越窄，抗病性越强。

菌种活化：将金针菇菌株和绿色木霉菌株分别在PDA培养基中25℃活化培养，长满皿后备用。作为菌种使用前，用直径0.5cm的打孔器制备菌饼。铜绿假单胞菌在PDA培养基中25℃活化2天，备用。

抗木霉能力测定方法：

使用直径90mm的定量培养皿，每皿用定量蠕动泵定量加入35mL PDA培养基，凝固。相距中心2cm接入直径0.5cm的金针菇菌饼，25℃培养4天后，与金针菇对峙、距离中心2cm处接入绿色木霉菌饼，25℃继续培养。测量拮抗线的宽度、菌落生长宽度，并且持续观察抑制带的颜色、大小变化。

抗铜绿假单胞菌能力测定方法：

使用直径90mm的定量培养皿，每皿用定量蠕动泵定量加入35mL PDA培养基，凝固。相距中心1.75cm接入直径0.5cm的金针菇菌饼，与金针菇对峙、距离中心1.75cm处用接种环接入活化的铜绿假单胞菌，25℃培养4天。观察记录菌丝生长及拮抗情况，测量拮抗线的宽度、菌落生长宽度。

结果见表2，由表可知，金针菇JK05与木霉的对峙宽度5.3mm，接近与杂19的5.2mm，说明被木霉侵入的距离较短，抗木霉能力较强；金针菇JK05与铜绿假单胞菌对峙，拮抗带宽度4.7mm，低于台厂白的6.2mm，说明抗铜绿假单胞菌能力强。金针菇工厂化栽培过程中，容易爆发细菌病害，出现烂菇病，而JK05菌株抗细菌能力强，可以减轻病害，因此有广阔的应用前景。

表2 菌株抗病情况

。

实施例4栽培实验

本发明金针菇JK05在金针菇工厂化栽培企业进行培养周期和栽培周期优选实验，每种每次栽培2000瓶，对培养周期、栽培周期及单产进行对比，总结出本发明金针菇JK05菌株的优势和特点。

本实施例采用的栽培条件如下：

栽培培养基1：20～35％的米糠、5～15％的麸皮、5～10％的豆饼粉、30～50％的玉米芯、3-5％的玉米粉、3～8％的棉籽壳、3～8％的甜菜渣、1~3%的碳酸钙、0.3~0.8的贝化石。含水量63~66%。

栽培培养基2，按质量百分比计，其包括35~38％的栽培培养料和62~65％的水，所述栽培培养料按质量百分比计，包括刨花木屑10~15%、10~25％的米糠、5~15％的麸皮、5~10％的豆饼粉、30~50％的玉米芯、3~5％的玉米粉、3~8％的棉籽壳、3~8％的甜菜渣、1~3%的碳酸钙以及0.3~0.8%的贝化石。

栽培培养基2中，所述刨花木屑为长3~8cm，宽1~3mm，厚0.5~1.8mm，具有使栽培料蓬松的作用。

栽培瓶容积：1100ml，装料量（干）280g/瓶。

培养：前期培养温度18-20℃，后期培养温度12-16℃，湿度55-65％。

出菇：将搔菌后的栽培瓶移入生育室，初始温度18℃，按天数递减，最后保持在8-10℃进行培养，湿度85～95％。原基形成期塑料瓶有“吐水”，进行人工倒水，测定平均“吐水”量。当子实体高出瓶口2-3cm时进行套筒，每天照射8h，150lux光，连续照2天。CO₂浓度2000～9000ppm，随着子实体生长逐步升高，待菌柄达到16-18cm长，采收。表3为金针菇JK05、台厂白和杂19栽培试验结果列表。试验结果见表3。

表3 金针菇JK05、台厂白和杂19栽培试验（头茬）

。

由栽培培养基1看，金针菇JK05的培养周期为25天，栽培周期49天。与亲本台厂白和杂19对比可知，金针菇JK05较白色金针菇台厂白缩短了培养周期和栽培周期，接近杂19的栽培周期。另外，平均单产298.3g/瓶，与杂19单产242.0g/瓶相比明显增加，而且瓶与瓶之间的产量差别不大，适合工厂化栽培。生物学转化率达到106.5%。此外，杂19在栽培过程中“吐水”现象严重，需要不断倒水，给出菇管理增加了许多难度，金针菇JK05和台厂白“吐水”较少，仅对比较严重的栽培瓶进行了倒水操作，大大节省人工。

从栽培培养基2看，金针菇JK05的培养周期为24天，栽培周期48天，与栽培培养基1相比，缩短了1天栽培周期。栽培培养基2较栽培培养基1“吐水”量明显减少。JK05平均单产306.4g/瓶，较配方1提高了产量，尤其基本不“吐水”，省去了倒水这一操作，节省大量人工。

实施例5 形态特征

金针菇JK05子实体形态特征记录的是其在工厂化生产，25天培养周期，49天栽培周期的条件下，采收时的表观特征，参见图2。

子实体整体淡黄色，基部浅褐色。分枝数平均405个；菌盖半球形，厚，不易开伞，菌盖直径3.88mm-4.54mm，平均4.13mm；菌柄长度12.6cm-18.5cm，平均16.8cm，直径3.28-3.45mm，平均3.36mm，大小均匀，基部无绒毛，不黏连；孢子印白色；枝干挺拔，肉质脆嫩。

杂19为黄色金针菇品种，形态特征这里不做过多描述。

以上描述仅为本发明的实施例，谅能理解，在不偏离本发明构思的前提下，对本发明的简单修改和替换皆应包含在本发明的技术构思之内。

Claims (10)

1.一种浅黄色金针菇JK05菌株，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.13879。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株的获得方法包括以下步骤：

（1）选择亲本菌株：选取菌株台厂白和杂19为亲本，采用常规的杂交育种方法获得a个杂合子；

（2）栽培与筛选：把获得的a个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株金杂9；

（3）收集金杂9菌株的孢子，进行自交，获得b个杂合子；

（4）栽培与筛选：把获得的b个杂合子进行栽培试验，通过系统筛选，获得一个目标菌株金针菇JK05。

3.一种权利要求1或2所述菌株的培养方法，其特征在于，所述浅黄色金针菇JK05原种液体种、栽培种的培养温度均为14~25℃。

4.一种权利要求1或2所述菌株作为亲本在杂交育种的应用。

5.一种浅黄色金针菇孢子，其特征在于，其为通过培养权利要求1或2所述菌株得到的孢子。

6.一种浅黄色金针菇菌丝体，其特征在于，其为通过培养权利要求1或2所述菌株得到的菌丝体。

7.一种浅黄色金针菇子实体，其特征在于，其为通过栽培权利要求1或2所述菌株得到的子实体。

8.一种用于栽培权利要求7所述浅黄色金针菇子实体的栽培培养基，其特征在于，按质量百分比计，其包括35~38％的栽培培养料和62~65％的水，所述栽培培养料按质量百分比计，包括刨花木屑10~15%、10~25％的米糠、5~15％的麸皮、5~10％的豆饼粉、30~50％的玉米芯、3~5％的玉米粉、3~8％的棉籽壳、3~8％的甜菜渣、1~3%的碳酸钙以及0.3~0.8%的贝化石。

9.根据权利要求8所述的栽培培养基，其特征在于，所述刨花木屑为长3~8cm，宽1~3mm，厚0.5~1.8mm。

10.一种权利要求7所述浅黄色金针菇子实体在食品加工中的应用。