CN102283854A - 一种麦角甾苷的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种麦角甾苷的应用,是指麦角甾苷以单一或与药学上可接受的药物载体组成的组合物形式在制备治疗糖尿病药物制剂中的应用,为麦角甾苷开拓了一种新的药用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种麦角甾苷的应用,具体说,是涉及一种麦角甾苷在治疗糖尿病中的新用途,属于中药技术领域。
背景技术
当前,糖尿病已成为严重危害现代人类健康的三大慢性疾病之一。目前用于治疗糖尿病的药物主要有磺脲类、格列奈类、双胍类、噻唑烷二酮类化合物及α-糖苷酶抑制剂等。这些药物对糖尿病具有一定的治疗作用,但同时也伴随着许多副作用,如消化道的不良反应及一定的肝肾毒性等。因此寻找低毒有效的新方法是糖尿病药物研究的重要任务。
麦角甾苷(acteoside),其化学结构式如下:
是一种苯乙醇苷类化合物,广泛分布于肉苁蓉属、车前属、地黄属等多种植物中。研究表明,麦角甾苷具有多种生理活性,如抗肿瘤、抗菌、抗炎、镇痛、抗氧化、保肝、解痉、抗溃疡、免疫调节、神经保护、抗尿酸升高、促进组胺和花生四烯酸的释放,以及血管舒张等作用,在临床上具有重要的药用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种麦角甾苷的新用途。
本发明所述的麦角甾苷的新用途是指麦角甾苷以单一形式用于治疗糖尿病的药物制剂的制备中。
进一步,本发明所述的麦角甾苷的新用途是指麦角甾苷以与药学上可接受的药物载体组成的组合物形式用于治疗糖尿病的药物制剂的制备中。
所述的糖尿病为I型和/或II型糖尿病。
所述的麦角甾苷来源于车前属植物的提取物。
所述的麦角甾苷是由车前子乙醇提取物的水混悬液经过石油醚萃取到石油醚层接近无色,弃去石油醚层,水层用水饱和的正丁醇萃取,至正丁醇层接近无色,合并正丁醇层并减压浓缩,再通过硅胶柱、ODS反相柱、半制备型高效液相色谱柱和Sephadex LH-20凝胶柱层析得到。
所述的车前子乙醇提取物推荐为车前子经过2~6倍体积的体积分数为60~90%的乙醇水溶液回流提取2~6次得到的提取物;优选为车前子经过3~5倍体积的体积分数为70~80%的乙醇水溶液回流提取3~5次得到的提取物。
所述的硅胶柱层析用的洗脱液优选乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系。
所述的ODS反相柱层析用的洗脱液优选甲醇-水溶液体系。
所述的Sephadex LH-20凝胶柱层析用的洗脱液优选甲醇。
所述的药物制剂形式可以是任何可药用的剂型,这些剂型包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂;优选口服剂型,如:胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。所述的口服剂型可含有常用的赋形剂,诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂,必要时可对片剂进行包衣。适宜的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂;适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物,例如羟基乙酸淀粉钠;适宜的润滑剂包括,例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
本发明利用HepG2细胞进行体外葡萄糖消耗试验,同时利用四氧嘧啶导致的I型糖尿病小鼠,链脲佐菌素导致的I型糖尿病小鼠,链脲佐菌素加高脂饲料导致的II型糖尿病大鼠进行体内降糖药效实验,结果表明,麦角甾苷在体外试验中可促进葡萄糖的消耗,显示了很低的细胞毒性;同时在体内试验中可明显提高血清胰岛素水平,降低空腹血糖水平,显示出良好的治疗糖尿病活性,为麦角甾苷开拓了一种新的药用价值。
具体实施方式
实施例1
取车前子粗粉1kg,用4倍体积的体积分数为70%的乙醇水溶液回流提取3h,重复3次。合并提取液,过滤、浓缩干溶剂。
将用1∶3重量/体积比的水稀释得到的上述浓缩提取液的水混悬液,用石油醚(60~90℃)多次萃取,至石油醚层接近无色,弃去石油醚层;水层用水饱和的正丁醇萃取,至正丁醇层接近无色,合并正丁醇层并减压浓缩。
通过硅胶柱层析,用体积比为35∶1∶0.4的乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系进行梯度洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,得到麦角甾苷粗品。
反复通过硅胶(乙酸乙酯-甲醇-水梯度系统)柱、ODS反相(甲醇-水体系)柱、半制备型高效液相色谱柱(Pre-LC)和Sephadex LH-20凝胶(甲醇)柱层析,直至得到麦角甾苷纯品。
分离得到的麦角甾苷的光谱数据如下:
麦角甾苷(acteoside),为淡黄色粉末,低分辨质谱得到该化合物的质量数为624.24,分子式为C29H36O15,紫外光谱λmax:232,246,289,332nm;红外光谱(KBr)max cm-1:3410,2927,1697,1604,1514,1447,1370,1277,1162,1030,809;1H NMR(500MHz,CD3OD)数据为:6.69(1H,d,J=1.7Hz,H-2),6.65(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.55(1H,dd,J=1.7,8.0Hz,H-6),2.78(2H,m,CH2-7),4.02(1H,m,H-8),3.72(1H,m,H-8),4.36(1H,d,J=8.0Hz,H-1’),3.43(1H,m,H-2’),3.85(1H,t,J=9.4Hz,H-3’),4.95(1H,t,J=9.4Hz,H-4’),3.57(1H,m,H-5’),3.66(1H,m,CH2-6’),3.57(1H,m,CH2-6’),5.18(1H,s,H-1”),3.90(1H,m,H-2”),3.61(1H,m,H-3”),3.35(1H,t,J=9.2Hz,H-4”),3.61(1H,m,H-5”),1.18(3H,d,H-6”),7.05(1H,d,J=1.7Hz,H-2”’),6.78(1H,d,J=8.4Hz,H-3”’),6.95(1H,dd,J=1.7,8.4Hz,H-6”’),7.59(1H,d,J=16.0Hz,H-7”’),6.27(1H,d,J=16.0Hz,H-8”’)。13C NMR(125MHz,CD3OD)数据为:131.8(C-1),116.6(C-2),146.4(C-3),144.9(C-4),115.0(C-5),123.5(C-6),72.5(C-7),36.8(C-8),104.5(C-1’),76.5(C-2′),81.9(C-3′),70.7(C-4’),76.3(C-5’),62.7(C-6’),103.2(C-1”),72.6(C-2”),72.4(C-3”),74.1(C-4”),70.9(C-5”),18.7(C-6”),127.9(C-1”’),121.6(C-2”’),117.4(C-3”’),147.1(C-4”’),150.0(C-5”’),116.8(C-6”’),148.3(C-7”’),115.6(C-8”’),168.6(C-9”’)。
实施例2
将HepG2细胞接种于96孔板,待细胞长至60%融合,换上含0.2%牛血清白蛋白(BSA)的不同浓度麦角甾苷的培养液,温育24h后,检测培液中的葡萄糖残量,按下式计算24h各孔细胞的葡萄糖消耗率。
葡萄糖消耗率=(实验孔0h实测值-实验孔24h实测值)/(对照孔0h实测值-对照孔24h实测值)×100%。
表1麦角甾苷对HepG2细胞糖代谢的促进作用
注:其中二甲双胍为阳性药。*P<0.05,***P<0.001,与对照孔相比。
由表1可见:麦角甾苷对HepG2细胞的葡萄糖代谢具有显著的促进作用。
实施例3
在HepG2细胞葡萄糖消耗试验结束时将待测培养液移出,换上含0.5g/LMTT的培养液继续孵育4h,然后将培养液倒尽,吸干,每孔再加入200μl二甲亚砜,混匀后置酶标仪上于570nm处测吸光度,按下式计算HepG2细胞存活率:细胞存活率=实验孔测定值/对照孔测定值×100%。
表2麦角甾苷对HepG2细胞的毒性
注:其中二甲双胍为阳性药。***P<0.001,与对照孔相比。
由表2可见:相对于阳性对照药二甲双胍,麦角甾苷对HepG2细胞几乎无毒性,显示出非常好的安全性。
实施例4
选用健康雄性小鼠,(22±2)g,随机分为正常组和造模组,造模组尾静脉注射四氧嘧啶48mg/kg。3天后,小鼠禁食12h,自由饮水,用葡萄糖氧化酶法测定小鼠的空腹血糖水平,筛选血糖值大于11.1mmol/L的小鼠进入实验,并分为模型组和麦角甾苷组,其中麦角甾苷组每日给药麦角甾苷30mg/kg。连续口服灌胃给药两周,给药结束后,测定小鼠空腹血糖值。实验数据进行方差分析,结果以x±s表示。
表3麦角甾苷对四氧嘧啶导致的I型糖尿病小鼠的降糖作用
正常组 | 模型组 | 麦角甾苷组 | |
空腹血糖值(mmol/L) | 4.94±0.85 | 19.40±5.12### | 12.8±3.30* |
注:###P<0.001,与正常组相比;*P<0.05,与模型组相比。
由表3可见:与正常组相比,模型组小鼠空腹血糖值显著升高,说明I型糖尿病模型造模成功。同时,与模型组相比,麦角甾苷组的空腹血糖值显著降低,说明麦角甾苷具有显著的降低空腹血糖的作用。
实施例5
选用健康雄性小鼠,(22±2)g,随机分为正常组和造模组,造模组腹腔注射链脲佐菌素150mg/kg,48h后剪尾测随机血糖,筛选血糖值超过10.1mmol/l的小鼠进入实验,并分为模型组和麦角甾苷组,其中麦角甾苷组每日给药麦角甾苷45mg/kg。连续口服灌胃给药4周,给药结束后,测定小鼠血清胰岛素和空腹血糖值。实验数据进行方差分析,结果以x±s表示。
表4麦角甾苷对链脲佐菌素导致的I型糖尿病小鼠的降糖作用
正常组 | 模型组 | 麦角甾苷组 | |
血清胰岛素值(IU/mL) | 24.56±4.21 | 13.50±2.22### | 18.13±2.99** |
空腹血糖值(mmol/L) | 5.31±0.27 | 29.94±5.18### | 19.28±8.28** |
注:#P<0.05,###P<0.001,与正常组相比;**P<0.01,与模型组相比。
由表4可见:与正常对照组相比,模型组小鼠空腹血糖值显著升高,说明I型糖尿病模型造模成功。同时,与模型组相比,麦角甾苷具有显著的升高血清胰岛素和降低空腹血糖的作用。
实施例6
选用健康雄性wistar大鼠,(200±20)g,随机分为正常组和高脂组(88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇),饲喂3周后,高脂组腹腔注射链脲佐菌素35mg/kg,五天后剪尾测随机血糖,筛选血糖值超过16.7mmol/L的大鼠进入实验,并分为模型组和麦角甾苷组,其中麦角甾苷组每日给药麦角甾苷150mg/kg。连续口服灌胃给药4周,给药结束后,测定大鼠血清胰岛素和空腹血糖值。实验数据进行方差分析,结果以x±s表示。
表5麦角甾苷对II型糖尿病大鼠的降糖作用
正常组 | 模型组 | 麦角甾苷组 | |
血清胰岛素值(IU/mL) | 44.48±12.51 | 17.85±3.78### | 26.09±4.12*** |
空腹血糖值(mmol/L) | 10.12±0.67 | 26.21±1.61### | 25.96±2.34 |
注:###P<0.001,与正常组相比;***P<0.001,与模型组相比。
由表5可见:与正常组相比,模型组大鼠空腹血糖值显著升高,说明II型糖尿病模型造模成功。同时,与模型组相比,麦角甾苷具有显著的升高血清胰岛素和降低空腹血糖的作用。
Claims (10)
1.一种麦角甾苷的应用,其特征在于:以麦角甾苷单一形式用于治疗糖尿病的药物制剂的制备中。
2.根据权利要求1所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:以麦角甾苷与药学上可接受的药物载体组成的组合物形式用于治疗糖尿病的药物制剂的制备中。
3.根据权利要求1或2所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的糖尿病为I型和/或II型糖尿病。
4.根据权利要求1或2所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的麦角甾苷来源于车前属植物的提取物。
5.根据权利要求4所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的麦角甾苷是由车前子乙醇提取物的水混悬液经过石油醚萃取到石油醚层接近无色,弃去石油醚层,水层用水饱和的正丁醇萃取,至正丁醇层接近无色,合并正丁醇层并减压浓缩,再通过硅胶柱、ODS反相柱、半制备型高效液相色谱柱和Sephadex LH-20凝胶柱层析得到。
6.根据权利要求5所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的车前子乙醇提取物为车前子经过2~6倍体积的体积分数为60~90%的乙醇水溶液回流提取2~6次得到的提取物。
7.根据权利要求6所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的车前子乙醇提取物为车前子经过3~5倍体积的体积分数为70~80%的乙醇水溶液回流提取3~5次得到的提取物。
8.根据权利要求5所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的硅胶柱层析用的洗脱液为乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系。
9.根据权利要求5所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的ODS反相柱层析用的洗脱液为甲醇-水溶液体系。
10.根据权利要求5所述的麦角甾苷的应用,其特征在于:所述的SephadexLH-20凝胶柱层析用的洗脱液为甲醇。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111221 |