CN105534905B - 一种含有恩替卡韦的多囊脂质体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种恩替卡韦多囊脂质体及其制备方法。本发明恩替卡韦多囊脂质体包括下列各组分：恩替卡韦、脂质成分、酸调节剂、渗透压调节剂和辅助乳化剂，其中脂质成分包括三油酸甘油酯、中性磷脂和胆固醇，另外还可包含带电荷类脂。本发明的恩替卡韦多囊脂质体具有较高的包封率和稳定性，在体外试验中显示有良好的缓释作用。

Description

一种含有恩替卡韦的多囊脂质体及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，特别涉及一种恩替卡韦多囊脂质体及其制备方法。

背景技术

恩替卡韦(Entecavir)是一种口服抗病毒药物，最初由百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)研制开发，2006年2月恩替卡韦片剂在中国获准上市，其化学名为[1S-(1α，3α，4β)]-2-氨基-1，9-二氢-9-[4-羟基-3-(羟甲基)-2-亚甲基环戊基]-6H-嘌呤-6-酮，具有如下的结构式：

多功能病毒聚合酶是肝脏病毒复制过程中的关键酶，成为研制病毒抑制剂的首选靶标。恩替卡韦对肝脏病毒的复制从起始阶段、逆转录期和DNA依赖性DNA合成期的三个阶段起抑制作用。通过对常用的HBV感染土拨鼠动物模型的研究，口服恩替卡韦0.021-0.5mg/kg，13个月能有效抑制土拨鼠肝炎病毒(WHV)，停药后，肝脏的病毒血症会逐渐回升至治疗前水平。另外，对WHV的持续治疗作用的研究结果表明，一旦病毒复制得到有效抑制，需用低剂量进行维持治疗，从而达到阻断或者持久抑制乙肝病毒HBV在体内的复制。常用的治疗慢性乙肝的有效药物制剂有Q-干扰素注射液、口服拉米夫定、阿德福韦酯及恩替卡韦，大多数存在被吸收快，血液药物浓度峰谷现象严重，半衰期短，不能长时间维持稳定药物治疗水平。

已上市的口服抗乙肝药物恩替卡韦在人体中60％-70％经肾脏排除，长期使用造成了恩替卡韦肾毒性的药物副作用，小于1％的恩替卡韦由感染乙肝病毒的器官肝脏吸收，99％左右的恩替卡韦到不了靶器官，因此，本领域迫切需要提供一种可有效达至肝靶向部位的恩替卡韦制剂。

多囊脂质体是于1983年研制成功的一种新型脂质体，主要用于运载亲水性药物(王晓梅等，中国新药杂志，2006，15(15)，1243-1246)。水溶性低的药物在制备成多囊脂质体时存在包封率低或可能影响脂质结构而使之不稳定等缺点，例如恩替卡韦在水中微溶，溶解度仅为2.4mg/ml。本发明成功将多囊脂质体作为恩替卡韦的载体，制备成恩替卡韦多囊脂质体，其具有包封率高、低渗漏、高载药量、高稳定性等特点，且具有缓释作用，可减少给药次数及总给药量，有利于提高患者顺应性，降低毒副作用；本发明的恩替卡韦多囊脂质体可持续释放治疗剂量的恩替卡韦，使乙肝病毒复制处于持续抑制状态，减轻或者终止肝脏炎症、坏死和纤维化病变，阻止病变向肝功能失代偿、肝硬化、肝功能衰竭和肝癌发展；恩替卡韦多囊脂质体可以通过注射给药，局部、区域和系统药物传递，可以增加局部组织药物水平，而且对肝脏网状内皮系统有一定被动靶向性。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有明显缓释效果的恩替卡韦多囊脂质体及其制备方法。本发明的恩替卡韦多囊脂质体具有包封率高、低渗漏、高载药量、药效持久、血药浓度平稳、副作用少等特点。

本发明提供一种恩替卡韦多囊脂质体，其包括下列组分：恩替卡韦、脂质成分、酸调节剂、渗透压调节剂和辅助乳化剂，其中脂质成分包括三油酸甘油酯、中性磷脂和胆固醇。

作为本发明的一种实施方式，三油酸甘油酯、中性磷脂及胆固醇重量比为1：3～50：1～30，优选为1：6～35：1～22，更优选为1：8～22：4～8。

本发明所述中性磷脂是指处于其等电点时净电荷为零的磷脂，可选自卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、鞘磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或几种的混合物。优选为卵磷脂、氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱及磷脂酰乙醇胺中一种或几种的混合物；最优选为卵磷脂或二棕榈酰磷脂酰胆碱。

本发明所述的酸调节剂可选自盐酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、醋酸、葡萄糖醛酸中的一种或几种的混合物。优选为柠檬酸、盐酸或醋酸，最优选为盐酸。

作为本发明的一种实施方式，本发明所述的脂质成分中还可含有带电荷的类脂。本发明所述的带电荷的类脂可选自二棕榈酰磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇中的一种或几种的混合物；优选为二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰甘油的一种或几种的混合物，最优选为二棕榈酰磷脂酰甘油或二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸。本发明所述带电荷的类脂与中性磷脂的重量比可为1:7～11。

本发明所述渗透压调节剂可为本领域常用的调节渗透压的物质，例如葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖等碳水化合物类以及氯化钠等水溶性金属盐，优选为蔗糖和/或葡萄糖。

本发明所述辅助乳化剂可选自聚乙烯醇(PVA)、右旋糖酐、羟甲基淀粉、羟乙基淀粉、明胶、海藻酸钠和聚乙烯吡咯烷酮、赖氨酸、组氨酸、甘氨酸或精氨酸中的一种或几种混合物，优选为赖氨酸、组氨酸、甘氨酸或精氨酸中的一种或几种混合物，最优选为精氨酸。

本发明还提供一种上述恩替卡韦多囊脂质体的制备方法，可包括下列步骤：

①将脂质成分溶于有机溶剂中，以作为脂质相，其中脂质成分包括中性磷脂、胆固醇及三油酸甘油酯；

②将恩替卡韦溶于含酸调节剂和渗透压调节剂的水溶液中，作为内水相；

③将步骤②所述的内水相加入脂质相中，混合乳化制得油包水型(W/O)初乳；

④将步骤③所述的油包水型初乳加入外水相中，搅拌形成水包油包水(W/O/W)型复乳，其中外水相中含有辅助乳化剂和渗透压调节剂；

⑤除去步骤④得到的复乳中的有机溶剂，制得恩替卡韦多囊脂质体初品；

⑥用等渗溶液洗涤上述恩替卡韦多囊脂质体初品，再分散于等渗溶液中，制得恩替卡韦多囊脂质体成品。

作为本发明的一种实施方式，步骤①所述的脂质相中有机溶剂为能溶解脂质成分的任何溶剂，可选自乙醚、氯仿、二氯甲烷、异丙基乙醚、四氢呋喃、卤代醚和卤代酯中的一种或几种，本发明优选为氯仿或氯仿和乙醚的混合物，最优选为氯仿和乙醚的混合物。

作为本发明的一种实施方式，步骤②所述的内水相中的酸调节剂为盐酸、柠檬酸或醋酸，优选为盐酸，更优选为30～100mM的盐酸。

作为本发明的一种实施方式，步骤②所述的内水相中渗透压调节剂为蔗糖。

作为本发明的一种实施方式，步骤④所述的外水相的渗透压调节剂优选为葡萄糖。

作为本发明的一种实施方式，步骤③和④所述混合乳化的方法可采用如搅拌、振荡、超声处理、高速剪切等方法来完成，本发明优选为高速剪切。

作为本发明的一种实施方式，步骤⑤所述去除有机溶剂的方法可采用如气流吹干、减压蒸发等，通常选用氮气、氦气、氩气、氢气、二氧化碳等气体吹干溶剂，本发明优选氮气吹干。

作为本发明的一种实施方式，步骤⑤所得的恩替卡韦多囊脂质体混悬液可用离心、透析或膜滤的方法去除其中的游离药物，本发明选用离心，然后用生理盐水稀释悬浮，即可得恩替卡韦多囊脂质体的混悬液制剂。

本发明与现有技术相比具有如下优点和效果：①将水中微溶的恩替卡韦制成了包封率高、稳定性好、低渗漏的多囊脂质体②药物缓慢释放，延长药物作用时间和药效时间，减少用药次数，提高病人顺应性，使用方便③使血液浓度平稳，避免峰谷现象，有利于降低药物的毒副作用，达到稳定药效浓度持续抑制病毒复制④可以减少用药的总剂量，具有一定肝靶向性，提高生物利用度。

附图说明

图1是本发明恩替卡韦多囊脂质体体外释放的药时曲线。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例中由摩尔比换算得到的物料的重量投料，由于磷脂多为混合物，故在计算时取其大约分子量。涉及到的物质的分子量如下：

卵磷脂750、氢化大豆磷脂790、二油酰磷脂酰胆碱786、二棕榈酰磷脂酰胆碱734、磷脂酰乙醇胺744、胆固醇387、三油酸甘油酯885、二棕榈酰磷脂酰甘油745、二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸733、磷脂酰丝氨酸758、二硬脂酰磷脂酰甘油801。

实施例中所用主要试剂的生产厂商如下：各种磷脂，Degussa；柠檬酸，国药集团化学试剂有限公司；胆固醇，国药集团化学试剂有限公司；三酸甘油脂，广州化学试剂厂。实施例中所用的恩替卡韦样品自制。

药物包封率测定方法为：

色谱条件：色谱柱Aglient C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水(8:92)；检测器：紫外检测器；检测波长：254nm；柱温：室温；流速：1ml/min；进样量：20μl。

取500μl本发明恩替卡韦多囊脂质体混悬液，600×g离心10分钟，取上清液，高效液相色谱法测定游离药物浓度。另取500μl本发明恩替卡韦多囊脂质体混悬液，用甲醇溶液破膜溶解，依同样的方法测定混悬液中恩替卡韦的总量。用以下公式计算恩替卡韦多囊脂质体的包封率：

包封率(％)＝(1-游离恩替卡韦的量/混悬液中恩替卡韦的总量)×100％

Zeta电位测定方法为：

取恩替卡韦多囊脂质体混悬液适量，加生理盐水稀释，用PSS380型粒度测定仪测定。

实施例1

步骤1：精密称取卵磷脂100mg、胆固醇60mg，三油酸甘油酯12mg，用氯仿-乙醚(1:1；v/v)溶解定容到5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取10mg恩替卡韦和蔗糖200mg，用5ml的60mmol/L的盐酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：将上述内水相缓慢加入脂质相上层，用高速剪切匀浆机以14000rpm的速度搅拌8min，得W/O型初乳。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到25ml含有5mg/ml葡萄糖和40mmol/L赖氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的1000ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿乙醚，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：向锥形瓶内加入适量的生理盐水，然后600g离心10min分离脂质体。弃去上清液，并将沉淀物再分散于适量的生理盐水中，再离心沉淀，如此循环操作3次，富集沉淀，沉淀用适量生理盐水稀释。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为87.4％；zeta电位为负48.6mV。

实施例2

步骤1：精密称取卵磷脂80mg、胆固醇35mg，三油酸甘油酯8mg，用氯仿-乙醚(1:1；v/v)溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取5mg恩替卡韦和蔗糖50mg，用5ml的70mmol/L的柠檬酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到25ml含有4mg/ml葡萄糖和20mmol/L赖氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的1000ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去二氯甲烷，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为80.3％；zeta电位为负46.3mV。

实施例3

步骤1：精密称取卵磷脂200mg、胆固醇100mg，三油酸甘油酯17mg，二棕榈酰磷脂酰甘油18mg，用氯仿-乙醚(1:1；v/v)溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取12mg恩替卡韦和蔗糖120mg，用5ml的100mmol/L的盐酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到25ml含有5mg/ml葡萄糖和80mmol/L精氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿乙醚，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为92.7％；zeta电位为负45.9mV。

实施例4

步骤1：精密称取氢化大豆磷脂170mg、胆固醇110mg，三油酸甘油酯5mg，二棕榈酰磷脂酰甘油50mg，用氯仿-乙醚(1:1；v/v)溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取10mg恩替卡韦和蔗糖50mg，用5ml的50mmol/L的盐酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到25ml含有5mg/ml葡萄糖和40mmol/L组氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以10000rpm的速度混合10s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿乙醚，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为70.9％；zeta电位为负43.5mV。

实施例5

步骤1：精密称取二油酰磷脂酰胆碱50mg、胆固醇17mg，三油酸甘油酯2.3mg，二棕榈酰磷脂酰甘油14mg，用氯仿溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取3mg恩替卡韦和蔗糖50mg，用5ml的30mmol/L的盐酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到25ml含有5mg/ml葡萄糖和50mmol/L组氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以10000rpm的速度混合10s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为79.5％；zeta电位为负42.9mV。

实施例6

步骤1：精密称取二棕榈酰磷脂酰胆碱70mg、胆固醇28mg，三油酸甘油酯3.9mg，二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸10mg，用氯仿溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取7.5mg恩替卡韦和蔗糖150mg，用2.5ml的50mmol/L的盐酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到15ml含有4mg/ml葡萄糖和50mmol/L精氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去乙酸乙酯，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为94.1％；zeta电位为负54.2mV。

实施例7

步骤1：精密称取二油酰磷脂酰胆碱15mg、胆固醇2mg，三油酸甘油酯0.6mg，磷脂酰丝氨酸4.5mg，用氯仿溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取1mg恩替卡韦和蔗糖12mg，用1ml的30mmol/L的柠檬酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到5ml含有4mg/ml葡萄糖和30mmol/L甘氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为42.5％；zeta电位为负36.1mV。

实施例8

步骤1：精密称取磷脂酰乙醇胺60mg、胆固醇12mg，三油酸甘油酯9mg，二硬脂酰磷脂酰甘油22mg，用氯仿-乙醚(1:1；v/v)溶解定容至5ml，作为脂质相。

步骤2：精密称取4mg恩替卡韦和蔗糖60mg，用2ml的30mmol/L的醋酸溶液超声溶解，作为内水相。

步骤3：同实施例1，制得油包水型乳液。

步骤4：将步骤3所制得的初乳加入到20ml含有5mg/ml葡萄糖和50mmol/L精氨酸的外水相中，用高速剪切匀浆机以6000rpm的速度混合40s，形成W/O/W复乳。

步骤5：将复乳转移至盛有25ml含有外水相的250ml锥形瓶中，通以氮气(8L/min)，37℃恒温水浴，20min除去氯仿乙醚，得多囊脂质体混悬液。

步骤6：同实施例1。

测得恩替卡韦多囊脂质体粒径为5～50μm；药物包封率为59.3％；zeta电位为负42.3mV。

实施例9

恩替卡韦多囊脂质体的体外释放测定

以生理盐水为释放介质进行恩替卡韦多囊脂质体的体外释放实验。精密量取3批依据实施例6制备的恩替卡韦多囊脂质体混悬液5ml，用20ml生理盐水稀释，将所得混悬液置于37℃恒温摇床(转速为15rpm)中，在预定的时间点取出等量的样品。以600×g离心10分钟，分离上清液和沉淀，依法测定上清液中恩替卡韦的量。每个时间点的药物释放百分比用以下公式计算：

药物释放百分比(％)＝上清液中的游离恩替卡韦的量/多囊脂质体中包封的恩替卡韦的原始量×100％

结果表明在第4天时，药物释放才达到了90％以上，包封的恩替卡韦基本释放完全(如图1所示)。说明本发明恩替卡韦多囊脂质体具有明显的体外缓释效果。

Claims (20)

1.一种恩替卡韦多囊脂质体，其特征是包括下列组分：恩替卡韦、脂质成分、酸调节剂、渗透压调节剂和辅助乳化剂，其中脂质成分包括三油酸甘油酯、中性磷脂和胆固醇，三油酸甘油酯、中性磷脂及胆固醇重量比为1：8～22：4～8，所述酸调节剂为盐酸。

2.权利要求1所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述中性磷脂选自卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、鞘磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或几种的混合物。

3.权利要求2所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述中性磷脂选自卵磷脂、氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱及磷脂酰乙醇胺中一种或几种的混合物。

4.权利要求3所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述中性磷脂选自卵磷脂或二棕榈酰磷脂酰胆碱。

5.权利要求1所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述渗透压调节剂选自葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖、氯化钠。

6.权利要求5所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述渗透压调节剂为蔗糖和/或葡萄糖。

7.权利要求1所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述辅助乳化剂选自聚乙烯醇(PVA)、右旋糖酐、羟甲基淀粉、羟乙基淀粉、明胶、海藻酸钠和聚乙烯吡咯烷酮、赖氨酸、组氨酸、甘氨酸或精氨酸中的一种或几种混合物。

8.权利要求7所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述辅助乳化剂选自赖氨酸、组氨酸、甘氨酸或精氨酸中的一种或几种混合物。

9.权利要求8所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述辅助乳化剂为精氨酸。

10.权利要求1所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述脂质成分还包括带电荷的类脂，所述带电荷类脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇中的一种或几种的混合物。

11.权利要求10所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述带电荷类脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰甘油的一种或几种的混合物。

12.权利要求11所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述带电荷类脂选自二棕榈酰磷脂酰甘油或二棕榈酸酰磷脂酰丝氨酸。

13.权利要求10-12任一项所述的恩替卡韦多囊脂质体，其特征是所述带电荷类脂与中性磷脂的重量比可为1:7～11。

14.一种权利要求1～13任一项所述的恩替卡韦多囊脂质体的制备方法，包括如下步骤：

①将脂质成分溶于有机溶剂中，以作为脂质相，其中脂质成分包括中性磷脂、胆固醇及三油酸甘油酯；

②将恩替卡韦溶于含酸调节剂和渗透压调节剂的水溶液中，作为内水相；

③将步骤②所述的内水相加入脂质相中，混合乳化制得油包水型(W/O)初乳；

④将步骤③所述的油包水型初乳加入外水相中，搅拌形成水包油包水(W/O/W)型复乳，其中外水相中含有辅助乳化剂和渗透压调节剂；

⑤除去步骤④得到的复乳中的有机溶剂，制得恩替卡韦多囊脂质体初品；

⑥用等渗溶液洗涤上述恩替卡韦多囊脂质体初品，再分散于等渗溶液中，制得恩替卡韦多囊脂质体成品。

15.权利要求14所述的制备方法，其特征是步骤①所述有机溶剂选自乙醚、氯仿、二氯甲烷、异丙基乙醚、四氢呋喃、卤代醚和卤代酯中的一种或几种。

16.权利要求15所述的制备方法，其特征是步骤①所述有机溶剂选自氯仿或氯仿和乙醚的混合物。

17.权利要求16所述的制备方法，其特征是步骤①所述有机溶剂选自氯仿和乙醚的混合物。

18.权利要求14所述的制备方法，其特征是步骤②所述的内水相中的酸调节剂为30～100mM的盐酸。

19.权利要求14所述的制备方法，其特征是步骤②所述的内水相中的渗透压调节剂为蔗糖。

20.权利要求14所述的制备方法，其特征是步骤④所述的外水相中的渗透压调节剂为葡萄糖。