CN102174053A - 依维莫司的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种依维莫司的纯化方法，是通过简单的混合溶剂萃取法，使雷帕霉素与依维莫司中间体达到有效的分离和纯化；得到几乎不含雷帕霉素的依维莫司中间体，可以直接用于合成依维莫司。再通过反相色谱将依维莫司粗品纯化得到依维莫司半成品，再将依维莫司半成品通过正相色谱分离得到依维莫司成品。通过本发明提供的依维莫司纯化方法，能有效去除雷帕霉素，且操作非常简单，制备的依维莫司样品稳定，具有良好的工业应用前景。

Description

依维莫司的纯化方法

技术领域

本发明涉及一种化学物质的分离纯化方法，具体涉及依维莫司的纯化方法。

背景技术

雷帕霉素，是20世纪70年代初由加拿大Wyeth-Ayerst研究所从放线菌吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)培养液中分离出来的31元大环内酯类抗生素。1989年由美国Home Products公司将其作为抗移植排异反应的新药进入临床，并于1999年9月通过美国FDA批准上市。近年的研究表明，雷帕霉素在预防同种异体肾移植术后排斥反应、各种支架管置人导致的血管再狭窄及抗肿瘤等方面具有重要作用。同时由Cordis公司研发的以雷帕霉素作为涂层药物的血管支架Cypher已于2002年相继在欧洲、美国和日本上市；而由美国惠氏公司开发的雷帕霉素作为抗癌药现已进入临床试验阶段，大量的试验已经证实，雷帕霉素可抑制多种癌细胞的生长。尽管如此，雷帕霉素也存在一些副作用，如可能会发生疲倦无力、恶心、白细胞减少等。虽然雷帕霉素的生物活性很强，但由于其生物利用度低和水溶性差、结构不稳定等，使得该药物一直是通过非肠道给药系统使用。

为了在临床上更好地发挥疗效，人们对雷帕霉素的结构和功能进行了大量的研究，并获得了一系列具有临床价值的雷帕霉素衍生物，其中就包括依维莫司。依维莫司的结构式如下：

依维莫司是由瑞士诺华公司研发的具一定水溶性的雷帕霉素衍生物，可以口服给药，临床上主要用来预防肾移植和心脏移植手术后的排斥反应。其作用机制主要包括免疫抑制作用、抗肿瘤作用、抗病毒作用、血管保护作用，常与环孢素等其他免疫抑制剂联合使用以降低毒性。此外还用于治疗晚期肾癌。也正在进行对神经内分泌肿瘤、淋巴瘤、其他癌症以及结节性硬化症的研究，可作为单一制剂或者与现有的癌症治疗方法合用。

由于在制备依维莫司关键中间体的时候，雷帕霉素有大量不能反应，而雷帕霉素与依维莫司在最后样品中又很难分离，所以在中间体这一步将雷帕霉素除掉是相当必要的。但是在依维莫司分离纯化的过程中由于依维莫司对光、热、酸、碱等均不稳定，并且还存在主峰与异构体之间的相互转化，常常在分离过程中有分解现象，给分离纯化带来了一定的难度。目前尚没有太好的分离方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、去除雷帕霉素残留效果明显、样品稳定的依维莫司分离纯化方法。

本发明是这样实现的：

依维莫司分离纯化方法，具体如下：

将含有雷帕霉素的依维莫司中间体或中间体的反应液用烷烃加热溶解，再用含水有机溶剂洗涤，洗涤掉雷帕霉素，将烷烃浓缩干，得到雷帕霉素残留量重量百分数小于0.1％的中间体。

本发明所述的中间体为：

按照美国专利US5665772描述的方法，将上述中间体或中间体的反应液合成得到依维莫司粗品。

将依维莫司粗品用5倍重量的乙醇溶解后，加含体积百分数为1％的甲酸水溶液将乙醇的体积浓度调到50％后，上反相树脂，再用乙醇和含1％醋酸的水溶液梯度洗脱，收集合并浓缩得依维莫司半成品。

将依维莫司半成品用异丙醚溶解后上正相填料柱分离，再用四氢呋喃和异丙醚梯度洗脱，分段收集后，合并后，在35℃以下减压浓缩，得依维莫司成品。

其中，所述的烷烃为戊烷、己烷、庚烷中的一种。

所述的含水有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、二氧六环的水溶液中的任意一种，含水量在20％～80％重量分数。

所述的用含水有机溶剂洗涤，是利用含水有机溶剂萃取洗涤掉雷帕霉素。

所述的萃取温度为10～30℃。

所述的反相树脂，是512树脂。

所述的正相填料柱内填充的正相材料是C1、C2、C3、C4、CN或乙二醇基中的任意一种。

本发明提供的依维莫司纯化方法。首先，用萃取的方法将中间体中的雷帕霉素除去，得到几乎不含雷帕霉素的中间体，再将中间体合成得到依维莫司，这样得到的依维莫司因为不含有雷帕霉素，所以分离纯化就相当简单。再通过一次反相树脂分离和一次正向填料柱分离后，得到稳定的依维莫司样品。该方法操作简单，具有良好的工业应用前景。

具体实施方式

下面就本发明每一步骤进行具体论述：

将中间体反应液125g(含中间体约50g，归一法，雷帕霉素含54.32％，中间体37.76％)用1250mL正己烷溶解后，加60％的甲醇1250mL萃取洗涤3次，将正己烷层干燥后浓缩干的68g，(中间体归一法计92.31％，雷帕霉素0.09％)。

将中间体64g(含中间体约40g，归一法，雷帕霉素含7.22％，中间体84.69％)用650mL正庚烷溶解后，加40％的乙醇650mL洗涤3次，将正己烷层干燥后浓缩干的62g，(中间体归一法计93.04％，雷帕霉素0.03％)。

将中间体反应液225g(含中间体约135g，归一法，雷帕霉素含23.33％，中间体67.71％)用1250mL正戊烷溶解后，加50％的乙醇1250mL洗涤3次，将正己烷层干燥后浓缩干的液体68g，(中间体归一法计88.34％，雷帕霉素0.07％)。

将依维莫司粗品50g(纯度：92.42％，异构体7.45％)用250mL乙醇溶解后，加入水250mL和醋酸5mL，上入预先用50％乙醇(含醋酸1％)平衡好的5L上海树脂厂生产的512树脂。再用50％乙醇(含醋酸1％)冲洗5L，65％乙醇(含醋酸1％)解析，分段收集，液相监控，合并浓缩干得依维莫司半成品43.9g。纯度98.73％，异构体3.21％。

将依维莫司半成品5g(98.73％，异构体3.21％)，用异丙醚50mL溶解，上入1000mL正相C1硅胶柱，用2∶8的四氢呋喃∶异丙醚1000mL冲洗。再用3∶7的四氢呋喃∶异丙醚解析，分段收集，液相监控，合并浓缩干的依维莫司成品4.6g。纯度99.43％，异构体0.31％，其他杂质单个小于0.2％。

将依维莫司半成品5g(98.73％，异构体3.21％)，用异丙醚50mL溶解，上入1000mL正相C4硅胶柱，用1∶9的四氢呋喃∶异丙醚1000mL冲洗。再用2∶8的四氢呋喃∶异丙醚解析，分段收集，液相监控，合并浓缩干的依维莫司成品4.3g。纯度99.55％，异构体0.28％，其他杂质单个小于0.2％。

将依维莫司半成品30g(98.73％，异构体3.21％)，用异丙醚300mL溶解，上入4000mL正相CN硅胶柱，用5∶5的四氢呋喃∶异丙醚3000mL冲洗。再用6∶4的四氢呋喃∶异丙醚解析，分段收集，液相监控，合并浓缩干的依维莫司成品27.9g。纯度99.82％，异构体0.19％，其他杂质单个小于0.1％。

本发明因为采用了特殊材料，有效的避免的材料对依维莫司的分解催化作用，并且通过反相树脂与正相分离相集合的方法分离纯化依维莫司，使得操作简单，效果明显，样品稳定；使得该分离纯化方法十分适合大工业化生产。

Claims (8)

1.依维莫司的纯化方法，其特征在于：

将含有雷帕霉素的依维莫司中间体或中间体的反应液用烷烃加热溶解，再用含水有机溶剂洗涤，洗涤掉雷帕霉素，将烷烃浓缩干，得到雷帕霉素残留量重量百分数小于0.1％的中间体；

按照美国专利US5665772描述的方法，将上述中间体合成得到依维莫司粗品；

将依维莫司粗品用5倍重量的乙醇溶解后，加体积百分数为1％的甲酸水溶液将乙醇的体积浓度调到50％后，上反相树脂，再用乙醇和含1％醋酸的水溶液梯度洗脱，收集合并浓缩得依维莫司半成品；

将依维莫司半成品用异丙醚溶解后上正相填料柱分离，再用四氢呋喃和异丙醚梯度洗脱，分段收集，合并后，在35℃以下减压浓缩，得依维莫司成品。

2.根据权利要求1所述的依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的中间体主要成分具有如下的结构式：

3.根据权利要求1所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的烷烃为戊烷、己烷、庚烷中的一种。

4.根据权利要求1所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的含水有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、二氧六环的水溶液中的任意一种，含水量在20％～80％重量分数。

5.根据权利要求1所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的用含水有机溶剂洗涤，是利用含水有机溶剂萃取洗涤掉雷帕霉素。

6.根据权利要求5所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的萃取温度为10～30℃。

7.根据权利要求1所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的反相树脂，是512树脂。

8.根据权利要求1所述依维莫司的纯化方法，其特征在于：所述的正相填料柱内填充的正相材料是C1、C2、C3、C4、CN或乙二醇基中的任意一种。