CN102099013A - 用于治疗耳部病症的控制释放凋亡调节组合物和方法 - Google Patents

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贝内迪克特·福尔拉特
安德鲁·M·特拉梅尔
塞尔希奥·G·杜龙
法布里斯·皮乌
路易斯·A·德拉玛丽
叶强
卡尔·勒贝尔
迈克尔·克里斯托弗·斯凯夫
杰弗里·P·哈里斯
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Abstract

本文公开用于以凋亡调节剂组合物和组合物治疗耳部病症的组合物和方法，其中所述凋亡调节剂组合物和组合物通过将这些组合物和组合物直接施用于目标耳结构上或经由灌注施用于目标耳结构中来局部投予罹患耳部病症的个体。

Description

用于治疗耳部病症的控制释放凋亡调节组合物和方法
交叉引用
本申请案主张以下的权利：2008年7月14日申请的美国临时申请案第61/080,583号、2008年7月21日申请的美国临时申请案第61/082,450号、2008年9月4日申请的美国临时申请案第61/094,384号、2008年9月29日申请的美国临时申请案第61/101,112号、2008年10月31日申请的美国临时申请案第61/110,511号、2008年12月22日申请的美国临时申请案第61/140,033号、2008年3月30日申请的美国临时申请案第61/164,841号、及2009年4月24日申请的英国专利申请案第0907065.7号，所有专利以全文引用的方式并入本文中。
背景技术
脊椎动物具有一双耳朵，对称地位于头部的相对侧。耳朵用作检测声音的感觉器官与维持平衡和体位的器官。耳朵一般分成三个部分：外耳(outer ear)、中耳(aurismedia/middle ear)和内耳(auris interna/inner ear)。
发明内容
在某些实施例中，本文描述用于将抗凋亡剂或促凋亡剂控制释放至耳朵的至少一个结构或区域的组合物、组合物、制造方法、治疗方法、用途、试剂盒和传递装置。在某些实施例中，本文公开用于将抗凋亡剂或促凋亡剂传递至耳朵的控制释放组合物。在一些实施例中，耳朵的目标部分是中耳。在一些实施例中，耳朵的目标部分是内耳。在其它实施例中，耳朵的目标部分是中耳与内耳。在一些实施例中，控制释放组合物另外包含用于将抗凋亡剂或促凋亡剂传递至目标耳结构的迅速释放或立即释放组分。所有组合物均包含耳可接受的赋形剂。
在某些实施例中，本文还公开用于治疗耳部病症的组合物和装置，所述组合物和装置包含抗凋亡剂或促凋亡剂。在某些实施例中，本文另外公开用于治疗耳部病症的方法，其通过投予有需要的个体包含抗凋亡剂或促凋亡剂的控制释放组合物来进行。在一些实施例中，耳部病症是兴奋性毒性(excitotoxicity)、耳毒性(ototoxicity)、老年性耳聋(presbycusis)或其组合。
在某些实施例中，本文还公开用于选择性诱导耳朵目标部分凋亡的组合物和装置，所述目标部分包括中耳(包括其中的亚结构)和/或内耳(包括其中的亚结构，例如耳蜗)，所述组合物和装置包含促凋亡剂。在某些实施例中，本文还公开用于选择性防止耳朵目标部分凋亡的组合物和装置，所述目标部分包括中耳(包括其中的亚结构)和/或内耳(包括其中的亚结构，例如耳蜗)，所述组合物和装置包含抗凋亡剂。
本文所述的耳组合物和治疗方法具有许多克服现有技术中描述的组合物和治疗方法的先前未被认识的局限性的优点。
无菌
内耳环境是隔离的环境。内淋巴和外淋巴是静态流体，且不与循环系统邻接接触。包括血液-内淋巴障壁和血液-外淋巴障壁的血液-迷路-障壁(BLB)由迷路空间(即，前庭和耳蜗空间)中的特有上皮细胞之间的紧密连接组成。BLB的存在限制活性剂(例如抗凋亡剂或促凋亡剂)向内耳的隔离微环境中的传递。耳毛细胞浸于内淋巴或外淋巴流体中，且钾离子的耳蜗再循环对毛细胞功能来说很重要。当内耳感染时，白血球和/或免疫球蛋白(例如应答微生物感染)流入内淋巴和/或外淋巴中，且内耳流体的离子组成被白血球和/或免疫球蛋白的流入扰乱。在某些情况下，内耳流体的离子组成的变化导致听力丧失、失去平衡和/或听觉结构骨化。在某些情况下，痕量热原和/或微生物引发内耳隔离微环境中的感染和相关生理变化。
归因于内耳对感染的敏感性，耳组合物需要现有技术中迄今尚未认识到的无菌水平。本文提供按严格的无菌要求灭菌且适于投予中耳和/或内耳的耳组合物。在一些实施例中，本文所述的耳相容性组合物实质上不含热原和/或微生物。
与内耳环境的相容性
本文描述离子平衡与外淋巴和/或内淋巴相容且不引起耳蜗电位的任何变化的耳部组合物。在特定实施例中，本发明组合物的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度例如通过使用适当的盐浓度(例如钠盐浓度)或使用使组合物变得内淋巴相容和/或外淋巴相容(即，与内淋巴和/或外淋巴等张)的张度剂来调整。在一些情况下，本文所述的内淋巴相容和/或外淋巴相容组合物在投予之后对内耳环境的干扰最小且个体(例如人类)不适(例如眩晕)程度最低。另外，组合物包含生物可降解和/或可分散和/或换句话说对内耳环境来说无毒的聚合物。在一些实施例中，本文所述的组合物不含防腐剂且对听觉结构的干扰(例如pH值或重量渗透摩尔浓度的变化、刺激)最小。在一些实施例中，本文所述的组合物包含对耳部结构无刺激和/或无毒的抗氧化剂。
给药频率
耳组合物的现行护理标准需要经若干天(例如长达两周)多次投予数滴或数次注射(例如鼓室内注射)，包括每天接受多次注射的日程。在一些实施例中，本文所述的耳组合物是控制释放组合物且以与现行护理标准相比减少的给药频率投予。在某些情况下，当耳组合物经由鼓室内注射投予时，减少的投药频率缓和正进行中耳和/或内耳疾病、病症或病状治疗的个体的由多次鼓室内注射引起的不适。在某些情况下，减少的鼓室内注射投药频率使永久性损伤鼓膜(例如鼓膜穿孔)的风险降低。本文所述的组合物向内耳环境恒定、持续、延长、延迟或脉动速率释放活性剂，因此避免耳部病症治疗中药物暴露的任何可变性。
治疗指数
本文所述的耳组合物投予耳道中或耳朵前庭中。在一些实施例中，到达前庭和耳蜗器官要穿过中耳(例如圆窗膜(round window membrane)、卵圆窗/镫骨足板、环状韧带和穿过听囊/颞骨)。本文所述的组合物的耳部投药避免活性剂的与全身性投药相关的毒性(例如肝毒性、心脏毒性、胃肠副作用、肾毒性)。在一些情况下，耳朵局部投药允许活性剂在无全身性活性剂积聚的情况下到达目标(例如内耳)。在一些情况下，耳朵局部投药提供较高的活性剂治疗指数，换句话说，将具有给药限制性全身性毒性。
防止排入咽鼓管中
在一些情况下，液体组合物的缺点是倾向于滴入咽鼓管中且导致组合物快速从内耳中清除。在某些实施例中，本文提供包含在体温下胶凝且保持与目标听觉表面(例如圆窗)长时间接触的聚合物的耳组合物。在一些实施例中，组合物另外包含允许组合物粘附于耳部粘膜表面的粘膜粘附剂。在一些情况下，本文所述的耳组合物避免因活性剂经由咽鼓管排出或泄漏而使治疗益处衰减。
某些实施例的描述
在某些实施例中，本文描述用于治疗耳部病症的控制释放组合物和装置，其包含治疗有效量的抗凋亡剂或促凋亡剂、控制释放耳可接受赋形剂和耳可接受媒剂。
在某些实施例中，本文还描述用于选择性诱导耳朵目标部分凋亡的组合物和装置，所述目标部分包括中耳(包括其中的亚结构)和/或内耳(包括其中的亚结构，例如耳蜗)，所述组合物和装置包含促凋亡剂。在某些实施例中，本文还公开用于选择性防止耳朵目标部分凋亡的组合物和装置，所述目标部分包括中耳(包括其中的亚结构)和/或内耳(包括其中的亚结构，例如耳蜗)，所述组合物和装置包含抗凋亡剂。
在本文所述的组合物和装置的一方面，控制释放耳可接受赋形剂选自耳可接受聚合物、耳可接受粘度增强剂、耳可接受凝胶、耳可接受涂料、耳可接受泡沫体、耳可接受微球体或微粒、耳可接受水凝胶、耳可接受的现场形成海绵状材料、耳可接受的光化辐射可固化凝胶、耳可接受脂质体、耳可接受纳米胶囊或纳米球体、耳可接受的热可逆性凝胶或其组合。在其它实施例中，耳可接受粘度增强剂是纤维素、纤维素醚、海藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、胶、纤维素聚合物或其组合。在又一实施例中，耳可接受粘度增强剂的存在量足以提供约1000至约1,000,000厘泊的粘度。又一方面，耳可接受粘度增强剂的存在量足以提供约50,000至约1,000,000厘泊的粘度。
在一些实施例中，调配本文公开组合物的pH值以确保其与目标耳结构相容。在一些实施例中，调配本文公开组合物的实用重量渗透摩尔浓度和/或容积渗透摩尔浓度以确保维持目标耳结构内稳定。外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度是在投予本文所述的医药组合物期间维持目标耳结构内稳定的实用容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度。
举例来说，外淋巴的容积渗透摩尔浓度在约270-300mOsm/L之间，且本文所述的组合物任选地经调配以提供约150至约1000mOsm/L的实用容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的组合物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/L以内的实用容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的组合物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约200至约400mOsm/L以内的实用容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的组合物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约250至约320mOsm/L以内的实用容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的组合物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/L、约200至约400mOsm/L或约250至约320mOsm/L以内的外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的组合物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/kg、约200至约400mOsm/kg或约250至约320mOsm/kg以内的外淋巴适合的重量渗透摩尔浓度。类似地，外淋巴的pH值为约7.2-7.4，且本发明组合物的pH值经调配(例如通过使用缓冲剂)以提供约5.5至约9.0、约6.0至约8.0或约7.0至约7.6的外淋巴适合的pH值。在某些实施例中，组合物的pH值在约6.0至约7.6范围内。在某些情况下，内淋巴的pH值为约7.2-7.9，且本发明组合物的pH值经调配(例如通过使用缓冲剂)在约5.5至约9.0范围内，在约6.6至约8.0范围内或在约7.0至约7.6范围内。
一些方面，耳可接受的控制释放赋形剂是生物可降解的和/或生物可排除的(例如降解和/或通过尿、粪便或其它排除途径排除)。另一方面，控制释放组合物另外包含耳可接受粘膜粘附剂、耳可接受渗透增强剂或耳可接受生物粘附剂。
一方面，控制释放组合物使用药物传递装置传递，所述药物传递装置是针和注射器、泵、微注射装置和现场形成海绵状材料或其组合。在一些实施例中，控制释放组合物的抗凋亡剂或促凋亡剂具有受限或非全身性释放，当全身投予时具有毒性，具有不良pK特征或其组合。
其它方面，抗凋亡剂是Akt、Akt激动剂、或其同源物或模拟物；Bre、Bre激动剂、或其同源物或模拟物；红细胞生成素、红细胞生成素激动剂、或其同源物或模拟物；fortilin、fortilin激动剂、或其同源物或模拟物；重组FNK蛋白(例如FNK-TAT融合蛋白)；胃內激素(ghrelin)、胃內激素激动剂、或其同源物或模拟物；IAP(凋亡蛋白抑制剂)、IAP激动剂、或其同源物或模拟物；PI3激酶、PI3激酶激动剂、或其同源物或模拟物；长寿因子(sirtuin)、长寿因子激动剂、或其同源物或模拟物；MAPK/JNK信号传导级联抑制剂；Bcl-2家族成员抑制剂；Fas抑制剂；NF-kB抑制剂；P38抑制剂；Ca2+通道抑制剂；HO-1抑制剂；卡斯蛋白酶(caspase)抑制剂；钙蛋白酶(calpain)抑制剂；p53；Src家族蛋白激酶抑制剂；三叶因子、三叶因子激动剂、或其同源物或模拟物；Hsp、Hsp激动剂、或其同源物或模拟物；载脂蛋白、载脂蛋白激动剂、或其同源物或模拟物；或其组合。
其它方面，促凋亡剂是Akt拮抗剂；Bre拮抗剂；红细胞生成素拮抗剂；fortilin拮抗剂；胃內激素拮抗剂；IAP(凋亡蛋白抑制剂)拮抗剂；PI3激酶拮抗剂；长寿因子拮抗剂；MAPK/JNK信号传导级联激动剂；Bcl-2家族成员激动剂；Fas激动剂；NF-kB抑制剂；P38激动剂；Ca2+通道激动剂；HO-1激动剂；卡斯蛋白酶激动剂；钙蛋白酶激动剂；p53；Src家族蛋白激酶激动剂；或其组合。
另一方面，抗凋亡剂或促凋亡剂是抗凋亡剂或促凋亡剂的盐或前药。其它方面，抗凋亡剂或促凋亡剂是米诺环素(minocycline)；SB-203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；PD 169316(4-(4-氟苯基)-2-(4-硝基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑)；SB 202190(4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；RWJ67657(4-[4-(4-氟苯基)-1-(3-苯基丙基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-3-丁炔-1-醇)；SB220025(5-(2-氨基-4-嘧啶基)-4-(4-氟苯基)-1-(4-哌啶基)咪唑)；D-JNK1-1((D)-hJIP175-157-DPro-DPro-(D)-HIV-TAT57-48)；AM-111(耳用)；SP600125(蒽并[1，9-cd]吡唑-6(2H)-酮)；JNK抑制剂I((L)-HIV-TAT48-57-PP-JBD20)；JNK抑制剂III((L)-HIV-TAT47-57-gaba-c-Junδ33-57)；AS601245(1，3-苯并噻唑-2-基(2-[[2-(3-吡啶基)乙基]氨基]-4-嘧啶基)乙腈)；JNK抑制剂VI(H2N-RPKRPTTLNLF-NH2)；JNK抑制剂VIII(N-(4-氨基-5-氰基-6-乙氧基吡啶-2-基)-2-(2，5-二甲氧基苯基)乙酰胺)；JNK抑制剂IX(N-(3-氰基-4，5，6，7-四氢-1-苯并噻吩-2-基)-1-萘甲酰胺)；双香豆素(dicumarol)(3，3′-亚甲基双(4-羟基香豆素))；SC-236(4-[5-(4-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯-磺酰胺)；CEP-1347(塞法隆公司(Cephalon))；CEP-11004(塞法隆公司(Cephalon))；包含Bcl-2多肽的至少一部分的人工蛋白质；重组FNK；V5(也称为Bax抑制剂肽V5)；Bax通道阻断剂((±)-1-(3，6-二溴咔唑-9-基)-3-哌嗪-1-基-丙-2-醇)；Bax抑制肽P5(也称为Bax抑制剂肽P5)；Kp7-6；FAIM(S)(Fas凋亡抑制分子-短型)；FAIM(L)(Fas凋亡抑制分子-长型)；Fas:Fc；FAP-1；NOK2；F2051；F1926；F2928；ZB4；Fas M3mAb；EGF；740Y-P；SC 3036(KKHTDDGYMPMSPGVA)；PI′3激酶活化剂(圣克鲁斯生物技术公司(Santa Cruz Biotechnology，Inc.))；Pam3Cys((S)-2，3-双(棕榈酰氧基)-(2RS)-丙基)-N-棕榈酰基-(R)-Cys-(S)-Ser(S)-Lys4-OH三盐酸盐)；Act1(NF-kB活化剂1)；抗IkB抗体；乙酰基-11-酮基-b-乳香酸；穿心莲内酯(Andrographolide)；咖啡酸苯乙酯(CAPE)；胶霉毒素(Gliotoxin)；异土木香内酯(Isohelenin)；NEMO结合域结合肽(DRQIKIWFQNRRMKWKKTALDWSWLQTE)；NF-kB活化抑制剂(6-氨基-4-(4-苯氧基苯基乙基氨基)喹唑啉)；NF-kB活化抑制剂II(4-甲基-N1-(3-苯基丙基)苯-1，2-二胺)；NF-kB活化抑制剂III(3-氯-4-硝基-N-(5-硝基-2-噻唑基)-苯甲酰胺)；NF-kB活化抑制剂IV((E)-2-氟-4′-甲氧基二苯乙烯)；NF-kB活化抑制剂V(5-羟基-(2，6-二异丙基苯基)-1H-异吲哚-1，3-二酮)；NF-kB SN50(AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP)；冬凌草甲素(Oridonin)；小白菊内酯(Parthenolide)；PPM-18(2-苯甲酰基氨基-1，4-萘醌)；Ro106-9920；柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine)；TIRAP抑制剂肽(RQIKIWFNRRMKWKKLQLRDAAPGGAIVS)；醉茄素A(Withaferin A)；汉黄芩素(Wogonin)；BAY 11-7082((E)3-[(4-甲基苯基)磺酰基]-2-丙烯腈)；BAY 11-7085((E)3-[(4-叔丁基苯基)磺酰基]-2-丙烯腈)；(E)-辣椒素((E)-Capsaicin)；金硫苹果酸盐(Aurothiomalate)(ATM或AuTM)；吴茱萸碱(Evodiamine)；次叶下珠素(Hypoestoxide)；IKK抑制剂III(BMS-345541)；IKK抑制剂VII；IKK抑制剂X；IKK抑制剂II；IKK-2抑制剂IV；IKK-2抑制剂V；IKK-2抑制剂VI；IKK-2抑制剂(SC-514)；IkB激酶抑制剂肽；IKK-3抑制剂IX；ARRY-797(阿莱生物制药公司(Array BioPharma))；SB-220025(5-(2-氨基-4-嘧啶基)-4-(4-氟苯基)-1-(4-哌啶基)咪唑)；SB-239063(反-4-[4-(4-氟苯基)-5-(2-甲氧基-4-嘧啶基)-1H-咪唑-1-基]环己醇)；SB-202190(4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；JX-401(-[2-甲氧基-4-(甲硫基)苯甲酰基]-4-(苯基甲基)哌啶)；PD-169316(4-(4-氟苯基)-2-(4-硝基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑)；SKF-86002(6-(4-氟苯基)-2，3-二氢-5-(4-吡啶基)咪唑并[2，1-b]噻唑二盐酸盐)；SB-200646(N-(1-甲基-1H-吲哚-5-基)N′-3-吡啶基脲)；CMPD-1(2′-氟N-(4-羟基苯基)-[1，1′-联苯基]-4-丁酰胺)；EO-1428((2-甲基苯基)-[4-[(2-氨基-4-溴苯基)氨基]-2-氯苯基]甲酮)；SB-253080(4-[5-(4-氟苯基)-2-[4-(甲基磺酰基)苯基]-1H-咪唑-4-基]吡啶)；SD-169(1H-吲哚-5-甲酰胺)；SB-203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；TZP-101(特兰齐姆制药公司(Tranzyme Pharma))；TZP-102(特兰齐姆制药公司(Tranzyme Pharma))；GHRP-6(生长激素释放肽-6)；GHRP-2(生长激素释放肽-2)；EX-1314(万能药医药公司(Elixir Pharmaceuticals))；MK-677(默克公司(Merck))；L-692,429((R)-3-氨基-3-甲基-N-(2，3，4，5-四氢-2-氧代-1-((2′-(1H-四唑-5-基)(1，1′-联苯)-4-基)甲基)-1H-1-苯并氮杂卓-3-基)-丁酰胺)；EP1572(Aib-DTrp-DgTrp-CHO)；地尔硫卓(diltiazem)；地尔硫卓代谢物；BRE(脑和生殖器官表达的蛋白质)；维拉帕米(verapamil)；尼莫地平(nimodipine)；地尔硫卓；ω-芋螺毒素(omega-conotoxin)；GVIA；氨氯地平(amlodipine)；非洛地平(felodipine)；拉西地平(lacidipine)；米贝拉地尔(mibefradil)；NPPB(5-硝基-2-(3-苯基丙基氨基)苯甲酸)；氟桂利嗪(flunarizine)；红细胞生成素；胡椒碱(piperine)；氯化血红素(hemin)；巴西木素(brazilin)；z-VAD-FMK(苯甲氧基羰基-Val-Ala-Asp(OMe)-氟甲基酮)；z-LEHD-FMK  (苯甲氧基羰基-Leu-Glu(OMe)-His-Asp(OMe)-氟甲基酮)；B-D-FMK(boc-天冬氨酰基(Ome)-氟甲基酮)；Ac-LEHD-CHO(N-乙酰基-Leu-Glu-His-Asp-CHO)；Ac-IETD-CHO(N-乙酰基-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO)；z-IETD-FMK(苯甲氧基羰基-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-氟甲基酮)；FAM-LEHD-FMK(苯甲氧基羰基Leu-Glu-His-Asp-氟甲基酮)；FAM-LETD-FMK(苯甲氧基羰基Leu-Glu-Thr-Asp-氟甲基酮)；Q-VD-OPH(喹啉-Val-Asp-CH2-O-Ph)；XIAP；cIAP-1；cIAP-2；ML-IAP；ILP-2；NAIP；生存素(Survivin)；Bruce；IAPL-3；fortilin；亮抑酶肽；PD-150606(3-(4-碘苯基)-2-巯基-(Z)-2-丙烯酸)；MDL-28170(Z-Val-Phe-CHO)；钙蛋白酶抑制剂(calpeptin)；乙酰基-钙蛋白酶抑制蛋白；MG 132(N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰基-N-[(1S)-1-甲酰基-3-甲基丁基]-L-亮氨酰胺)；MYODUR；BN 82270(伊普森公司(Ipsen))；BN 2204(伊普森公司(Ipsen))；AHLi-11(夸克制药公司(Quark Pharmaceuticals))，一种mdm2蛋白质，pifithrin-α(1-(4-甲基苯基-2-(4，5，6，7-四氢-2-亚氨基-3(2H)-苯并噻唑基)乙酮)；反-二苯乙烯；顺-二苯乙烯；白藜芦醇(resveratrol)；白皮杉醇(piceatannol)；土大黄甙(rhapontin)；脱氧土大黄甙；紫铆因(butein)；查耳酮；异甘草根糖精宁(isoliquirtigen)；紫铆因；4，2′，4′-三羟基查耳酮；3，4，2′，4′，6′-五羟基查耳酮；黄酮；桑色素(morin)；漆树黄酮(fisetin)；木犀草素(luteolin)；槲皮素(quercetin)；山萘酚(kaempferol)；芹菜素(apigenin)；棉花素(gossypetin)；杨梅素(myricetin)；6-羟基芹菜素；5-羟基黄酮；5，7，3′，4′，5′-五羟基黄酮；3，7，3′，4′，5′-五羟基黄酮；3，6，3′，4′-四羟基黄酮；7，3′，4′，5′-四羟基黄酮；3，6，2′4′-四羟基黄酮；7，4′-二羟基黄酮；7，8，3′，4′-四羟基黄酮；3，6，2′，3′-四羟基黄酮；4′-羟基黄酮；5-羟基黄酮；5，4′-二羟基黄酮；5，7-二羟基黄酮；大豆黄酮(daidzein)；染料木素(genistein)；柑桔黄素(naringenin)；黄烷酮(flavanone)；3，5，7，3′，4′-五羟基黄烷酮；氯化花葵素(pelargonidinchloride)；氯化花青素(cyanidin chloride)；氯化翠雀素(delphinidin chloride)；(-)-表儿茶素(epicatechin)(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(-)-儿茶素(catechin)(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(-)-没食子儿茶素(gallocatechin)(羟基位置：3，5，7，3′，4′，5′)(+)-儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(+)-表儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；日扁柏素(Hinokitiol)(b-崖柏素(Thujaplicin)；2-羟基-4-异丙基-2，4，6-环庚三烯-1-酮)；L-(+)-麦角硫因(Ergothioneine)((S)-a-羧基-2，3-二氢-N，N，N-三甲基-2-硫代-1H-咪唑4-乙铵内盐)；咖啡酸苯酯；MCI-186(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)；HBED(N，N′-二-(2-羟基苯甲基)乙二胺-N，N′-二乙酸·H2O)；氨溴索(Ambroxol)(反-4-(2-氨基-3，5-二溴苯甲氨基)环己烷盐酸盐；和U-83836E((-)-2-((4-(2，6-二-1-吡咯啶基-4-嘧啶基)-1-哌嗪基)甲基)-3，4-二氢-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并哌喃-6-醇二盐酸盐)；β-1′-5-甲基-烟酰胺-2′-脱氧核糖；β-D-1′-5-甲基-烟酰胺-2′-脱氧呋喃核糖；β-1′-4，5-二甲基-烟酰胺-2′-脱氧核糖；β-D-1′-4，5-二甲基-烟酰胺-2′-脱氧呋喃核糖；1-萘基PP1(1-(1，1-二甲基乙基)-3-(1-萘基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；薰草菌素A(Lavendustin A)(5-[[(2，5-二羟基苯基)甲基][(2-羟基苯基)甲基]氨基]-2-羟基苯甲酸)；MNS(3，4-亚甲基二氧基-b-硝基苯乙烯)；PP1(1-(1，1-二甲基乙基)-1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；PP2(3-(4-氯苯基)1-(1，1-二甲基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；KX1-004(Kinex)；KX1-005(Kinex)；KX1-136(Kinex)；KX1-174(Kinex)；KX1-141(Kinex)；KX2-328(Kinex)；KX1-306(Kinex)；KX1-329(Kinex)；KX2-391(Kinex)；KX2-377(Kinex)；ZD4190(阿斯利康公司(AstraZeneca)；N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-胺)；AP22408(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AP23236(阿瑞德制药公司(AriadPharmaceuticals))；AP23451(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AP23464(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AZD0530(阿斯利康公司(Astra Zeneca))；AZM475271(M475271；阿斯利康公司(Astra Zeneca))；达沙替尼(Dasatinib)(N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺)；GN963(反-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)环己醇硫酸盐)；泊舒替尼(Bosutinib)(4-((2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基-1-哌嗪基)丙氧基)-3-喹啉甲腈)；Hsp70；Hsp72；BiP(或Grp78)；mtHsp70(或Grp75)；Hsp70-1b；Hsp70-1L；Hsp70-2；Hsp70-4；Hsp70-6；Hsp70-7；Hsp70-12a；Hsp70-14；Hsp 10；Hsp27；Hsp40；Hsp60；Hsp90；Hsp104；Hsp110；Grp94；TFF1；TFF2；TFF3；ApoA；ApoB；ApoC；ApoD；ApoE，ApoH；siRNA分子；或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是AM-111(耳用)。
在一些实施例中，本文还公开治疗耳部病症的方法，所述方法包含如下投予本文公开的组合物：至少每3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15天一次、至少每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次或每六周一次；或至少一月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次、每六个月一次、每七个月一次、每八个月一次、每九个月一次、每十个月一次、每十一个月一次或每十二个月一次。在特定实施例中，本文所述的控制释放组合物在控制释放组合物的后续剂量之间向内耳提供持续剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂。即，仅举一个实例来说，如果每10天经由鼓室内注射向圆窗膜投予新剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂控制释放组合物，那么在这10天的时间期间，控制释放组合物向内耳提供有效剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂(例如穿过圆窗膜)。
一方面，投予组合物以使组合物与蜗窗嵴(crista fenestrae cochleae)、圆窗膜或鼓室接触。一方面，组合物是通过鼓室内注射投予。
本文提供用于治疗特征在于多个耳部细胞凋亡的耳部疾病或病状的组合物或装置，其包含治疗有效量的具有实质上低降解产物的抗凋亡剂；且其中所述传递装置包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒抗凋亡剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克传递装置少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；和
(iii)多颗粒抗凋亡剂。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒抗凋亡剂；和
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度。
本文提供用于治疗特征在于多个耳部细胞功能异常的耳部疾病或病状的组合物或装置，其包含治疗有效量的具有实质上低降解产物的抗凋亡剂；且其中所述传递装置包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒促凋亡剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克传递装置少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；和
(iii)多颗粒促凋亡剂。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒促凋亡剂；和
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约150与500mOsm/L之间的实用容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实用容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实用容积渗透摩尔浓度。
在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少10天的时间。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少14天的时间。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少1个月的时间。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈中性分子、游离酸、游离碱、盐或前药形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈中性分子、游离酸、游离碱、盐或前药或其组合形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈多颗粒形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈微米尺寸化粒子形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈微米尺寸化粉末形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约10％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约15％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约20％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约25％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含以组合物的重量计约1％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约2％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含以组合物的重量计约3％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含以组合物的重量计约4％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约5％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约10％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约15％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约20％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约25％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约30％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约40％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约50％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约60％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约70％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约80％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约90％的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约5.5与约8.0之间。在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约6.0与约8.0之间。在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约6.0与约7.6之间。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克组合物含有少于100个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克组合物含有少于50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克组合物含有少于10个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置含有每公斤个体体重少于5个内毒素单位(EU)。在一些实施例中，上述医药组合物或装置含有每公斤个体体重少于4个内毒素单位(EU)。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约42℃之间的胶凝温度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约37℃之间的胶凝温度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约30℃之间的胶凝温度。
在一些实施例中，医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。在一些实施例中，聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物是生物可降解的和/或生物可排除的(例如通过生物降解过程从身体排除共聚物，例如在尿、粪便等中排除)。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含粘膜粘附剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含渗透增强剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含增稠剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含染料。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含选自以下的药物传递装置：针和注射器、泵、微注射装置、吸液芯、现场形成海绵状材料或其组合。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置是抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的盐具有有限释放或非全身性释放、全身性毒性、不良PK特征或其组合的医药组合物或装置。在本文所述的医药组合物或装置的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂呈中性分子、游离碱、游离酸、盐、前药或其组合形式。在本文所述的医药组合物或装置的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂是以磷酸盐或酯前药的形式投予。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含一种或一种以上抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的盐、前药或其组合作为立即释放剂。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含另一治疗剂。在一些实施例中，所述另一治疗剂是酸化剂、麻醉剂、止痛剂、抗生素、止吐剂、抗真菌剂、抗微生物剂、抗精神病药(尤其吩噻嗪类抗精神病药)、防腐剂、抗病毒剂、收敛剂、化疗剂、胶原蛋白、皮质类固醇、利尿剂、角质溶解剂(keratolytic agent)、一氧化氮合成酶抑制剂、其组合。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置是医药组合物或装置的pH值介于约6.0至约7.6之间的医药组合物或装置。
在本文所述的医药组合物或装置的一些实施例中，具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物与增稠剂的比率为约40∶1至约5∶1。在一些实施例中，增稠剂是羧甲基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素。
在一些实施例中，耳部疾病或病状是兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合。
本文还提供治疗耳部疾病或病状的方法，所述方法包含向有需要的个体投予包含治疗有效量的抗凋亡剂或促凋亡剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含具有实质上低降解产物的抗凋亡剂或促凋亡剂，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)介于约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或促凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)介于约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒抗凋亡剂或促凋亡剂；
(v)介于约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克组合物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂，和
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)。
在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少4天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少6天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少7天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少8天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少9天的时间。在本文所述的方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物或装置中释放持续至少10天的时间。在上述方法的一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂基本上呈微米尺寸化粒子的形式。
在本文所述的方法的一些实施例中，组合物穿过圆窗投予。在本文所述的方法的一些实施例中，所述耳部疾病或病状是兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合。
图式简单说明
图1说明非持续释放与持续释放组合物的比较。
图2说明浓度对巴伦诺斯(Blanose)精制CMC水溶液粘度的影响。
图3说明浓度对美多秀(Methocel)水溶液粘度的影响。
图4提供耳朵解剖学的说明性示图。
具体实施方式
本文提供控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物，其用于治疗(例如改善或减缓作用)兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合。
少数治疗产品可用于治疗耳部病症；然而，目前使用经口、经静脉内或经肌肉内途径的全身性途径来传递这些治疗剂。在一些情况下，全身性药物投予会导致药物浓度可能不相等，其中血清中的循环水平较高而目标中耳和内耳器官结构中的水平较低。因而，需要相当大量的药物来克服这一不相等以向内耳传递足够的治疗有效量。另外，因为需要高血清量来实现足够的向目标部位的局部传递，所以全身性药物投予可能会增加全身性毒性和不良副作用的可能性。全身性毒性也可能因治疗剂被肝脏分解并加工，形成有效消除投予治疗剂所获得的任何益处的毒性代谢物而发生。
为克服全身性传递的毒性和伴随副作用，本文公开用于向目标耳结构局部传递治疗剂的方法和组合物和装置。到达例如前庭和耳蜗器官将要穿过中耳(包括圆窗膜、卵圆窗/镫骨足板、环状韧带和穿过听囊/颞骨)。
鼓室内注射治疗剂是在鼓膜后面将治疗剂注射到中耳和/或内耳中的技术。这一技术存在若干挑战；例如到达圆窗膜，内耳中的药物吸收位点是一种挑战。
另外，鼓室内注射产生若干现行治疗方案未阐明的未被认识到的问题，诸如改变外淋巴和内淋巴的容积渗透摩尔浓度和pH值，和引入直接或间接损害内耳结构的病原体和内毒素。此项技术可能尚未认识到这些问题的原因之一是无已批准的鼓室内组合物：内耳提供独特的组合物挑战。因此，为身体其它部分研发的组合物几乎与鼓室内组合物无关。
现有技术中无关于适于投予人类的耳部组合物的要求(例如无菌水平、pH值、容积渗透摩尔浓度)的指南。不同物种动物的耳朵之间的解剖学存在较大差异。物种间听觉结构差异的结果是内耳疾病的动物模型作为测试被研发用于临床批准的治疗剂的工具通常不可靠。
本文提供符合关于pH值、容积渗透摩尔浓度、离子平衡、无菌、内毒素和/或热原水平的严格标准的耳部组合物。本文所述的耳组合物与内耳微环境(例如外淋巴)相容且适于投予人类。在一些实施例中，本文所述的组合物在鼓室内治疗剂的临床前和/或临床研发期间包含染料且辅助观测投予的组合物以避免对侵袭性程序的需要(例如去除外淋巴)。
本文提供控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物，其用于局部治疗目标耳结构，从而避免由全身性投予抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物所致的副作用。局部施用的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物和装置与目标耳结构相容，并且直接投予至所要目标耳结构(例如耳蜗区、鼓室或外耳)，或投予至与内耳区域直接连通的结构(例如圆窗膜、蜗窗嵴或卵圆窗膜)。通过特异性地靶向耳结构，可避免由全身性治疗所致的不良副作用。此外，临床研究显示使药物与耳蜗的外淋巴长期接触具有益处，例如当多次给予治疗剂时，对突发性听力丧失具有改良的临床功效。因此，通过提供控制释放凋亡调节组合物或组合物来治疗耳部病症，可向罹患耳部病症的个体提供恒定的、可变的和/或长期的抗凋亡剂或促凋亡剂源，从而降低或消除治疗的不确定性。因此，本文公开的一个实施例是提供使得至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂能够在可变或恒定速率下以治疗有效剂量释放，诸如以确保抗凋亡剂或促凋亡剂连续释放的组合物。在一些实施例中，本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂以立即释放组合物或组合物形式投予。在其它实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂以连续、可变或以脉动方式释放的持续释放组合物或其变体形式投予。在又其它实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂组合物是以连续、可变或以脉动方式释放的立即释放与持续释放组合物或其变体形式投予。释放任选地取决于环境或生理条件，例如外部离子环境(参看例如释放系统，强生公司(Johnson&Johnson))。
另外，目标耳结构的局部治疗还能够使用先前不适合使用的治疗剂，包括具有不良pK特征、不良摄取、低全身性释放和/或毒性问题的治疗剂。由于抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物和装置可局部靶向目标而且在内耳中存在生物血液障壁，所以由利用先前表征的毒性或无效抗凋亡剂或促凋亡剂进行治疗所致的不良作用的风险将降低。因此，本文实施例的范围内还涵盖在病症的治疗中使用先前已因抗凋亡剂或促凋亡剂的不良作用或无效性而被专业人士否决的抗凋亡剂或促凋亡剂。
本文公开的实施例内还包括使用其它耳相容性药剂与本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物和装置组合。当使用时，这些药剂辅助治疗由兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合所致的听力丧失或平衡能力丧失或功能异常。因此，还涵盖使用改善或减缓兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合的作用的其它药剂与抗凋亡剂或促凋亡剂组合。在一些实施例中，所述其它药剂为酸化剂、麻醉剂、止痛剂、抗生素、止吐剂、抗真菌剂、抗微生物剂、抗精神病药(尤其吩噻嗪类抗精神病药)、防腐剂、抗病毒剂、收敛剂、化疗剂、胶原蛋白、皮质类固醇、利尿剂、角质溶解剂、一氧化氮合成酶抑制剂、或其组合。
在一些实施例中，向目标耳朵区域投予本文所述的耳可接受的控制释放凋亡调节组合物，且另外投予口服剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，在投予耳可接受的控制释放凋亡调节组合物之前，投予口服剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂，并且随后口服剂量在提供控制释放凋亡调节组合物的时间内逐渐减少。或者，在投予控制释放凋亡调节组合物期间，投予口服剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂，并且随后口服剂量在提供控制释放凋亡调节组合物的时间内逐渐减少。或者，在投予控制释放凋亡调节组合物之后，投予口服剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂，并且随后口服剂量在提供控制释放凋亡调节组合物的时间内逐渐减少。
另外，本文所包括的抗凋亡剂或促凋亡剂医药组合物或组合物或装置还包括载剂、佐剂(例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂)、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。这些载剂、佐剂和其它赋形剂应与目标耳结构所在的环境相容。特别涵盖无耳毒性或具有最低限度耳毒性的载剂、佐剂和赋形剂以允许在对目标区或区域具有最小副作用下有效治疗本文涵盖的耳部病症。为防止耳毒性，本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂医药组合物或组合物或装置任选靶向目标耳结构的独特区域，包括(但不限于)鼓室、前庭骨迷路和膜迷路、耳蜗骨迷路和膜迷路以及位于内耳中的其它解剖学或生理学结构。
某些定义
如本文所使用的术语“耳可接受”就组合物、组合物或成分来说包括不对所治疗个体的中耳和内耳产生持续的有害影响。如本文所使用的“耳医药学上可接受”是指诸如载剂或稀释剂等物质不消除化合物对于中耳和内耳的生物活性或性质，并且对中耳和内耳的毒性相对较低或低，即物质投予个体而不产生不当生物作用或以有害方式与组合物中所含的任何组分发生相互作用。
如本文所使用，通过投予特定化合物或医药组合物来改善或减轻特定耳部疾病、病症或病状的症状是指归因于投予化合物或组合物或由投予化合物或组合物所引起的严重程度的任何降低、发作延迟、进展减缓或持续时间缩短，而不论这些作用是永久性的还是暂时性的，持续的还是短暂的。
如本文所使用，术语“激动剂”意思是结合并正面改变受体活性的分子。在一些实施例中，激动剂增加受体起作用的速率。在一些实施例中，激动剂活化受体。在一些实施例中，激动剂组成性活化受体。在一些实施例中，激动剂增加受体配体结合袋的可及性(例如改变结合袋的形状以使之更可及)。激动剂包括(但不限于)完全激动剂、部分激动剂和共激动剂。
如本文所使用，术语“拮抗剂”意思是结合并负面改变受体活性的分子。在一些实施例中，拮抗剂抑制(部分或完全)受体活性。在一些实施例中，拮抗剂降低受体起作用的速率。在一些实施例中，拮抗剂降低受体配体结合袋的可及性(例如阻断受体配体结合袋或改变结合袋的形状以使之不易及)。拮抗剂包括(但不限于)竞争性拮抗剂、部分激动剂(其结合抑制完全激动剂的结合)、反向激动剂、非竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。
“抗氧化剂”是耳医药学上可接受的抗氧化剂，并且包括例如丁基羟基甲苯(BHT)、抗坏血酸钠、抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠和生育酚。在某些实施例中，需要时抗氧化剂可增强化学稳定性。抗氧化剂还用于抵消某些治疗剂的耳毒性作用，包括与本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合使用的药剂。
“内耳”是指内耳，包括耳蜗和前庭迷路以及连接耳蜗与中耳的圆窗。
“耳生物利用率”或“内耳生物利用率”或“中耳生物利用率”或“外耳生物利用率”是指所投予剂量的本文公开的化合物在所研究的动物或人类的目标耳结构中可利用的百分比。
“中耳”是指中耳，包括鼓室、听小骨和连接中耳与内耳的卵圆窗。
“外耳”是指外耳，包括耳廓、耳道和连接外耳与中耳的鼓膜。
“血浆浓度”是指本文提供的化合物在个体血液的血浆组分中的浓度。
“载剂物质”是与抗凋亡剂或促凋亡剂、目标耳结构和耳可接受的医药组合物的释放曲线性质相容的赋形剂。这些载剂物质包括例如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。“耳医药学上相容的载剂物质”包括(但不限于)阿拉伯胶(acacia)、明胶、胶状二氧化硅、甘油磷酸钙、乳酸钙、麦芽糖糊精、甘油、硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胆固醇、胆固醇酯、酪蛋白酸钠、大豆卵磷脂、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、氯化钠、磷酸三钙、磷酸二钾、纤维素和纤维素结合物、糖硬脂酰乳酸钠、卡拉胶(carrageenan)、甘油单酯、甘油二酯、预胶凝化淀粉等。
“凋亡调节剂”和“抗凋亡剂或促凋亡剂”是同义词。其包括(a)防止神经元和耳部毛细胞(或中耳或内耳的其它细胞)凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)；或诱导神经元或耳部毛细胞(或中耳或内耳的其它细胞)凋亡的药剂。
术语“稀释剂”是指用于在传递之前稀释抗凋亡剂或促凋亡剂且与目标耳结构相容的化合物。
“分散剂”和/或“粘度调节剂”是控制抗凋亡剂或促凋亡剂在液体介质中的扩散和均一性的物质。扩散促进剂/分散剂的实例包括(但不限于)亲水性聚合物、电解质、吐温(Tween)
Figure BPA00001294499700181
60或80、PEG、聚乙烯吡咯烷酮(PVP；市面上称为
Figure BPA00001294499700182
)，和基于碳水化合物的分散剂，诸如羟丙基纤维素(例如HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟丙基甲基纤维素(例如HPMC K100、HPMC K4M、HPMC K15M和HPMC K100M)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素乙酸酯硬脂酸酯(HPMCAS)、非晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol))、泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛尼克F127、泊洛尼克
Figure BPA00001294499700191
和
Figure BPA00001294499700192
，其为环氧乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物)；和泊洛沙胺(poloxamine)(例如特求尼克
Figure BPA00001294499700193
也称为泊洛沙胺
Figure BPA00001294499700194
其是通过向乙二胺依次添加环氧丙烷和环氧乙烷所得到的四官能性嵌段共聚物(巴斯夫公司(BASF Corporation)，新泽西州帕西帕尼(Parsippany，N.J.))、聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S-630)、聚乙二醇(例如聚乙二醇的分子量为约300至约6000、或约3350至约4000、或约7000至约5400)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、胶(诸如黄芪胶和阿拉伯胶、瓜尔胶、黄原类(xanthans)，包括黄原胶)、糖、纤维素类(诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠)、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚维酮(povidone)、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇(PVA)、海藻酸盐、壳聚糖(chitosan)和其组合。还使用诸如纤维素或三乙基纤维素等增塑剂作为分散剂。适用于本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂的脂质体分散液和自乳化分散液中的可选分散剂是二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱(c8-c18)、磷脂酰乙醇胺(c8-c18)、磷脂酰甘油(c8-c18)、来自卵或大豆的天然磷脂酰胆碱、来自卵或大豆的天然磷脂酰甘油、胆固醇和肉豆蔻酸异丙酯。
“药物吸收”或“吸收”是指抗凋亡剂或促凋亡剂从投药的局部部位(仅举例来说，内耳的圆窗膜)和穿过障壁(圆窗膜，如下文所述)进入内耳或内耳结构的移动过程。如本文所使用的术语“共投予”等打算涵盖投予单个患者抗凋亡剂或促凋亡剂，且打算包括通过相同或不同投药途径或在相同或不同时间投予抗凋亡剂或促凋亡剂的治疗方案。
如本文所使用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指预期所投予的抗凋亡剂或促凋亡剂足以在一定程度上减轻所治疗的疾病或病状的一种或一种以上症状的量。举例来说，投予本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂药剂的结果是减少和/或减轻兴奋性毒性的病征、症状或病因。举例来说，用于治疗使用的“有效量”是抗凋亡剂或促凋亡剂(包括本文公开的组合物)减缓或改善疾病症状而无过度不良副作用所需的量。术语“治疗有效量”包括例如预防有效量。本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物的“有效量”是有效达成所要药理学效果或治疗改善而无过度不良副作用的量。应了解，在一些实施例中，“有效量”或“治疗有效量”因所投予的化合物的代谢、个体的年龄、体重、一般状况、所治疗病状、所治疗病状的严重程度和开处方医生的判断的变化而随个体变化。还应了解，基于药物动力学和药效学的考虑，延长释放给药格式中的“有效量”可与立即释放给药格式中的“有效量”不同。
术语“增强”是指增加或延长抗凋亡剂或促凋亡剂的所要效果的效力或持续时间，或减弱随投予治疗剂而发生的诸如局部疼痛等任何不利症状。因此，就增强本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂的效果来说，术语“增强”是指能够增加或延长与本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合使用的其它治疗剂的效果的效力或持续时间。如本文所使用的“增强有效量”是指抗凋亡剂或促凋亡剂或其它治疗剂的足以增强另一治疗剂或抗凋亡剂或促凋亡剂在所要系统中的效果的量。当用于患者中时，对此用途有效的量将取决于疾病、病症或病状的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态和对药物的反应以及治疗医生的判断。
术语“抑制”包括阻止、减缓或逆转必需治疗的患者的病状(例如兴奋性毒性)的发展或病状的进展。
术语“试剂盒”和“制品”作为同义词使用。
“药物动力学”是指决定在目标耳结构内所要部位处达到并维持适当药物浓度的因素。
在预防性应用中，将本文所述的含有抗凋亡剂或促凋亡剂的组合物投予易患特定疾病、病症或病状(例如兴奋性毒性、耳毒性及老年性耳聋)或另外处于罹患所述疾病、病症或病状风险之中的患者。这种量定义为“预防有效量或剂量”。在此用途中，确切量还取决于患者的健康状态、体重等。如本文所使用的“医药装置”包括投予耳朵之后提供用于延长释放本文所述的活性剂的储积器的任何本文所述的组合物。
“前药”是指在活体内转化成母体药物的抗凋亡剂或促凋亡剂。在某些实施例中，前药经一个或一个以上步骤或过程酶促代谢成化合物的生物活性、医药活性或治疗活性形式。为制造前药，对医药活性化合物进行修饰以使活性化合物将在活体内投予之后再生。在一个实施例中，前药经设计以改变药物的代谢稳定性或传输特征，屏蔽副作用或毒性或改变药物的其它特征或性质。在一些实施例中，本文提供的化合物被衍生成适合的前药。
“圆窗膜”是人类中覆盖蜗窗(也称为圆形窗、正圆窗或圆窗)的膜。在人类中，圆窗膜的厚度为约70微米。
“增溶剂”是指耳可接受的化合物，诸如三乙酰甘油酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、月桂基硫酸钠、癸酸钠、蔗糖酯、烷基糖苷、多库酯钠(sodium docusate)、维生素E TPGS、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)、二乙二醇单乙基醚(transcutol)、丙二醇和异山梨醇二甲醚(dimethyl isosorbide)等。
“稳定剂”是指与目标耳结构的环境相容的化合物，诸如任何抗氧化剂、缓冲剂、酸、防腐剂等。稳定剂包括(但不限于)会产生任何以下作用的试剂：(1)提高赋形剂与容器或传递系统(包括注射器或玻璃瓶)的相容性，(2)提高组合物组分的稳定性，或(3)提高组合物稳定性。
如本文所使用的“稳态”是指当投予目标耳结构的药物的量等于一个给药时间间隔内消除的药物的量时，在目标结构内产生平稳或恒定水平的药物暴露。
如本文所使用，术语“实质上低的降解产物”意思是少于5重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于3重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在又其它实施例中，这一术语意思是少于2重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于1重量％的活性剂是活性剂的降解产物。
如本文所使用的术语“个体”用于指任何动物，优选哺乳动物，包括人类或非人类。术语患者与个体可互换使用。这两个术语均不应解释为需要专业医务人员(例如医生、护士、医生助理、护理员、收容所工作人员)的监督。
“表面活性剂”是指耳可接受的化合物，诸如月桂基硫酸钠、多库酯钠、吐温
Figure BPA00001294499700211
60或80、三乙酰甘油酯、维生素E TPGS、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆、胆汁盐、单硬脂酸甘油酯、环氧乙烷与环氧丙烷的共聚物，例如
Figure BPA00001294499700212
(巴斯夫公司(BASF))等。一些其它表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10(octoxynol 10)、辛苯聚醇40(octoxynol 40)。在一些实施例中，纳入表面活性剂以增强物理稳定性或用于其它目的。
如本文所使用的术语“治疗”包括预防性和/或治疗性缓和、缓解或改善疾病或病状症状，预防其它症状，改善或预防症状的潜在代谢病因，抑制疾病或病状(例如阻止疾病或病状发展)，减轻疾病或病状，使疾病或病状消退，减轻由疾病或病状引起的病状，或终止疾病或病状的症状。
如本文所使用，“基本上呈微米尺寸化粉末形式”仅举例来说包括大于70重量％的活性剂呈活性剂的微米尺寸化粒子形式。在其它实施例中，这一术语意思是大于80重量％的活性剂呈活性剂的微米尺寸化粒子形式。在又其它实施例中，这一术语意思是大于90重量％的活性剂呈活性剂的微米尺寸化粒子形式。
如本文所使用，术语“实质上低的降解产物”意思是少于5重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于3重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在又其它实施例中，这一术语意思是少于2重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于1重量％的活性剂是活性剂的降解产物。
如本文所使用，术语“耳部介入”意思是对一个或一个以上耳结构的外部损害或损伤且包括植入物、耳部外科手术、注射、套管插入术等。植入物包括内耳或中耳医学装置，其实例包括耳蜗植入物、听力防护装置、听力改善装置、短电极、微假体或活塞样假体；针；干细胞移植物；药物传递装置；基于细胞的治疗剂；等。耳部外科手术包括中耳外科手术、内耳外科手术、鼓膜切开术、耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。注射包括鼓室内注射、耳蜗内注射、穿过圆窗膜注射等。套管插入术包括鼓室内、耳蜗内、内淋巴、外淋巴或前庭套管插入术等。
由以下详细描述，本文所述的方法和组合物的其它目标、特征和优点将变得显而易见。然而，应了解详细描述和具体实例在指示特定实施例时仅以说明性方式提供。
耳的解剖学
如图4所示，外耳是器官的外部部分且由耳廓(pinna/auricle)、耳道(外耳道)和鼓膜的向外部分(也称为耳鼓)构成。耳廓是外耳的肉质部分，可见于头的侧面，其用于收集声波且将声波导向耳道。因此，外耳的功能部分在于收集声波并将声波导向鼓膜和中耳。
中耳是空气填充的空腔，称为鼓室，在鼓膜后方。鼓膜也称为耳鼓，是隔开外耳与中耳的薄膜。中耳位于颞骨内，且在这一空间内包括三块耳骨(听小骨)：锤骨、砧骨和镫骨。听小骨经由细小的韧带连接在一起，形成横跨鼓室空间的桥。锤骨的一端附着于鼓膜，其前端连接于砧骨，而砧骨又连接于镫骨。镫骨附着于卵圆窗，卵圆窗是位于鼓室内的两个窗中的一个。称为环状韧带的纤维组织层连接镫骨与卵圆窗。来自外耳的声波首先引起鼓膜振动。振动经由听小骨和卵圆窗传播到达耳蜗，将运动转移到内耳中的流体。因此，听小骨的排列提供鼓膜与流体填充内耳的卵圆窗之间的机械联动，其中声音转变并转换到内耳以供进一步处理。听小骨、鼓膜或卵圆窗的硬度、刚性或活动性丧失导致听力丧失，例如耳硬化症或镫骨刚性。
鼓室还经由咽鼓管连接于咽喉。咽鼓管能够平衡外部空气与中耳空腔之间的压力。圆窗是内耳的一个组件但也可在鼓室内接近，其通向内耳的耳蜗。圆窗被圆窗膜覆盖，圆窗膜由三个层组成：外层或粘膜层、中间层或纤维层、和内膜，内膜直接与耳蜗流体连通。因此，圆窗经由内膜直接与内耳连通。
卵圆窗和圆窗中的运动是互连的，即，当镫骨将鼓膜运动传播到卵圆窗以相对于内耳流体向内移动时，圆窗(圆窗膜)相应地推出并远离耳蜗流体。圆窗的这一运动使得耳蜗内的流体运动，这又导致耳蜗内毛细胞运动，从而转换听力信号。圆窗膜变硬或僵化因不能使耳蜗流体运动而导致听力丧失。最近的研究已集中于在圆窗上植入机械转换器，所述转换器经由卵圆窗绕过正常传导路径并向耳蜗腔室提供放大的输入。
听觉信号转换发生在内耳中。流体填充的内耳由两个主要组件组成：耳蜗和前庭器官。内耳部分位于骨迷路中，骨迷路是颅颞骨中一系列复杂的通道。前庭器官是平衡器官且由三个半规管和前庭组成。三个半规管彼此的相对排列使得可通过流体的运动来检测头部沿空间中三个正交平面的运动，并随后由半规管的感觉器官(称为壶腹嵴)对信号进行处理。壶腹嵴含有毛细胞和支持细胞，并且被称为壶腹帽的圆顶状凝胶物质覆盖。毛细胞的毛包埋于壶腹帽中。半规管检测动态平衡，即转动或角度运动的平衡。
虽然当头部快速转动时，半规管随头部移动，但位于膜半规管内的内淋巴流体倾向于保持不动。内淋巴流体推抵壶腹帽，壶腹帽向一侧倾斜。当壶腹帽倾斜时，其使壶腹嵴的毛细胞上的一些毛弯曲，进而触发感觉脉冲。因为各半规管位于不同平面上，所以各半规管的相应壶腹嵴不同地回应于头部的相同运动。此举产生嵌合脉冲，这一脉冲在前庭蜗神经的前庭支上传播到中枢神经系统。中枢神经系统解释这一信息并引发适当的反应来维持平衡。中枢神经系统中重要的是小脑，小脑介导平衡感和平衡。
前庭是内耳的中央部分，且含有具有探知静态平衡或头部相对于重力的位置的毛细胞的机械感受器。静态平衡在头部不动或沿直线移动时发挥作用。前庭中的膜迷路分成两个囊样结构，即椭圆囊和球囊。各结构又含有称为囊斑的小结构，这一小结构负责维持静态平衡。囊斑由包埋于覆盖囊斑的凝胶物质(类似于壶腹帽)中的感觉毛细胞组成。称为耳石的碳酸钙粒嵌于凝胶层表面上。
当头部位于竖直位置时，毛沿囊斑竖立。当头部倾斜时，凝胶物质和耳石相应倾斜，使囊斑毛细胞上的一些毛弯曲。这一弯曲作用向中枢神经系统发起信号脉冲，信号脉冲经由前庭蜗神经的前庭支行进，继而向适当肌肉转播运动脉冲以维持平衡。
耳蜗是内耳中与听力相关的部分。耳蜗是卷曲成类似蜗牛形状的锥形管样结构。耳蜗内部分成三个区，这三个区进一步由前庭膜和基底膜的位置界定。前庭膜上方的部分是前庭阶，前庭阶从卵圆窗延伸到耳蜗顶点，且含有外淋巴流体，一种钾含量低而钠含量高的水性液体。基底膜界定鼓阶区，鼓阶区从耳蜗顶点延伸到圆窗而且含有外淋巴。基底膜含有数以千计的刚性纤维，这些纤维的长度从圆窗到耳蜗顶点逐渐增加。基底膜纤维在被声音刺激时振动。前庭阶与鼓室阶中间是耳蜗管，耳蜗管以耳蜗顶点处的封闭囊为末端。耳蜗管含有内淋巴流体，内淋巴流体类似于脑脊髓流体且钾含量高。
柯替(Corti)器官是用于听力的感觉器官，位于基底膜上且向上延伸至耳蜗管中。柯替器官含有毛细胞，毛细胞具有从其自由表面延伸并接触称为顶盖膜的凝胶状表面的毛样突出物。虽然毛细胞没有轴突，但其被形成前耳庭蜗神经(脑神经VIII)的耳蜗支的感觉神经纤维包围。
如所论述，卵圆窗(也称为椭圆窗)与镫骨连通以转播从鼓膜振动的声波。转移到卵圆窗的振动经由外淋巴和前庭阶/鼓阶使流体填充耳蜗内部的压力增加，而这一压力增加又引起圆窗膜反应而扩展。协调的卵圆窗向内挤压/圆窗向外扩展使得耳蜗内的流体运动而不改变耳蜗内压力。然而，当振动行进穿过前庭阶中的外淋巴时，其在前庭膜中产生相应振动。这些相应的振动行进穿过耳蜗管的内淋巴，并且转移到基底膜。当基底膜振动或上下运动时，柯替器官沿着基底膜运动。柯替器官中的毛细胞受体随后相对顶盖膜运动，导致顶盖膜发生机械变形。这一机械变形引发神经脉冲，神经脉冲经由前庭耳蜗神经行进到中枢神经系统，将所接收的声波以机械方式传播为信号，这些信号接着由中枢神经系统处理。
疾病
耳部病症，包括内耳病症、中耳病症和外耳病症，产生包括(但不限于)以下的症状：听力丧失、眼球震颤、眩晕、耳鸣、炎症、感染和充血。用本文公开的组合物治疗的耳部病症众多且包括耳毒性、兴奋性毒性和老年性耳聋。
兴奋性毒性
兴奋性毒性是指神经元和/或耳部毛细胞因谷氨酸盐和/或类似物质而死亡或损坏。
谷氨酸盐是中枢神经系统中最丰富的刺激性神经传递质。突触前神经元在刺激后释放谷氨酸盐。谷氨酸盐流过突触，与位于突触后神经元上的受体结合，且活化这些神经元。谷氨酸盐受体包括NMDA、AMPA和红藻氨酸受体(kainate receptor)。谷氨酸盐转运蛋白的任务是从突触去除细胞外谷氨酸盐。某些事件(例如缺血或中风)损坏谷氨酸盐转运蛋白。这导致突触中积聚过量谷氨酸盐。突触中的过量谷氨酸盐导致谷氨酸盐受体过度活化。
AMPA受体因谷氨酸盐和AMPA的结合而活化。AMPA受体的某些同功异构物的活化导致位于神经元质膜中的离子通道打开。当通道打开时，Na+和Ca2+离子流入神经元且K+离子流出神经元。
NMDA受体因谷氨酸盐和NMDA的结合而活化。NMDA受体的活化导致位于神经元质膜中的离子通道打开。然而，这些通道被Mg2+离子阻断。AMPA受体的活化导致Mg2+离子从离子通道排出进入突触中。当离子通道打开且Mg2+离子撤出离子通道时，Na+和Ca2+离子流入神经元且K+离子流出神经元。
兴奋性毒性在NMDA受体和AMPA受体因过量配体(例如异常量的谷氨酸盐)结合而过度活化时发生。这些受体的过度活化引起离子通道在其控制下过度打开。这使得异常高水平的Ca2+和Na+进入神经元。这些水平的Ca2+和Na+流入到神经元中引起神经元更频繁地放电。这一放电增加使得自由基和发炎性化合物快速累积。自由基损坏线粒体，耗尽细胞的能量储存。另外，过量水平的Ca2+和Na+离子活化过量水平的酶，包括(但不限于)磷脂酶、核酸內切酶和蛋白酶。这些酶过度活化对细胞骨架、质膜、线粒体和神经元DNA产生损害。这些损害通常导致凋亡基因活化。另外，多个促凋亡基因和凋亡调节基因的转录由Ca2+水平控制。过量Ca2+通常导致促凋亡基因上调和凋亡调节基因下调。
老年性耳聋
老年性耳聋是由衰老导致的进行性双侧听力丧失。大多数听力丧失发生在较高频率处(即，频率高于15或16Hz)，使得难以听到女性声音(与男性声音相比)，且不能分辨高音调的声音(诸如“s”和“th”)。可能很难滤除背景噪音。所述病症最通常通过植入助听器和/或投予防止ROS聚集的医药剂来治疗。
所述病症由内耳、中耳和/或VII神经的生理学发生变化而引起。导致老年性耳聋的内耳变化包括上皮萎缩伴随耳部毛细胞和/或静纤毛损失、神经细胞萎缩、血管纹萎缩和基底膜变厚/变硬。可造成老年性耳聋的其它变化包括鼓膜和小骨中缺陷的积聚。
可因DNA突变和线粒体DNA突变的积聚而发生导致老年性耳聋的变化；然而，所述变化可能因暴露于喧闹的噪音、暴露于耳毒性剂、感染和/或流向耳朵的血流减少而加剧。后者可由动脉粥样硬化、糖尿病、高血压和吸烟引起。
耳毒性
耳毒性是指对耳神经元或毛细胞的破坏或损害，其中所述损害由毒素所引起。已知多个药物具有耳毒性。耳毒性通常是剂量依赖性的。其在停止药物后可能是永久性或可逆的。
已知的耳毒性药物包括(但不限于)氨基糖苷类抗生素(例如庆大霉素(gentamicin)和丁胺卡那霉素(amikacin))、大环内酯类抗生素的一些成员(例如红霉素)、糖肽类抗生素的一些成员(例如万古霉素(vancomycin))、水杨酸、烟碱、一些化疗剂(例如放线菌素、博莱霉素、顺铂、卡铂和长春新碱)和袢利尿剂家族药物的一些成员(例如呋喃苯胺酸)。
顺铂和氨基糖苷类抗生素诱导产生活性氧类(ROS)。ROS可通过损害DNA、蛋白质和/或脂质直接损害细胞，因此诱导凋亡。ROS还参与导致凋亡的信号传导级联。在某些情况下，抗氧化剂通过防止ROS形成或在ROS可损害细胞之前清除自由基来防止被ROS损害。因此，一些实施例合并使用抗氧化剂。在某些情况下，硝酮与抗氧化剂协同作用以预防急性噪音诱导的听力丧失。在某些情况下，硝酮捕获自由基。在一些实施例中，与抗氧化剂一起共投予硝酮(例如α-苯基-叔丁基硝酮(PBN)，别嘌呤醇(allpurinol))。顺铂与氨基糖苷类抗生素还被认为因结合内耳血管纹中的黑色素而损害耳朵。
水杨酸归为耳毒性的，因为其抑制蛋白质压力素(prestin)的功能。压力素通过控制穿过外耳部毛细胞质膜的氯离子与碳酸根的交换调节外耳部毛细胞运动性。其仅可见于外耳部毛细胞中，不可见于内耳部毛细胞中。
耳部和/或前庭病症，包括内耳病症和中耳病症，产生包括(但不限于)以下的症状：听力丧失、眼球震颤、眩晕、耳鸣、炎症、肿胀、感染和充血。这些病症可具有许多病因，诸如感染、损伤、炎症、肿瘤和对药物或其它化学剂的不良反应。
损伤
损伤是指由施加外力所致的对耳部结构的物理损坏。在一些实施例中，损伤由暴露于喧闹的噪音(例如鞭炮或喧闹的音乐)所致。在一些实施例中，对耳部结构的损伤由植入医学装置、耳部外科手术、注射、套管插入术等所致。植入物包括内耳或中耳医学装置，其实例包括耳蜗植入物、听力防护装置、听力改善装置、短电极、微假体或活塞样假体；针；干细胞移植物；药物传递装置；基于细胞的治疗剂；等。耳部外科手术包括中耳外科手术、内耳外科手术、鼓膜切开术、耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。注射包括鼓室内注射、耳蜗内注射、穿过圆窗膜注射等。套管插入术包括鼓室内、耳蜗内、内淋巴、外淋巴或前庭套管插入术等。
在一些实施例中，在声致损伤之后投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置延迟或防止由声致损伤引起的对耳结构的损害，例如刺激、细胞死亡骨再生(cell death osteoneogenesis)和/或神经元进一步退化。
在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置与植入外源性材料(例如医学装置植入物或干细胞移植物)组合可延迟或防止由在耳朵中安装外部装置和/或多个细胞(例如干细胞)引起的对耳结构的损害，例如刺激、细胞死亡骨再生和/或神经元进一步退化。在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置与植入物组合使得与单独植入物相比，听力丧失更有效地恢复。
在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置减小由允许成功植入的主要状况引起的对耳结构的损害。在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置结合外科手术和/或植入外源性材料可减小或防止负面副作用(例如细胞死亡)。
在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置结合植入外源性材料具有营养作用(即，促进细胞健康生长和使植入物或移植物区域中的组织愈合)。在一些实施例中，营养作用为耳部外科手术期间或鼓室内注射程序期间所想要。在一些实施例中，营养作用为安装医学装置之后或细胞(例如干细胞)移植之后所想要。在一些所述实施例中，本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置经由直接耳蜗注射、经由耳蜗切开术或经由沉积于圆窗上来投予
在一些实施例中，投予本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置可减小与耳部外科手术或植入外源性材料(例如医学装置或多个细胞(例如干细胞))相关的炎症和/或感染。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置可减小或消除外科手术后和/或植入后并发症(例如炎症、毛细胞损害、神经元退化、骨再生等)。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置可缩短外科手术后或植入后恢复时间。
一方面，本文所述的调配物和其投药模式适用于对内耳隔室进行直接灌注的方法。因此，本文所述的调配物适用于与外科手术组合，所述外科手术包括(但不限于)耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。在一些实施例中，在耳部外科手术之前、耳部外科手术期间、耳部外科手术之后或其组合，给内耳隔室灌注本文所述的抗凋亡剂(例如AM-111)组合物或装置。
在一些实施例中，投予个体AM-111以修复耳部结构因损伤所致的损害。在一些实施例中，在耳部外科手术之前、耳部外科手术期间、耳部外科手术之后投予AM-111以降低由外科手术所致的损害。
医药剂
本文提供防止耳的神经元和耳部毛细胞凋亡和/或改善耳的感觉神经元和/或毛细胞退化的凋亡调节组合物。本文另外提供促进耳的神经元和/或毛细胞生长和/或再生的凋亡调节组合物。本文还提供诱导耳的神经元和/或毛细胞凋亡的凋亡调节组合物。耳部病症具有可对本文公开的医药剂或其它医药剂有反应的病因和症状。本文未公开但适用于改善或根除耳部及/或前庭病症的抗凋亡剂或促凋亡剂明确地包括于所呈示的实施例范围内并且意欲属于所述范围。
此外，先前已显示例如因肝加工之后形成的有毒代谢物、药物在特定器官、组织或系统中的毒性、达成功效所需要的高含量、不能经由全身性途径释放或不良pK特征而在全身性施用或局部施用于其它器官系统期间有毒性、有害或无效的医药剂适用于本文的一些实施例。举例来说，一种抗凋亡剂或促凋亡剂米诺环素的已知的副作用包括腹泻、头痛、呕吐、发烧、黄疸、颅内高压和自体免疫病症(诸如狼疮)。因此，具有有限释放或非全身性释放、全身性毒性、不良pK特征或其组合的医药剂涵盖于本文公开的实施例范围内。
本文公开的凋亡调节组合物任选直接靶向需要治疗的耳结构；例如预期的一个实施例是将本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物直接施用于内耳的圆窗膜或蜗窗嵴上，从而直接到达和治疗内耳或内耳组件。在其它实施例中，将本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂调配物直接施用于卵圆窗。在又其它实施例中，通过例如利用耳蜗微灌注术直接微注射于内耳中直接到达。这些实施例还任选包含药物传递装置，其中所述药物传递装置通过使用针和注射器、泵、微注射装置或其任何组合来传递抗凋亡剂或促凋亡剂调配物。
一些医药剂单独或组合时具有耳毒性。举例来说，以下一些药剂适度有毒至极具毒性：化疗剂，包括放线菌素、博莱霉素、顺铂、卡铂和长春新碱；和抗生素，包括红霉素、庆大霉素、链霉素、双氢链霉素、妥布拉霉素(tobramycin)、奈替米星(netilmicin)、丁胺卡那霉素、新霉素、卡那霉素(kanamycin)、伊替霉素(etiomycin)、万古霉素、甲硝哒唑、卷曲霉素(capreomycin)，且不同程度地影响前庭和耳蜗结构。然而，在一些情况下，耳毒性药物(例如顺铂)与耳保护剂(otoprotectant)的组合通过减小药物的耳毒性作用具有保护性。此外，局部施用潜在耳毒性药物还通过使用较少的量但维持功效或使用目标量但持续较短的时间来减轻全身性施用会发生的毒性作用。
此外，一些医药赋形剂、稀释剂或载剂具有潜在耳毒性。举例来说，氯化苯甲烃铵，一种常见防腐剂，具有耳毒性，因此如果引入前庭或耳蜗结构中，那么可能有害。在调配控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂调配物时，建议避免或组合适当的赋形剂、稀释剂或载剂以从调配物中减少或消除可能的耳毒性组分或减少所述赋形剂、稀释剂或载剂的量。控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂调配物任选地包括耳保护剂，诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素或铁螯合剂，以抵消可由使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂而产生的可能的耳毒性作用。在一些实施例中，与抗氧化剂一起共投予硝酮(例如α-苯基-叔丁基硝酮)。
MAPK/JNK信号传导级联抑制剂
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
MAPK/JNK级联诱导细胞凋亡。细胞应力(例如声致损伤、暴露于耳毒性药剂等)活化有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)。活化的MAPK使c-Jun N末端激酶(JNK)成员上的Thr和Tyr残基磷酸化，从而活化这些激酶。JNK然后使c-Jun磷酸化，c-Jun是AP-1转录因子复合体的一个组分。AP-1的活化诱导Bcl-2家族的若干促凋亡成员(例如Bax、BAD、Bak和Bok)转录。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)MAPK/JNK信号传导级联的活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是米诺环素；SB-203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；PD 169316(4-(4-氟苯基)-2-(4-硝基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑)；SB 202190(4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；RWJ67657(4-[4-(4-氟苯基)-1-(3-苯基丙基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-3-丁炔-1-醇)；SB220025(5-(2-氨基-4-嘧啶基)-4-(4-氟苯基)-1-(4-哌啶基)咪唑)；或其组合。米诺环素通过抑制p38MAPK磷酸化的诱导来防止耳部毛细胞在用耳毒性抗生素庆大霉素治疗后凋亡。在一些实施例中，拮抗MAPK/JNK信号传导级联的药剂是D-JNK1-1((D)-hJIP175-157-DPro-DPro-(D)-HIV-TAT57-48)；AM-111(耳用)；SP600125(蒽并[1，9-cd]吡唑-6(2H)-酮)；JNK抑制剂I((L)-HIV-TAT48-57-PP-JBD20)；JNK抑制剂III((L)-HIV-TAT47-57-gaba-c-Junδ33-57)；AS601245(1，3-苯并噻唑-2-基(2-[[2-(3-吡啶基)乙基]氨基]-4-嘧啶基)乙腈)；JNK抑制剂VI(H2N-RPKRPTTLNLF-NH2)；JNK抑制剂VIII(N-(4-氨基-5-氰基-6-乙氧基吡啶-2-基)-2-(2，5-二甲氧基苯基)乙酰胺)；JNK抑制剂IX(N-(3-氰基-4，5，6，7-四氢-1-苯并噻吩-2-基)-1-萘甲酰胺)；双香豆素(3，3′-亚甲基双(4-羟基香豆素))；SC-236(4-[5-(4-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺)；CEP-1347(塞法隆公司(Cephalon))；CEP-11004(塞法隆公司(Cephalon))；或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是AM-111(耳用)。
JAK(Janus激酶)抑制剂
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，JAK激酶磷酸化和活化参与I型和II型细胞激素受体信号转导路径的下游蛋白质。在某些情况下，JAK2激酶的活化诱导凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)Janus激酶(JAK)活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)Janus激酶2(JAK2)活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是VX-680、TG101348、TG101209、INCB018424、XL019、CEP-701、AT9283或其组合。
Bcl-2家族
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，抗凋亡剂是Bcl-2。在某些情况下，Bcl-2部分或完全抑制卡斯蛋白酶(例如卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶-6)的活化。在某些情况下，Bcl-2(或其剪接变异体)的治疗作用或激动作用改善神经细胞的局部缺血性损害。在某些情况下，Bcl-2(或其剪接变异体)的治疗作用或激动作用改善顺铂诱导的凋亡。在某些情况下，Bcl-2(或其剪接变异体)的治疗作用或激动作用改善新霉素诱导的凋亡。在某些情况下，Bcl-2(或其剪接变异体)的治疗作用或激动作用改善声致损伤诱导的凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是包含凋亡调节Bcl-2多肽的至少一部分的人造蛋白质。在一些实施例中，Bcl-2家族的凋亡调节成员是特大号基底细胞淋巴瘤(Bcl-XL)。Bcl-XL是通常于癌细胞中过度表达的Bcl-2家族的凋亡调节成员。在一些实施例中，源自Bcl-x(L)的人造蛋白质是FNK。在一些实施例中，构筑包含FNK和HIV/TAT蛋白质构筑体的转导域(TAT)的融合蛋白质。对于FNK-TAT构筑体的cDNA序列，参看美国专利第7,253,269号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。投予FNK-TAT蛋白质构筑体可抑制被损伤损害的神经元和耳部毛细胞凋亡的诱导。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)Bax、BAD、Bak、Bok或其组合的活性的药剂。在某些情况下，Bax多肽(单独或与另一多肽组合)在细胞线粒体的外膜中形成小孔。在某些情况下，Bak多肽(单独或与另一多肽组合)在细胞线粒体的外膜中形成小孔。细胞线粒体中小孔的形成会部分或完全引起细胞色素c和其它促凋亡因子从线粒体中释放(“线粒体外膜渗透”)。在某些情况下，线粒体外膜渗透会部分或完全引起多个卡斯蛋白酶活化。在某些情况下，卡斯蛋白酶的活化会部分或完全引起凋亡诱导。在某些情况下，BAD多肽结合Bcl-2和Bcl-xL。在某些情况下，BAD多肽与Bcl-2或Bcl-xL多肽的结合使Bcl-2和/或Bcl-xL多肽失活。在某些情况下，Bcl-2或Bcl-xL多肽的失活促进由Bax和/或Bak诱导的凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是Bax抑制肽V5(也称为Bax抑制剂肽V5)；Bax通道阻断剂((±)-1-(3，6-二溴咔唑-9-基)-3-哌嗪-1-基-丙-2-醇)；Bax抑制肽P5(也称为Bax抑制剂肽P5)；或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂抑制(部分或完全)Bak的活性。在一些实施例中，抗凋亡剂抑制(部分或完全)BAD的活性。
FAS
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
Fas(也称为CD95、Apo-1和TNFRSf6)是受体。在某些情况下，当Fas由其配体结合时，Fas形成诱导死亡的信号传导复合体(DISC)。DISC由经配体结合的Fas受体的三聚体和若干其它多肽(包括(但不限于)FADD和卡斯蛋白酶8)构成。在某些情况下，DISC内化于细胞中。在某些情况下，卡斯蛋白酶-8多肽与FADD的结合引起卡斯蛋白酶8多肽活化。在某些情况下，活性卡斯蛋白酶-8多肽从DISC中释放到细胞的胞液中。在某些情况下，活性卡斯蛋白酶-8多肽裂解其它效应卡斯蛋白酶，从而引起DNA降解、细胞膜起泡、细胞皱缩、染色质浓缩以及细胞核和细胞质破碎。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)FAS活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是Kp7-6；FAIM(S)(Fas凋亡抑制分子-短型)；FAIM(L)(Fas凋亡抑制分子-长型)；Fas:Fc；FAP-1；或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是抗Fas配体抗体；抗Fas抗体；或其组合。在一些实施例中，抗Fas配体抗体是NOK2；F2051；F1926；F2928；或其组合。在一些实施例中，抗Fas抗体是ZB4；Fas M3mAb；或其组合。
Akt
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，Akt1(也称为Aktα)抑制(单独或与其它多肽组合)凋亡。在某些情况下，Akt结合PIP3和/或PIP2。在某些情况下，结合PIP3之后，Akt被PDPK1、mTORC2和DNA-PK磷酸化。在某些情况下，Akt通过结合和调控其它多肽中的核因子-κB、Bcl-2家族、MDM2、FOXO1、GSK-3、Raf-1、ASK、Chk1、Bad和MDM2调控(单独或与其它多肽组合)凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)Akt1活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是生长因子。在一些实施例中，生长因子是EGF。
PI3激酶
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，磷酸肌醇3-激酶(PI3激酶)使磷脂酰肌醇(例如磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸盐)的肌醇环的3位羟基磷酸化。在某些情况下，PI3(例如p110α、p110δ和p110γ)活化结合AKT的PIP3。在某些情况下，结合于PIP3的AKT被PDPK1、mTORC2和DNA-PK磷酸化。在某些情况下，磷酸化的AKT抑制凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是抑制(部分或完全)PI3激酶活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是740Y-P；SC 3036(KKHTDDGYMPMSPGVA)；PI3激酶活化剂(圣克鲁斯生物技术公司(Santa Cruz Biotechnology，Inc.))；或其组合。
NF-kB
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，NF-kB(核因子-κB)转录因子由均二聚合和杂二聚合若干亚单元形成。亚单元包含(但不限于)NF-κB1(p50)；NF-κB2(p52)；RelA(p65)；RelB；和c-Rel。在某些情况下，NF-kB由p50与p65的杂二聚体或p52与p65的杂二聚体构成。
p65含有转录活化域。在某些情况下，非活性NF-kB可见于胞液中，且由调控蛋白(例如IkBa和IkBb)结合。
在某些情况下，NF-κB家族的成员应答(在其它触发中)细胞激素、LPS、紫外线辐射、休克(例如热或渗透)、氧应力或其组合而活化。在某些情况下，暴露于前述触发引起IkB被IKK磷酸化。在某些情况下，IKK磷酸化IkB引起IkB蛋白水解降解。在某些情况下，IkB的降解允许NF-kB移位到细胞核中，在细胞核中NF-kB结合目标基因的kB强化子元件并诱导转录。在某些情况下，活性NF-κB转录因子抑制凋亡。在某些情况下，活性NF-κB转录因子抑制凋亡调节基因TRAF1和TRAF2。在某些情况下，活性NF-κB转录因子促进凋亡。
因此，一些实施例合并使用调节NF-kB转录因子的药剂。在某些情况下，调节NF-kB转录因子的药剂是NF-kB的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，调节NF-kB转录因子的药剂是NF-kB转录因子激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂。在一些实施例中，NF-kB转录因子激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是Pam3Cys((S)-2，3-双(棕榈酰氧基)-(2RS)-丙基)-N-棕榈酰基-(R)-Cys-(S)-Ser(S)-Lys4-OH三盐酸盐)；Act1(NF-kB活化剂1)；或其组合。
在一些实施例中，NF-kB激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是IkB拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，IkB拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是抗IkB抗体。
在一些实施例中，调节NF-kB转录因子的药剂是NF-kB转录因子拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，所述NF-kB转录因子拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是乙酰基-11-酮基-b-乳香酸；穿心莲内酯；咖啡酸苯乙酯(CAPE)；胶霉毒素；异土木香内酯；NEMO结合域结合肽(DRQIKIWFQNRRMKWKKTALDWSWLQTE)；NF-kB活化抑制剂(6-氨基-4-(4-苯氧基苯乙基氨基)喹唑啉)；NF-kB活化抑制剂II(4-甲基-N1-(3-苯基丙基)苯-1，2-二胺)；NF-kB活化抑制剂III(3-氯-4-硝基-N-(5-硝基-2-噻唑基)-苯甲酰胺)；NF-kB活化抑制剂IV((E)-2-氟-4′-甲氧基二苯乙烯)；NF-kB活化抑制剂V(5-羟基-(2，6-二异丙基苯基)-1H-异吲哚-1，3-二酮)；NF-kB SN50(AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP)；冬凌草甲素；小白菊内酯；PPM-18(2-苯甲酰基氨基-1，4-萘醌)；Ro106-9920；柳氮磺胺吡啶；TIRAP抑制剂肽(RQIKIWFNRRMKWKKLQLRDAAPGGAIVS)；醉茄素A；汉黄芩素；或其组合。
在一些实施例中，调节NF-kB转录因子的药剂抑制TNF活化NF-kB。在一些实施例中，调节NF-kB转录因子的药剂是TNF的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，抑制TNF活化NF-kB的药剂是BAY 11-7082((E)3-[(4-甲基苯基)磺酰基]-2-丙烯腈)；BAY 11-7085((E)3-[(4-叔丁基苯基)磺酰基]-2-丙烯腈)；(E)-辣椒素；或其组合。
在一些实施例中，调节NF-kB转录因子的药剂是IKK拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，所述IKK拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是金硫苹果酸盐(ATM或AuTM)；吴茱萸碱；次叶下珠素；IKK抑制剂III(BMS-345541)；IKK抑制剂VII；IKK抑制剂X；IKK抑制剂II；IKK-2抑制剂IV；IKK-2抑制剂V；IKK-2抑制剂VI；IKK-2抑制剂(SC-514)；IkB激酶抑制剂肽；IKK-3抑制剂IX；或其组合。
在一些实施例中，NF-kB拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是IKK激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂。
p38
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，p38(有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK))应答(在其它触发中)细胞激素、LPS、紫外线辐射、休克(例如热或渗透)、氧应力或其组合的存在而诱导(单独或与其它多肽组合)凋亡。在某些情况下，活化的p38多肽使MAPKAP激酶2、ATF-2、Mac和MEF2磷酸化。在某些情况下，MAPKAP激酶2、ATF-2、Mac和/或MEF2的磷酸化导致凋亡。在某些情况下，当暴露于耳毒性药剂(例如新霉素和/或顺铂)的耳蜗培养物首先用p38抑制剂SB-203580处理时，培养物中的凋亡减少。
因此，一些实施例合并使用调节p38的药剂。在一些实施例中，调节p38的药剂是p38拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，所述p38拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是ARRY-797(阿莱生物制药公司(ArrayBioPharma))；SB-220025(5-(2-氨基-4-嘧啶基)-4-(4-氟苯基)-1-(4-哌啶基)咪唑)；SB-239063(反-4-[4-(4-氟苯基)-5-(2-甲氧基-4-嘧啶基)-1H-咪唑-1-基]环己醇)；SB-202190(4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；JX-401(-[2-甲氧基-4-(甲硫基)苯甲酰基]-4-(苯基甲基)哌啶)；PD-169316(4-(4-氟苯基)-2-(4-硝基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑)；SKF-86002(6-(4-氟苯基)-2，3-二氢-5-(4-吡啶基)咪唑并[2，1-b]噻唑二盐酸盐)；SB-200646(N-(1-甲基-1H-吲哚-5-基)-N′-3-吡啶基脲)；CMPD-1(2′-氟-N-(4-羟基苯基)-[1，1′-联苯基]-4-丁酰胺)；EO-1428((2-甲基苯基)-[4-[(2-氨基-4-溴苯基)氨基]-2-氯苯基]甲酮)；SB-253080(4-[5-(4-氟苯基)-2-[4-(甲基磺酰基)苯基]-1H-咪唑-4-基]吡啶)；SD-169(1H-吲哚-5-甲酰胺)；SB-203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)1H-咪唑)；或其组合。
胃內激素
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些实施例中，胃內激素是结合生长激素促分泌素受体(GHS-R)的配体。在某些情况下，暴露于胃內激素会抑制心肌细胞、内皮细胞、脂肪细胞、肾上腺球状带细胞、胰脏β细胞、成骨细胞MC3T3-E1细胞、肠上皮细胞和/或下丘脑神经元的凋亡。在某些情况下，暴露于胃內激素会引起ERK1/2活化。在某些情况下，暴露于胃內激素会降低活性氧类的产生。在某些情况下，暴露于胃內激素会使线粒体跨膜电位稳定。另外，暴露于胃內激素治疗会引起Bcl-2/Bax比率增加和卡斯蛋白酶-3的拮抗作用。
因此，一些实施例合并使用调节胃內激素的药剂。在某些情况下，调节胃內激素的药剂是胃內激素的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，所述调节胃內激素的药剂是胃內激素激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂。在一些实施例中，胃內激素激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是TZP-101(特兰齐姆制药公司(Tranzyme Pharma))；TZP-102(特兰齐姆制药公司(Tranzyme Pharma))；GHRP-6(生长激素释放肽-6)；GHRP-2(生长激素释放肽-2)；EX-1314(万能药医药公司(Elixir Pharmaceuticals))；MK-677(默克公司(Merck))；L-692,429((R)-3-氨基-3-甲基N-(2，3，4，5-四氢-2-氧代-1-((2′-(1H-四唑-5-基)(1，1′-联苯基)-4-基)甲基)-1H-1-苯并氮杂卓-3-基)-丁酰胺)；EP1572(Aib-DTrp-DgTrp-CHO)；地尔硫卓(diltiazem)；地尔硫卓代谢物；或其组合。
BRE
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用凋亡调节多肽、凋亡调节多肽的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂、或其组合。在一些实施例中，凋亡调节多肽是BRE(脑和生殖器官表达的蛋白质)。在某些情况下，BRE是受体拮抗剂。在某些情况下，BRE是TNF-R1拮抗剂。在某些情况下，BRE是Fas拮抗剂。在某些情况下，BRE对TNF-R1和/或Fas的拮抗作用可部分或完全抑制下游卡斯蛋白酶活化。在某些情况下，抑制卡斯蛋白酶活化可部分或完全抑制凋亡。在某些情况下，BRE与TNF-R1和/或Fas的结合可部分或完全抑制线粒体凋亡路径。
钙通道阻断剂
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用拮抗Ca2+通道打开的药剂。多个促凋亡基因和凋亡调节基因的转录由Ca2+离子水平控制。另外，Ca2+离子是活化多个酶所需的，所述酶包括(但不限于)磷脂酶、核酸內切酶和蛋白酶。如果这些酶过度活化，那么其损害神经元的细胞骨架、质膜、线粒体和DNA。如果损害显著，那么神经元将凋亡。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂是Ca2+通道阻断剂的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，Ca2+通道阻断剂是维拉帕米；尼莫地平；地尔硫卓；ω-芋螺毒素；GVIA；氨氯地平；非洛地平；拉西地平；米贝拉地尔；NPPB(5-硝基-2-(3-苯丙基氨基)苯甲酸)；氟桂利嗪；或其组合。
载脂蛋白
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，抗凋亡剂是促进载脂蛋白活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoE、ApoE激动剂、ApoE模拟物、ApoE同源物、或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoA、ApoA激动剂、ApoA模拟物、ApoA同源物、或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoB、ApoB激动剂、ApoB模拟物、ApoB同源物、或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoC、ApoC激动剂、ApoC模拟物、ApoC同源物、或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoD、ApoD激动剂、ApoD模拟物、ApoD同源物、或其组合。在一些实施例中，抗凋亡剂是ApoH、ApoH激动剂、ApoH模拟物、ApoH同源物、或其组合。
红细胞生成素
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用调控抗凋亡基因活性的药剂。在一些实施例中，调控抗凋亡基因活性的药剂是红细胞生成素(EPO)。EPO是结合受体之后活化JAK2级联的糖蛋白。此最终引起多个凋亡调节基因活化。EPO受体可见于内指细胞和外指细胞、内沟细胞、支撑柯蒂氏器官(organ ofCorti)的细胞和螺旋神经节神经元的细胞质中。
用外源性EPO治疗使得凋亡中的细胞数目减少。其还改善声致损伤和局部缺血诱导的损害，且其防止神经元具有谷氨酸盐诱导的兴奋性毒性。因此，EPO防止神经元和耳部毛细胞凋亡和/或损害诱导的凋亡。因此，在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂是红细胞生成素的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。
HO-1
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
HO-1的表达抑制凋亡的诱导。因此，一些实施例合并使用调节血红素加氧酶-1(HO-1)活性的药剂。在一些实施例中，HO-1的调节剂是HO-1的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，HO-1的调节剂是HO-1激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂。在一些实施例中，HO-1的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是胡椒碱、氯化血红素和/或巴西木素。
卡斯蛋白酶
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，合并卡斯蛋白酶目标(包括但不限于卡斯蛋白酶-8和/或卡斯蛋白酶-9)的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。一些实施例合并使用卡斯蛋白酶抑制剂。卡斯蛋白酶是其中一些调节凋亡的蛋白酶。卡斯蛋白酶8与卡斯蛋白酶9可见于经受声致损伤、氨基糖苷类处理和顺铂处理的毛细胞中。当用新霉素处理后用卡斯蛋白酶拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂处理前庭毛细胞时，细胞存活得以维持。在一些实施例中，卡斯蛋白酶抑制剂是z-VAD-FMK(苯甲氧基羰基-Val-Ala-Asp(OMe)-氟甲基酮)；z-LEHD-FMK(苯甲氧基羰基-Leu-Glu(OMe)-His-Asp(OMe)-氟甲基酮)；B-D-FMK(boc-天冬氨酰基(Ome)-氟甲基酮)；Ac-LEHD-CHO(N-乙酰基-Leu-Glu-His-Asp-CHO)；Ac-IETD-CHO(N-乙酰基-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO)；z-IETD-FMK(苯甲氧基羰基-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-氟甲基酮)；FAM-LEHD-FMK(苯甲氧基羰基Leu-Glu-His-Asp-氟甲基酮)；FAM-LETD-FMK(苯甲氧基羰基Leu-Glu-Thr-Asp-氟甲基酮)；Q-VD-OPH(喹啉-Val-Asp-CH2-O-Ph)；或其组合。
凋亡蛋白质抑制剂(IAP)
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，合并凋亡调节多肽的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。一些实施例合并使用凋亡调节多肽、凋亡调节多肽的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂、或其组合。在一些实施例中，凋亡调节多肽是凋亡蛋白质抑制剂(IAP)家族的成员(例如XIAP；cIAP-1；cIAP-2；ML-IAP；ILP-2；NAIP；生存素；Bruce；和IAPL-3)。在某些情况下，XIAP的治疗作用或激动作用改善老年性耳聋的发展和/或进展。在某些情况下，XIAP的治疗作用或激动作用改善高频范围内的听力损失。在某些情况下，XIAP的治疗作用或激动作用改善庆大霉素诱导的听力损失。
在某些情况下，IAP家族的成员拮抗卡斯蛋白酶(例如卡斯蛋白酶3、卡斯蛋白酶7、卡斯蛋白酶8和卡斯蛋白酶9)。在某些情况下，XIAP拮抗卡斯蛋白酶3、卡斯蛋白酶7和卡斯蛋白酶9。在某些情况下，cIAP-1拮抗卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶7。在某些情况下，cIAP-2拮抗卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶7。在某些情况下，ML-IAP拮抗卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶9。在某些情况下，ILP-2拮抗卡斯蛋白酶9。在某些情况下，NIAP拮抗卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶7。在某些情况下，生存素拮抗卡斯蛋白酶9。在某些情况下，卡斯蛋白酶的拮抗作用部分或完全抑制凋亡。在某些情况下，IAP家族的成员催化卡斯蛋白酶的泛素化。在某些情况下，XIAP催化卡斯蛋白酶的泛素化。在某些情况下，cIAP-1催化卡斯蛋白酶的泛素化。在某些情况下，cIAP-2催化卡斯蛋白酶(例如卡斯蛋白酶3和卡斯蛋白酶7)的泛素化。
在一些实施例中，IAP家族的成员是XIAP(X连锁IAP)；cIAP-1(细胞IAP-1)；cIAP-2(细胞IAP-2)；ML-IAP(黑色素瘤IAP)；ILP-2(IAP样蛋白质)；NAIP(神经元凋亡抑制蛋白质)；生存素；Bruce；IAPL-3；或其组合。在一些实施例中，IAP是XIAP。在一些实施例中，IAP在第二多肽之前、之后或与其同时投予。在一些实施例中，生存素在乙肝X相互作用蛋白质(HBXIP)之前、之后或与其同时投予。在一些实施例中，ILP-2与结合搭配物一起投予。在某些情况下，结合搭配物使ILP-2稳定。
Fortilin
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用凋亡调节多肽的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。在一些实施例中，采用凋亡调节多肽、凋亡调节多肽的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂或其组合。在一些实施例中，凋亡调节多肽是fortilin。在某些情况下，fortilin结合Ca2+。在某些情况下，Ca2+介导多个促凋亡基因的转录。在某些情况下，Ca2+由fortilin结合可部分或完全抑制Ca2+介导的促凋亡基因转录。
钙蛋白酶
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用钙蛋白酶的一种或一种以上拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。钙蛋白酶是钙依赖性非溶酶体半胱氨酸蛋白酶。其参与细胞凋亡。亮抑酶肽，一种钙蛋白酶抑制剂，保护神经和耳部毛细胞免于氨基糖苷类耳毒性。另外，钙蛋白酶在顺铂治疗或声致损伤后通常可见于耳的神经元和/或毛细胞中。在一些实施例中，所述钙蛋白酶抑制剂是亮抑酶肽；PD-150606(3-(4-碘苯基)-2-巯基-(Z)-2-丙烯酸)；MDL-28170(Z-Val-Phe-CHO)；钙蛋白酶抑制剂；乙酰基-钙蛋白酶抑制蛋白；MG 132(N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰基-N-[(1S)-1-甲酰基-3-甲基丁基]-L-亮氨酰胺)；MYODUR；BN 82270(伊普森公司(Ipsen))；BN 2204(伊普森公司(Ipsen))；或其组合。
p53
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用p53的一种或一种以上拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。p53是调控细胞周期和引发受损细胞凋亡的转录因子。在一些实施例中，p53的拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是siRNA分子，即AHLi-11(夸克制药公司(Quark Pharmaceuticals))；mdm2蛋白质，即pifithrin-α(1-(4-甲基苯基-2-(4，5，6，7-四氢-2-亚氨基-3(2H)-苯并噻唑基)乙酮)；其类似物；或其组合。
热休克蛋白
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，抗凋亡剂是促进热休克蛋白活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是热休克蛋白。在一些实施例中，抗凋亡剂是Hsp、Hsp激动剂或其同源物或模拟物。在一些实施例中，抗凋亡剂是Hsp70；Hsp72；BiP(或Grp78)；mtHsp70(或Grp75)；Hsp70-1b；Hsp70-1L；Hsp70-2；Hsp70-4；Hsp70-6；Hsp70-7；Hsp70-12a；Hsp70-14；Hsp10；Hsp27；Hsp40；Hsp60；Hsp90；Hsp104；Hsp110；Grp94；或其组合。
三叶因子
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在某些情况下，三叶因子诱导NF-κB的活化。在某些情况下，NF-κB的活化抑制凋亡。
在一些实施例中，抗凋亡剂是促进三叶因子活性的药剂。在一些实施例中，抗凋亡剂是三叶因子。在一些实施例中，抗凋亡剂是三叶因子、三叶因子激动剂、或其同源物或模拟物。在一些实施例中，抗凋亡剂是TFF1、TFF2、TFF3或其组合。
长寿因子调节剂
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
因此，一些实施例合并使用长寿因子的一种或一种以上拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。长寿因子(或Sir2蛋白质)包含III类组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)。存在七个家族成员：Sirt1、Sirt2、Sirt3、Sirt4、Sirt5、Sirt6和Sirt7。Sirt1的激动作用可防止促凋亡基因p53和Ku-70因脱乙酰基反应而凋亡。在一些实施例中，长寿因子活性的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是二苯乙烯、黄酮、异黄酮、黄烷酮、儿茶素、自由基保护性化合物、异烟酰胺、双嘧达莫(dipyridamole)、ZM 336372(3-(二甲氨基)-N-[3-[(4-羟基苯甲酰基)-氨基]-4-甲基苯基]苯甲酰胺)、喜树碱、香豆雌酚(coumestrol)、去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid)、七叶亭(esculetin)、SRT-1720(Sirtris)、SRT-1460(Sirtris)、SRT-2183(Sirtris)、其类似物或其组合。
在一些实施例中，长寿因子的激动剂、部分激动剂和/或正变构调节剂是二苯乙烯。在一些实施例中，二苯乙烯是反-二苯乙烯；顺-二苯乙烯；白藜芦醇；白皮杉醇；土大黄甙；脱氧土大黄甙；紫铆因；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是查耳酮。在一些实施例中，所述查耳酮是橙皮苷(chalcon)；异甘草根糖精宁；紫铆因；4，2′，4′-三羟基查耳酮；3，4，2′，4′，6′-五羟基查耳酮；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是黄酮。在一些实施例中，所述黄酮是黄酮；桑色素；漆树黄酮；木犀草素；槲皮素；山萘酚；芹菜素；棉花素；杨梅素；6-羟基芹菜素；5-羟基黄酮；5，7，3′，4′，5′-五羟基黄酮；3，7，3′，4′，5′-五羟基黄酮；3，6，3′，4′-四羟基黄酮；7，3′，4′，5′-四羟基黄酮；3，6，2′4′-四羟基黄酮；7，4′-二羟基黄酮；7，8，3′，4′-四羟基黄酮；3，6，2′，3′-四羟基黄酮；4′-羟基黄酮；5-羟基黄酮；5，4′-二羟基黄酮；5，7-二羟基黄酮；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是异黄酮。在一些实施例中，异黄酮是大豆黄酮；染料木素；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是黄烷酮。在一些实施例中，黄烷酮是柑桔黄素；黄烷酮；3，5，7，3′，4′-五羟基黄烷酮；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是花青素。在一些实施例中，花青素是氯化花葵素；氯化花青素；氯化翠雀素；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是儿茶素。在一些实施例中，儿茶素是(-)-表儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(-)-儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(-)-没食子儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′，5′)；(+)-儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；(+)-表儿茶素(羟基位置：3，5，7，3′，4′)；或其组合。
在一些实施例中，调节长寿因子催化的脱乙酰基反应的药剂是自由基保护性化合物。在一些实施例中，自由基保护性化合物是日扁柏素(b-崖柏素；2-羟基-4-异丙基-2，4，6-环庚三烯酚-1-酮)；L-(+)-麦角硫因((S)-a-羧基-2，3-二氢-N，N，N-三甲基-2-硫代-1H-咪唑4-乙铵内盐)；咖啡酸苯酯；MCI-186(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)；HBED(N，N′-二-(2-羟基苯甲基)乙二胺-N，N′-二乙酸·H2O)；氨溴索(反-4-(2-氨基-3，5-二溴苯甲氨基)环己烷盐酸盐；和U-83836E((-)-2-((4-(2，6-二-1-吡咯啶-4-嘧啶基)-1-哌嗪基)甲基)-3，4-二氢-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并哌喃-6-醇·2HCl)；或其组合。
在一些实施例中，烟酰胺结合拮抗剂是异烟酰胺或异烟酰胺类似物。在一些实施例中，异烟酰胺类似物是β-1′-5-甲基-烟酰胺-2′-脱氧核糖；β-D-1′-5-甲基-烟酰胺-2′-脱氧呋喃核糖；β-1′-4，5-二甲基-烟酰胺-2′-脱氧核糖；或β-D-1′-4，5-二甲基-烟酰胺-2′-脱氧呋喃核糖。关于其它异烟酰胺类似物，参看美国专利第5,985,848号、第6,066,722号、第6,228,847号、第6,492,347号、第6,803,455号和美国专利公开案第2001/0019823号、第2002/0061898号、第2002/0132783号、第2003/0149261号、第2003/0229033号、第2003/0096830号、第2004/0053944号、第2004/0110772号和第2004/0181063号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
Src
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
抑制Src pp60c-src可调节凋亡。因此，一些实施例合并使用蛋白激酶Src家族的一种或一种以上拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。Src家族是非受体蛋白质激酶家族。可见于脊椎动物中的Src激酶的实例包括(但不限于)Src、Yes、Fgr、Yrk、Fyn、Lyn、Hck、Lck和Blk。其通过将磷酸从ATP转移到丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的游离羟基上来催化蛋白质磷酸化反应。作为非限制性实例，Src激酶催化的磷酸化反应的目标包括纽蛋白、皮层肌动蛋白(cortactin)、踝蛋白(talin)、桩蛋白(paxillin)、FAK、张力蛋白、埃兹蛋白(ezrin)、p130cas、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、ZO-1、咬合蛋白(occludin)、p120ctn、连接蛋白43、粘连蛋白-2δ。Src激酶由N末端SH3域、中心SH2域和酪氨酸激酶域组成。配体与SH2和SH3域的结合诱导的构型变化抑制Src激酶活性。
在一些实施例中，Src是pp60c-src。在一些实施例中，Src拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂是1-萘基PP1(1-(1，1-二甲基乙基)-3-(1-萘基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；薰草菌素A(5-[[(2，5-二羟基苯基)甲基][(2-羟基苯基)甲基]氨基]-2-羟基苯甲酸)；MNS(3，4-亚甲基二氧基-b-硝基苯乙烯)；PP1(1-(1，1-二甲基乙基)-1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；PP2(3-(4-氯苯基)1-(1，1-二甲基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺)；KX1-004(Kinex)；KX1-005(Kinex)；KX1-136(Kinex)；KX1-174(Kinex)；KX1-141(Kinex)；KX2-328(Kinex)；KX1-306(Kinex)；KX1-329(Kinex)；KX2-391(Kinex)；KX2-377(Kinex)；ZD4190(阿斯利康公司(Astra Zeneca)；N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙氧基)喹唑啉-4-胺)；AP22408(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AP23236(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AP23451(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AP23464(阿瑞德制药公司(Ariad Pharmaceuticals))；AZD0530(阿斯利康公司(AstraZeneca))；AZM475271(M475271；阿斯利康公司(Astra Zeneca))；达沙替尼(N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺)；GN963(反-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)环己醇硫酸盐)；泊舒替尼(4-((2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基-1-哌嗪基)丙氧基)-3-喹啉甲腈)；或其组合。关于激酶Src家族其它拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂的揭示内容，参看美国公开案第2006/0172971号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
RNAi
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是防止神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，抗凋亡剂)。另外，涵盖与本文公开的调配物一起使用的是诱导神经元和耳部毛细胞凋亡的药剂(即，促凋亡剂)。因此，一些实施例合并使用抗凋亡剂。或者，一些实施例合并使用促凋亡剂。
在一些实施例中，当想要抑制或下调目标(例如MAPK/JNK级联中的基因、卡斯蛋白酶基因、Src基因、钙蛋白酶基因、Ca2+通道基因)时，可利用RNA干扰。在一些实施例中，抑制或下调目标的药剂是siRNA分子。在某些情况下，siRNA分子抑制由RNA干扰(RNAi)所致的目标转录。在一些实施例中，产生序列与目标互补的双链RNA(dsRNA)分子(例如通过PCR)。在一些实施例中，产生序列与目标互补的20-25bp siRNA分子。在一些实施例中，20-25bp siRNA分子在各链3′端、5′磷酸端和3′羟基端上具有2-5bp悬臂。在一些实施例中，20-25bp siRNA分子具有钝端。关于产生RNA序列的技术，参看分子克隆：实验手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，第2版(山姆布鲁克(Sambrook)等人，1989)和分子克隆：实验手册(Molecular Cloning：A LaboratoryManual)，第3版(山姆布鲁克(Sambrook)和拉塞尔(Russel)，2001)，在本文中共同称为“山姆布鲁克(Sambrook)”；分子生物学中的当前方案(Current Protocols in MolecularBiology)(F.M.阿索贝尔(F.M.Ausubel)等人编，1987，包括2001年的增刊)；核酸化学中的当前方案(Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry)约翰威利父子公司(JohnWiley&Sons，Inc.)，纽约(New York)，2000，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，dsRNA或siRNA分子并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯蒂氏器官、前庭迷路或其组合中。
在某些情况下，投予dsRNA或siRNA分子之后，投予部位处的细胞(例如耳蜗、柯蒂氏器官和/或前庭迷路细胞)经dsRNA或siRNA分子转型。在某些情况下，转型后，dsRNA分子裂解成约20-25bp的多个片段，从而得到siRNA分子。在某些情况下，片段在各链3′端具有约2bp的悬臂。
在某些情况下，siRNA分子被RNA诱导的沉默复合体(RISC)分为两个链(引导链和反引导链)。在某些情况下，引导链并入RISC的催化组分(即，argonaute)中。在某些情况下，引导链结合互补目标mRNA序列。在某些情况下，RISC裂解目标mRNA。在某些情况下，目标基因的表达下调。
在一些实施例中，与目标互补的序列连接于载体。在一些实施例中，所述序列位于两个启动子之间。在一些实施例中，启动子以反方向定向。在一些实施例中，载体与细胞接触。在某些情况下，细胞用载体转型。在某些情况下，转型之后，产生序列的有义链和反义链。在某些情况下，有义链和反义链杂交形成dsRNA分子，其可裂解成siRNA分子。在某些情况下，链杂交形成siRNA分子。在一些实施例中，载体是质粒(例如pSUPER；pSUPER.neo；pSUPER.neo+gfp)。
在一些实施例中，载体并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯蒂氏器官、前庭迷路或其组合中。
在一些实施例中，本文所述的组合物的活性医药成分或其医药学上可接受的前药或盐的浓度为以组合物的体积计约0.1至约70mg/mL之间，在约0.5mg/mL至约70mg/mL之间，在约0.5mg/mL至约50mg/mL之间，在约0.5mg/mL至约20mg/mL之间，在约1mg至约70mg/mL之间，在约1mg至约50mg/mL之间，在约1mg/mL至约20mg/mL之间，在约1mg/mL至约10mg/mL之间或在约1mg/mL至约5mg/mL之间的活性剂或其医药学上可接受的前药或盐。
抗体
涵盖与本文公开的调配物一起使用的是抑制耳部赘瘤生长的药剂。在一些实施例中，所述药剂是抗体。在一些实施例中，抗体抑制血管生长。在一些实施例中，抗体诱导赘生性细胞死亡(例如凋亡)。在一些实施例中，所述抗体是抗CD-20抗体、抗CD22抗体、抗CD32b抗体、抗CD-33抗体、抗CD40抗体、抗CD52抗体、抗EGFR抗体、抗VEGF抗体、抗HER2受体抗体、抗17-1A抗体、抗CCR4抗体、抗IGF-1R抗体、抗CTLA-4抗体、或其组合。在一些实施例中，所述抗体是抗CD20抗体。在一些实施例中，所述抗体是利妥昔单抗(rituximab)、托西莫单抗(tositumomab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、伊拉妥珠(epratuzumab)、阿莱珠单抗(alemtuzumab)、奥利珠单抗(ocrelizumab)(PRO70769)、维妥珠单抗(veltuzumab)(IMMU-106或hA20)、奥法木单抗(ofatumumab)(HuMax-CD20人类IgG1抗体或2F2)、HuMAB 7D8(Genmab A/S)、AME-133v(LY2469298，应用分子进化公司(Applied Molecular Evolution))、GA101(R7159，基因技术公司(Genentech))、PRO131921(基因技术公司(Genentech))、rhuMAbv114、Hex-hA20(免疫医药公司(Immunomedics))、BLX301(百莱斯公司(BioLex))、Bi20(FBTA05，TRION制药公司(TRION Pharma))、伊拉妥珠、鲁昔单抗(lumiliximab)、HuM195、阿莱珠单抗、西妥昔单抗(cetuximab)、盘尼图单抗(panitumumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、阿德木单抗(adecatumumab)、KM2760、rhuCD40mAb、达妥珠单抗(Dacetuzumab)(SGN40)、CP-870,893(辉瑞制药有限公司(Pfizer))、HCD122(诺华公司(Novartis)/艾克索玛公司(Xoma))、CP-675,206(辉瑞制药有限公司(Pfizer))、CP-751,871(辉瑞制药有限公司(Pfizer))、或其组合。
组合疗法
在一些实施例中，本文公开的组合物另外包含另一治疗剂。在一些实施例中，所述另一治疗剂是酸化剂、麻醉剂、止痛剂、抗生素、止吐药、抗真菌剂、抗微生物剂、抗精神病药(尤其吩噻嗪类抗精神病药)、防腐剂、抗病毒剂、收敛剂、化疗剂、胶原蛋白、皮质类固醇、利尿剂、角质溶解剂、一氧化氮合成酶抑制剂或其组合。
酸化剂
酸化剂任选地与本文公开的组合物组合使用。酸化剂降低前庭环境的pH值水平，使其不利于大多数微生物生长。酸化剂包括(但不限于)乙酸。
止吐剂
止吐剂任选地与本文公开的组合物组合使用。止吐剂包括异丙嗪(promethazine)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、曲美苄胺(trimethobenzamide)和硫乙拉嗪(triethylperazine)。其它止吐剂包括5HT3拮抗剂，诸如多拉司琼(dolasetron)、格拉司琼(granisetron)、昂丹司琼(ondansetron)、托烷司琼(tropisetron)和帕洛诺司琼(palonosetron)；和抗精神病药，诸如氟哌利多(droperidol)。其它止吐剂包括抗组胺剂，诸如美其敏(meclizine)；吩嗪类，诸如奋乃静(perphenazine)和硫乙拉嗪(thiethylperazine)；多巴胺拮抗剂(dopamine antagonist)，包括多潘立酮(domperidone)、氟哌利多(properidol)、氟哌啶醇(haloperidol)、氯丙嗪、异丙嗪、丙氯拉嗪、甲氧氯普胺(metoclopramide)或其组合；大麻碱，包括屈大麻酚(dronabinol)、大麻隆(nabilone)、塞替维克斯(sativex)或其组合；抗胆碱能药，包括东莨菪碱(scopolamine)；和类固醇，包括地塞米松(dexamethasone)；曲美苄胺、愈吐宁(emetrol)、异丙酚(propofol)、蝇蕈醇(muscimol)或其组合。
抗微生物剂
还涵盖抗微生物剂与本文公开的组合物一起使用。抗微生物剂包括作用于抑制或根除微生物(包括细菌、真菌或寄生虫)的药剂。特定的抗微生物剂可用于对抗特定微生物。因此，有经验的从业者将知道，抗微生物剂将视鉴别出的微生物或显示的症状而相关或适用。抗微生物剂包括抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂和抗寄生虫剂。
抗生素包括(但不限于)丁胺卡那霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、链霉素、妥布拉霉素、巴龙霉素(paromomycin)、格尔德霉素(geldanmycin)、除莠霉素(herbimycin)、氯碳头孢(loracarbef)、厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)、西司他汀(cilastatin)、美罗培南(meropenem)、头孢羟胺苄(cefadroxil)、头孢唑林(cefazolin)、头孢噻吩(cefalotin)、头孢胺苄(cefalexin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢噻吩(cefoxitin)、头孢丙烯(defprozil)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢克肟(cefixime)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢吡肟(cefepime)、头孢比普(ceftobiprole)、替考拉宁(teicoplanin)、万古霉素、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地红霉素(dirithromycin)、红霉素、罗红霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、泰利霉素(telithromycin)、壮观霉素(spectinomycin)、胺曲南(aztreonam)、阿莫西林(amoxicillin)、安比西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、卡本西林(carbenicillin)、邻氯青霉素(cloxacillin)、双氯青霉素(dicloxacillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、甲氧西林(meticillin)、乙氧萘青霉素(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素(penicillin)、哌拉西林(piperacillin)、替卡西兰(ticarcillan)、杆菌肽(bacitracin)、粘菌素(colistin)、多粘菌素B(polymyxin B)、环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovfloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、偶氮磺胺(prontosil)、磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、磺胺(sulfanimilimde)、柳氮磺吡啶(sulfsalazine)、磺胺异噁唑(sulfsioxazole)、甲氧苄啶(trimethoprim)、地美环素(demeclocycline)、多西环素(doxycycline)、米诺环素、土霉素(oxtetracycline)、四环素(tetracycline)、胂凡纳明(arsphenamine)、氯霉素(chloramphenicol)、氯林可霉素(clindamycin)、林可霉素(lincomycin)、乙胺丁醇(ethambutol)、磷霉素(fosfomycin)、梭链孢酸(fusidic acid)、呋喃唑酮(furazolidone)、异烟肼(isoniazid)、利奈唑胺(linezolid)、甲硝唑(metronidazole)、莫匹罗星(mupirocin)、硝化呋喃妥因(nitrofurantoin)、平板霉素(platensimycin)、吡嗪酰胺(pyrazinamide)、奎奴普汀(quinuspristin)/达福普汀(dalfopristin)、利福平(rifampin)、替硝唑(tinidazole)或其组合。
抗病毒剂包括(但不限于)阿昔洛韦(acyclovir)、泛昔洛韦(famciclovir)和泛拉西洛韦(valacyclovir)。其它抗病毒剂包括阿巴卡韦(abacavir)、阿昔洛韦(aciclovir)、阿德福韦(adfovir)、金刚胺(amantadine)、安普那韦(amprenavir)、阿比朵尔(arbidol)、阿扎那韦(atazanavir)、阿替普拉(artipla)、溴夫定(brivudine)、西多福韦(cidofovir)、卡贝韦(combivir)、依度尿苷(edoxudine)、依发韦仑(efavirenz)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩福韦地(enfuvirtide)、因提弗(entecavir)、福维森(fomvirsen)、夫沙那韦(fosamprenavir)、福卡奈特(foscarnet)、福弗奈特(fosfonet)、更昔洛韦(ganciclovir)、加德西(gardasil)、伊巴他滨(ibacitabine)、伊诺韦(imunovir)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、茚地那韦(indinavir)、肌苷(inosine)、整合酶抑制剂、干扰素(包括III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素)、拉米夫定(lamivudine)、洛匹那韦(lopinavir)、洛韦胺(loviride)、MK-0518、吗拉维诺(maraviroc)、吗啉胍(moroxydine)、奈非那韦(nelfinavir)、奈韦拉平(nevirapine)、奈克沙韦(nexavir)、核苷类似物、奥司他伟(oseltamivir)、喷昔洛韦(penciclovir)、帕拉米韦(peramivir)、普乐康尼(pleconaril)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、蛋白酶抑制剂、反转录酶抑制剂、病毒唑(ribavirin)、金刚乙胺(rimantadine)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、双脱氧胸苷(stavudine)、泰诺福韦(tenofovir)、泰诺福韦(tenofovir disoproxil)、替拉那韦(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三协韦(trizivir)、曲金刚胺(tromantadine)、特鲁瓦达(truvada)、缬更昔洛韦(valganciclovir)、维克利诺(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、伟拉咪定(viramidine)、扎西他滨(zalcitabine)、扎那米韦(zanamivir)、叠氮胸腺(zidovudine)或其组合。
抗真菌剂包括(但不限于)阿莫罗芬(amrolfine)、布替萘芬(utenafine)、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、氟胞嘧啶(flucytosine)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、雷夫康唑(ravuconazole)、伏立康唑(voriconazole)、克霉唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、咪康唑(miconazole)、奥昔康唑(oxiconazole)、硫康唑(sulconazole)、特康唑(terconazole)、噻康唑(tioconazole)、尼柯霉素Z(nikkomycin Z)、卡泊芬净(caspofungin)、米卡芬净(micafungin)、阿尼芬净(anidulafungin)、两性霉素B(amphotericin B)、脂质体尼司汀(liposomal nystastin)、匹马菌素(pimaricin)、灰黄霉素(griseofulvin)、环吡酮胺(ciclopirox olamine)、卤普罗近(haloprogin)、托萘酯(tolnaftate)、十一碳烯酸盐(undecylenate)或其组合。抗寄生虫剂可包括双甲脒(amitraz)、硝硫氰胺(amoscanate)、阿维菌素(avermectin)、卡巴多司(carbadox)、乙胺嗪(diethylcarbamizine)、地美硝唑(dimetridazole)、二脒那秦(diminazene)、双氢除虫菌素(ivermectin)、杀丝虫剂(macrofilaricide)、马拉硫磷(malathion)、米塔班(mitaban)、奥沙尼喹(oxamniquine)、百灭宁(permethrin)、吡喹酮(praziquantel)、双羟萘酸噻嘧啶(prantel pamoate)、塞拉菌素(selamectin)、葡萄糖酸锑钠(sodium stibogluconate)、腐绝(thiabendazole)或其组合。
防腐剂
还涵盖防腐剂与本文公开的组合物一起使用。防腐剂包括(但不限于)乙酸、硼酸、龙胆紫(gentian violet)、过氧化氢、过氧化脲、氯己定、盐水、红汞(mercurochrome)、聚维酮碘、polyhyroxine iodine、甲酚盐和醋酸铝和其混合物。
收敛剂
还涵盖收敛剂与本文公开的组合物一起使用。收敛剂包括(但不限于)异丙醇、乙醇和丙二醇。
皮质类固醇
还涵盖皮质类固醇与本文公开的组合物一起使用。皮质类固醇包括(但不限于)氢化可的松(hydrocortisone)、泼尼松(prednisone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、地塞米松、倍他米松(betamethasone)、戊酸倍他米松(betamethasone valerate)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、氟轻松(fluocinolone acetonide)、氟氯奈德(flurandrenoloneacetonide)、氟米龙(fluorometholone)、可的松(cortisone)、泼尼松龙(prednisolone)、阿氯米松(alclometasone)、安西奈德(amcinonide)、倍他米松、氯倍他索(clobetasol)、氯可托龙(clocortolone)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximetasone)、二氟拉松(diflorasone)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟氢缩松(flurandrenolide)、氟替卡松(fluticasone)、哈西奈德(halcinonide)、氯倍他索(halobetasol)、莫米松(mometasone)、氟美松(flumethasone)、泼尼卡酯(prednicarbate)和曲安西龙(triamcinolone)和其混合物。
血小板活化因子拮抗剂
还涵盖与本文公开的凋亡调节组合物组合使用血小板活化因子拮抗剂。仅举例来说，血小板活化因子拮抗剂包括海风藤酮(kadsurenone)、phomactin G、人参皂苷(ginsenoside)、阿帕泛(apafant)(4-(2-氯苯基)-9-甲基-2[3(4-吗啉基)-3-丙醇-1-基[6H-噻吩并[3.2-f[[1.2.4]三唑并]4，3-1]]1.4]二氮杂卓)、A-85783、BN-52063、BN-52021、BN-50730(四氢(tetrahedra)-4，7，8，10-甲基-1(氯-1苯基)-6(甲氧基-4苯基-氨甲酰基)-9吡啶并[4′，3′-4，5]噻吩并[3，2-f]三唑并-1，2，4[4，3-a]二氮杂卓-1，4)、BN 50739、SM-12502、RP-55778、Ro 24-4736、SR27417A、CV-6209、WEB 2086、WEB 2170、14-去氧穿心莲内酯、CL 184005、CV-3988、TCV-309、PMS-601、TCV-309或其组合。
以下呈示(表1)涵盖与本文公开的组合物和装置一起使用的活性剂的实例。在一些实施例中，表1中所公开的一种或一种以上活性剂用于本文所述的组合物或装置中。
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(表1)
在一些实施例中，所述另一治疗剂是立即释放剂。在一些实施例中，所述另一治疗剂是控制释放剂。
一般灭菌方法
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳用组合物。在一些实施例中，本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置经灭菌。本文公开的实施例中包括对用于人类的本文公开的医药组合物或装置进行灭菌的方法和工艺。目标在于提供相对不含导致感染的微生物的安全医药产品。美国食品与药物管理局(U.S.Food and DrugAdministration)在出版物“工业指南：利用无菌处理所产生的灭菌药物产品(Guidance for Industry：Sterile Drug ProductsProduced by Aseptic Processing)”中提供管理指南，可从http://www.fda.gov/cder/guidance/5882fnl.htm获得，其用的方式并入本文中。
如本文所使用，“灭菌”意思是用于破坏或去除产品或包装中所存在的微生物的工艺。涵盖与本文公开的组合物和装置一起使用可用于物体和组合物灭菌的任何适合的方法。可用于使微生物失活的方法包括(但不限于)应用极热、致命化学品或γ辐射。在一些实施例中，本文公开制备耳部治疗组合物的工艺，其包含使组合物经受选自热灭菌、化学灭菌、辐射灭菌或过滤灭菌的灭菌方法。所使用的方法基本上取决于待灭菌的装置或组合物的性质。许多灭菌方法的详细描述提供于利平科特(Lippincott)、威廉姆斯(Williams)和威尔金斯(Wilkins)出版的雷明顿：药学科学与实践(Remington：The Scienceand Practice ofPharmacy)第40章中，且关于这一主题，以引用的方式并入本文中。
热灭菌
许多方法可以用于通过应用极热来灭菌。一种方法是通过使用饱和蒸汽高压灭菌器。在这一方法中，使温度为至少121℃的饱和蒸汽接触待灭菌的物体。在物体待灭菌的情况下，热直接转移到微生物，或通过加热待灭菌的水溶液整体间接转移到微生物。这一方法得到广泛实施，因为其在灭菌过程中具有灵活性、安全性且经济。
干热灭菌是一种用于杀死微生物且在高温下进行去热原的方法。这一工艺在适于将经HEPA过滤的无微生物空气加热到用于灭菌工艺的至少130-180℃的温度和用于去热原工艺的至少230-250℃的温度的装置中进行。复原浓缩或粉末组合物的水也用高压灭菌器灭菌。在一些实施例中，本文所述的组合物包含通过干式加热(例如在130-140℃的内部粉末温度下加热约7-11小时，或在150-180℃的内部温度下加热1-2小时)灭菌的微米尺寸化医药剂。
化学灭菌
化学灭菌方法是用于经不起极热灭菌的产品的替代方法。在这一方法中，使用多种具有杀菌性质的气体和蒸气(诸如环氧乙烷、二氧化氯、甲醛或臭氧)作为抗凋亡剂或促调凋亡剂。环氧乙烷的杀菌活性是产生于例如因其能够用作反应性烷化剂。因此，灭菌工艺需要环氧乙烷蒸气与待灭菌的产品直接接触。
辐射灭菌
辐射灭菌的一个优点在于能够在无热降解或其它损害的情况下对许多类型的产品进行灭菌。常采用的辐射是β辐射或来自60Co源的γ辐射。γ辐射的渗透能力允许其用于许多产品类型的灭菌，包括溶液、组合物和不均匀混合物。照射的杀菌作用是产生于γ辐射与生物大分子的相互作用。这一相互作用产生带电荷的物质和自由基。诸如重排和交联过程等后续化学反应导致这些生物大分子丧失正常功能。本文所述的组合物还任选使用β照射灭菌。
过滤
过滤灭菌是一种用于从溶液中去除但不破坏微生物的方法。膜过滤器用于过滤对热敏感的溶液。所述过滤器是混合纤维素酯(MCE)、聚偏氟乙烯(PVF；也称为PVDF)或聚四氟乙烯(PTFE)的薄且坚固的均匀聚合物，且孔径在0.1至0.22微米的范围内。具有各种特征的溶液任选地使用不同的过滤膜过滤。举例来说，PVF和PTFE膜非常适于过滤有机溶剂，而水溶液经由PVF或MCE膜过滤。过滤器装置可在许多规模下使用，从连接于注射器的单点使用一次性过滤器到用于制造厂的商业规模过滤器。膜过滤器利用高压灭菌器或化学灭菌来灭菌。膜过滤系统的验证按照标准化方案(用于对液体进行灭菌的过滤器的微生物评估(Microbiological Evaluation ofFilters for Sterilizing Liquids)，第4卷第3期，华盛顿特区(Washington，D.C)：健康工业制造商协会(Health IndustryManufacturers Association)，1981)进行且涉及用已知量(约107个/cm2)的诸如缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)(ATCC 19146)异常小微生物激发膜过滤器。
医药组合物任选地通过穿过膜过滤器来灭菌。包含纳米粒子(美国专利第6,139,870号)或多层微脂粒(理查德(Richard)等人，国际药学杂志(International Journal ofPharmaceutics)(2006)，312(1-2)：144-50)的组合物可通过经由0.22微米过滤器过滤来灭菌而不破坏其组织结构。
在一些实施例中，本文公开的方法包含借助于过滤灭菌来对组合物(或其组分)进行灭菌。在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物包含粒子，其中所述粒子组合物适于过滤灭菌。在另一实施例中，所述粒子组合物包含尺寸小于300nm、尺寸小于200nm、尺寸小于100nm的粒子。在另一实施例中，耳可接受的组合物包含粒子组合物，其中粒子的无菌性可通过无菌过滤前驱组分溶液来确保。在另一实施例中，耳可接受的组合物包含粒子组合物，其中粒子组合物的无菌性通过低温无菌过滤来确保。在另一实施例中，低温无菌过滤在0℃与30℃之间、0℃与20℃之间、0℃与10℃之间、10℃与20℃之间或20℃与30℃之间的温度下进行。
在另一实施例中，制备耳可接受的粒子组合物的工艺包含：在低温下经由灭菌过滤器过滤含有粒子组合物的水溶液；冻干无菌溶液；和在投予之前用无菌水复原粒子组合物。在一些实施例中，本文所述的组合物制造成呈悬浮液形式的含微米尺寸化活性医药成分的单一小瓶组合物。单一小瓶组合物通过无菌混合无菌泊洛沙姆溶液与无菌微米尺寸化活性成分(例如PD98059)和将组合物转移到无菌医药容器中来制备。在一些实施例中，在分配和/或投予之前，将含有呈悬浮液形式的本文所述的组合物的单一小瓶再悬浮。
在具体实施例中，过滤和/或填充程序在低于本文所述的组合物的胶凝温度(T胶凝)约5℃下且在粘度低于理论值100cP下进行，以允许在合理时间内使用蠕动泵过滤。
在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物包含纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物适于过滤灭菌。在另一实施例中，所述纳米粒子组合物包含尺寸小于300nm、尺寸小于200nm或尺寸小于100nm的纳米粒子。在另一实施例中，耳可接受的组合物包含微球体组合物，其中微球体的无菌性通过无菌过滤前驱有机溶液和水溶液来确保。在另一实施例中，耳可接受的组合物包含热可逆性凝胶组合物，其中凝胶组合物的无菌性通过低温无菌过滤来确保。在另一实施例中，低温无菌过滤在0℃与30℃之间、或0℃与20℃之间、或0℃与10℃之间、或10℃与20℃之间、或20℃与30℃之间的温度下进行。在另一实施例中，制备耳可接受的热可逆性凝胶组合物的工艺包含：在低温下经由灭菌过滤器过滤含有热可逆性凝胶组分的水溶液；冻干无菌溶液；和在投予之前用无菌水复原热可逆性凝胶组合物。
在某些实施例中，将活性成分溶解于适合的媒剂(例如缓冲液)中且分开灭菌(例如通过热处理、过滤、γ辐射)。在一些情况下，活性成分在干燥状态下分开灭菌。在一些情况下，活性成分以悬浮液或胶状悬浮液形式灭菌。在另一步骤中利用适合的方法(例如过滤和/或照射冷却的赋形剂混合物)对其余赋形剂(例如耳用组合物中所存在的流体凝胶组分)进行灭菌；然后将分开灭菌的两种溶液无菌混合以提供最终耳用组合物。在一些情况下，最终无菌混合在即将投予本文所述的组合物之前进行。
在一些情况下，通常使用的灭菌方法(例如热处理(例如在高压灭菌器中)、γ照射、过滤)导致组合物中的聚合物组分(例如热固性、胶凝或粘膜粘附聚合物组分)和/或活性剂不可逆地降解。在一些情况下，如果组合物包含在过滤过程中会胶凝的触变聚合物，那么不可能通过膜过滤(例如0.2微米膜)来对耳用组合物进行灭菌。
因此，本文提供耳用组合物的灭菌方法，其防止聚合物组分(例如热固性和/或胶凝和/或粘膜粘附聚合物组分)和/或活性剂在灭菌过程中降解。在一些实施例中，通过使用缓冲液组分的特定pH值范围和胶凝剂于组合物中的特定比例来降低或消除活性剂(例如本文所述的任何耳部治疗剂)的降解。在一些实施例中，选择适当胶凝剂和/或热固性聚合物允许通过过滤来对本文所述的组合物进行灭菌。在一些实施例中，使用适当热固性聚合物和适当共聚物(例如胶凝剂)与组合物的特定pH值范围的组合允许对所述组合物进行高温灭菌而治疗剂或聚合物赋形剂实质上不发生降解。本文提供的灭菌法的优点在于，在某些情况下，经由高压灭菌处理对组合物进行最终灭菌而活性剂和/或赋形剂和/或聚合物组分在灭菌步骤期间无任何损失，且组合物变得实质上不含微生物和/或热原。
微生物
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳可接受的组合物或装置。本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置实质上不含微生物。可接受的无菌程度是基于定义治疗上可接受的耳用组合物的适用标准，包括(但不限于)美国药典(United States Pharmacopeia)第<1111>章及后续内容。举例来说，可接受的无菌程度包括每克组合物约10个菌落形成单位(cfu)，每克组合物约50cfu，每克组合物约100cfu，每克组合物约500cfu或每克组合物约1000cfu。在一些实施例中，组合物的可接受的无菌程度包括小于10cfu/mL、小于50cfu/mL、小于500cfu/mL或小于1000cfu/mL微生物剂。另外，可接受的无菌程度包括排除指定的有害微生物剂。举例来说，指定的有害微生物剂包括(但不限于)大肠杆菌(Escherichia coli/E.coli)、沙门氏菌属(Salmonella sp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa/P.aeruginosa)和/或其它特定微生物剂。
耳可接受的耳部治疗剂组合物的无菌性根据美国药典第<61>、<62>和<71>章由无菌性保证程序确认。无菌性保证品质控制、品质保证和验证过程的关键组成部分是无菌性测试的方法。仅举例来说，利用两种方法进行无菌性测试。第一是直接接种，其中将待测试的组合物的样品添加到生长培养基中并培育长达21天的时间。生长培养基的混浊度指示污染。这种方法的缺点包括整体材料的取样规模小，这会降低灵敏度，和基于目测检测微生物生长。一种替代方法是膜过滤无菌性测试。在这种方法中，使一定体积的产品穿过小膜滤纸。然后，将滤纸放在培养基中以促进微生物生长。这一方法的优点在于灵敏度较高，因为对整个产品进行取样。任选使用可自市面上购得的密理博(Millipore)Steritest无菌测试系统来通过膜过滤无菌性测试进行测定。对于乳膏或软膏的过滤测试，使用TLHVSL210号Steritest过滤系统。对于乳液或粘性产品的过滤测试，使用TLAREM210或TDAREM210号Steritest过滤系统。对于预填充注射器的过滤测试，使用TTHASY210号Steritest过滤系统。对于分配成气雾剂或泡沫体的材料的过滤测试，使用TTHVA210号Steritest过滤系统。对于于安瓿或小瓶中的可溶性粉末的过滤测试，使用TTHADA210或TTHADV210号Steritest过滤系统。
大肠杆菌和沙门氏菌的测试包括使用在30-35℃下培育24-72小时的乳糖肉汤，在麦康基(MacConkey)和/或EMB琼脂中培育18-24小时，和/或使用拉帕波特(Rappaport)培养基。检测绿脓杆菌的测试包括使用NAC琼脂。美国药典第<62>章另外列举用于指定有害微生物的测试程序。
在某些实施例中，本文所述的任何控制释放组合物在每克组合物中都具有少于约60个菌落形成单位(CFU)、少于约50个菌落形成单位、少于约40个菌落形成单位、或少于约30个菌落形成单位的微生物剂。在某些实施例中，本文所述的耳用组合物经调配以与内淋巴和/或外淋巴等张。
内毒素
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳用组合物。本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置实质上不含内毒素。灭菌工艺的另一方面是在杀死微生物(下文称为“产品”)时去除副产物。去热原工艺从样品中去除热原。热原是诱发免疫反应的内毒素或外毒素。内毒素的一个实例是革兰氏阴性细菌细胞壁中可见的脂多糖(LPS)分子。当诸如高压灭菌处理或用环氧乙烷处理等灭菌程序杀死细菌时，LPS残余物诱发促发炎免疫反应，诸如败血性休克。因为内毒素的分子尺寸可广泛变化，所以内毒素的存在以“内毒素单位”(EU)表示。1EU相当于100皮克大肠杆菌LPS。人类可对少至每千克体重5EU产生反应。无菌性以所属领域中认可的任何单位表示。在某些实施例中，与通常可接受的内毒素含量(例如每千克个体体重5EU)相比，本文所述的耳用组合物含有较低内毒素含量(例如每千克个体体重＜4EU)。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克个体体重小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克个体体重小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克个体体重小于约3EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克个体体重小于约2EU。
在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物或装置具有每千克组合物小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克组合物小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克组合物小于约3EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克产品小于约1EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每千克产品小于约0.2EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每克单位或产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每克单位或产品小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每克单位或产品小于约3EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每毫克单位或产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每毫克单位或产品小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每毫克单位或产品小于约3EU。在某些实施例中，本文所述的耳用组合物每毫升组合物中含有约1至约5EU。在某些实施例中，本文所述的耳用组合物每毫升组合物中含有约2至约5EU，每毫升组合物中含有约3至约5EU，或每毫升组合物中含有约4至约5EU。
在某些实施例中，与通常可接受的内毒素含量(例如每毫升组合物0.5EU)相比，本文所述的耳用组合物或装置含有较低内毒素含量(例如每毫升组合物＜0.5EU)。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物或装置具有每毫升组合物小于约0.5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每毫升组合物小于约0.4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物具有每毫升组合物小于约0.2EU。
仅举例来说，利用若干方法进行热原检测。适合的无菌性测试包括美国药典(UnitedStates Pharmacopoeia，USP)<71>无菌性测试(Sterility Tests)(第23版，1995)中所述的测试。美国药典第<85>和<151>章(USP23/NF 18，生物测试(Biological Tests)，美国药典规范(The United States Pharmacopeial Convention)，马里兰州罗克维尔(Rockville，MD)，1995)中详细说明了兔子热原测试与鲎变形细胞溶解物测试(Limulus amebocytelysate test)。已基于单核细胞活化-细胞因子分析开发出替代性热原分析。已开发出适于品质控制应用的均一细胞系且已证明能够检测已通过兔子热原测试和鲎变形细胞溶解物测试的样品中的致热性(塔克塔克(Taktak)等人，药学与药理学杂志(J.Pharm.Pharmacol.)(1990)，43：578-82)。在另一实施例中，对耳可接受的耳部治疗剂组合物进行去热原操作。在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂组合物的制造工艺包含测试组合物的致热性。在某些实施例中，本文所述的组合物实质上不含热原。
pH值和实用容积渗透摩尔浓度
如本文所使用的“实用容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度”或“可传递容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度”意思是通过测量活性剂和除胶凝剂和/或增稠剂(例如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、羧甲基纤维素等)以外的所有赋形剂的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度所确定的组合物的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度。本文所述的组合物的实用容积渗透摩尔浓度由任何适合的方法测量，例如维嘎斯(Viegas)等人，国际药学杂志(Int.J.Pharm.)，1998，160，157-162所述的冰点下降法。在一些情况下，本文所述的组合物的实用容积渗透摩尔浓度由允许测定组合物在较高温度下的容积渗透摩尔浓度的蒸气压渗透压测定法(例如蒸气压下降法)测量。在一些情况下，蒸气压下降法允许测定包含胶凝剂(例如热可逆性聚合物)的组合物在胶凝剂呈凝胶形式的较高温度下的容积渗透摩尔浓度。本文所述的耳用组合物的实用重量渗透摩尔浓度为约100mOsm/kg至约1000mOsm/kg、约200mOsm/kg至约800mOsm/kg、约250mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约320mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、或约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一些实施例中，本文所述的组合物的实用容积渗透摩尔浓度为约100mOsm/L至约1000mOsm/L、约200mOsm/L至约800mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约250mOsm/L至约320mOsm/L、或约280mOsm/L至约320mOsm/L。
在一些实施例中，目标作用部位(例如外淋巴)处的容积渗透摩尔浓度与本文所述的任何组合物的传递的容积渗透摩尔浓度(即，穿过或渗透圆窗膜的物质的容积渗透摩尔浓度)大致相同。在一些实施例中，本文所述的组合物的可传递容积渗透摩尔浓度为约150mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约280mOsm/L至约370mOsm/L、或约250mOsm/L至约320mOsm/L。
内淋巴中所存在的主要阳离子是钾。另外，内淋巴具有高浓度的带正电氨基酸。外淋巴中所存在的主要阳离子是钠。在某些情况下，内淋巴和外淋巴的离子组成调节毛细胞的电化学脉冲。在某些情况下，内淋巴或外淋巴的离子平衡的任何变化都会因电化学脉冲沿耳部毛细胞传导发生变化而导致听力损失。在一些实施例中，本文公开的组合物不破坏外淋巴的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物具有与外淋巴相同或实质上相同的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物不破坏内淋巴的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物具有与内淋巴相同或实质上相同的离子平衡。在一些实施例中，本文所述的耳用组合物经调配以提供与内耳流体(例如内淋巴和/或外淋巴)相容的离子平衡。
内淋巴和外淋巴的pH值接近血液的生理学pH值。内淋巴的pH值范围为约7.2-7.9；外淋巴的pH值范围为约7.2-7.4。近端内淋巴的原位pH值为约7.4，而远端内淋巴的pH值为约7.9。
在一些实施例中，将本文所述的组合物的pH值调节(例如通过使用缓冲液)到约5.5至9.0的内淋巴相容的pH值范围。在具体实施例中，将本文所述的组合物的pH值调节到约5.5至约9.0的外淋巴适合的pH值范围。在一些实施例中，将本文所述的组合物的pH值调节到约5.5至约8.0、约6至约8.0、或约6.6至约8.0的外淋巴适合的范围。在一些实施例中，将本文所述的组合物的pH值调节到约7.0-7.6的外淋巴适合的pH值范围。
在一些实施例中，适用的组合物还包括一种或一种以上pH值调节剂或缓冲剂。适合的pH值调节剂或缓冲剂包括(但不限于)乙酸盐、碳酸氢盐、氯化铵、柠檬酸盐、磷酸盐、其医药学上可接受的盐或其组合或混合物。
在一个实施例中，当本发明组合物中使用一种或一种以上缓冲剂时，所述缓冲剂(例如与医药学上可接受的媒剂)组合且存在于最终组合物中(存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内)。在本发明的某些实施例中，凝胶组合物中包括的缓冲剂的量是使得凝胶组合物的pH值不干扰身体天然缓冲系统的量。
在一个实施例中，还使用稀释剂来稳定化合物，因为其可提供更稳定的环境。在所属领域中使用溶解于缓冲溶液中的盐(还可提供pH值控制或维持)作为稀释剂，包括(但不限于)磷酸盐缓冲盐水溶液。
在一些实施例中，本文所述的任何凝胶组合物的pH值允许在医药剂或构成凝胶的聚合物不降解的情况下对凝胶组合物进行灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))。为减少灭菌期间耳用药剂和/或凝胶聚合物的水解和/或降解，缓冲液的pH值经设计以将组合物的pH值在灭菌(例如高温高压灭菌处理)过程中维持在7-8范围内。
在具体实施例中，本文所述的任何凝胶组合物的pH值允许在医药剂或构成凝胶的聚合物不降解的情况下对凝胶组合物进行最终灭菌(例如通过热处理和/或高压灭菌处理)。举例来说，为减少高压灭菌处理期间耳用药剂和/或凝胶聚合物的水解和/或降解，设计缓冲液的pH值将组合物的pH值在高温下维持在7-8范围内。视组合物中所用的耳用药剂而定，可使用任何适当的缓冲液。在一些情况下，因为TRIS的pKa以约-0.03/℃随温度增加而降低，且PBS的pKa以约0.003/℃随温度增加而增加，所以在250°F(121/℃)下进行高压灭菌处理使得TRIS缓冲液的pH值显著向下偏移(即，酸性更大)，而PBS缓冲液的pH值相对程度小的多地向上偏移，因此耳用药剂在TRIS中的水解和/或降解的增加比在PBS中多得多。耳用药剂的降解通过使用如本文所述的缓冲液与聚合物添加剂(例如P407、CMC)的适当组合而减少。
在一些实施例中，适于本文所述的耳用组合物灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))的组合物pH值在约5.0与约9.0之间、在约5.5与约8.5之间、在约6.0与约7.6之间、在约7与约7.8之间、在约7.0与约7.6之间、在约7.2与7.6之间、或在约7.2与约7.4之间。在具体实施例中，适于本文所述的任何组合物的灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))的组合物pH值为约6.0、约6.5、约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4、约7.5或约7.6。
在一些实施例中，组合物具有如本文所述的pH值，且包括增稠剂(例如粘度增强剂)，作为非限制性实例，诸如本文所述的基于纤维素的增稠剂。在一些情况下，第二聚合物(例如增稠剂)的添加和如本文所述的组合物的pH值允许对本文所述的组合物进行灭菌而耳用组合物中的耳用药剂和/或聚合物组分无任何实质性降解。在一些实施例中，具有如本文所述的pH值的组合物中热可逆性泊洛沙姆与增稠剂的比率为约40∶1、约35∶1、约30∶1、约25∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1或约5∶1。举例来说，在某些实施例中，本文所述的持续释放和/或延长释放组合物包含泊洛沙姆407(泊洛尼克F127)与羧甲基纤维素(CMC)的组合，两者的比率为约40∶1、约35∶1、约30∶1、约25∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1或约5∶1。
在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物的量为组合物的总重量的约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％或约40％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物的量为组合物的总重量的约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％或约25％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127(pluronic F127))的量为组合物的总重量的约7.5％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约10％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约11％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约12％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约13％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约14％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约15％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约16％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约17％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约18％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约19％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约20％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约21％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约23％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为组合物的总重量的约25％。
在一些实施例中，本文所述的任何组合物中增稠剂(例如胶凝剂)的量为组合物的总重量的约1％、约5％、约10％或约15％。在一些实施例中，本文所述的任何组合物中增稠剂(例如胶凝剂)的量为组合物的总重量的约0.5％、约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％或约5％。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物就pH值来说在任何以下时期内是稳定的：至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月。在其它实施例中，本文所述的组合物就pH值来说在至少约1周的时期内是稳定的。本文还描述就pH值来说在至少约1个月的时期内是稳定的组合物。
张力剂
一般来说，内淋巴的重量渗透摩尔浓度高于外淋巴。举例来说，内淋巴的重量渗透摩尔浓度为约304mOsm/kg H2O，而外淋巴的重量渗透摩尔浓度为约294mOsm/kg H2O。在某些实施例中，向本文所述的组合物中添加一定量的张力剂以提供耳用组合物的实用重量渗透摩尔浓度为约100mOsm/kg至约1000mOsm/kg、约200mOsm/kg至约800mOsm/kg、约250mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、或约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一些实施例中，本文所述的组合物的实用容积渗透摩尔浓度为约100mOsm/L至约1000mOsm/L、约200mOsm/L至约800mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约280mOsm/L至约320mOsm/L、或约250mOsm/L至约320mOsm/L。
在一些实施例中，本文所述的任何组合物的可传递容积渗透摩尔浓度经设计与目标耳部结构(例如内淋巴、外淋巴等)等张。在具体实施例中，本文所述的耳用组合物经调配以在目标作用部位提供约250至约320mOsm/L(约250至约320mOsm/kg H2O重量渗透摩尔浓度)且优选约270至约320mOsm/L(约270至约320mOsm/kg H2O重量渗透摩尔浓度)的传递的外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度。在具体实施例中，在传递到目标部位之后，例如通过使用适当的盐浓度(例如钾盐或钠盐的浓度)或使用使组合物变得与内淋巴相容和/或与外淋巴相容(即，与内淋巴和/或外淋巴等张)的张力剂调节组合物的可传递的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度(即，在无胶凝剂或增稠剂(例如热可逆性凝胶聚合物)存在下组合物的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度)。归因于不同水量与聚合物的单体单元的关联，包含热可逆性凝胶聚合物的组合物的容积渗透摩尔浓度是不可靠的量度。组合物的实用容积渗透摩尔浓度是可靠的量度，且由任何适合的方法(例如冰点下降法、蒸气下降法)测量。在一些情况下，本文所述的组合物提供在投予后之对内耳环境产生最小干扰且引起哺乳动物最小程度的不适(例如眩晕和/或恶心)的可传递的容积渗透摩尔浓度(例如目标部位(例如外淋巴))。
在一些实施例中，本文所述的任何组合物与外淋巴和/或内淋巴等张。等张组合物通过添加张力剂提供。适合的张力剂包括(但不限于)任何医药学上可接受的糖、盐或其任何组合或混合物，诸如但不限于右旋糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化钠和其它电解质。
适用的耳用组合物包括一种或一种以上使组合物的重量渗透摩尔浓度在可接受范围内所需的量的盐。所述盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；适合的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些实施例中，本文所述的组合物具有如本文所述的pH值和/或实用容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度在约1μM与约10μM之间，在约1mM与约100mM之间，在约0.1mM与约100mM之间，在约0.1mM与约100nM之间。在一些实施例中，本文所述的组合物具有如本文所述的pH值和/或实用容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以组合物的重量计为约0.01％-约20％之间、约0.01％-约10％之间、约0.01％-约7.5％之间、约0.01％-6％之间、约0.01-5％之间、约0.1-约10％之间或约0.1-约6％之间的活性成分。在一些实施例中，本文所述的组合物具有如本文所述的pH值和/或实用容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以组合物的体积计在约0.1mg与约70mg之间、在约1mg与约70mg/mL之间、在约1mg与约50mg/mL之间、在约1mg/mL与约20mg/mL之间、在约1mg/mL与约10mg/mL之间、在约1mg/mL与约5mg/mL之间、或在约0.5mg/mL与约5mg/mL之间的活性剂。在一些实施例中，本文所述的组合物具有如本文所述的pH值和/或实用容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以组合物的体积计为在约1μg/mL与约500μg/mL之间、在约1μg/mL与约250μg/mL之间、在约1μg与约100μg/mL之间、在约1μg/mL与约50μg/mL之间、或在约1μg/mL与约20μg/mL之间的活性剂。
粒径
尺寸减小用于增加表面积和/或调节组合物溶解性质。其还用于维持本文所述的任何组合物的一致平均粒径分布(PSD)(例如微米尺寸化粒子、纳米尺寸化粒子等)。在一些实施例中，本文所述的任何组合物是多颗粒组合物(即包含多个粒子尺寸(例如微米尺寸化粒子、纳米尺寸化粒子、非尺寸化粒子(non-sized particle)、胶体粒子))。在一些实施例中，本文所述的任何组合物包含一种或一种以上多颗粒(例如微米尺寸)治疗剂。微米尺寸化是降低固体材料粒子的平均直径的工艺。微米尺寸化粒子是指直径为约微米尺寸到直径为约纳米尺寸。在一些实施例中，微米尺寸化固体中的粒子的平均直径为约0.5μm至约500μm。在一些实施例中，微米尺寸化固体中的粒子的平均直径为约1μm至约200μm。在一些实施例中，微米尺寸化固体中的粒子的平均直径为约2μm至约100μm。在一些实施例中，微米尺寸化固体中的粒子的平均直径为约3μm至约50μm。在一些实施例中，颗粒微米尺寸化固体包含小于约5微米、小于约20微米和/或小于约100微米的粒子尺寸。在一些实施例中，与包含非多颗粒(例如非微米尺寸化)抗凋亡剂或促凋亡剂的组合物相比，使用抗凋亡剂或促凋亡剂颗粒(例如微米尺寸化粒子)允许抗凋亡剂或促凋亡剂从本文所述的任何组合物中延长释放和/或持续释放。在一些情况下，含有多颗粒(例如微米尺寸化)抗凋亡剂或促凋亡剂的组合物从配有无任何堵塞或阻塞的27G针的1mL注射器中喷出。
在一些情况下，本文所述的任何组合物中的任何粒子是涂布过的粒子(例如涂布过的微米尺寸化粒子、纳米粒子)和/或微球体和/或脂质体粒子。粒径减小技术包括例如碾磨、研磨(例如空气盘磨研磨(喷射研磨)、球磨研磨)、凝聚、复合凝聚、高压均质化、喷雾干燥和/或超临界流体结晶。在一些情况下，粒子通过机械冲击(例如锤磨机、球磨机和/或针磨机)进行尺寸化。在一些情况下，粒子经由流体能量(例如螺旋喷射研磨机、环流喷射研磨机和/或流化床喷射研磨机)进行尺寸化。在一些实施例中，本文所述的组合物包含结晶粒子和/或各向同性粒子。在一些实施例中，本文所述的组合物包含非晶粒子和/或各向异性粒子。在一些实施例中，本文所述的组合物包含治疗剂粒子，其中治疗剂是治疗剂的中性分子、游离酸、游离碱、或盐、或前药、或其任何组合。
在一些实施例中，本文所述的组合物包含一种或一种以上抗凋亡剂或促凋亡剂，其中抗凋亡剂或促凋亡剂包含纳米颗粒。在一些实施例中，本文所述的组合物包含任选地涂有控制释放赋形剂的抗凋亡剂或促凋亡剂珠粒(例如他克莫司(tacrolimus)珠粒)。在一些实施例中，本文所述的组合物包含颗粒化和/或尺寸减小且涂有控制释放赋形剂的抗凋亡剂或促凋亡剂；颗粒化的经涂布抗凋亡剂或促凋亡剂颗粒然后任选进行微米尺寸化和/或调配成本文所述的任何组合物。
在一些情况下，通过利用本文所述的程序使用抗凋亡剂或促凋亡剂呈所述抗凋亡剂或促凋亡剂的中性分子、游离酸、游离碱和盐形式的组合来制备脉冲释放的耳用药剂组合物。在一些组合物中，通过利用本文所述的任何程序使用微米尺寸化抗凋亡剂或促凋亡剂(和/或其盐或前药)与涂布过的粒子(例如纳米粒子、脂质体、微球体)的组合来制备脉冲释放的耳用药剂组合物。或者，通过借助于环糊精、表面活性剂(例如泊洛沙姆407、338、188)、吐温(80、60、20、81)、PEG-氢化蓖麻油、辅溶剂(如N-甲基-2-吡咯烷酮)等将多达20％的传递剂量的抗凋亡剂或促凋亡剂(例如微米尺寸化抗凋亡剂或促凋亡剂、其中性分子、游离碱、游离酸或盐或前药；多颗粒抗凋亡剂或促凋亡剂、其中性分子、游离碱、游离酸或盐或前药)溶解且使用本文所述的任何程序制备脉冲释放组合物来达成脉冲释放曲线。
在具体实施例中，本文所述的任何耳相容性组合物包含一种或一种以上微米尺寸化医药剂(例如抗凋亡剂或促凋亡剂)。在一些所述实施例中，微米尺寸化医药剂包含微米尺寸化粒子、涂布(例如涂有延长释放涂层)过的微米尺寸化粒子或其组合。在一些所述实施例中，包含微米尺寸化粒子、涂布过的微米尺寸化粒子或其组合的微米尺寸化医药剂包含呈中性分子、游离酸、游离碱、盐、前药或其任何组合形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。在某些实施例中，本文所述的医药组合物包含呈微米尺寸化粉末形式的抗凋亡剂或促凋亡剂。
本文所述的多颗粒和/或微米尺寸化抗凋亡剂或促凋亡剂借助于任何类型的基质(包括固体、液体或凝胶基质)传递到耳结构(例如内耳)。在一些实施例中，本文所述的多颗粒和/或微米尺寸化抗凋亡剂或促凋亡剂借助于任何类型的基质(包括固体、液体或凝胶基质)经由鼓室内注射传递到耳结构(例如内耳)。
医药组合物
本文提供医药组合物或装置，其包括至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂和医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载剂。在一些实施例中，医药组合物包括其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。在其它实施例中，医药组合物还含有其它治疗物质。
一些医药赋形剂、稀释剂或载剂具有潜在耳毒性。举例来说，氯化苯甲烃铵，一种常见防腐剂，具有耳毒性，因此如果引入前庭或耳蜗结构中，那么可能有害。在调配控制释放凋亡调节组合物时，建议避免或组合适当的赋形剂、稀释剂或载剂以从组合物中减少或消除可能的耳毒性组分或减少所述赋形剂、稀释剂或载剂的量。控制释放凋亡调节组合物任选地包括耳保护剂，诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素、或铁螯合剂，以抵消可由使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂而产生的可能的耳毒性作用。
在一些实施例中，本文所述的组合物或装置包括染料以在施用时帮助增强对凝胶的观测。在一些实施例中，与本文所述的耳可接受的组合物或装置相容的染料包括伊文思蓝(Evans blue)(例如耳用组合物总重量的0.5％)、亚甲基蓝(Methylene blue)(例如耳用组合物总重量的1％)、异硫蓝(Isosulfan blue)(例如耳用组合物总重量的1％)、台盼蓝(Trypan blue)(例如耳用组合物总重量的0.15％)和/或吲哚菁绿(indocyanine green)(例如每小瓶25mg)。其它常见染料，例如FD&C红40、FD&C红3、FD&C黄5、FD&C黄6、FD&C蓝1、FD&C蓝2、FD&C绿3、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate)、若丹明(rhodamine)、Alexa Fluors、DyLight Fluors)和/或可结合诸如MRI、CAT扫描、PET扫描等非侵入性成像技术观测的染料。还涵盖与本文所述的任何耳用组合物一起使用钆基MRI染料、碘基染料、钡基染料等。西格玛-阿尔德里奇(Sigma-Aldrich)目录的染料条目下列出与本文所述的任何组合物或组合物相容的其它染料(关于所述公开内容，以引用的方式包括在本文中)。
本文所述的任何医药组合物或装置通过使组合物或装置与蜗窗嵴、圆窗、鼓室、鼓膜、中耳或外耳接触来投予。
在本文所述的耳可接受的控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂医药组合物的一个具体实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂于凝胶基质中提供，凝胶基质在本文中也称为“耳可接受的凝胶组合物”、“内耳可接受的凝胶组合物”、“中耳可接受的凝胶组合物”、“外耳可接受的凝胶组合物”、“耳用凝胶组合物”或其变化形式。凝胶组合物的所有组分必须与目标耳结构相容。另外，凝胶组合物控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂到目标耳结构的所要部位；在一些实施例中，凝胶组合物还具有用于将抗凋亡剂或促凋亡剂传递到所要目标部位的立即释放或快速释放组分。在其它实施例中，凝胶组合物具有用于传递抗凋亡剂或促凋亡剂的持续释放组分。在一些实施例中，凝胶组合物包含多颗粒(例如微米尺寸化)抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，耳用凝胶组合物是生物可降解的。在其它实施例中，耳用凝胶组合物包括粘膜粘附赋形剂以允许粘附于圆窗膜的外部粘膜层。在又其它实施例中，耳用凝胶组合物包括渗透增强剂赋形剂；在其它实施例中，耳用凝胶组合物含有足以提供以下粘度的粘度增强剂：约500与1,000,000厘泊之间；约750与1,000,000厘泊之间；约1000与1,000,000厘泊之间；约1000与400,000厘泊之间；约2000与100,000厘泊之间；约3000与50,000厘泊之间；约4000与25,000厘泊之间；约5000与20,000厘泊之间；或约6000与15,000厘泊之间。在一些实施例中，耳用凝胶组合物含有足以提供约50,0000与1,000,000厘泊之间的粘度的粘度增强剂。
在其它实施例中，本文所述的内耳医药组合物另外提供耳可接受的水凝胶；在又其它实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的微球体或微粒；在又其它实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的脂质体。在一些实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的泡沫体；在又其它实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的涂剂；在又其它实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的现场形成海绵状材料。在一些实施例中，耳医药组合物提供耳可接受的溶剂释放凝胶。在一些实施例中，耳医药组合物提供光化辐射可固化凝胶。其它实施例在耳医药组合物中包括热可逆性凝胶，以致在室温下或低于室温制备凝胶后，组合物是流体，但凝胶施用于内耳和/或中耳目标部位(包括鼓室、圆窗膜或蜗窗嵴)之中或附近后，耳医药组合物变硬或硬化成凝胶样物质。
在其它或替代实施例中，耳用凝胶组合物能够经由鼓室内注射投在圆窗膜上或圆窗膜附近。在其它实施例中，耳用凝胶组合物通过经由耳后切开和外科操作进入圆窗或蜗窗嵴区域中或附近而投在圆窗或蜗窗嵴上或附近。另外，耳用凝胶组合物经由注射器和针施用，其中针插穿鼓膜并导向圆窗或蜗窗嵴区域。耳用凝胶组合物然后沉积于圆窗或蜗窗嵴上或附近以供局部治疗。在其它实施例中，耳用凝胶组合物经由植入患者的微导管施用，且在又其它实施例中，组合物经由泵装置投在圆窗膜上或附近。在又其它实施例中，耳用凝胶组合物经由微注射装置施用在圆窗膜上或附近。在又其它实施例中，耳用凝胶组合物施用于鼓室中。在一些实施例中，耳用凝胶组合物施用在鼓膜上。在又其它实施例中，耳用凝胶组合物施用在耳道上或耳道中。
在其它具体实施例中，本文所述的任何医药组合物或装置包含多颗粒抗凋亡剂或促凋亡剂于液体基质(例如用于鼓室内注射的液体组合物或耳用滴剂)中。在某些实施例中，本文所述的任何医药组合物包含多颗粒抗凋亡剂或促凋亡剂于固体基质中。
控制释放组合物
一般来说，控制释放型药物组合物控制药物释放的释放部位和在体内的释放时间。如本文所论述，控制释放是指立即释放、延迟释放、持续释放、延长释放、可变释放、脉动释放和双模释放。控制释放有许多优点。第一，医药剂的控制释放允许较低的给药频率因此将重复治疗减至最少。第二，控制释放型治疗产生更有效的药物利用且较少化合物以残余物形式残留。第三，控制释放提供通过将传递装置或组合物置于疾病部位来进行局部药物传递的可能。另外，控制释放提供借助于单一剂量单元投予和释放两种或两种以上各具有独特的释放曲线的不同药物的可能，或以不同速率或不同持续时间释放相同药物的可能。
因此，本文公开的实施例的一个方面在于提供用于耳可接受的控制释放型凋亡调节组合物。本文公开的组合物和/或组合物和/或装置的控制释放方面通过多种药剂赋予，包括(但不限于)赋形剂、可为在内耳或其它耳部结构中使用所接受的药剂或材料。仅举例来说，所述赋形剂、药剂或材料包括耳可接受的聚合物、耳可接受的粘度增强剂、耳可接受的凝胶、耳可接受的涂剂、耳可接受的泡沫体、耳可接受的干凝胶、耳可接受的微球体或微粒、耳可接受的水凝胶、耳可接受的现场形成海绵状材料、耳可接受的光化辐射可固化凝胶、耳可接受的溶剂释放凝胶、耳可接受的脂质体、耳可接受的纳米胶囊或纳米球体、耳可接受的热可逆性凝胶或其组合。
耳可接受的凝胶
凝胶，有时称为凝胶剂(jellies)，已以多种方式加以定义。举例来说，美国药典定义凝胶为由小无机粒子构成的悬浮液或穿插有液体的大有机分子组成的半固体系统。凝胶包括单相或两相系统。单相凝胶由有机大分子以分散的大分子与液体之间不存在明显边界的方式均匀地分布在整个液体中组成。一些单相凝胶由合成大分子(例如卡波姆)或由天然胶(例如黄芪胶)制备。在一些实施例中，虽然单相凝胶一般是水性的，但还将使用醇和油制备。两相凝胶由小个别粒子的网络组成。
凝胶还可分类成疏水性的或亲水性的。在某些实施例中，疏水性凝胶的基质由液体石蜡与聚乙烯、或脂肪油与胶体二氧化硅胶凝、或铝或锌皂组成。相比之下，疏水性凝胶的基质通常由水、甘油或丙二醇与适合的胶凝剂(例如黄芪胶、淀粉、纤维素衍生物、羧乙烯基聚合物和硅酸镁铝)胶凝组成。在某些实施例中，本文公开的组合物或装置的流变学是假塑性、塑性、触变性或膨胀性。
在一个实施例中，本文所述的粘度增强的耳可接受的组合物在室温下不是液体。在某些实施例中，粘度增强的组合物的特征在于在室温与体温(包括重度发烧的个体，例如高达约42℃)之间发生相变。在一些实施例中，相变在低于体温1℃、低于体温2℃、低于体温3℃、低于体温4℃、低于体温6℃、低于体温8℃或低于体温10℃下发生。在一些实施例中，相变在低于体温约15℃、低于体温约20℃或低于体温约25℃下发生。在具体实施例中，本文所述的组合物的胶凝温度(T凝胶)为约20℃、约25℃或约30℃。在某些实施例中，本文所述的组合物的胶凝温度(T凝胶)为约35℃或约40℃。在一个实施例中，大致在体温下投予本文所述的任何组合物会降低或抑制与鼓室内投予耳用组合物相关的眩晕。体温的定义包括健康个体或包括发烧个体(高达约42℃)的不健康个体的体温。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置大致在室温下是液体且在室温下或大致在室温下投予，以减少或改善诸如眩晕等副作用。
由聚氧丙烯和聚氧乙烯构成的聚合物在并入水溶液中时形成热可逆性凝胶。这些聚合物能够在接近体温的温度下从液态变成凝胶状态，从而得到施用于目标耳部结构的适用组合物。液态到凝胶状态的相变取决于溶液中的聚合物浓度和成分。
泊洛沙姆407(Poloxamer 407)(PF-127)是由聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物构成的非离子型表面活化剂。其它泊洛沙姆包括188(F-68级)、237(F-87级)、338(F-108级)。泊洛沙姆水溶液在酸、碱金属和金属离子存在下是稳定的。PF-127是具有通式E106P70E106的可购得的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物，平均摩尔质量为13,000。所述聚合物可另外利用会增强聚合物的胶凝性质的适合方法纯化。其含有约70％环氧乙烷，是其亲水性的原因。其是一系列泊洛沙姆ABA嵌段共聚物中的一种，泊洛沙姆ABA嵌段共聚物成员共有如下所示的化学式。
Figure BPA00001294499700681
PF-127受到特别关注，因为共聚物的浓溶液(＞20％w/w)在加热到体温时从低粘度透明溶液转变成固体凝胶。因此，这一现象表明当与身体接触时，凝胶制剂会形成半固体结构和持续释放型储积库(depot)。此外，PF-127具有良好的溶解能力，低毒，因此视为药物传递系统的良好介质。
在一替代实施例中，热敏凝胶(thermogel)是PEG-PLGA-PEG三嵌段共聚物(正(Jeong)等人，自然(Nature)(1997)，388：860-2；正(Jeong)等人，控制释放杂志(J.Control.Release)(2000)，63：155-63；正(Jeong)等人，先进药物传递评论(Adv.DrugDelivery Rev.)(2002)，54：37-51)。聚合物在约5％w/w至约40％w/w浓度内展现溶胶-凝胶特性。取决于所想要的性质，PLGA共聚物中丙交酯/乙交酯的摩尔比在约1∶1至约20∶1范围内。所得共聚物可溶于水中，且在室温下形成自由流动液体，但在体温下形成水凝胶。市售PEG-PLGA-PEG三嵌段共聚物是由勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)制造的RESOMER RGP t50106。这一材料由50∶50聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的PGLA共聚物构成，且含10％w/w PEG，且分子量为约6000。
是麦克罗公司(MacroMed Incorporated)的一类低分子量生物可降解嵌段共聚物的商品名称，其具有如美国专利第6,004,573号、第6,117,949号、第6,201,072号和第6,287,588号所述的逆转热胶凝性质。其还包括申请中的美国专利申请案第09/906,041号、第09/559,799号和第10/919,603号中公开的生物可降解聚合物药物载剂。生物可降解的药物载剂包含ABA型或BAB型三嵌段共聚物或其混合物，其中A嵌段具有相对疏水性且包含生物可降解的聚酯或聚(原酸酯)，且B嵌段具有相对亲水性且包含聚乙二醇(PEG)，所述共聚物的疏水性含量在50.1重量％至83重量％之间且亲水性含量在17重量％至49.9重量％之间，且总嵌段共聚物分子量在2000道尔顿与8000道尔顿之间。药物载剂在低于正常哺乳动物体温的温度下展现水溶性且经历可逆的热胶凝，因此在等于生理学哺乳动物体温的温度下以凝胶形式存在。生物可降解的疏水性A聚合物嵌段包含聚酯或聚(原酸酯)，其中聚酯由选自由以下组成的群组的单体合成：D，L-丙交酯、D-丙交酯、L-丙交酯、D，L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、乙交酯、乙醇酸、ε-己内酯、ε-羟基己酸、γ-丁内酯、γ-羟基丁酸、δ-戊内酯、δ-羟基戊酸、羟基丁酸、苹果酸和其共聚物，且平均分子量在约600道尔顿与3000道尔顿之间。亲水性B嵌段节段优选是聚乙二醇(PEG)，平均分子量在约500道尔顿与2200道尔顿之间。
其它生物可降解的热塑性聚酯包括
Figure BPA00001294499700691
(由阿特里克斯实验室(AtrixLaboratories，Inc.)提供)和/或例如美国专利第5,324,519号、第4,938,763号、第5,702,716号、第5,744,153号和第5,990,194号中公开的热塑性聚酯；其中适合的生物可降解的热塑性聚酯以热塑性聚合物公开。适合的生物可降解热塑性聚酯的实例包括聚乳酸、聚乙交酯、聚己酸内酯、其共聚物、其三元共聚物和其任何组合。在一些所述实施例中，适合的生物可降解热塑性聚酯是聚乳酸、聚乙交酯、其共聚物、其三元共聚物或其组合。在一个实施例中，生物可降解的热塑性聚酯是具有羧基末端基团的50/50聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；占组合物的约30wt.％至约40wt.％；且平均分子量为约23,000至约45,000。或者，在另一实施例中，生物可降解的热塑性聚酯是无羧基末端基团的75/25聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；占组合物的约40wt.％至约50wt.％；且平均分子量为约15,000至约24,000。在其它或替代实施例中，取决于聚合方法，聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的末端基团是羟基、羧基或酯。乳酸或乙醇酸的聚缩合提供含末端羟基和羧基的聚合物。环状丙交酯或乙交酯单体与水、乳酸或乙醇酸的开环聚合提供含相同末端基团的聚合物。然而，用单官能醇(诸如甲醇、乙醇或1-十二烷醇)进行环状单体的开环提供含一个羟基和一个酯末端基团的聚合物。环状单体与二醇(诸如1，6-己二醇或聚乙二醇)的开环聚合提供仅含羟基末端基团的聚合物。
因为热可逆性凝胶的聚合物系统在低温下更完全溶解，所以溶解方法包括在低温下向待使用的量的水中添加所需量的聚合物。一般来说，在通过振荡润湿聚合物之后，盖上混合物且置于冷室中或约0-10℃的恒温容器中以使聚合物溶解。搅拌或振荡混合物以使热可逆性凝胶聚合物更快速地溶解。接着添加抗凋亡剂或促凋亡剂和诸如缓冲剂、盐和防腐剂等各种添加剂并溶解。在一些情况下，如果抗凋亡剂或促凋亡剂和/或其它医药活性剂不溶于水，那么将其悬浮。通过添加适当的缓冲剂调节pH值。任选地通过在组合物中并入圆窗膜粘膜粘附剂卡波姆(诸如
Figure BPA00001294499700692
934P)使热可逆性凝胶具有圆窗膜粘膜粘附特征(麻吉提亚(Majithiya)等人，美国药学科学家学会医药科技(AAPSPharmSciTech)(2006)，7(3)，第E1页；EP0551626，关于所述公开内容，两者以引用的方式并入本文中)。
一个实施例是不需要使用添加的粘度增强剂的耳可接受的医药凝胶组合物。这些凝胶组合物合并有至少一种医药学上可接受的缓冲剂。一方面是包含抗凋亡剂或促凋亡剂和医药学上可接受的缓冲剂的凝胶组合物。在另一实施例中，医药学上可接受的赋形剂或载剂是胶凝剂。
在其它实施例中，适用的耳可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂医药组合物还包括一种或一种以上pH值调节剂或缓冲剂以提供适合于内淋巴或外淋巴的pH值。适合的pH值调节剂或缓冲剂包括(但不限于)乙酸盐、碳酸氢盐、氯化铵、柠檬酸盐、磷酸盐、其医药学上可接受的盐或其组合或混合物。所包括的这些pH值调节剂和缓冲剂的量是维持组合物的pH值在约pH 5与约pH 9之间所需的量，在一个实施例中，pH值在约6.5至约7.5之间，且在又一实施例中，pH值为约6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。在一个实施例中，当本发明组合物中使用一种或一种以上缓冲剂时，所述缓冲剂例如与医药学上可接受的媒剂组合且于最终组合物中的存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内。在本发明的某些实施例中，凝胶组合物中所包括的缓冲剂的量是使得凝胶组合物的pH值不干扰中耳或内耳的天然缓冲系统或不干扰内淋巴或外淋巴的天然pH值的量：取决于抗凋亡剂或促凋亡剂组合物以耳蜗中的何处为目标。在一些实施例中，凝胶组合物中存在约10μM至约200mM浓度的缓冲剂。在某些实施例中，存在约5mM至约200mM浓度的缓冲剂。在某些实施例中，存在约20mM至约100mM浓度的缓冲剂。一个实施例是诸如呈微酸性pH值的乙酸盐或柠檬酸盐等缓冲剂。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约4.5至约6.5的乙酸钠缓冲剂。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约5.0至约8.0或约5.5至约7.0的柠檬酸钠缓冲剂。
在替代性实施例中，所用的缓冲剂是呈微碱性pH值的三(羟基甲基)氨基甲烷、碳酸氢盐、碳酸盐或磷酸盐。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约6.5至约8.5、或约7.0至约8.0的碳酸氢钠缓冲剂。在另一实施例中，缓冲剂是pH值为约6.0至约9.0的磷酸二钠缓冲剂。
本文还描述包含抗凋亡剂或促凋亡剂和粘度增强剂的控制释放组合物或装置。仅举例来说，适合的粘度增强剂包括胶凝剂和悬浮剂。在一个实施例中，粘度增强的组合物不包括缓冲剂。在其它实施例中，粘度增强的组合物包括医药学上可接受的缓冲剂。必要时，任选使用氯化钠或其它张力剂来调节张力。
仅举例来说，耳可接受的粘度剂包括羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、硫酸软骨素钠、透明质酸钠。与目标耳结构相容的其它粘度增强剂包括(但不限于)阿拉伯胶、琼脂、硅酸铝镁、海藻酸钠、硬脂酸钠、墨角藻(bladderwrack)、膨土、卡波姆、卡拉胶、卡波普(Carbopol)、黄原胶、纤维素、微晶纤维素(MCC)、长角豆(ceratonia)、几丁质、羧甲基化聚葡萄胺糖、角叉菜(chondrus)、右旋糖、红藻胶(furcellaran)、明胶、印度树胶(Ghatti gum)、瓜尔胶、锂皂石(hectorite)、乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精、甘露醇、山梨醇、蜂蜜、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、苹婆胶(sterculia gum)、黄原胶、黄芪胶、乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、乙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、氧化聚明胶(oxypolygelatin)、果胶、聚明胶肽(polygeline)、聚维酮、碳酸丙二酯、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物(PVM/MA)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙基酯)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙基酯)、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(CMC)、二氧化硅、聚乙烯吡咯烷酮(PVP：聚维酮)、
Figure BPA00001294499700711
(右旋糖、麦芽糖糊精和蔗糖素)或其组合。在具体实施例中，粘度增强赋形剂是MCC与CMC的组合。在另一实施例中，粘度增强剂是羧甲基化壳聚糖或几丁质与海藻酸盐的组合。几丁质和海藻酸盐与本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂的组合以控制释放组合物形式起作用，限制抗凋亡剂或促凋亡剂从组合物中扩散。此外，任选使用羧甲基化壳聚糖与海藻酸盐的组合以帮助增加抗凋亡剂或促凋亡剂穿过圆窗膜的渗透性。
一些实施例是粘度增强的组合物，包含约0.1mM与约100mM的抗凋亡剂或促凋亡剂、医药学上可接受的粘度剂和注射用水，粘度剂于水中的浓度足以提供最终粘度为约100至约100,000cP的粘度增强的组合物。在某些实施例中，凝胶的粘度在约100至约50,000cP、约100cP至约1,000cP、约500cP至约1500cP、约1000cP至约3000cP、约2000cP至约8,000cP、约4,000cP至约50,000cP、约10,000cP至约500,000cP、约15,000cP至约1,000,000cP的范围内。在其它实施例中，当需要甚至更粘的介质时，生物相容的凝胶包含以重量计至少约35％、至少约45％、至少约55％、至少约65％、至少约70％、至少约75％或甚至至少约80％左右的抗凋亡剂或促凋亡剂。在高度浓缩的样品中，生物相容的粘度增强组合物包含以重量计至少约25％、至少约35％、至少约45％、至少约55％、至少约65％、至少约75％、至少约85％、至少约90％或至少约95％或95％以上的抗凋亡剂或促凋亡剂。
在一些实施例中，本文呈示的凝胶组合物的粘度由任何描述的方式测量。举例来说，在一些实施例中，使用LVDV-II+CP锥板式粘度计和锥轴式CPE-40计算本文所述的凝胶组合物的粘度。在其它实施例中，使用博力飞(Brookfield)(轴式和杯式)粘度计计算本文所述的凝胶组合物的粘度。在一些实施例中，本文提及的粘度范围是在室温下测量。在其它实施例中，本文提及的粘度范围是在体温(例如健康人类的平均体温)下测量。
在一个实施例中，医药学上可接受的粘度增强的耳可接受的组合物包含至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂和至少一种胶凝剂。用于制备凝胶组合物的适合胶凝剂包括(但不限于)纤维素、纤维素衍生物、纤维素醚(例如羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素)、瓜尔胶、黄原胶、刺槐豆胶、海藻酸盐(例如海藻酸)、硅酸盐、淀粉、黄芪胶、羧乙烯基聚合物、卡拉胶、石蜡、凡士林和其任何组合或混合物。在一些其它实施例中，利用羟丙基甲基纤维素(美多秀(Methocel)
Figure BPA00001294499700721
)作为胶凝剂。在某些实施例中，还利用本文所述的粘度增强剂作为本文呈示的凝胶组合物的胶凝剂。
在一些实施例中，本文公开的耳部治疗剂以耳可接受的涂剂形式分配。如本文所使用，涂剂(也称为成膜剂)是包含溶剂、单体或聚合物、活性剂和任选的一种或一种以上医药学上可接受的赋形剂的溶液。施用于组织后，溶剂蒸发，留下包含单体或聚合物和活性剂的薄涂层。涂层保护活性剂且将其以固定状态维持在施用部位。此举可减小可能损失的活性剂的量并相应增加传递给个体的量。作为非限制性实例，涂剂包括火棉胶(例如弹性火棉胶，USP)以及包含糖类硅氧烷共聚物和交联剂的溶液。火棉胶是含有火棉(硝化纤维素)的乙醚/乙醇溶液。施用后，乙醚/乙醇溶液蒸发，留下火棉薄膜。在包含糖类硅氧烷共聚物的溶液中，糖类硅氧烷共聚物在溶剂蒸发引发糖类硅氧烷共聚物交联之后形成涂层。关于涂剂的其它揭示内容，参看雷明顿：药学科学和实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，其关于这一主题的内容并入本文中。涵盖在本文中使用的涂剂是弹性的以致其不会干扰压力波穿过耳朵传播。另外，涂剂可以液体(即，溶液、悬浮液或乳液)、半固体(即，凝胶、泡沫体、糊状物或胶状物)或气雾剂形式施用。
在一些实施例中，本文公开的耳部治疗剂以控制释放泡沫体形式分配。适用于本文公开的组合物的可泡沫化载剂的实例包括(但不限于)海藻酸和其衍生物、羧甲基纤维素和其衍生物、胶原蛋白、多糖(包括例如葡聚糖、葡聚糖衍生物、果胶、淀粉、变性淀粉，诸如具有额外羧基和/或酰胺基和/或具有亲水性侧链的淀粉)、纤维素和其衍生物、琼脂和其衍生物(诸如经聚丙烯酰胺稳定的琼脂)、聚氧化乙烯、甲基丙烯酸乙二醇酯、明胶、胶(诸如黄原胶(xanthum gum)、瓜尔胶(guar gum)、刺梧桐树胶(karaya gum)、结冷胶(gellan gum)、阿拉伯胶(arabic gum)、黄芪胶和刺槐豆胶)或其组合。同样适合的是前述载剂的盐，例如海藻酸钠。组合物任选地另外包含发泡剂，其促进泡沫体形成，包括表面活性剂或外置推进剂(external propellant)。适合的发泡剂的实例包括西曲溴铵(cetrimide)、卵磷脂、肥皂、硅酮等。
Figure BPA00001294499700731
等可自市面上购得的表面活性剂也是适合的。
在一些实施例中，取决于特定抗凋亡剂或促凋亡剂、所用的其它医药剂或赋形剂/添加剂，其它凝胶组合物也适用，因而视为在本发明的范围内。举例来说，预期其它可购得的基于甘油的凝胶、甘油衍生的化合物、结合或交联的凝胶、基质、水凝胶和聚合物、以及明胶和其衍生物、海藻酸盐和基于海藻酸盐的凝胶、和甚至各种天然和合成水凝胶和水凝胶衍生的化合物全部适用于本文所述的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物中。在一些实施例中，耳可接受的凝胶包括(但不限于)海藻酸盐水凝胶凝胶(康复宝(ConvaTec)，新泽西州普林斯顿(Princeton，N.J.))；
Figure BPA00001294499700733
水凝胶(康复宝(ConvaTec))、
Figure BPA00001294499700734
(强生医学(Johnson&Johnson Medical)，德克萨斯州阿灵顿(Arlington，Tex.))；
Figure BPA00001294499700735
(V)醋孟南水凝胶(Acemannan Hydrogel)(卡灵顿实验室公司(Carrington Laboratories，Inc.)，德克萨斯州欧文(Irving，Tex.))；甘油凝胶水凝胶(瑞士-美国产物公司(Swiss-American Products，Inc.)，德克萨斯州达拉斯(Dallas，Tex.))和无菌
Figure BPA00001294499700737
(强生公司(Johnson&Johnson))。在其它实施例中，生物可降解的生物相容性凝胶还表示存在于本文公开和描述的耳可接受的组合物中的化合物。
在一些开发用于向哺乳动物投药和用于经调配以供人类投药的组合物的组合物中，耳可接受的凝胶占组合物重量的实质上全部。在其它实施例中，耳可接受的凝胶占组合物的高达约98重量％或约99重量％。当需要实质上非流体或实质上粘性的组合物时，希望如此。在另一实施例中，当需要粘性略小或流动性略大的耳可接受的医药凝胶组合物时，组合物的生物相容性凝胶部分占化合物的至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、或甚至至少约80重量％或90重量％。涵盖这些范围内的所有中间整数均在本案的范围内，且在一些替代实施例中，调配流动性更大(因而粘性较小)的耳可接受的凝胶组合物，诸如混合物的凝胶或基质组分占不超过约50重量％、不超过约40重量％、不超过约30重量％的组合物，或甚至占不超过约15重量％或约20重量％的组合物。
耳可接受的悬浮剂
在一实施例中，医药学上可接受的粘度增强组合物中包括至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂，其中所述组合物另外包含至少一种悬浮剂，其中所述悬浮剂帮助赋予组合物控制释放特征。在一些实施例中，悬浮剂还用于增加耳可接受的凋亡调节组合物和组合物的粘度。
仅举例来说，悬浮剂包括以下化合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30；乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)；羧甲基纤维素钠；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)；硬脂酸醋酸羟甲基纤维素；聚山梨醇酯-80；羟乙基纤维素；海藻酸钠；胶，诸如黄芪胶和阿拉伯树胶、瓜尔胶；黄原胶类，包括黄原胶；糖；纤维素塑料，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯、聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯、聚维酮等。在一些实施例中，适用的水性悬浮液还含有一种或一种以上聚合物作为悬浮剂。适用的聚合物包括水溶性聚合物，诸如纤维素聚合物，例如羟丙基甲基纤维素；和水不溶性聚合物，诸如交联含羧基聚合物。
在一实施例中，本发明提供于羟乙基纤维素凝胶中包含治疗有效量的抗凋亡剂或促凋亡剂的耳可接受的凝胶组合物。获得呈干粉状的羟乙基纤维素(HEC)，其于水或水性缓冲溶液中复原以得到想要的粘度(一般为约200cps到约30,000cps，对应于约0.2到约10％HEC)。在一实施例中，HEC的浓度在约1％与约15％之间，约1％与约2％之间，或约1.5％与约2％之间。
在其它实施例中，包括凝胶组合物和粘度增强组合物的耳可接受的组合物另外包括赋形剂、其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、盐、增溶剂、消泡剂、抗氧化剂、分散剂、润湿剂、表面活性剂或其组合。
耳可接受的光化辐射可固化凝胶
在其它实施例中，凝胶是光化辐射可固化凝胶，以致投予目标耳结构中或附近后，利用光化辐射(或光，包括紫外光、可见光或红外光)形成想要的凝胶性质。仅举例来说，使用光纤提供光化辐射以形成想要的凝胶性质。在一些实施例中，光纤和凝胶投予装置形成单个单元。在其它实施例中，光纤和凝胶投予装置分开提供。
耳可接受的溶剂释放凝胶
在一些实施例中，凝胶是溶剂释放凝胶，以致想要的凝胶性质在投予目标耳结构中或附近之后形成，其为当注入的凝胶组合物中的溶剂扩散出凝胶时，形成具有想要凝胶性质的凝胶。举例来说，包含蔗糖醋酸异丁酸酯、医药学上可接受的溶剂、一种或一种以上添加剂和抗凋亡剂或促凋亡剂的组合物投予圆窗膜之上或附近：溶剂扩散出注入的组合物提供具有想要凝胶性质的储库。举例来说，使用水溶性溶剂，当溶剂快速扩散出注入的组合物时提供高粘度储库。另一方面，使用疏水性溶剂(例如苯甲酸苄酯)提供粘度较小的储库。耳可接受的溶剂释放凝胶组合物的一个实例是杜雷科特公司(DURECT Corporation)销售的SABERTM传递系统。
耳可接受的现场形成海绵状材料
实施例的范围内还涵盖使用在内耳或中耳中现场形成的海绵状材料。在一些实施例中，海绵状材料由透明质酸或其衍生物形成。海绵状材料浸有想要的抗凋亡剂或促凋亡剂且放置到中耳内以控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂在中耳内或与圆窗膜接触放置以控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂到内耳内。在一些实施例中，海绵状材料是生物可降解的。
圆窗膜粘膜粘附剂
实施例范围内还涵盖向本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物和组合物和装置中添加圆窗膜粘膜粘附剂。术语‘粘膜粘附’用于指结合于诸如三层圆窗膜的外膜等生物膜的粘蛋白层的物质。为用作圆窗膜粘膜粘附聚合物，聚合物具有一些一般生理化学特征，诸如阴离子亲水性占优和许多氢键形成基团、适于润湿粘液/粘膜组织表面的表面性质或足以渗透粘液网络的灵活性。
与耳可接受的组合物一起使用的圆窗膜粘膜粘附剂包括(但不限于)至少一种可溶性聚乙烯吡咯烷酮聚合物(PVP)；水可膨胀但不溶于水的纤维状交联羧基官能型聚合物；交联聚(丙烯酸)(例如
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947P)；卡波姆同聚物；卡波姆共聚物；亲水性多糖胶、麦芽糖糊精、交联海藻酸盐胶凝胶、水可分散性聚羧基化乙烯基聚合物、至少两种选自由二氧化钛、二氧化硅和粘土组成的群组的颗粒组分、或其混合物。圆窗膜粘膜粘附剂任选与耳可接受的粘度增加赋形剂组合使用，或单独使用以增加组合物与粘膜层目标耳部组件的相互作用。在一个非限制性实例中，粘膜粘附剂是麦芽糖糊精和/或海藻酸盐胶。当使用时，赋予组合物的圆窗膜粘膜粘附剂特征处于足以传递有效量的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物到例如圆窗膜的粘膜层或蜗窗嵴达涂布粘膜的量且此后传递组合物到受影响区域(仅举例来说，包括内耳前庭和/或耳蜗结构)的水平。当使用时，确定本文提供的组合物的粘膜粘附特征，且使用这一信息(以及本文提供的其它教示)，确定适当的量。一种确定足够的粘膜粘附的方法包括监测组合物与粘膜层相互作用的变化，包括(但不限于)测量组合物在不存在和存在粘膜粘附赋形剂的情况下保留或滞留时间的变化。
粘膜粘附剂已描述于例如美国专利第6,638,521号、第6,562,363号、第6,509,028号、第6,348,502号、第6,319,513号、第6,306,789号、第5,814,330号和第4,900,552号中，其各自的揭示内容以引用的方式并入本文中。
在另一非限制性实例中，粘膜粘附剂是例如至少两个选自二氧化钛、二氧化硅和粘土的颗粒组分，其中组合物在投予之前不另外用任何液体稀释，且二氧化硅存在时，水平为组合物的约3重量％到约15重量％。二氧化硅存在时包括烟雾状二氧化硅、沉淀二氧化硅、团聚二氧化硅、凝胶二氧化硅和其混合物。粘土存在时包括高岭土矿物、蛇纹石矿物、蒙脱石、伊利石或其混合物。举例来说，粘土包括锂藻土(laponite)、膨润土、锂蒙脱石、皂石、蒙脱石或其混合物。
在一个非限制性实例中，圆窗膜粘膜粘附剂是麦芽糖糊精。麦芽糖糊精是通过水解任选来源于玉米、马铃薯、小麦或其它植物产品的淀粉所产生的碳水化合物。麦芽糖糊精任选地单独使用或与其它圆窗膜粘膜粘附剂组合使用以使本文公开的组合物具有粘膜粘附特征。在一个实施例中，使用麦芽糖糊精与卡波普聚合物的组合来增加本文公开的组合物或装置的圆窗膜粘膜粘附特征。
在另一实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷和/或糖烷基酯。如本文所使用的“烷基-糖苷”意思是化合物包含任何连接于疏水性烷基的亲水性糖(例如蔗糖、麦芽糖或葡萄糖)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷包含糖经由酰胺键、胺键、氨基甲酸酯键、醚键、硫醚键、酯键、硫酯键、糖苷键、硫糖苷键和/或酰脲键连接于疏水性烷基(例如包含约6至约25个碳原子的烷基)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-麦芽糖苷；己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-葡糖苷；己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-蔗糖苷；己基-、庚基-、辛基-、十二烷基-、十三烷基-和十四烷基-β-D-硫代麦芽糖苷；庚基-或辛基-1-硫代-α-或β-D-吡喃葡萄糖苷；烷基硫代蔗糖苷；烷基麦芽三糖苷；蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰胺；巴拉金糖(palatinose)或异麦芽胺(isomaltamine)经由酰胺键连接于烷基链的衍生物和异麦芽胺经由脲连接于烷基链的衍生物；蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰脲和蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰胺。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是麦芽糖、蔗糖、葡萄糖或其组合经由糖苷键连接于具有9-16个碳原子的烷基链(例如壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基蔗糖苷；壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基葡糖苷；和壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基麦芽糖苷)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是十二烷基麦芽糖苷、十三烷基麦芽糖苷和十四烷基麦芽糖苷。
在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基糖苷，其中烷基糖苷是含至少一个葡萄糖的二糖。在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷、正十二烷基-4-O-α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷和/或正十四烷基-4-O-α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷的表面活性剂。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷于纯水或水溶液中的临界胶束浓度(CMC)小于约1mM。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷内的氧原子经硫原子取代。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是β-异头物。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷包含90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.5％或99.9％的β-异头物。
耳可接受的控制释放粒子
本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂和/或其它医药剂任选地合并于增强或促进抗凋亡剂或促凋亡剂的局部传递的控制释放粒子、脂质复合物、脂质体、纳米粒子、微粒、微球体、团聚体、纳米胶囊或其它药剂中。在一些实施例中，使用存在至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂的单个粘度增强组合物，而在其它实施例中，使用存在至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂的包含两种或两种以上不同的粘度增强组合物的混合物的医药组合物。在一些实施例中，还采用溶胶、凝胶和/或生物相容基质的组合以提供控制释放凋亡调节组合物或组合物的想要特征。在某些实施例中，控制释放凋亡调节组合物或组合物经一种或一种以上试剂交联以改变或改进组合物的性质。
与本文公开的医药组合物相关的微球体的实例包括：卢齐L.A.(Luzzi，L.A.)，药学心理学杂志(J.Pharm.Psy.)59：1367(1970)；美国专利第4,530,840号；路易斯D.H.(Lewis，D.H.)，″生物活性剂从丙交酯/乙交酯聚合物中的控制释放(Controlled-release ofBioactive Agents from Lactides/Glycolide Polymers)″，作为药物传递系统的生物可降解聚合物(Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems)，查辛M.(Chasin，M.)和朗格R.(Langer，R.)编，马塞尔·德克尔公司(Marcel Decker)(1990)；美国专利第4,675,189号；贝克(Beck)等人，″聚(乳酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)避孕传递系统(Poly(lactic acid)andPoly(lactic acid-co-glycolic acid)Contraceptive Delivery Systems)″，长效类固醇避孕法(Long Acting Steroid Contraception)，米歇尔D.R.(Mishell，D.R.)编，莱文出版社(RavenPress)(1983)；美国专利第4,758,435号；美国专利第3,773,919号；美国专利第4,474,572号。调配成微球体的蛋白质治疗剂的实例包括：美国专利第6,458,387号；美国专利第6,268,053号；美国专利第6,090,925号；美国专利第5,981,719号；和美国专利第5,578,709号，且其揭示内容以引用的方式并入本文中。
虽然微球体通常具有球形，但不规则形状的微粒也有可能。微球体的尺寸可变化，直径从亚微米到1000微米。适于与本文公开的耳可接受的组合物一起使用的微球体是亚微米到250微米直径的微球体，从而允许通过用标准型号针注射来投药。耳可接受的微球体由制造尺寸范围为在可注射组合物中使用所接受的微球体的任何方法制备。任选地用用于投予液体组合物的标准型号针来注射。
用于本文的耳可接受的控制释放粒子中的聚合物基质材料的适合实例包括聚(乙醇酸)、聚-d，l-乳酸、聚-l-乳酸、前述者的共聚物、聚(脂肪族羧酸)、共聚草酸酯、聚己酸内酯、聚二氧杂环己酮(polydioxonene)、聚(原碳酸酯)、聚(乙缩醛)、聚(乳酸-己内酯)、聚原酸酯、聚(乙醇酸-己内酯)、聚二氧杂环己酮、聚酸酐、聚磷嗪(polyphosphazine)、和天然聚合物，包括白蛋白、酪蛋白和一些蜡(诸如甘油单硬脂酸酯和甘油二硬脂酸酯)等。各种可自市面上购得的聚(丙交酯-共-乙交酯)材料(PLGA)任选地用于本文公开的方法中。举例来说，聚(d，l-乳酸-共-乙醇酸)可自勃林格殷格翰公司(Boehringer-Ingelheim)以RESOMER RG 503H购得。这一产品的摩尔百分比组成为50％丙交酯和50％乙交酯。可获得宽范围分子量和乳酸与乙醇酸比率的这些共聚物。一个实施例包括使用聚合物聚(d，l-丙交酯-共-乙交酯)。这类共聚物中丙交酯与乙交酯的摩尔比率包括约95∶5到约50∶50的范围。
聚合物基质材料的分子量具有一定的重要性。分子量应足够高以能形成令人满意的聚合物涂层，即聚合物应是良好的成膜剂。令人满意的分子量通常在5,000到500,000道尔顿范围内。从分子量会影响聚合物生物降解速率的观点来看，聚合物的分子量也很重要。对于药物释放的扩散机理，聚合物应在所有药物从微粒释放之前仍是完整的，然后降解。当聚合物赋形剂生物腐蚀时，药物也从微粒中释放。通过适当选择聚合物材料，可制备一种微球体组合物以致所得微球体展现扩散释放与生物降解释放性质。这适用于得到多相释放模式。
已知多种将化合物囊封于微球体中的方法。在这些方法中，一般使用搅拌器、搅拌机或其它动力学混合技术将抗凋亡剂或促凋亡剂分散或乳化于含有成壁材料的溶剂中。然后从微球体中去除溶剂，其后获得微球体产物。
在一实施例中，控制释放凋亡调节组合物通过在乙烯-醋酸乙烯共聚物基质中并入抗凋亡剂或促凋亡剂和/或其它医药剂来制备。(参看美国专利第6,083,534号，其揭示内容并入本文中)。在另一实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂并入聚(乳酸-乙醇酸)或聚-L-乳酸微球体中(出处同上)。在又一实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂囊封于海藻酸酯微球体中。(参看美国专利第6,036,978号，其揭示内容并入本文中)。囊封凋亡调节化合物或组合物的基于生物相容性甲基丙烯酸酯的聚合物任选地用于本文公开的组合物和方法中。多种基于甲基丙烯酸酯的聚合物系统可自市面上购得，诸如以Evonik销售的EUDRAGIT聚合物。甲基丙烯酸酯聚合物的一个适用方面是组合物的性质因并入各种共聚合物而变化。举例来说，聚(丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯)微粒粘膜粘附的性质增强，因为聚(丙烯酸)中的羧基与粘蛋白形成氢键(帕克(Park)等人，药理学研究(Pharm.Res.)，(1987)4(6)：457-464)。变化丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯单体之间的比率可用于调节共聚合物的性质。基于甲基丙烯酸酯的微粒还用于蛋白质治疗组合物中(纳哈(Naha)等人，微囊化杂志(Journal ofMicroencapsulation)，2008年2月4日(在线公开))。在一实施例中，本文描述的粘度增强耳可接受的组合物包含凋亡调节微球体，其中所述微球体由甲基丙烯酸酯聚合物或共聚物形成。在另一实施例中，本文描述的粘度增强组合物包含凋亡调节微球体，其中微球体具有粘膜粘附性。本文公开的实施例中还明确涵盖其它控制释放系统，包括在含有抗凋亡剂或促凋亡剂的固体或空心球体上并入或沉积聚合物材料或基质。可利用的抗凋亡剂或促凋亡剂活性没有显著丧失的控制释放系统的类型使用本文公开的教示、实例和原理确定。
药物制剂的常规微囊法的一个实例显示于美国专利第3,737,337号中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。使用常规混合器，包括(在分散液制备时)振动器和高速搅拌器等，将待囊封或包埋的凋亡调节物质溶解或分散于聚合物(A相)的有机溶液中。再次使用常规混合器，诸如高速混合器、振动混合器或甚至喷雾嘴，在水相(B)中分散含有呈溶液状态或悬浮状态的核心材料的相(A)，在此情况下，微球体的粒度将不仅由相(A)的浓度而且由乳化物或微球体尺寸来决定。利用微囊化抗凋亡剂或促凋亡剂的常规方法，当通过搅拌、搅动、振动或其它动力学混合技术，通常历经一段相对较长的时间，将含有活性剂和聚合物的溶剂乳化或分散于不混溶溶液中时，形成微球体。
微球体的构造方法还描述于美国专利第4,389,330号和美国专利第4,530,840号中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。将想要的抗凋亡剂或促凋亡剂溶解或分散于适当的溶剂中。向含药剂的介质中所加入的聚合物基质材料相对于活性成分的量可赋予产品想要的活性剂负荷。任选地，可将凋亡调节微球体产品的所有成分一起掺合于溶剂介质中。能溶解药剂和聚合物基质材料的适合溶剂包括有机溶剂，诸如丙酮、卤代烃(诸如氯仿、二氯甲烷等)、芳香族烃化合物、卤化芳香族烃化合物、环状醚、醇、乙酸乙酯等。
在连续相加工介质中乳化各成分于溶剂中的混合物；所述连续相介质使得在连续相介质中形成含有指示成分的微滴分散液。当然，连续相加工介质和有机溶剂必须不混溶，且包括水，但任选地使用诸如二甲苯和甲苯等非水性介质和合成油和天然油。任选地，向连续相加工介质中加入表面活性剂以防止微粒凝聚且控制乳液中溶剂微滴的尺寸。优选的表面活性剂分散介质组合是1到10重量％聚(乙烯醇)于水中的混合物。分散液通过机械搅拌混合的材料形成。乳液任选地通过向连续相加工介质中加入小滴活性剂成壁材料溶液来形成。虽然乳液形成期间的温度不是特别重要，但其影响微球体的尺寸和质量以及药物在连续相中的溶解性。希望连续相中具有尽可能少的药剂。此外，视采用的溶剂和连续相加工介质而定，温度不能太低，否则溶剂和加工介质将固化，或从实用目的来看，加工介质将变得太粘稠，或温度不能太高，否则加工介质将蒸发或液体加工介质不能维持。此外，介质温度不能太高以致不利地影响并入微球体中的特定药剂的稳定性。因此，分散过程在任何维持稳定操作条件的温度下进行，优选温度为约15℃到60℃，视所选药物和赋形剂而定。
所形成的分散液是稳定乳液，且在溶剂去除过程的第一步骤中，任选地从这一分散液中部分去除有机溶剂不混溶液体。利用诸如加热、施加减压或两者的组合等技术来去除溶剂。虽然用于从微滴中蒸发溶剂的温度并不重要，但不应高到以致其降解既定微粒制备中所采用的抗凋亡剂或促凋亡剂，也不应高得以致溶剂蒸发速率太快从而在成壁材料中产生缺陷。一般来说，在第一溶剂去除步骤中去除5％到75％的溶剂。
第一阶段后，利用任何便利的分离方法从流体介质中分离溶剂不混溶流体介质中的分散微粒。因此，举例来说，从微球体中倾析流体或过滤微球体悬浮液。另外，需要时，使用分离技术的各种组合。
从连续相加工介质中分离微球体后，通过萃取去除微球体中的剩余溶剂。在这一步骤中，将微球体悬浮于步骤1中所用的同一连续相加工介质(有或无表面活性剂)或另一液体中。萃取介质从微球体中去除溶剂但不溶解微球体。萃取期间，任选地去除溶解有溶剂的萃取介质并用新鲜萃取介质置换。此举最好不断进行。既定方法的萃取介质补充速率是所述方法进行时确定的变量，因此无需预先确定所述速率的精确界限。在大多数溶剂已从微球体中去除后，通过暴露于空气中或通过其它常规干燥技术(诸如真空干燥、干燥剂干燥等)干燥微球体。这一方法对囊封抗凋亡剂或促凋亡剂非常有效，因为获得多达80重量％、优选多达60重量％的核心负荷。
或者，通过使用静态混合器制备含有抗凋亡剂或促凋亡剂的控制释放微球体。静态或不动混合器由接收多种静态混合剂的管道或管组成。静态混合器在相对较短长度的管道和相对较短的时间内提供均匀混合。用静态混合器，使流体流经混合器而不是混合器的某一部分(诸如桨叶)流经流体。
任选地使用静态混合器形成乳液。当使用静态混合器形成乳液时，若干因素决定乳液粒子尺寸，包括待混合的各种溶液或相的密度和粘度、各相的体积比、相之间的界面张力、静态混合器参数(管道直径；混合元件的长度；混合元件的数目)和通过静态混合器的线速度。温度是变量，因为其影响密度、粘度和界面张力。控制变量是线速度、剪切速率和单位长度静态混合器的压降
为使用静态混合器方法形成含有抗凋亡剂或促凋亡剂的微球体，组合有机相和水相。有机相和水相在很大程度上或实质上不混溶，其中水相构成乳液的连续相。有机相包括抗凋亡剂或促凋亡剂以及成壁聚合物或聚合物基质材料。通过将抗凋亡剂或促凋亡剂溶解于有机或其它适合的溶剂中或通过形成含有抗凋亡剂或促凋亡剂的分散液或乳液来制备有机相。泵送有机相和水相以使两相同时流经静态混合器，由此形成包含含有抗凋亡剂或促凋亡剂囊封于聚合物基质材料中的微球体的乳液。泵送有机相和水相流经静态混合器进入大量冷却液(quench liquid)中以萃取或去除有机溶剂。任选地从微球体中去除有机溶剂，同时于冷却液中洗涤或搅拌微球体。在微球体于冷却液中洗涤之后，过筛分离，并干燥。
在一实施例中，使用静态混合器制备微球体。虽然这一方法不限于上文论述的溶液萃取技术，但与其它囊封技术一起使用。举例来说，这一方法任选地与相分离囊封技术一起使用。为实现此举，制备包含抗凋亡剂或促凋亡剂悬浮或分散于聚合物溶液中的有机相。非溶剂第二相不含能溶解聚合物和活性剂的溶剂。优选非溶剂第二相是硅油。泵送有机相和非溶剂相流经静态混合器进入非溶剂冷却液，诸如庚烷中。冷却半固体粒子以完全硬化和洗涤。微囊法包括喷雾干燥、溶剂蒸发、蒸发和萃取的组合以及熔融挤出。
在另一实施例中，微囊法涉及使用利用单一溶剂的静态混合器。这一方法详细描述于美国申请案第08/338,805中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。另一替代方法涉及使用利用共溶剂的静态混合器。在这一方法中，制备包含生物可降解的聚合粘合剂和抗凋亡剂或促凋亡剂的生物可降解微球体，其包含至少两种实质上无毒溶剂的掺合物，无卤代烃以溶解药剂与聚合物。将含有溶解的药剂和聚合物的溶剂掺合物分散于水溶液以形成液滴。然后将所得乳液加入优选含有掺合物的至少一种溶剂的水性萃取介质中，由此控制各溶剂的萃取率，因此形成含有医药学上活性剂的生物可降解微球体。这一方法的优点在于需要较少萃取介质，因为一种溶剂于水中的溶解性实质上与另一溶剂无关，且溶剂选择性增加，尤其用特别难以萃取的溶剂。
还涵盖纳米粒子与本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂一起使用。纳米粒子是尺寸为约100nm或100nm以下的材料结构。纳米粒子在医药组合物中的一个用途是当粒子表面与溶剂的相互作用足以克服密度差时形成悬浮液。当纳米粒子足够小而能进行无菌过滤时，给纳米粒子悬浮液灭菌(参看例如美国专利第6,139,870号，其揭示内容以引用的方式并入本文中)。纳米粒子包含至少一种疏水性、水不溶性和水不可分散性聚合物或共聚物乳化于表面活性剂、磷脂或脂肪酸的溶液或水性分散液中。抗凋亡剂或促凋亡剂任选地与聚合物或共聚物一起引入纳米粒子中。
本文还涵盖呈控制释放结构同时穿透圆窗膜并到达内耳和/或中耳目标的脂质纳米胶囊。脂质纳米胶囊任选地通过乳化癸酸与辛酸甘油三酯(Labrafac WL 1349；平均分子量为512)、大豆卵磷脂(
Figure BPA00001294499700821
S75-3；69％磷脂酰胆碱和其它磷脂)、表面活性剂(例如Solutol HS15)(聚乙二醇660羟基硬脂酸酯与游离聚乙二醇660的混合物)、NaCl和水形成。在室温下搅拌混合物，得到水包油乳液。在磁力搅拌下以4℃/min的速率渐进性加热后，在接近70℃应出现一段短时间间隔的透明，在85℃时出现反转的相(油包水液滴)。然后在85℃与60℃之间以4℃/min的速率应用三次冷却与加热循环，且在接近0℃的温度下快速稀释于冷水中，制得纳米胶囊悬浮液。为囊封抗凋亡剂或促凋亡剂，所述试剂任选地在即将用冷水稀释之前加入。
在一些实施例中，通过将抗凋亡剂或促凋亡剂与耳活性剂的水性胶束溶液一起培育90分钟使其插入脂质纳米胶囊中。然后每15分钟使悬浮液涡旋，然后于冰浴中冷却1分钟。
适合的耳可接受的表面活性剂是例如胆酸或牛磺胆酸盐。牛磺胆酸，由胆酸与牛磺酸形成的结合物，是一种完全可代谢的磺酸表面活性剂。牛磺胆酸类似物，牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)，是一种天然存在的胆酸且是牛磺酸与熊去氧胆酸(UDCA)的结合物。任选地使用其它天然存在的阴离子表面活性剂(例如硫酸半乳糖脑苷)、中性表面活性剂(例如乳糖苷基神经酰胺(lactosylceramide))或两性离子表面活性剂(例如鞘磷脂、磷脂酰胆碱、棕榈酰肉碱)制备纳米粒子。
耳可接受的磷脂选自例如天然、合成或半合成磷脂；卵磷脂(磷脂酰胆碱)，诸如纯卵磷脂或大豆磷脂(卵磷脂E100、卵磷脂E80和phospholipon系列，例如phospholipon90)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱甘油酯、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱和磷脂酸，或更尤其使用其混合物。
供耳可接受的组合物使用的脂肪酸选自例如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、花生酸、山箭酸、油酸、肉豆寇烯酸、棕榈油酸、亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥子酸、二十二碳六烯酸等。
适合的耳可接受的表面活性剂选自已知的有机和无机医药赋形剂。所述赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。优选表面改性剂包括非电离型和离子型表面活性剂。两种或两种以上表面改性剂组合使用。
耳可接受的表面活性剂的代表性实例包括氯化十六烷基吡锭、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、葡聚糖、甘油、阿拉伯胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八十六醇、聚西托醇乳化蜡(cetomacrogol emulsifying wax)、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、溴化十二烷基三甲基铵、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羟丙基纤维素(HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、非结晶纤维、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol)、士贝亮(superione)和曲通(triton))、泊洛沙姆、泊洛沙胺(poloxamnine)，一种带电磷脂，诸如二肉豆蔻酰基磷脂酰基甘油、磺基丁二酸二辛基酯(DOSS))；
Figure BPA00001294499700831
1508、磺基丁二酸钠的二烷基酯、Duponol P、Tritons X-200、Crodestas F-110、对异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、Crodestas SL-40(禾大公司(Croda，Inc.))；和SA9OHCO，其为C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(伊斯曼柯达公司(Eastman Kodak Co.))；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正癸基β-D-吡喃葡萄糖苷；正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷；正十二烷基β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正庚基β-D-硫代葡萄糖苷；正己基β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正壬基β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基β-D-硫代吡喃葡萄糖苷等。大部分这些表面活性剂是已知的医药赋形剂且详细描述于医药赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，由美国医药协会(American Pharmaceutical Association)和英国医药学会(Pharmaceutical Society ofGreat Britain)联合出版(医药出版社(Pharmaceutical Press)，1986)，其揭示内容特别地以引用的方式并入本文中。
疏水性、水不溶性和水不可分散聚合物或共聚物可选自生物相容和生物可降解的聚合物，例如乳酸或乙醇酸聚合物和其共聚物、或聚乳酸/聚氧乙烯(或聚氧丙烯)共聚物(优选分子量在1000与200,000之间)、聚羟基丁酸聚合物、含有至少12个碳原子的脂肪酸的聚内酯或聚酸酐。
纳米粒子可通过团聚或溶剂蒸发技术自添加有包含有效成分和疏水性、水不溶性和水不可分散性聚合物或共聚物的不混溶有机相的磷脂和油酸盐的水性分散液或溶液获得。预乳化所述混合物，然后进行均化作用并蒸发有机溶剂，获得极小尺寸纳米粒子的水性悬浮液。
任选采用各种方法制造在实施例范畴内的凋亡调节纳米粒子。这些方法包括汽化法，诸如自由喷流膨胀、激光汽化、电火花腐蚀、电爆炸和化学气相淀积；物理法，包括机械磨损(例如“高速珠磨(pearlmilling)”技术，伊兰纳米系统公司(ElanNanosystems))、超临界CO2和溶剂置换后的界面沉积。在一实施例中，使用溶剂置换法。由此方法制造的纳米粒子的尺寸易随有机溶剂中聚合物的浓度、混合速率和过程中所用的表面活性剂变化。连续流动混合器提供必要的湍流以确保小粒子尺寸。已描述一种类型的任选用于制备纳米粒子的连续流动混合装置(汉森(Hansen)等人，物理化学杂志(J Phys Chem)，92，2189-96，1988)。在其它实施例中，可使用超声波装置、流过均化器或超临界CO2装置来制备纳米粒子。
如果直接合成不能获得适合的纳米粒子均一性，那么使用尺寸排阻色谱法来制造含高度均一药物的粒子，即不含其制造中所涉及的其它组分。使用尺寸排阻色谱(SEC)技术(诸如凝胶过滤色谱)分离粒子结合的抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药化合物与游离抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药化合物，或选择含凋亡调节剂纳米粒子的适合粒度范围。各种SEC介质(诸如Superdex 200、Superose 6、Sephacryl 1000)均可自市面上购得，且用于所述混合物的基于尺寸的分馏。另外，任选地利用离心、膜过滤和利用其它分子筛分装置、交联的凝胶/材料和薄膜来纯化纳米粒子。
耳可接受的环糊精和其它稳定组合物
在一具体实施例中，耳可接受的组合物另外包含环糊精。环糊精是含有6、7或8个吡喃葡糖单元的环状寡糖，分别称为α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。环糊精具有增强水可溶性的亲水性外部，和形成空腔的疏水性内部。在水性环境中，其它分子的疏水性部分通常进入环糊精的疏水性空腔形成包合化合物(inclusion compound)。另外，环糊精还能够与不在疏水性空腔内部的分子发生其它类型的非键结相互作用。环糊精的各吡喃葡糖单元具有三个自由羟基，或α-环糊精具有18个羟基，β-环糊精具有21个羟基，且γ-环糊精具有24个羟基。一个或一个以上这些羟基可与若干试剂中的任何试剂反应以形成多种环糊精衍生物，包括羟丙基醚、磺酸盐和磺烷基醚。下文显示β-环糊精和羟丙基-β-环糊精(HPβCD)的结构。
Figure BPA00001294499700851
在一些实施例中，在本文所述的医药组合物中使用环糊精提高药物的溶解度。在许多增强溶解的情况下，涉及包合化合物；然而环糊精与不可溶化合物之间的其它相互作用也提高溶解度。羟丙基-β-环糊精(HPβCD)可以无致热原产品形式购得。其是易溶解于水中的非吸湿性白色粉末。HPβCD是热稳定的且在中性pH值下不降解。因此，环糊精提高治疗剂在组合物或组合物中的溶解度。因此，在一些实施例中，纳入环糊精以增加耳可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂在本文所述的组合物中的溶解度。在其它实施例中，环糊精另外在本文所述的组合物内用作控制释放赋形剂。
仅举例来说，可用环糊精衍生物包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟乙基β-环糊精、羟丙基γ-环糊精、硫酸化β-环糊精、硫酸化α-环糊精、磺丁基醚β-环糊精。
本文公开的组合物和方法中所用的环糊精的浓度随生理化学性质、药物动力学性质、副作用或不良事件、组合物考虑因素、或其它与治疗活性剂或其盐或前药相关的因素、或组合物中其它赋形剂的性质而变化。因此，在某些情况下，根据本文公开的组合物和方法使用的环糊精的浓度或量将视需要而变化。当使用时，增加抗凋亡剂或促凋亡剂的溶解度和/或充当本文所述的任何组合物中的控制释放赋形剂所需的环糊精的量使用本文所述的原理、实例和教示来进行选择。
适用于本文公开的耳可接受的组合物的其它稳定剂包括例如脂肪酸、脂肪醇、醇、长链脂肪酸酯、长链醚、脂肪酸的亲水性衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醚、聚乙烯醇、烃、疏水性聚合物、水分吸收聚合物或其组合。在一些实施例中，还使用稳定剂的酰胺类似物。在其它实施例中，所选稳定剂改变组合物的疏水性(例如油酸、蜡)，或改良组合物中各种组分的混合(例如乙醇)，控制配方中的水分含量(例如PVP或聚乙烯吡咯烷酮)，控制相迁移率(熔点高于室温的物质，诸如长链脂肪酸、醇、酯、醚、酰胺等或其混合物；蜡)，和/或提高配方与囊封材料的相容性(例如油酸或蜡)。在另一实施例中，使用这些稳定剂中的一些作为溶剂/共溶剂(例如乙醇)。在其它实施例中，稳定剂的存在量足以抑制抗凋亡剂或促凋亡剂的降解。所述稳定剂的实例包括(但不限于)：(a)约0.5％到约2％w/v甘油，(b)约0.1％到约1％w/v甲硫氨酸，(c)约0.1％到约2％w/v单硫代甘油，(d)约1mM到约10mM EDTA，(e)约0.01％到约2％w/v抗坏血酸，(f)0.003％到约0.02％w/v聚山梨醇酯80，(g)0.001％到约0.05％w/v聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(l)多硫酸戊聚糖和其它类肝素，(m)二价阳离子，诸如镁和锌；或(n)其组合。
其它适用的耳可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物包括一种或一种以上抗聚集添加剂以通过降低蛋白质聚集速率来增强抗凋亡剂或促凋亡剂组合物的稳定性。所选抗聚集添加剂取决于例如抗凋亡剂或促凋亡剂抗体等抗凋亡剂或促凋亡剂所暴露的条件的性质。举例来说，经受搅拌和热应力的某些组合物需要与经受冻干和复原的组合物不同的抗聚集添加剂。仅举例来说，适用的抗聚集添加剂包括脲、氯化胍、诸如甘氨酸或精氨酸等简单氨基酸、糖、多元醇、聚山梨醇酯、诸如聚乙二醇和葡聚糖等聚合物、诸如烷基糖苷等烷基糖类、和表面活性剂。
需要时，其它适用的组合物任选包括一种或一种以上耳可接受的抗氧化剂以增强化学稳定性。仅举例来说，适合的抗氧化剂包括抗坏血酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠和偏亚硫酸氢钠。在一个实施例中，抗氧化剂选自金属螯合剂、含硫醇化合物和其它一般稳定剂。
其它适用的组合物包括一种或一种以上耳可接受的表面活性剂以增强物理稳定性或用于其它目的。适合的非离子型表面活性剂包括(但不限于)聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。
在一些实施例中，本文所述的耳可接受的医药组合物就化合物降解来说在任何以下时期内是稳定的：至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月。在其它实施例中，本文所述的组合物就化合物降解来说在至少约1周的时期内是稳定的。本文还描述就化合物降解来说在至少约1个月的时期内是稳定的组合物。
在其它实施例中，将另一表面活性剂(共表面活性剂)和/或缓冲剂与一种或一种以上本文先前所述的医药学上可接受的媒剂组合以使表面活性剂和/或缓冲剂将产品维持在稳定性最佳的pH值下。适合的共表面活性剂包括(但不限于)：a)天然与合成亲脂性试剂，例如磷脂、胆固醇和胆固醇脂肪酸酯和其衍生物；b)非离子型表面活性剂，包括例如聚氧乙烯脂肪醇酯、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘(Span))、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温60)、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温20)和其它吐温、脱水山梨醇酯、甘油酯，例如Myrj与三乙酸甘油酯(glycerol triacetate/triacetin)、聚乙二醇、十六烷醇、十六醇硬脂醇、硬脂醇、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、泊洛沙胺、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如
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RH40、Cremphor A25、Cremphor A20、
Figure BPA00001294499700872
EL)和其它Cremophor、磺基丁二酸酯、烷基硫酸酯(SLS)；PEG甘油基脂肪酸酯，诸如PEG-8甘油基辛酸酯/癸酸酯(Labrasol)、PEG-4甘油基辛酸酯/癸酸酯(Labrafac HydroWL 1219)、PEG-32甘油基月桂酸酯(Gelucire 444/14)、PEG-6甘油基单油酸酯(LabrafilM 1944CS)、PEG-6甘油基亚油酸酯(Labrafil M 2125CS)；丙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯，诸如丙二醇月桂酸酯、丙二醇辛酸酯/癸酸酯；
Figure BPA00001294499700873
700、抗坏血酸基-6-棕榈酸酯、硬脂胺、月桂基硫酸钠、聚氧乙烯三蓖麻醇酸甘油酯和其任何组合或混合物；c)阴离子型表面活性剂包括(但不限于)羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、磺基丁二酸钠二辛酯、海藻酸钠、烷基聚氧乙烯硫酸盐、月桂基硫酸钠、三乙醇胺硬脂酸酯、月桂酸钾、胆汁盐和其任何组合或混合物；和d)阳离子型表面活性剂，诸如溴化十六烷基三甲基铵和氯化十二烷基二甲基苄基-铵。
在另一实施例中，当本发明的耳可接受的组合物中使用一种或一种以上共表面活性剂时，所述共表面活性剂例如与医药学上可接受的媒剂组合且于最终组合物中的存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内。
在一实施例中，表面活性剂的HLB值为0到20。在其它实施例中，表面活性剂的HLB值为0到3、4到6、7到9、8到18、13到15、10到18。
在一个实施例中，还使用稀释剂来稳定抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药化合物，因为其提供更稳定的环境。使用溶解于缓冲溶液中的盐(还可提供pH值控制或维持)作为稀释剂，包括(但不限于)磷酸盐缓冲生理盐水溶液。在其它实施例中，凝胶组合物与内淋巴或外淋巴等张：取决于作为抗凋亡剂或促凋亡剂组合物的目标的耳蜗部分。等张组合物通过添加张力剂提供。适合的张力剂包括(但不限于)任何医药学上可接受的糖、盐或任何其组合或混合物，诸如但不限于右旋糖和氯化钠。在其它实施例中，张度剂的存在量为约100mOsm/kg到约500mOsm/kg。在一些实施例中，张度剂的存在量为约200mOsm/kg到约400mOsm/kg，约280mOsm/kg到约320mOsm/kg。如本文所述，张力剂的量将取决于医药组合物的目标结构。
适用的张力组合物还包括使组合物的重量渗透摩尔浓度在外淋巴或内淋巴可接受的范围内所需的量的一种或一种以上盐。所述盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；适合的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些实施例中，本文公开的耳可接受的凝胶组合物替代地或另外含有防腐剂以防止微生物生长。用于本文所述的粘度增强的组合物的适合耳可接受的防腐剂包括(但不限于)苯甲酸、硼酸、对羟基苯甲酸盐、醇、季铵化合物、稳定的二氧化氯、汞剂(诸如硝酸苯汞和硫柳汞)、上述物质的混合物等。
在另一实施例中，仅举例来说，在本文呈示的耳可接受的组合物内，防腐剂是抗微生物剂。在一个实施例中，组合物包括防腐剂，仅举例来说，对羟基苯甲酸甲酯、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、氯丁醇、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、苯基乙醇等。在另一实施例中，对羟基苯甲酸甲酯的浓度为约0.05％至约1.0％，约0.1％至约0.2％。在另一实施例中，凝胶通过混合水、对羟基苯甲酸甲酯、羟乙基纤维素和柠檬酸钠来制备。在另一实施例中，凝胶通过混合水、对羟基苯甲酸甲酯、羟乙基纤维素和乙酸钠来制备。在另一实施例中，混合物通过在120℃高压灭菌处理约20分钟来灭菌，且在与适量本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂混合之前，测试pH值、对羟基苯甲酸甲酯浓度和粘度。
药物传递媒剂中所用的适合的耳可接受的水溶性防腐剂包括亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、氯丁醇、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、丁基化羟基甲苯(BHT)、苯基乙醇等。这些试剂的存在量一般为约0.001重量％至约5重量％，且存在量优选为约0.01重量％至约2重量％。在一些实施例中，本文所述的耳相容性组合物不含防腐剂。
圆窗膜渗透增强剂
在另一实施例中，组合物另外包含一种或一种以上圆窗膜渗透增强剂。穿过圆窗膜的渗透通过存在圆窗膜渗透增强剂来增强。圆窗膜渗透增强剂是有利于将共投予的物质传输穿过圆窗膜的化学实体。圆窗膜渗透增强剂根据化学结构分组。诸如月桂基硫酸钠、月桂酸钠、聚氧乙烯-20-十六烷基醚、月桂醇-9、十二烷基磺酸钠、磺基丁二酸钠二辛酯、聚氧乙烯-9-月桂基醚(PLE)、
Figure BPA00001294499700881
80、壬基苯氧基聚乙烯(NP-POE)、聚山梨醇酯等离子型与非离子型表面活性剂可用作圆窗膜渗透增强剂。胆汁盐(诸如甘胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺双氢褐霉素钠(sodium taurodihydrofusidate)、糖双氢褐霉素钠等)、脂肪酸和衍生物(诸如油酸、羊脂酸、甘油单酯和甘油二酯、月桂酸、酰基胆碱、羊脂酸、酰基肉碱、癸酸钠等)、螯合剂(诸如EDTA、柠檬酸、水杨酸盐等)、亚砜(诸如二甲亚砜(DMSO)、十二烷基甲基亚砜等)和醇(诸如乙醇、异丙醇、甘油、丙二醇等)也可用作圆窗膜渗透增强剂。
在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含烷基糖苷的表面活性剂，其中烷基糖苷是十四烷基-β-D-麦芽糖苷。在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含烷基糖苷的表面活性剂，其中烷基糖苷是十二烷基-麦芽糖苷。在某些情况下，渗透增强剂是透明质酸酶(hyaluronidase)。在某些情况下，透明质酸酶是人类或牛透明质酸酶。在一些情况下，透明质酸酶是人类透明质酸酶(例如人类精子中可见的透明质酸酶、PH20(哈罗齐姆公司(Halozyme))、
Figure BPA00001294499700891
(巴克斯特国际有限公司(Baxter International，Inc.))。在一些情况下，透明质酸酶是牛透明质酸酶(例如牛睾丸透明质酸酶、
Figure BPA00001294499700892
(安发斯达制药公司(Amphastar Pharmaceuticals))、
Figure BPA00001294499700893
(普瑞姆制药公司(PrimaPharm，Inc))。在一些情况下，透明质酸酶是羊透明质酸酶，
Figure BPA00001294499700894
(ISTA制药公司(ISTA Pharmaceuticals))。在某些情况下，本文所述的透明质酸酶是重组透明质酸酶。在一些情况下，本文所述的透明质酸酶是人类化重组透明质酸酶。在一些情况下，本文所述的透明质酸酶是聚乙二醇化透明质酸酶(例如PEGPH20(哈罗齐姆公司(Halozyme)))。另外，涵盖美国专利第7,151,191号、第6,221,367号和第5,714,167号(其揭示内容以引用的方式并入本文中)描述的肽样渗透增强剂作为另一实施例。这些渗透增强剂是氨基酸和肽衍生物且能够通过被动跨细胞扩散实现药物吸收而不影响膜或细胞间紧密连接的完整性。
圆窗膜可渗透脂质体
还可采用脂质体或脂质粒子来囊封抗凋亡剂或促凋亡剂组合物或组合物。缓和分散于水性介质中的磷脂形成多层微脂粒，其中截留水性介质的区域将各脂质层隔开。对这些多层微脂粒进行超声波处理或湍流搅拌形成单层微脂粒，常称为脂质体，尺寸为约10-1000nm。这些脂质体具有许多作为抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药剂载剂的优点。其是生物惰性的，生物可降解的，无毒的且无抗原性。所形成的脂质体具有各种尺寸且具有不同组成和表面特性。另外，其能够截留多种试剂并在脂质体瓦解的部位释放所述试剂。
此处用于耳可接受的脂质体的适合磷脂为例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂、心磷脂、缩醛磷脂、磷脂酸和脑苷脂，尤其为可与本文的抗凋亡剂或促凋亡剂一起溶于无毒的医药学上可接受的有机溶剂中的磷脂。优选磷脂为例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油等和其混合物，尤其为卵磷脂，例如大豆卵磷脂。本发明组合物中所用的磷脂的量在约10％至约30％、优选约15％至约25％范围内，且尤其为约20％。
宜采用亲脂性添加剂选择性修饰脂质体的特征。仅举例来说，这些添加剂的实例包括硬脂胺、磷脂酸、生育酚、胆固醇、胆固醇琥珀酸单酯和羊毛脂提取物。所用的亲脂性添加剂的量在0.5％至8％、优选1.5％至4％的范围内，且尤其为约2％。一般来说，亲脂性添加剂的量与磷脂的量的比率在约1∶8至约1∶12范围内，且尤其为约1∶10。所述磷脂、亲脂性添加剂同抗凋亡剂或促凋亡剂和其它医药化合物与溶解所述成分的无毒的医药学上可接受的有机溶剂系统结合使用。所述溶剂系统不仅必须完全溶解抗凋亡剂或促凋亡剂，而且其必须允许组合物具有稳定的单个双层脂质体。溶剂系统包含约8％至约30％的量的异山梨醇二甲醚(dimethylisosorbide)和四甘醇(四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)，即四氢呋喃聚乙二醇醚(tetrahydrofurfuryl alcohol polyethylene glycolether))。在所述溶剂系统中，异山梨醇二甲醚的量与四甘醇的量的比率在约2∶1至约1∶3、尤其约1∶1至约1∶2.5的范围内，且优选为约1∶2。因此，最终组合物中四甘醇的量从5％到20％、尤其5％到15％不等，且优选为约10％。因此，最终组合物中异山梨醇二甲醚的量在3％至10％、尤其3％至7％范围内，且优选为约5％。
如下文使用的术语“有机组分”是指包含所述磷脂、亲脂性添加剂和有机溶剂的混合物。抗凋亡剂或促凋亡剂可溶解于有机组分中，或其它方式以维持药剂的完全活性。最终组合物中抗凋亡剂或促凋亡剂的量可在0.1％至5.0％范围内。另外，可向有机组分中添加诸如抗氧化剂等其它成分。实例包括生育酚、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸油酸酯等。
或者，关于抗凋亡剂或促凋亡剂或适度耐热的其它医药如下制备脂质体组合物：(a)在容器中将磷脂和有机溶剂系统加热到约60-80℃，溶解所述活性成分，然后添加任何其它调配剂，且搅拌混合物直到完全溶解；(b)在第二容器中将水溶液加热到90-95℃且在其中溶解防腐剂，冷却混合物，然后添加剩余辅助调配剂和剩余水，且搅拌混合物直到完全溶解；由此制得水性组分；(c)将有机相直接转移到水性组分中，同时用高效混合设备(例如高剪切混合器)均质化所述组合，和(d)在进一步均质化时，向所得混合物中添加粘度增强剂。水性组分任选地放置在配备有均质机的适合容器中，且通过在注入有机组分期间制造湍流来实现均质化。可采用对混合物施加高剪切力的任何混合构件或均质机。一般来说，可采用能够从约1,500rpm加速到20,000rpm、尤其约3,000rpm加速到约6,000rpm的混合器。适合用于方法步骤(d)中的粘度增强剂为例如黄原胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或其混合物。粘度增强剂的量视其它成分的性质和浓度而定且一般在约0.5到2.0％范围内或为约1.5％。为防止脂质体组合物制备期间使用的材料降解，宜用诸如氮气或氩气等惰性气体冲洗所有溶液且在惰性气氛下执行所有步骤。通过上述方法制备的脂质体通常含有大多数结合于脂质双层中的活性成分，且不需要分离脂质体与未囊封材料。
在其它实施例中，耳可接受的组合物(包括凝胶组合物和粘度增强的组合物)另外包括赋形剂、其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、盐、增溶剂、消泡剂、抗氧化剂、分散剂、润湿剂、表面活性剂或其组合。
用于本文所述的耳可接受的组合物的适合载剂包括(但不限于)与目标耳部结构的生理环境相容的任何医药学上可接受的溶剂。在其它实施例中，基质是医药学上可接受的表面活性剂与溶剂的组合。
在一些实施例中，其它赋形剂包括硬脂酰反丁烯二酸钠、二乙醇胺十六烷基硫酸酯、异硬脂酸酯、聚乙氧基化蓖麻油、壬苯醇醚10(nonoxyl 10)、辛苯聚醇9、月桂基硫酸钠、脱水山梨醇酯(脱水山梨醇单月桂酸酯、脱水山梨醇单油酸酯、脱水山梨醇单棕榈酸酯、脱水山梨醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇倍半油酸酯、脱水山梨醇三油酸酯、脱水山梨醇三硬脂酸酯、脱水山梨醇月桂酸酯、脱水山梨醇油酸酯、脱水山梨醇棕榈酸酯、脱水山梨醇硬脂酸酯、脱水山梨醇二油酸酯、脱水山梨醇倍半异硬脂酸酯、脱水山梨醇倍半硬脂酸酯、脱水山梨醇三异硬脂酸酯)、卵磷脂其医药学上可接受的盐或其组合或混合物。
在其它实施例中，载剂是聚山梨醇酯。聚山梨醇酯是脱水山梨醇酯的非离子型表面活性剂。适用于本发明的聚山梨醇酯包括(但不限于)聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80(吐温80)和其任何组合或混合物。在其它实施例中，利用聚山梨醇酯80作为医药学上可接受的载剂。
在一个实施例中，用于制备医药传递媒剂的基于甘油的水可溶性耳可接受的粘度增强组合物包含含有至少约0.1％水可溶性甘油化合物或更多的至少一种抗凋亡剂或促凋亡剂。在一些实施例中，抗凋亡剂或促凋亡剂的百分比在总医药组合物的重量或体积的约1％与约95％之间、约5％与约80％之间、约10％与约60％之间或更大百分比间变化。在一些实施例中，各治疗上适用的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物中化合物的量经制备以使化合物的任何既定单位剂量内将获得适合的剂量。本文涵盖诸如溶解度、生物利用率、生物半衰期、投药途径、产品贮存期以及其它药理学考虑因素等因素。
必要时，耳可接受的医药凝胶除缓冲剂以外还含有共溶剂、防腐剂、共溶剂、离子强度和重量渗透摩尔浓度调节剂和其它赋形剂。适合的耳可接受的水溶性缓冲剂是碱金属或碱土金属碳酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、柠檬酸盐、硼酸盐、乙酸盐、丁二酸盐等，诸如磷酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠、乙酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠和缓血酸胺(TRIS)。这些试剂的存在量足以将系统的pH值维持在7.4±0.2且优选为7.4。因而，缓冲剂以总组合物的重量计多达5％。
使用共溶剂来增强抗凋亡剂或促凋亡剂的溶解性，然而，一些抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药化合物不可溶。通常借助于适合的悬浮或粘度增强剂将其悬浮于聚合物媒剂中。
此外，一些医药赋形剂、稀释剂或载剂可能具有耳毒性。举例来说，氯化苯甲烃铵，一种常见防腐剂，具有耳毒性，因此如果引入前庭或耳蜗结构中，那么可能有害。在调配控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂组合物时，建议避免或组合适当的赋形剂、稀释剂或载剂以从组合物中减少或消除可能的耳毒性组分或减少所述赋形剂、稀释剂或载剂的量。控制释放抗凋亡剂或促凋亡剂组合物任选包括耳保护剂，诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素、或铁螯合剂，以抵消可因使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂造成的可能的耳毒性作用。
以下是治疗上可接受的耳部组合物的实例：
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或者，本文公开的组合物除至少一种活性剂和/或赋形剂以外还涵盖耳保护剂，包括(但不限于)诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素或铁螯合剂等药剂，以抵消可因使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂造成的可能的耳毒性作用。
治疗模式
给药方法和时程
传递到内耳的药物已经由经口、静脉内或肌肉内途径全身性投予。然而，针对内耳局部性病理学的全身性投药增加全身性毒性和不良副作用的可能性，且产生药物的非富有成效的分布，在这一分布中，血清中可见高含量的药物而相应地内耳中可见较低含量。
鼓室内注射治疗剂是将治疗剂注射到鼓膜后方的中耳和/或内耳中的技术。在一个实施例中，本文所述的组合物经由经鼓室注射直接投予到圆窗膜上。在另一实施例中，本文所述的耳可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物经由通向内耳的非经鼓室途径投予到圆窗膜上。在其它实施例中，本文所述的组合物经由通向圆窗膜的外科途径投予到圆窗膜上，包含修改蜗窗嵴。
在一个实施例中，传递系统是能够刺穿鼓膜并直接到达圆窗膜或内耳的蜗窗嵴的注射器和针装置。在一些实施例中，注射器上的针比18号针宽。在另一实施例中，针号为18号到31号。在另一实施例中，针号为25号到30号。取决于抗凋亡剂或促凋亡剂组合物或组合物的稠度或粘度，注射器或皮下注射针的针号可相应变化。在另一实施例中，针的内径可通过减小针(通常称为薄壁或超薄壁针)的壁厚来增加以减小针堵塞的可能性，同时维持适当的针型号。
在另一实施例中，针是用于即时传递凝胶组合物的皮下注射针。皮下注射针可为单次使用针或一次性针。在一些实施例中，注射器可用于传递如本文公开的医药学上可接受的基于凝胶的含抗凋亡剂或促凋亡剂组合物，其中注射器具有压配合型(press-fit)(Luer)或旋紧型(twist-on)(Luer-lock)接头。在一个实施例中，注射器是皮下注射器。在另一实施例中，注射器由塑料或玻璃制成。在又一实施例中，皮下注射器是单次使用性注射器。在另一实施例中，玻璃注射器能够进行灭菌。在又一实施例中，灭菌利用高压灭菌器进行。在另一实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中凝胶组合物在使用前储存于其中。在其它实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中如本文公开的基于凝胶的医药学上可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物在使用前储存于其中，其允许便利地与适合的医药学上可接受的缓冲液混合。在其它实施例中，注射器可含有其它赋形剂、稳定剂、悬浮剂、稀释剂或其组合以稳定或以其它方式稳定地储存其中所含的抗凋亡剂或促凋亡剂或其它医药化合物。
在一些实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中主体被隔室化，各隔室能够储存耳可接受的抗凋亡剂或促凋亡剂凝胶组合物的至少一种组分。在另一实施例中，具有隔室化主体的注射器允许在注射到中耳或内耳中之前混合各组分。在其它实施例中，传递系统包含多个注射器，多个注射器的各注射器含有凝胶组合物的至少一种组分以便各组分在注射之前预先混合或在注射之后混合。在另一实施例中，本文公开的注射器包含至少一个储积器，其中至少一个储积器包含抗凋亡剂或促凋亡剂或医药学上可接受的缓冲液或粘度增强剂(诸如胶凝剂)或其组合。任选采用呈最简单形式的市售注射装置进行鼓室内注射，如具有注射筒、含针的针组合件、含柱塞杆的柱塞和固定凸缘的即用型塑料注射器。
在一些实施例中，传递装置是设计用于将治疗剂投予中耳和/或内耳的装置。仅举例来说，佳乐医药有限公司(GYRUS Medical Gmbh)提供观测圆窗龛(round window niche)和传递药物至圆窗龛的微耳镜(micro-otoscope)；阿伦伯格(Arenberg)已在美国专利第5,421,818号、第5,474,529号和第5,476,446号中描述传递流体至内耳结构的医学治疗装置，关于所述公开内容，各专利以引用的方式并入本文中。美国专利申请案第08/874,208号(关于所述公开内容，以引用的方式并入本文中)描述植入流体转移导管以传递治疗剂至内耳的外科方法。美国专利申请公开案2007/0167918(关于所述公开内容，以引用的方式并入本文中)另外描述用于鼓室内流体取样和药剂施用的组合型耳用抽吸器和药物分配器。
本文所述的组合物和其投药模式也适用于对内耳隔室进行直接滴注或灌注的方法。因此，本文所述的组合物适用于外科程序，作为非限制性实例，包括耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、内淋巴球囊切开术等。
含有本文所述的抗凋亡剂或促凋亡剂化合物的耳可接受的组合物或组合物可投予用于预防性和/或治疗性处理。在治疗性应用中，向已罹患本文所公开的病症的患者投予足以治愈或至少部分阻止疾病、病症或病状的症状的量的抗凋亡剂或促凋亡剂组合物。对此用途有效的量将取决于疾病、病症或病状的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态和对药物的反应以及治疗医师的判断。
在患者的病状未改善的情况下，基于医生的判断，可长期投予抗凋亡剂或促凋亡剂化合物投药，即长时间投予，包括患者的整个生命持续时间，以改善或以其它方式控制或限制患者的疾病或病状的症状。
在患者状态改善的情况下，基于医生的判断，可连续给予抗凋亡剂或促凋亡剂化合物投药；或者，所投予的药物剂量可暂时减少或暂时暂停某一段时间(即“药物假期”)。药物假期的长度从2天到1年不等，仅举例来说，包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天和365天。药物假期期间，剂量减少可为10％-100％，仅举例来说，包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％和100％。
一旦患者的耳部病状得到改善，必要时即投予维持性抗凋亡剂或促凋亡剂剂量。接着，任选根据症状减少投药的剂量或频率或两者至保持疾病、病症或病状改善的水平。在某些实施例中，在症状出现任何复发之后，患者需要长期的间歇疗法。
抗凋亡剂或促凋亡剂的对应于这一量的量将视以下因素而变化：诸如特定化合物、疾病病状和其严重程度、病例相关的特定境况，包括例如所投予的具体抗凋亡剂或促凋亡剂、投药途径、所治疗的病状、所治疗的目标区域和所治疗的个体或宿主。然而，一般来说，用于成年人类治疗的剂量通常会在每次投药0.02-50mg范围内，优选为每次投药1-15mg。所要的剂量以单次剂量或同时(或在短时期内)或以适当间隔投予的分次剂量提供。
在一些实施例中，最初投药是特定抗凋亡剂或促凋亡剂，而后续投药是一不同组合物或抗凋亡剂或促凋亡剂。
外源性材料植入物
在一些实施例中，本文所述的医药调配物、组合物和装置与植入外源性材料(例如医学装置或多个细胞(例如干细胞))组合使用(例如植入、短期使用、长期使用或去除)。如本文所使用，术语“外源性材料”包括内耳或中耳医学装置(例如听力防护装置、听力改善装置、短电极、微假体或活塞样假体)；针；药物传递装置；和细胞(例如干细胞)。在一些情况下，植入外源性材料结合听力损失的患者使用。在一些情况下，出生时即存在听力损失。在一些情况下，听力损失与出生后发展或进展的引起骨再生、神经损伤、耳蜗结构管腔闭合(obliteration of cochlear structures)或其组合的病状(例如美尼尔氏病)相关。
在一些情况下，外源性材料是多个细胞。在一些情况下，外源性材料是多个干细胞。
在一些情况下，外源性材料是电子装置。在一些实施例中，电子装置具有放置在耳朵后面的外部部分和通过手术放置在皮肤内以帮助提供给深度耳聋或严重耳背者声音感觉的第二部分。仅举例来说，所述医学装置植入物绕过耳朵受损部分且直接刺激听觉神经。在一些情况下，耳蜗植入物用于单侧耳聋中。在一些情况下，耳蜗植入物用于双耳耳聋中。
在一些实施例中，投予本文所述的活性剂与植入外源性材料(例如医学装置植入物或干细胞移植物)的组合可延迟或防止由在耳朵中安装外部装置和/或多个细胞(例如干细胞)引起的对耳结构的损害，例如刺激、细胞死亡骨再生和/或神经元进一步退化。在一些实施例中，投予本文所述的组合物或装置与植入物组合可使得听力损失与单独植入物相比更有效地恢复。
在一些实施例中，投予本文所述的活性剂可减小由允许成功植入的主要状况引起的对耳结构的损害。在一些实施例中，投予本文所述的活性剂结合外科手术和/或植入外源性材料可减小或防止负面副作用(例如细胞死亡)。
在一些实施例中，投予本文所述的活性剂结合植入外源性材料具有营养作用(即，促进细胞健康生长和使植入物或移植物区域中的组织愈合)。在一些实施例中，营养作用为耳部外科手术期间或鼓室内注射程序期间所想要。在一些实施例中，营养作用为安装医学装置之后或细胞(例如干细胞)移植之后所想要。在一些所述实施例中，本文所述的组合物或装置经由直接耳蜗注射、经由耳蜗切开术或经由沉积于圆窗上来投予
在一些实施例中，投予本文所述的活性剂可减轻与耳部外科手术或植入外源性材料(例如医学装置或多个细胞(例如干细胞))相关的炎症和/或感染。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的调配物可减轻或消除外科手术后和/或植入后并发症(例如炎症、毛细胞损害、神经元退化、骨再生等)。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的调配物可缩短外科手术后或植入后恢复时间。
一方面，本文所述的调配物和其投药模式适用于直接灌注内耳隔室的方法。因此，本文所述的调配物适用于与外科手术组合，所述外科手术包括(但不限于)耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。在一些实施例中，在耳部外科手术之前、耳部外科手术期间、耳部外科手术之后或其组合，给内耳隔室灌注本文所述的调配物。在一些所述实施例中，本文所述的调配物实质上不含延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)。在一些所述实施例中，本文所述的调配物含有以调配物重量计少于5％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，本文所述的调配物含有以调配物重量计少于2％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，本文所述的调配物含有以调配物重量计少于1％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，用于灌注外科手术区域的本文所述的组合物实质上不含胶凝组分。
控制释放组合物或装置的药物动力学
在一个实施例中，本文公开的组合物或装置另外提供活性剂从组合物或装置中的立即释放，或在1分钟内、或在5分钟内、或在10分钟内、或在15分钟内、或在30分钟内、或在60分钟内、或在90分钟内释放。在其它实施例中，治疗有效量的活性剂从组合物或装置中立即、或在1分钟内、或在5分钟内、或在10分钟内、或在15分钟内、或在30分钟内、或在60分钟内、或在90分钟内释放。在某些实施例中，组合物或装置包含提供活性剂的立即释放的耳医药学上可接受的凝胶组合物或装置。组合物或装置的其它实施例还可包括增强组合物或装置的粘度的试剂。
在其它或另外的实施例中，组合物或装置提供活性剂的延长释放组合物或装置。在某些实施例中，活性剂从组合物或装置中扩散的持续时间超过5分钟、或15分钟、或30分钟、或1小时、或4小时、或6小时、或12小时、或18小时、或1天、或2天、或3天、或4天、或5天、或6天、或7天、或10天、或12天、或14天、或18天、或21天、或25天、或30天、或45天、或2个月、或3个月、或4个月、或5个月、或6个月、或9个月、或1年。在其它实施例中，治疗有效量的活性剂从组合物或装置中释放的持续时间超过5分钟、或15分钟、或30分钟、或1小时、或4小时、或6小时、或12小时、或18小时、或1天、或2天、或3天、或4天、或5天、或6天、或7天、或10天、或12天、或14天、或18天、或21天、或25天、或30天、或45天、或2个月、或3个月、或4个月、或5个月、或6个月、或9个月、或1年。
在其它实施例中，组合物或装置提供活性剂的立即释放与延长释放组合物或装置。在又其它实施例中，组合物或装置含有0.25∶1比率、或0.5∶1比率、或1∶1比率、或1∶2比率、或1∶3、或1∶4比率、或1∶5比率、或1∶7比率、或1∶10比率、或1∶15比率、或1∶20比率的立即释放与延长释放组合物或装置。在一些实施例中，组合物或装置提供第一活性剂的立即释放和第二活性剂或其它治疗剂的延长释放。在又其它实施例中，组合物或装置提供活性剂和至少一种活性剂的立即释放和延长释放组合物或装置。在一些实施例中，组合物或装置分别提供0.25∶1比率、或0.5∶1比率、或1∶1比率、或1∶2比率、或1∶3、或1∶4比率、或1∶5比率、或1∶7比率、或1∶10比率、或1∶15比率、或1∶20比率的第一活性剂和第二活性剂的立即释放与延长释放组合物或装置。
在一具体实施例中，组合物或装置在疾病部位提供治疗有效量的活性剂，基本上无全身性暴露。在另一实施例中，组合物或装置在疾病部位提供治疗有效量的活性剂，基本上检测不到全身性暴露。在其它实施例中，组合物或装置在疾病部位提供治疗有效量的活性剂，极少检测到或不可检测到全身性暴露。
立即释放、延迟释放和/或延长释放耳相容性组合物或装置的组合可与其它医药剂以及本文公开的赋形剂、稀释剂、稳定剂、张力剂和其它组分组合。因而，取决于所用的活性剂、所要的稠度或粘度、或所选的传递模式，本文公开的实施例的替代方面相应地与立即释放、延迟释放和/或延长释放实施例组合。
在某些实施例中，通过将组合物或装置注射于测试动物(包括例如豚鼠或栗鼠)的圆窗膜上或附近来测定本文所述的耳相容性组合物或装置的药物动力学。在确定的时期(例如，在1周时期内，6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天和7天用于测试组合物或装置的药物动力学)，对测试动物实施安乐死且测试5mL外淋巴流体样品。取出内耳且测试活性剂的存在。需要时，测量其它器官中活性剂的含量。另外，通过从测试动物抽取血液样品来测量活性剂的全身性含量。为确定组合物或装置是否阻碍听力，任选对测试动物的听力进行测试。
或者，提供内耳(从测试动物中取出)并且测量活性剂的迁移。作为又一替代，提供圆窗膜的活体外模型，并且测量活性剂的迁移。
如本文所述，包含微米尺寸化活性剂的组合物或装置与包含非微米尺寸化活性剂的组合物或装置相比提供一段更长时间内的延长释放。在一些情况下，微米尺寸化活性剂经由缓慢降解提供稳定的活性剂供给(例如，+/-20％)，且用作活性剂的储库；所述储库作用增加活性剂在耳朵中的滞留时间。在特定实施例中，选择适当粒径的活性剂(例如微米尺寸化活性剂)与组合物或装置中胶凝剂的量组合提供允许活性剂在数小时、数天、数周或数月时间内释放的可调延长释放特征。
在一些实施例中，本文所述的组合物或装置的粘度经设计以提供适合的从耳相容性凝胶中释放的速率。在一些实施例中，增稠剂(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)的浓度提供可调的平均溶解时间(MDT)。MDT与活性剂从本文所述的组合物或装置中的释放速率成反比。在实验上，任选地将释放的活性剂拟合成考斯梅尔-佩帕斯等式(Korsmeyer-Peppas equation)
Q Q &alpha; = kt n + b
其中Q是时间t时释放的活性剂的量，Qα是活性剂的总释放量，k是n次的释放常数，n是与溶解机制相关的无量纲数且b是轴截距，表征最初爆发的释放机制，其中n＝1表征侵蚀控制机制。平均溶解时间(MDT)是不同时段释放之前留在基质中的药物分子的和除以分子总数，且任选地如下计算：
MDT = nk - 1 / n n + 1
举例来说，组合物或装置的平均溶解时间(MDT)与胶凝剂(例如泊洛沙姆)的浓度之间的线性关系指示活性剂因聚合物凝胶(例如泊洛沙姆)腐蚀而非经由扩散释放。在另一实例中，非线性关系指示活性剂经由扩散和/或聚合物凝胶降解的组合释放。在另一实例中，组合物或装置的凝胶排除时程越快(活性剂释放越快)指示平均溶解时间(MDT)越短。测试组合物或装置中胶凝组分和/或活性剂的浓度以确定MDT的适合参数。在一些实施例中，还测试注射体积以确定临床前和临床研究的适合参数。活性剂的凝胶强度和浓度影响活性剂从组合物或装置中的释放动力学。在低泊洛沙姆浓度下，消除速率加快(MDT较短)。组合物或装置中活性剂浓度的增加延长活性剂在耳朵中的滞留时间和/或MDT。
在一些实施例中，泊洛沙姆从本文所述的组合物或装置中的MDT为至少6小时。在一些实施例中，泊洛沙姆从本文所述的组合物或装置中的MDT为至少10小时。
在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约48小时。在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约96小时。在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约1周。在一些实施例中，本文所述的组合物或装置的MDT为约1周到约6周。
在某些实施例中，本文所述的控制释放耳部组合物或装置与不为控制释放耳部组合物或装置的组合物或装置相比增加活性剂的暴露且使耳部流体(例如内淋巴和/或外淋巴)的曲线下面积(AUC)增加约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。在某些实施例中，本文所述的控制释放耳部组合物或装置与不为控制释放耳部组合物或装置的组合物或装置相比可增加活性剂的暴露时间且使耳部流体(例如内淋巴和/或外淋巴)的Cmax减小约40％、约30％、约20％或约10％。在某些实施例中，本文所述的控制释放耳部组合物或装置与不为控制释放耳部组合物或装置的组合物或装置相比改变(例如减小)Cmax与Cmin的比率。在某些实施例中，本文所述的控制释放耳部组合物或装置与不为控制释放耳部组合物或装置的组合物或装置相比可增加活性剂的暴露且使活性剂浓度高于Cmin的时间长度增加约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。在某些情况下，本文所述的控制释放组合物或装置延迟达到Cmax的时间。在某些情况下，药物的控制稳定释放可延长药物浓度将保持高于Cmin的时间。在一些实施例中，本文所述的组合物或装置可延长药物在内耳中的滞留时间且提供稳定药物暴露曲线。在一些情况下，组合物或装置中活性剂的浓度增加贯穿清除过程且允许达到更快速且更稳定的稳态。
在某些情况下，一旦药物的药物暴露(例如内淋巴或外淋巴中的浓度)达到稳态，内淋巴或外淋巴中药物的浓度即保持在治疗剂量或治疗剂量左右持续一段较长时间(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周、3周、6周、2个月)。在一些实施例中，从本文所述的控制释放组合物或装置中释放的活性剂的稳态浓度为从不为控制释放组合物或装置的组合物或装置中释放的活性剂的稳态浓度的约20到约50倍。
活性剂从本文公开的组合物或装置中的释放任选地可调成想要的释放特征。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置是实质上不含胶凝组分的溶液。在所述情况下，组合物或装置提供活性剂的大体立即释放。在一些所述实施例中，组合物或装置适用于灌注耳部结构，例如在外科手术期间。
在一些实施例中，本文公开的组合物或装置是实质上不含胶凝组分且包含微米尺寸化活性剂的溶液。在一些所述实施例中，组合物或装置的活性剂在约2天到约4天内立即释放。
在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约1天到约3天的时间内释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约1天到约5天的时间内释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约2天到约7天的时间内释放。
在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)与微米尺寸化活性剂组合且提供长时间持续释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含(a)约14-17％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和(b)微米尺寸化活性剂；且在约1周到约3周的时间内长时间持续释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含(a)约16％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和(b)微米尺寸化活性剂；且在约3周的时间内长时间持续释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含(a)约18-21％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和(b)微米尺寸化活性剂；且在约3周到约6周的时间内长时间持续释放。在一些实施例中，本文公开的组合物或装置包含(a)约20％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和(b)微米尺寸化活性剂；且在约6周的时间内长时间持续释放。在一些实施例中，组合物或装置中胶凝剂的量和活性剂的粒径可调到获得想要的活性剂从组合物或装置中的释放曲线。
在特定实施例中，包含微米尺寸化活性剂的组合物或装置与包含非微米尺寸化活性剂的组合物或装置相比提供一段更长时间内的延长释放。在特定实施例中，选择适当粒径的活性剂(例如微米尺寸化活性剂)与组合物或装置中胶凝剂的量组合提供允许活性剂在数小时、数天、数周或数月时间内释放的可调延长释放特征。
试剂盒/制品
本案还提供预防、治疗或改善哺乳动物的疾病或病症的症状的试剂盒。所述试剂盒一般将包含一种或一种以上本文公开的抗凋亡剂或促凋亡剂控制释放组合物或装置和所述试剂盒的使用说明书。本案还涵盖一种或一种以上抗凋亡剂或促凋亡剂控制释放组合物的用途，其用于制造用于治疗、缓解、减轻或改善患有、怀疑患有内耳病症或处于发展内耳病症风险之中的哺乳动物(诸如人类)的疾病、功能异常或病症的症状的药剂。
在一些实施例中，试剂盒包括经划分以容纳一个或一个以上诸如小瓶、管等容器的载具、包装或容器，诸如小瓶、管等容器各包括本文所述的方法中使用的一个独立的元件。适合的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在其它实施例中，容器由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。
本文提供的制品含有包装材料。本文还提供用于包装医药产品的包装材料。参看例如美国专利第5,323,907号、第5,052,558号和第5,033,252号。医药包装材料的实例包括(但不限于)泡罩包装、瓶子、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子和任何适于所选组合物和预定投药模式和治疗的包装材料。预期本文提供的多种抗凋亡剂或促凋亡剂组合物作为用于可通过将抗凋亡剂或促凋亡剂控制释放投予至内耳中而受益的任何疾病、病症或病状的多种治疗。
在一些实施例中，从商业和使用者使用本文所述的组合物的观点看，希望试剂盒包括一个或一个以上额外容器，各具有一种或一种以上各种材料(诸如任选呈浓缩形式的试剂，和/或装置)。所述材料的非限制性实例包括(但不限于)缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器；列出内含物和/或使用说明书的载具、包装、容器、小瓶和/或管标签和带使用说明书的包装插页。任选地包括一组说明书。在另一实施例中，标签可位于容器上或附随容器。在又一实施例中，当形成标签的字母、数字或其它字符粘贴、模制或蚀刻于容器本身时，标签可位于容器上；当标签存在于还容纳容器的贮器或载具内部时，其可附随容器，例如包装插页形式。在其它实施例中，标签可用于指明内含物将用于特定的治疗应用。在又一实施例中，标签还指明内含物的用法说明，诸如在本文所述的方法中的用法说明。
在某些实施例中，医药组合物存在于含有一个或一个以上含本文提供的化合物的单位剂型的包装或分配器装置中。在另一实施例中，包装例如含有金属或塑料箔片，诸如泡罩包装。在另一实施例中，包装或分配器装置可随附投药说明书。在又一实施例中，包装或分配器还附带容器附随的呈医药制造、使用或销售的政府管理机构规定的形式的告示，所述告示反映机构批准所述药物形式用于人类或兽医投药。在另一实施例中，所述告示例如是美国食品与药物管理局关于处方药物所批准的标签或批准的产品插页。在又一实施例中，还制备含有本文提供的化合物调配于相容性医药载剂中的组合物，放置在适当的容器中，且加以治疗指示病状的标签。
实例
实例1：制备热可逆性凝胶XIAP调配物
  成分   量(每克调配物所含的毫克数)
  XIAP   21.0
  对羟基苯甲酸甲酯   2.1
  羟丙基甲基纤维素   21.0
  泊洛沙姆407   378
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   1677.9
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))悬浮于TRIS HCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％XIAP的凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌该组合物直到观察到溶解。添加XIAP溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例2：制备粘膜粘附性热可逆性凝胶AM-111调配物
  成分   量(每克调配物所含的毫克数)
  AM-111   25.5
  对羟基苯甲酸甲酯   2.55
  羟丙基甲基纤维素   25.5
  卡波普934P   5.1
  泊洛沙姆407   459
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   2032.35
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))和卡波普934P悬浮于TRISHCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％AM-111的粘膜粘附凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407、卡波普934P和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407和卡波普934P完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌该组合物直到观察到溶解。添加AM-111溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例3：制备粘膜粘附性热可逆性凝胶SB-203580调配物
  成分   量(每克调配物所含的毫克数)
  SB-203580   25.5
  对羟基苯甲酸甲酯   2.55
  羟丙基甲基纤维素   25.5
  卡波普934P   5.1
  泊洛沙姆407   459
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   2032.35
SB-203580以固体形式提供。将其于水中再水化成最终摩尔浓度为10mM。
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))和卡波普934P悬浮于TRISHCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％SB-203580的粘膜粘附凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407、卡波普934P和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407和卡波普934P完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌该组合物直到观察到溶解。添加SB-203580溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例4：制备基于水凝胶的亮肽素调配物
首先通过轻轻混合亮肽素与水直到亮肽素溶解来制备膏状调配物。然后，通过在高达60℃的温度下混合石蜡油、三羟基硬脂酸酯和鲸蜡基二甲聚硅氧烷共聚醇来制备油基质。冷却油基质到室温，且添加亮肽素溶液。混合两相直到形成均一的单相水凝胶。
实例5：制备凝胶米诺环素调配物
  成分   量(每克调配物所含的毫克数)
  米诺环素   16
  壳聚糖   8
  甘油磷酸钠   32
  水   336
滴定5ml乙酸溶液直到pH值为约4.0。添加壳聚糖以使pH值为约5.5。然后将米诺环素溶解于壳聚糖溶液中。通过过滤对这一溶液进行灭菌。另外制备5ml甘油磷酸钠水溶液且灭菌。混合这两种溶液，且在37℃下在2小时内形成所要的凝胶。
实例6：施用粘度增强SB-203580调配物于圆窗膜上
制备实例3的调配物，且装入5ml硅化玻璃注射器中，连接于15号路厄旋转锁(luerlock)一次性针。将SB-203580局部施用于鼓膜，且产生小切口以允许观测中耳空腔。将针尖导入圆窗膜上方的位置，且将SB-203580调配物直接施用于圆窗膜上。
实例7：pH信对高压灭菌处理的含17％泊洛沙姆407NF/2％耳用药剂的PBS缓冲 液的降解产物的影响
通过用79.3g无菌过滤的去离子水溶解351.4mg氯化钠(飞世尔科技(FisherScientific))、302.1mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、122.1mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和适量耳用药剂制备17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的储备溶液。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入17.05g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SPECTRUM CHEMICALS))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。测量这一溶液的pH值。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的PBS，pH 5.3。取上述溶液的等分试样(约30mL)，且通过添加1M HCl调节pH值至5.3。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的PBS，pH 8.0。取上述储备溶液的等分试样(约30mL)，且通过添加1M NaOH调节pH值至8.0。
通过用无菌过滤的去离子水溶解805.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、606mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、247mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))，然后补足到200g来制备PBS缓冲液(pH 7.3)。
通过将适量耳用药剂溶解于PBS缓冲液中且用PBS缓冲液补足到10g来制备耳用药剂于PBS(pH 7.3)中的2％溶液。
将1mL样品个别地置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌15分钟。高压灭菌之后，冷却样品至室温，然后置于冰箱中。趁冷混合小瓶，使样品均质化。
观察外观(例如褪色和/或沉淀)并记录。使用配备有Luna C18(2)3μm，
Figure BPA00001294499701051
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。
一般来说，组合物不应具有超过2％的任何个别杂质(例如耳用药剂的降解产物)且更优选不超过1％。另外，组合物不应在储藏期间沉淀或在制造和储藏之后变色。
使用上述程序测试根据实例6中的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定高压灭菌处理步骤期间pH值对降解的影响。
实例8：高压灭菌处理对含17％泊洛沙姆407NF/2％耳用药剂的PBS的释放曲线 和 粘度的影响
评估实例6样品的等分试样(高压灭菌处理和未高压灭菌处理)的释放曲线和粘度测量以评估热灭菌对凝胶性质的影响。
在37℃下在膜嵌套(snapwell)(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL置于储积器中且使用优莱博(Labline)轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。相对于外部校准标准曲线，使用硫氰酸钴方法在624nm下利用UV分析样品的泊洛沙姆浓度。简单地说，混合20μL样品与1980μL 15mM硫氰酸钴溶液，且使用Evolution 160UV/Vis分光光度计(赛默科技(Thermo Scientific))在625nm下测量吸光度。
将释放的耳用药剂拟合成考斯梅尔-佩帕斯等式(Korsmeyer-Peppas equation)
Q Q &alpha; = kt n + b
其中Q是时间t时释放的耳用药剂的量，Qα是耳用药剂的总释放量，k是n次的释放常数，n是与溶解机制相关的无量纲数且b是轴截距，表征最初爆发的释放机制，其中n＝1表征侵蚀控制机制。平均溶解时间(MDT)是不同时段释放之前留在基质中的药物分子的和除以分子总数，且如下计算：
MDT = nk - 1 / n n + 1
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计(Brookfield viscometer)RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线的拐点。
使用上述程序测试根据实例6中的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定T胶凝。
实例9：添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的组合物在热 灭菌(高压灭菌处理)之后的降解产物和粘度的影响
溶液A：通过用78.4无菌过滤的去离子水溶解178.35mg氯化钠(飞世尔科技(FisherScientific))、300.5mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、126.6mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))制备于PBS缓冲液中包含羧甲基纤维素钠(CMC)的溶液(pH 7.0)，然后向缓冲溶液中洒入1g Blanose 7M65CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时的粘度为5450cP)且加热以帮助溶解，然后冷却溶液。
通过在冰冷水浴中冷却8.1g溶液A，然后添加适量耳用药剂，接着混合，来制备于PBS缓冲液中包含17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的溶液(pH 7.0)。在混合下，向冷溶液中洒入1.74g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。进一步混合混合物直到所有泊洛沙姆完全溶解。
将2mL上述样品置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温，然后置于冰箱中。趁小瓶尚冷时混合，使样品均质化。
在高压灭菌处理之后，观察到沉淀或褪色。使用配备有Luna C18(2)3μm，
Figure BPA00001294499701062
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行非高压灭菌处理样品的溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL置于储积器中且使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。相对于外部校准标准曲线，在245nm下利用UV分析样品的耳用药剂浓度。
使用上述程序测试包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的组合物在热灭菌(高压灭菌处理)之后降解产物和粘度的影响。
实例10：缓冲液类型对含有泊洛沙姆407NF的组合物在热灭菌(高压灭菌处理) 之后的降解产物的影响
通过用无菌过滤的去离子水溶解377.8mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和602.9mg缓血酸胺(西格玛化学公司(Sigma Chemical Co.))，然后补足到100g来制备TRIS缓冲液，用1M HCl调节pH值至7.4。
含有25％泊洛沙姆407溶液的TRIS缓冲液的储备溶液：
称量45g TRIS缓冲液，在冰冷浴中冷却，然后在混合下，向缓冲液中洒入15g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。进一步混合混合物直到所有泊洛沙姆完全溶解。
用上述储备溶液制备一系列组合物。所有实验使用适量耳用药剂(或其盐或前药)和/或呈微米尺寸化/涂布/脂质体粒子形式的耳用药剂(或其盐或前药)。
含有25％泊洛沙姆407溶液的PBS缓冲液的储备溶液(pH 7.3)：
用140.4g无菌过滤的去离子水溶解704mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、601.2mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、242.7mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))来制备PBS缓冲液。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入50g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SPECTRUMCHEMICALS))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
用上述储备溶液制备一系列组合物。所有实验使用适量耳用药剂(或其盐或前药)和/或呈微米尺寸化/涂布/脂质体粒子形式的耳用药剂(或其盐或前药)。
表2和3列出使用上述程序制备的样品。向各样品中添加适量耳用药剂以在样品中提供最终浓度为2％的耳用药剂。
表2.制备含TRIS缓冲液的样品
样品 pH值 25％储备溶液(g) TRIS缓冲液(g)
20％P407/2耳用药剂/TRIS 7.45 8.01 1.82
18％P407/2耳用药剂/TRIS 7.45 7.22 2.61
16％P407/2耳用药剂/TRIS 7.45 6.47 3.42
18％P4072耳用药剂/TRIS 7.4 7.18 2.64
4％耳用药剂/TRIS 7.5 - 9.7
2％耳用药剂/TRIS 7.43 - 5
1％耳用药剂/TRJS 7.35 - 5
2％耳用药剂/TRIS(悬浮液) 7.4 - 4.9
表3.制备含PBS缓冲液(pH 7.3)的样品
  样品   25％于PBS中的储备溶液(g)   PBS缓冲液(g)
  20％P407/2耳用药剂/PBS   8.03   1.82
  18％P407/2耳用药剂/PBS   7.1   2.63
  16％P407/2耳用药剂/PBS   6.45   3.44
  18％P407/2耳用药剂/PBS   -   2.63
  2％耳用药剂/PBS   -   4.9
将1mL样品个别地置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。
使用配备有Luna C18(2)3μm，
Figure BPA00001294499701081
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。比较组合物在TRIS与PBS缓冲液中的稳定性。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。仅分析高压灭菌处理之后不显示变化的组合物。
使用上述程序测试包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的组合物在热灭菌(高压灭菌处理)之后降解产物和粘度的影响。比较含有微米尺寸化耳用药剂的组合物与非微米尺寸化耳用药剂组合物对应物的稳定性。
实例11：脉冲释放型耳用组合物
通过利用本文所述的程序，使用安定(Diazepam)制备脉冲释放型耳用药剂组合物。通过用79.3g无菌过滤的去离子水溶解351.4mg氯化钠(飞世尔科技(FisherScientific))、302.1mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、122.1mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))及适量耳用药剂制备17％泊洛沙姆溶液。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入17.05g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SPECTRUM CHEMICALS))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。测量该溶液的pH。借助于β-环糊精，将20％传递剂量的安定溶解于17％泊洛沙姆溶液中。然后向混合物中添加其余80％的耳用药剂，且使用本文所述的任何程序制备最终组合物。
根据本文所述的程序和实例制备包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的脉冲释放型组合物，且使用本文所述的程序测试以测定脉冲释放曲线。
实例12：制备含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/78Ppm伊文思蓝的PBS
通过用1mL PBS缓冲液溶解5.9mg伊文思蓝(西格玛化学公司(Sigma ChemicalCo))制备伊文思蓝(5.9mg/mL)于PBS缓冲液中的储备溶液。通过用140.4g无菌过滤的去离子水溶解704mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、601.2mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、242.7mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(FisherScientific))制备PBS缓冲液。
这一研究中使用含有25％泊洛沙姆407的PBS缓冲液溶液(实例9)的储备溶液。向25％泊洛沙姆407溶液储备溶液中添加适量耳用药剂以制备包含2％耳用药剂的组合物(表4)。
表4制备含伊文思蓝的泊洛沙姆407样品
样品ID 含25％P407的PBS(g) PBS缓冲液(g) 伊文思蓝溶液(μL)
17％P407/2耳用药剂/EB 13.6 6 265
20％P407/2耳用药剂/EB 16.019 3.62 265
25％P407/2耳用药剂/EB 19.63 - 265
根据实例12中的程序制备包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物，且经由0.22μm PVDF注射器过滤器(密理博公司(Millipore corporation))无菌过滤并高压灭菌处理。
通过本文所述的程序和组合物在接触之后胶凝的能力给予豚鼠的中耳上述组合物，且在给药之后和给药之后24小时辨识凝胶的位置。
实例13：有和无显色染料的泊洛沙姆407组合物的最终灭菌
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液，pH 7.3：用158.1g无菌过滤的去离子水溶解709mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、742mg脱水磷酸二钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific))、251.1mg单水合磷酸二氢钠USP(飞世尔科技(FisherScientific))和适量耳用药剂。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入34.13g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum chemicals))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/59ppm伊文思蓝的磷酸盐缓冲液：取2mL 17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液且添加2mL 5.9mg/mL伊文思蓝(西格玛-阿尔德里奇化学公司(Sigma-Aldrich chemical Co))的PBS缓冲液溶液。
25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液：用70.5g无菌过滤的去离子水溶解330.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、334.5mg去水磷酸二钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific))、125.9mg单水合磷酸二氢钠USP(飞世尔科技(FisherScientific))和适量耳用药剂。
在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入25.1g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum chemicals))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
含25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/59ppm伊文思蓝的磷酸盐缓冲液：取2mL25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液且添加2mL 5.9mg/mL伊文思蓝(西格玛-阿尔德里奇化学公司(Sigma-Aldrich chemical Co))的PBS缓冲液溶液。
将2mL组合物置于2mL玻璃小瓶(惠顿(Wheaton)血清玻璃小瓶)中，且用13mm丁基苯乙烯(金布尔(kimble)塞子)密封，且用13mm铝封封口。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温，然后冷冻放置。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。记录在高压灭菌处理之后的样品褪色或沉淀。
使用配备有Luna C18(2)3μm，
Figure BPA00001294499701101
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200依次使用30-95甲醇∶乙酸盐缓冲液(pH 4)梯度(1-6min)和等梯度(11分钟)进行HPLC分析，总操作时间为22分钟。通过取30μL样品且用0.97mL水溶解来稀释样品。主峰记录在下表中。使用此方法，在高压灭菌处理之前纯度始终大于99％。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
使用上述程序测试根据实例11中的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定组合物的稳定性。
实例14：释放曲线的活体外比较
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的6.5mm直径的聚碳酸酯膜)中进行溶解，将0.2mL本文所述的凝胶组合物放置于膜嵌套中并使之硬化，然后将0.5mL缓冲液置于储积器中并使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。利用245nm的紫外线相对于外部校准标准曲线分析样品的耳用药剂浓度。在624nm下使用硫氰酸钴方法分析泊洛尼克浓度。决定随％P407变化的平均溶解时间(MDT)的相对等级次序。组合物平均溶解时间(MDT)与P407浓度之间的线性关系指示耳用药剂因聚合物凝胶(泊洛沙姆)腐蚀而释放，而非经由扩散释放。非线性关系指示耳用药剂经由扩散和/或聚合物凝胶降解的组合释放。
或者，使用李新宇(Li Xin-Yu)论文[药学学报(Acta Pharmaceutica Sinica)2008，43(2)：208-203]描述的方法分析样品，且决定随％P407而变的平均溶解时间(MDT)的等级次序。
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定耳用药剂的释放曲线。
实例15：胶凝温度的活体外比较
出于操纵胶凝温度的目的，评估泊洛沙姆188和耳用药剂对泊洛沙姆407组合物的胶凝温度和粘度的影响。
使用25％泊洛沙姆407的PBS缓冲液储备溶液(实例9)和PBS溶液(实例11)。使用来自巴斯夫(BASF)的泊洛沙姆188NF。向表5中所述的溶液中添加适量耳用药剂以提供耳用药剂2％的组合物。
表5制备含泊洛沙姆407/泊洛沙姆188的样品
样品 25％P407储备溶液(g) 泊洛沙姆188(mg) PBS缓冲液(g)
16％P407/10％P188 3.207 501 1.3036
17％P407/10％P188 3.4089 500 1.1056
18％P407/10％P188 3.6156 502 0.9072
19％P407/10％P188 3.8183 500 0.7050
20％P407/10％P 188 4.008 501 0.5032
20％P407/5％P 188 4.01 256 0.770
使用本文所述的程序测量上述组合物的平均溶解时间、粘度和胶凝温度。
将所获得的数据拟合成等式，且可利用这一等式估算F127/F68混合物(17-20％F127和0-10％F68)的胶凝温度。
T胶凝＝-1.8(％F127)+1.3(％F68)+53
将所获得的数据拟合成等式，且可使用实例13和15中获得的结果基于F127/F68混合物(17-20％F127和0-10％F68)的胶凝温度利用这一等式估算平均溶解时间(hr)。
MDT＝-0.2(T胶凝)+8
通过向表5中所述的溶液中添加适量耳用药剂来制备包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物。使用上述程序确定组合物胶凝温度。
实例16：测定无菌过滤的温度范围
测量低温下的粘度以帮助指导需要进行无菌过滤以降低堵塞可能性的温度范围。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从10℃上升到25℃)的具有在1、5和10rpm(剪切速率为7.5、37.5和75s-1)下旋转的CPE-40轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。
随耳用药剂浓度递增测定17％泊洛尼克P407的T胶凝。由下式估算17％泊洛尼克组合物的T胶凝的增加：
ΔT胶凝＝0.93[耳用药剂％]
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定无菌过滤的温度范围。记录添加增加量的耳用药剂对组合物的T胶凝和表观粘度的影响。
实例17：决定制造条件
表6.制造/过滤条件下可能的组合物的粘度
Figure BPA00001294499701131
a37.5s-1剪切速率下测得的粘度
制造8升批料的17％P407安慰剂以评估制造/过滤条件。通过将6.4升去离子水置于3加仑SS压力容器中制造安慰剂，且在冰箱中冷却过夜。第二天早晨，取出水槽(水温5℃，室温18℃)，且添加48g氯化钠、29.6g脱水磷酸二钠和10g单水合磷酸二氢钠，且用顶置式混合器(IKA RW20，1720rpm)溶解。半小时后，一旦缓冲液溶解(溶液温度8℃，室温18℃)，在15分钟间隔内向缓冲溶液中缓慢洒入1.36kg泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(spectrum chemicals))(溶液温度12℃，室温18℃)，然后速度增至2430rpm。再混合1小时之后，将混合速率降至1062rpm(完全溶解)。
室温维持在低于25℃以保持溶液温度低于19℃。制造开始后溶液温度维持在低于19℃长达3小时，无需冷冻/冷却容器。
在溶液在20psi和14℃下，评估表面积为17.3cm2的三个不同赛多斯克(Sartoscale)(赛多利斯斯泰迪公司(Sartorius Stedim))过滤器
1)Sartopore 2，0.2μm 5445307HS-FF(PES)，流速：16mL/min
2)Sartobran P，0.2μm 5235307HS-FF(纤维素酯)，流速：12mL/min
3)Sartopore 2XL1，0.2μm 5445307IS-FF(PES)，流速：15mL/min
使用Sartopore 2过滤器5441307H4-SS，使用表面积为0.015m2的0.45，0.2μmSartopore 2150无菌胶囊(赛多利斯斯泰迪公司(Sartorius Stedim))在溶液温度下在16psi压力下进行过滤。在16psi下流速经测量为约100mL/min，当温度维持在6.5-14℃范围内时，流速无变化。溶液的递减压力和递增温度因溶液粘度增加而引起流速减小。在这一过程期间监测溶液的褪色。
表7.17％泊洛沙姆407安慰剂在6.5-14℃的溶液温度范围内使用Sartopore 20.2μm过滤器在16psi压力下预测得到的过滤时间
过滤器 尺寸(m2) 估算的流速(mL/min) 过滤8升的时间(估算值)
Sartopore 2，4号 0.015 100mL/min 80min
Sartopore 2，7号 0.05 330mL/min 24min
Sartopore 2，8号 0.1 670mL/min 12min
在过滤评估之前，检查粘度、T胶凝和UV/Vis吸收。泊洛尼克UV/Vis光谱由Evolution 160UV/Vis(赛默科技(Thermo Scientific))获得。250-300nm范围内的峰归因于原料中存在BHT稳定剂(泊洛沙姆)。表8列出上述溶液在过滤之前与之后的物理化学性质。
表8.17％泊洛沙姆407安慰剂溶液在过滤之前与之后的物理化学性质
  样品   T胶凝(℃)   19℃下的粘度a(cP)   274nm下的吸光度
  过滤之前   22   100   0.3181
  过滤之后   22   100   0.3081
a37.5s-1剪切速率下测得的粘度
上述工艺适用于制造17％P407组合物，且包括室内条件的温度分析。优选地，最大19℃的温度降低制造期间冷却容器的成本。在一些情况下，使用夹套容器进一步控制溶液温度以减少制造方面的问题。
实例18：高压灭菌处理的微米尺寸化样品中耳用药剂的活体外释放
含17％泊洛沙姆407/1.5％耳用药剂的TRIS缓冲液：将250.8mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和302.4mg缓血酸胺(西格玛化学公司(Sigma Chemical Co.))溶解于39.3g无菌过滤的去离子水中，用1M HCl调节pH值至7.4。使用4.9g上述溶液，且将适量微米尺寸化耳用药剂充分悬浮并分散。将2mL组合物转移到2mL玻璃小瓶(惠顿(Wheaton)血清玻璃小瓶)中，且用13mm丁基苯乙烯(金布尔(kimble)塞子)密封，且用13mm铝封封口。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。记录在高压灭菌处理之后的样品褪色或沉淀。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的6.5mm直径的聚碳酸酯膜)中进行溶解，将0.2mL凝胶放置于膜嵌套中并使之硬化，然后将0.5mL PBS缓冲液置于储积器中并使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品[抽取0.1mL且用含2％PEG-40氢化蓖麻油(巴斯夫(BASF))的温PBS缓冲液置换以增强耳用药剂溶解性]。相对于外部校准标准曲线，由245nm的紫外线分析样品的耳用药剂浓度。与本文公开的其它组合物比较释放速率。计算各样品的MDT时间。
通过使用艾本德(eppendorf)离心机5424在15,000rpm下离心样品10分钟之后测量上清液中耳用药剂的浓度来评估17％泊洛沙姆系统中耳用药剂的溶解。相对于外部校准标准曲线，由245nm的紫外线测量上清液中的耳用药剂浓度。
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定耳用药剂从各组合物中的释放速率。
实例19：含有羧甲基纤维素钠的组合物的释放速率或MDT和粘度
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/1％CMC(赫尔克里斯(Hercules)Blanose 7M)：通过将205.6mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、372.1mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、106.2mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(FisherScientific))溶解于78.1g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.0)。向缓冲溶液中洒入1g Blanose 7M CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时粘度为533cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.08g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。通过向9.8g上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到所有耳用药剂完全溶解来制备于PBS缓冲液中包含17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的组合物。
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/0.5％CMC(Blanose 7M65)：通过将257mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、375mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(FisherScientific))、108mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))溶解于78.7g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.2)。向缓冲溶液中洒入0.502g Blanose 7M65CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时粘度为5450cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.06g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。通过向9.8g上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到耳用药剂完全溶解来制备17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的PBS缓冲液溶液。
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/0.5％CMC(Blanose 7H9)：通过将256.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、374mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(FisherScientific))、107mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))溶解于78.6g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.3)，然后向缓冲溶液中洒入0.502g Blanose 7H9CMC(赫尔克里斯(Hercules)，1％时粘度为5600cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.03g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SpectrumChemicals))。通过向9.8上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到耳用药剂完全溶解来制备17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的PBS缓冲液溶液。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从10℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.6s-1)下旋转的CPE-40轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL PBS缓冲液置于储积器中且使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品，抽取0.1mL且用温PBS缓冲液置换。相对于外部校准标准曲线，在245nm下利用UV分析样品的耳用药剂浓度。计算上述各组合物的MDT时间。
使用上述程序测试根据上述程序制备的包含SB-203580、PD 169316、SB 202190、RWY 67657、AM-111、微米尺寸化SB-203580或微米尺寸化AM-111的组合物以确定含有羧甲基纤维素钠的组合物的释放速率和/或平均溶解时间与粘度之间的关系。记录平均溶解时间(MDT)与表观粘度(在胶凝温度以下2℃时测量)之间的任何关系。
实例20：施用粘度增强抗凋亡剂或促凋亡剂组合物于圆窗膜上
制备实例2的组合物，且装入5ml硅化玻璃注射器中，连接于15号路厄旋转锁一次性针。利多卡因(Lidocaine)局部施用于鼓膜，且产生小切口以允许观测中耳空腔。将针尖导入圆窗膜上方的位置，且将组合物直接施用于圆窗膜上。
实例21：在豚鼠中鼓室内注射凋亡调节组合物的活体内试验
给21只豚鼠的群组(查尔斯河(Charles River)，雌性，重200-300g)鼓室内注射50μL含有0至6％耳用药剂的本文所述的不同P407-DSP组合物。测定各组合物的凝胶排除时程。组合物的凝胶排除时程越快指示平均溶解时间(MDT)越短。因此，测试注射体积和组合物中抗凋亡剂或促凋亡剂的浓度以决定临床前和临床研究的最佳参数。
实例22：活体内延长释放动力学
给21只豚鼠的群组(查尔斯河(Charles River)，雌性，重200-300g)鼓室内注射50μL缓冲为280mOsm/kg且含有以组合物重量计1.5％至4.5％的抗凋亡剂或促凋亡剂的17％泊洛尼克F-127组合物。第1天对动物进行给药。基于对外淋巴的分析确定组合物的释放曲线。
实例23：在声致损伤小鼠模型中对维拉帕米进行评估
诱发耳毒性
使用12只重20至24g的哈伦司帕拉格-道利(Harlan Sprague-Dawley)小鼠。测量4-20mHz的基线听觉脑干反应(ABR)。使小鼠麻醉并暴露于响度为120dB的6kHz连续纯音中30分钟。
处理
声致损伤后，投予对照组(n＝10)盐水。声致损伤后，投予实验组(n＝10)维拉帕米(每公斤体重2.0mg)。
电生理实验
最初和在实验程序后1周测量每只动物每只耳朵对滴答声刺激的听觉脑干反应阈值(ABR)的听力阈值。将动物放置在位于加热板上的单壁隔声间(工业声学公司(IndustrialAcoustics Co)，美国纽约布朗克斯(Bronx，NY，USA))中。将皮下电极(阿斯曲医药公司(Astro-Med，Inc.)格拉斯仪器分公司(Grass Instrument Division)，美国罗得岛州西沃威克(West Warwick，RI，USA))插在颅顶(有效电极)、乳突(参考)和后腿(接地)上。滴答声刺激(0.1毫秒)由计算机产生，且传递到装备有放置在外耳道中的耳镜的200欧姆的Beyer DT 48扬声器。由电池操作的前置放大器放大记录的ABR并数字化，且输入对刺激、记录和平均功能提供计算机控制的塔克-戴维斯技术(Tucker-DavisTechnologies)ABR记录系统(塔克-戴维斯技术(Tucker Davis Technology)，美国佛罗里达州盖恩斯维尔(Gainesville，FL，USA))中。向动物提供以5dB为步幅的幅度连续递降的刺激，且求取所记录下的刺激锁定活性的平均值(n＝512)并显示。阈值定义为无明显可检测反应与有明显可鉴别反应的记录之间的刺激水平。
实例24：在声致损伤小鼠模型中对AM-111进行评估
诱发耳毒性
使用12只重20至24g的哈伦司帕拉格-道利(Harlan Sprague-Dawley)小鼠。测量4-20mHz的基线听觉脑干反应(ABR)。使小鼠麻醉并暴露于响度为120dB的6kHz连续纯音中30分钟。
处理
声致损伤后，投予对照组(n＝10)盐水。声致损伤后，投予实验组(n＝10)AM-111(每公斤体重3.0mg)。
电生理实验
最初和在实验程序后1周测量每只动物每只耳朵对滴答声刺激的听觉脑干反应阈值(ABR)的听力阈值。将动物放置在位于加热板上的单壁隔声间(工业声学公司(IndustrialAcoustics Co)，美国纽约布朗克斯(Bronx，NY，USA))中。将皮下电极(阿斯曲医药公司(Astro-Med，Inc.)格拉斯仪器分公司(Grass Instrument Division)，美国罗得岛州西沃威克(West Warwick，RI，USA))插在颅顶(有效电极)、乳突(参考)和后腿(接地)上。滴答声刺激(0.1毫秒)由计算机产生，且传递到装备有放置在外耳道中的耳镜的200欧姆的Beyer DT 48扬声器。由电池操作的前置放大器放大所记录的ABR并数字化，且输入对刺激、记录和平均功能提供计算机控制的塔克-戴维斯技术(Tucker-DavisTechnologies)ABR记录系统(塔克-戴维斯技术(Tucker Davis Technology)，美国佛罗里达州盖恩斯维尔(Gainesville，FL，USA))中。向动物提供以5dB为步幅的幅度连续递降的刺激，且求取所记录下的刺激锁定活性的平均值(n＝512)并显示。阈值定义为无明显可检测反应与有明显可鉴别反应的记录之间的刺激水平。
实例25：施用粘度增强AM-111调配物于圆窗膜上
制备实例2的调配物，且装入5ml硅化玻璃注射器中，连接于15号路厄旋转锁一次性针。AM-111局部施用于鼓膜，且产生小切口以允许观测中耳空腔。将针尖导入圆窗膜上方的位置，且将AM-111调配物直接施用于圆窗膜上。
实例25：评估鼓室内投予AM-111对急性声致损伤的影响
研究目标
这一研究的主要目标是评估鼓室内(IT)AM-111治疗对急性声致损伤的安全性和功效。
主要结果测量
纯音听阈均值(Pure Tone Average，PTA)和词汇识别(Word Recognition)作为等加权终点；对于语音辨别率得分，将采用50个词汇的单音节系统；PTA或整个或部分频率的改良大于20dB，其中缺陷大于30dB，和/或WDS改良为20％或更高；除绝对改变外，还将测定对侧耳朵的恢复。
完全恢复-恢复到对侧语音辨别率得分的5％点内，或对侧PTA的5dB内。
研究设计
这将是比较急性声致损伤治疗中鼓室内AM-111与安慰剂的多中心双盲随机安慰剂对照平行组研究。约有140位个体将参加这一研究，且基于随机分配顺序，随机分配(1∶1)到2个治疗组中的一个。
a.组I中的个体将接受IT AM-111(以热可逆性凝胶传递装置1次注射2mg/mLAM-111；每周投予一次，持续1个月)
b.组II中的个体将接受安慰剂IT注射(以热可逆性凝胶传递装置注射1次；每周投予一次，持续1个月)
听力评估
听力评估包含：
a.纯音听阈均值(500Hz、1kHz和2kHz；4kHz、6kHz和8kHz)。
i.然后将确定两个PTA值：低频值(500Hz-2kHz)和高频值(4-8kHz)。
b.镫骨反射
c.鼓室压测量和音调衰减
d.语音识别阈值
治疗开始之前，将测量各个体的听力丧失(分配到研究中之前测量两次，且随机分配之前测量一次)。在治疗开始后1、2、4和8周、4和6个月进行听力评估
主要纳入标准
·年龄在18岁与75岁之间的男性或女性患者
·1个月内发展的听力丧失为至少30dB
排除标准
·在之前30天内出于任何原因先前经历口服类固醇治疗超过10天
·在之前14天内先前口服类固醇治疗急性声致损伤5天或5天以上
·任一耳朵中有听力变动病史
虽然本文已显示和描述本发明的优选实施例，但这些实施例仅以举例的方式提供。任选采用本文所述的实施例的各种替代方案实施本发明。希望随附权利要求书界定本发明的范畴，因此涵盖所述权利要求书范围内的方法和结构以及其等效物。

Claims (19)

1.一种用于治疗特征在于多个耳部细胞凋亡的耳部疾病或病状的组合物或装置，其包含治疗有效量的具有实质上低降解产物的抗凋亡剂；且其中所述传递装置包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒抗凋亡剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克传递装置少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
2.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述组合物或装置提供介于约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
3.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述抗凋亡剂释放持续至少3天的时间。
4.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物是耳可接受的热可逆性凝胶。
5.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其另外包含染料。
6.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述抗凋亡剂呈中性分子、游离酸、游离碱、盐、前药或其组合形式。
7.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述抗凋亡剂是Akt、Akt激动剂、或其同源物或模拟物；Bre、Bre激动剂、或其同源物或模拟物；红细胞生成素、红细胞生成素激动剂、或其同源物或模拟物；fortilin、fortilin激动剂、或其同源物或模拟物；重组FNK蛋白(例如FNK-TAT融合蛋白)；胃内激素(ghrelin)、胃内激素激动剂、或其同源物或模拟物；IAP(凋亡蛋白质抑制剂)、IAP激动剂、或其同源物或模拟物；PI3激酶、PI3激酶激动剂、或其同源物或模拟物；长寿因子(sirtuin)、长寿因子激动剂、或其同源物或模拟物；MAPK/JNK信号传导级联抑制剂；Bcl-2家族成员抑制剂；Fas抑制剂；NF-kB抑制剂；P38抑制剂；Ca2+通道抑制剂；HO-1抑制剂；卡斯蛋白酶(caspase)抑制剂；钙蛋白酶抑制剂；p53；蛋白激酶Src家族抑制剂；三叶因子、三叶因子激动剂、或其同源物或模拟物；热休克蛋白、热休克蛋白激动剂、或其同源物或模拟物；载脂蛋白、载脂蛋白激动剂、或其同源物或模拟物；或其组合。
8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗凋亡剂是AM-111。
9.根据权利要求1所述的组合物或装置，其另外包含所述抗凋亡剂或其医药学上可接受的盐、前药或其组合作为立即释放剂。
10.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述抗凋亡剂包含多颗粒。
11.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述抗凋亡剂基本上呈微米尺寸化粒子形式。
12.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述组合物或装置的pH值介于约6.0与约7.6之间。
13.根据权利要求1所述的医药组合物或装置，其中所述耳部疾病或病状是兴奋性毒性、耳毒性、老年性耳聋或其组合。
14.一种用于治疗特征在于多个耳部细胞凋亡的耳部疾病或病状的方法，其包含投予有需要的个体包含治疗有效量的抗凋亡剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含所述抗凋亡剂的实质上低降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的抗凋亡剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒抗凋亡剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克传递装置少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗凋亡剂从所述组合物中释放持续至少3天的时间。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗凋亡剂基本上呈微米尺寸化粒子形式。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗凋亡剂抑制由谷氨酸盐活性诱导的神经元或耳部毛细胞的凋亡。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗凋亡剂抑制由以下诱导的神经元或耳部毛细胞的凋亡：氨基糖苷类抗生素、大环内酯类抗生素、糖肽类抗生素、水杨酸、烟碱、放线菌素(actinomycin)、博莱霉素(bleomycin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、长春新碱(vincristine)、袢利尿剂(loop diuretic)或其组合。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗凋亡剂抑制由以下诱导的耳部毛细胞、神经细胞、血管纹细胞的凋亡：DNA突变积聚、粒线体DNA突变积聚、暴露于喧闹的噪音、感染、流向耳朵的血流减少或其组合。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106455579A (zh) * 2014-04-23 2017-02-22 耳瑞思医学股份有限公司 用于治疗和预防耳鸣的方法和组合物
CN108319811A (zh) * 2018-01-15 2018-07-24 深港产学研基地 雷诺丁受体调控心肌细胞中Ca2+波的二维建模方法

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8604042B2 (en) * 2005-11-01 2013-12-10 Targegen, Inc. Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
US8133900B2 (en) * 2005-11-01 2012-03-13 Targegen, Inc. Use of bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
RU2597364C2 (ru) * 2005-11-01 2016-09-10 Таргеджен, Инк. Би-арил-мета-пиримидиновые ингибиторы киназ
EP2278999A4 (en) 2008-04-21 2015-04-22 Otonomy Inc EARLY TREATMENT FORMULATIONS FOR THE TREATMENT OF EARLY DISEASES AND DRESSES
EP2303227B1 (en) 2008-05-14 2021-10-06 Otonomy, Inc. Controlled release corticosteroid compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8846770B2 (en) 2008-06-18 2014-09-30 Otonomy, Inc. Controlled release aural pressure modulator compositions and methods for the treatment of OTIC disorders
WO2010011466A2 (en) 2008-06-27 2010-01-28 Otonomy, Inc. Controlled-release cns modulating compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8784870B2 (en) 2008-07-21 2014-07-22 Otonomy, Inc. Controlled release compositions for modulating free-radical induced damage and methods of use thereof
US8496957B2 (en) 2008-07-21 2013-07-30 Otonomy, Inc Controlled release auris sensory cell modulator compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8318817B2 (en) 2008-07-21 2012-11-27 Otonomy, Inc. Controlled release antimicrobial compositions and methods for the treatment of otic disorders
EP2344151A4 (en) 2008-10-22 2012-04-18 House Ear Inst THERAPEUTIC AND / OR PROPHYLACTIC TREATMENT OF INTERNAL EAR PATHOLOGIES BY MODULATION OF THE METABOTROPIC GLUTAMATE RECEPTOR
WO2012060847A1 (en) 2010-11-07 2012-05-10 Targegen, Inc. Compositions and methods for treating myelofibrosis
JP6012112B2 (ja) * 2011-02-18 2016-10-25 オトノミ—，インク． 薬物により誘発される耳毒性の予防又は回復
JP6189754B2 (ja) 2011-03-04 2017-08-30 イントレキソン コーポレーション タンパク質を条件的に発現するベクター
WO2012177927A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transgenic animals capable of being induced to delete senescent cells
JP6170047B2 (ja) 2011-08-31 2017-07-26 ユニバーシティ・オブ・ジョージア・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド アポトーシス−ターゲティングナノ粒子
AU2012352177A1 (en) 2011-12-13 2014-07-10 Buck Institute For Research On Aging Methods for improving medical therapies
EP2814496B1 (en) 2012-02-17 2018-04-11 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Nanoparticles for mitochondrial trafficking of agents
US20150064137A1 (en) 2012-04-17 2015-03-05 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Use of engineered viruses to specifically kill senescent cells
US9901080B2 (en) 2012-08-23 2018-02-27 Buck Institute For Research On Aging Transgenic mouse having a transgene that converts a prodrug into a cytotoxic compound in senescent cells
US9901081B2 (en) 2012-08-23 2018-02-27 Buck Institute For Research On Aging Transgenic mouse for determining the role of senescent cells in cancer
WO2014089124A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Cenexys, Inc. Immunogenic compositions for inducing an immune response for elimination of senescent cells
RU2528917C1 (ru) * 2013-07-29 2014-09-20 государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Фармакологическая композиция с антибактериальными свойствами для лечения наружных отитов
CA2921816A1 (en) 2013-08-27 2015-03-05 Otonomy, Inc. Treatment of pediatric otic disorders
HUE056551T2 (hu) * 2013-10-14 2022-02-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Az akamprozát alkalmazása az ERK 1-2 aktiváció modulálására az FXS és az ASD állati modelljeiben, valamint az FXS és ASD diagnózissal rendelkezõ egyéneken
KR102345084B1 (ko) 2013-11-08 2021-12-29 액티버스 파마 컴퍼니 리미티드 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제
CA2974651A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Children's Hospital Of Eastern Ontario Research Institute Inc. Smc combination therapy for the treatment of cancer
JP6688224B2 (ja) 2014-01-28 2020-04-28 バック インスティテュート フォー リサーチ オン エイジング Ｍｄｍ２を阻害する手段の投与による関節における変形性関節症の処置
WO2015116735A1 (en) 2014-01-28 2015-08-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and combinations for killing senescent cells and for treating senescence-associated diseases and disorders
US10328058B2 (en) 2014-01-28 2019-06-25 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating atherosclerosis by removing senescent foam cell macrophages from atherosclerotic plaques
US10398663B2 (en) 2014-03-14 2019-09-03 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Mitochondrial delivery of 3-bromopyruvate
KR101628707B1 (ko) * 2014-05-29 2016-06-10 한남대학교 산학협력단 난청 치료용 약물 전달 시스템 및 이의 제조방법
KR101717585B1 (ko) 2014-12-31 2017-03-20 중앙대학교 산학협력단 약물 방출 조절이 가능한 스캐폴드
ES2928593T3 (es) * 2015-01-19 2022-11-21 Univ Keio Agentes terapéuticos para el deterioro auditivo del oído interno
CN107847489B (zh) 2015-05-18 2021-09-17 森索睿翁公司 用于治疗听力损失的司琼类钙调神经磷酸酶抑制剂
WO2017079505A1 (en) * 2015-11-04 2017-05-11 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Rnase7 for treatment of bacterial infection
CA3015172A1 (en) 2016-02-18 2017-08-24 Privo Technologies, Inc. Two-stage microparticle-based therapeutic delivery system and method
DK3442537T3 (da) * 2016-04-14 2024-03-25 Sensorion (+)-azasetron til anvendelse i behandlingen af ørelidelser
US10085097B2 (en) * 2016-10-04 2018-09-25 Starkey Laboratories, Inc. Hearing assistance device incorporating system in package module
US20180179497A1 (en) * 2016-12-20 2018-06-28 Nikita Balashov Katz Artificial immune cell emulating selected properties of granulocytes utilizing Fenton-type reactions
WO2018151849A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Privo Technologies, Inc. Particle-based multi-layer therapeutic delivery device and method
US10478403B1 (en) 2017-05-03 2019-11-19 Privo Technologies, Inc. Intraoperative topically-applied non-implantable rapid release patch
US10561736B1 (en) 2019-01-09 2020-02-18 Spiral Therapeutics, Inc. Apoptosis inhibitor formulations for prevention of hearing loss
FR3095755A1 (fr) * 2019-05-10 2020-11-13 Balmes Transplantation Nouveaux médicaments cytoprotecteurs
CN114845721A (zh) * 2019-10-30 2022-08-02 奥德纳米有限公司 用于药物诱导的耳毒性的耳用制剂
WO2021127275A1 (en) * 2019-12-17 2021-06-24 Otonony, Inc. Gsk-3 modulator otic formulations
RU2747401C1 (ru) * 2020-06-22 2021-05-04 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный университет" Способ получения фармацевтических лекарственных форм на основе сополимеров метилметакрилата
US20220387340A1 (en) * 2021-06-01 2022-12-08 Privo Technologies, Inc. Enhanced Two-Stage Microparticle-Based Localized Therapeutic Delivery System
KR20230152605A (ko) * 2022-04-27 2023-11-03 주식회사 파이안바이오테크놀로지 미토콘드리아를 유효성분으로 포함하는 난청 또는 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US529251A (en) * 1894-11-13 Cabinet and index-file
US4016254A (en) * 1972-05-19 1977-04-05 Beecham Group Limited Pharmaceutical formulations
US4478822A (en) * 1983-05-16 1984-10-23 Merck & Co., Inc. Drug delivery system utilizing thermosetting gels
US5292516A (en) * 1990-05-01 1994-03-08 Mediventures, Inc. Body cavity drug delivery with thermoreversible gels containing polyoxyalkylene copolymers
CA2040460C (en) * 1990-05-01 1997-06-10 Tacey X. Viegas Drug delivery with thermoreversible gels
IT1251151B (it) * 1991-08-05 1995-05-04 Fidia Spa Materiale spugnoso essenzialmente costituito da acido ialuronico,o suoi derivati
US6531156B1 (en) * 1994-04-15 2003-03-11 Temple University Aqueous solven encapsulation method, apparatus and microcapsules
ES2353840T3 (es) * 1997-04-21 2011-03-07 California Institute Of Technology Recubrimientos tisulares poliméricos multifuncionales.
SE9704186D0 (sv) * 1997-11-14 1997-11-14 Astra Ab New composition of matter
US6177434B1 (en) * 1997-12-16 2001-01-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Prevention or reversal of sensorineural hearing loss (SNHL) through biologic mechanisms
US6649621B2 (en) * 1997-12-16 2003-11-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Prevention or reversal of sensorineural hearing loss (SNHL) through biologic mechanisms
EP1109563A4 (en) * 1998-08-04 2009-07-22 Madash Llp HEAT-SENSITIVE HYDROGELS WITH MODIFIED TERMINATION
US6818018B1 (en) * 1998-08-14 2004-11-16 Incept Llc In situ polymerizable hydrogels
US6740664B2 (en) * 1998-09-30 2004-05-25 Alcon, Inc. Methods for treating otic and ophthalmic infections
WO2000019978A2 (en) * 1998-10-05 2000-04-13 The Penn State Research Foundation Compositions and methods for enhancing receptor-mediated cellular internalization
US20040082509A1 (en) * 1999-10-12 2004-04-29 Christophe Bonny Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway
KR20010069066A (ko) * 2000-01-12 2001-07-23 이종원 저산소 농도하에서 생존이 가능하도록 하는 동물세포의배양방법
US7029694B2 (en) * 2000-04-26 2006-04-18 Watson Laboratories, Inc. Compositions and methods for transdermal oxybutynin therapy
US20060269602A1 (en) * 2001-04-13 2006-11-30 Dasch James R Method of modifying the release profile of sustained release compositions
US7001615B1 (en) * 2001-12-07 2006-02-21 Alcon, Inc. Sustained release ophthalmic, otic and nasal suspension
JP3776810B2 (ja) * 2002-01-25 2006-05-17 富士写真フイルム株式会社 感熱記録材料及び感熱記録方法
US20030229333A1 (en) * 2002-02-22 2003-12-11 Control Delivery Systems, Inc. Methods for treating otic disorders
WO2004039328A2 (en) * 2002-10-29 2004-05-13 Oregon Health & Science University Fludrocortisone treatment for hearing loss
US7220431B2 (en) * 2002-11-27 2007-05-22 Regents Of The University Of Minnesota Methods and compositions for applying pharmacologic agents to the ear
US7842791B2 (en) * 2002-12-19 2010-11-30 Nancy Jean Britten Dispersible pharmaceutical compositions
CA2531564C (en) * 2003-07-18 2016-01-19 Santarus, Inc. Pharmaceutical composition for inhibiting acid secretion
US8993599B2 (en) * 2003-07-18 2015-03-31 Santarus, Inc. Pharmaceutical formulations useful for inhibiting acid secretion and methods for making and using them
WO2005009287A2 (en) * 2003-07-21 2005-02-03 University Of Maryland, Baltimore Drug delivery to the inner ear and methods of using same
US20070292498A1 (en) * 2003-11-05 2007-12-20 Warren Hall Combinations of proton pump inhibitors, sleep aids, buffers and pain relievers
US7700086B2 (en) * 2003-11-06 2010-04-20 Pluromed, Inc. Internal clamp for surgical procedures
US20060063802A1 (en) * 2004-03-29 2006-03-23 Matthieu Guitton Methods for the treatment of tinnitus induced by cochlear excitotoxicity
US8268866B2 (en) * 2004-03-29 2012-09-18 Matthieu Guitton Methods for the treatment of tinnitus induced by cochlear excitotoxicity
BRPI0512569A (pt) * 2004-06-23 2008-03-25 Sirion Therapeutics Inc métodos para reduzir a formação de n-retinilideno-n-retiniletanolamina no olho de um mamìfero, para reduzir a formação de lipofuscina no olho de um mamìfero, para tratar degeneração macular relacionada com a idade na forma seca no olho de um mamìfero e para reduzir atrofia geográfica no olho de um humano
US20060046970A1 (en) * 2004-08-31 2006-03-02 Insite Vision Incorporated Topical otic compositions and methods of topical treatment of prevention of otic infections
US20080241925A1 (en) * 2004-09-02 2008-10-02 Angela Paz Judith Cruz Three-Dimensional Self Assembly in Suspension of Adherent Cells
MX2007005886A (es) * 2004-11-16 2008-01-21 Renaissance Herbs Inc Composiciones farmaceuticas y terapeuticas derivadas de la planta garcinia mangostana l.
CA2594963A1 (en) * 2005-01-24 2006-07-27 Neurosystec Corporation Apparatus and method for delivering therapeutic and/or other agents to the inner ear and to other tissues
EA017264B1 (ru) * 2005-09-28 2012-11-30 Аурис Медикаль Аг Применение композиции арилциклоалкиламида для получения лекарственного препарата для лечения нарушения внутреннего уха
US20070178051A1 (en) * 2006-01-27 2007-08-02 Elan Pharma International, Ltd. Sterilized nanoparticulate glucocorticosteroid formulations
EP1844653B1 (en) * 2006-03-30 2017-07-26 GAT Microencapsulation GmbH Novel agrochemical formulations containing microcapsules
US20080051319A1 (en) * 2006-08-22 2008-02-28 Children's Medical Center Corporation Inhibiting JNK Signaling Promotes CNS Axon Regeneration
WO2008049196A1 (en) * 2006-10-27 2008-05-02 Iomedix Development International Srl Composition for improving blood cholesterol levels
EP2303227B1 (en) * 2008-05-14 2021-10-06 Otonomy, Inc. Controlled release corticosteroid compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8822410B2 (en) * 2008-05-19 2014-09-02 Children's Medical Center Corporation Tympanic membrane permeating ear drops and uses thereof
US8648119B2 (en) * 2008-05-23 2014-02-11 Otonomy, Inc. Controlled release immunomodulator compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8846770B2 (en) * 2008-06-18 2014-09-30 Otonomy, Inc. Controlled release aural pressure modulator compositions and methods for the treatment of OTIC disorders
US8349353B2 (en) * 2008-06-27 2013-01-08 Otonomy, Inc. Controlled release cytotoxic agent compositions and methods for the treatment of otic disorders
WO2010011466A2 (en) * 2008-06-27 2010-01-28 Otonomy, Inc. Controlled-release cns modulating compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8399018B2 (en) * 2008-07-21 2013-03-19 Otonomy, Inc. Controlled release ion channel modulator compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8496957B2 (en) * 2008-07-21 2013-07-30 Otonomy, Inc Controlled release auris sensory cell modulator compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8318817B2 (en) * 2008-07-21 2012-11-27 Otonomy, Inc. Controlled release antimicrobial compositions and methods for the treatment of otic disorders
US8784870B2 (en) * 2008-07-21 2014-07-22 Otonomy, Inc. Controlled release compositions for modulating free-radical induced damage and methods of use thereof

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106455579A (zh) * 2014-04-23 2017-02-22 耳瑞思医学股份有限公司 用于治疗和预防耳鸣的方法和组合物
CN108319811A (zh) * 2018-01-15 2018-07-24 深港产学研基地 雷诺丁受体调控心肌细胞中Ca2+波的二维建模方法
CN108319811B (zh) * 2018-01-15 2021-06-11 深港产学研基地 雷诺丁受体调控心肌细胞中Ca2+波的二维建模方法

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