CN104195055A - 一种尖孢镰刀菌及其在铁皮石斛抗叶斑病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种尖孢镰刀菌，其分类命名为镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，菌株号为JSNL002，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.9566，保藏日期为2014年8月15日。本发明尖孢镰刀菌JSNL002在提高铁皮石斛生长抗叶斑病能力等方面作用效果显著；且能够人工培养，繁殖速度快，便于进行规模化生产，具有良好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种尖孢镰刀菌及其在铁皮石斛抗病中的应用。
背景技术
铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，研究表明，从其种子萌发到苗的健康生长，无不需要共生真菌的参与。由于野生铁皮石斛资源濒临枯竭，目前，铁皮石斛的市场需求主要靠人工栽培，但人工种植铁皮石斛生长速度慢，平均产量低，病害发生较为严重。目前，病害的防治仍然主要依靠农药。从保护生态环境和食品安全的角度出发，铁皮石斛作为名贵中药，应尽可能减少农药、化学肥料的施用量。菌根是土壤中菌根真菌与植物根系形成的具有特定形态结构和功能的共生体，是自然界中普遍存在的一种共生现象。兰科植物对菌根的依赖性较强，菌根真菌与植物根系互为条件形成共生体，在生理上是一个相互协调的整体，并在共同进化的过程中，形成特定的形态特征。菌根真菌与宿主植物的相互关系多数情况下是互利的，菌根真菌从植物体内获取生长必需的营养物质，而植物通过与共生真菌结合，也能更好的从土壤中得到所需的养分及水分等。合理利用菌根资源，提高铁皮石斛的抗病能力，在一定程度上减少化学农药的施用量，这也符合农业的可持续发展战略。因此，菌根菌剂相关研究已成为铁皮石斛产业的一个重要方向。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种对铁皮石斛抗病作用效果显著地菌根真菌——镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002。
本发明还要解决的技术问题是提供上述真菌在提高铁皮石斛抗病能力中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种尖孢镰刀菌，其分类命名为镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，菌株号为JSNL002，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.9566，保藏日期为2014年8月15日。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
上述菌株JSNL002是2010年10月在浙江省乐清市铁皮石斛栽植区内生长状况较好的植株上分离获得的，该菌株对铁皮石斛促生作用不显著。但能明显改善铁皮石斛的抗病能力。
矮小伞霉(Umbelopsis nana)JSNL002的菌落特征如下：
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002的菌落特征如下：
形态学特征观察表明：在PDA平叛上培养后，肉眼观察菌落形态，发现其菌丝体呈绒毛状，并稍带有紫色色素(图1A)。大型分生孢子镰刀形，少许弯曲，两端细胞稍尖，多数为3隔(图1B)。小型分生孢子单胞，卵形，着生于单生瓶梗上，常在瓶梗顶端聚成团(图1C)。扩增ITS区全序列并进行测序，PCR扩增得到的16sRNA全序列如SEQ ID No：1所示。
上述尖孢镰刀菌在铁皮石斛抗叶斑病中的应用也在本发明的保护范围之内。
具体的应用方法是：将尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002制备成固体菌剂，置于铁皮石斛幼苗栽培基质表面，每丛铁皮石斛幼苗的固体菌剂接种量为5g，施用菌剂后，基质相对含水量维持在60％以上10天，以确保菌丝在基质内成活。
其中，所述的固体菌剂按如下方法制备得到：以棉籽壳菌渣为培养基质、硝酸铵为外源氮源、蔗糖为外源碳源，制备成固体培养基，灭菌，接种尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL002，在28℃、12h光照+12h黑暗、pH6-8条件下培养25～35天，将培养好的菌剂切割成1cm3大小的块状物，用于铁皮石斛植株菌根菌剂的接种。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：
(1)尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002对铁皮石斛抗病作用效果较为显著，对减少化学农药的使用有一定作用，也是保证食用安全的重要手段。
(2)尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为图1铁皮石斛菌根真菌JSNL002的形态特征。
图2为JSNL002菌菌根化铁皮石斛的抗叶斑病能力分析。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002对铁皮石斛的抗病能力作用效果分析。
(1)以棉籽壳菌渣为培养基质、硝酸铵为外源氮源、蔗糖为外源碳源，制备成固体培养基质装入高压灭菌袋内，于121℃和101.3千帕的高压条件下灭菌20分钟。待培养基质冷却后在无菌条件下接种菌根真菌JSNL002，然后进行人工培养。具体培养条件为28℃、12h光照+12h黑暗、pH6-8，培养25～35天。将培养好的菌剂加工成1cm3大小的块状物，置于铁皮石斛幼苗栽培基质表面，每丛铁皮石斛幼苗的固体菌剂接种量为5g，施用菌剂后，基质相对含水量维持在60％以上10天，以确保菌丝在基质内成活。
(2)通过紫外光和黑暗处理培养在PDA培养基上的叶斑病病原菌，制得病菌孢子悬浮液，将其稀释到2×105个/mL备用。
(3)将供试铁皮石斛植株在同等条件下进行管理，每株接种植株都选取上部第五片叶，用针刺法人工制造伤口，表面喷洒病原菌孢子悬浮液2ml/每株，温室内温度为30-35℃，湿度95％，每种处理均为100株，并设3组重复。
(4)接种后每天监控叶斑病的发病程度，统计发病率、发病指数。
病株分级标准：病情分级主要根据接种叶片正反两面出现病斑数量及直径，初定分级标准为：
0：正常；
Ⅰ：正反两面有少量病斑；
Ⅱ：正反两面有病斑，发病面积占叶片总面积1/4以下；
Ⅲ：正反两面有病斑，发病面积占叶片总面积的1/4-1/2；
Ⅳ：正反两面有病斑，发病面积占叶片总面积1/2-3/4；
Ⅳ：正反两面有病斑，发病面积占叶片总面积3/4以上。
感病指数＝∑(各级病株数×该级代表数值)×100/(总株数×最高一级代表数值)；
感病率＝(感病株树/接种株树)×100％。
结果见图2。
Claims (4)
1.一种尖孢镰刀菌，其分类命名为镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，菌株号为JSNL002，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.9566，保藏日期为2014年8月15日。
2.权利要求1所述的尖孢镰刀菌在铁皮石斛抗叶斑病中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002制备成固体菌剂，置于铁皮石斛幼苗栽培基质表面，每丛铁皮石斛幼苗的固体菌剂接种量为5g，施用菌剂后，基质相对含水量维持在60％以上10天，以确保菌丝在基质内成活。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的固体菌剂按如下方法制备得到：以棉籽壳菌渣为培养基质、硝酸铵为外源氮源、蔗糖为外源碳源，制备成固体培养基，灭菌，接种尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JSNL002，在28℃、12h光照+12h黑暗、pH6-8条件下培养25～35天，将培养好的菌剂切割成1cm3大小的块状物，用于铁皮石斛植株菌根菌剂的接种。
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