CN102274183B - 一种多囊脂质体制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及多囊脂质体、空白多囊脂质体及其制备方法和应用。该多囊脂质体含下述重量份数的1份脂质、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节剂和药物活性成分；该多囊脂质体药脂比为1∶0.1～1∶200；该脂质含有特定用量的中性磷脂、胆固醇和三酸甘油酯；所述辅助乳化剂选自右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、精氨酸和羟甲基淀粉。空白多囊脂质体含下述重量份数的1份脂质成分、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节剂和0.1～50份离子梯度调节剂；改多囊脂质体内水相渗透压等于人体血浆的渗透压；辅助乳化剂如前所述。该多囊脂质体具有高的包封率，在体内、体外实验均能达到良好的缓释作用。

Description

一种多囊脂质体制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种多囊脂质体、空白多囊脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

Kim等人于1983年最先发现并研究了多囊脂质体，他们通过复乳法，以磷脂、胆固醇和中性脂质为成膜材料，以氯仿和乙醚为有机溶剂，成功制备了多囊脂质体，并凭借光学显微镜和电镜观察了多囊脂质体的微观结构。在制备过程中，首先将药物溶液和油相在机械作用力下形成油包水(W/O)型初乳，再将初乳与外水相混合制得复乳，通过氮气吹干除去有机溶剂制得多囊脂质体混悬液。多囊脂质体颗粒的平均粒径在5μm～50μm之间。通过复乳法制备得多囊脂质体具有高包封率(20％～90％)、高载药量、高稳定性(4℃下可保存一年以上)、低渗漏、缓释作用(可延迟释放数天至数周)。因其非同心圆的拓朴结构，使得多囊脂质体在注射部位形成药物“储库”，随着磷脂双分子层的不断代谢，包封在囊泡中的药物逐步释放至血液或病变部位，发挥很好的延迟释放作用。通过调节制备过程中的参数和处方比例，可以轻松控制药物释放时间在几天到数周之间。

但是，现有技术中Kim等人在多囊脂质体制备工艺中，均依赖于采用L-赖氨酸作为乳剂稳定剂，使对于各种不同种类的药物多囊脂质体的制备均受到一定程度地局限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是本发明提供多囊脂质体、空白多囊脂质体及其制备方法和应用。该多囊脂质体具有高的包封率，在体内、体外实验均能达到良好的缓释作用。

本发明涉及一种多囊脂质体，其配方为含有1份脂质、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节剂、以及药物活性成分，所述的份数为重量份数；所述的多囊脂质体的药脂比为1∶0.1～1∶200；所述的脂质含有中性磷脂、胆固醇和三酸甘油酯；其中，所述的中性磷脂与胆固醇的质量比为10∶1～1∶1；所述的三酸甘油酯的含量为1％～10％，百分比为三酸甘油酯占脂质总量的摩尔数百分比；所述的辅助乳化剂为右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、丙二醇纤维素钠、羟乙基淀粉、羟乙基纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、明胶、西黄蓍胶、阿拉伯胶、果胶、干酪素钠、壳聚糖、白蛋白、聚麦芽三糖、甲基纤维素、甘氨酸、精氨酸、甘露醇、山梨醇、羟甲基淀粉和葡萄糖酸钠中的一种或多种。

在本领域，常规的用于多囊脂质体中的辅助乳化剂一般是赖氨酸、甘氨酸和组氨酸。本发明新发现了上述化合物成分也可以作为多囊脂质体中的辅助乳化剂成分，从而提供了上述多囊脂质体。其中，所述的辅助乳化剂较佳的为右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、精氨酸和羟甲基淀粉中的一种或多种。

本发明中，所述的脂质为本领域常规所用脂质，含有中性磷脂、胆固醇和三酸甘油酯。其中，所述的中性磷脂和胆固醇为成膜材料。胆固醇为膜稳定剂，可通过改变磷脂相转变温度调节脂质体膜层的流动性，从而改善脂质体的稳定性，减小贮存过程中因脂质体膜层相变引起的药物渗漏；若胆固醇用量过小，其调节作用甚微，而其用量过大时，则难以形成脂质体的磷脂双分子层，研究表明当中性磷脂与胆固醇重量比在10∶1～1∶1之间时形成的脂质体较稳定，更佳的在5∶1～2∶1。

其中，所述的中性磷脂是指处于中性pH时整个分子的净电荷为零的磷脂。所述的中性磷脂可以是天然或者合成的中性磷脂，较佳的为卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂、鞘磷脂、氢化大豆磷脂、磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；更佳的为卵磷脂、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种。

其中，所述的三酸甘油酯是形成多囊脂质体拓扑结构的决定性因素之一。其在脂质体中主要起支架作用，分布于非同心水性腔室磷脂双分子层节点处，支撑起多囊脂质体的拓扑结构。所述的三酸甘油酯可以是天然或者合成的三酸甘油酯。天然三酸甘油酯较佳的如各种植物油、动物油。本发明中所述的三酸甘油酯较佳的为大豆油、三油酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三癸酸甘油酯、三辛酸甘油酯和三己酸甘油酯中的一种或多种，更佳的为三油酸甘油酯。三酸甘油酯在脂质成分中占摩尔百分比为1％～10％，更佳的是4％～8％。

本发明中，所述的脂质中较佳的还可以含有负电荷磷脂或者脂肪胺。所述的负电荷磷脂是指处于中性pH时整个分子带负电荷的磷脂。脂肪胺则带正电荷。这些带电荷的成分可有效调节脂质体表面电荷，使脂质体带负电或正电，以克服中性磷脂由于范德华力所导致的凝聚问题，从而增强制剂的稳定性。所述的负电荷磷脂较佳的为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸(DSPS)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰肌醇(DPPZ)、二硬脂酰磷脂酰肌醇(DSPZ)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)和二硬脂酰磷脂酸(DSPA)中的一种或多种。所述的脂肪胺较佳的为硬脂胺。所述的负电荷磷脂或者脂肪胺在脂质相中的含量较佳的为0.2mg/mL～8mg/mL，更佳的为2mg/mL～6mg/mL。

本发明中，所述的渗透压调节剂是指用于调节溶液渗透压的物质，可为本领域现有技术中常用的物质，如海藻糖、琥珀酸盐、环糊精、半乳糖、甘露醇、麦芽糖、甘露糖醇、柠檬酸盐、山梨醇、葡萄糖和蔗糖等，较佳的选自葡萄糖、蔗糖、甘露醇和氯化钠中的一种或几种。

本发明中，所述的多囊脂质体较佳的还含有pH调节剂。所述的“pH调节剂”是指用于调剂溶液pH的物质，可为本领域现有技术中常用的物质，较佳的为柠檬酸、盐酸、磷酸和醋酸中的一种或多种。

本发明还涉及上述多囊脂质体的制备方法，其包括按前述的配方，将药物活性成分与渗透压调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可，所述的外水相，或者外水相和内水相中还含有辅助乳化剂；其中，当多囊脂质体含有pH调节剂时，pH调节剂先溶于水中，之后用于溶解药物活性成分和渗透压调节剂制备内水相。其中，所述的辅助乳化剂如前所述。

本发明中，所述的中性磷脂在脂质相中的浓度较佳的为4mg/mL～40mg/mL。

本发明中，所述的有机溶剂为本领域常规使用的有机溶剂，一般为能溶解脂质成分的任何有机溶剂，较佳的为乙醚、氯仿、二氯甲烷、异丙基乙醚、四氢呋喃、卤代醚和卤代酯中的一种或多种。

本发明中，所述的外水相中的渗透压调节剂的含量较佳的为3.2g/100mL～6g/100mL。

本发明中，所述的外水相与油包水型初乳的体积比较佳的为2∶1～6∶1。

本发明中，所述的当多囊脂质体含有pH调节剂时，pH调节剂先溶于水的浓度较佳的为≤1mol/L，不包括0。

本发明中，所述的初乳或复乳可按本领域常规乳化方法制得，其处理方式较佳的为搅拌、振荡、声处理、超声波或高速剪切匀浆机处理。

本发明中，所述的除去复乳中的有机溶剂为本领域常规处理方式，较佳的为气流吹干或减压蒸发，所述的气流吹干涉及使用的气体较佳的为惰性气体、氢气或二氧化碳，所述的惰性气体较佳的为氮气、氦气或氩气。

本发明中，所述的多囊脂质体制得之后较佳的将其用等渗溶液洗涤，再分散于等渗溶液中，制得多囊脂质体成品。

本发明中，术语“等渗溶液”是指渗透压与人体血浆相同的溶液，较佳的为生理盐水。其中洗涤的目的在于去除未包封的药物活性成分和渗透压调节剂等梯度形成物质。

本发明还涉及一种空白多囊脂质体，其配方含有1份脂质成分、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节和0.1～50份离子梯度调节剂剂，所述的份数为重量份数；其中，所述的多囊脂质体的内水相渗透压等于人体血浆的渗透压；所述的辅助乳化剂为右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、羟甲基淀粉和精氨酸中的一种或多种。

本发明中，所述的空白多囊脂质体中涉及的脂质中的含有组分及其含量、渗透压调节剂的种类和含量均同前所述。

本发明中，所述的离子梯度调节剂较佳的为硫酸铵、硫酸铜、硫酸锰、硫酸镁、醋酸钙、柠檬酸和二氯化锰中的一种或多种。

本发明还涉及上述的空白多囊脂质体的制备方法，按所述配方，将离子梯度调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可；所述的内水相中还含有渗透压调节剂，含量为0g/100ml～6g/100ml；所述的外水相，或者外水相和内水相中含有辅助乳化剂。其中，所述的辅助乳化剂如前所述。

其中，所述的中性磷脂在脂质相中的浓度如前所述。所述的有机溶剂的具体种类、外水相与油包水型初乳的体积比，初乳或复乳的制备方法以及除去复乳有机溶剂的方式均如前所述。

其中，所述的离子梯度调节剂在内水相中的浓度较佳的为10mmol/L～1000mmol/L，更佳的为50mmol/L～500mmol/L。本发明内水相中的离子梯度调节剂使本发明所得的空白多囊脂质体内外产生了离子梯度。在主动载药法制备普通脂质体的工艺中，常用的离子梯度包括pH梯度、硫酸铵梯度和离子梯度-细胞离子载体。硫酸铵梯度法以及其他离子梯度法能够将药物载入脂质体内部的最根本原动力都可以归结为pH梯度的作用，只不过pH梯度的产生方法有直接和间接的区别。本发明所适用的离子梯度也包括如上三种，是通过所述的离子梯度调节剂建立的。空白多囊脂质体内外的离子梯度建立后，就可以利用该离子梯度产生的动力，将药物活性成分主动载入该空白多囊脂质体中，从而制得活性药物多囊脂质体。

内水相中可以不含渗透压调节剂，因为离子梯度调节剂本身就可以造成渗透压，当离子梯度调节剂浓度不够大时，就需要渗透压调节剂来调节渗透压。渗透压调节剂可为本领域任何常用的用于调节溶液渗透压的物质。渗透压调节剂的作用在于调节内水相的渗透压等于人体血浆的渗透压，这样可以保证本发明的多囊脂质体被注入人体后保持稳定，并调节药物自多囊脂质体释放至体内的速率。因此，控制所述的渗透压调节剂的含量为0g/100ml～6g/100ml，更佳的为3.2g/100ml～5.4g/100ml。

本发明中，所述的空白多囊脂质体制得之后较佳的将其用等渗溶液洗涤，再分散于等渗溶液中，制得空白多囊脂质体成品。

本发明还涉及一种多囊脂质体，包括药物活性成分和如上所述的空白多囊脂质体载体。

根据本发明，所述的含药物活性成分的多囊脂质体中，药脂比较佳的是1∶0.1～1∶200，更佳的为1∶5～1∶50。

本发明中，所述的“药脂比”是指药物活性成分与多囊脂质体中的脂质成分的质量比。

本发明还涉及一种如上所述多囊脂质体的制备方法，包括将溶解有药物活性成分和渗透压调节剂的水溶液加入如上所述空白多囊脂质体成品中，混合均匀，在高于脂质的相转变温度孵育，制得含有药物活性成分的多囊脂质体混悬液初品，用等渗溶液洗涤所述含药物活性成分的多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制得含药物活性成分多囊脂质体成品。

本发明中，所述的药物活性成分对于抗癌药、抗糖尿病药、抗高血压药、抗病毒药、抗寄生虫药、抗真菌药、抗心律失常药、抗组胺药、抗生素、激素、核酸及其类似物、多肽、蛋白质和糖蛋白、镇静药、止痛药、类固醇、疫苗和受体阻滞剂等均可适用，较佳的为艾塞纳肽、拓扑替康和盐酸可乐定中的一种或多种。本发明的多囊脂质体包封的药物活性成分，特别适用于碱性条件下不稳定的药物活性成分，克服了现有技术中的辅助乳化剂不适宜用于制备碱性条件下不稳定的药物活性成分。

本发明还涉及本发明前述的两种含有药物活性成分的多囊脂质体在制备药物中的应用。

本发明还涉及右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、羟甲基淀粉和精氨酸中的一种或多种作为辅助乳化剂在制备多囊脂质体中的应用。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征可以任意组合得到本发明较佳实施例。

本发明的积极进步效果在于：本发明提供多囊脂质体、空白多囊脂质体及其制备方法和应用。该多囊脂质体具有高的包封率，在体内、体外实验均能达到良好的缓释作用，并特别适用于碱性条件下不稳定的药物活性成分的载体。

附图说明

图1为实施例1制得的多囊脂质体400倍光学显微镜下外观形态图。

图2为实施例1制得的多囊脂质体经SPSS 16.0分析的粒径分布示意图。

图3为效果实施例3中艾塞那肽多囊脂质体体外累计释放率图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

下述实施例中所用卵磷脂为德固赛公司产品；二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸和二棕榈酰磷脂酰甘油购于Sigma公司；胆固醇购于上海蓝季科技发展有限公司；三油酸甘油酯购于广州化学试剂厂。

下述实施例中多囊脂质体粒径采用显微镜检测；

包封率测定方法为：

取0.5mL本发明多囊脂质体混悬液，加入4.5mL生理盐水，混和均匀，600×g离心5分钟，分离上清液和沉淀。检测上清液中游离药物活性成分浓度；将沉淀用10％的Triton X-100溶液破膜溶解，测定包封的药物活性成分的浓度，用以下公式计算多囊脂质体的包封率：

包封率(％)＝被包封的药物活性成分量/混悬液中活性成分总量×100

实施例1

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量盐酸溶液(0.1mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和1g/100mL辅助乳化剂聚乙烯吡咯烷酮的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型二氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去二氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为99.6％。

实施例2

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量柠檬酸溶液(0.02mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有6.0g/100ml渗透压调节剂葡萄糖和2.765g/100ml右旋糖酐的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型氯仿微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去氯仿；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，拓扑替康多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为85.7％。

实施例3

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分用适量磷酸溶液(0.2mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将60mL含有1.07g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和2.9mg/100mL辅助乳化剂精氨酸的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型氯仿-乙醚微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去氯仿和乙醚；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，盐酸可乐定多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为61.9％。

实施例4

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量醋酸溶液(1mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将40mL含有7.0g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和6g/100mL辅助乳化剂羟乙基淀粉的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型氯仿-乙醚微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去氯仿和乙醚；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为85.2％。

实施例5

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量磷酸溶液(0.01mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有1.25g/100ml渗透压调节剂葡萄糖和2g/100mL辅助乳化剂明胶的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型二氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去二氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，拓扑替康多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为90.4％。

实施例6

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分、渗透压调节剂蔗糖、辅助乳化剂聚乙烯吡咯烷酮用适量纯水超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和1g/100mL辅助乳化剂聚乙烯吡咯烷酮的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型二氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去二氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为80.6％。

实施例7

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将离子梯度调节剂硫酸铵用适量纯水超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和2g/100mL辅助乳化剂白蛋白的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型三氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去三氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得空白多囊脂质体混悬液。

(5)将药物活性成分的拓扑替康加入空白多囊脂质体混悬液，摇匀，使溶解，40℃恒温孵育5min，得拓扑替康多囊脂质体。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为87.2％。

实施例8

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将离子梯度调节剂硫酸铵用适量纯水超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和2g/100mL辅助乳化剂羟甲基淀粉的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型三氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去三氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得空白多囊脂质体混悬液。

(5)将药物活性成分的拓扑替康加入空白多囊脂质体混悬液，摇匀，使溶解，40℃恒温孵育5min，得拓扑替康多囊脂质体。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为87.2％。

实施例9

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将离子梯度调节剂硫酸铵用适量纯水超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和2g/100mL辅助乳化剂羟甲基淀粉的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型三氯甲烷微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去三氯甲烷；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得空白多囊脂质体混悬液。

(5)将药物活性成分的拓扑替康加入空白多囊脂质体混悬液，摇匀，使溶解，40℃恒温孵育5min，得拓扑替康多囊脂质体。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为92.8％。

对比实施例1

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量盐酸溶液(0.1mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和40mmol/L辅助乳化剂赖氨酸的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型氯仿微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去氯仿；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，拓扑替康多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率为8.4％。

由本对比例可知，使用现有技术中的辅助乳化剂赖氨酸会导致外水相pH值约为9，进而导致药物活性成分不稳定，制得的脂质体包封率极低。

对比实施例2

原料配方：

制备多囊脂质体：

(1)按照上述配方将脂质用有机溶剂溶解，作为脂质相；将药物活性成分与渗透压调节剂蔗糖用适量盐酸溶液(0.1mol/L)超声溶解，并定容至5mL，作为内水相，将内水相缓慢加入脂质相上层；用高速剪切匀浆机将所得混合物在10,000rpm的转速下作用9分钟，制得W/O型初乳；

(2)将20mL含有3.2g/100mL渗透压调节剂葡萄糖和40mmol/L辅助乳化剂赖氨酸的外水相加在W/O型初乳的上层，以4500rpm的转速作用15秒钟，制得水包油包水型氯仿微球的复乳混悬液；

(3)将上述复乳注入盛有30mL外水相的1000mL锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃水浴20分钟缓慢除去氯仿；

(4)再向锥形瓶中加入60mL生理盐水，在600×g条件下离心5分钟分离脂质体，弃上清液，用生理盐水洗涤沉淀三次，将所得沉淀再分散在5mL～10mL生理盐水中，得多囊脂质体混悬液。

经检测，艾塞纳肽多囊脂质体粒径为5～50μm；包封率仅为3.9％。由本对比例可知，使用现有技术中的辅助乳化剂赖氨酸会导致外水相pH值约为9，进而导致药物活性成分不稳定，制得的脂质体包封率极低。

效果实施例1多囊脂质体的外观形态检测

取实施例1的多囊脂质体混悬液，置于400倍光学显微镜下观察多囊脂质体的外观形态，并拍照(如图1所示)，经SPSS 16.0分析粒径分布(如图2所示)，其粒径的均值为17.01μm，标准偏差为8.421，N为200。

效果实施例2

取艾塞那肽多囊脂质体混悬液(实施例1制备)，分别移取1mL(平行3份)于透析袋内(5.0cm×2.5cm)，置于含有0.01mol/L等渗PBS 10、25、50mL的广口瓶内，于37℃、100r/min的恒温振荡仪中进行释放实验，分别于0、1、6、18、24、48、72、96、120、168h取样1mL，补加等量等渗PBS。样品用microBCA法测定，结果如图3所示。

试验结果表明艾塞那肽多囊脂质体在体外能持续释放160个小时以上，缓释效果明显。

Claims (17)

1.一种多囊脂质体，其特征在于：其含有1份脂质、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节剂、以及药物活性成分，所述的份数为重量份数；所述的多囊脂质体的药脂比为1:0.1～1:200；所述的脂质含有中性磷脂、胆固醇、三酸甘油酯和负电荷磷脂；其中，所述的中性磷脂为卵磷脂、氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；所述的三酸甘油酯为三油酸甘油酯和/或三辛酸甘油酯；所述的中性磷脂与胆固醇的质量比为10:1～1:1；所述的三酸甘油酯的含量为1%～10%，百分比为三酸甘油酯占脂质总量的摩尔数百分比；所述的辅助乳化剂为右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、精氨酸和羟甲基淀粉中的一种或多种；

其制备方法为：将药物活性成分与渗透压调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可，所述的外水相，或者外水相和内水相中还含有辅助乳化剂；其中，当多囊脂质体含有pH调节剂时，pH调节剂先溶于水中，之后用于溶解药物活性成分和渗透压调节剂制备内水相。

2.如权利要求1所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的负电荷磷脂为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸和磷脂酸中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的多囊脂质体还含有pH调节剂。

4.如权利要求1所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的药物活性成分为抗癌药、抗糖尿病药、抗高血压药、抗病毒药、抗寄生虫药、抗真菌药、抗心律失常药、抗组胺药、抗生素、激素、核酸、多肽、蛋白质、镇静药、止痛药、类固醇、疫苗和受体阻滞剂中的一种或多种。

5.如权利要求4所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的蛋白质为糖蛋白。

6.一种权利要求1～5任一项所述的多囊脂质体的制备方法，其特征在于：将药物活性成分与渗透压调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可，所述的外水相，或者外水相和内水相中还含有辅助乳化剂；其中，当多囊脂质体含有pH调节剂时，pH调节剂先溶于水中，之后用于溶解药物活性成分和渗透压调节剂制备内水相。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的中性磷脂在脂质相中的浓度为4mg/mL～40mg/mL；所述的外水相中的渗透压调节剂的含量为3.2g/100mL～6g/100mL；所述的外水相与油包水型初乳的体积比为2:1～6:1；所述的当多囊脂质体含有pH调节剂时，pH调节剂先溶于水的浓度为≤1mol/L，不包括0。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的多囊脂质体制得之后将其用等渗溶液洗涤，再分散于等渗溶液中，制得多囊脂质体成品；其中，所述的等渗溶液为生理盐水。

9.一种空白多囊脂质体，其特征在于：其配方含有1份脂质、0.01～20份辅助乳化剂、1～50份渗透压调节剂和0.1～50份离子梯度调节剂，所述的份数为重量份数；所述的脂质含有中性磷脂、胆固醇、三酸甘油酯和负电荷磷脂；其中，所述的中性磷脂为卵磷脂、氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；所述的三酸甘油酯为三油酸甘油酯和/或三辛酸甘油酯；所述的离子梯度调节剂为硫酸铵和/或二氯化锰；所述的中性磷脂与胆固醇的质量比为10:1～1:1；所述的三酸甘油酯的含量为1%～10%，百分比为三酸甘油酯占脂质总量的摩尔数百分比；其中，所述的多囊脂质体的内水相渗透压等于人体血浆的渗透压；所述的辅助乳化剂为右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉、明胶、白蛋白、精氨酸和羟甲基淀粉中的一种或多种；

其制备方法为：将离子梯度调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可。

10.如权利要求9所述的空白多囊脂质体，其特征在于：所述的负电荷磷脂为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸和磷脂酸中的一种或多种。

11.一种如权利要求9或10所述的空白多囊脂质体的制备方法，其特征在于：将离子梯度调节剂溶于水制得的内水相，加入由脂质溶于有机溶剂制得的脂质相，制得油包水型初乳，之后在油包水型初乳上层加入含有渗透压调节剂的外水相，制得水包油包水型复乳，之后除去复乳中的有机溶剂即可；所述的内水相中还含有渗透压调节剂，含量为0g/100ml～6g/100ml；所述的外水相，或者外水相和内水相中含有辅助乳化剂。

12.一种多囊脂质体，其特征在于：其包括药物活性成分和如权利要求9或10所述的空白多囊脂质体载体。

13.如权利要求12所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的多囊脂质体的药脂比为1:0.1～1:200。

14.如权利要求12所述多囊脂质体，其特征在于：所述的药物活性成分为抗癌药、抗糖尿病药、抗高血压药、抗病毒药、抗寄生虫药、抗真菌药、抗心律失常药、抗组胺药、抗生素、激素、核酸、多肽、蛋白质、镇静药、止痛药、类固醇、疫苗和受体阻滞剂中的一种或多种。

15.如权利要求14所述的多囊脂质体，其特征在于：所述的蛋白质为糖蛋白。

16.一种权利要求12～15任一项所述多囊脂质体的制备方法，其特征在于：包括将溶解有药物活性成分和渗透压调节剂的水溶液加入如权利要求9或10所述的空白多囊脂质体的成品中，混合均匀，在高于脂质的相转变温度孵育，制得含有药物活性成分的多囊脂质体混悬液初品，用等渗溶液洗涤所述含药物活性成分的多囊脂质体混悬液初品，再分散于等渗溶液中，制得含药物活性成分多囊脂质体成品。

17.如权利要求1～5、12～15任一项所述的多囊脂质体在制备药物中的应用。

Images