CN108076962B - 一种干巴菌人工栽培方法 - Google Patents

Abstract

一种干巴菌人工栽培方法，改进了先前的菌液侵染效率低的问题，采用仿自然环境的培养基对菌丝进行培养，提高了干巴菌促繁的效率，为干巴菌提供更好的生存环境而不影响松树的生长，进而使得干巴菌能成更大群落生长，科学的促繁和管理松林，更好的保护自然环境。

Description

一种干巴菌人工栽培方法

技术领域

本发明属于菌类培养技术领域，具体涉及一种干巴菌人工栽培方法。

背景技术

干巴菌，云南珍稀野生食用菌，属担子菌亚门层菌纲非裙菌目革菌科革军属的大型真菌，子实体丛生，生于海拔1900-2300米的从林间，近几年在湖北宜昌西北山区也有发现。学名干巴革菌，也叫对花菌、马牙菌等。它生长在滇中及滇西及鄂西北的山林松树间。

产于七八月雨季，至今仍未实现人工养殖。据云南中科院植物研究所刘培贵院士介绍，干巴菌与其他的野生菌不同，不是单一物种，而是复合型真菌，与云南松有共生关系。

干巴菌是一种外生菌根真菌，属担子菌亚门层菌纲非裙菌目菌军属的大型真菌。干巴菌为云南特有的珍稀野生菌类，目前未实现人工栽培，通过合理的开采利用可以实现增产，据（昆明日报）关于“野生干巴菌促繁与保育技术试验项目”成果的报道，该项技术可使干巴菌的亩产量提高198%。通过了解得知，该项技术不足以是干巴菌的数量增加，而仅仅限于通过人工控制采收时间使干巴菌长得更大。

目前，干巴菌面临非常严峻的问题。大肆的不合理的采摘使得干巴菌的幼嫩子实体被采摘；连根拔起的采摘方式使得本可多次采摘的干巴菌根死亡；干巴菌子实体的形成是复杂而且缓慢的；由于其特殊的营养方式，使得科研探究疑点重重，人工促繁技术不成熟。

干巴菌的形成

干巴菌的形成需要经历漫长的步骤，需要一定的自然条件，条件虽然苛刻，但并不代表不可以认识和掌握。干巴菌的营养类型与其他真菌相差较大，但与其相近的腐木寄生真菌相接近。干巴菌菌丝是不可能在存活的松树根或草根上寄生存活的，经过对有寄生的树根和新鲜树根的成分分析，新鲜树根缺少了干巴菌生长必需的单糖成分和适宜的PH环境，因此，干巴菌菌丝是没有存活繁衍的可能的。

干巴菌可通过有丝分裂产生的孢子萌发繁殖，但在自然状态下，由于其孢子出现的核内多核、单核现象，直接导致了干巴菌孢子的存活。因此，在自然的状态下，干巴菌是以另外一种方式繁衍的：菌丝经自然的状态下生成后，会在所寄生的松根草根下蔓延，直到整棵树或草的周围树根都不同程度侵染，这也就造成了常见的干巴菌的“菌窝”现象。

雨水和光照的刺激是干巴菌由菌丝形成步骤中的条件。简要的说，非常适宜干巴菌菌丝生长的环境反而是形成干巴菌子实体的阻碍条件。自然状态下，新出现的干巴菌子实体形成于云南的春夏交替季节，水热条件反复，不利于干巴菌菌丝存活，干巴菌为了能繁衍就会形成子实体和孢子，进而长大。

新形成的干巴菌子实体在条件适宜，养料充足时会不断的进行细胞分裂，菌丝增粗子实体长大。新形成的真菌担子和孢子产生调节素使下部分留存的休眠分生细胞继续处于休眠，与其他真菌相比干巴菌孢子脱落后担子并不会坏死而是成了营养组织，并夹杂了少量的可分生真菌细胞，当干巴菌的子实体大部分被采摘时，旧担子中夹杂的休眠分生细胞脱离调节素的控制进行分裂，产生新的担子和孢子，子实体伴随这一步骤长大。

干巴菌独特的营养方式和繁殖方式共同作用造成了干巴菌强大的生命力，同时也为人工栽培造成了极大的困难。自然条件下，只有五年以上十五年以下的松树才具备可供干巴菌寄生的腐松根，因此，对干巴菌资源的开采也要特别注意保护环境。

干巴菌的菌根

根据研究干巴菌的形成试验得知，干巴菌在形成纽结后的五天后形成肉眼可见菌根，此时菌根较弱小，生命力薄弱。最初形成的干巴菌子实体和菌根是同时在生长的，当干巴菌子实体成熟可以产生成熟的生殖孢子时，菌根也加快生长，同时期加快对枯死在泥土里的松树根和兔儿草跟侵染，在空气湿度85%，温度23摄氏度，生长菌坑光照低于300lux高于260lux菌根生长最快。干巴菌菌根在初形成时与菌丝紧密依存，当菌根侵染松根或草根获得稳定的营养物质后依存关系减弱。

干巴菌菌根的形状是不确定的，因土质疏松度的不同，干巴菌的形态也会有所不同。在土质疏松的地点，采集到的干巴菌有明显的笔直粗壮的菌根；在土质坚硬的地点，采集到的干巴菌菌根与土壤相间。干巴菌菌根在空气湿度低于78%，温度低于9摄氏度，干巴菌菌根便进入休眠态停止生命活动。

干巴菌的生长情况之所以复杂，最重要的原因就是干巴菌菌根的作用复杂。干巴菌的菌根能在土壤中存活多年，这也是干巴菌生命力旺盛的原因，干巴菌菌根不仅为子实体提供生长所需的营养，而且可以通过细胞分裂增生新的子实体。

	5mm	5-10mm	10-12mm	12-15mm	15-17mm	17-20mm
							根深度	>2cm	>5cm	>8cm	<10cm	<11.5cm	<11.5cm
土壤PH	4.7	4.7	4.4	4.6	4.3	4.5
							形成子实体空气湿度	89%	88%	86%	84%	83%	84%
平均温度	19	19	18	17	15	14
							菌坑光照强度	250lux	260lux	273lux	275lux	287lux	300lux
有机质	2.0	1.8	1.7	1.7	1.6	1.4
							新子实体颜色	淡黄色	淡黄色	浅白色	白色	白色	暗白色

由测试图表可以看出如下结论：

1）干巴菌菌根的长度是有限的，另发现干巴菌菌根可与松树根连结。

2）新形成的子实体菌根较短，符合在采集时的经验，新形成的子实体较易连根拔起。

3）干巴菌较适宜生长的PH环境为偏酸性，纤维素经细菌分解形成的弱酸环境有利干巴菌的生长。

4）干巴菌菌根对环境的湿度没有严格的要求，经实践调查，在雨水匮乏的秋季，菌根深度较深的菌块也能生长。在形成菌根后，干巴菌的生命力会明显增强，但在菌丝形成子实体的步骤中，即菌根较短时，若水分含量较高遇光照弱则菌丝会霉变，导致子实体形成失败。

5）干巴菌菌根的分生能力随其与松根草根行成的共生体系稳定性增强而增强。当干巴菌与松树或茅草形成稳定的营养体系后，干巴菌的抗旱，抗强光能力就会增强。

6）野生干巴菌在最初形成时所获得的碳源、氮源最充足，但若没有形成菌根则极易死亡。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种干巴菌人工栽培方法，改进了先前的菌液侵染效率低的问题，采用仿自然环境的培养基对菌丝进行培养，提高了干巴菌促繁的效率。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种干巴菌人工栽培方法，包括以下步骤：

1）获取原生干巴菌菌种，先到能长干巴菌的松林找到子实体20株，用灭菌刀沿土表割下，用松针或枯草掩盖令其能自然生长，10天后，准备好20只灭菌的培养皿，用灭菌刀沿土表割下干巴菌子实体放入培养皿并标号；

2）将收割获得的干巴菌子实体捡出杂质，各培养皿挑选最洁净的5条子实体丝备用，用事先准备好的添加维生素B₂的PDA培养液，每皿50ml转入培养皿高压灭菌，后接种入挑选好的子实体丝，放入培养箱配养；

3）培养10天后，再次制备PDA培养液，手工挑取菌丝较粗，菌落纯净的菌丝接入新的培养液，再培养10天重复该步骤，直到目测整皿菌丝洁净；

4）收集枯松针、细松枝、白茅草粉碎，堆放发霉60天，按100克碎末加入6克生石灰水浴100度蒸煮，蒸出过量有机质和灭菌，直到无气味和上层无粘着感，取出冷却后晾在灭菌装有紫外线灯光的房间里直至含水量检测为5%；

5）对松树林进行清理，拔除杂草，清除较厚的覆盖物，砍除多余的松枝，使松树下有260lux-300lux光照，在松树根周围用刀环切下深度为10厘米的圆周，使接近表层的松树细根断裂，能让干巴菌菌丝自然侵染更大面积的松树根，再在松树周围用镰刀切出散射形的，宽7厘米，深10厘米，长20厘米的八条短槽；

6）将步骤4）准备好的枯松针、细松枝、白茅草用2%葡萄糖、0.03%硫酸铵，0.03%硫酸镁，0.04%硫酸铜，0.04%硫酸锰溶液润湿至含水量10%，分装入培养皿中，将步骤3）纯净好的菌丝接种到培养基中，放入培养箱，控制湿度在23度；

7）待培养基中的菌丝开始生长时，挑选出菌丝洁净，显微镜下菌丝粗壮的培养皿，运送到室外林地，接种至挖好的槽中，用落下的松针覆盖；

8）菌丝接种到室外的时间为每年的四月最适宜，到六月到林地观察菌丝生长情况，若显微镜下可视腐根已被菌丝大量侵染，铲开5厘米的表土，并用原先的覆盖物重新覆盖；

9）接种后三个月左右会形成一批干巴菌子实体，另其菌根生长强壮是未来保持数量的前提，带干巴菌子实体离土表5厘米时用无菌刀沿土表切割第一次。

所述的PDA培养液按质量比通过以下成分制作：先将土豆加入1500ml纯净水中煮汁1000ml，捞出土豆残渣，冷却后按20g葡萄糖、0.03%硫酸铵、0.03%硫酸铜、0.04%硫酸锰加入溶解。

本发明的有益效果是：

1）改进了先前的菌液侵染效率低的问题，采用仿自然环境的培养基对菌丝进行培养，提高了干巴菌促繁的效率。

2）改进了先前的挖坑、挖坡、围栏的方式，减少了对自然环境的改变。

3）为干巴菌的人工栽培提供了理论方法，为后面实现工厂化的生产奠定基础。

4）在铲开的土下，有高达18%的出菌率。

附图说明

图1为本发明实施后实体栽培效果图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进一步叙述。

实施例

2017年1月20日，在云南省玉溪市通海县四寨村大西山东坡松林，海拔2100米，划定了40株树龄7年-10年无干巴菌的松树作为标准栽培树木，土壤PH粗测4.3，有机质2.0，常年均温18度。把选为标准树木的松树用镰刀环切深度10厘米的圆，拔除杂草清理过多的覆盖物，检测是否有枯死松根，排除无枯死松根的松树，并将选出的40株松树标记位置。2017年1月21日，在大西山东坡松林采集到2千克变黑的枯松针、2千克白茅草、1千克发黑枯松枝放入打糠机中粉碎成粗末，用麻袋收贮，洒水发霉，后干燥保存于放房梁下。

2017年4月24日，在大西山北坡切割第一次休眠期结束的干巴菌20株，标记位置。5月29日，在通海县四街镇私人诊所租借高压灭菌锅获得无菌培养液，并将所购40余培养皿灭菌。5月31日上午，在大西山北坡首次发现除标记的干巴菌外的其他种类真菌开始出现，切割新生干巴菌，发现块状大小不一，子实体颜色有差异，大块的呈现淡黄色。5月32日下午，将所得干巴菌撕成细丝选取接种入保温箱内，6月9日第一次纯化，6月19日第二次纯化并直接挑选接种但培养基，6月20日将存放的枯松针松枝碎末高温蒸煮，冷却后晾在紫外光线下。6月27日在事先标记的松树周围开接种槽，6月28日，将培养基取出分开，接种入松树下的接种槽，盖上薄土，7月18日，在距离接种槽10厘米处显微镜下观测到密集的菌丝侵染了枯松根，铲开5cm的表层土，并盖上覆盖物。7月29日，首次发现干巴菌子实体形成于产开的表层土覆盖物下，8月14日40株松树下共出现了17株干巴菌子实体，后增加到了30株，极大的增加了干巴菌繁殖效率。见图1。

Claims (2)

1.一种干巴菌人工栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）获取原生干巴菌，先到能长干巴菌的松林找到子实体20株，用灭菌刀沿土表割下，用松针或枯草掩盖令其能自然生长，10天后，准备好20只灭菌的培养皿，用灭菌刀沿土表割下干巴菌子实体放入培养皿并标号；

2）将收割获得的干巴菌子实体捡出杂质，各培养皿挑选最洁净的5条子实体丝备用，用事先准备好的添加维生素B₂的PDA培养液，每皿50ml转入培养皿高压灭菌，后接种入挑选好的子实体丝，放入培养箱配养；

3）培养10天后，再次制备PDA培养液，手工挑取菌丝较粗，菌落纯净的菌丝接入新的培养液，再培养10天重复该步骤，直到目测整皿菌丝洁净；

4）收集枯松针、细松枝、白茅草粉碎，堆放发霉60天，按100克碎末加入6克生石灰水浴100度蒸煮，蒸出过量有机质和灭菌，直到无气味和上层无粘着感，取出冷却后晾在灭菌装有紫外线灯光的房间里直至含水量检测为5%；

5）对松树林进行清理，拔除杂草，清除较厚的覆盖物，砍除多余的松枝，使松树下有260lux-300lux光照，在松树根周围用刀环切下深度为10厘米的圆周，使接近表层的松树细根断裂，能让干巴菌菌丝自然侵染更大面积的松树根，再在松树周围用镰刀切出散射形的，宽7厘米，深10厘米，长20厘米的八条短槽；

6）将步骤4）准备好的枯松针、细松枝、白茅草用2%葡萄糖、0.03%硫酸铵，0.03%硫酸镁，0.04%硫酸铜，0.04%硫酸锰溶液润湿至含水量10%，分装入培养皿中，将步骤3）纯净好的菌丝接种到培养基中，放入培养箱，控制温 度在23度；

7）待培养基中的菌丝开始生长时，挑选出菌丝洁净，显微镜下菌丝粗壮的培养皿，运送到室外林地，接种至挖好的槽中，用落下的松针覆盖；

8）菌丝接种到室外的时间为每年的四月最适宜，到六月到林地观察菌丝生长情况，若显微镜下可视腐根已被菌丝大量侵染，铲开5厘米的表土，并用原先的覆盖物重新覆盖；

9）接种后三个月左右会形成一批干巴菌子实体，另其菌根生长强壮是未来保持数量的前提，带干巴菌子实体离土表5厘米时用无菌刀沿土表切割第一次。

2.根据权利要求1所述的一种干巴菌人工栽培方法，其特征在于，所述的PDA培养液按质量比通过以下成分制作：先将土豆加入1500ml纯净水中煮汁1000ml，捞出土豆残渣，冷却后按20g葡萄糖、0.03%硫酸铵、0.03%硫酸铜、0.04%硫酸锰加入溶解。

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