JP4594298B2 - 高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物、医薬組成物におけるその使用のための該組成物の調製方法、および活性成分としてそれを含む医薬組成物に関する。

フォンダパリヌクスナトリウム、すなわち、式Ｉ：

で示される化合物であるメチル Ｏ−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−(スルホアミノ)−α−Ｄ−グルコピラノシル−(１→４)−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−(１→４)−Ｏ−２−デオキシ−３,６−ジ−Ｏ−スルホ−２−(スルホアミノ)−α−Ｄ−グルコピラノシル−(１→４)−２−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−(１→４)−Ｏ−２−Ｏ−スルホ−Ｌ−イドピラヌロシル−(１→４)−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−(スルホアミノ)−α−Ｄ−グルコピラノシド・１０ナトリウム塩は、非常に強力な抗第Ｘａ因子（抗Ｘａ）活性および非常に有利な抗血栓特性を有する化合物である。１７２８の分子量を有するこの化合物は、血栓塞栓症の治療および予防において使用されるものであり、皮下投与される医療用医薬品（specialite）Ａｒｉｘｔｒａ（登録商標）における活性成分である。

この化合物は、EP 084 999および米国特許第4,818,816号に記載されている方法に従って得られる。フォンダパリヌクスナトリウムは５０段階を超える工程を含む化学合成により誘導される。この方法により、フォンダパリヌクスナトリウムおよび他の近縁オリゴ糖からなる混合物である粗製フォンダパリヌクスナトリウムを得ることができる。陰イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により評価されるこの混合物のフォンダパリヌクスナトリウム含有量は約７０％である。

９６.０％を超えない純度を有するフォンダパリヌクスナトリウムを得るためであっても、カラムクロマトグラフィーおよび沈殿によるいくつかの精製工程が必要である。
さらにまた、合成の工程数の多さが工業用バッチの規格化を非常に困難にしている。

フォンダパリヌクスナトリウムおよびその合成中間体の構造の複雑さを考えると、合成の過程において多くの不純物が生じ得る。さらに、作業条件のほんの僅かな変化が相当な量の近縁生成物を含む粗製フォンダパリヌクスナトリウムのバッチを生じる。抗第Ｘａ因子活性を有しないか、または非常に僅かな活性しか有しないこれらの近縁生成物は、フォンダパリヌクスナトリウムに非常に類似している化学構造および物理化学的性質を有しており、上記の精製方法によって十分に除去することはできない。さらにまた、これらの生成物には、オートクレーブ処理のような方法により滅菌されると容易に分解してさらなる不純物を生成するものがあることが観察された。

医療用医薬品（specialite pharmaceutique）における活性成分であるフォンダパリヌクスナトリウムは、ある程度の品質基準および標準を満たさなければならず、特に、できる限り高い純度でなければならない。その結果、相当な量の近縁生成物を含む工業用バッチは、医療用医薬品の製造のために使用することができない。かくして、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物、特に、工業的な量のかかる組成物、およびそれらを得る方法をもつことは重要である。

驚くべきことに、この度、粗製フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも１つの活性炭による精製工程で処理し、次いで、カラムクロマトグラフィーまたは沈殿／結晶化のような糖を精製するための１つまたはそれ以上の慣用の工程で処理することにより高純度のフォンダパリヌクスナトリウムを得ることできるということが見出された。これらは、主にフォンダパリヌクスナトリウム、および五糖または八糖のような他のオリゴ糖、特に近縁五糖からなる組成物であり、フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９７％含んでいる。

本発明によると、これらの組成物は、特に製薬の分野において、工業的見地から非常に価値のあるものである。それらは、医薬品の品質を満たすものであり、医薬品における活性成分として使用することができる。

驚くべきことに、単に活性炭の上を通過させることにより、非常に異なる含有量のフォンダパリヌクスナトリウムおよび近縁不純物を有する粗製フォンダパリヌクスナトリウムのバッチから十分に決定された構成の組成物を得ることができることも見出された。

活性炭は、長い間、気体および液体から不純物を除去するために使用されてきた。例えば、活性炭は廃水および飲料水を精製するために使用される。活性炭はまた、精製されるべき生成物と比べて非常に異なる構造をもつ微量の不純物を除去するために使用される。

糖誘導体の分野では、グルコシドを精製するために活性炭が使用されてきた。例えば、特許出願FR 2 557 139には、酵母を用いて溶液中の粗製グルコシドを精製するための方法が記載されており、単糖またはオリゴ糖還元糖を減少させることができる。この方法によれば、活性炭は、還元オリゴ糖を含まないグルコシドの水溶液を脱色および脱臭するために最終段階で使用される。

さらにまた、特許出願FR 2 732 024には、液相において活性炭を使用して、化学的に修飾されたシクロデキストリンを精製するための方法が記載されている。この方法によれば、特定の起源の活性炭だけ、特に石炭およびココナッツの殻から得られた活性炭だけがシクロデキストリンの化学的修飾の間に生成される有機不純物および残留反応溶媒を除去することができる。

精製されるべき物質と類似の構造を有する多量の不純物を処去することにより物質を精製することができる活性炭を用いる公知の方法はあまりない。例えば、活性炭および特定の物質を用いる２,６−ナフタレンカルボン酸の精製方法を記載している国際公開WO 01/16079が知られている。この方法は、合成から不純物、特に、１−ナフタレンカルボン酸および２−ナフタレンカルボン酸を除去することができる。この方法によれば、精製されるべき生成物の溶液を、活性炭を含有する吸収剤のマイクロビーズで濾過する。

本発明は、近縁オリゴ糖である不純物を低い割合で含有するものを包含する、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物に関する。

EP 084 999および米国特許4,818,816号に記載されている方法に従って得られた精製フォンダパリヌクスナトリウムの陰イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による分析およびλ＝２１０ｎｍでのＵＶによる検出により、近縁オリゴ糖であるいくつかの不純物を同定することができる。同定された主な不純物は以下のとおりである。

不純物Ａ（フォンダパリヌクスナトリウムの保持時間に対する相対的な保持時間（Ｒｒｔ）＝０.８）
式ＩＩ：

で示される化合物であるメチル (２−アミノ−２−デオキシ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシド

不純物Ｂ（Ｒｒｔ＝０.９３）
主に、式ＩＩＩ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２,３−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである不純物および式ＩＶ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−２−ホルミルアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである不純物からなる混合物であり、後者は混合物中にあまり生じず、存在しないことがよくある。

不純物Ｃ（Ｒｒｔ＝１.２）
主に式Ｖ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−シクロヘキシルメチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドからなる混合物である。

不純物Ｄ（Ｒｒｔ＝１.３）
式ＶＩ：

で示される化合物であるメチル (ナトリウム ４−Ｏ−｛ナトリウム ７−ヒドロキシ−２−オキソ−６−[(スルホナトオキシ)メチル]ヘキサヒドロ−４−Ｈ−ピラノ[３,４−ｄ][１,３]オキサゾール−４−イル｝−β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである。

不純物Ｅ（Ｒｒｔ＝１.４）
式ＶＩＩ：

で示される化合物であるメチル (３,４−ジ−Ｏ−[(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル]−２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウムスルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウムスルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである。

不純物Ｆ（Ｒｒｔ＝１.５）
式ＶＩＩＩ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル−(１→４)−(ナトリウム β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−ベンズアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである。

不純物Ｇ（Ｒｒｔ＝１.５８）
式ＩＸ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−２−ナトリウムスルホアミノ−６−Ｏ−ナトリウムスルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ３−Ｏ−シクロヘキシルメチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロナート)−(１→４)−(２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウムスルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである。

不純物Ｈ（Ｒｒｔ＝１.６０）
式Ｘ：

で示される化合物であるメチル (２−デオキシ−４−Ｏ−｛ジナトリウム ３,４,８−トリヒドロキシ−１１−オキソ−９−(スルホナトオキシ)−７−[(スルホナトオキシ)メチル]デカヒドロ−２Ｈ,５ａＨ−ジピラノ[２,３−ｂ:２,３−ｆ][１,４]オキサゼピン−２−イル｝−２−ナトリウム スルホアミノ−３,６−ジ−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→４)−(ナトリウム ２−Ｏ−ナトリウム スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシルウロナート)−２−デオキシ−２−ナトリウム スルホアミノ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシドである。

上記不純物は、マススペクトロメトリーおよび／またはＮＭＲスペクトロメトリーにより同定された。

これらの化合物の吸光係数は正確に評価されていないが、粗製フォンダパリヌクスナトリウムにおけるまたは本発明のフォンダパリヌクスナトリウム組成物におけるこれらの化合物の量は、下記式にしたがってパーセント（％）として表される：
［Ａ_i／Ａ_total]×１００
Ａ_i： 分析されるべき溶液について得られたクロマトグラムにて得られた近縁物質「ｉ」に相当するピークの面積。
Ａ_total： 試験溶液において観察されたピークの合計面積。

図１は、フォンダパリヌクスナトリウムの保持時間と比べたオリゴ糖不純物の保持時間を示す陰イオン交換ＨＰＬＣクロマトグラムである。

本発明は、フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９７％、好ましくは少なくとも９８％含有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物であって、残りの成分が近縁オリゴ糖であり、組成物中のフォンダパリヌクスナトリウムの量は決して１００％にはならないと解される、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物に関する。これらの組成物のうち、不純物Ｂの量が多くとも０.８％である組成物が好ましく、特に、後者の組成物のうち、不純物Ｄの量が多くても１.０％、好ましくは０.５％であるものが好ましい。

本発明は、特に、フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９８％含有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物であって、残りの成分が近縁オリゴ糖であり、組成物中のフォンダパリヌクスナトリウムの量は決して１００％にはならないと解され、不純物Ｂの量が多くても０.８％であり、不純物Ｃの量が多くても１.０％であり、不純物Ｄの量が多くても０.５％である、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物に関する。これらの組成物のうち、不純物Ｂの量が多くても０.８％であり、不純物Ｃの量が多くても０.６％であり、不純物ＢおよびＣ以外の近縁オリゴ糖不純物の各々の量が多くても０.３％である組成物が好ましい。

本発明はまた、特に、フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９８％含有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物であって、残りの成分が近縁オリゴ糖であり、組成物中のフォンダパリヌクスナトリウムの量は決して１００％にはならないと解され、不純物Ｂの量が多くても０.８％であり、不純物Ｄの量が多くても０.５％であり、不純物ＢおよびＤ以外の近縁オリゴ糖不純物の各々の量が多くても０.３％である、高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物に関する。これらの組成物のうち、不純物Ｄの量が多くても０.３％である組成物が好ましく、不純物Ｂの量が多くても０.５％であり、不純物Ｄの量が多くても０.３％である組成物が特に好ましい。

これらの組成物は全て、好ましくは、工業的な量、より正確には、５ｇ〜８０００ｇ、例えば、１０ｇ、１００ｇ、５００ｇ、８００ｇ、１０００ｇ、２０００ｇまたは５０００ｇの量であり、粗製フォンダパリヌクスナトリウムから得ることができる。

上記のように、フォンダパリヌクスナトリウムは５０段階を超える工程を含むオリゴ糖の化学合成により誘導される。この方法により、イオンＨＰＬＣにより純度約７０％である粗製フォンダパリヌクスナトリウムを得ることができる。

本発明の組成物を得るために、該粗製フォンダパリヌクスに対して活性炭を作用させる。驚くべきことに、この工程により、存在する不純物、特に、フォンダパリヌクスナトリウムと類似の構造をもつが活性成分としてフォンダパリヌクスナトリウムを有する医療用医薬品を滅菌する種々の工程の間に非常に容易に分解する化合物である不純物Ｄの量を実質的に減少させることができる。

次いで、このようにして得られた組成物を、これまでオリゴ糖のために用いられてきた慣用の方法で、すなわち、カラムクロマトグラフィーおよびエタノール沈殿による精製を用いて、精製する。かくして、この活性成分の含有量が少なくとも９７％である高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる。

少なくとも１つの活性炭による精製工程で処理されるフォンダパリヌクスナトリウムの組成物もまた本発明の一部である。

本発明はまた、少なくとも１つの活性炭による精製工程を含む、フォンダパリヌクスナトリウムの精製方法にも関する。

本発明の組成物を得るために使用される活性炭は、植物（木、ピート、ココナッツの殻またはコーヒーの実）、鉱物（木炭、石炭または炭化水素）または動物（血液、骨など）のような種々の化合物から生成することができる。

活性炭といわれるこれらの炭は、蒸気の作用または化学的作用のいずれかにより活性化される。それにより生じる多孔度は該炭の吸収性を決定し、それにその有効性を与える。本発明によると、蒸気で活性化された植物起源の炭を使用するのが好ましい。Noritにより製造されるＮｏｒｉｔ Ａ Ｓｕｐｒａ Ｅｕｒｏ（登録商標）のタイプの植物炭が好ましい。

CECAにより提供される３Ｓ（登録商標）のタイプ、CECAにより提供されるＣＰＬ（登録商標）のタイプ、Noritにより提供されるＧＡＣ １２４０（登録商標）のタイプ、またはCECAにより提供される４ＳＣのタイプの活性炭もまた好ましい。

活性炭による精製は、エタノール沈殿の前または後で、水溶液中の粗製フォンダパリヌクスナトリウムに対して行うことができる。この活性炭による精製は、好ましくは、エタノール沈殿による最初の精製を行った後に行われる。

活性炭での処理は、粉末炭と一緒にバッチ系において、または、フィルタープレートに付着させた炭と一緒に動力学的系において、行うことができる。
動力学的系における処理が好ましい。

活性炭対フォンダパリヌクスナトリウムの割合は５０％〜１５０％、好ましくは８０％〜１２５％、特に１００％である。

活性炭での処理またはフィルターでの動力学的系における処理の２つの場合において、該精製は、５℃〜５０℃の温度、有利には１５℃〜３５℃の温度、好ましくは周囲温度で行われる。

精製されるべき粗製フォンダパリヌクスの溶液のｐＨは、必要ならば、５〜１０、好ましくは７〜９に調整される。

最初の濾液および洗液をプールし、１μｍ未満、有利には０.２２μｍ未満の多孔度をもつ膜で濾過する。

本発明はまた、活性成分として本発明の精製フォンダパリヌクスナトリウム組成物を含む医薬組成物に関する。これらの組成物は、好ましくは、皮下投与または非経口投与のための注射液の剤形である。

以下の非限定的な実施例は本発明を説明する。

組成物におけるフォンダパリヌクスナトリウム価の測定
フォンダパリヌクスナトリウム価をイオンＨＰＬＣおよびλ＝２１０ｎｍでのＵＶによる検出により測定する。

高速液体クロマトグラフィーについて、以下のものを使用する：ａ）第４級アンモニウム官能基をもつラテックスマイクロビーズがグラフトされている高分子マトリックスが充填されている、長さ２５０ｍｍ、内径４ｍｍの陰イオン交換カラム（Ｄｉｏｎｅｘ Ｃａｒｂｏｐａｃ（登録商標）ｒｅｆ０３５３９１または等価物）およびｂ）分析用カラムとしての、同固定相が充填されている、長さ５０ｍｍ、内径４ｍｍの陰イオン交換プレカラム（Ｄｉｏｎｅｘ Ｃａｒｂｏｐａｃ（登録商標）ｒｅｆ０４３０９６または等価物）。分析の間、カラム温度を３０℃に維持する。

移動相として、移動相Ａ（Ｈ₂Ｏ １０００ｍｌで１／１０に希釈したジメチルスルホキシドの溶液１５０μｌ）および移動相Ｂ（Ｈ₂Ｏ １０００ｍｌに溶解したＮａＣｌ １１７ｇ）の混合物を使用する。

移動相の流速を１ｍｌ／分に調節し、以下の線勾配を使用した。

系の一致は主要な不純物を含んでいる参照溶液を用いて評価する。基準クロマトグラムを図１に示す。

不純物Ｂ（Ｒｒｔ＝０.９３）についてのピークおよびこのピークの直後に溶出するピークは、２つの異なるピークとして出現する。
不純物ＤについてのピークおよびＲｒｔ＝１.２９についてのピークは、２つの異なるピークとして出現する。
不純物Ｇ（Ｒｒｔ＝１.５８）についてのピークおよび不純物Ｈ（Ｒｒｔ＝１.６０）についてのピークは、２つの異なるピークとして出現する。

約１０ｍｇ／ｍｌの既知のフォンダパリヌクスナトリウム含有量を含むフォンダパリヌクスナトリウム組成物の溶液を参照溶液（ＲＳ）として使用する。Ｈ₂Ｏ １０ｍｌ中に分析されるべき組成物１００ｍｇを含有する溶液を試験溶液（Ｓ２）として使用する。

水および溶媒を含まない分析されるべき組成物中のフォンダパリヌクスナトリウムの濃度は、下記式に従って算出される。
Cref(a) × [S(a)／Sref(a)] × V／m × 100 × [100/100 − (E＋S)]
ここで、
Ｃｒｅｆ(ａ)： 参照溶液ＲＳ中のフォンダパリヌクスナトリウムの濃度（ｍｇ／ｍｌ）
Ｓ(ａ)およびＳｒｅｆ(ａ)： それぞれ試験溶液Ｓ２および参照溶液ＲＳを用いて得られたフォンダパリヌクスナトリウムのピークの面積
Ｖ： 試験溶液Ｓ２を調製するための試験試料を溶解するための体積（ｍｌ）
ｍ： 試験溶液Ｓ２を調製するための分析されるべき物質についての試験試料
Ｗ： 分析されるべき物質の含水率（％）
Ｓ： 分析されるべき物質の溶媒含有率（％）

水および溶媒を含まない分析されるべき組成物の分析されるべき溶液中の近縁物質の含有率は下記式に従って算出される。
[Ａ_i／Ａ_total] × １００
ここで、
Ａ_i： 試験溶液Ｓ２を用いて得られたクロマトグラムについて観察された近縁物質「ｉ」に相当するピークの面積
Ａ_total： 試験溶液Ｓ２において観察されたピークの合計面積

実施例１
本発明の組成物の調製
工程Ａ： 粗製フォンダパリヌクスナトリウムの精製 − 撹拌バッチ式木炭処理
撹拌バッチ式系における処理のために、粗製フォンダパリヌクスナトリウムを脱イオン水に、１リットル当たり純粋なフォンダパリヌクスナトリウム４０〜６０ｇの割合で溶解する。

この試験に用いられる粗製フォンダパリヌクスナトリウムのバッチはフォンダパリヌクスナトリウム７１.４％を含有する。
不純物Ａの量は１.５％に等しく、
不純物Ｂの量は１.７％に等しく、
不純物Ｃの量は０.７％に等しく、
不純物Ｄの量は１.６％に等しく、
不純物Ｆの量は４.５％に等しく、
不純物Ｇの量は０.３％に等しく、
不純物Ｈの量は０.５％に等しい。

該溶液のｐＨを７.６に調整する。
粗製フォンダパリヌクスナトリウムの塩の含有量は炭処理の作用を可能にする溶液中の導電率を保証するのに十分である。しかしながら、必要であれば、該導電率は粉末塩化ナトリウムを導入することにより３０〜１００ｍＳ／ｃｍに調節してもよい。

植物炭（粉末Ｎｏｒｉｔ Ａ Ｓｕｐｒａ Ｅｕｒｏ（登録商標））を１００％で加える。
媒質を２〜４時間、好ましくは３時間撹拌し、次いで、濾過する。
次いで、該炭を導電率５０ｍＳ／ｃｍの水／塩化ナトリウムの溶液で洗浄する。
この洗浄は最初に使用した溶液の体積の二等分の体積を用いて二段階で行われ、該炭を再度ペースト状にし、濾過する。

次いで、最初の濾液および洗液をプールし、多孔度０.２２ｍｍの膜で濾過する。
かくして得られた組成物はフォンダパリヌクスナトリウムを９４％含有する。
不純物Ａの量は０.１％未満であり、
不純物Ｂの量は０.６％と等しく、
不純物Ｃの量は０.１％未満であり、
不純物Ｄの量は０.２％と等しく、
不純物Ｆの量は０.１％未満であり、
不純物Ｇの量は０.１％未満であり、
不純物Ｈの量は０.１％未満である。
収率：９０％。

工程Ｂ： 陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製
前の工程で得られたフォンダパリヌクスナトリウム組成物を、次いで、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｑ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラムにて陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製する。該カラムを０.２Ｍ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）で平衡させる。フォンダパリヌクスナトリウム組成物を水に溶解し、水またはＮａＣｌを用いて導電率を２０ｍＳ／ｃｍ未満に調節する。

精製されるべき生成物をゲル１リットル当たりフォンダパリヌクスナトリウム１５ｇの割合で添加する。カラム供給ラインを０.２Ｍ ＮａＣｌですすぎ、次いで、該カラムを０.４６Ｍ ＮａＣｌ溶液で洗浄し、弱く荷電した不純物を除去することができる。

次いで、フォンダパリヌクスナトリウムを０.８Ｍ ＮａＣｌ溶液で溶離し、次いで、該カラムを再生させ、高く荷電した不純物を２.００Ｍ ＮａＣｌ溶液で脱着させる。

フラクションを分析し、９５％よりも高いかまたはそれに等しい純度をもつフラクションをプールする。

フォンダパリヌクスナトリウムを含有する精製溶液を濃縮して２０〜７０ｇ／ｌのフォンダパリヌクスナトリウムを含有する溶液を得る。水またはＮａＣｌを使用して導電率を４５〜９０ｍＳ／ｃｍに調節する。かくして得られた溶液をマイクロフィルトレーション膜で濾過し、次いで、１：５（Ｖ／Ｖ）の比率でエタノールと混合する。

かくして、沈殿により以下の特徴を有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９９.８％を超える
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.２％未満
不純物Ｃ含有量 ０.１％未満
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ、ＧおよびＨの含有量 ０.１％未満
累積収率： ９０.４％

実施例２
カラムクロマトグラフィーおよび沈殿による粗製フォンダパリヌクスナトリウムの精製（炭での精製を用いない）
工程Ａ
試験するために使用する粗製フォンダパリヌクスのバッチは実施例１に記載されているものである。
このバッチを、実施例１の工程Ｂに記載した条件に従ってカラムクロマトグラフィーにより精製した。

工程Ｂ
この精製の次に、以下の条件に従ってＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｑ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラムで２度目の精製を行った：
該カラムを０.４Ｍ ＮａＣｌ溶液で平衡させた。精製されるべきフォンダパリヌクスナトリウム組成物を水で希釈し、水またはＮａＣｌを用いて導電率を３５ｍＳ／ｃｍ未満に調節した。このフォンダパリヌクスナトリウム溶液をゲル１リットル当たりフォンダパリヌクスナトリウム１２〜１５ｇの割合で添加した。

カラム供給ラインを０.４Ｍ ＮａＣｌですすぎ、次いで、該カラムを０.４８Ｍ ＮａＣｌ溶液ですすいだ（弱く荷電した不純物の脱着）。次に、該フォンダパリヌクスを０.７５Ｍ ＮａＣｌ溶液で溶離し、次いで、カラムを再生し、高く荷電した不純物を２.００Ｍ ＮａＣｌ溶液で脱着した。

種々のフラクションを分析し、９５％を超えるかまたはそれに等しい純度を有するものをプールした。
次に、ナノフィルトレーションを行い、その後、マイクロフィルトレーションを行い、次いで、実施例１の工程Ｂに記載した沈殿を行った。

かくして得られたフォンダパリヌクスナトリウム組成物は以下の特徴を有する：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９６.０％
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.２％未満
不純物Ｃ含有量 ０.７％
不純物Ｄ含有量 １.４％
不純物Ｆ含有量 １.２％
不純物Ｇ含有量 ０.２％未満
不純物Ｈ含有量 ０.６％
累積収率 ８８.５％

実施例３
本発明の組成物の調製
工程Ａ： 粗製フォンダパリヌクスナトリウムの精製 − 活性炭による動力学的処理
動力学的処理に関して、粗製フォンダパリヌクスナトリウムを含有する溶液の調製方法は実施例１の工程Ａに記載されている方法と同一である。使用されるフォンダパリヌクスナトリウムの溶液は脱イオン水１リットル当たり５０ｇのフォンダパリヌクスナトリウム濃度を有する。ｐＨを５〜１０に調整し、該溶液の導電率を３０〜１００ｍＳ／ｃｍに調整する。

この場合、２枚のセルロースプレート（ＣＵＮＯフィルター）の間で樹脂型アジュバントを使用して活性炭をフィルター中に固定する。フィルターを通るパーコレーションの流速は１０００リットル／時／ｍ²である。該溶液を２時間再循環させる。

導電率５０ｍＳ／ｃｍをもつＮａＣｌ溶液の、使用される初期体積の８０％に相当する体積を用いて洗浄を行う。３回連続洗浄を行う。
次に、最初の濾液および洗液をプールし、１μｍ未満の多孔度をもつ膜で濾過する。

この試験のために使用される粗製フォンダパリヌクスナトリウムのバッチはフォンダパリヌクスナトリウムを７３％含有している。
不純物Ａの量は３.９％に等しく、
不純物Ｂの量は３.０％に等しく、
不純物Ｃの量は０.７％に等しく、
不純物Ｄの量は０.９％に等しく、
不純物Ｆの量は０.３％に等しく、
不純物Ｇの量は０.４％に等しく、
不純物Ｈの量は０.３％である。
他の同定されない近縁オリゴ糖の量： 約１％

活性炭での処理の後、フォンダパリヌクスナトリウム組成物は以下のとおりである：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９０.７％
不純物Ａ含有量 ０.２％未満
不純物Ｂ含有量 ２.１％
不純物Ｃ含有量 ０.２％未満
不純物Ｄ含有量 ０.３％
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
収率： ９３.１％

工程Ｂ： 陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製
次いで、実施例１の工程Ｂに記載の方法を行う。フラクションの分析後、７０％を超える純度を有するフラクションをプールする。
この工程の最後に、以下の特徴をもつ高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９９.１％
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.５％
不純物Ｃ含有量 ０.１％未満
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
他の同定されない近縁オリゴ糖の合計： ０.４％

次いで、実施例２の工程Ｂに記載するように陰イオン交換クロマトグラフィーによる２度目の精製を行う。この工程の最後に、以下の特徴を有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９９.７％
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.３％
不純物Ｃ含有量 ０.１％未満
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
他の同定されない近縁オリゴ糖の合計： ０.２％未満
累積収率： ９０.１％

実施例４
本発明の組成物の調製
工程Ａ： 粗製フォンダパリヌクスナトリウムの精製 − 活性炭による動力学的処理
動力学的処理に関して、粗製フォンダパリヌクスナトリウムを含有する溶液の調製方法は実施例１の工程Ａに記載されている方法と同一である。この実施例で使用するフォンダパリヌクスナトリウムの溶液は注射用製剤のための水１リットル当たり３０〜３５ｇのフォンダパリヌクスナトリウム濃度を有する。ｐＨを７.１に調整し、溶液の導電率を２０〜３０ｍＳ／ｃｍに調整する。

この場合、２枚のセルロースプレート（ＣＵＮＯフィルター）の間で樹脂型アジュバントを使用して活性炭をフィルター中に固定する。フィルターを通るパーコレーションの流速は１００〜５００リットル／時／ｍ²である。該溶液を２時間再循環させる。

導電率２０〜３５ｍＳ／ｃｍをもつＮａＣｌ溶液の、使用される初期体積の１５０％に相当する体積を用いて洗浄を行う。該洗浄を、フィルターに再循環させずに連続して行う。
次に、最初の濾液および洗液をプールし、１μｍ未満（０.２２μｍ）の多孔度をもつ膜で濾過する。

この試験のために使用される粗製フォンダパリヌクスナトリウムのバッチはフォンダパリヌクスナトリウム７３.６％を含有している。
不純物Ａの量は２.７％に等しく、
不純物Ｂの量は３.４％に等しく、
不純物Ｃの量は０.９％に等しく、
不純物Ｄの量は０.５％に等しく、
不純物Ｆの量は０.４％に等しく、
不純物Ｇの量は０.２％に等しく、
不純物Ｈの量は０.３％である。
他の同定されない近縁オリゴ糖の量： 約１８％

活性炭での処理の後、フォンダパリヌクスナトリウム組成物は以下のとおりである：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ８９.６％
不純物Ａ含有量 ０.２％未満
不純物Ｂ含有量 ２.５％
不純物Ｃ含有量 ０.７％
不純物Ｄ含有量 ０.２％未満
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
収率： ９７％

工程Ｂ： 陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製
次いで、実施例１の工程Ｂに記載の方法を行う。フラクションの分析後、７０％を超える純度を有するフラクションをプールする。
この工程の最後に、以下の特徴をもつ高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９７％
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.９％
不純物Ｃ含有量 ０.２％
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
他の同定されない近縁オリゴ糖の合計： 約２％
累積収率： ９４％

次いで、実施例２の工程Ｂに記載するように陰イオン交換クロマトグラフィーによる２度目の精製を行う。この工程の最後に、以下の特徴を有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９９％
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.２％
不純物Ｃ含有量 ０.１％未満
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ含有量 ０.１％未満
不純物Ｇ含有量 ０.１％未満
不純物Ｈ含有量 ０.１％未満
他の同定されない近縁オリゴ糖の合計： 約０.８％
累積収率： ８７.７％

フォンダパリヌクスナトリウムを含有する精製溶液を濃縮して２０〜７０ｇ／ｌのフォンダパリヌクスナトリウムを含有する溶液を得る。水またはＮａＣｌを用いて導電率を４５〜９０ｍＳ／ｃｍに調節する。かくして得られた溶液をマイクロフィルトレーション膜で濾過し、次いで、１：５（Ｖ／Ｖ）の比率でエタノールと混合する。

かくして、沈殿により以下の特徴を有する高純度フォンダパリヌクスナトリウム組成物が得られる：
フォンダパリヌクスナトリウム含有量 ９９.１％を超える
不純物Ａ含有量 ０.１％未満
不純物Ｂ含有量 ０.２％未満
不純物Ｃ含有量 ０.３％未満
不純物Ｄ含有量 ０.１％未満
不純物Ｆ、ＧおよびＨの含有量 ０.１％未満
累積収率： ７８％

（原文に記載なし）

Claims (12)

1. フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９７％含有する組成物の製造方法であって、該組成物がさらに
   ａ）最高で０.８％までの、式ＩＩＩ：
   

   

   で示されるオリゴ糖、または式ＩＩＩで示されるオリゴ糖と式ＩＶ：
   

   

   で示されるオリゴ糖の混合物、
   ｂ）最高で１.０％までの式ＶＩ：
   

   

   で示されるオリゴ糖、および
   ｃ）最高で１.０％までの式Ｖ：
   

   

   で示されるオリゴ糖
   を含み、該製造方法が、不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムを活性炭で処理する工程、次いで、カラムクロマトグラフィーにより精製する工程を含む、方法。
2. 不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムの水溶液を活性炭床に通す、請求項１記載の方法。
3. 活性炭が植物起源のものであり、蒸気により活性化される、請求項１記載の方法。
4. エチルアルコールを使用するフォンダパリヌクスナトリウムの沈殿工程を含む、請求項１記載の方法。
5. フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９７％含有する組成物の製造方法であって、該組成物がさらに
   ａ）最高で０.８％までの、式ＩＩＩ：
   

   

   で示されるオリゴ糖、または式ＩＩＩで示されるオリゴ糖と式ＩＶ：
   

   

   で示されるオリゴ糖の混合物、および
   ｂ）最高で０.６％までの式Ｖ：
   

   

   で示されるオリゴ糖
   のうち少なくとも１つを含み、該製造方法が、不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムを活性炭で処理する工程、次いで、カラムクロマトグラフィーにより精製する工程を含む、方法。
6. 不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムを活性炭床に通す、請求項５記載の方法。
7. 活性炭が植物起源のものであり、蒸気により活性化される、請求項５記載の方法。
8. エチルアルコールを使用するフォンダパリヌクスナトリウムの沈殿工程を含む、請求項５記載の方法。
9. フォンダパリヌクスナトリウムを少なくとも９８％含有する組成物の製造方法であって、該組成物がさらに
   ａ）最高で０.５％までの、式ＩＩＩ：
   

   

   で示されるオリゴ糖、または式ＩＩＩで示されるオリゴ糖と式ＩＶ：
   

   

   で示されるオリゴ糖の混合物、および
   ｂ）最高で０.３％までの式ＶＩ：
   

   

   で示されるオリゴ糖
   のうち少なくとも１つを含み、
   該製造方法が、不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムを活性炭で処理する工程、次いで、カラムクロマトグラフィーにより精製する工程を含む、方法。
10. 不純物を含むフォンダパリヌクスナトリウムを活性炭床に通す、請求項９記載の方法。
11. 活性炭が植物起源のものであり、蒸気により活性化される、請求項９記載の方法。
12. エチルアルコールを使用するフォンダパリヌクスナトリウムの沈殿工程を含む、請求項９記載の方法。

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