CN107427482A

CN107427482A - 凝血酸的多囊脂质体制剂

Info

Publication number: CN107427482A
Application number: CN201680012499.5A
Authority: CN
Inventors: 凯瑟琳·邓恩·奥尔布莱特·洛斯; 路易·丹尼尔·加西亚; 斯蒂芬妮·库尔兹; 弗拉迪米尔·哈利托诺夫
Original assignee: Pacira Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Pacira Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2015-01-21
Filing date: 2016-01-20
Publication date: 2017-12-01
Also published as: GB201621448D0; IL253465A0; EP3142656B1; ES2704299T3; US20160206580A1; EP3142656A4; WO2016118652A1; GB2541835B; JP2018502870A; EP3142656A1; GB2541835A

Abstract

本申请的一些实施方案涉及包含凝血酸(TXA)的多囊脂质体制剂，目的是使未封装的凝血酸的副作用最小化，同时维持或改善功效并延长作用的持续时间。还提供制备和施用封装凝血酸的多囊脂质体制剂的方法及其作为药物的用途。

Description

凝血酸的多囊脂质体制剂

背景

领域

本申请涉及凝血酸(TXA)的多囊脂质体(MVL)制剂，其使TXA的副作用最小化，同时维持或改善功效并延长TXA的治疗效果。具体地，本申请的实施方案涉及包含封装TXA的多囊脂质体的组合物，制备它们的方法和施用它们的方法。还提供制备含有TXA的多囊脂质体的方法及其作为药物的用途。

凝血酸(TXA)为氨基酸赖氨酸的合成类似物，其用于治疗或预防创伤后、手术期间或月经期间的过度失血。TXA为这样的抗纤维蛋白溶解剂，其通过可逆阻断纤溶酶原分子上的赖氨酸结合位点发挥其凝血作用。相对于安慰剂，静脉内施用的凝血酸在使用心肺转流术进行心脏手术的患者中引起手术后失血29-54％的降低，其中在一些研究中，输血需求在统计学上显著降低。60个试验的元分析(meta-analysis)显示，与ε-氨基己酸和去氨加压素不同，TXA和抑肽酶显著降低使用CPB进行心脏手术之后需要同种异体输血的患者数目。TXA还显著降低患有血友病的患者中进行口腔外科手术之后的平均失血量。在经受原位肝移植或经尿道前列腺手术的患者中使用该药物也获得失血量的减少。也已经报道了在患有遗传性血管神经性水肿的患者中使用TXA的临床益处。参见，例如Dunn和Goa,Drugs,第57卷,第6期，第1005-32页(1999)。

然而，TXA的口服施用通常导致胃肠不适，并且静脉内施用可引起头晕和低血压。这些副作用主要是由于当以足以提供必需的凝血作用的弹丸施用剂量(bolus dose)施用时，TXA血浆水平的迅速增加。然而，持续的静脉内施用并不总是可行的，特别是对于创伤患者而言。此外，TXA血浆水平的迅速增加之后，由于分泌和代谢，TXA浓度迅速降低。这种迅速降低很快达到TXA以亚治疗量存在的水平。因此，需要稳定的持续释放的TXA制剂，其用于局部和皮下应用。此外，需要包含持续释放和即时释放的TXA的稳定制剂，其用于局部和多种肠胃外应用，如皮下注射、伤口浸润或伤口滴注。

附图简述

图1A示出了如实施例1的动物研究中所述，历经96小时，含TXA的盐溶液、TXA-MVL和Depo-TXA中游离TXA的血浆水平的降低。

图1B示出了如实施例1的动物研究中所述，施用后长至96小时，含TXA的盐溶液、TXA-MVL和Depo-TXA的游离TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。

图2-4、5A-5B、6A-6B、7A-7B和8A-8B指如实施例3中所述获自动物研究的药代动力学数据。

图2示出了在治疗第1天，注射后历经72小时，TXA的平均血浆浓度。向组2施用120mg/kg TXA，向组3施用40mg/kg Depo-TXA，以及向组4施用120mg/kg Depo-TXA。

图3示出了在治疗第10天，施用之后历经72小时，TXA的平均血浆浓度。向组2施用120mg/kg TXA，向组3施用40mg/kg Depo-TXA，以及向组4施用120mg/kg Depo-TXA。

图4示出了组2、3和4在治疗第1天，施用之后历经12小时，血浆中TXA的浓度。

图5A示出了组2、3和4在治疗第1天，施用之后直至72小时，TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。

图5B示出了组2、3和4在治疗第10天，施用之后直至72小时，TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。

图6A示出了组2、3和4在治疗第1天，施用之后历经72小时递送的TXA的总量。

图6B示出了组2、3和4在治疗第10天，施用之后历经72小时递送的TXA的总量。

图7A示出了组2、3和4在第1天，施用之后历经72小时，TXA血浆水平的降低。

图7B示出了组2、3和4在第10天，施用之后历经72小时，TXA血浆水平的降低。

图8A示出了组2和4在施用之后历经72小时，血浆中总TXA剂量的百分数。

图8B示出了组2、3和4在施用之后历经72小时，血浆中TXA剂量的百分数。

概述

本申请的一些实施方案涉及药物组合物，其包含：封装凝血酸的多囊脂质体和未封装的凝血酸，所述多囊脂质体包含凝血酸、含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分以及一种或多种pH调节剂。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约80mg/mL，且未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约1％至约80％。

本申请的一些实施方案涉及治疗、改善或预防失血的方法，其包括施用这样的药物组合物，所述药物组合物包含封装凝血酸的多囊脂质体和未封装的凝血酸，所述多囊脂质体包含凝血酸、含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分以及一种或多种pH调节剂。

本申请的一些其它实施方案涉及制备包含凝血酸的多囊脂质体的方法，所述方法包括：制备包含凝血酸和至少一种pH调节剂的第一水性组分；制备包含至少一种有机溶剂、至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分；将所述第一水性组分与所述脂质组分混合以形成油包水乳状液，其中至少一种组分包含凝血酸；使所述油包水乳状液与第二水性组分接触以形成含有溶剂的球体；以及从所述含有溶剂的球体中去除有机溶剂以形成多囊脂质体。在一些实施方案中，所述方法还包括下述额外步骤：使多囊脂质体悬浮在包含游离凝血酸的溶液中，以形成包含封装和未封装的凝血酸两者的药物组合物。

本申请的一些其它实施方案涉及包含通过本文所述的方法制备的含有凝血酸的多囊脂质体的药物组合物。

一些实施方案提供包含封装凝血酸的多囊脂质体和未封装的凝血酸的药物组合物，所述多囊脂质体包含：凝血酸，含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分，以及一种或多种pH调节剂。一些实施方案提供包含封装凝血酸的多囊脂质体的药物组合物，所述多囊脂质体包含：凝血酸，含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分，以及一种或多种pH调节剂。

在一些实施方案中，多囊脂质体还包含一种或多种渗透剂和/或密度调节剂。在一些实施方案中，多囊脂质体还包含胆固醇和/或植物甾醇。在一些实施方案中，两亲性脂质包括磷脂酰胆碱、或者磷脂酰甘油或其盐、或者它们的组合。在一些实施方案中，磷脂酰甘油为DPPG。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC或者它们的组合。

在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯或角鲨烯、或者它们的组合。在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯。在一些实施方案中，甘油三酯选自三油精或三辛精、或者它们的组合。

在一些实施方案中，所述pH调节剂选自有机酸、有机碱、无机酸或无机碱、或者它们的组合。在一些实施方案中，所述pH调节剂选自无机酸或有机碱、或者它们的组合。在一些实施方案中，所述pH调节剂选自有机酸或有机碱、或者它们的组合。在一些实施方案中，无机酸选自盐酸或磷酸。在一些实施方案中，有机酸选自酒石酸或谷氨酸、或者它们的组合。在一些实施方案中，有机碱选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸或氨丁三醇、或者它们的组合。

在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约80mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约2.5mg/mL至约40mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约5mg/mL至约25mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。

在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约1％至约80％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约20％至约70％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约30％至约60％。

在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约50％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸少于药物组合物中总凝血酸的约10％。

在一些实施方案中，所述多囊脂质体具有约4.0至约9.0的外部pH范围。在一些实施方案中，所述外部pH范围为约4.5至约8.5。在一些实施方案中，所述多囊脂质体具有约3.0至约9.0的内部pH范围。在一些实施方案中，所述内部pH范围为约3.5至约5.5。

在一些实施方案中，封装凝血酸的多囊脂质体在37℃稳定至少2天。

一些实施方案提供治疗、改善或预防失血的方法，其包括将本文所述的药物组合物施用于有需要的对象。

在一些实施方案中，施用是肠胃外施用。在一些实施方案中，肠胃外施用选自皮下注射、组织注射、伤口浸润或伤口滴注。在一些实施方案中，肠胃外施用为皮下注射。在一些实施方案中，肠胃外施用为组织注射。在一些实施方案中，肠胃外施用为伤口浸润。在一些实施方案中，肠胃外施用为伤口滴注。

在一些实施方案中，施用是局部的。在一些实施方案中，施用是局部和肠胃外施用。在一些实施方案中，局部施用包括使所述药物组合物与需要治疗的对象身体的腔室或表面直接接触。

一些实施方案提供制备包含凝血酸的多囊脂质体的方法，其包括制备包含凝血酸和至少一种pH调节剂的第一水性组分；制备包含至少一种有机溶剂、至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分；将所述第一水性组分与所述脂质组分混合以形成油包水乳状液，其中至少一种组分包含凝血酸；使所述油包水乳状液与第二水性组分接触以形成含有溶剂的球体；以及从所述含有溶剂的球体中去除有机溶剂以形成多囊脂质体。一些实施方案还包括使多囊脂质体悬浮在包含盐水的溶液中以形成包含封装的凝血酸的药物组合物。

一些实施方案还包括使多囊脂质体悬浮在包含凝血酸的溶液中以形成包含封装和未封装的凝血酸两者的药物组合物。

在一些实施方案中，脂质组分还包含胆固醇和/或植物甾醇。在一些实施方案中，两亲性脂质包括磷脂酰胆碱、或者磷脂酰甘油或其盐、或者它们的组合。在一些实施方案中，磷脂酰甘油为DPPG。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC、或者它们的组合。在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯或角鲨烯、或者它们的组合。在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯。在一些实施方案中，甘油三酯选自三油精或三辛精、或者它们的组合。

在一些实施方案中，第一水性组分还包含至少一种渗透剂和/或密度调节剂。在一些实施方案中，第一水性组分的pH调节剂选自无机酸、有机酸、无机碱或有机碱、或者它们的组合。

在一些实施方案中，所述pH调节剂选自盐酸、磷酸或酒石酸、或者它们的组合。在一些实施方案中，所述pH调节剂选自组氨酸、精氨酸、氨丁三醇或者它们的组合。

在一些实施方案中，第一水性组分的pH范围为约2.0至约9.0。在一些实施方案中，第一水性组分的pH范围为约3.5至约5.5。在一些实施方案中，第一水性组分的pH范围为约4.3至约5.5。在一些实施方案中，第一水性组分的pH范围为约7.5至约9.0。在一些实施方案中，第一水性组分的pH为约7.7。

在一些实施方案中，所述第二水性组分包含至少一种渗透剂和至少一种pH调节剂。

在一些实施方案中，第二水性组分的pH范围为约3.5至约10.5。在一些实施方案中，第二水性组分的pH范围为约7.5至约10.5。

在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约1％至约80％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约20％至约70％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约30％至约60％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约50％。在一些实施方案中，未封装的凝血酸少于药物组合物中总凝血酸的约10％。

在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:10至10:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:10。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:9。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:8。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:7。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:6。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:5。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:4。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:3。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:2。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为1:1。

在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为2:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为3:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为4:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为5:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为6:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为7:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为8:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为9:1。在一些实施方案中，未封装的(游离的)凝血酸与封装的凝血酸的比率为10:1。

一些实施方案提供包含通过本文所述的方法制备的含有凝血酸的多囊脂质体的药物组合物。

实施方案的任何特征均适用于本文鉴定的所有实施方案。此外，实施方案的任何特征可以以任何方式与本文所述的其它实施方案部分或全部独立地组合，例如，一个、两个或者三个或者更多个实施方案可以全部或部分组合。此外，实施方案的任何特征对于其它实施方案可以是可选的。方法的任何实施方案可以包含化合物的另一实施方案，并且可以配置化合物的任何实施方案，以实施另一实施方案的方法。实施方案详述

本申请的实施方案提供这样的药物制剂，所述药物制剂包含含有凝血酸(TXA)的多囊脂质体(MVL)，其使TXA的副作用最小化，同时维持或改善功效并延长作用的持续时间。本申请的实施方案还提供包含封装在MVL中的TXA和未封装的TXA的药物制剂。本文使用的术语“未封装的”意为生物活性成分(例如，凝血酸)在MVL颗粒之外，例如，在悬液中。未封装的TXA提供TXA的即时功效，而在本申请的实施方案中使用封装TXA的MVL制剂导致TXA的释放持续延长的时间。同此还公开了制备DEPO-TXA的方法和使用DEPO-TXA制剂治疗、改善或预防失血的方法。

如本文所用，术语“DEPO-TXA”指封装凝血酸的多囊脂质体制剂。DEPO-TXA还包含在MVL的水性悬液中的游离凝血酸。优选地，DEPO-TXA水性悬液中的游离TXA的浓度大约等于多囊脂质体中封装的TXA的浓度。

如本文所用，术语“游离TXA”指包含未封装的凝血酸的药物制剂，例如，含有TXA的盐溶液或水性TXA。

如本文所用，“TXA-MVL”指这样的药物制剂，其包含封装凝血酸的多囊脂质体制剂以及少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％或任何两个前述值所限定的范围的游离TXA。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。除非另有说明，否则将本文引用的所有专利、申请、公开的申请和其它出版物通过引用整体并入。如果本文中的术语存在多个定义，除非另有说明，否则以此部分的定义为准。除非上下文另有明确指示，否则如说明书和所附的权利要求中所用，单数形式“一种/个(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物。除非另有指示，否则采用质谱法、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。除非另有说明，否则“或”或者“和”的使用意为“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其它形式(如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”)的使用不是限制性的。如在本说明书中所用，无论是在过渡的短语中还是在权利要求的主体中，术语“包含(comprise)”和“包含(comprising)”应被理解为具有开放式含义。即，该术语应被理解为与短语“具有至少”或“包括至少”同义。当在方法的背景下使用时，术语“包括”意为所述方法至少包括所列的步骤，并且可以包括另外的步骤。当在化合物、组合物或装置的背景下使用时，术语“包含”意为化合物、组合物或装置至少包含所列的特征或组分，并且还可以包含另外的特征或组分。

本文所用的章节标题仅出于组织的目的，并且不应被解释为对所述主题进行限制。

多囊脂质体制剂

本申请的实施方案涉及含有TXA的MVL。在Kim等人(Biochim.Biophys.Acta,728:339-348,1983)中报道的MVL为一组独特形式的合成膜囊泡，其不同于其它基于脂质的递送系统，如单层脂质体(Huang,Biochemistry,8:334-352,1969；Kim等人,Biochim.Biophys.Acta,646:1-10,1981)和多层脂质体(Bangham等人,J Mol.Bio.,13:238-252,1965)。多囊脂质体与单层脂质体(也被称为单层囊泡)之间的主要结构差异为多囊脂质体的每个颗粒含有多个水性室。多囊脂质体与多层脂质体(也被称为多层囊泡)之间的主要结构差异为在多囊脂质体中，多个水性室是非同心的。多囊脂质体的每个颗粒通常具有100至1百万个室，并且所有内部室均通过使室隔开的共有脂质双层壁互相连接。单层、多层和多囊脂质体之间的结构差异在Sankaram等人，美国专利第5,766,627号和第6,132,766号中阐明。

多囊脂质体的结构和功能特征不能从单层囊泡和多层囊泡的现有知识中直接预测。多囊脂质体具有非常独特的内部形态，其可由于制备中使用的特定方法而产生。在拓扑学上，多囊脂质体被定义为在每个颗粒内具有多个非同心室，类似“泡沫样”或“蜂窝样”基质；而多层囊泡在每个脂质体颗粒中含有多个同心室，类似“洋葱层”。

遍及多囊脂质体的如网络般分布的内膜的存在可以用来赋予囊泡增加的机械强度。颗粒本身可以占据制剂总体积的非常大的比例。MVL的填充颗粒体积(PPV)(其以类似于血细胞比容的方式测量)代表颗粒所构成的制剂的体积，并且可以接近高达80％。通常，PPV为约50％。在50％的PPV，多囊脂质体制剂通常由少于5％w/w的脂质组成。因此，封装的体积为大约50％，同时具有相对低的脂质浓度。多囊脂质体的多囊性质也表明，与单层囊泡不同，多囊囊泡外膜中的单个破裂不会导致内部水性内容物的完全释放。

因此，多囊脂质体制剂由微观的球形颗粒构成，所述颗粒由封装待递送的TXA的许多非同心水性室组成。各个室被由天然存在的脂质的合成形式组成的脂质双层膜隔开，导致生物相容的和生物可降解的递送媒介物。本申请的DEPO-TXA制剂提供局部位置或全身的持续递送，并且可以通过许多途径施用，所述途径包括局部和多种肠胃外应用，如皮下注射、肌肉注射、伤口浸润或伤口滴注。

本申请的一些实施方案涉及包含封装凝血酸的多囊脂质体(“MVL”)的药物组合物，所述多囊脂质体包含凝血酸(“TXA”)、含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分以及一种或多种pH调节剂。在一些实施方案中，MVL可以任选地包含第二治疗剂。在一些其它实施方案中，TXA是MVL中唯一的治疗剂。

本申请的一些实施方案涉及药物组合物，所述药物组合物包含：封装凝血酸的多囊脂质体和未封装的凝血酸，所述多囊脂质体包含凝血酸、含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分以及一种或多种pH调节剂。

在一些实施方案中，MVL还包含胆固醇和/或植物甾醇。

在一些实施方案中，两亲性脂质包括磷脂酰胆碱、或者磷脂酰甘油或其盐、或者它们的组合。在一些这样的实施方案中，磷脂酰甘油为DPPG。在一些这样的实施方案中，磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC或者它们的组合。在一些其它实施方案中，MVL不含DEPC。在一些其它实施方案中，MVL基本上不含磷脂酰胆碱。

在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯或角鲨烯或者它们的组合。在一些实施方案中，中性脂质包括甘油三酯。在一些这样的实施方案中，甘油三酯选自三油精或三辛精或者它们的组合。

pH调节剂

在一些实施方案中，pH调节剂选自一种或多种有机酸、有机碱、无机酸或无机碱或者它们的组合。可以用于本申请的合适的无机酸(也被称为矿物酸)包括但不限于盐酸(HCl)、硫酸(H₂SO₄)、磷酸(H₃PO₄)、硝酸(HNO₃)等。可以用于本申请的合适的有机酸包括但不限于乙酸、天冬氨酸、柠檬酸、甲酸、谷氨酸、葡萄糖醛酸、乳酸、苹果酸、酒石酸等。可以用于本申请的合适的有机碱包括但不限于组氨酸、精氨酸、赖氨酸、氨丁三醇(Tris)等。可以用于本申请的合适的无机碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钾等。在一些实施方案中，pH调节剂选自无机酸或有机碱或者它们的组合。在一些其它实施方案中，pH调节剂选自有机酸或有机碱或者它们的组合。在一些这样的实施方案中，无机酸选自盐酸或磷酸。在一些这样的实施方案中，有机酸选自酒石酸或谷氨酸或者它们的组合。在一些实施方案中，有机碱选自组氨酸、精氨酸、氨丁三醇或赖氨酸或者它们的组合。在一个实施方案中，MVL的pH调节剂为盐酸和赖氨酸。在另一实施方案中，MVL的pH调节剂为磷酸和赖氨酸。在另一实施方案中，MVL的pH调节剂为酒石酸和赖氨酸。在另一实施方案中，MVL的pH调节剂为组氨酸和赖氨酸。在另一实施方案中，MVL的pH调节剂为氨丁三醇和赖氨酸。

在一些实施方案中，MVL具有约4.0至约9.0的外部pH范围。在一些这样的实施方案中，外部pH范围为约4.5至约8.5。在一些实施方案中，MVL具有约3.0至约9.0的内部pH范围。在一些这样的实施方案中，内部pH范围为约3.5至约5.5。在一些其它实施方案中，内部pH为约5.5。

渗透剂和密度调节剂

在一些实施方案中，MVL还包含一种或多种pH调节剂和/或密度调节剂。本申请中使用的渗透剂在MVL的第一水性组分和第二水性组分的制备中提供期望的渗透度。适合于本申请的MVL制剂的非限制示例性渗透剂包括单糖(例如，葡萄糖等)、二糖(例如，蔗糖等)和多糖或多元醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、葡聚糖等)。在一些其它实施方案中，渗透剂选自葡聚糖40、蔗糖、山梨糖醇或者它们的组合。

在一些实施方案中，渗透剂也可以充当密度调节剂。例如，葡聚糖40可以充当密度调节剂以使MVL的密度最大化，同时最低程度地改变渗透度。适合于本申请的密度调节剂的其它非限制性实例包括多糖、泊洛沙姆、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)等。

在一些实施方案中，pH调节剂也可以充当渗透剂。在一个具体实施方案中，TXA也被用作渗透剂。

在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约100mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约80mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约2.5mg/mL至约40mg/mL。在一些实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约5mg/mL至约25mg/mL。在一些其它实施方案中，药物组合物中总凝血酸的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。在一些实施方案，药物组合物中总凝血酸的浓度为约15mg/mL至约20mg/mL。

在一些实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约10％至约80％。在一些这样的实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约20％至约70％。在一些这样的实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约30％至约60％。在一些其它实施方案中，未封装的凝血酸为药物组合物中凝血酸总量的约50％。在一些其它实施方案中，未封装的凝血酸少于药物组合物中总凝血酸的约10％。

在一些实施方案中，每天施用DEPO-TXA制剂一次、两次、三次、四次或更多次。也可以以每天少于一次，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天一次，或者每1周或2周一次，或者前述值中的任何两个所限定的范围来施用DEPO-TXA制剂。在一些实施方案中，每天的施用次数是恒定的(例如，每天一次)。在其它实施方案中，施用次数是可变的。施用次数可以根据剂量的有效性、观察到的副作用、滴定直至期望剂量的期望、外部因素(例如，另一药物的变化)或者已施用剂型的时间长度而改变。

在一些实施方案中，以范围为约10mg/kg至约500mg/kg的剂量施用DEPO-TXA制剂。在一些其它实施方案中，以范围为约20mg/kg至约250mg/kg的剂量施用制剂。在一些其它实施方案中，以范围为约40mg/kg至约125mg/kg的剂量施用制剂。在一个实施方案中，以约40mg/kg的剂量施用DEPO-TXA制剂。在另一实施方案中，以约120mg/kg的剂量施用制剂。

在一些实施方案中，本文所述的DEPO-TXA制剂中TXA的Cmax为约10mg/L至约200mg/L、约20mg/L至约150mg/L、约40mg/L至约100mg/L。在一些其它实施方案中，DEPO-TXA制剂中TXA的Cmax为约45mg/L至约140mg/L。

环糊精

在某些实施方案中，也可以将环糊精用于DEPO-TXA中。在一些其它实施方案中，本申请的药物组合物不含环糊精。

环糊精为通过环糊精转糖基酶对淀粉的作用而形成的手性环形分子。这些环状低聚物含有通过α-(1,4)-连接键合的6至12个葡萄糖单元。三种最小的同系物α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精可商购获得；较大的同系物必须单独制备和分离。2-和3-仲羟基构成(line)环糊精空腔的开口并具有交错取向。6-伯羟基在分子的相对端。环糊精空腔的内部是相对疏水的，因为所有羟基均指向分子的外部。

许多不同类型的环糊精可以用于本申请实施方案的组合物和方法中。这样的环糊精包括但不限于：(2,6-二-O-)乙基-β-环糊精、(2-羧乙基)-β-环糊精钠盐、(2-羟乙基)-β-环糊精、(2-羟丙基)-α-环糊精、磺基丁醚-β-环糊精、(2-羟丙基)-β-环糊精、6-单脱氧-6-单氨基-β-环糊精、6-O-α-麦芽糖基-β-环糊精、丁基-β-环糊精、丁基-γ-环糊精、羧甲基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、琥珀酰基-α-环糊精、琥珀酰基-β-环糊精、三乙酰基-β-环糊精、α-环糊精、β-环糊精以及γ-环糊精。

在一些实施方案中，本申请的MVL制剂任选地包含药学可接受的载体。

本申请的DEPO-TXA制剂在4℃稳定至少1周、2周或4个月。本申请的DEPO-TXA制剂也在37℃稳定至少2天。本文所用的术语“稳定的”指在某些环境条件下封装的TXA在MVL内保持一段时间而无游离形式的TXA从MVL中过度渗出。在一些实施方案中，本申请的DEPO-TXA制剂在4℃稳定4个月，其中少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的TXA呈游离形式。在一些实施方案中，本申请的DEPO-TXA制剂在37℃稳定2天，其中少于50％、少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、更优选少于10％、少于5％的TXA呈游离形式。

制备方法

本申请的一些其它实施方案涉及制备包含凝血酸的多囊脂质体的方法，所述方法包括：制备包含凝血酸和至少一种pH调节剂的第一水性组分；制备包含至少一种有机溶剂、至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分；将所述第一水性组分与所述脂质组分混合以形成油包水乳状液，其中至少一种组分包含凝血酸；使所述油包水乳状液与第二水性组分接触以形成含有溶剂的球体；以及从含有溶剂的球体中去除有机溶剂以形成多囊脂质体。在一些实施方案中，所述方法还包括下述额外步骤：使多囊脂质体悬浮在可包含游离凝血酸的溶液中，以形成包含封装和未封装的凝血酸两者的药物组合物。

任选地，其它组分也包含在脂质相中。其中有抗氧化剂、抗微生物防腐剂和胆固醇或植物甾醇。在一些实施方案中，脂质组分还包含胆固醇和/或植物甾醇。

“油包水”型乳状液由两个不可混溶的相，即脂质相和第一水相形成。脂质相由在挥发性有机溶剂中的至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质，以及任选地胆固醇和/或胆固醇衍生物组成。术语“两亲性脂质”是指这样的分子，其具有亲水性“头部”基团和疏水性“尾部”基团，并且可以具有成膜能力。如本文所用，两亲性脂质包括具有净负电荷、净正电荷的脂质以及两性离子脂质(在其等电点没有净电荷)。术语“中性脂质”是指这样的油或脂肪，其自身没有囊泡形成能力，并且缺乏带电的或亲水性“头部”基团。中性脂质的实例包括但不限于缺乏带电的或亲水性“头部”基团的甘油酯、乙二醇酯、生育酚酯、甾醇酯，以及烷烃和角鲨烯。

两亲性脂质选自在同一分子中具有疏水性区域和亲水性区域的宽范围的脂质。合适的两亲性脂质包括但不限于：两性离子型磷脂，其包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺；阴离子两亲性磷脂，如磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸和心磷脂；阳离子两亲性脂质，如酰基三甲胺丙烷、二酰基二甲胺丙烷、硬脂胺等。优选的两亲性脂质包括二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二芥酰基(dierucoyl)磷脂酰胆碱或1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(DEPC)、以及二棕榈酰基磷脂酰甘油或1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油)(DPPG)。在某些实施方案中，DEPO-TXA制剂中使用的两亲性脂质包括与DPPG缀合的DOPC和/或DEPC。

合适的中性脂质包括但不限于甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯和角鲨烯。可用于本申请的制剂和方法中的非限制示例性甘油三酯为三油精(TO)、三棕榈油精、三肉豆蔻酰油精(trimyristolein)、三亚油精(trilinolein)、三丁精、三己精、三辛精和三癸精。可用于本申请的甘油三酯中的脂肪链可以全部相同或者不全相同(混合链的甘油三酯)或者全部不同。丙二醇酯可以是辛酸和癸酸的混合二酯。

在一些实施方案中，两亲性脂质包括磷脂酰胆碱或磷脂酰甘油或其盐或者它们的组合。在一些这样的实施方案中，磷脂酰甘油为DPPG。在一些这样的实施方案中，磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC或者它们的组合。

在用于制备MVL的与水不混溶的溶剂中存在的两亲性脂质、中性脂质和胆固醇的浓度的范围通常分别为1-40mM、2-40mM和0-60mM。在一些实施方案中，两亲性脂质、中性脂质和胆固醇的浓度范围可以分别为约20mM至约40mM、约5mM至约40mM和约25至约40mM。如果包含带电荷的两亲性脂质，则其通常以低于两性离子型脂质的浓度存在(当存在两性离子型脂质时)。

许多类型的挥发性有机溶剂可以用于本申请中，包括醚、酯、卤代醚、烃类、卤代烃或氟利昂。例如，二乙醚、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯和它们的任何组合适用于制备制剂。在一些实施方案中，使用二氯甲烷。在一些其它实施方案中，使用氯仿。

在某些实施方案中，第一水性组分包含TXA和至少一种pH调节剂，任选地包含本文所述的一种或多种渗透剂或环糊精。在一些实施方案中，第一水性组分的pH调节剂选自无机酸、有机酸、无机碱或有机碱、或者它们的组合。在一些这样的实施方案中，pH调节剂选自盐酸、磷酸或酒石酸。在一些其它实施方案中，pH调节剂选自组氨酸、精氨酸或氨丁三醇。在一些实施方案中，渗透剂选自糖类，如蔗糖。在一些实施方案中，密度调节剂选自葡聚糖，例如葡聚糖-40。在一些实施方案中，第一水性组分的渗透度的范围为约10mOsm/kg至约600mOsm/kg。在一些其它实施方案中，第一水性组分的渗透度的范围为约285mOsm/kg至约335mOsm/kg。

在一些实施方案中，第一水性组分的pH范围为约2.0至约9.0。在一些其它实施方案中，第一水性组分的pH范围为约3.5至约5.5。在一个实施方案中，第一水性组分的pH范围为约5.5。在一些其它实施方案中，第一水性组分的pH范围为约4.3至约5.5。在一些其它实施方案中，第一水性组分的pH范围为约7.5至约9.0。在一些其它实施方案中，第一水性组分的pH为约7.7。第一水性组分的pH对完成的封装TXA的MVL的稳定性有影响。在某些情况中，观察到当第一水性组分中的pH水平较高时，封装的TXA更可能从MVL中渗出。相比之下，第一水性组分中的较低pH水平使得成品在较高储存温度(例如，室温或37℃)下更稳定。在一些实施方案中，优选的pH范围为约3.5至约5.5，更优选约3.5至约4.4。

将脂质相和第一水相通过机械湍流，如通过使用旋转或振动叶片、摇动、通过挡板结构或多孔管挤出、或通过超声、或通过使用三流体喷嘴(描述于Schutt等人，美国专利公开第2011/0250264A1号中)混合以产生油包水乳状液。然后，可以通过上述手段将油包水乳状液分散在第二水相中以形成悬浮在第二水相中的含有溶剂的球体，形成水包油包水乳状液。术语“含有溶剂的球体”指含有有机溶剂的微观球状液滴，在该液滴内悬浮了多个较小的水溶液液滴。第二水相可以含有另外的组分，如一种或多种pH调节剂和一种或多种渗透剂以及它们的组合。在一些实施方案中，第二水性组分包含赖氨酸或组氨酸作为pH调节剂。在一些实施方案中，第二水性组分的pH范围为约3.5至约10.5。在一些实施方案中，第二水性组分的pH范围为约7.5至约10.5。在一些实施方案中，第二水性组分包含山梨糖醇或蔗糖作为渗透剂。在一个具体实施方案中，TXA也被用作渗透剂。在一些实施方案中，第二水性组分的渗透度的范围为约10mOsm/kg至约600mOsm/kg。在一些其它实施方案中，第二水性组分的渗透度的范围为约270mOsm/kg至约350mOsm/kg。

然后，例如通过从悬液的表面蒸发、用气体鼓泡或与喷雾室中的气体接触来从球体去除挥发性有机溶剂。当溶剂基本上或完全蒸发时，形成MVL。可以用于蒸发的气体包括氮气、氩气、氦气、氧气、氢气和二氧化碳、它们的混合物或干净的压缩气体。可选地，可以通过鼓泡、旋转蒸发、透析过滤或使用溶剂选择性膜，或与喷雾室中的气体接触来去除挥发性溶剂。

如上所述，TXA可以通过包含在第一水性组分中而掺入MVL中。TXA也可以通过包含在脂质相或者脂质和第一水性组分两者中而掺入MVL中。如美国药典37(USP 37)中针对有机杂质的分析所述，利用一些较小的修改，通过下述来分析在本申请的MVL中回收的TXA的量：将DEPO-TXA的悬液在含50％甲醇的水中稀释30倍，然后将所得混合物上样至HPLC(Hewlett-Packard Model 1100，C-18柱；运行溶剂系统：51％MeOH；49％的含有磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)、H₃PO₄、TEA和十二烷基硫酸钠(“SDS”)的缓冲水溶液；pH＝2.5)。在一些实施方案中，TXA收率的百分数为起始TXA量的约40％至约90％，更优选约50％至约90％，更优选约60％至约90％。

多囊脂质体的制备示出在Sankaram等人，美国专利第5,766,627号和第6,132,766号中，将其各自通过引用整体并入。制备本发明的MVL制剂的方法也可以见于Hartounian等人(WO99/25319)和Schutt等人(美国公开第2011/0250264A1号)中，将其通过引用整体并入本申请中。可选地，可以将TXA遥控(remotely)装载至空的MVL颗粒中。这样的方法描述于Garcia等人，美国公开第2012/0114740号中，在此将其通过引用整体并入。

施用方法

本申请的一些实施方案涉及治疗、改善或预防失血的方法，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含封装凝血酸的多囊脂质体和未封装的凝血酸，所述多囊脂质体包含凝血酸、含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分、以及一种或多种pH调节剂。在一些实施方案中，施用是肠胃外施用。在一些其它实施方案中，施用是局部的。在一些实施方案中，施用是肠胃外和局部的。在一些这样的实施方案中，肠胃外施用选自皮下注射、组织注射、伤口浸润或伤口滴注。在一些这样的实施方案中，局部施用包括使所述药物组合物与需要治疗的对象身体的腔室或表面直接接触，如将药物组合物倒在开放性伤口上。

如本文所用，术语“对象”包括动物和人。在优选实施方案中，对象为人。

在任何实施方案中，可以通过弹丸注射，例如，皮下弹丸注射、肌内弹丸注射、皮内弹丸注射等来施用本发明的药物组合物。在任何实施方案中，可以通过输注，例如，皮下输注、肌内输注、皮内输注等来施用。在任何实施方案中，施用可以为通过局部注入伤口周边和/或在伤口周边附近的局部注射或滴注至切口、伤口或体腔或它们的组合进行的直接伤口浸润。也可以通过其它施用途径来施用DEPO-TXA制剂，所述施用途径包括但不限于局部、鼻部和全身递送，如IV。

使用标准方法和装置，例如，笔、注射器系统、针和注射器、皮下注射口递送系统、导管等来完成本发明的DEPO-TXA制剂的施用。

在一些实施方案中，本申请的MVL制剂任选地包含药学可接受的载体。如本文所用，术语“药学可接受的载体”意为适合于向动物施用的一种或多种相容的固体或液体填充物稀释剂或封装物质。如本文所用，术语“相容的”意为组合物的组分能够以不存在相互作用的方式与主题化合物以及互相混合，所述相互作用将大幅降低普通使用情况下组合物的药物功效。当然，药学可接受的载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性以使得它们适合优选向动物施用，优选向正治疗的哺乳动物施用。

可以用作药学可接受的载体或其组分的物质的一些实例为糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；麦芽；明胶；滑石；硫酸钙；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如TWEENS；盐，如氯化钠；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；以及磷酸盐缓冲溶液。

与主题化合物结合使用的药学可接受的载体的选择基本上由施用化合物的方式确定。

含有这些化合物的有效可注射组合物可以呈悬液或溶液形式。在溶液形式中，TXA溶解在生理学可接受的媒介物中。如果需要，这样的媒介物包括合适的溶剂、张度剂(如蔗糖或盐水)、防腐剂(如苄醇)和缓冲剂。有用的溶剂包括，例如，水和含水醇、二醇和碳酸酯，如碳酸二乙酯。

可注射悬液组合物需要含有或不含佐剂的液体悬浮介质作为媒介物。悬浮介质可以为，例如，氯化钠、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或上述组合的水溶液。在一些实施方案中，悬液组合物包含适合于使未封装的凝血酸溶解或增溶的液体悬浮介质。

使用合适的生理学可接受的储存溶液组分来保存悬浮在悬液组合物中的化合物。储存溶液组分可以选自增稠剂，如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和海藻酸盐。许多表面活性剂也可以用作悬浮剂。悬浮介质还可以包含卵磷脂、烷基酚聚环氧乙烷加合物、萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐或聚氧乙烯山梨糖醇酯。MVL储存悬浮液可以含有另外的添加剂。

影响液体悬浮介质的亲水性、密度和表面张力的许多物质可以有助于在个别情况下制备可注射悬液。例如，硅酮消泡剂、山梨糖醇和糖可以是有用的悬浮剂。

一些实施方案提供历经12小时的TXA的持续释放。一些实施方案提供历经24小时的TXA的持续释放。一些实施方案提供历经36小时的TXA的持续释放。一些实施方案提供历经48小时的TXA的持续释放。一些实施方案提供历经60小时的TXA的持续释放。一些实施方案提供历经72小时的TXA的持续释放。例如，图5A和5B分别示出在第1天和第10天，治疗之后直至72h的总AUC的百分数。在游离TXA组中，94％的施用的TXA在12小时之后被清除，而在DepoTXA组中，在12小时剩余25％的剂量，并且历经接下来的60小时将其递送。类似地，图6A和6B分别示出在治疗第1天和第10天，施用之后历经72小时递送的TXA的总量。单独施用TXA导致在小于24小时内几乎全部的TXA剂量的暴露。相比之下，Depo-TXA在24小时提供，例如，100mg/kg TXA(来自120mg/kg剂量)的暴露，表明Depo-TXA的持续释放特征。

实施例

虽然已经根据某些实施方案具体描述了本发明的某些治疗剂、组合物和方法，但下述实施例仅用来示例本发明的组合物和方法，并且不旨在对其进行限制。

实施例1：DEPO-TXA制剂

如下制备DEPO-TXA制剂：将治疗剂(TXA)溶解在包含一种或多种pH调节剂和一种或多种渗透剂和/或密度调节剂的第一水性溶液中，然后利用机械湍流将第一水性溶液与包含磷脂和有机溶剂的脂质组分混合以形成油包水乳状液；然后将油包水乳状液分散在第二水性溶液中。使氮气流通过混合物以蒸发有机溶剂。然后，将盐溶液添加至混合物中，随后通过离心分离并洗涤MVL。

示例性的制备条件和DEPO-TXA制剂分析结果总结在下表1中。条目1-65和68-120中所述的DEPO-TXA制剂的小型制备的方法和设备公开在Sankaram等人，美国专利第6,132,766号(例如实施例1)中。第一水性组分及溶液和溶剂的pH的变化如表1所述。在实验条目28中，将MVL离心并重悬于含有40mg/mL游离TXA的溶液中，产生含有约60％游离TXA的悬液。

条目66和67中所述的DEPO-TXA制剂的喷涂工艺的方法和设备公开于2011年4月8日提交的Schutt等人，US 2011/0250264 A1中(例如，实施例4)，除了溶液和溶剂如表1所述，以及漂洗溶液的组成与那些实验中列出的第二水性溶液的相同。

如以下USP 37中针对有机杂质的分析所述，利用一些较小的修改，通过下述分析本发明的MVL中的TXA收率：将DEPO-TXA的悬液在含50％甲醇的水中稀释30倍，然后将所得混合物上样至HPLC(Hewlett-Packard Model 1100，C-18柱；流动相溶剂系统：51％MeOH；49％的含有NaH₂PO₄、H₃PO₄、TEA和SDS的缓冲水溶液；pH＝2.5)。

表1：DEPO-TXA制剂的溶液组成和终产物属性

CFM为氯仿(CFM)。

DCM为二氯甲烷(CH₂Cl₂)。

Lys为赖氨酸。

His为组氨酸。

Osm/D指渗透剂/密度调节剂。

EXP由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-60由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,12mM,10.67mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),2.12mM,1.58mg/mL)；胆固醇(16.03mM,6.20mg/mL)；TC(三辛精,5.40mM,2.59mg/mL)；和水(0.04％)组成。

EXP-150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,30mM,26.67mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),5.31mM,3.96mg/mL)；胆固醇(40.08mM,15.51mg/mL)；TC(三辛精,13.50mM,6.48mg/mL)；和水(0.11％)组成。

EXP-C150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(40.08mM,15.51mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-C75由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(20.04mM,7.76mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-C113由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(30.19mM,11.68mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-DEPC50由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,10mM,8.89mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-DEPC150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,30mM,26.67mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-TC150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,13.5mM,6.48mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-TC50由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,4.5mM,2.16mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-DOPC100由DOPC(二油酰基磷脂酰胆碱,20mM)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TC(三辛精,9mM,4.32mg/mL)；和水(0.07％)组成。

EXP-TO100由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,20mM,17.78mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),3.54mM,2.64mg/mL)；胆固醇(26.72mM,10.34mg/mL)；TO(三油精,9mM)；和水(0.07％)组成。

OBLT由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,26mM,23.71mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,40mM,18.84mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-DPPG50由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,26mM,23.71mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),5.50mM,4.17mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,40mM,18.84mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-DEPC50由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,13mM,11.86mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,40mM,18.84mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-DEPC150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,39mM,35.57mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,40mM,18.84mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-TC50由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,26mM,23.71mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,20mM,9.42mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-TC150由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,26mM,23.71mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(40mM,15.48mg/mL)；TC(三辛精,60mM,28.26mg/mL)；和水(0.39％)组成。

OBLT-C75由DEPC(1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸,26mM,23.71mg/mL)；DPPG(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸-rac-(1-甘油),11mM,8.34mg/mL)；胆固醇(30mM,11.61mg/mL)；TC(三辛精,40mM,18.84mg/mL)；和水(0.39％)组成。

如下表2所述制备三种TXA制剂。按照制剂#34中所述的相似程序制备在多囊脂质体中的封装的TXA。此外，通过将游离TXA的水溶液添加至TXA-MVL颗粒中来制备DEPO-TXA制剂，以在最终组合物中获得63％的游离TXA。

在由Charles River Labs提供的雄性Sprague-Dawley大鼠(300至325克)中进行上文提及的TXA制剂的皮下给药的药代动力学研究。本研究中使用总计24只大鼠，将其分成6组(每组N＝4只大鼠)。在给药当天之前，可以进行给药前样品收集和刮腿毛。用配备有25G的皮下注射针的1cc一次性注射器，通过皮下注射至左后肢的中间部分(靠近大鼠的背部)向大鼠施用。注射体积为0.5mL。

在不同时间点(给药前，给药后0.5、1、2、6、24、48、72&96小时)收集血浆样品用于分析。使用19G针刺或心脏穿刺经由右侧隐静脉收集最终时间点的血液样品，将其置于含有适当抗凝剂的冷冻管中，颠倒数次以混合，避光并保存在冰上直至离心。图1A和1B中示出了游离TXA的血浆水平下降和游离TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。

实施例2：DEPO-TXA的喷涂工艺合成

实施例2描述DEPO-TXA制剂(121S)的大规模合成，其中液体溶液包含11.85mg/mLDEPC、8.34mg/mL DPPG、15.48mg/mL胆固醇和18.84mg/mL三辛精。

通过将77.4g胆固醇、41.7g DPPG、94.2g三辛精、59.3g DEPC和19.5g水溶解在氯仿溶液中来制备液体溶液。混合溶液直至溶液澄清并且将脂质保留在溶液中。为制备第一水性溶液，将200.0g凝血酸、300.0g葡聚糖和4000.0g水一起混合。测量混合物的pH为约7.30-7.50。然后，使用85％的H₃PO₄滴定混合物直至第一水性溶液的pH为大约5.50。将脂质溶液与第一水性溶液混合以形成油包水乳状液。通过在去了皮重的20L容器中将400.0g凝血酸与10000.0g水混合来制备第二水性溶液。将油包水乳状液随后分散在第二水性溶液中。以与第二水性溶液类似的方式制备含有400.0g凝血酸的漂洗溶液。在去除氯仿之后，将封装TXA的MVL分离，并用漂洗溶液洗涤，得到DEPO-TXA制剂。

实施例3：皮下施用的毒性评价

本研究的目的是为了与参考对照物质凝血酸相比，确定TXA制剂在通过皮下注射给予比格犬时的潜在毒性以及评价任何发现的潜在可逆性。此外，确定了毒代动力学特征。

研究设计如下所述：

在给药当天分配参考物质0.9％注射用氯化钠(USP)，以施用于组1的对照动物。

在给药之前，使用无菌注射用水(USP)制备适当浓度的参考对照物质(凝血酸)给药制剂以满足剂量水平要求。在使用之前，使用0.22μm大小的过滤器过滤制剂。在第一剂量配制时，测定pH(并且为7.41)并将一个样品(6mL)收集在适当大小的容器(玻璃或聚丙烯)中，在环境条件下保存，以用于渗透度的测定(并且为245mOsm/kg)。分配给药制剂，以用于向组2的动物给药。

如本文所述(参见，例如，表1，制剂编号34和段落[0020])制备DEPO-TXA制剂(测试物质)，其中向TXA-MVL组合物中添加另外的游离TXA。如下表3所例示，制备了两种不同的DEPO-TXA制剂(40mg/mL和120mg/mL的上清液浓度)。对于40mg/mL的制剂，％PPV为约50.0％，并且假定的间隙体积(interstitial volume)(mL)为约20％，使得约62％的游离TXA在多囊脂质体的外面。DEPO-TXA制剂的一个目标是在手术之后立即减少出血和在手术之后接下来数天减少出血。游离部分立即出现在血浆中，以及封装的部分经三天的时间更缓慢地出现。在注射DEPO-TXA之后，游离的TXA部分立即出现在血浆中并且被完全清除，这与在弹丸施用TXA组中一样。另外在注射之后，封装的TXA部分立即开始从MVL中缓慢释放。在前12h，释放的TXA促成在血浆中测量的初始TXA峰值。在12-24h，随着游离TXA被迅速清除，从MVL释放的TXA进入血浆的贡献变得明显。在接下来的数天，封装的TXA以每个时间间隔5-10％的速率继续释放。在给药至组3和组4的动物之前，从冰箱移出制剂并使其升温至室温，持续至少30分钟。用手轻轻握住瓶子，并经由手腕旋转将其颠倒20-30次直至达到均匀悬液出现。不要摇动、涡旋或搅拌测试物质。

收集来自参考对照物质的给药制剂的样品，以用于分析第7天(来自仅给药雌性的制备物)和第10天的制备物。从制备容器中取出重复的样品组(5mL)，然后过滤。在分析之前，将所有待分析的样品保存在设置成维持4℃，没有直射光的冰箱中。

与本研究一起平行分析TXA制剂的稳定性，并且在生命期结束时分析适于研究持续的时间点。

本研究中使用21只雄性和21只雌性比格犬。在开始给药时，动物为6至7个月龄，并且体重为7.5至9.8kg(雄性)以及6.0至8.2kg(雌性)。

表3：实验设计

在第1天、第4天、第7天和第10天，经由皮下注射到肩胛和中背部区域中而将测试物质、参考对照物质和参考物质施用于适当的动物。每只动物的给药体积基于最新的体重测量。使用注射器/针通过一次注射施用每个剂量的体积。注射部位在两个限定的部位(以及在特定日期对所有动物均是相同的部位)之间轮转。根据需要，刮剃给药区域并用笔标记注射部位(5cm x 5cm的目标区域)。第一给药部位在背部的肩胛中间区域，以及第二给药部位在背部中间区域的第一部位的尾端。

从颈静脉收集血液。从各饲养的动物中过夜收集尿液。在收集之后，将样品转移至适当的实验室进行处理。在采血(用于临床化学)之前，将动物禁食过夜。在尿液收集程序期间，剥夺动物的食物和水。

将来自所有动物的颈静脉(或头静脉)的血液收集在含有肝素锂的管中。在第1天和第10天在下述时间点连续收集样品：给药前，给药后15min、30min、1、2、6、12、24、36、48和72小时。

将样品轻轻混合，并置于压碎的湿冰上直至离心，该离心应根据实际尽可能快地进行。将样品在冷冻离心机(设定为保持4℃的温度)中于2700rpm离心10分钟。将所得血浆分离，转移至特别标记的透明聚丙烯管中，立即在干冰上冷冻并转移至设置保持-80℃的冷冻机中。

使用经过验证的分析程序来分析血浆样品的凝血酸浓度。

在可行时，由来自第1天和第10天的血浆中的测试物质(凝血酸)的单独浓度产生毒代动力学参数。

结果和讨论

历经14天的时间向比格犬皮下注射40和120mg/kg/剂量的DEPO-TXA(“测试物质”)，这耐受良好，并且未导致任何不利的毒性。

给药后，在给予DEPO-TXA的动物中观察到剂量相关的较轻临床症状，如轻微和偶然的呕吐。在给予TXA的动物中也观察到具有相似的发生率和严重性这些临床症状。在给药之间的日子或在恢复期均未注意到测试物质或参考对照物质相关的临床症状。

与对照组相比，对体重、体重增加、食物摄入、眼科、心电学、血液学、凝血、D-二聚体含量、尿分析参数、器官重量或肉眼可见的发现没有影响。

毒代动力学分析清楚地表明DEPO-TXA给药材料中含有的高水平的TXA在皮下注射后被吸收到外周循环中。这在性别之间没有差异。在治疗第1天和第10天，血浆暴露(C_max和AUC)相当。

表4.毒代动力学参数概述

在DepoTXA施用后第1天，在分别给药40和120mg/kg剂量组之后，TXA的性别组合的血浆浓度的平均值±标准差(n＝10)在0.63±0.27和1.0±0.0小时(Tmax)达到峰值。各自的平均峰值水平(Cmax)为48.9±10.8和109±12.7μg/mL。在第10天，对于低和高给药动物，在0.55±0.16和0.68±0.29小时达到各自的平均峰值浓度，其中平均峰值水平为50.8±9.8和138±15.1μg/mL，代表在第1天、第4天、第7天和第10天给药之后，暴露峰值的最小变化。在第1天，在40mg/kg DepoTXA剂量水平下，AUC0-24、AUC0-48、AUC0-72和AUC0-inf的性别组合的平均值±标准差(n＝10)的数值分别为159±15.7、177±18.0、188±18.5和201±17.2μg·hr/mL，以及对于120mg/kg的DepoTXA剂量水平，为445±35.9、498±35.3、526±34.6和561±35.9μg·hr/mL。在第10天，在40mg/kg的剂量水平下，AUC0-24、AUC0-48和AUC0-72的各自平均值为156±15.7、173±17.5、182±18.3μg·hr/mL，以及在120mg/kg的剂量水平下，为455±45.0、503±50.6和524±52.8μg·hr/mL。对于40和120mg/kg的剂量水平，在第1天，DepoTXA的平均终末消除半衰期(t1/2elim)分别为28.5±7.4和27.9±9.8小时，以及在第10天，为22.9±6.8和21.7±5.7。

对于游离TXA(给予组2的动物的参考对照物质)，在第1天，在120mg/kg给药之后，TXA的性别组合的血浆浓度的平均值±标准差(n＝10)在1.2±0.42小时(Tmax)达到峰值，其中平均峰值水平(Cmax)为140±19.2μg/mL。在第10天，在1.1±0.32小时达到平均峰值浓度，其中平均峰值水平为119±15.4μg/mL。在TXA之后第1天AUC0-24、AUC0-48、AUC0-72和AUC0-inf的性别组合的平均值±标准差(n＝10)的数值分别为475±35.1、485±36.1、490±36.5和495±36.8μg·hr/mL。在第10天，AUC0-24、AUC0-48和AUC0-72的各自平均值为468±42.5、479±44.2和484±45.2μg·hr/mL。在第1天，TXA的平均终末消除半衰期(t1/2elim)为25.7±2.0小时，以及在第10天，为28.9±2.9。

将120mg/kg剂量水平的DepoTXA与游离TXA进行比较，在第1天，对于游离TXA组，平均暴露峰值(Cmax)高28％，但在研究第10天，在第四次和最终皮下给药之后，峰值TXA水平低14％。在第1天，DepoTXA组相对于游离TXA组，平均总体系统暴露(AUC0-72)高7％，以及在第10天，对于DepoTXA组，平均暴露高8％。

在研究第1、4、7和10天，以40和120mg/kg/剂量向犬皮下施用DepoTXA。在第一次和最后一次给药后，收集血液样品直至给药后72小时，并且确定毒代动力学参数估计值。TK分析的结果清楚地表明DepoTXA给药材料中含有的高水平的TXA在皮下注射后被吸收到外周循环中。Depo-TXA的施用耐受良好，无不利毒性。在第1天和第10天，血浆暴露(Cmax和AUC)相当。将120mg/kg DepoTXA组与120mg/kg游离TXA组之间的平均暴露进行比较，在单次给药之后(第1天)，对于游离TXA组，平均暴露峰值(Cmax)较高，但在多次给药之后(第10天)，对于DepoTXA组，平均暴露峰值较高。对于DepoTXA组，平均总体系统暴露(AUC0-72)略高。

图2示出了在治疗第1天，施用之后历经72小时，TXA的平均血浆浓度。向组2施用参考对照物质，向组3施用40mg/kg Depo-TXA，以及向组4施用120mg/kg Depo-TXA。

图3示出了在治疗第10天，施用之后历经72小时，TXA的平均血浆浓度。向组2施用参考对照物质，向组3施用40mg/kg Depo-TXA，以及向组4施用120mg/kg Depo-TX。

图4示出了在治疗第1天，施用之后历经12小时，血浆中TXA的浓度。

图5A示出了在治疗第1天，直至注射后72小时，TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。图5B示出了在治疗第10天，直至注射后72小时，TXA的总曲线下面积(AUC)的百分数。具体地，在游离TXA组中，94％的施用的TXA在12小时之后被清除，而在DepoTXA组中，在12小时剩余25％的剂量，并且历经接下来的60小时将其递送。

图6A示出了在治疗第1天，施用之后历经72小时递送的TXA的总量。图6B示出了在治疗第10天，施用之后历经72小时递送的TXA的总量。单独的TXA的施用导致在少于24小时内几乎全部TXA剂量的暴露。相比之下，Depo-TXA在24小时提供，例如，100mg/kg TXA(来自120mg/kg剂量)的暴露，表明Depo-TXA的持续释放特征。

图7A示出了在第1天，施用之后历经72小时，TXA血浆水平的降低。图7B示出了在第10天，施用之后历经72小时，TXA血浆水平的降低。

因此，在注射DepoTXA之后，游离的TXA部分立即出现在血浆中并且被完全清除，这与在弹丸施用TXA组中一样。另外在注射之后，封装的TXA部分立即开始缓慢释放。在前12h，释放的TXA促成在血浆中测量的初始TXA峰值。在12-24h，随着游离TXA被迅速清除，释放的TXA对测量的血浆TXA水平的贡献变得明显。在接下来的24-72小时，封装的TXA以每个时间间隔5-10％的速率继续释放，如图8A和8B所示。

在两种剂量的DEPO-TXA均无副作用的情况下，本研究中未观察到副作用的水平(NOAEL)被认为是120mg/kg/剂量DEPO-TXA(其中，在第10天，性别组合的平均血浆AUC_0-72为524μg·h/mL，以及C_max为138μg/mL)。

虽然已经参考本申请的具体实施方案描述了本申请，但本领域技术人员应理解，在不背离发明的真实精神和范围的情况下可以进行各种变化和等同物替代。此外，可以进行许多修改以使特定情况、材料、物质的组成、方法、方法步骤或步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有此类修改均意图在所附权利要求的范围内。

Claims

1.药物组合物，其包含：

封装凝血酸的多囊脂质体以及未封装的凝血酸，所述多囊脂质体包含：凝血酸，含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分，以及一种或多种pH调节剂。

2.药物组合物，其包含：

封装凝血酸的多囊脂质体，所述多囊脂质体包含：凝血酸，含有至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分，以及一种或多种pH调节剂。

3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述多囊脂质体还包含一种或多种渗透剂和/或密度调节剂。

4.如权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述多囊脂质体还包含胆固醇和/或植物甾醇。

5.如权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述两亲性脂质包括磷脂酰胆碱、或者磷脂酰甘油或其盐、或者它们的组合。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述磷脂酰甘油为DPPG。

7.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC或者它们的组合。

8.如权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中所述中性脂质包括甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯或角鲨烯、或者它们的组合。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述中性脂质包含甘油三酯。

10.如权利要求8或9所述的药物组合物，其中所述甘油三酯选自三油精或三辛精、或者它们的组合。

11.如权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中所述pH调节剂选自有机酸、有机碱、无机酸或无机碱、或者它们的组合。

12.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述pH调节剂选自无机酸或有机碱、或者它们的组合。

13.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述pH调节剂选自有机酸或有机碱、或者它们的组合。

14.如权利要求11或12所述的药物组合物，其中所述无机酸选自盐酸或磷酸。

15.如权利要求11或13中任一项所述的药物组合物，其中所述有机酸选自酒石酸或谷氨酸、或者它们的组合。

16.如权利要求11至15中任一项所述的药物组合物，其中所述有机碱选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸或氨丁三醇、或者它们的组合。

17.如权利要求1至16中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约80mg/mL。

18.如权利要求1至17中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约2.5mg/mL至约40mg/mL。

19.如权利要求1至18中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约5mg/mL至约25mg/mL。

20.如权利要求1至19中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。

21.如权利要求1或3至20中任一项所述的药物组合物，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约1％至约80％。

22.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约20％至约70％。

23.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约30％至约60％。

24.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约50％。

25.如权利要求1或3至20中任一项所述的药物组合物，其中所述未封装的凝血酸少于所述药物组合物中总凝血酸的约10％。

26.如权利要求1至25中任一项所述的药物组合物，其中所述多囊脂质体具有约4.0至约9.0的外部pH范围。

27.如权利要求26所述的药物组合物，其中所述外部pH范围为约4.5至约8.5。

28.如权利要求1至27中任一项所述的药物组合物，其中所述多囊脂质体具有约3.0至约9.0的内部pH范围。

29.如权利要求28所述的药物组合物，其中所述内部pH范围为约3.5至约5.5。

30.如权利要求1至29中任一项所述的药物组合物，其中所述封装凝血酸的多囊脂质体在37℃下稳定至少2天。

31.治疗、改善或预防失血的方法，其包括向有需要的对象施用权利要求1至30中任一项所述的药物组合物。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述施用为肠胃外施用。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述肠胃外施用选自皮下注射、组织注射、伤口浸润或伤口滴注。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述肠胃外施用为皮下注射。

35.如权利要求33所述的方法，其中所述肠胃外施用为组织注射。

36.如权利要求33所述的方法，其中所述肠胃外施用为伤口浸润。

37.如权利要求33所述的方法，其中所述肠胃外施用为伤口滴注。

38.如权利要求31所述的方法，其中所述施用为局部施用。

39.如权利要求31所述的方法，其中所述施用为局部和肠胃外施用。

40.如权利要求38或39所述的方法，其中所述局部施用包括使所述药物组合物与需要治疗的对象身体的腔室或表面直接接触。

41.制备包含凝血酸的多囊脂质体的方法，所述方法包括：

制备包含凝血酸和至少一种pH调节剂的第一水性组分；

制备包含至少一种有机溶剂、至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质的脂质组分；

将所述第一水性组分与所述脂质组分混合以形成油包水乳状液，其中至少一种组分包含凝血酸；

使所述油包水乳状液与第二水性组分接触以形成含有溶剂的球体；以及

从所述含有溶剂的球体中去除有机溶剂以形成多囊脂质体。

42.如权利要求41所述的方法，其还包括使所述多囊脂质体悬浮在包含凝血酸的溶液中，以形成包含封装和未封装的凝血酸两者的药物组合物。

43.如权利要求41所述的方法，其还包括使所述多囊脂质体悬浮在包含盐水的溶液中，以形成包含封装的凝血酸的药物组合物。

44.如权利要求41至43中任一项所述的方法，其中所述脂质组分还包含胆固醇和/或植物甾醇。

45.如权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述两亲性脂质包括磷脂酰胆碱、或者磷脂酰甘油或其盐、或者它们的组合。

46.如权利要求45所述的方法，其中所述磷脂酰甘油为DPPG。

47.如权利要求45所述的方法，其中所述磷脂酰胆碱选自DEPC或DOPC、或者它们的组合。

48.如权利要求41至47中任一项所述的方法，其中所述中性脂质包括甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯或角鲨烯、或者它们的组合。

49.如权利要求48所述的方法，其中所述中性脂质包括甘油三酯。

50.如权利要求48或49所述的方法，其中所述甘油三酯选自三油精或三辛精、或者它们的组合。

51.如权利要求41至50中任一项所述的方法，其中所述第一水性组分还包含至少一种渗透剂和/或密度调节剂。

52.如权利要求41至51中任一项所述的方法，其中所述第一水性组分的pH调节剂选自无机酸、有机酸、无机碱或有机碱、或者它们的组合。

53.如权利要求52所述的方法，其中所述pH调节剂选自盐酸、磷酸或酒石酸、或者它们的组合。

54.如权利要求41所述的方法，其中所述pH调节剂选自组氨酸、精氨酸、氨丁三醇或它们的组合。

55.如权利要求41至54中任一项所述的方法，其中所述第一水性组分的pH范围为约2.0至约9.0。

56.如权利要求55所述的方法，其中所述第一水性组分的pH范围为约3.5至约5.5。

57.如权利要求55所述的方法，其中所述第一水性组分的pH范围为约4.3至约5.5。

58.如权利要求55所述的方法，其中所述第一水性组分的pH范围为约7.5至约9.0。

59.如权利要求58所述的方法，其中所述第一水性组分的pH为约7.7。

60.如权利要求41至59中任一项所述的方法，其中所述第二水性组分包含至少一种渗透剂和至少一种pH调节剂。

61.如权利要求41至60中任一项所述的方法，其中所述第二水性组分的pH范围为3.5至约10.5。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述第二水性组分的pH范围为约7.5至约10.5。

63.如权利要求42至62中任一项所述的方法，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约1mg/mL至约80mg/mL。

64.如权利要求42至63中任一项所述的方法，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约2.5mg/mL至约40mg/mL。

65.如权利要求42至64中任一项所述的方法，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约5mg/mL至约25mg/mL。

66.如权利要求42至65中任一项所述的方法，其中所述药物组合物中总凝血酸的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。

67.如权利要求42或44至65中任一项所述的方法，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约1％至约80％。

68.如权利要求67所述的方法，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约20％至约70％。

69.如权利要求67所述的方法，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约30％至约60％。

70.如权利要求67所述的方法，其中所述未封装的凝血酸为所述药物组合物中凝血酸总量的约50％。

71.如权利要求41或43至66中任一项所述的方法，其中所述未封装的凝血酸少于所述药物组合物中总凝血酸的约10％。

72.包含通过权利要求41至71所述的方法制备的含有凝血酸的多囊脂质体的药物组合物。