CN110256533A - 一种高纯度的多臂抗癌偶联物 - Google Patents
一种高纯度的多臂抗癌偶联物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110256533A CN110256533A CN201810199003.0A CN201810199003A CN110256533A CN 110256533 A CN110256533 A CN 110256533A CN 201810199003 A CN201810199003 A CN 201810199003A CN 110256533 A CN110256533 A CN 110256533A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- mobile phase
- acetonitrile
- compound
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种纯度大于99%的式(Ⅰ)化合物,该高纯度药用化合物是通过下述方法得到的:
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及可药用化合物,具体涉及一种高纯度的多臂抗癌偶联物。
背景技术
中国专利申请201710263114.9公开了一种多臂抗癌偶联物BGC0222,该化合物的结构如式(Ⅰ)所示:
该化合物为多臂偶联物化合物,其药物载体的基本结构为四臂聚乙二醇,该四臂聚乙二醇被称为4ARM-PEG-20K,其分子量约为20kDa左右,分子量大,结构复杂。在制备BGC0222的过程中,BGC0222的粗品中含有较多杂质,这些杂质主要为没有偶联完全的化合物,这些杂质的存在直接影响药物的载药量。为了提高药物的载药量,唯一的方法就是将这些没有偶联完全的化合物除去,以提高BGC0222的纯度,但是由于这些杂质分子量大,结构复杂,使用常规的分离方法很难将这些杂质去除干净。
本申请研发人员通过深入研究发现,利用离子对色谱法,使用反相HPLC纯化,并使用庚烷磺酸钠/磷酸二氢钠/水/乙腈体系做流动相,可以将这些杂质很好的去除,提高药物纯度,并应用到相关生产工艺上。但是由于庚烷磺酸钠在HPLC制备纯化后转化成庚烷磺酸,庚烷磺酸属于强酸,会和BGC0222成盐,利用弱酸无法将庚烷磺酸完全置换出来,使得在后续纯化的脱盐过程中,无法将庚烷磺酸彻底脱除干净,还有较多的庚烷磺酸和BGC0222成盐,直接影响了药物的纯度及后续成药用盐的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纯度大于99%的BGC0222,该高纯度药用化合物是通过下述方法得到的
(1)将BGC0222的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,达到平衡的目的;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯的BGC0222。
其中,步骤(1)所使用的填料为苏州纳微科技的Unisil 10-300C18,流动相水相为加入磷酸二氢钠作为缓冲盐的庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈。优选0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液为流动相水相。
步骤(2)中,预脱盐的目的是将制备纯化分离得到的馏分中大量的盐先除掉一部分,因为太多的盐用离子交换方法无法脱除干净,超出填料的离子交换量。
预脱盐使用的流动相水相可以为醋酸水溶液、甲酸水溶液,有机相可以为甲醇、乙醇、乙腈中的一种或其混合溶液,优选5‰(v/v)醋酸水溶液作为流动相水相,乙腈作为流动相有机相。
由于BGC0222样品的水溶液呈粘稠状,步骤(4)分离纯化前的步骤(3),需要使用有机溶剂与水的混合溶液(即流动相)对离子交换柱进行冲洗,以达到降低样品过柱时的粘稠度,平衡离子交换柱的目的。使用的流动相水相为含有有机酸的水溶液,流动相有机相为乙腈、甲醇、乙醇中的一种或其混合溶液。
其中,有机酸可以为醋酸、甲酸、丙酸等,优选醋酸。最优选的流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2。
步骤(4)中,所使用的填料为阴离子交换填料,优选强碱型阴离子交换填料,更优选苏州纳微科技的UniGel-80Q填料。流动相和步骤(3)中所使用的流动相相同。
为了得到纯度大于99%的BGC0222,本发明最优的方法为:
(1)将BGC0222的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱,所使用的填料为苏州纳微科技的Unisil 10-300C18,流动相水相为0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱,5‰(v/v)醋酸水溶液作为流动相水相,乙腈作为流动相有机相;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,所使用的填料为苏州纳微科技的UniGel-80Q,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯度大于99%的BGC0222。
附图说明
图1:BGC0222粗品HPLC谱图,纯度<80%。
图2:BGC0222纯品HPLC谱图,纯度>99%。
具体实施例
在下面将对本发明进行详细描述。然而,本发明可能具体体现为许多不同的形式,而且它不应该被局限于此处所描述的实施例中,提供这些实施例中的目的是使所披露内容更完整与全面。所用试剂和原料,除了提供制备方法的除外,其余均为市售。除非另有定义,否则本文中所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属技术领域人员通常理解的含义相同。
其中,BGC0222粗品按照201710263114.9所公开的方法制备。
实施例1
第一步纯化:
制备柱:300DAC 300×250mm,填料:Unisil 10-300C18,流动相水相:0.02M磷酸二氢钠+0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相:乙腈,检测波长:220nm;
BGC0222粗品200g,用10%(V/V)乙腈/水溶解后上样,HPLC制备纯化,梯度洗脱(时间:0~100min;流动相有机相浓度:20%~60%)收集纯度大于95%的组分作为第一步纯化的产物。
实施例2
预脱盐:
制备柱:300DAC,填料:Unisil 10-300C18,流动相水相:5‰醋酸水溶液,流动相有机相:乙腈,检测波长:220nm;
将第一步纯化收集的纯品混合,进样,梯度洗脱(时间:0~80min;流动相有机相浓度:5%~80%),收集样品。
实施例3
平衡并进行第二步纯化:
填料:阴离子交换填料,型号:UniGel-80Q,数量:2L,柱子:玻璃柱(10*110cm),离子交换填料再生处理后,流动相洗涤离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2,平衡后,上样,使用相同的流动相离子交换除盐,洗脱并收集产品,得到纯度大于99%的BGC0222。
Claims (10)
1.纯度大于99%的式(Ⅰ)化合物,该高纯度药用化合物是通过下述方法得到的:
(1)将式(Ⅰ)化合物的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,达到平衡的目的;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯的式(Ⅰ)化合物。
2.如权利要求1所述的化合物,步骤(1)所使用的填料为Unisil 10-300C18,流动相水相为加入磷酸二氢钠作为缓冲盐的庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈。
3.如权利要求2所述的化合物,流动相水相为0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液。
4.如权利要求1所述的化合物,步骤(2)中,流动相水相为醋酸水溶液或甲酸水溶液,流动相有机相为甲醇、乙醇、乙腈中的一种或其混合溶液。
5.如权利要求4所述的化合物,流动相水相为5‰醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈。
6.如权利要求1所述的化合物,步骤(3)中,流动相为醋酸、甲酸或丙酸水溶液,流动相为醇、乙醇、乙腈中的一种或其混合溶液。
7.如权利要求6所述的化合物,流动相水相为5‰醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,流动相水相和有机相的体积比为3:2。
8.如权利要求1所述的化合物,步骤(4)中,所使用的填料为UniGel-80Q,流动相为醋酸、甲酸或丙酸水溶液,流动相为醇、乙醇、乙腈中的一种或其混合溶液。
9.如权利要求8所述的化合物,流动相水相为5‰醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,流动相水相和有机相的体积比为3:2。
10.如权利要求1-9任一所述的纯度大于99%的式(Ⅰ)化合物,该高纯度药用化合物是通过下述方法得到的:
(1)将式(Ⅰ)化合物的粗品,利用离子对色谱法,使用反相HPLC进行第一步纯化,使用流动相进行梯度洗脱,所使用的填料为苏州纳微科技的Unisil10-300C18,流动相水相为0.02M磷酸二氢钠/0.0075M庚烷磺酸钠水溶液,流动相有机相为乙腈;
(2)第一步纯化后,进行预脱盐处理,使用流动相进行梯度洗脱,5‰(v/v)醋酸水溶液作为流动相水相,乙腈作为流动相有机相;
(3)预脱盐处理完毕,使用流动相冲洗离子交换柱,流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2;
(4)利用离子交换色谱法进行离子交换,进行第二步纯化,所使用的流动相水相为5‰(v/v)醋酸水溶液,流动相有机相为乙腈,且醋酸水溶液和乙腈的体积比为3:2,将残留的庚烷磺酸除去,得到纯的式(Ⅰ)化合物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110256533A true CN110256533A (zh) | 2019-09-20 |
CN110256533B CN110256533B (zh) | 2022-05-10 |
Family
ID=67911406
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810199003.0A Active CN110256533B (zh) | 2018-03-12 | 2018-03-12 | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物的提取方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110256533B (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101372504A (zh) * | 2007-08-22 | 2009-02-25 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化去氨加压素的方法 |
US20130143909A1 (en) * | 2009-11-18 | 2013-06-06 | Nektar Therapeutics | Acid Salt Forms of Polymer-Drug Conjugates and Alkoxylation Methods |
CN103467574A (zh) * | 2013-09-05 | 2013-12-25 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种醋酸去氨加压素的纯化方法 |
CN107375288A (zh) * | 2016-05-16 | 2017-11-24 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂的聚合靶向抗癌偶联物 |
CN108727583A (zh) * | 2017-04-21 | 2018-11-02 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂靶向抗癌偶联物 |
-
2018
- 2018-03-12 CN CN201810199003.0A patent/CN110256533B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101372504A (zh) * | 2007-08-22 | 2009-02-25 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化去氨加压素的方法 |
US20130143909A1 (en) * | 2009-11-18 | 2013-06-06 | Nektar Therapeutics | Acid Salt Forms of Polymer-Drug Conjugates and Alkoxylation Methods |
US20150105519A1 (en) * | 2009-11-18 | 2015-04-16 | Nektar Therapeutics | Acid salt forms of polymer-drug conjugates and alkoxylation methods |
CN103467574A (zh) * | 2013-09-05 | 2013-12-25 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种醋酸去氨加压素的纯化方法 |
CN107375288A (zh) * | 2016-05-16 | 2017-11-24 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂的聚合靶向抗癌偶联物 |
CN108727583A (zh) * | 2017-04-21 | 2018-11-02 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 多臂靶向抗癌偶联物 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ALMA DAL POZZO等: "Conjugates of a Novel 7-Substituted Camptothecin with RGD-Peptides as r", 《BIOCONJUGATE CHEM.》 * |
ALMA DAL POZZO等: "Novel tumor-targeted RGD peptide–camptothecin conjugates:Synthesis and biological evaluation", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
DESHAN YU 等: "Antitumor activity of poly(ethylene glycol)–camptothecin conjugate: The inhibition of tumor growth in vivo", 《JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE》 * |
UTE HOCH · CARL-MICHAEL STASCHEN等: "Nonclinical pharmacokinetics and activity of etirinotecan pegol (NKTR-102), a long-acting topoisomerase 1 inhibitor, in multiple cancer models", 《CANCER CHEMOTHER PHARMACOL》 * |
ZHIWANG SONG等: "Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE》 * |
邱传龙等: "聚乙二醇偶联羟基喜树碱的合成、表征及聚集行为", 《高等学校化学学报》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110256533B (zh) | 2022-05-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN115505051B (zh) | 一种精制舒更葡糖钠的方法 | |
EP2504298B1 (en) | Preparation and purification of iodixanol | |
JP4594298B2 (ja) | 高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物 | |
CN105001309B (zh) | 一种达巴万星的分离纯化方法 | |
CN101372504A (zh) | 一种纯化去氨加压素的方法 | |
CN106831804B (zh) | 离子交换和硅胶柱层析法分离制备汉防己甲、乙素的方法 | |
CN111057140B (zh) | 一种Selepressin的纯化方法 | |
CN101787071B (zh) | 一种伐普肽的纯化方法 | |
CN102993293A (zh) | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 | |
CN102552340A (zh) | 银杏萜类内酯单体及银杏总黄酮的制备方法 | |
CN106167522A (zh) | 一种大规模分离纯化特立帕肽(Teriparatide)的方法 | |
CN102863517B (zh) | 一种戈舍瑞林的纯化方法 | |
TW201231475A (en) | Method for separating and purifying cyclohexapeptide compound and salt thereof | |
US20230075632A1 (en) | Method for preparing isavuconazonium sulfate | |
CN114644547A (zh) | 一种大麻二酚和/或次大麻二酚的制备方法 | |
JPH03118393A (ja) | ペプチド又はプソイドペプチド構造の低分子量化合物の精製方法 | |
CN110256533A (zh) | 一种高纯度的多臂抗癌偶联物 | |
CN101525382B (zh) | 一种纯化普兰林肽的方法 | |
CN110256534A (zh) | 一种多臂抗癌偶联物的纯化方法 | |
CN112279895B (zh) | 一种化学合成酸性多肽的制备方法 | |
CN107312072A (zh) | 一种纯化分离阿托西班的方法 | |
JPH07113024B2 (ja) | ピロロキノリンキノンの精製方法 | |
JP3382297B2 (ja) | 高純度デフェロキサミン塩の製造法 | |
CN105968173B (zh) | 米卡芬净前体fr901379的纯化方法 | |
JPWO2002051854A1 (ja) | アミノオリゴ糖誘導体の金属錯体の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |