CN110256533B - 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 - Google Patents
一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110256533B CN110256533B CN201810199003.0A CN201810199003A CN110256533B CN 110256533 B CN110256533 B CN 110256533B CN 201810199003 A CN201810199003 A CN 201810199003A CN 110256533 B CN110256533 B CN 110256533B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- mobile phase
- mobile
- ion exchange
- acetonitrile
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种纯度大于99%的式(Ⅰ)化合物,该高纯度药用化合物是通过下述方法得到的:
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及可药用化合物,具体涉及一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法。
背景技术
中国专利申请201710263114.9公开了一种多臂抗癌偶联物BGC0222,该化合物的结构如式(Ⅰ)所示:
该化合物为多臂偶联物化合物,其药物载体的基本结构为四臂聚乙二醇,该四臂聚乙二醇被称为4ARM-PEG-20K,其分子量约为20kDa左右,分子量大,结构复杂。在制备BGC0222的过程中,BGC0222的粗品中含有较多杂质,这些杂质主要为没有偶联完全的化合物,这些杂质的存在直接影响药物的载药量。为了提高药物的载药量,唯一的方法就是将这些没有偶联完全的化合物除去,以提高BGC0222的纯度,但是由于这些杂质分子量大,结构复杂,使用常规的分离方法很难将这些杂质去除干净。
本申请研发人员通过深入研究发现,利用离子对色谱法,使用反相HPLC纯化,并使用庚烷磺酸钠/磷酸二氢钠/水/乙腈体系做流动相,可以将这些杂质很好的去除,提高药物纯度,并应用到相关生产工艺上。但是由于庚烷磺酸钠在HPLC制备纯化后转化成庚烷磺酸,庚烷磺酸属于强酸,会和BGC0222成盐,利用弱酸无法将庚烷磺酸完全置换出来,使得在后续纯化的脱盐过程中,无法将庚烷磺酸彻底脱除干净,还有较多的庚烷磺酸和BGC0222成盐,直接影响了药物的纯度及后续成药用盐的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种BGC0222纯度大于99%的提取方法:
(1)将BGC0222的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,达到平衡的目的;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯的BGC0222。
其中,步骤(1)所使用的填料为苏州纳微科技的Unisil 10-300 C18,流动相水相为加入磷酸二氢钠作为缓冲盐的庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈。优选0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液为流动相水相。
步骤(2)中,预脱盐的目的是将制备纯化分离得到的馏分中大量的盐先除掉一部分,因为太多的盐用离子交换方法无法脱除干净,超出填料的离子交换量。
预脱盐使用的流动相水相可以为醋酸水溶液、甲酸水溶液,有机相可以为甲醇、乙醇、乙腈中的一种或其混合溶液,优选5‰(v/v)醋酸水溶液作为流动相水相,乙腈作为流动相有机相。
由于BGC0222样品的水溶液呈粘稠状,步骤(4)分离纯化前的步骤(3),需要使用有机溶剂与水的混合溶液(即流动相)对离子交换柱进行冲洗,以达到降低样品过柱时的粘稠度,平衡离子交换柱的目的。使用的流动相水相为含有有机酸的水溶液,流动相有机相为乙腈、甲醇、乙醇中的一种或其混合溶液。
其中,有机酸可以为醋酸、甲酸、丙酸等,优选醋酸。最优选的流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2。
步骤(4)中,所使用的填料为阴离子交换填料,优选强碱型阴离子交换填料,更优选苏州纳微科技的UniGel-80Q填料。流动相和步骤(3)中所使用的流动相相同。
为了得到纯度大于99%的BGC0222,本发明最优的方法为:
(1)将BGC0222的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱,所使用的填料为苏州纳微科技的Unisil 10-300C18,流动相水相为0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱,5‰(v/v)醋酸水溶液作为流动相水相,乙腈作为流动相有机相;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,所使用的填料为苏州纳微科技的UniGel-80Q,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯度大于99%的BGC0222。
附图说明
图1:BGC0222粗品HPLC谱图,纯度<80%。
图2:BGC0222纯品HPLC谱图,纯度>99%。
具体实施例
在下面将对本发明进行详细描述。然而,本发明可能具体体现为许多不同的形式,而且它不应该被局限于此处所描述的实施例中,提供这些实施例中的目的是使所披露内容更完整与全面。所用试剂和原料,除了提供制备方法的除外,其余均为市售。除非另有定义,否则本文中所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属技术领域人员通常理解的含义相同。
其中,BGC0222粗品按照201710263114.9所公开的方法制备。
实施例1
第一步纯化:
制备柱:300DAC 300×250mm,填料:Unisil 10-300 C18,流动相水相:0.02M磷酸二氢钠+0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相:乙腈,检测波长:220nm;
BGC0222粗品200g,用10%(V/V)乙腈/水溶解后上样,HPLC制备纯化,梯度洗脱(时间:0~100min;流动相有机相浓度:20%~60%)收集纯度大于95%的组分作为第一步纯化的产物。
实施例2
预脱盐:
制备柱:300DAC,填料:Unisil 10-300 C18,流动相水相:5‰醋酸水溶液,流动相有机相:乙腈,检测波长:220nm;
将第一步纯化收集的纯品混合,进样,梯度洗脱(时间:0~80min;流动相有机相浓度:5%~80%),收集样品。
实施例3
平衡并进行第二步纯化:
填料:阴离子交换填料,型号:UniGel-80Q,数量:2L,柱子:玻璃柱(10*110cm),离子交换填料再生处理后,流动相洗涤离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2,平衡后,上样,使用相同的流动相离子交换除盐,洗脱并收集产品,得到纯度大于99%的BGC0222。
Claims (1)
1.式(Ⅰ)化合物纯度大于99%的提纯方法:
(Ⅰ)
(1)将式(Ⅰ)化合物的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱,所使用的柱子为300DAC,填料为Unisil 10-300 C18,流动相水相为0.02M磷酸二氢钠和0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈;控制检测波长为220nm;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱,所使用的柱子为300DAC,填料为Unisil 10-300 C18,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈;控制检测波长220nm;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v) 醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈溶液,且流动水相和流动有机相的体积比为3:2;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,所使用的填料为 UniGel- 80Q , 所使用的流动相水相为5‰(v/v) 醋酸水溶液,流动相有机相乙腈溶液,且流动水相和流动有机相的体积比为3:2,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯的式(Ⅰ)化合物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110256533A CN110256533A (zh) | 2019-09-20 |
CN110256533B true CN110256533B (zh) | 2022-05-10 |
Family
ID=67911406
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A Active CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110256533B (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101372504A (zh) * | 2007-08-22 | 2009-02-25 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化去氨加压素的方法 |
CN103467574A (zh) * | 2013-09-05 | 2013-12-25 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种醋酸去氨加压素的纯化方法 |
CN107375288A (zh) * | 2016-05-16 | 2017-11-24 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂的聚合靶向抗癌偶联物 |
CN108727583A (zh) * | 2017-04-21 | 2018-11-02 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂靶向抗癌偶联物 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011063156A2 (en) * | 2009-11-18 | 2011-05-26 | Nektar Therapeutics | Acid salt forms of polymer-drug conjugates and alkoxylation methods |
-
2018
- 2018-03-12 CN CN201810199003.0A patent/CN110256533B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101372504A (zh) * | 2007-08-22 | 2009-02-25 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化去氨加压素的方法 |
CN103467574A (zh) * | 2013-09-05 | 2013-12-25 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种醋酸去氨加压素的纯化方法 |
CN107375288A (zh) * | 2016-05-16 | 2017-11-24 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂的聚合靶向抗癌偶联物 |
CN108727583A (zh) * | 2017-04-21 | 2018-11-02 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂靶向抗癌偶联物 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
Antitumor activity of poly(ethylene glycol)–camptothecin conjugate: The inhibition of tumor growth in vivo;Deshan Yu 等;《Journal of Controlled Release》;20051104;第110卷;第90-102页 * |
Conjugates of a Novel 7-Substituted Camptothecin with RGD-Peptides as r;Alma Dal Pozzo等;《Bioconjugate Chem.》;20101015;第21卷;第1956-1967页 * |
Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects;Zhiwang Song等;《International Journal of Nanomedicine》;20170310;第12卷;第1941-1958页 * |
Nonclinical pharmacokinetics and activity of etirinotecan pegol (NKTR-102), a long-acting topoisomerase 1 inhibitor, in multiple cancer models;Ute Hoch · Carl-Michael Staschen等;《Cancer Chemother Pharmacol》;20140914;第74卷;第1125-1137页 * |
Novel tumor-targeted RGD peptide–camptothecin conjugates:Synthesis and biological evaluation;Alma Dal Pozzo等;《Bioorganic & Medicinal Chemistry》;20091112;第18卷;第64-72页 * |
聚乙二醇偶联羟基喜树碱的合成、表征及聚集行为;邱传龙等;《高等学校化学学报》;20160831;第37卷(第8期);第1535-1541页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110256533A (zh) | 2019-09-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN115505051B (zh) | 一种精制舒更葡糖钠的方法 | |
US10246524B2 (en) | Method for preparing sulfobutyl ether-β-cyclodextrin | |
CN105001309B (zh) | 一种达巴万星的分离纯化方法 | |
CN111039762B (zh) | 一种大麻二酚的纯化方法 | |
CN102766266B (zh) | 一种萃取分离维生素e聚乙二醇琥珀酸单双酯的方法 | |
WO2020015316A1 (zh) | 辅酶q10的提取纯化方法及由其制备的辅酶q10 | |
CN110590511B (zh) | 一种同时分离次大麻二酚和大麻萜酚的方法 | |
CN101973848B (zh) | 一种尿素柱层析分离纯化茄尼醇的方法 | |
CN108192090B (zh) | 一种维生素e聚乙二醇琥珀酸酯的纯化方法 | |
CN106226426A (zh) | 一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法 | |
CN110256533B (zh) | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 | |
CN101386614B (zh) | 树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 | |
CN103804336B (zh) | 一种双水相体系分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 | |
CN110343113B (zh) | 一种托法替布中间体的制备方法 | |
CN102070647A (zh) | 一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯b的方法 | |
CN106117191B (zh) | 一种高效分离提纯葛根素的方法 | |
CN102276570B (zh) | 一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)的方法 | |
TWI641585B (zh) | 純化茄尼醇的方法 | |
CN101723927B (zh) | 一种儿茶素单体egcg工厂化生产分离纯化方法 | |
CN113173835B (zh) | 一种高速逆流色谱分离制备高纯度补骨脂酚的方法 | |
CN110256534B (zh) | 一种多臂抗癌偶联物的纯化方法 | |
CN105418631A (zh) | 一种用高效液相色谱分离纯化奈马菌素的方法 | |
CN111909089B (zh) | 一种米库氯铵对照品的制备方法 | |
CN1162433C (zh) | 一种纯化鲀毒素的方法 | |
CN111607019B (zh) | 一种舒更葡糖酸的纯化方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |