CN102112111A - 用于治疗耳部病症的控制释放耳感觉细胞调节剂组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本文揭示用耳感觉细胞调节剂组合物和调配物治疗耳部疾病或病状的组合物和方法，其中通过将所述组合物和调配物直接施用于目标耳结构上或经由灌注施用至目标耳结构中来将这些组合物和调配物局部投予罹患耳部疾病或病状的个体。

Description

用于治疗耳部病症的控制释放耳感觉细胞调节剂组合物和方法
交叉引用
本专利申请案主张以下的权利：2008年12月22日申请的美国临时申请案第61/140,033号、2009年3月13日申请的美国临时申请案第61/160,233号、2009年3月30日申请的美国临时申请案第61/164,812号、2009年4月30日申请的美国临时申请案第61/174,421号、2009年4月24日申请的英国专利申请案第0907070.7号、以及2009年7月16日申请的美国申请案第12/504,553号，所有专利以全文引用的方式并入本文中。
背景技术
脊椎动物具有一双耳朵，对称地位于头部的相对侧。耳朵用作检测声音的感觉器官与维持平衡和体位的器官。耳朵一般分成三个部分：外耳(outer ear)、中耳(aurismedia/middle ear)和内耳(auris interna/inner ear)。
发明内容
本文描述用于将至少一种耳感觉细胞调节剂控制释放或传递至耳朵的至少一个结构或区的组合物、调配物、制造方法、治疗方法、用途、试剂盒和传递装置。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳感觉细胞损伤剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳感觉细胞死亡剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳感觉细胞保护剂(例如促进耳感觉细胞存活)。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳感觉细胞生长/再生剂。本文公开用于治疗或改善由内耳毛损坏、发育迟缓、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的控制释放组合物。在一实施例中，控制释放组合物包含治疗有效量的至少一种耳神经元和/或毛细胞的调节剂(也称为“耳感觉细胞调节剂”)、耳可接受控制释放赋形剂和耳可接受媒剂。
在一些实施例中，耳朵的目标部分是中耳。在其它实施例中，耳朵的目标部分是内耳。在其它实施例中，耳朵的目标部分是中耳。在又其它实施例中，耳朵的目标部分是中耳与内耳。在一些实施例中，控制释放调配物另外包含用于将耳感觉细胞调节剂传递至中耳和/或内耳的快速或立即释放组分。所有调配物包含中耳和/或内耳可接受的赋形剂。
本文描述诱导中耳或内耳内选择性耳感觉细胞损伤和/或死亡的方法，所述方法包含投予本文所述的耳感觉细胞调节剂控制释放调配物。本文还描述诱导耳感觉细胞生长和/或逆转对耳感觉细胞(例如发育迟缓或功能失常耳感觉细胞)的损害和/或保护耳感觉细胞(例如发育迟缓或功能失常耳感觉细胞)以免进一步受损害的方法，所述方法包含投予本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物。
本文还公开用于治疗耳部病症的方法，所述方法包含投予耳感觉细胞调节剂控制释放调配物。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是毒物(例如庆大霉素(gentamicin))且诱导细胞死亡。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳保护剂(例如胺磷汀(amifostine))、抗氧化剂等。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂诱导新的耳感觉细胞的生长，例如表达Atoh1的腺病毒。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是减少或抑制耳感觉细胞死亡的药剂，例如谷氨酸受体调节剂。
在一些实施例中，谷氨酸受体调节剂是谷氨酸受体拮抗剂。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是NMDA受体拮抗剂。在一些实施例中，调节NMDA受体的药剂是NMDA受体拮抗剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是营养剂(例如促进健康细胞和/或组织生长的药剂)。在一些实施例中，营养剂是生长因子。在一些实施例中，生长因子是脑源性神经营养性因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、胶质细胞系源性神经营养性因子(GDNF)、神经营养蛋白-3、神经营养蛋白-4、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)等和/或其组合。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是具有保护作用的药剂，例如减少发炎和/或感染的免疫系统细胞。在一些实施例中，免疫系统细胞是巨噬细胞，小胶质细胞(microglia)和/或小胶质细胞样细胞。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是Na+通道阻断剂且减少或抑制耳感觉细胞损伤和/或死亡。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳保护剂，例如减少、延迟或逆转对耳感觉细胞的损伤的皮质类固醇。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是引起耳感觉细胞死亡的耳毒性剂或毒物。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是pRB调节剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是TH受体调节剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是表达BRN3的腺病毒。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是BRN3激动剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是BRN3拮抗剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是促进耳感觉细胞生长和/或再生的干细胞和/或耳感觉分化细胞。
在一些实施例中，组合物另外包含耳感觉细胞调节剂作为立即释放剂(其中立即释放耳感觉细胞调节剂是与控制释放剂相同的药剂)、另一耳感觉细胞调节剂、其它治疗剂或其组合。
在一些实施例中，组合物另外包含其它治疗剂。在一些实施例中，所述其它治疗剂是麻醉剂、局部作用麻醉剂、止痛剂、抗生素、止吐药、抗真菌剂、抗微生物剂、防腐剂、抗病毒剂、化疗剂、利尿剂、角质溶解剂、耳保护剂(例如类固醇)、免疫抑制剂，包含(但不限于)诸如钙调神经磷酸酶(calcineurin)抑制剂(环孢素(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus)、吡美莫司(pimecrolimus))、大环内酯(诸如雷帕霉素(rapamycin))、皮质类固醇等药剂，或其组合。在一些实施例中，所述其它治疗剂是立即释放剂。在一些实施例中，所述其它治疗剂是控制释放剂。
本文公开传递耳感觉细胞调节剂至耳朵的控制释放调配物。在一些实施例中，投予组合物以使组合物与蜗窗嵴、圆窗或鼓室接触。
本文所述的耳调配物和治疗方法具有许多克服现有技术中描述的调配物和治疗方法的先前未被认识到的局限性的优点。
无菌
内耳环境是隔离的环境。内淋巴和外淋巴是静态流体，且不与循环系统邻接接触。包括血液-内淋巴障壁和血液-外淋巴障壁的血液-迷路-障壁(BLB)由迷路空间(即，前庭和耳蜗空间)中的特有上皮细胞之间的紧密连接组成。BLB的存在限制活性剂(例如耳感觉细胞调节剂)向内耳的隔离微环境中的传递。耳毛细胞浸于内淋巴或外淋巴流体中，且钾离子的耳蜗再循环对毛细胞功能来说很重要。当内耳感染时，白血球和/或免疫球蛋白(例如应答微生物感染)流入内淋巴和/或外淋巴中，且内耳流体精确的离子组成被白血球和/或免疫球蛋白的流入扰乱。在某些情况下，内耳流体的离子组成的变化导致听力丧失、失去平衡和/或听觉结构骨化。在某些情况下，甚至痕量热原和/或微生物都会引发内耳隔离微环境中的感染和相关生理变化。
归因于内耳对感染的敏感性，耳调配物需要现有技术中迄今尚未认识到的无菌水平(例如低生物负载)。本文提供经制造具有低生物负载或按严格的无菌要求灭菌且适于投予中耳和/或内耳的耳调配物。在一些实施例中，本文所述的耳相容性组合物实质上不含热原和/或微生物。
与内耳环境的相容性
本文描述离子平衡与外淋巴和/或内淋巴相容且不引起耳蜗电位的任何变化的耳用调配物。在特定实施例中，本发明调配物的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度例如通过使用适当的盐浓度(例如钠盐浓度)或使用使调配物变得内淋巴相容和/或外淋巴相容(即，与内淋巴和/或外淋巴等张)的张度剂来调整。在一些情况下，本文所述的内淋巴相容和/或外淋巴相容调配物在投予之后对内耳环境的干扰最小且哺乳动物(例如人类)不适(例如眩晕)程度最低。另外，调配物包含生物可降解和/或可分散和/或换句话说对内耳环境来说无毒的聚合物。在一些实施例中，本文所述的调配物不含防腐剂且对听觉结构的干扰(例如pH值或容积渗透摩尔浓度的变化、刺激)最小。在一些实施例中，本文所述的调配物包含对耳部结构无刺激和/或无毒的抗氧化剂。
给药频率
耳调配物的现行护理标准需要经若干天(例如长达两周)多次投予数滴或数次注射(例如鼓室内注射)，包括每天接受多次注射的日程。在一些实施例中，本文所述的耳调配物是控制释放调配物且以与现行护理标准相比减少的给药频率投予。在某些情况下，当耳调配物经由鼓室内注射投予时，减少的投药频率缓和正进行中耳和/或内耳疾病、病症或病状治疗的个体的由多次鼓室内注射引起的不适。在某些情况下，减少的鼓室内注射投药频率使永久性损伤耳鼓(例如鼓膜穿孔)的风险降低。本文所述的调配物向内耳环境恒定、持续、延长、延迟或脉动速率释放活性剂，因此避免耳部病症治疗中药物暴露的任何可变性。
治疗指数
本文所述的耳调配物投予耳道中或耳朵前庭中。到达例如前庭和耳蜗器官将要穿过中耳，包括圆窗膜(round window membrane)、卵圆窗/镫骨足板、环状韧带和穿过听囊/颞骨。本文所述的调配物的耳部投药避免活性剂的与全身性投药相关的毒性(例如肝毒性、心脏毒性、胃肠副作用、肾毒性)。在一些情况下，耳朵局部投药允许活性剂在无全身性活性剂积聚的情况下到达目标器官(例如内耳)。在一些情况下，耳朵局部投药提供较高的活性剂治疗指数，换句话说，将具有给药限制性全身性毒性。
防止排入咽鼓管中
在一些情况下，液体调配物的缺点是倾向于滴入咽鼓管中且导致调配物快速从内耳中清除。在某些实施例中，本文提供包含在体温下胶凝且保持与目标听觉表面(例如圆窗)长时间接触的聚合物的耳调配物。在一些实施例中，调配物另外包含允许调配物粘附于耳部粘膜表面的粘膜粘附剂。在一些情况下，本文所述的耳调配物避免因活性剂经由咽鼓管排出或泄漏而使治疗益处衰减。
某些实施例的描述
本文描述治疗耳部病症的控制释放组合物和装置，其包含治疗有效量的耳感觉细胞调节剂、控制释放耳可接受赋形剂和耳可接受媒剂。一方面，控制释放耳可接受赋形剂选自耳可接受聚合物、耳可接受粘度增强剂、耳可接受凝胶、耳可接受涂料、耳可接受泡沫体、耳可接受微球体或微粒、耳可接受水凝胶、耳可接受的现场形成海绵状材料、耳可接受的光化辐射可固化凝胶、耳可接受脂质体、耳可接受纳米胶囊或纳米球体、耳可接受的热可逆性凝胶或其组合。在其它实施例中，耳可接受粘度增强剂是纤维素、纤维素醚、海藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、胶、纤维素聚合物或其组合。在又一实施例中，耳可接受粘度增强剂的存在量足以提供约1000至约1,000,000厘泊的粘度。又一方面，耳可接受粘度增强剂的存在量足以提供约50,000至约1,000,000厘泊的粘度。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂调配物或组合物对目标耳结构的重量渗透摩尔浓度或容积渗透摩尔浓度来说是最佳的以确保维持内稳定。
在一些实施例中，调配组合物的pH值和实用重量渗透摩尔浓度或容积渗透摩尔浓度以确保维持目标耳结构内稳定。外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度是在投予本文所述的医药调配物期间维持目标耳结构内稳定的实用/可传递容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度。
举例来说，外淋巴的容积渗透摩尔浓度在约270-300mOsm/L之间，且本文所述的组合物任选地经调配以提供约150至约1000mOsm/L的实际容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的调配物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/L以内的实用和/或可传递容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的调配物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约200至约400mOsm/L以内的实际容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的调配物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约250至约320mOsm/L以内的实际容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的调配物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/L、约200至约400mOsm/L或约250至约320mOsm/L以内的外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度。在某些实施例中，本文所述的调配物在目标作用部位(例如内耳和/或外淋巴和/或内淋巴)提供约150至约500mOsm/kg、约200至约400mOsm/kg或约250至约320mOsm/kg以内的外淋巴适合的重量渗透摩尔浓度。类似地，外淋巴的pH值为约7.2-7.4，且本发明调配物的pH值经调配(例如通过使用缓冲剂)以提供约5.5至约9.0、约6.0至约8.0或约7.0至约7.6的外淋巴适合的pH值。在某些实施例中，调配物的pH值在约6.0至约7.6范围内。在某些情况下，内淋巴的pH值为约7.2-7.9，且本发明调配物的pH值经调配(例如通过使用缓冲剂)在约5.5至约9.0范围内，在约6.5至约8.0范围内或在约7.0至约7.6范围内。
一些方面，耳可接受的控制释放赋形剂是生物可降解的。一些方面，耳可接受的控制释放赋形剂是生物可排除的(例如降解和/或通过尿、粪便或其它排除途径排除)。另一方面，控制释放组合物另外包含耳可接受粘膜粘附剂、耳可接受渗透增强剂或耳可接受生物粘附剂。
一方面，控制释放耳感觉细胞调节剂组合物使用药物传递装置传递，所述药物传递装置是针和注射器、泵、微注射装置或其组合。在一些实施例中，控制释放组合物的耳感觉细胞调节剂具有受限或非全身性释放，当全身投予时具有毒性，具有不良pK特征或其组合。一些方面，耳感觉细胞调节剂是小分子剂。其它方面，耳感觉细胞调节剂是抗体。
本文还公开治疗耳部病症的方法，所述方法包含如下投予本文公开的组合物和调配物：至少每3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15天一次、至少每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次或每六周一次；或一月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次、每六个月一次、每七个月一次、每八个月一次、每九个月一次、每十个月一次、每十一个月一次或每十二个月一次。在特定实施例中，本文所述的控制释放调配物在控制释放调配物的后续剂量之间向内耳提供持续剂量的耳感觉细胞调节剂。即，仅举一个实例来说，如果每10天经由鼓室内注射向圆窗膜投予新剂量的耳感觉细胞调节剂控制释放调配物，那么在这10天的时间期间，控制释放调配物向内耳提供有效剂量的耳感觉细胞调节剂(例如穿过圆窗膜)。
一方面，投予组合物以使组合物与蜗窗嵴(crista fenestrae cochleae)、圆窗膜或鼓室接触。一方面，组合物是通过鼓室内注射投予。
在一些实施例中，本文提供选择性诱导耳感觉细胞损伤的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的耳毒性剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的耳毒性剂降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳毒性剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的耳毒性剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在所述方法的一些实施例中，耳毒性剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在所述方法的一些实施例中，耳毒性剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在所述方法的一些实施例中，耳毒性剂基本上呈微粉化粒子形式。
本文还提供诱导耳感觉细胞生长的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的营养剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的营养剂降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒营养剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的营养剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在所述方法的一些实施例中，营养剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在所述方法的一些实施例中，营养剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在所述方法的一些实施例中，营养剂基本上呈微粉化粒子形式。
本文还提供减轻耳部介入对耳感觉细胞的损伤的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的耳保护剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的耳保护剂降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳保护剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳保护剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的耳保护剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在所述方法的一些实施例中，耳保护剂在耳部介入之前或期间投予。在所述方法的一些实施例中，耳保护剂在耳部介入之后投予。在所述方法的一些实施例中，耳保护剂基本上呈微粉化粒子形式。
在上述方法的一些实施例中，所述组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳感觉细胞调节剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；和
(v)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在上述方法的一些实施例中，所述组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳感觉细胞调节剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；和
(v)约30小时的耳感觉细胞调节剂平均溶解时间。
在上述方法的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在上述方法的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在上述方法的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从组合物或装置中释放持续至少10天的时间。在上述方法的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂基本上呈微粉化粒子形式。
在本文所述的方法的一些实施例中，组合物穿过圆窗投予。在一些实施例中，所述耳部和/或前庭病症是耳毒性、化疗诱发听力丧失、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、兴奋性毒性、美尼尔氏病/综合症(Meniere′s Disease/Syndrome)、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症(Ramsay Hunt′s Syndrome)、前庭神经元炎、耳鸣或微血管压迫综合症。
本文提供包含治疗耳部疾病或病状的治疗有效量的耳毒性剂(包含实质上低的耳毒性剂降解产物)的医药组合物或装置，所述医药组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳毒性剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的耳毒性剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，所述医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳毒性剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(v)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，所述医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳毒性剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(v)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，包含耳毒性剂的医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，包含耳毒性剂的医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
在一些实施例中，耳毒性剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在一些实施例中，耳毒性剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在一些实施例中，包含耳毒性剂的医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。在一些实施例中，医药组合物或装置包含基本上呈微粉化粒子形式的耳毒性剂。
本文提供包含治疗耳部疾病或病状的治疗有效量的营养剂(包含实质上低的营养剂降解产物)的医药组合物或装置，所述医药组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒营养剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的营养剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，所述医药组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒营养剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(viii)约30小时的营养剂平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
在一些实施例中，包含营养剂的医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，包含营养剂的医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，营养剂从组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在一些实施例中，营养剂从组合物或装置中释放持续至少5天的时间。
在一些实施例中，包含营养剂的医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。在一些实施例中，医药组合物或装置包含基本上呈微粉化粒子形式的营养剂。
在一些实施例中，任何上述组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳感觉细胞调节剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；和
(v)约30小时的耳感觉细胞调节剂平均溶解时间。
在一些实施例中，任何上述医药组合物或装置包含实质上低的耳感觉细胞调节剂降解产物。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约150与500mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少3天的时间。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少5天的时间。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少10天的时间。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少14天的时间。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂从上述医药组合物或装置中释放持续至少1个月的时间。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈中性化合物、游离酸、游离碱、盐或前药形式的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含呈中性化合物、游离酸、游离碱、盐或前药或其组合形式的耳感觉细胞调节剂。在本文所述的医药组合物或装置的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂以酯前药形式投予。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。在医药组合物或装置的一些实施例中，聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物是生物可排除的。
在一些实施例中，医药组合物或装置另外包含渗透增强剂。在一些实施例中，医药组合物或装置另外包含染料。
在一些实施例中，医药组合物或装置另外包含耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的盐、前药或其组合作为立即释放剂。
在医药组合物或装置的一些实施例中，所述耳感觉细胞调节剂包含多颗粒。在医药组合物或装置的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂基本上呈微粉化粒子形式。在医药组合物或装置的一些实施例中，耳感觉细胞调节剂呈微粉化耳感觉细胞调节剂粉末形式。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约10％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约15％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约20％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约25％的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约0.01％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约0.05％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约0.1％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约1％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约2.5％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约5％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约10％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约20％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约30％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计约40％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，上述医药组合物或装置包含以组合物的重量计至多约50％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约5.5至约8.0之间。在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约6.0至约8.0之间。在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约6.0至约7.6之间。在一些实施例中，上述医药组合物或装置的pH值介于约7.0至约7.6之间。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克调配物含有少于100个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克调配物含有少于50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。在一些实施例中，上述医药组合物或装置中每克调配物含有少于10个菌落形成单位(cfu)的微生物剂。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置含有每公斤个体体重少于5个内毒素单位(EU)。在一些实施例中，上述医药组合物或装置含有每公斤个体体重少于4个内毒素单位(EU)。
在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约42℃之间的胶凝温度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约37℃之间的胶凝温度。在一些实施例中，上述医药组合物或装置提供介于约19℃至约30℃之间的胶凝温度。
在一些实施例中，医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。在一些实施例中，聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物是生物可降解的和/或生物可排除的(例如通过生物降解过程从身体排除共聚物，例如在尿、粪便等中排除)。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含粘膜粘附剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含渗透增强剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含增稠剂。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含染料。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置另外包含选自以下的药物传递装置：针和注射器、泵、微注射装置、吸液芯、现场形成海绵状材料或其组合。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置是耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的盐具有有限释放或非全身性释放、全身性毒性、不良PK特征或其组合的医药组合物或装置。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置包含一种或一种以上耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的盐、前药或其组合作为立即释放剂。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置是医药组合物或装置的pH值是介于约6.0至约7.6之间外淋巴适合的pH值的医药组合物或装置。
在本文所述的医药组合物或装置的一些实施例中，具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物与增稠剂的比率为约40∶1至约5∶1。在一些实施例中，增稠剂是羧甲基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素。
在一些实施例中，所述耳部和/或前庭病症是耳毒性、化疗诱发听力丧失、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、兴奋性毒性、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣或微血管压迫综合症。
附图说明
图1说明非持续释放与持续释放调配物的比较。
图2说明浓度对巴伦诺斯(Blanose)精制CMC水溶液粘度的影响。
图3说明浓度对美多秀(Methocel)水溶液粘度的影响。
图4说明耳朵解剖学。
图5显示四种组合物的可调释放特征预测。
具体实施方式
本文提供用于治疗或改善由内耳毛损坏、发育迟缓、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的控制释放组合物。在一实施例中，控制释放组合物包含治疗有效量的至少一种耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)生长和/或再生的调节剂、耳可接受控制释放赋形剂和耳可接受媒剂。在一实施例中，控制释放组合物包含治疗有效量的至少一种耳感觉细胞损伤调节剂、耳可接受控制释放赋形剂和耳可接受媒剂。在一实施例中，控制释放组合物包含治疗有效量的至少一种保护耳神经元和/或毛细胞以免受损伤耳感觉细胞或减少、逆转或延迟对耳感觉细胞的损伤的药剂、耳可接受控制释放赋形剂和耳可接受媒剂。
本文另外公开治疗耳毒性、兴奋性毒性、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣和微血管压迫综合症的控制释放耳感觉细胞调节剂组合物和调配物。
少数治疗产品可用于治疗耳毒性、兴奋性毒性、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣和微血管压迫综合症；然而，目前使用经口、经静脉内或肌肉内途径的全身性途径来传递这些治疗剂。
全身性药物投予可导致药物浓度电势不相等，其中血清中循环水平较高且目标内耳器官结构中水平较低。因而，需要相当大量的药物来克服这一不相等以向内耳传递足够的治疗有效量。另外，生物利用率通常因药物被肝脏代谢而降低。另外，因为需要高血清量来实现足够的向目标部位的局部传递，所以全身性药物投予可能会增加全身性毒性和不良副作用的可能性。全身性毒性也可能因治疗剂被肝脏分解并加工，形成会有效消除投予治疗剂所获得的任何益处的毒性代谢物(例如卡马西平(carbamazepine)的代谢物可导致肝损害且在一些患者中导致死亡)而发生。
为克服全身性传递耳感觉细胞调节剂的毒性和伴随的不想要副作用(一般理解为对细胞具有毒性)，本文公开用于向中耳和/或内耳结构局部传递耳感觉细胞调节剂的方法和组合物。到达例如前庭和耳蜗器官将要穿过中耳或内耳(包括圆窗膜、卵圆窗/镫骨足板、环状韧带)和穿过听囊/颞骨。在其它或替代实施例中，耳用控制释放调配物能够经由鼓室内注射投在圆窗膜上或圆窗膜附近。在其它实施例中，耳用控制释放调配物通过经由耳后切开和外科操作进入圆窗或蜗窗嵴区域中或附近而投在圆窗或蜗窗嵴上或附近。另外，耳用控制释放调配物经由注射器和针施用，其中针插穿鼓膜并导向圆窗或蜗窗嵴区域。
另外，内耳的局部治疗还能够使用先前不适合使用的治疗剂，包括具有不良pK特征、不良摄取、低全身性释放和/或毒性问题的治疗剂。
由于耳感觉细胞调节剂调配物和组合物可局部靶向目标而且在内耳中存在生物血液障壁，所以由利用先前表征的毒性或无效耳感觉细胞调节剂进行治疗所致的不良作用的风险将降低。因此，本文实施例的范围内还涵盖在耳毒性、兴奋性毒性、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣和微血管压迫综合症的治疗中使用先前已因耳感觉细胞调节剂的不良作用或无效性而被专业人士否决的耳感觉细胞调节剂，包括治疗剂。
本文公开的实施例内还包括使用其它中耳和/或内耳可接受药剂与本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物和组合物组合。当使用时，这些药剂辅助治疗由自体免疫病症，包括眩晕、耳鸣、听力丧失、平衡障碍、感染、发炎反应或其组合所致的听力丧失或平衡能力丧失或功能异常。因此，还涵盖使用改善或减缓眩晕、耳鸣、听力丧失、平衡障碍、感染、发炎反应或其组合的作用的药剂与本文所述的耳感觉细胞调节剂组合。
在一些实施例中，组合物另外包含耳感觉细胞调节剂作为立即释放剂(其中所述立即释放耳感觉细胞调节剂是与控制释放剂相同的药剂)、另一耳感觉细胞调节剂、其它治疗剂或其组合。在一些实施例中，组合物另外包含其它治疗剂。在一些实施例中，所述其它治疗剂是麻醉剂、局部作用麻醉剂、止痛剂、抗生素、止吐剂、抗真菌剂、抗微生物剂、防腐剂、抗病毒剂、化疗剂、利尿剂、角质溶解剂、耳保护剂、免疫抑制剂，包含(但不限于)诸如钙调神经磷酸酶抑制剂(环孢素、他克莫司、吡美莫司)、大环内酯(诸如雷帕霉素)、皮质类固醇等药剂，或其组合。在一些实施例中，所述其它治疗剂是立即释放剂。在一些实施例中，所述其它治疗剂是控制释放剂。
因此，本文提供控制释放耳感觉细胞调节剂调配物和组合物，其用于局部治疗中耳和/或内耳结构，从而避免由全身性投予耳感觉细胞调节剂所致的副作用。局部施用的耳感觉细胞调节剂调配物和组合物与中耳和/或内耳结构相容，并且直接投予至所要中耳和/或内耳结构(例如耳蜗区或鼓室)，或投予至与内耳区域直接连通的结构，包括(但不限于)圆窗膜、蜗窗嵴或卵圆窗膜。通过特异性地靶向中耳或内耳结构，可避免由全身性治疗所致的不良副作用。此外，通过提供控制释放耳感觉细胞调节剂调配物或组合物来治疗耳部病症，可向罹患耳部病症的个体或患者提供恒定和/或长期的耳感觉细胞调节剂源，从而降低或消除治疗可变性。
鼓室内注射治疗剂是在鼓膜后面将治疗剂注射到中耳和/或内耳中的技术。虽然这一技术早已成功(舒克内希特(Schuknecht)，喉镜(Laryngoscope)(1956)66，859-870)，但仍存在某些挑战。举例来说，到达圆窗膜，内耳中的药物吸收位点可能是一种挑战。
然而，鼓室内注射产生若干现行治疗方案未阐明的未被认识到的问题，诸如改变外淋巴和内淋巴的容积渗透摩尔浓度和pH值，和引入直接或间接损害内耳结构的病原体和内毒素。此项技术可能尚未认识到这些问题的原因之一是无已批准的鼓室内组合物：内耳提供独特的调配物挑战。因此，为身体其它部分研发的组合物几乎与鼓室内组合物无关。
现有技术中无关于适于投予人类的耳用调配物的要求(例如无菌水平、pH值、容积渗透摩尔浓度)的指南。不同物种动物的耳朵之间的解剖学存在较大差异。物种间听觉结构差异的结果是内耳疾病的动物模型作为测试被研发用于临床批准的治疗剂的工具通常不可靠。
本文提供符合关于pH值、容积渗透摩尔浓度、离子平衡、无菌、内毒素和/或热原水平的严格标准的耳用调配物。本文所述的耳组合物与内耳微环境(例如外淋巴)相容且适于投予人类。在一些实施例中，本文所述的调配物在鼓室内治疗剂的临床前和/或临床研发期间包含染料且辅助观测投予的组合物以避免对侵袭性程序的需要(例如去除外淋巴)。
本文提供控制释放耳感觉细胞调节剂调配物和组合物，其用于局部治疗目标耳结构，从而避免由全身性投予耳感觉细胞调节剂调配物和组合物所致的副作用。局部施用的耳感觉细胞调节剂调配物和组合物和装置与目标耳结构相容，并且直接投予至所要目标耳结构(例如耳蜗区、鼓室或外耳)，或投予至与内耳区域直接连通的结构(包括(但不限于)圆窗膜、蜗窗嵴或卵圆窗膜)。通过特异性地靶向耳结构，可避免由全身性治疗所致的不良副作用。此外，临床研究显示使药物与耳蜗的外淋巴长期接触具有益处，例如当多次给予治疗剂时，对突发性听力丧失具有改良的临床功效。因此，通过提供控制释放耳感觉细胞调节剂调配物或组合物来治疗耳部病症，可向罹患耳部病症的个体或患者提供恒定的和/或长期的耳感觉细胞调节剂源，从而降低或消除治疗的可变性。因此，本文公开的一个实施例是提供使得至少一种耳感觉细胞调节剂能够在可变或恒定速率下以治疗有效剂量释放，诸如以确保至少一种药剂连续释放的组合物。在一些实施例中，本文公开的耳感觉细胞调节剂以立即释放调配物或组合物形式投予。在其它实施例中，耳感觉细胞调节剂以连续、可变或以脉动方式释放的持续释放调配物或其变体形式投予。在又其它实施例中，耳感觉细胞调节剂调配物是以连续、可变或以脉动方式释放的立即释放与持续释放调配物或其变体形式投予。释放任选地取决于环境或生理条件，例如外部离子环境(参看例如
Figure BPA00001308809100171
释放系统，强生公司(Johnson&Johnson))。
另外，向有需要个体目标耳朵区域(包括内耳)提供本文所述的耳可接受的控制释放耳感觉细胞调节剂调配物或治疗，且另外投予有需要个体口服剂量的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，在投予耳可接受的控制释放耳感觉细胞调节剂调配物之前，投予口服剂量的耳感觉细胞调节剂，并且随后口服剂量在提供耳可接受控制释放耳感觉细胞调节剂调配物的时间内逐渐减少。或者，在投予耳可接受控制释放耳感觉细胞调节剂调配物期间，投予口服剂量的耳感觉细胞调节剂，并且随后口服剂量在提供耳可接受控制释放耳感觉细胞调节剂调配物的时间内逐渐减少。或者，在起始投予耳可接受控制释放耳感觉细胞调节剂调配物之后，投予口服剂量的耳感觉细胞调节剂，并且随后口服剂量在提供耳可接受控制释放耳感觉细胞调节剂调配物的时间内逐渐减少。
另外，本文所包括的耳感觉细胞调节剂医药组合物或调配物或装置还包括载剂、佐剂(诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂)、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。这些载剂、佐剂和其它赋形剂应与目标耳结构所在的环境相容。因此，特别涵盖无耳毒性或具有最低限度耳毒性的载剂、佐剂和赋形剂以允许在对目标区或区域具有最小副作用下有效治疗本文涵盖的耳部病症。为防止耳毒性，本文公开的耳感觉细胞调节剂医药组合物或调配物或装置任选靶向目标耳结构的独特区域，包括(但不限于)鼓室、前庭骨迷路和膜迷路、耳蜗骨迷路和膜迷路以及位于内耳中的其它解剖学或生理学结构。
某些定义
如本文所使用的术语“耳可接受”就调配物、组合物或成分来说包括不对所治疗个体的内耳产生持续的有害影响。如本文所使用的“耳医药学上可接受”是指诸如载剂或稀释剂等物质不消除化合物对于内耳的生物活性或性质，并且对内耳的毒性相对较低或低，即物质投予个体而不产生不当生物作用或以有害方式与组合物中所含的任何组分发生相互作用。
如本文所使用，通过投予特定化合物或医药组合物来改善或减轻特定耳部疾病、病症或病状的症状是指归因于投予化合物或组合物或由投予化合物或组合物所引起的严重程度的任何降低、发作延迟、进展减缓或持续时间缩短，而不论这些作用是永久性的还是暂时性的，持续的还是短暂的。
“抗氧化剂”是耳医药学上可接受的抗氧化剂，并且包括例如丁基羟基甲苯(BHT)、抗坏血酸钠、抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠和生育酚。在某些实施例中，需要时抗氧化剂可增强化学稳定性。抗氧化剂还用于抵消某些治疗剂的耳毒性作用，包括与本文公开的耳感觉细胞调节剂组合使用的药剂。
“内耳”是指内耳，包括耳蜗和前庭迷路以及连接耳蜗与中耳的圆窗。
“内耳生物利用率”是指所投予剂量的本文公开的化合物在所研究的动物或人类的内耳中可利用的百分比。
“中耳”是指中耳，包括鼓室、听小骨和连接中耳与内耳的卵圆窗。
“平衡障碍”是指使个体感到不平稳或具有运动感觉的病症、疾病或病状。此定义包括头晕、眩晕、失去平衡和近昏厥(pre-syncope)。归为平衡障碍的疾病包括(但不限于)拉姆齐-亨特综合症、美尼尔氏病、登陆困难症(mal de debarquement)、良性阵发性位置性眩晕和迷路炎。
“血浆浓度”是指本文提供的化合物在个体血液的血浆组分中的浓度。
“载剂物质”是与耳感觉细胞调节剂、内耳和耳可接受的医药调配物的释放曲线性质相容的赋形剂。这些载剂物质包括例如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。“耳医药学上相容的载剂物质”包括(但不限于)阿拉伯胶(acacia)、明胶、胶状二氧化硅、甘油磷酸钙、乳酸钙、麦芽糖糊精、甘油、硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胆固醇、胆固醇酯、酪蛋白酸钠、大豆卵磷脂、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、氯化钠、磷酸三钙、磷酸二钾、纤维素和纤维素结合物、糖硬脂酰乳酸钠、卡拉胶(carrageenan)、甘油单酯、甘油二酯、预胶凝化淀粉等。
术语“稀释剂”是指用于在传递之前稀释耳感觉细胞调节剂且与内耳相容的化合物。
“分散剂”和/或“粘度调节剂”是控制耳感觉细胞调节剂在液体介质中的扩散和均一性的物质。扩散促进剂/分散剂的实例包括(但不限于)亲水性聚合物、电解质、吐温
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60或80、PEG、聚乙烯吡咯烷酮(PVP；市面上称为
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)，和基于碳水化合物的分散剂，诸如羟丙基纤维素(例如HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟丙基甲基纤维素(例如HPMC K100、HPMC K4M、HPMC K15M和HPMC K100M)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素乙酸酯硬脂酸酯(HPMCAS)、非晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol))、泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛尼克
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Figure BPA00001308809100192
和
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其为环氧乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物)；和泊洛沙胺(poloxamine)(例如特求尼克
Figure BPA00001308809100194
也称为泊洛沙胺
Figure BPA00001308809100195
其是通过向乙二胺依次添加环氧丙烷和环氧乙烷所得到的四官能性嵌段共聚物(巴斯夫公司(BASF Corporation)，新泽西州帕西帕尼(Parsippany，N.J.))、聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S-630)、聚乙二醇(例如聚乙二醇的分子量为约300至约6000、或约3350至约4000、或约7000至约5400)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、胶(诸如黄芪胶和阿拉伯胶、瓜尔胶、黄原类(xanthans)，包括黄原胶)、糖、纤维素类(诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠)、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚维酮(povidone)、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇(PVA)、海藻酸盐、壳聚糖(chitosan)和其组合。还使用诸如纤维素或三乙基纤维素等增塑剂作为分散剂。适用于本文公开的耳感觉细胞调节剂的脂质体分散液和自乳化分散液中的分散剂是二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、来自卵的天然磷脂酰胆碱、来自卵的天然磷脂酰甘油、胆固醇和肉豆蔻酸异丙酯。
“药物吸收”或“吸收”是指耳感觉细胞调节剂从投药的局部部位(仅举例来说，内耳的圆窗膜)和穿过障壁(圆窗膜，如下文所述)进入内耳或内耳结构的移动过程。如本文所使用的术语“共投予”等打算涵盖投予单个患者耳感觉细胞调节剂，且打算包括通过相同或不同投药途径或在相同或不同时间投予耳感觉细胞调节剂的治疗方案。
如本文所使用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指预期所投予的耳感觉细胞调节剂足以在一定程度上减轻所治疗的疾病或病状的一种或一种以上症状的量。举例来说，投予本文公开的耳感觉细胞调节剂药剂的结果是减少和/或减轻耳鸣或平衡障碍的病征、症状或病因。举例来说，用于治疗使用的“有效量”是耳感觉细胞调节剂(包括本文公开的调配物)减缓或改善疾病症状而无过度不良副作用所需的量。术语“治疗有效量”包括例如预防有效量。本文公开的耳组合物的神经元和/或毛细胞调节剂的“有效量”是有效达成所要药理学效果或治疗改善而无过度不良副作用的量。应了解，在一些实施例中，“有效量”或“治疗有效量”因所投予的化合物的代谢、个体的年龄、体重、一般状况、所治疗病状、所治疗病状的严重程度和开处方医生的判断的变化而随个体变化。还应了解，基于药物动力学和药效学的考虑，延长释放给药格式中的“有效量”可与立即释放给药格式中的“有效量”不同。
术语“增强”是指增加或延长耳感觉细胞调节剂的所要效果的效力或持续时间，或减弱随投予治疗剂而发生的任何不利症状。因此，就增强本文公开的耳感觉细胞调节剂的效果来说，术语“增强”是指能够增加或延长与本文公开的耳感觉细胞调节剂组合使用的其它治疗剂的效果的效力或持续时间。如本文所使用的“增强有效量”是指耳感觉细胞调节剂或其它治疗剂的足以增强另一治疗剂或耳感觉细胞调节剂在所要系统中的目标耳结构中的效果的量。当用于患者中时，对此用途有效的量将取决于疾病、病症或病状的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态和对药物的反应以及治疗医生的判断。
术语“抑制”包括阻止、减缓或逆转必需治疗的患者的例如病状的发展或病状的进展。
术语“试剂盒”和“制品”作为同义词使用。
“药效学”是指决定中耳和/或内耳内想要部位处相对于药物浓度所观察到的生物反应的因素。
“药物动力学”是指决定在中耳和/或内耳内想要部位处达到并维持适当药物浓度的因素。
“耳神经元和/或毛细胞调节剂”与“耳感觉细胞调节剂”是同义词。其包括促进耳神经元和/或毛细胞生长和/或再生的药剂和破坏耳神经元和/或毛细胞的药剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂通过促进耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)生长和/或再生提供治疗益处(例如减轻听力丧失)。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂(例如毒物)通过破坏或损伤耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)提供治疗益处(例如减轻眩晕)。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂通过治疗和/或逆转对耳感觉细胞的损伤(例如耳神经元和/或毛细胞功能异常)或减小或延迟对耳感觉细胞的进一步损伤(例如细胞死亡)(例如通过施加耳保护作用或营养作用)提供治疗益处(例如减轻听觉损伤所致的耳鸣)。
术语“营养剂”意思是促进耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)的存活、生长和/或再生的药剂。在一些实施例中，营养剂减小或抑制耳感觉细胞的氧化性损伤和/或骨再生和/或退化。在一些实施例中，营养剂维持健康耳感觉细胞(例如在外科手术植入医学装置之后)。在一些实施例中，营养剂上调抗氧化酶的活性(例如在投予耳毒性剂期间)。在一些实施例中，营养剂是免疫抑制剂(例如耳部外科手术期间使用的免疫抑制剂)。在一些实施例中，营养剂是生长因子(例如植入程序之后使用的生长因子以促进耳细胞生长)。
术语“谷氨酸受体拮抗剂”意思是干扰或抑制谷氨酸受体活性的化合物。在一些实施例中，受体是AMPA受体或NMDA受体。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂结合谷氨酸受体，但所述结合不产生生理反应。谷氨酸受体拮抗剂包括部分激动剂、反向激动剂、中性或竞争性拮抗剂、非竞争性拮抗剂、变构拮抗剂和/或正位拮抗剂。
术语“谷氨酸受体激动剂”意思是结合谷氨酸受体并活化所述受体的化合物。所述术语另外包括促进天然配体结合的化合物。在一些实施例中，所述受体是mGlu受体。谷氨酸受体激动剂包括部分拮抗剂、变构激动剂和/或正位激动剂。
在预防性应用中，将本文所述的包含耳感觉细胞调节剂的组合物投予易患特定疾病、病症或病状或处于特定疾病、病症或病状风险中的患者。举例来说，所述病状包括(但不限于)耳毒性、兴奋性毒性、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣和微血管压迫综合症。这种量定义为“预防有效量或剂量”。在此用途中，确切量还取决于患者的健康状态、体重等。
如本文所使用，“医药装置”包括投予耳朵之后提供用于本文所述的活性剂的延长释放的储集器的任何本文所述的组合物。
术语“实质上低的降解产物”意思是少于5重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于3重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在又其它实施例中，这一术语意思是少于2重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在其它实施例中，这一术语意思是少于1重量％的活性剂是活性剂的降解产物。在一些实施例中，本文所述的调配物中存在的任何个别杂质(例如金属杂质，活性剂和/或赋形剂降解产物等)为活性剂的不到5重量％、不到2重量％或不到1重量％。在一些实施例中，调配物在储藏期间不含沉淀，或在制造和储藏之后无颜色变化。
如本文所使用，“基本上呈微粉化粉末形式”仅举例来说包括大于70重量％的活性剂呈活性剂的微粉化粒子形式。在其它实施例中，这一术语意思是大于80重量％的活性剂呈活性剂的微粉化粒子形式。在又其它实施例中，这一术语意思是大于90重量％的活性剂呈活性剂的微粉化粒子形式。
术语“耳部介入”意思是对一个或一个以上耳结构的外部损害或外伤且包括植入物、耳部外科手术、注射、套管插入术等。植入物包括内耳或中耳医学装置，其实例包括耳蜗植入物、听力防护装置、听力改善装置、短电极、微假体或活塞样假体；针；干细胞移植物；药物传递装置；任何基于细胞的治疗剂；等。耳部外科手术包括中耳外科手术、内耳外科手术、鼓膜切开术、耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。注射包括鼓室内注射、耳蜗内注射、穿过圆窗膜注射等。套管插入术包括鼓室内、耳蜗内、内淋巴、外淋巴或前庭套管插入术等。
“前药”是指在活体内转化成母体药物的耳感觉细胞调节剂。在某些实施例中，前药经一个或一个以上步骤或过程酶促代谢成化合物的生物活性、医药活性或治疗活性形式。为制造前药，对医药活性化合物进行修饰以使活性化合物将在活体内投予之后再生。在一个实施例中，前药经设计以改变药物的代谢稳定性或传输特征，屏蔽副作用或毒性或改变药物的其它特征或性质。在一些实施例中，本文提供的化合物被衍生成适合的前药。
“增溶剂”是指有助于或增强本文公开的耳感觉细胞调节剂的溶解性的耳可接受的化合物，诸如三乙酰甘油酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、月桂基硫酸钠、多库酯钠(sodium docusate)、维生素E TPGS、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)、二乙二醇单乙基醚(transcutol)、丙二醇和异山梨醇二甲醚(dimethyl isosorbide)等。
“稳定剂”是指与内耳环境相容的化合物，诸如任何抗氧化剂、缓冲剂、酸、防腐剂等。稳定剂包括(但不限于)会产生任何以下作用的试剂：(1)提高赋形剂与容器或传递系统(包括注射器或玻璃瓶)的相容性，(2)提高组合物组分的稳定性，或(3)提高调配物稳定性。
如本文所使用的“稳态”是指当投予内耳的药物的量等于一个给药时间间隔内消除的药物的量时，在目标结构内产生平稳或恒定水平的药物暴露。
如本文所使用的术语“个体”用于指动物，优选哺乳动物，包括人类或非人类。术语患者与个体可互换使用。
“表面活性剂”是指耳可接受的化合物，诸如月桂基硫酸钠、多库酯钠、吐温60或80、三乙酰甘油酯、维生素E TPGS、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆、胆汁盐、单硬脂酸甘油酯、环氧乙烷与环氧丙烷的共聚物，例如
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(巴斯夫公司(BASF))等。一些其它表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10(octoxynol 10)、辛苯聚醇40(octoxynol 40)。在一些实施例中，纳入表面活性剂以增强物理稳定性或用于其它目的。
如本文所使用的术语“治疗”包括预防性和/或治疗性缓和、缓解或改善疾病或病状(例如耳鸣)症状，预防其它症状，改善或预防症状的潜在代谢病因，抑制疾病或病状(例如阻止疾病或病状发展)，减轻疾病或病状，使疾病或病状消退，减轻由疾病或病状引起的病状，或终止疾病或病状的症状。
由以下详细描述，本文所述的方法和组合物的其它目标、特征和优点将变得显而易见。然而，应了解详细描述和具体实例在指示特定实施例时仅以说明性方式提供。
耳的解剖学
如图4所示，外耳是器官的外部部分且由耳廓(pinna/auricle)、耳道(外耳道)和鼓膜的向外部分(也称为耳鼓)构成。耳廓是外耳的肉质部分，可见于头的侧面，其用于收集声波且将声波导向耳道。因此，外耳的功能部分在于收集声波并将声波导向鼓膜和中耳。
中耳是空气填充的空腔，称为鼓室，在鼓膜后方。鼓膜也称为耳鼓，是隔开外耳与中耳的薄膜。中耳位于颞骨内，且在这一空间内包括三块耳骨(听小骨)：锤骨、砧骨和镫骨。听小骨经由细小的韧带连接在一起，形成横跨鼓室空间的桥。锤骨的一端附着于鼓膜，其前端连接于砧骨，而砧骨又连接于镫骨。镫骨附着于卵圆窗，卵圆窗是位于鼓室内的两个窗中的一个。称为环状韧带的纤维组织层连接镫骨与卵圆窗。来自外耳的声波首先引起鼓膜振动。振动经由听小骨和卵圆窗传播到达耳蜗，将运动转移到内耳中的流体。因此，听小骨的排列提供鼓膜与流体填充内耳的卵圆窗之间的机械联动，其中声音转变并转换到内耳以供进一步处理。听小骨、鼓膜或卵圆窗的硬度、刚性或活动性丧失导致听力丧失，例如耳硬化症或镫骨刚性。
鼓室还经由咽鼓管连接于咽喉。咽鼓管能够平衡外部空气与中耳空腔之间的压力。圆窗是内耳的一个组件但也可在鼓室内接近，其通向内耳的耳蜗。圆窗被圆窗膜覆盖，圆窗膜由三个层组成：外层或粘膜层、中间层或纤维层、和内膜，内膜直接与耳蜗流体连通。因此，圆窗经由内膜直接与内耳连通。
卵圆窗和圆窗中的运动是互连的，即，当镫骨将鼓膜运动传播到卵圆窗以相对于内耳流体向内移动时，圆窗(圆窗膜)相应地推出并远离耳蜗流体。圆窗的这一运动使得耳蜗内的流体运动，这又导致耳蜗内毛细胞运动，从而转换听力信号。圆窗膜变硬或僵化因不能使耳蜗流体运动而导致听力丧失。最近的研究已集中于在圆窗上植入机械转换器，所述转换器经由卵圆窗绕过正常传导路径并向耳蜗腔室提供放大的输入。
听觉信号转换发生在内耳中。流体填充的内耳由两个主要组件组成：耳蜗和前庭器官。内耳部分位于骨迷路中，骨迷路是颅颞骨中一系列复杂的通道。前庭器官是平衡器官且由三个半规管和前庭组成。三个半规管彼此的相对排列使得可通过流体的运动来检测头部沿空间中三个正交平面的运动，并随后由半规管的感觉器官(称为壶腹嵴)对信号进行处理。壶腹嵴含有毛细胞和支持细胞，并且被称为壶腹帽的圆顶状凝胶物质覆盖。毛细胞的毛包埋于壶腹帽中。半规管检测动态平衡，即转动或角度运动的平衡。
虽然当头部快速转动时，半规管随头部移动，但位于膜半规管内的内淋巴流体倾向于保持不动。内淋巴流体推抵壶腹帽，壶腹帽向一侧倾斜。当壶腹帽倾斜时，其使壶腹嵴的毛细胞上的一些毛弯曲，进而触发感觉脉冲。因为各半规管位于不同平面上，所以各半规管的相应壶腹嵴不同地回应于头部的相同运动。此举产生嵌合脉冲，这一脉冲在前庭蜗神经的前庭支上传播到中枢神经系统。中枢神经系统解释这一信息并引发适当的反应来维持平衡。中枢神经系统中重要的是小脑，小脑介导平衡感和平衡。
前庭是内耳的中央部分，且含有具有探知静态平衡或头部相对于重力的位置的毛细胞的机械感受器。静态平衡在头部不动或沿直线移动时发挥作用。前庭中的膜迷路分成两个囊样结构，即椭圆囊和球囊。各结构又含有称为囊斑的小结构，这一小结构负责维持静态平衡。囊斑由包埋于覆盖囊斑的凝胶物质(类似于壶腹帽)中的感觉毛细胞组成。称为耳石的碳酸钙粒嵌于凝胶层表面上。
当头部位于竖直位置时，毛沿囊斑竖立。当头部倾斜时，凝胶物质和耳石相应倾斜，使囊斑毛细胞上的一些毛弯曲。这一弯曲作用向中枢神经系统发起信号脉冲，信号脉冲经由前庭蜗神经的前庭支行进，继而向适当肌肉转播运动脉冲以维持平衡。
耳蜗是内耳中与听力相关的部分。耳蜗是卷曲成类似蜗牛形状的锥形管样结构。耳蜗内部分成三个区，这三个区进一步由前庭膜和基底膜的位置界定。前庭膜上方的部分是前庭阶，前庭阶从卵圆窗延伸到耳蜗顶点，且含有外淋巴流体，一种钾含量低而钠含量高的水性液体。基底膜界定鼓阶区，鼓阶区从耳蜗顶点延伸到圆窗而且含有外淋巴。基底膜含有数以千计的刚性纤维，这些纤维的长度从圆窗到耳蜗顶点逐渐增加。基底膜纤维在被声音刺激时振动。前庭阶与鼓室阶中间是耳蜗管，耳蜗管以耳蜗顶点处的封闭囊为末端。耳蜗管含有内淋巴流体，内淋巴流体类似于脑脊髓流体且钾含量高。
柯替(Corti)器官是用于听力的感觉器官，位于基底膜上且向上延伸至耳蜗管中。柯替器官含有毛细胞，毛细胞具有从其自由表面延伸并接触称为顶盖膜的凝胶状表面的毛样突出物。虽然毛细胞没有轴突，但其被形成前耳庭蜗神经(脑神经VIII)的耳蜗支的感觉神经纤维包围。
如所论述，卵圆窗(也称为椭圆窗)与镫骨连通以转播从鼓膜振动的声波。转移到卵圆窗的振动经由外淋巴和前庭阶/鼓阶使流体填充耳蜗内部的压力增加，而这一压力增加又引起圆窗膜反应而扩展。协调的卵圆窗向内挤压/圆窗向外扩展使得耳蜗内的流体运动而不改变耳蜗内压力。然而，当振动行进穿过前庭阶中的外淋巴时，其在前庭膜中产生相应振动。这些相应的振动行进穿过耳蜗管的内淋巴，并且转移到基底膜。当基底膜振动或上下运动时，柯替器官沿着基底膜运动。柯替器官中的毛细胞受体随后相对顶盖膜运动，导致顶盖膜发生机械变形。这一机械变形引发神经脉冲，神经脉冲经由前庭耳蜗神经行进到中枢神经系统，将所接收的声波以机械方式传播为信号，这些信号接着由中枢神经系统处理。
疾病
耳部病症产生各种症状，包括(但不限于)听力丧失、眼球震颤、眩晕、耳鸣、炎症、感染和充血。用本文公开的组合物治疗的耳部病症众多且包括耳毒性、兴奋性毒性、感觉神经性听力丧失、噪声诱发听力丧失、美尼尔氏病/综合症、内淋巴水肿、迷路炎、拉姆齐-亨特综合症、前庭神经元炎、耳鸣和微血管压迫综合症。
兴奋性毒性
兴奋性毒性是指谷氨酸和/或类似物质使神经元和/或耳毛细胞死亡或损伤。
谷氨酸是中枢神经系统中最丰富的刺激性神经传递素。突触前神经元在刺激后会释放出谷氨酸。谷氨酸流过突触，结合于位于突触后神经元上的受体，并活化这些神经元。谷氨酸受体包括NMDA、AMPA和红藻氨酸受体。谷氨酸转运体的工作是将细胞外谷氨酸从突触中除去。某些事件(例如局部缺血或中风)可损伤这些转运体。此会导致突触中谷氨酸过多累积。突触中过多的谷氨酸可引起谷氨酸受体过度活化。
AMPA受体通过谷氨酸和AMPA两者的结合而活化。AMPA受体的某些同功异型物的活化会引起位于神经元质膜中的离子通道打开。当通道打开时，Na+和Ca2+离子流入神经元中且K+离子从神经元中流出。
NMDA受体通过谷氨酸和NMDA两者的结合而活化。NMDA受体的活化会引起位于神经元质膜中的离子通道打开。然而，这些通道被Mg2+离子阻断。AMPA受体的活化会引起Mg2+离子从离子通道排到突触中。当离子通道打开且Mg2+离子排空离子通道时，Na+和Ca2+离子流入神经元中且K+离子从神经元中流出。
当NMDA受体和AMPA受体通过结合过量配体，例如异常量的谷氨酸而过度活化时，产生兴奋性毒性。这些受体过度活化会引起离子通道在其控制下过多地打开。此使得异常高含量的Ca2+和Na+进入神经元中。这些含量的Ca2+和Na+流入神经元中会引起神经元更高频率地放电，从而引起自由基和发炎性化合物迅速积聚于细胞内。自由基最终损伤线粒体，消耗细胞的能量存储。此外，过多含量的Ca2+和Na+离子活化过多含量的酶，包括(但不限于)磷脂酶、核酸内切酶和蛋白酶。这些酶的过度活化引起对感觉神经元的细胞骨架、质膜、线粒体和DNA的破坏。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是减小或抑制过度神经元放电和/或神经元细胞死亡的谷氨酸受体拮抗剂。在某些实施例中，本文公开用于治疗特征在于NMDA受体功能异常的耳朵疾病的医药组合物。
耳鸣
如本文所使用，“耳鸣”是指特征在于不存在任何外界刺激下感觉到声音的病症。在一些情况下，耳鸣连续或零星地发生在一个或两个耳朵中，且最常描述为铃声。其最常用作其它疾病的诊断性症状。存在两种类型的耳鸣：客观性耳鸣和主观性耳鸣。前者是任何人可听到的在体内产生的声音。后者仅仅是患病个体能听到。研究估计，超过五千万的美国人经历某种形式的耳鸣。在这五千万中，约一千二百万人经历严重的耳鸣。
针对耳鸣有若干种治疗。通过静脉内投予利多卡因(Lidocaine)可减少或消除约60％-80％患者中与耳鸣相关的噪音。例如去甲替林(nortriptyline)、舍曲林(sertraline)和帕罗西汀(paroxetine)等选择性神经传递素再摄取抑制剂也显示针对耳鸣的功效。苯并二氮呯也用于治疗耳鸣。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂减少或抑制与耳鸣相关的耳感觉细胞损伤和/或死亡。
感觉神经性听力丧失
感觉神经性听力丧失是一类由前庭蜗神经(也称为脑神经VIII)或内耳感觉细胞存在缺陷(先天性和后天性)所引起的听力丧失。大部分内耳缺陷是耳毛细胞缺陷。
耳蜗发育不全、染色体缺陷和先天性胆脂瘤是可引起感觉神经性听力丧失的先天性缺陷的实例。通过非限制性实例，发炎性疾病(例如化脓性迷路炎、脑膜炎、腮腺炎、麻疹、病毒性梅毒和自体免疫病症)、美尼尔氏病、暴露于耳毒性药物(例如氨基糖苷、袢利尿剂(loop diuretics)、抗代谢物、水杨酸酯(salicylate)和顺铂(cisplatin))、身体创伤、老年性耳聋和听觉损伤(长时间暴露于超过90dB的声音)都可以引起后天性感觉神经性听力丧失。
如果引起感觉神经性听力丧失的缺陷是听觉通路的缺陷，那么感觉神经性听力丧失称为中枢听力丧失。如果引起感觉神经性听力丧失的缺陷是听觉通路的缺陷，那么感觉神经性听力丧失称为皮质性聋。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是促进耳感觉细胞生长且减少或逆转感觉神经性听力丧失的营养剂(例如BDNF、GDNF)。
噪声诱发听力丧失
噪声诱发听力丧失(NIHL)是在暴露于太喧闹或喧闹的声音持续一段较长时间之后引起。长时间或重复或脉冲暴露于85分贝或85分贝以上的声音会导致听力丧失。听力丧失还可能因长期暴露于喧闹的噪声下而发生，诸如响亮的音乐、重型设备或机器、飞机、炮火或其它基于人类的噪声。NIHL引起对毛细胞和/或听觉神经的损伤。毛细胞是使声能转化成传送到脑部的电信号的小的感觉细胞。脉冲声音可引起立即的听力丧失，此可能是永久性的。这类听力丧失可能伴随耳鸣，即耳朵或头部出现铃声、嗡嗡声或轰鸣声，此可能随时间而消退。听力丧失和耳鸣可能发生在一只或两只耳朵，且耳鸣可能在整个生命周期中不断或间或持续。连续暴露于喧闹的噪声还会损伤毛细胞结构，从而引起永久性听力丧失和耳鸣，但这一过程与脉冲噪声相比是循序渐进的。
在一些实施例中，耳保护剂可逆转、减少或改善NIHL。治疗或预防NIHL的耳保护剂的实例包括(但不限于)本文所述的耳保护剂。
耳毒性
耳毒性是指由毒素引起的听力丧失。此听力丧失可由耳毛细胞、耳蜗和/或脑神经VII的损伤引起。已知多种药物具有耳毒性。耳毒性常常取决于剂量。在停止服用药物后，耳毒性可能为持久或可逆转的。
已知的耳毒性药物包括(但不限于)氨基糖苷类抗生素(例如庆大霉素和阿米卡星(amikacin))、大环内酯类抗生素的一些成员(例如红霉素)、糖肽类抗生素的一些成员(例如万古霉素(vancomycin))、水杨酸、烟碱、一些化学治疗剂(例如放线菌素(actinomycin)、博来霉素(bleomycin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)和长春新碱(vincristine))和亨氏环利尿剂家族药物的一些成员(例如呋喃苯胺酸(furosemide))、6-羟基多巴胺(6-OH DP AT)、6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)等。
顺铂和氨基糖苷类抗生素诱发活性氧(reactive oxygen species，“ROS”)的产生。ROS可直接通过损伤DNA、多肽和/或脂质使细胞受损。抗氧化剂通过预防ROS形成或在ROS损伤细胞之前清除自由基来预防ROS的损伤。顺铂与氨基糖苷类抗生素都被认为是通过结合内耳血管纹中的黑色素来损伤耳朵。
水杨酸分类为耳毒性药物是因为其抑制多肽压力素(prestin)的功能。压力素通过控制氯离子和碳酸根穿过外耳毛细胞的质膜交换，来介导外耳毛细胞的运动。仅在外耳毛细胞中发现压力素，在内耳毛细胞中未发现。因此，本文公开包含耳保护剂(例如抗氧化剂)的控制释放耳用组合物的用途，其用于预防、改善或减轻包括(但不限于)顺铂治疗、氨基糖苷或水杨酸投药或其它耳毒性药剂在内的化学疗法的耳毒性作用。
内淋巴水肿
内淋巴水肿是指内耳的内淋巴系统内水压增加。内淋巴与外淋巴由含有多个神经的薄膜分离。压力波动会压迫膜和其所具有的神经。如果压力够大，那么可能在膜中造成破环。此会引起流体混合，导致去极化阻断和短暂性功能丧失。前庭神经放电速率的变化常常引起眩晕。另外，柯蒂氏器亦可能受到影响。基底膜以及内毛细胞和外毛细胞的变形会导致听力丧失和/或耳鸣。
病因包括代谢障碍、激素不平衡、自体免疫疾病和病毒、细菌或真菌感染。症状包括听力丧失、眩晕、耳鸣和耳胀。也可能出现眼球震颤。治疗包括全身性投予苯并二氮呯(benzodiazepine)、利尿剂(减少流体压力)、皮质类固醇和/或抗细菌剂、抗病毒剂或抗真菌剂。
迷路炎
迷路炎是含有内耳迷路系统的耳迷路发炎。病因包括细菌、病毒和真菌感染。其也可能由头部损伤或过敏症引起。迷路炎的症状包括难以维持平衡、头晕、眩晕、耳鸣和听力丧失。恢复可能需要一至六周；然而，慢性症状可能存在多年。
对迷路炎有若干种治疗。丙氯拉嗪(prochlorperazine)常常指示作为止吐剂。血清素再摄取抑制剂显示对内耳中新的神经生长有刺激作用。另外，如果病因是细菌感染，那么指示用抗生素治疗，且如果病状由病毒感染引起，那么建议用皮质类固醇和抗病毒剂治疗。
美尼尔氏病
美尼尔氏病是一种特发性病状，其特征为眩晕、恶心和呕吐突然发作，可持续3至24个小时，且可逐渐消退。逐渐的听力丧失、耳鸣和耳中压力感伴随此疾病，历经病程。美尼尔氏病的病因可能与内耳流体稳态的不平衡相关，包括内耳流体的产生增加或再吸收减少。
对内耳中加压素(VP)介导的水通道蛋白2(AQP2)系统的研究表明，VP在诱导内淋巴产生，从而增加前庭和耳蜗结构中的压力方面起作用。发现VP含量在内淋巴水肿(美尼尔氏病)病例中上调，且发现天竺鼠中长期投予VP会诱发内淋巴水肿。用VP拮抗剂治疗，包括输注OPC-31260(一种V2-R的竞争性拮抗剂))到鼓阶中，可使美尼尔氏病症状显著地减少。其它VP拮抗剂包括WAY-140288、CL-385004、托伐普坦(tolvaptan)、考尼伐坦(conivaptan)、SR 121463A和VPA 985。(桑吉(Sanghi)等人，欧洲心脏杂志(Eur.Heart J.)(2005)26：538-543；帕姆(Palm)等人，肾病学，透析，移植术(Nephrol Dial Transplant)(1999)14：2559-2562)。
其它研究表明，雌激素相关受体β/NR3B2(ERR/Nr3b2)在调节内淋巴产生，因此调节前庭/耳蜗器官中的压力方面起作用。小鼠中的基因剔除研究显示，Nr3b2基因的多肽产物在调节内淋巴流体产生方面起作用。Nr3b2的表达分别定位于耳蜗和前庭器官的分泌内淋巴的血管纹边缘细胞和前庭暗细胞中。另外，Nr3b2基因的条件基因剔除会引起耳聋和内淋巴流体量减少。用ERR/Nr3b2的拮抗剂治疗可有助于减小内淋巴体积，因此改变内耳结构的压力。
其它治疗可针对处理即刻的症状和预防复发。提倡低钠饮食，避免咖啡因、酒精和烟草制品。可暂时地减轻眩晕发作的药物包括抗组胺药(包括美克利嗪和其它抗组胺药)和中枢神经系统药剂，包括巴比妥酸盐(barbiturate)和/或苯并二氮呯，包括劳拉西泮(lorazepam)或安定(diazepam)。可用于减轻症状的药物的其它实例包括毒蕈碱型拮抗剂，包括莨菪碱(scopolamine)。可通过含有抗精神病药的栓剂，包括吩噻嗪类药丙氯拉嗪来减轻恶心和呕吐。
用以减轻症状的外科手术程序包括破坏前庭和/或耳蜗的功能以减轻眩晕症状。这些程序旨在减少内耳中的流体压力和/或破坏内耳的平衡功能。可在内耳中进行减轻流体压力的内淋巴分流程序，以减轻前庭功能障碍的症状。其它的治疗包括应用庆大霉素，其在注射至耳鼓中时会破坏感觉毛细胞的功能，从而根除内耳的平衡功能。也可以切断前庭神经，此在保留听觉的同时可控制眩晕。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂促进毛细胞生长且使得个体恢复内耳平衡功能。
美尼尔氏综合症
美尼尔氏综合症显示与美尼尔氏病类似的症状，认为其是例如梅毒感染所致的甲状腺疾病或内耳发炎等另一疾病过程的继发性疾病。因此，美尼尔氏综合症是干扰内淋巴正常产生或再吸收的各种过程的继发效应，包括内分泌异常、电解质不平衡、自体免疫功能障碍、药物治疗、感染(例如寄生虫感染)或高脂质血症。美尼尔氏综合症患者的治疗类似于美尼尔氏病。
拉姆齐-亨特综合症(带状疱疹感染)
拉姆齐-亨特综合症由听神经的带状疱疹感染所引起。这种感染可能引起严重的耳痛、听力丧失、眩晕，以及外耳上、耳道中以及由这些神经供给的面部或颈部皮肤上出现水泡。如果隆起物挤压面神经，那么脸部肌肉也可能变瘫痪。听力丧失可为暂时性或永久性的，且眩晕症状通常持续数天到数周。
拉姆齐-亨特综合症的治疗包括投予包括阿昔洛韦(acyclovir)在内的抗病毒剂。其它抗病毒剂包括泛昔洛韦(famciclovir)和发昔洛韦(valacyclovir)。也可以采用抗病毒剂与皮质类固醇疗法组合来改善带状疱疹感染。也可以投予镇痛剂或麻醉药来减轻疼痛，且投予安定或其它的中枢神经系统药剂来抑制眩晕。任选使用辣椒素(capsaicin)、利多卡因贴片和神经阻滞。也可以对挤压的面神经进行外科手术以减轻面神经麻痹。
微血管压迫综合症
微血管压迫综合症(MCS)又称为“血管压迫”或“神经血管压迫”，是一种特征为眩晕和耳鸣的病症。其由血管对脑神经VII的刺激所引起。在患有MCS的个体中发现的其它症状包括(但不限于)严重的运动难忍和如“迅速旋转(quick spin)”一样的神经痛。MCS用卡马西平(carbamazepine)、和巴氯芬(baclofen)治疗。其也可用外科手术来治疗。
前庭神经元炎
前庭神经元炎或前庭神经病是一种急性并持续的周围迷路系统功能障碍。推断前庭神经元炎由来自一个或两个前庭器官的传入神经元输入遭到破环所引起。此破环的原因包括前庭神经和/或迷路的病毒感染和急性局部缺血。
在诊断前庭神经元炎时，最重大的发现是自发、单向、水平性眼球震颤。其常常伴有恶心、呕吐和眩晕。然而，其一般不伴有听力丧失或其它的听觉症状。
对前庭神经元炎有若干种治疗。诸如茶苯海明(dimenhydrinate)、苯海拉明(diphenhydramine)、美克利嗪和异丙嗪等H1-受体拮抗剂通过抗胆碱能作用可减少前庭刺激并抑制迷路功能。例如安定和劳拉西泮等苯并二氮呯也因作用于GABAA受体而可用以抑制前庭反应。也指示抗胆碱能药，例如莨菪碱。这些抗胆碱能药通过抑制前庭小脑路径中的传导性起作用。最后，指示皮质类固醇(即泼尼松)来改善前庭神经和相关器官的发炎。
医药剂
本文提供调节耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)退化的耳感觉细胞调节剂组合物或调配物。在一些实施例中，本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或调配物减轻或延迟或逆转耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)的退化。本文还公开用于治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的控制释放组合物。另外，本文提供促进耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)生长和/或再生的耳感觉细胞促进剂组合物或调配物。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂组合物或调配物破坏耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂是耳保护剂且减轻、逆转或延迟对耳感觉细胞(例如耳神经元和/或毛细胞)的损伤。
耳部和前庭病症具有应答本文公开的医药剂或其它医药剂的病因和症状。本文未公开但能改善或根除耳部病症的耳感觉细胞调节剂明确地包括于所呈示的实施例范围内并且意欲属于所述范围
此外，先前已显示例如因肝加工之后形成的有毒代谢物、药物在特定器官、组织或系统中的毒性、达成功效所需要的高含量、不能经由全身性途径释放或不良pK特征而在全身性施用或局部施用于其它器官系统期间有毒性、有害或无效的医药剂适用于本文的一些实施例。因此，具有有限释放或非全身性释放、全身性毒性、不良pK特征或其组合的医药剂涵盖于本文公开的实施例范围内。
本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物任选直接靶向需要治疗的耳结构；例如预期的一个实施例是将本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物直接施用于内耳的圆窗膜或蜗窗嵴上，从而直接到达和治疗内耳或内耳组件。在其它实施例中，将本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物直接施用于卵圆窗。在又其它实施例中，通过例如利用耳蜗微灌注术直接微注射于内耳中直接到达。这些实施例还任选包含药物传递装置，其中所述药物传递装置通过使用针和注射器、泵、微注射装置、耳可接受的现场形成海绵状材料或其任何组合来传递耳感觉细胞调节剂调配物。
一些医药剂单独或组合时具有耳毒性。举例来说，以下一些药剂适度有毒至极具毒性：化疗剂，包括放线菌素、博莱霉素、顺铂、卡铂和长春新碱；和抗生素，包括红霉素、庆大霉素、链霉素、双氢链霉素、妥布拉霉素(tobramycin)、奈替米星(netilmicin)、阿米卡星、新霉素、卡那霉素(kanamycin)、伊替霉素(etiomycin)、万古霉素、甲硝哒唑、卷曲霉素(capreomycin)，且不同程度地影响前庭和耳蜗结构。然而，在一些情况下，耳毒性药物(例如顺铂、庆大霉素)与耳保护剂的组合减小药物的耳毒性作用。此外，局部施用潜在耳毒性药物还通过使用较少量但维持功效或使用目标量但持续较短的时间来减轻全身性施用会发生的毒性作用。
在一些实施例中，本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物另外包含耳保护剂，所述耳保护剂可降低、抑制或改善诸如本文所述的化疗剂和/或抗生素等药剂的耳毒性，或降低、抑制或改善包括过度噪声等其它环境因素的影响。耳保护剂的实例包括(但不限于)本文所述的耳保护剂、硫醇和/或硫醇衍生物和/或其医药上可接受的盐或衍生物(例如前药)。
耳保护剂允许耳毒性剂和/或抗生素以高于最大毒性剂量的剂量投予；否则，归因于耳毒性，耳毒性剂和/或抗生素应以较低的剂量投予。耳保护剂当任选地单独投予时还允许改善、降低或消除造成听力丧失和伴随影响(包括(但不限于)噪声诱发听力丧失和耳鸣)的环境因素的影响。
本文所述的任何调配物中耳保护剂的量相对于耳毒性化疗剂(例如顺铂)和/或耳毒性抗生素(例如庆大霉素)以摩尔∶摩尔计在约5∶1至约200∶1、约5∶1至约100∶1、或约5∶1至约20∶1范围内。本文所述的任何调配物中耳保护剂的量相对于耳毒性化疗剂(例如顺铂)和/或耳毒性抗生素(例如庆大霉素)以摩尔计为约50∶1、约20∶1或约10∶1。本文所述的任何耳感觉细胞调节剂调配物包含约10mg/ml至约50mg/ml、约20mg/ml至约30mg/ml、或约10mg/ml至25mg/ml耳保护剂。
此外，一些医药赋形剂、稀释剂或载剂具有潜在耳毒性。举例来说，氯化苯甲烃铵，一种常见防腐剂，具有耳毒性，因此如果引入前庭或耳蜗结构中，那么可能有害。在调配控制释放耳感觉细胞调节剂调配物时，建议避免或组合适当的赋形剂、稀释剂或载剂以从调配物中减少或消除可能的耳毒性组分或减少所述赋形剂、稀释剂或载剂的量。控制释放耳感觉细胞调节剂调配物任选地包括耳保护剂，诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素或铁螯合剂，以抵消可由使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂而产生的可能的耳毒性作用。
氨磷汀(Amifostine)
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用援救神经元和耳部毛细胞以免受顺铂诱发耳毒性的药剂。
氨磷汀(也称为WR-2721或
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)是一种耳保护剂。在某些情况下，其预防或改善由顺铂引起的对神经元和耳部毛细胞的损伤。在某些情况下，需要40mg/kg或40mg/kg以上的剂量来阻止或改善顺铂的耳毒性作用。
水杨酸
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用水杨酸。在某些情况下，水杨酸是一种抗氧化剂，且当在用氨基糖苷类治疗之前投予时，其保护耳部毛细胞和螺旋神经节神经元免受氨基糖苷类耳毒性。
Atoh/Math1调节
涵盖可供本文公开的调配物使用促进神经元和/或耳部毛细胞生长和/或再生的药剂。Atoh1是结合E-box的转录因子。在某些情况下，其在前庭和听觉系统的毛细胞发育期间表达。在某些情况下，剔除Atoh1的小鼠不发育耳部毛细胞。在某些情况下，表达Atoh1的腺病毒刺激经耳毒性抗生素处理的豚鼠的耳部毛细胞的生长和/或再生。因此，一些实施例合并调节Atoh1基因。
在一些实施例中，投予个体经工程改造以运载人类Atoh1基因的载体(“Atoh1载体”)。关于形成Atoh1载体的技术的揭示内容参看美国公开案第2004/02475750号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。在一些实施例中，Atoh1载体是反转录病毒。在一些实施例中，Atoh1载体不是反转录病毒(例如其是腺病毒；慢病毒；或聚合物传递系统，诸如METAFECTENE、
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或MIRUS TRANSIT)。
在一些实施例中，Atoh1载体并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。
在某些情况下，在投予Atoh1载体之后，Atoh1载体感染投予部位处的细胞(例如耳蜗、柯替氏器和/或前庭迷路细胞)。在某些情况下，Atoh1序列并入个体的基因组中(例如当Atoh1载体是反转录病毒时)。在某些情况下，疗法将需要周期性再投予(例如当Atoh1载体不是反转录病毒时)。在一些实施例中，疗法每年再投予。在一些实施例中，疗法每半年再投予。在一些实施例中，疗法在个体中度(即个体自始至终不能听到小于41db至55dB的频率)至深度(即个体自始至终不能听到小于90dB的频率)听力丧失时再投予。
在一些实施例中，投予个体Atoh1多肽。在一些实施例中，Atoh1多肽并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶经放置与圆窗膜接触。
在一些实施例中，投予个体调节Atoh1基因的表达或Atoh1多肽的活性的医药学上可接受的药剂。在一些实施例中，Atoh1基因的表达或Atoh1多肽的活性上调。在一些实施例中，Atoh1基因的表达或Atoh1多肽的活性下调。
在某些情况下，鉴别激动或拮抗Atoh1的化合物(例如通过使用高通量筛选)。在一些实施例中，构筑体经设计以使报告基因放置在E-box序列的下游。在一些实施例中，报告基因是荧光素酶、CAT、GFP、β-内酰胺酶或β-半乳糖苷酶。在某些情况下，Atoh1多肽结合E-box序列且引发报告基因的转录和表达。在某些情况下，Atoh1激动剂帮助或促进Atoh1结合于E-box序列，从而相对于预定基线表达水平增强报告基因的转录和表达。在某些情况下，Atoh1拮抗剂阻断Atoh1结合于E-box，从而相对于预定基线表达水平降低报告基因的转录和表达。
BRN-3调节剂
涵盖可供本文公开的调配物使用促进神经元和/或耳部毛细胞生长和/或再生的药剂。BRN-3是一组转录因子，包括(但不限于)BRN-3a、BRN-3b和BRN-3c。在某些情况下，其表达于有丝分裂期后的毛细胞。在某些情况下，剔除BRN-3c的小鼠的毛细胞不发育静纤毛和/或发生细胞死亡。在某些情况下，BRN3基因调控内耳支持细胞分化成内耳感觉细胞。因此，一些实施例合并BRN3基因和/或多肽的调节。
在一些实施例中，投予个体经工程改造以携带人类BRN-3基因的载体(“BRN3载体”)。在一些实施例中，BRN3载体是反转录病毒。在一些实施例中，BRN3载体不是反转录病毒(例如其是腺病毒；慢病毒；或聚合物传递系统，诸如METAFECTENE、
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Figure BPA00001308809100342
或MIRUS TRANSIT)。
在一些实施例中，在暴露于耳毒性剂(例如氨基糖苷类或顺铂)或响度足以诱发听觉损伤的声音之前、期间或之后投予个体BRN3载体。
在一些实施例中，BRN3载体并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。
在某些情况下，在投予BRN3载体之后，BRN3载体感染投予部位处的细胞(例如耳蜗、柯替氏器和/或前庭迷路细胞)。在某些情况下，BRN3序列并入个体的基因组中(例如当BRN3载体是反转录病毒时)。在某些情况下，疗法将需要周期性再投予(例如当BRN3载体不是反转录病毒时)。
在一些实施例中，投予个体BRN3多肽。在一些实施例中，BRN3多肽并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶经放置与圆窗膜接触。
在一些实施例中，投予个体调节BRN3基因的表达或BRN3多肽的活性的医药学上可接受的药剂。在一些实施例中，BRN3基因的表达或BRN3多肽的活性上调。在一些实施例中，BRN3基因的表达或BRN3多肽的活性下调。
在一些实施例中，鉴别激动或拮抗BRN3的化合物(例如通过使用高通量筛选)。在一些实施例中，构筑体经设计以使报告基因放置在BRN3结合位点的下游。在一些实施例中，BRN3结合位点具有序列ATGAATTAAT(SBNR3)。在一些实施例中，报告基因是荧光素酶、CAT、GFP、β-内酰胺酶或β-半乳糖苷酶。在某些情况下，BRN3多肽结合SBNR3序列且引发报告基因的转录和表达。在某些情况下，BRN3激动剂帮助或促进BRN3结合于SBNR3序列，从而相对于预定基线表达水平增强报告基因的转录和表达。在某些情况下，BRN3拮抗剂阻断BRN3结合于SBNR3，从而相对于预定基线表达水平降低报告基因的转录和表达。
氨基甲酸酯
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。在某些情况下，氨基甲酸酯化合物保护神经元和耳部毛细胞免受谷氨酸诱发的兴奋性毒性。因此，一些实施例合并使用氨基甲酸酯化合物。在一些实施例中，氨基甲酸酯化合物是2-苯基-1，2-乙二醇单氨基甲酸酯和二氨基甲酸酯、其衍生物和/或其组合。
γ-分泌酶抑制剂
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用抑制Notch1信号传导的药剂。Notch1是参与细胞发育的跨膜多肽。在一些实施例中，抑制Notch1信号传导的药剂是γ-分泌酶抑制剂。在某些情况下，用耳毒性剂治疗之后γ-分泌酶抑制剂抑制Notch1会引起耳部毛细胞产生/生长。在一些实施例中，γ-分泌酶抑制剂是LY450139(羟基戊酰基单苯并己内酰胺)、L685458(1S-苯甲基-4R[1-[1-S-氨甲酰基-2-苯乙基氨甲酰基)-1S-3-甲基丁基氨甲酰基]-2R-羟基-5-苯基戊基}氨基甲酸叔丁酯)；LY411575(N2-[(2S)-2-(3，5-二氟苯基)-2-羟基乙酰基]-N1[(7S)-5-甲基-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[bid]氮呯-7基]-L-丙氨酰胺)、MK-0752(默克(Merck))、塔夫比尔(tarenflurbil)和/或BMS-299897(2-[(1R)-1-[[(4-氯苯基)磺酰基](2，5-二氟苯基)氨基]乙基]-5-氟苯丙酸)。
谷氨酸受体调节剂
本文提供治疗特征在于谷氨酸受体调控异常(例如过度活化或过度刺激)的耳部病症的方法。在一些实施例中，本文公开的方法包含向有需要个体投予包含谷氨酸受体拮抗剂的组合物。本文未公开但适用于改善或根除耳部病症的谷氨酸受体拮抗剂明确地包括于所呈示的实施例范围内并且意欲属于所述范围。
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用调节谷氨酸受体的药剂。在一些实施例中，谷氨酸受体是AMPA受体和/或第II组或第III组mGlu受体。在一些实施例中，谷氨酸受体是NMDA受体。在一些实施例中，谷氨酸受体调节剂是谷氨酸受体拮抗剂。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是非竞争性拮抗剂。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是小分子。
在一些实施例中，调节AMPA受体的药剂是AMPA受体拮抗剂。在一些实施例中，拮抗AMPA受体的药剂是CNQX(6-氰基-7-硝基喹喔啉-2，3-二酮)；NBQX(2，3-二羟基-6-硝基-7-氨磺酰基-苯并[f]喹喔啉-2，3-二酮)；DNQX(6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮)；犬尿喹啉酸；2，3-二羟基-6-硝基-7-氨磺酰基苯并-[f]喹噁啉或其组合。
在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是NMDA受体拮抗剂。在一些实施例中，调节NMDA受体的药剂是NMDA受体拮抗剂。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是1-氨基金刚烷、右美沙芬(dextromethorphan)、右羟吗喃(dextrorphan)、伊波加因(ibogaine)、艾芬地尔(ifenprodil)、(S)-氯胺酮(ketamine)、(R)-氯胺酮、美金刚(memantine)、地佐环平(dizocilpine)(MK-801)、加环利定(gacyclidine)、AM-101、曲索罗地(traxoprodil)、D-2-氨基-5-膦酸基戊酸(D-AP5)、3-((±)2-羧基哌嗪-4-基)-丙基-1-磷酸(CPP)、芋螺睡眠肽(conantokin)、7-氯犬尿胺酸(7-chlorokynurenate，7-CK)、利可替奈(licostinel)、一氧化氮、苯环利定(phencyclidine)、利鲁唑(riluzole)、替来他明(tiletamine)、阿替加奈(aptiganel)、瑞吗米德(remacimide)、DCKA(5，7-二氯犬尿喹啉酸)、犬尿喹啉酸、1-氨基环丙甲酸(ACPC)、AP7(2-氨基-7-膦酸基庚酸)、APV(R-2-氨基-5-膦酸基戊酸酯)、CPPene(3-[(R)-2-羰基哌嗪-4-基]-丙-2-烯基-1-膦酸)；(+)-(1S，2S)-1-(4-羟基-苯基)-2-(4-羟基-4-苯基(N-哌啶基))-1-丙醇；(1S，2S)-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-(4-羟基-4-苯基(N-哌啶基))-1-丙醇；(3R，4S)-3-(4-(4-氟苯基)-4-羟基哌啶-1-基-)-色满-4，7-二醇；(1R*，2R*)-1-(4-羟基-3-甲基苯基)-2-(4-(4-氟-苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-丙-1-醇-甲磺酸酯或其组合。在一些实施例中，NMDA受体拮抗剂是芳基环烷基胺。在一些实施例中，NMDA受体拮抗剂是(S)-氯胺酮或其盐。在一种喹唑啉些实施例中，NMDA受体拮抗剂是喹唑啉。在一些实施例中，NMDA受体拮抗剂是7-CK或其盐。在一些实施例中，NMDA受体拮抗剂是AM-101或其盐。
在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)转运蛋白肽和(b)抑制NMDA受体与NMDA受体相互作用蛋白质的相互作用的肽。如本文所使用，“转运蛋白肽”意思是促进肽渗透到细胞和组织中的肽。在一些实施例中，转运蛋白肽是TAT。
在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)TAT肽和(b)抑制NMDA受体与NMDA受体相互作用蛋白质的相互作用的肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)(D)-TAT肽和(b)抑制NMDA受体与NMDA受体相互作用蛋白质的相互作用的肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)转运蛋白肽和(b)NR2B9c肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)转运蛋白肽和(b)(D)-NR2B9c肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)(D)-TAT肽和(b)(D)-NR2B9c肽。在一些实施例中，谷氨酸受体拮抗剂是融合肽，包含(a)转运蛋白肽和(b)(L)-NR2B9c肽。
在某些情况下，AMPA和NMDA谷氨酸受体因结合过量谷氨酸而过度活化会在其控制下过度打开离子通道。在某些情况下，这产生异常高水平的Ca2+和Na+进入神经元。在某些情况下，Ca2+和Na+流入神经元中会活化多种酶，包括(但不限于)磷脂酶、核酸内切酶和蛋白酶。在某些情况下，这些酶过度活化对细胞骨架、质膜、线粒体和神经元DNA产生损伤。另外，在某些情况下，多个促凋亡基因和抗凋亡基因的转录由Ca2+水平控制。
mGlu受体，不同于AMPA和NMDA受体，不直接控制离子通道。然而，在某些情况下，其通过活化生物化学级联间接控制离子通道的打开。mGlu受体分为三组。在某些情况下，第II组和III组的成员通过预防或降低cAMP的形成降低或抑制突触后电位。在某些情况下，这引起神经传递质、尤其谷氨酸的释放减少。GRM7是编码mGlu7受体，一个第III组受体的基因。在某些情况下，mGlu7的激动作用引起谷氨酸的突触浓度降低。这改善谷氨酸兴奋性毒性。
在一些实施例中，谷氨酸受体是第II组mGlu受体。在一些实施例中，调节第II组mGlu受体的药剂是第II组mGlu受体激动剂。在一些实施例中，第II组mGlu受体激动剂是LY389795((-)-2-硫杂-4-氨基二环-己烷-4，6-二甲酸酯)；LY379268((-)-2-氧杂-4-氨基二环-己烷-4，6-二甲酸酯)；LY354740((+)-2-氨基二环-己烷-2，6-二甲酸酯)；DCG-IV((2S，2′R，3′R)-2-(2′，3′-二羧基环丙基)甘氨酸)；2R，4R-APDC(2R，4R-4-氨基吡咯烷-2，4-二甲酸酯)、(S)-3C4HPG((S)-3-羧基-4-羟基苯基甘氨酸)；(S)-4C3HPG((S)-4-羧基-3-羟基苯基甘氨酸)；L-CCG-I((2S，1′S，2′S)-2-(羧基环丙基)甘氨酸)和/或其组合。
在一些实施例中，mGlu受体是第III组mGlu受体。在一些实施例中，第III组mGlu受体是mGlu7。在一些实施例中，调节第III组mGlu受体的药剂是第III组mGlu受体激动剂。在一些实施例中，第III组mGlu受体激动剂是ACPT-I((1S，3R，4S)-1-氨基环戊烷-1，3，4-三甲酸)；L-AP4(L-(+)-2-氨基-4-膦酸基丁酸)；(S)-3，4-DCPG((S)-3，4-二羧基苯基甘氨酸)；(RS)-3，4-DCPG((RS)-3，4-二羧基苯基甘氨酸)；(RS)-4-膦酸基苯基甘氨酸((RS)PPG)；AMN082(，N′-双(二苯基甲基)-1，2-乙二胺二盐酸盐)；DCG-IV((2S，2′R，3′R)-2-(2′，3′-二羧基环丙基)甘氨酸)和/或其组合。在一些实施例中，mGlu受体是mGlu7。在一些实施例中，mGlu7激动剂是AMN082。在一些实施例中，mGlu受体调节剂是3，5-二甲基吡咯-2，4-二甲酸2-丙酯4-(1，2，2-三甲基-丙基)酯(3，5-二甲基PPP)；3，3′-二氟苄连氮(DFB)、3，3′-二甲氧基苄连氮(DMeOB)、3，3′-二氯苄连氮(DCB)和分子药理学(Mol.Pharmacol.)2003，64，731-740中揭示的其它mGluR5变构调节剂；(E)-6-甲基-2-(苯基二氮烯基)吡啶-3-醇(SIB 1757)；(E)-2-甲基-6-苯乙烯基吡啶(SIB1893)；2-甲基-6-(苯基乙炔基)吡啶(MPEP)、2-甲基-4-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)噻唑(MTEP)；7-(羟基亚氨基)环丙[b]色烯-1-二甲酸乙酯(CPCCOEt)、N-环己基-3-甲基苯并[d]噻唑并[3，2-a]咪唑-2-甲酰胺(YM-298198)、三环[3.3.3.1]壬基喹喔啉-2-甲酰胺(NPS2390)；6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯基)喹唑啉-4-胺(LY 456239)；WO2004/058754和WO2005/009987中揭示的mGluR1拮抗剂；2-(4-(2，3-二氢-1H-茚-2基氨基)-5，6，7，8-四氢喹唑啉-2-基硫基)乙醇；3-(5-(吡啶-2-基)-2H-四唑-2-基)苯甲腈、2-(2-甲氧基-4-(4-(吡啶-2-基)噁唑-2-基)苯基)乙腈；2-(4-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲氧基苯基)乙腈；6-(3-甲氧基-4-(吡啶-2-基)苯基)咪唑并[2，1-b]噻唑；(S)-(4-氟苯基)(3-(3-(4-氟苯基)-1，2，4-噁二唑-5-基)哌啶-1-基)甲酮(ADX47273)和/或其组合。
在一些实施例中，谷氨酸受体调节剂是益智剂。涵盖可供本文公开的调配物使用通过活化谷氨酸受体调节神经元的信号传导的益智剂。在一些情况下，益智剂治疗或改善听力丧失(例如NIHL)或耳鸣。因此，一些实施例合并使用治疗NIHL或耳鸣的益智剂，包括(但不限于)吡拉西坦(piracetam)、奥拉西坦(Oxiracetam)、茴拉西坦(Aniracetam)、普拉西坦(Pramiracetam)、苯基吡拉西坦(Phenylpiracetam)(卡非多(Carphedon))、乙拉西坦(Etiracetam)、左乙拉西坦(Levetiracetam)、奈非西坦(Nefiracetam)、烟拉西坦(Nicoracetam)、罗拉西坦(Rolziracetam)、奈拉西坦(Nebracetam)、法索西坦(Fasoracetam)、考拉西坦(Coluracetam)、地来西坦(Dimiracetam)、伯瑞伐西坦(Brivaracetam)、塞来西坦(Seletracetam)和/或咯利普兰(Rolipram)。
营养剂
涵盖可供本文公开的调配物使用减轻或延迟耳神经元和/或毛细胞退化的药剂。在一些实施例中，涵盖可供本文所述的组合物使用作为营养剂的药剂，例如促进耳组织和/或神经元和/或毛细胞生长的药剂。还涵盖可供本文所述的组合物使用治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用促进神经元和耳毛细胞存活和/或神经元和耳毛细胞生长的营养剂。在一些实施例中，促进耳毛细胞存活的营养剂是生长因子。在一些实施例中，生长因子是神经营养素。在某些情况下，神经营养素是预防细胞死亡、预防细胞损害、恢复损害的神经元和耳毛细胞、和/或诱导祖细胞分化的生长因子。在一些实施例中，神经营养素是脑源性神经营养性因子(BDNF)、纤毛神经营养因子(CNTF)、胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)、神经营养蛋白-4(NT-4)或其组合。在一些实施例中，生长因子是成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子(PGF)和/或其激动剂。在一些实施例中，生长因子是成纤维细胞生长因子(FGF)受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体、表皮生长因子(EGF)受体、血小板源性生长因子的激动剂。在一些实施例中，生长因子是肝细胞生长因子。
在一些实施例中，营养剂和/或神经营养素是BDNF。在一些实施例中，营养剂和/或神经营养素是GDNF。在某些情况下，BDNF和GDNF是通过修复损伤的细胞、抑制ROS的产生和/或抑制细胞死亡来促进现存神经元(例如螺旋神经节神经元)和耳毛细胞存活的神经营养素。在某些情况下，其还促进祖神经细胞和祖耳毛细胞分化。另外，在某些情况下，其保护脑神经VII以免退化。在一些实施例中，BDNF结合成纤维细胞生长因子投予。
在一些实施例中，神经营养素是神经营养蛋白-3。在某些情况下，神经营养蛋白-3促进现存神经元和耳毛细胞存活，且促进祖神经细胞和祖耳毛细胞分化。另外，在某些情况下，其保护VII神经以免退化。
在一些实施例中，神经营养素是CNTF。在某些情况下，CNTF促进神经传递素合成和神经炎发展。在一些实施例中，CNTF结合BDNF投予。
在一些实施例中，营养剂和/或神经营养素是GDNF。在某些情况下，GDNF表达通过用耳毒性剂处理来增加。另外，在某些情况下，用外源性GDNF处理的细胞在外伤后的存活率高于未处理的细胞。
在一些实施例中，营养剂和/或生长因子是表皮生长因子(EGF)。在一些实施例中，EGF是调蛋白(HRG)。在某些情况下，HRG刺激椭圆囊感觉上皮的增生。在某些情况下，HRG结合受体在前庭和听觉感觉上皮中发现。
在一些实施例中，营养剂和/或生长因子是胰岛素样生长因子(IGF)。在一些实施例中，IGF是IGF-1。在一些实施例中，IGF-1是美卡舍明(mecasermin)。在某些情况下，IGF-1减弱因暴露于氨基糖苷类诱发的损伤。在某些情况下，IGF-1刺激耳蜗神经节细胞的分化和/或成熟。
在一些实施例中，FGF受体激动剂是FGF-2。在一些实施例中，IGF受体激动剂是IGF-1。FGF与IGF受体在构成椭圆囊上皮的细胞中发现。
在一些实施例中，生长因子是肝细胞生长因子(HGF)。在一些情况下，HGF保护耳蜗毛细胞免受噪声诱发的损伤且降低噪声暴露引起的ABR阈移。
还涵盖可供本文描述的耳用调配物使用如下生长因子，包括促红细胞生成素(EPO)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、生长分化因子-9(GDF9)、胰岛素样生长因子(IGF)、肌肉生长抑制素(Myostatin)(GDF-8)、血小板源性生长因子(PDGF)、促血小板生成素(TPO)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)或其组合。还涵盖可供本文描述的耳用组合物使用本文所述的营养因子，包括抗氧化剂和/或维生素。
抗细胞间粘附分子-1抗体
涵盖可供本文公开的调配物使用抗细胞间粘附分子(ICAM)的抗体。在一些情况下，ICAM阻断与噪声暴露相关的活性氧类的级联。在一些情况下，调节与噪声暴露相关的活性氧类级联可改善或减缓耳神经元和/或毛细胞的退化。因此，一些实施例合并使用作为ICAM抗体(例如抗ICAM-1Ab、抗ICAM-2Ab等)的药剂。
耳保护剂
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用耳保护剂。在一些实施例中，耳保护剂是本文所述的谷氨酸受体拮抗剂。在一些实施例中，耳保护剂是本文所述的皮质类固醇。在一些实施例中，耳保护剂是调节谷胱甘肽过氧化酶(GPx)的药剂。酶GPx减少耳蜗中的活性氧类(ROS)且维持内耳神经元和/或毛细胞的健康。GPx调节剂包括(但不限于)谷胱甘肽过氧化酶模拟物，诸如2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮(依布硒(ebselen)，SPI-1005)、6A，6B-二硒酸-6A′，6B′-硒桥联的β-环糊精(6-diSeCD)和2，2′-二硒基-双-β-环糊精(2-diSeCD)。
在一些实施例中，使用耳保护剂可减缓或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或听力下降。耳保护剂包括(但不限于)D-甲硫氨酸、L-甲硫氨酸、乙硫氨酸、羟基甲硫氨酸、甲硫醇、氨磷汀、巯乙磺酸钠(2-硫基乙烷磺酸钠)、D-甲硫氨酸与L-甲硫氨酸的混合物、N-乙酰基甲硫氨酸(NAM)、降甲硫氨酸、高甲硫氨酸、S-腺苷-L-甲硫氨酸、二乙基二硫氨基甲酸酯、依布硒(ebselen)(2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)、硫代硫酸钠、AM-111(一种细胞可渗透的JNK抑制剂，(实验室耳用SAS(Laboratoires Auris SAS))、N-乙酰基-DL-甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、半胱胺、N-乙酰基半胱氨酸(NAC)、谷胱甘肽、谷胱甘肽乙酯、谷胱甘肽二乙酯、谷胱甘肽三乙酯、半胱胺、胱硫醚、N，N′-二乙酰基-L-胱氨酸(DiNAC)、2(R，S)-D-核-(1′，2′，3′，4′-四羟基丁基)-噻唑烷-4(R)-甲酸(RibCys)、2-烷基噻唑烷2(R，S)-D-核-(1′，2′，3′，4′-四羟基丁基)噻唑烷(RibCyst)和2-氧-L-噻唑烷-4-甲酸(OTCA)、水杨酸、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、甲酰四氢叶酸钙(leucovorin calcium)、右雷佐生(dexrazoxane)、吡拉西坦、奥拉西坦、茴拉西坦、普拉西坦、苯基吡拉西坦(卡非多)、乙拉西坦、左乙拉西坦、奈非西坦、烟拉西坦、罗拉西坦、奈拉西坦、法索西坦、考拉西坦、地来西坦、伯瑞伐西坦、塞来西坦、咯利普兰和/或其组合。
在一些实施例中，耳保护剂包括黄嘌呤氧化酶抑制剂。黄嘌呤氧化酶抑制剂的非限制性实例包括别嘌呤醇(allopurinol)；1-甲基别嘌呤醇；2-甲基别嘌呤醇；5-甲基别嘌呤醇；7-甲基别嘌呤醇；1，5-二甲基别嘌呤醇；2，5-二甲基别嘌呤醇；1，7-二甲基别嘌呤醇；2，7-二甲基别嘌呤醇；5，7-二甲基别嘌呤醇；2，5，7-三甲基别嘌呤醇；1-乙氧羰基别嘌呤醇；和1-乙氧羰基-5-甲基别嘌呤醇。
在一些实施例中，耳保护剂与毒物组合使用。
毛细胞再生调节剂
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞再生的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂使耳毛细胞和/或支持细胞增生和/或再生。因此，一些实施例合并使用周期素依赖性激酶(CDK)调节剂。在一些实施例中，CDK调节剂是p27Kip1调节剂。p27Kip1介导柯替氏器的感觉毛细胞再生。在一些情况下，内耳感觉毛细胞(例如短毛细胞)通过刺激支持细胞(例如汉森细胞(Hansen′s cell)、代特细胞(Deiter′s cell)和/或皮勒细胞(Pillar′s cell)等)增生而再生。在一些情况下，周期素依赖性激酶p27Kip1调节剂是调节p27Kip1活性的反义分子(例如siRNA分子)或肽分子(例如p27Kip1的内源性配体)。
在一些实施例中，本文描述的调配物包含能够刺激内耳感觉毛细胞或内耳支持细胞的形成的核酸和/或转录因子(例如POU4F1、POU4F2、POU4F3、Brn3a、Brn3b和/或Brn3c等)。所述核酸分子和/或转录因子的非限制性实例包括但不限于美国申请公开案第20070041957号和第20030203482号中描述的分子，所述公开案中的揭示内容以引用的方式并入本文中。
免疫系统细胞
涵盖可供本文公开的调配物使用减缓、逆转或延迟耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用参与耳部毛细胞和神经元修复的细胞。在一些实施例中，参与耳部毛细胞和神经元修复的细胞是巨噬细胞、小胶质细胞和/或小胶质细胞样细胞。在某些情况下，巨噬细胞和小胶质细胞的浓度在因耳毒性剂治疗而受到损伤的耳朵中会增加。在某些情况下，小胶质细胞样细胞去除耳毒性抗生素新霉素所致的废物。
耳毒性剂和毒物
涵盖可供本文公开的调配物使用破坏神经元和/或耳部毛细胞的药剂。因此，一些实施例合并使用致命性损伤和/或诱发耳神经元和/或耳部毛细胞死亡的药剂。在一些实施例中，耳感觉细胞(例如毛细胞)的死亡可治疗与本文所述的任何耳部疾病或病状相关的症状(例如眩晕)。在一些实施例中，毒物在耳朵中诱导减轻诸如眩晕等症状的化学性病变。在一些实施例中，致命性损伤和/或诱发耳神经元和/或耳部毛细胞死亡的药剂是氨基糖苷类抗生素(例如庆大霉素和阿米卡星)、大环内酯类抗生素(例如红霉素)、糖肽抗生素(例如万古霉素)、袢利尿剂(例如呋喃苯胺酸)、烟碱、6-羟基多巴胺(6-OHDPAT)、6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)等。在一些实施例中，本文所述的组合物包含用于通过选择性破坏耳朵中的毛细胞治疗眩晕的毒物。在一些所述实施例中，包含毒物的耳用组合物是有利的；所述组合物提供治疗眩晕的治疗益处，因为其非全身性投予至耳朵中且不产生与全身性投予毒物相关的副作用。
在一些实施例中，本文所述的组合物适用于临床前动物研究(例如动物豚鼠模型研究)。在一些情况下，包含毒物的本文所述的组合物用于在动物耳朵中诱导化学性病变。在一些情况下，使用所述动物测试本文所述的组合物在动物模型中的治疗功效。
成视网膜细胞瘤蛋白质调节
涵盖可供本文公开的调配物使用调节耳神经元和/或毛细胞退化、促进耳神经元和/或毛细胞生长的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。本文另外涵盖破坏神经元和/或耳部毛细胞的药剂。因此，一些实施例合并使用调节成视网膜细胞瘤蛋白质(pRB)的药剂。pRB是口袋蛋白质家族的成员。其由RB1基因编码。在某些情况下，其通过结合转录因子E2f家族和使之失活抑制从G1期转变到S期。在某些情况下，其还调控毛细胞的分化和存活。在某些情况下，pRB剔除小鼠显示毛细胞的增生增加。
在一些实施例中，调节一种或一种以上pRB的药剂是pRB的激动剂。在一些实施例中，调节一种或一种以上pRB的药剂是pRB的拮抗剂。在某些情况下，鉴别激动或拮抗pRB的化合物(例如通过使用高通量筛选)。在一些实施例中，构筑体经设计以使报告基因放置在E2F结合序列的下游。在一些实施例中，结合序列是TTTCGCGC。在一些实施例中，报告基因是荧光素酶、CAT、GFP、β-内酰胺酶或β-半乳糖苷酶。在某些情况下，E2f结合引起报告基因转录和表达的结合序列。在某些情况下，pRB的激动剂引起pRB与E2f的结合增加。在某些情况下，pRB与E2f的结合的增加引起报告基因的转录和表达降低。在某些情况下，pRB的拮抗剂引起pRB与E2f的结合降低。在某些情况下，pRB与E2f的结合的降低引起报告基因的转录和表达增加。
在一些实施例中，调节pRB的药剂是siRNA分子。在某些情况下，siRNA分子通过RNA干扰(RNAi)抑制RB1基因转录。在一些实施例中，产生具有与RB1mRNA序列互补的序列的双链RNA(dsRNA)分子(例如通过PCR)。在一些实施例中，产生具有与RB1mRNA互补的序列的20-25bp siRNA分子。在一些实施例中，20-25bp siRNA分子在各链的3′端具有2-5bp悬臂以及5′磷酸末端和3′羟基末端。在一些实施例中，20-25bp siRNA分子具有钝端。关于产生RNA序列的技术，参看分子克隆：实验手册(MolecularCloning：A Laboratory Manual)，第2版(山姆布鲁克(Sambrook)等人，1989)和分子克隆：实验手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，第3版(山姆布鲁克(Sambrook)和拉塞尔(Russel)，2001)，在本文中共同称为“山姆布鲁克(Sambrook)”；分子生物学中的当前方案(Current Protocols in Molecular Biology)(F.M.阿索贝尔(F.M.Ausubel)等人编，1987，包括到2001年的增刊)；核酸化学中的当前方案(Current Protocolsin Nucleic Acid Chemistry)约翰威利父子公司(John Wiley&Sons，Inc.)，纽约(NewYork)，2000，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，dsRNA或siRNA分子并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。
在某些情况下，投予dsRNA或siRNA分子之后，投予部位处的细胞(例如耳蜗、柯替氏器和/或前庭迷路细胞)经dsRNA或siRNA分子转型。在某些情况下，转型后，dsRNA分子裂解成约20-25bp的多个片段，从而得到siRNA分子。在某些情况下，片段在各链3′端具有约2bp的悬臂。
在某些情况下，siRNA分子被RNA诱导的沉默复合体(RISC)分为两个链(引导链和反引导链)。在某些情况下，引导链并入RISC的催化组分(即，argonaute)中。在某些情况下，引导链结合互补的RB1mRNA序列。在某些情况下，RISC裂解RB1mRNA。在某些情况下，RB1基因的表达下调。
在一些实施例中，与RB1mRNA互补的序列并入载体中。在一些实施例中，所述序列位于两个启动子之间。在一些实施例中，启动子以反方向定向。在一些实施例中，载体与细胞接触。在某些情况下，细胞用载体转型。在某些情况下，转型之后，产生序列的有义链和反义链。在某些情况下，有义链和反义链杂交形成dsRNA分子，其可裂解成siRNA分子。在某些情况下，链杂交形成siRNA分子。在一些实施例中，载体是质粒(例如pSUPER；pSUPER.neo；pSUPER.neo+gfp)。
在一些实施例中，载体并入控制释放耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶中。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入内耳中。在一些实施例中，耳可接受的微球体或微粒、水凝胶、脂质体或热可逆性凝胶。在一些实施例中，耳可接受的微球体、水凝胶、脂质体、涂剂、泡沫体、现场形成海绵状材料、纳米胶囊或纳米球体或热可逆性凝胶注入耳蜗、柯替氏器、前庭迷路或其组合中。
甲状腺激素受体调节
涵盖可供本文公开的调配物使用减缓或逆转耳神经元和/或毛细胞退化和/或促进耳神经元和/或毛细胞生长的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用调节甲状腺激素(TH)受体的药剂。TH受体是核激素受体家族。这一家族包括(但不限于)TRα1和TRβ。在某些情况下，TRβ剔除小鼠显示对听觉刺激的反应减小和毛细胞中的K+电流减小。
在一些实施例中，调节一种或一种以上TH受体的药剂是一种或一种以上TH受体的激动剂。在一些实施例中，一种或一种以上TH受体的激动剂是T3(3，5，3′-三碘-L-甲状腺原氨酸)；KB-141(3，5-二氯-4-(4-羟基-3-异丙基苯氧基)苯基乙酸)；GC-1(3，5-二甲基-4-(4′-羟基-3′-异丙基苯甲基)-苯氧基乙酸)；GC-24(3，5-二甲基-4-(4′-羟基-3′-苯甲基)苯甲基苯氧基乙酸)；索布替姆(sobetirome)(QRX-431)；4-OH-PCB106(4-OH-2′，3，3′，4′，5′-五氯联苯)；MB07811((2R，4S)-4-(3-氯苯基)-2-[(3，5-二甲基-4-(4-羟基-3-异丙基苯甲基)苯氧基)甲基]-2-氧离子基-[1，3，2]-二氧膦烷)；MB07344(3，5-二甲基-4-(4-羟基-3-异丙基苯甲基)苯氧基)甲基膦酸)和其组合。在一些情况下，KB-141、GC-1、索布替姆和GC-24对TRβ具有选择性。
TRPV调节
涵盖可供本文公开的调配物使用调节神经元和毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用调节TRPV受体的药剂。瞬时受体电位通道辣椒素(TransientReceptor Potential Channel Vanilloid，TRPV)受体是钙可穿透的非选择性离子通道家族。存在六个家族成员：TRPV1-6。在某些情况下，用卡那霉素治疗后，TRPV1上调。另外，在某些情况下，TRPV4受体的拮抗作用使得小鼠易受到听觉损伤。另外，在某些情况下，辣椒碱(capsaicin)，一种TRPV1激动剂，预防局部缺血事件后的运动亢进。
在一些实施例中，调节一种或一种以上TRPV受体的药剂是一种或一种以上TRPV受体的激动剂。在一些实施例中，一种或一种以上TRPV受体的激动剂是辣椒碱、超强辣素(resiniferatoxin)或其组合。在一些实施例中，投予包含TRPV激动剂的耳感觉细胞调节组合物可减缓或逆转神经元和毛细胞的退化。
钠通道阻断剂
涵盖可供本文公开的调配物使用调节神经元和毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。在某些情况下，兴奋性毒性引起Na+通道过度打开。在某些情况下，这引起过量Na+离子进入神经元中。在某些情况下，过量Na+离子内流到神经元中引起神经元更频繁地放电。在某些情况下，这一放电增加使得自由基和发炎性化合物快速累积。在某些情况下，自由基损伤线粒体，耗尽细胞的能量储存。另外，在某些情况下，过量水平的Na+离子活化过量水平的酶，包括(但不限于)磷脂酶、核酸内切酶和蛋白酶。在某些情况下，这些酶过度活化对细胞骨架、质膜、线粒体和神经元DNA产生损伤。因此，一些实施例合并使用拮抗Na+通道的打开和减少或逆转耳毛细胞死亡和/或耳毛细胞损伤的药剂。
在一些实施例中，Na+通道阻断剂是长春西丁(vinpocetine)((3a，16a)-埃那美宁-14-甲酸乙酯((3a，16a)-Eburnamenine-14-carboxylic acid ethyl ester))；西帕曲近(sipatrigine)(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(2，3，5-三氯苯基)-嘧啶-4-胺)；阿米洛利(amiloride)(3，5-二氨基-N-(氨基亚氨基甲基)-6-氯吡嗪甲酰胺盐酸盐)；卡巴西平(carbamazepine)(5H-二苯并[b，f]氮呯-5-甲酰胺)；TTX(八氢-12-(羟基甲基)-2-亚氨基-5，9：7，10a-二甲桥-10aH-[1，3]二噁辛并[6，5-d]嘧啶-4，7，10，11，12-戊醇(octahydro-12-(hydroxymethyl)-2-imino-5，9：7，10a-dimethano-10aH-[1，3]dioxocino[6，5-d]pyrimidine-4，7，10，11，12-pentol))；RS100642(1-(2，6-二甲基-苯氧基)-2-乙基氨基丙烷盐酸盐)；美西律(mexiletine)((1-(2，6-二甲基苯氧基)-2-氨基丙烷盐酸盐))；QX-314(溴化N-(2，6-二甲基苯基氨基甲酰基甲基)三乙基铵)；苯妥英(phenytoin)(5，5-二苯基咪唑烷-2，4-二酮)；拉莫三嗪(lamotrigine)(6-(2，3-二氯苯基)-1，2，4-三嗪-3，5-二胺)；4030W92(2，4-二氨基-5-(2，3-二氯苯基)-6-氟甲基嘧啶)；BW1003C87(5-(2，3，5-三氯苯基)嘧啶-2，4-1.1-乙烷磺酸盐)；QX-222(氯化2-[(2，6-二甲基苯基)氨基]-N，N，N-三甲基-2-氧代乙铵)；氨溴索(ambroxol)(反式-4-[[(2-氨基-3，5-二溴苯基)甲基]氨基]环己醇盐酸盐)；R56865(N-[1-(4-(4-氟苯氧基)丁基]-4-哌啶基-N-甲基-2-苯并-噻唑胺)；芦贝鲁唑(lubeluzole)；阿吗灵(ajmaline)((17R，21α)-；阿吗兰-17，21-二醇((17R，21alpha)-ajmalan-17，21-diol))；普鲁卡因胺(procainamide)(4-氨基-N-(2-二乙基氨基乙基)苯甲酰胺盐酸盐)；氟卡胺(flecainide)；瑞唑乐(riluzoleor)或其组合。
皮质类固醇
涵盖可供本文公开的组合物和调配物使用减缓、逆转或延迟耳神经元和/或毛细胞退化的药剂和治疗或改善由内耳毛损坏、障碍、功能失常、损伤、脆弱或损失所致的听力丧失或下降的药剂。因此，一些实施例合并使用保护耳部毛细胞以免受耳毒素的药剂。在一些实施例中，保护耳部毛细胞以免受耳毒素的药剂是类固醇。在一些实施例中，保护耳部毛细胞以免受耳毒素的类固醇是皮质类固醇。在一些实施例中，皮质类固醇是曲安奈德(triamicinolone actenoide)和/或地塞米松(dexamethasone)。在某些情况下，曲安奈德和地塞米松保护耳部毛细胞以免受由内耳应答氧应力所产生的天然存在的毒素4-羟基-2，3-壬烯醛(HNE)引起的损伤。其它皮质类固醇包括(但不限于)21-乙酰氧基孕烯醇酮(21-acetoxypregnenolone)、阿氯米松(alclometasone)、阿尔孕酮(algestone)、安西奈德(amcinonide)、倍氯米松、倍他米松、布地奈德(budesonide)、氯泼尼松(chloroprednisone)、氯倍他索、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龙(clocortolone)、氯泼尼醇(cloprednol)、皮质酮(corticosterone)、可的松(cortisone)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximetasone)、地塞米松、二氟拉松(diflorasone)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟扎可特(fluazacort)、氟氯奈德(flucloronide)、氟米松(flumethasone)、氟尼缩松(flunisolide)、氟轻松(fluocinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟考丁酯(fluocortin butyl)、氟可龙(fluocortolone)、氟米龙(fluorometholone)、醋酸氟培龙(fluperolone acetate)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene acetate)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氟氢缩松(flurandrenolide)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、福莫可他(formocortal)、哈西奈德(halcinonide)、丙酸氯倍他索(halobetasol propionate)、卤米松(halometasone)、醋酸卤泼尼松(halopredone acetate)、氢可他酯(hydrocortamate)、氢化可的松(hydrocortisone)、氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮(mazipredone)、甲羟松(medrysone)、甲泼尼松(meprednisone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼卡酯(prednicarbate)、泼尼松龙(prednisolone)、25-二乙基氨基-醋酸泼尼松龙(prednisolone25-diethylamino-acetate)、泼尼松龙磷酸钠(prednisolone sodium phosphate)、泼尼松(prednisone)、戊酸泼尼松龙(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙、曲安奈德、苯曲安奈德(triamcinolonebenetonide)或己曲安奈德、或其磷酸盐前药或酯前药。
干细胞和分化的耳感觉细胞
涵盖可供本文公开的调配物使用增补和/或替换预先存在的耳神经元和/或毛细胞的细胞移植物。在一些实施例中，药剂是干细胞。在一些实施例中，药剂是部分或完全分化的耳感觉细胞。在一些实施例中，分化的耳感觉细胞源于人类供体。在一些实施例中，分化的耳感觉细胞源于干细胞，干细胞的分化在人工(例如实验室)条件下诱导。
干细胞是有能力分化成多种细胞类型的细胞。全能干细胞可分化成胚细胞或胚胎外细胞。多潜能细胞可分化成具有任何内胚层、中胚层或外胚层起源的细胞。多能细胞可分化成密切相关的细胞(例如造血干细胞)。虽然单能细胞可分化成仅一种类型的细胞，但如同其它干细胞一样具有自我更新的特征。在一些实施例中，干细胞是全能、多潜能、多能或单能的。另外，干细胞可进行有丝分裂而不进行自身分化(即，自我更新)。
胚胎干(ES)细胞是源自囊胚或早期胚芽的内细胞团的外胚层组织的干细胞。ES细胞是多潜能的。在一些实施例中，干细胞是ES细胞。成熟干细胞(也称为体细胞或生殖系细胞)是从发育的生物体分离的细胞，其中所述细胞具有自我更新的特征和分化成多种细胞类型的能力。成熟干细胞是多潜能的(例如在脐带血液中发现的干细胞)、多能或单能的。在一些实施例中，干细胞是成熟干细胞。
在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞与分化刺激剂组合投予。在一些实施例中，分化刺激剂是生长因子。在一些实施例中，生长因子是神经营养蛋白，例如神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养性因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)、神经营养蛋白-4(NT-4)或新颖神经营养蛋白-1(NNT1)。在一些实施例中，生长因子是FGF、EGF、IGF、PGF或其组合。
在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞投予有需要个体作为控制释放剂。在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞与控制释放耳感觉细胞调节剂组合投予有需要个体作为立即释放剂(例如于细胞悬浮液中)。在一些实施例中，控制释放耳感觉细胞调节剂是包含Atoh1或BRN3基因、靶向RB1的siRNA序列、生长因子或其组合的载体。
在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞投予耳蜗或前庭迷路。在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞经由鼓室内注射和/或耳后切口投予。在一些实施例中，干细胞和/或分化的耳感觉细胞与柯替氏器、前庭蜗神经和/或壶腹嵴接触。
立即释放剂
在一些实施例中，组合物另外包含耳神经元和/或毛细胞调节剂作为立即释放剂(其中耳神经元和/或毛细胞的立即释放调节剂是与控制释放剂相同的药剂)、另一耳神经元和/或毛细胞调节剂、其它治疗剂或其组合。在一些实施例中，立即释放剂是干细胞、分化的耳感觉细胞、免疫系统细胞、带有Atoh1基因拷贝的载体、带有BRN3基因拷贝的载体、siRNA序列、miRNA序列或其组合。
直接注射
在一些实施例中，一种药剂直接注入内耳中，包括穿过圆窗膜，而第二药剂投予于中耳中、中耳上或与圆窗膜接触以使所述第二药剂呈控制释放调配物形式。在一些实施例中，直接投予的药剂是干细胞、分化的耳感觉细胞、免疫系统细胞、带有Atoh1基因拷贝的载体、带有BRN3基因拷贝的载体、siRNA序列、miRNA序列或其组合。
活性剂浓度
在一些实施例中，本文所述的组合物的活性医药成分的浓度为以组合物的重量计约0.01％至约90％、约0.01％至约50％、约0.1％至约70％、约0.1％至约50％、约0.1％至约40％、约0.1％至约30％、约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、或约0.1％至约5％的活性成分或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的组合物的活性医药剂的浓度为以组合物的重量计约1％至约50％、约5％至约50％、约10％至约40％、或约10％至约30％的活性成分或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约70重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约60重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约50重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约40重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约30重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约20重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约15重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约10重量％的耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约5重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约2.5重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约1重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约0.5重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约0.1重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物包含以调配物的重量计约0.01重量％的耳感觉细胞调节剂或其医药学上可接受的前药或盐。在一些实施例中，本文所述的调配物的活性医药成分或其医药学上可接受的前药或盐的浓度为以调配物的体积计约0.1至约70mg/mL、约0.5mg/mL至约70mg/mL、约0.5mg/mL至约50mg/mL、约0.5mg/mL至约20mg/mL、约1mg至约70mg/mL、约1mg至约50mg/mL、约1mg/mL至约20mg/mL、约1mg/mL至约10mg/mL、或约1mg/mL至约5mg/mL的活性剂或其医药学上可接受的前药或盐。
组合疗法
在一些实施例中，本文所述的任何组合物或装置包含一种或一种以上活性剂和/或第二治疗剂，所述第二治疗剂包括(但不限于)止吐药、抗微生物剂、抗氧化剂、防腐剂等。
止吐剂
止吐剂任选地与本文公开的调配物组合使用。止吐剂包括异丙嗪(promethazine)、丙氯拉嗪、曲美苄胺(trimethobenzamide)和硫乙拉嗪(triethylperazine)。其它止吐剂包括5HT3拮抗剂，诸如多拉司琼(dolasetron)、格拉司琼(granisetron)、昂丹司琼(ondansetron)、托烷司琼(tropisetron)和帕洛诺司琼(palonosetron)；和抗精神病药，诸如氟哌利多(droperidol)。其它止吐剂包括抗组胺剂，诸如美克利嗪(meclizine)；吩嗪类，诸如奋乃静(perphenazine)和硫乙拉嗪(thiethyl perazine)；多巴胺拮抗剂(dopamineantagonist)，包括多潘立酮(domperidone)、氟哌利多(properidol)、氟哌啶醇(haloperidol)、氯丙嗪、异丙嗪、丙氯拉嗪、甲氧氯普胺(metoclopramide)和其组合；大麻碱，包括屈大麻酚(dronabinol)、大麻隆(nabilone)、塞替维克斯(sativex)和其组合；抗胆碱能药，包括东莨菪碱(scopolamine)；和类固醇，包括地塞米松(dexamethasone)；曲美苄胺、愈吐宁(emetrol)、异丙酚(propofol)、蝇蕈醇(muscimol)和其组合。
抗微生物剂
还涵盖抗微生物剂与本文公开的调配物一起使用。抗微生物剂包括作用于抑制或根除微生物(包括细菌、真菌或寄生虫)的药剂。特定的抗微生物剂可用于对抗特定微生物。因此，有经验的从业者将知道，抗微生物剂将视鉴别出的微生物或显示的症状而相关或适用。抗微生物剂包括抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂和抗寄生虫剂。
抗生素可包括阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、链霉素、妥布拉霉素、巴龙霉素(paromomycin)、格尔德霉素(geldanmycin)、除莠霉素(herbimycin)、氯碳头孢(loracarbef)、厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)、西司他汀(cilastatin)、美罗培南(meropenem)、头孢羟胺苄(cefadroxil)、头孢唑林(cefazolin)、头孢噻吩(cefalotin)、头孢胺苄(cefalexin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢噻吩(cefoxitin)、头孢丙烯(defprozil)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢克肟(cefixime)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢吡肟(cefepime)、头孢比普(ceftobiprole)、替考拉宁(teicoplanin)、万古霉素、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地红霉素(dirithromycin)、红霉素、罗红霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、泰利霉素(telithromycin)、壮观霉素(spectinomycin)、胺曲南(aztreonam)、阿莫西林(amoxicillin)、安比西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、卡本西林(carbenicillin)、邻氯青霉素(cloxacillin)、双氯青霉素(dicloxacillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、甲氧西林(meticillin)、乙氧萘青霉素(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素(penicillin)、哌拉西林(piperacillin)、替卡西兰(ticarcillan)、杆菌肽(bacitracin)、粘菌素(colistin)、多粘菌素B(polymyxin B)、环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovfloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、偶氮磺胺(prontosil)、磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、磺胺(sulfanimilimde)、柳氮磺吡啶(sulfsalazine)、磺胺异噁唑(sulfsioxazole)、甲氧苄啶(trimethoprim)、地美环素(demeclocycline)、多西环素(doxycycline)、米诺环素、土霉素(oxtetracycline)、四环素(tetracycline)、胂凡纳明(arsphenamine)、氯霉素(chloramphenicol)、氯林可霉素(clindamycin)、林可霉素(lincomycin)、乙胺丁醇(ethambutol)、磷霉素(fosfomycin)、梭链孢酸(fusidic acid)、呋喃唑酮(furazolidone)、异烟肼(isoniazid)、利奈唑胺(linezolid)、甲硝唑(metronidazole)、莫匹罗星(mupirocin)、硝化呋喃妥因(nitrofurantoin)、平板霉素(platensimycin)、吡嗪酰胺(pyrazinamide)、奎奴普汀(quinuspristin)/达福普汀(dalfopristin)、利福平(rifampin)、替硝唑(tinidazole)和其组合。
抗病毒剂可包括阿昔洛韦(acyclovir)、泛昔洛韦(famciclovir)和泛拉西洛韦(valacyclovir)。其它抗病毒剂包括阿巴卡韦(abacavir)、阿昔洛韦(aciclovir)、阿德福韦(adfovir)、金刚胺(amantadine)、安普那韦(amprenavir)、阿比朵尔(arbidol)、阿扎那韦(atazanavir)、阿替普拉(artipla)、溴夫定(brivudine)、西多福韦(cidofovir)、卡贝韦(combivir)、依度尿苷(edoxudine)、依发韦仑(efavirenz)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩福韦地(enfuvirtide)、因提弗(entecavir)、福维森(fomvirsen)、夫沙那韦(fosamprenavir)、福卡奈特(foscarnet)、福弗奈特(fosfonet)、更昔洛韦(ganciclovir)、加德西(gardasil)、伊巴他滨(ibacitabine)、伊诺韦(imunovir)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、茚地那韦(indinavir)、肌苷(inosine)、整合酶抑制剂、干扰素(包括III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素)、拉米夫定(lamivudine)、洛匹那韦(lopinavir)、洛韦胺(loviride)、MK-0518、吗拉维诺(maraviroc)、吗啉胍(moroxydine)、奈非那韦(nelfinavir)、奈韦拉平(nevirapine)、奈克沙韦(nexavir)、核苷类似物、奥司他伟(oseltamivir)、喷昔洛韦(penciclovir)、帕拉米韦(peramivir)、普乐康尼(pleconaril)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、蛋白酶抑制剂、反转录酶抑制剂、病毒唑(ribavirin)、金刚乙胺(rimantadine)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、双脱氧胸苷(stavudine)、泰诺福韦(tenofovir)、泰诺福韦(tenofovir disoproxil)、替拉那韦(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三协韦(trizivir)、曲金刚胺(tromantadine)、特鲁瓦达(truvada)、缬更昔洛韦(valganciclovir)、维克利诺(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、伟拉咪定(viramidine)、扎西他滨(zalcitabine)、扎那米韦(zanamivir)、叠氮胸腺(zidovudine)和其组合。
抗真菌剂可包括阿莫罗芬(amrolfine)、布替萘芬(utenafine)、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、氟胞嘧啶(flucytosine)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、雷夫康唑(ravuconazole)、伏立康唑(voriconazole)、克霉唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、咪康唑(miconazole)、奥昔康唑(oxiconazole)、硫康唑(sulconazole)、特康唑(terconazole)、噻康唑(tioconazole)、尼柯霉素Z(nikkomycin Z)、卡泊芬净(caspofungin)、米卡芬净(micafungin)、阿尼芬净(anidulafungin)、两性霉素B(amphotericin B)、脂质体尼司汀(liposomal nystastin)、匹马菌素(pimaricin)、灰黄霉素(griseofulvin)、环吡酮胺(ciclopirox olamine)、卤普罗近(haloprogin)、托萘酯(tolnaftate)、十一碳烯酸盐(undecylenate)和其组合。抗寄生虫剂可包括双甲脒(amitraz)、硝硫氰胺(amoscanate)、阿维菌素(avermectin)、卡巴多司(carbadox)、乙胺嗪(diethylcarbamizine)、地美硝唑(dimetridazole)、二脒那秦(diminazene)、双氢除虫菌素(ivermectin)、杀丝虫剂(macrofilaricide)、马拉硫磷(malathion)、米塔班(mitaban)、奥沙尼喹(oxamniquine)、百灭宁(permethrin)、吡喹酮(praziquantel)、双羟萘酸噻嘧啶(prantel pamoate)、塞拉菌素(selamectin)、葡萄糖酸锑钠(sodium stibogluconate)、腐绝(thiabendazole)和其组合。
抗氧化剂
抗氧化剂任选地与本文所述的组合物组合使用。还涵盖抗氧化剂与本文公开的调配物一起使用作为调节耳神经元和/或毛细胞退化的药剂。因此，一些实施例合并使用抗氧化剂。在一些实施例中，抗氧化剂是维生素C、N-乙酰半胱氨酸、维生素E、依布硒啉(Ebselen)(2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)(又称为PZ 51或DR3305)、L-甲硫氨酸、艾地苯醌(Idebenone)(2-(10-羟基癸基)-5，6-二甲氧基-3-甲基-环己-2，5-二烯-1，4-二酮)。在一些实施例中，抗氧化剂是营养剂且促进健康细胞生长。
防腐剂
防腐剂任选地与本文所述的组合物组合使用。还涵盖防腐剂与本文公开的调配物一起使用。防腐剂包括(但不限于)乙酸、硼酸、龙胆紫、过氧化氢、过氧化脲、氯己定(chlorhexidine)、盐水、汞溴红(mercurochrome)、聚维酮碘(povidone iodine)、聚羟碘(polyhyroxine iodine)、甲酚盐和醋酸铝和其混合物。
其它药剂任选地用于本文所述的任何组合物或装置中。在一些实施例中，单胺氧化酶抑制剂(例如雷沙吉林(Rasagiline)，R(+)-N-炔丙基-1-氨基茚满)用于本文所述的任何组合物或装置中。在一些实施例中，腺苷拮抗剂(例如R-N6-苯基异丙基腺苷、1-2-氧代噻唑烷-4-甲酸(半胱氨酸前体(Procysteine))用于本文所述的任何组合物或装置中。活性剂和/或第二治疗剂的任何组合都与本文所述的组合物相容。
耳外科手术和植入物
在一些实施例中，本文所述的医药调配物、组合物或装置与(例如植入、短期使用、长期使用或去除)植入物(例如耳蜗植入物)组合使用。如本文所使用，植入物包括内耳或中耳医学装置，其实例包括耳蜗植入物、听力防护装置、听力改善装置、短电极、微假体或活塞样假体；针；干细胞移植物；药物传递装置；任何基于细胞的治疗剂；等。在一些情况下，植入物结合发生听力丧失的患者使用。在一些情况下，出生时即存在听力丧失。在一些情况下，听力丧失与引起骨再生和/或神经损伤和耳蜗结构快速消失和深度听力丧失的病状(诸如AIED、细菌性脑膜炎等)相关。
在一些情况下，植入物是耳中的免疫细胞或干细胞移植物。在一些情况下，植入物是小的电子装置，其具有放置在耳朵后面的外部部分和通过手术放置在皮肤内以帮助提供给深度耳聋或严重耳背者声音感觉的第二部分。举例来说，所述耳蜗医学装置植入物绕过耳朵受损部分且直接刺激听觉神经。在一些情况下，耳蜗植入物用于单侧耳聋中。在一些情况下，耳蜗植入物用于双侧耳朵耳聋中。
在一些实施例中，投予本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或装置与耳部介入(例如鼓室内注射、镫骨切除术、医学装置植入物或基于细胞的移植物)组合可延迟或防止由外部耳部介入(例如在耳朵中安装外部装置和/或细胞)引起的对耳结构的附带损伤，例如刺激、细胞损伤、细胞死亡、骨再生和/或神经元进一步退化。在一些实施例中，投予本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或装置与植入物组合与单独植入物相比使得听力丧失更有效地恢复。
在一些实施例中，投予本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或装置可减小由允许成功植入耳蜗装置的潜在病状(例如细菌性脑膜炎、自体免疫耳疾病(AIED))引起的对耳蜗结构的损害。在一些实施例中，投予本文所述的组合物或装置结合耳部外科手术、医学装置植入和/或细胞移植可减小或防止与耳部外科手术、医学装置植入和/或细胞移植相关的细胞损伤和/或死亡(例如耳感觉毛细胞死亡和/或损伤)。
在一些实施例中，投予本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或装置(例如包含生长因子的组合物或装置)结合耳蜗植入物或干细胞移植物具有营养作用(例如促进细胞健康生长和/或使植入物或移植物区域中的组织愈合)。在一些实施例中，营养作用为耳部外科手术期间或鼓室内注射程序期间所想要。在一些实施例中，营养作用为安装医学装置之后或细胞移植之后所想要。在一些所述实施例中，本文所述的耳感觉细胞调节剂组合物或装置经由直接耳蜗注射、经由耳蜗切开术或经由沉积于圆窗上来投予。
在一些实施例中，投予本文所述的消炎或免疫抑制组合物(例如包含诸如皮质类固醇等免疫抑制剂的组合物)可减少与耳部外科手术或植入医学装置或细胞移植物相关的炎症和/或感染。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的耳感觉细胞调节剂调配物可减少或消除外科手术后和/或植入后并发症(例如炎症、毛细胞损伤、神经元退化、骨再生等)。在一些情况下，给外科手术区域灌注本文所述的调配物可缩短外科手术后或植入后恢复时间。在一些实施例中，医学装置在植入耳朵中之前用本文所述的组合物涂布。
一方面，本文所述的调配物和其投药模式适用于直接灌注内耳隔室的方法。因此，本文所述的调配物适用于与耳部介入组合。在一些实施例中，耳部介入是植入程序(例如在耳蜗中植入听力装置)。在一些实施例中，耳部介入是外科手术，包括(但不限于)耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术、鼓膜切开术等。在一些实施例中，在耳部介入之前、耳部介入期间或耳部介入之后或其组合，给内耳隔室灌注本文所述的调配物。
在一些实施例中，当灌注与耳部介入组合进行时，耳感觉细胞组合物是立即释放组合物。在一些所述实施例中，本文所述的立即释放调配物是未增稠的组合物且实质上不含延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)。在一些所述实施例中，组合物含有以调配物重量计少于5％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，组合物含有以调配物重量计少于2％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，组合物含有以调配物重量计少于1％的延长释放组分(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物)。在一些所述实施例中，用于灌注外科手术区域的本文所述的组合物实质上不含胶凝组分，并且是立即释放组合物。
在其它实施例中，本文所述的组合物在耳部介入之后(例如植入医学装置或基于细胞的治疗剂之后)投予。在一些所述实施例中，在耳部介入之后投予的本文所述的组合物是立即释放或延长释放组合物，且含有本文所述的胶凝组分。
以下呈示(表1)涵盖供本文公开的调配物和装置使用的活性剂的实例。一种或一种以上活性剂用于本文所述的任何调配物或装置中。
供本文公开的调配物使用的活性剂(包括这些活性剂的医药上可接受的盐)
(表1)
  耳病状   治疗剂
  良性阵发性位置性眩晕   苯海拉明
  良性阵发性位置性眩晕   劳拉西泮
  良性阵发性位置性眩晕   美克利嗪
  良性阵发性位置性眩晕   昂丹司琼
  听力丧失   雌激素
  眩晕   DNQX
  眩晕   6-羟基多巴胺
  耳鸣   (S)-氯胺酮
  听力丧失   雌激素和孕酮(E+P)
  听力丧失   叶酸
  听力丧失   含0.03％氧氟沙星的乳酸林格氏液(Lactated Ringer′s)
  听力丧失   甲氨喋呤(Methotrexate)
  听力丧失   N-乙酰基半胱氨酸
  美尼尔氏病   倍他司汀(Betahistine)
  美尼尔氏病   西地那非(Sildenafil)
  美尼尔氏病   考尼伐坦
  中耳积液   肺炎球菌疫苗
  外耳炎   双氯芬酸钠；dexotc
  急性外耳炎   AL-15469A/AL-38905
  中耳炎   阿莫西林/棒酸盐
  中耳炎   链道酶α(Domase alfa)
  中耳炎   紫睢花(Echinacea purpurea)
  中耳炎   法罗培南酯(Faropenem medoxomil)
  中耳炎   左氧氟沙星
  中耳炎   PNCRM9
  中耳炎   肺炎球菌疫苗
  中耳炎   泰利霉素
  中耳炎   Zmax
  积液性中耳炎   兰索拉唑
  急性中耳炎   AL-15469A；AL-38905
  急性中耳炎   阿莫西林
  急性中耳炎   阿莫西林-棒酸盐
  急性中耳炎   阿奇霉素
  急性中耳炎   阿奇霉素SR
  急性中耳炎   头孢地尼
  急性中耳炎   健安喜耳痛滴液(Hyland′s earache drop)
  急性中耳炎   孟鲁司特
  急性中耳炎   肺炎球菌疫苗
  鼓室置管术伴随急性中耳炎   AL-15469A/AL38905
  慢性中耳炎   磺胺甲噁唑-甲氧苄啶
  化脓性中耳炎   阿奇霉素
  化脓性中耳炎   泰利霉素
  耳硬化症   乙酰半胱氨酸
  耳毒性   阿司匹林
  耳鸣   阿坎酸(Acamprosate)
  耳鸣   加巴喷丁(Gabapentin)
  耳鸣   莫达非尼(Modafinil)
  耳鸣   奈美胺(Neramexane)
  耳鸣   甲磺酸奈美胺(Neramexane mesylate)
  耳鸣   吡贝地尔(Piribedil)
  耳鸣   伐地那非(Vardenafil)
  耳鸣   维替匹坦(Vestipitant)+帕罗西汀(Paroxetine)
  耳鸣   维替匹坦
  耳鸣   硫酸锌
一般灭菌方法
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳用组合物。本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置经灭菌。本文公开的实施例中包括对用于人类的本文公开的医药组合物或装置进行灭菌的方法和工艺。目标在于提供相对不含导致感染的微生物的安全医药产品。美国食品与药物管理局(U.S.Food and DrugAdministration)在出版物“工业指南：利用无菌处理所产生的灭菌药物产品(Guidancefor Industry：Sterile Drug Products Produced byAseptic Processing)”中提供管理指南，可从http://www.fda.gov/cder/guidance/5882fnl.htm获得，其以全文引用的方式并入本文中。
如本文所使用，灭菌意思是用于破坏或去除产品或包装中所存在的微生物的工艺。使用可用于物体和组合物灭菌的任何适合的方法。可用于使微生物失活的方法包括(但不限于)应用极热、致命化学品或γ辐射。在一些实施例中，是一种制备耳部治疗调配物的工艺，其包含使调配物经受选自热灭菌、化学灭菌、辐射灭菌或过滤灭菌的灭菌方法。所使用的方法基本上取决于待灭菌的装置或组合物的性质。许多灭菌方法的详细描述提供于利平科特(Lippincott)、威廉姆斯(Williams)和威尔金斯(Wilkins)出版的雷明顿：药学科学与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)第40章中，且关于这一主题，以引用的方式并入本文中。
热灭菌
许多方法可以用于通过应用极热来灭菌。一种方法是通过使用饱和蒸汽高压灭菌器。在这一方法中，使温度为至少121℃的饱和蒸汽接触待灭菌的物体。在物体待灭菌的情况下，热直接转移到微生物，或通过加热待灭菌的水溶液整体间接转移到微生物。这一方法得到广泛实施，因为其在灭菌过程中具有灵活性、安全性且经济。
干热灭菌是一种用于杀死微生物且在高温下进行去热原的方法。这一工艺在适于将经HEPA过滤的无微生物空气加热到用于灭菌工艺的至少130-180℃的温度和用于去热原工艺的至少230-250℃的温度的装置中进行。复原浓缩或粉末调配物的水也用高压灭菌器灭菌。在一些实施例中，本文所述的调配物包含通过干式加热(例如在130-140℃的内部粉末温度下加热约7-11小时，或在150-180℃的内部温度下加热1-2小时)灭菌的微粉化耳感觉细胞调节剂(例如氯胺酮微粉)。
化学灭菌
化学灭菌方法是用于经不起极热灭菌的产品的替代方法。在这一方法中，使用多种具有杀菌性质的气体和蒸气(诸如环氧乙烷、二氧化氯、甲醛或臭氧)作为抗凋亡剂。环氧乙烷的杀菌活性是产生于例如因其能够用作反应性烷化剂。因此，灭菌工艺需要环氧乙烷蒸气与待灭菌的产品直接接触。
辐射灭菌
辐射灭菌的一个优点在于能够在无热降解或其它损害的情况下对许多类型的产品进行灭菌。常采用的辐射是β辐射或来自60Co源的γ辐射。γ辐射的渗透能力允许其用于许多产品类型的灭菌，包括溶液、组合物和不均匀混合物。照射的杀菌作用是产生于γ辐射与生物大分子的相互作用。这一相互作用产生带电荷的物质和自由基。诸如重排和交联过程等后续化学反应导致这些生物大分子丧失正常功能。本文所述的调配物还任选使用β照射灭菌。
过滤
过滤灭菌是一种用于从溶液中去除但不破坏微生物的方法。膜过滤器用于过滤对热敏感的溶液。所述过滤器是混合纤维素酯(MCE)、聚偏氟乙烯(PVF；也称为PVDF)或聚四氟乙烯(PTFE)的薄且坚固的均匀聚合物，且孔径在0.1至0.22微米的范围内。具有各种特征的溶液任选地使用不同的过滤膜过滤。举例来说，PVF和PTFE膜非常适于过滤有机溶剂，而水溶液经由PVF或MCE膜过滤。过滤器装置可在许多规模下使用，从连接于注射器的单点使用一次性过滤器到用于制造厂的商业规模过滤器。膜过滤器利用高压灭菌器或化学灭菌来灭菌。膜过滤系统的验证按照标准化方案(用于对液体进行灭菌的过滤器的微生物评估(Microbiological Evaluation of Filters for Sterilizing Liquids)，第4卷第3期，华盛顿特区(Washington，D.C)：健康工业制造商协会(Health IndustryManufacturers Association)，1981)进行且涉及用已知量(约107个/cm2)的诸如缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)(ATCC 19146)异常小微生物激发膜过滤器。
医药组合物任选地通过穿过膜过滤器来灭菌。包含纳米粒子(美国专利第6,139,870号)或多层微脂粒(理查德(Richard)等人，国际药学杂志(International Journal ofPharmaceutics)(2006)，312(1-2)：144-50)的调配物可通过经由0.22微米过滤器过滤来灭菌而不破坏其组织结构。
在一些实施例中，本文公开的方法包含借助于过滤灭菌来对调配物(或其组分)进行灭菌。在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物包含粒子，其中所述粒子调配物适于过滤灭菌。在另一实施例中，所述粒子调配物包含尺寸小于300nm、尺寸小于200nm、尺寸小于100nm的粒子。在另一实施例中，耳可接受的调配物包含粒子调配物，其中粒子的无菌性可通过无菌过滤前驱组分溶液来确保。在另一实施例中，耳可接受的调配物包含粒子调配物，其中粒子调配物的无菌性通过低温无菌过滤来确保。在另一实施例中，低温无菌过滤在0℃与30℃之间、0℃与20℃之间、0℃与10℃之间、10℃与20℃之间或20℃与30℃之间的温度下进行。
在另一实施例中，是一种制备耳可接受的粒子调配物的工艺，其包含：在低温下经由灭菌过滤器过滤含有粒子调配物的水溶液；冻干无菌溶液；和在投予之前用无菌水复原粒子调配物。在一些实施例中，本文所述的调配物制造成呈悬浮液形式的含微粉化活性医药成分的单一小瓶调配物。单一小瓶调配物通过无菌混合无菌泊洛沙姆溶液与无菌微粉化活性成分(例如氯胺酮)和将调配物转移到无菌医药容器中来制备。在一些实施例中，在分配和/或投予之前，将含有呈悬浮液形式的本文所述的调配物的单一小瓶再悬浮。
在具体实施例中，过滤和/或填充程序在低于本文所述的调配物的胶凝温度(T胶凝)约5℃下且在粘度低于理论值100cP下进行，以允许在合理时间内使用蠕动泵过滤。
在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物包含纳米粒子调配物，其中所述纳米粒子调配物适于过滤灭菌。在另一实施例中，所述纳米粒子调配物包含尺寸小于300nm、尺寸小于200nm或尺寸小于100nm的纳米粒子。在另一实施例中，耳可接受的调配物包含微球体调配物，其中微球体的无菌性通过无菌过滤前驱有机溶液和水溶液来确保。在另一实施例中，耳可接受的调配物包含热可逆性凝胶调配物，其中凝胶调配物的无菌性通过低温无菌过滤来确保。在另一实施例中，低温无菌过滤在0℃与30℃之间、或0℃与20℃之间、或0℃与10℃之间、或10℃与20℃之间、或20℃与30℃之间的温度下进行。在另一实施例中，是一种制备耳可接受的热可逆性凝胶调配物的工艺，其包含：在低温下经由灭菌过滤器过滤含有热可逆性凝胶组分的水溶液；冻干无菌溶液；和在投予之前用无菌水复原热可逆性凝胶调配物。
在某些实施例中，将活性成分溶解于适合的媒剂(例如缓冲液)中且分开灭菌(例如通过热处理、过滤、γ辐射)。在一些情况下，活性成分在干燥状态下分开灭菌。在一些情况下，活性成分以悬浮液或胶状悬浮液形式灭菌。在另一步骤中利用适合的方法(例如过滤和/或照射冷却的赋形剂混合物)对其余赋形剂(例如耳用调配物中所存在的流体凝胶组分)进行灭菌；然后将分开灭菌的两种溶液无菌混合以提供最终耳用调配物。在一些情况下，最终无菌混合在即将投予本文所述的调配物之前进行。
在一些情况下，通常使用的灭菌方法(例如热处理(例如在高压灭菌器中)、γ照射、过滤)导致调配物中的聚合物组分(例如热固性、胶凝或粘膜粘附聚合物组分)和/或活性剂不可逆地降解。在一些情况下，如果调配物包含在过滤过程中会胶凝的触变聚合物，那么不可能通过膜过滤(例如0.2微米膜)来对耳用调配物进行灭菌。
因此，本文提供耳用调配物的灭菌方法，其防止聚合物组分(例如热固性和/或胶凝和/或粘膜粘附聚合物组分)和/或活性剂在灭菌过程中降解。在一些实施例中，通过使用缓冲液组分的特定pH值范围和胶凝剂于调配物中的特定比例来降低或消除活性剂(例如本文所述的任何耳部治疗剂)的降解。在一些实施例中，选择适当胶凝剂和/或热固性聚合物允许通过过滤来对本文所述的调配物进行灭菌。在一些实施例中，使用适当热固性聚合物和适当共聚物(例如胶凝剂)与调配物的特定pH值范围的组合允许对所述调配物进行高温灭菌而治疗剂或聚合物赋形剂实质上不发生降解。本文提供的灭菌法的优点在于，在某些情况下，经由高压灭菌处理对调配物进行最终灭菌而活性剂和/或赋形剂和/或聚合物组分在灭菌步骤期间无任何损失，且调配物变得实质上不含微生物和/或热原。
微生物
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳可接受的组合物或装置。本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置实质上不含微生物。可接受的生物负载或无菌程度是基于定义治疗上可接受的组合物的适用标准，包括(但不限于)美国药典(United States Pharmacopeia)第<1111>章及后续内容。举例来说，可接受的无菌(例如生物负载)程度包括每克调配物约10个菌落形成单位(cfu)，每克调配物约50cfu，每克调配物约100cfu，每克调配物约500cfu或每克调配物约1000cfu。在一些实施例中，调配物的可接受的生物负载水平或无菌性包括小于10cfu/mL、小于50cfu/mL、小于500cfu/mL或小于1000cfu/mL微生物剂。另外，可接受的生物负载水平或无菌性包括排除指定的有害微生物剂。举例来说，指定的有害微生物剂包括(但不限于)大肠杆菌(Escherichia coli/E.coli)、沙门氏菌属(Salmonella sp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa/P.aeruginosa)和/或其它特定微生物剂。
耳可接受的耳部治疗剂调配物的无菌性根据美国药典第<61>、<62>和<71>章由无菌性保证程序确认。无菌性保证品质控制、品质保证和验证过程的关键组成部分是无菌性测试的方法。仅举例来说，利用两种方法进行无菌性测试。第一是直接接种，其中将待测试的组合物的样品添加到生长培养基中并培育长达21天的时间。生长培养基的混浊度指示污染。这种方法的缺点包括整体材料的取样规模小，这会降低灵敏度，和基于目测检测微生物生长。一种替代方法是膜过滤无菌性测试。在这种方法中，使一定体积的产品穿过小膜滤纸。然后，将滤纸放在培养基中以促进微生物生长。这一方法的优点在于灵敏度较高，因为对整个产品进行取样。任选使用可自市面上购得的密理博(Millipore)Steritest无菌测试系统来通过膜过滤无菌性测试进行测定。对于乳膏或软膏的过滤测试，使用TLHVSL210号Steritest过滤系统。对于乳液或粘性产品的过滤测试，使用TLAREM210或TDAREM210号Steritest过滤系统。对于预填充注射器的过滤测试，使用TTHASY210号Steritest过滤系统。对于分配成气雾剂或泡沫体的材料的过滤测试，使用TTHVA210号Steritest过滤系统。对于于安瓿或小瓶中的可溶性粉末的过滤测试，使用TTHADA210或TTHADV210号Steritest过滤系统。
大肠杆菌和沙门氏菌的测试包括使用在30-35℃下培育24-72小时的乳糖肉汤，在麦康基(MacConkey)和/或EMB琼脂中培育18-24小时，和/或使用拉帕波特(Rappaport)培养基。检测绿脓杆菌的测试包括使用NAC琼脂。美国药典第<62>章另外列举用于指定有害微生物的测试程序。
在某些实施例中，本文所述的任何控制释放调配物在每克调配物中都具有少于约60个菌落形成单位(CFU)、少于约50个菌落形成单位、少于约40个菌落形成单位、或少于约30个菌落形成单位的微生物剂。在某些实施例中，本文所述的耳用调配物经调配以与内淋巴和/或外淋巴等张。
内毒素
本文提供改善或减轻本文所述的耳部病症的耳用组合物。本文另外提供包含投予所述耳用组合物的方法。在一些实施例中，组合物或装置实质上不含内毒素。灭菌工艺的另一方面是在杀死微生物(下文称为“产品”)时去除副产物。去热原工艺从样品中去除热原。热原是诱发免疫反应的内毒素或外毒素。内毒素的一个实例是革兰氏阴性细菌细胞壁中可见的脂多糖(LPS)分子。当诸如高压灭菌处理或用环氧乙烷处理等灭菌程序杀死细菌时，LPS残余物诱发促发炎免疫反应，诸如败血性休克。因为内毒素的分子尺寸可广泛变化，所以内毒素的存在以“内毒素单位”(EU)表示。1EU相当于100皮克大肠杆菌LPS。人类可对少至每千克体重5EU产生反应。生物负载(例如微生物限度)和/或无菌性(例如内毒素水平)以所属领域中认可的任何单位表示。在某些实施例中，与通常可接受的内毒素含量(例如每公斤个体体重5EU)相比，本文所述的耳用组合物含有较低内毒素含量(例如每公斤个体体重＜4EU)。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每公斤个体体重小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每公斤个体体重小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每公斤个体体重小于约3EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每公斤个体体重小于约2EU。
在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物或装置具有每千克调配物小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每千克调配物小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每千克调配物小于约3EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每千克产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每千克产品小于约1EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每千克产品小于约0.2EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每克单位或产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每克单位或产品小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每克单位或产品小于约3EU。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每毫克单位或产品小于约5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每毫克单位或产品小于约4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每毫克单位或产品小于约3EU。在某些实施例中，本文所述的耳用调配物每毫升调配物中含有约1至约5EU。在某些实施例中，本文所述的耳用调配物每毫升调配物中含有约2至约5EU，每毫升调配物中含有约3至约5EU，或每毫升调配物中含有约4至约5EU。
在某些实施例中，与通常可接受的内毒素含量(例如每毫升调配物0.5EU)相比，本文所述的耳用组合物或装置含有较低内毒素含量(例如每毫升调配物＜0.5EU)。在一些实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物或装置具有每毫升调配物小于约0.5EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每毫升调配物小于约0.4EU。在其它实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物具有每毫升调配物小于约0.2EU。
仅举例来说，利用若干方法进行热原检测。适合的无菌性测试包括美国药典(UnitedStates Pharmacopoeia，USP)<71>无菌性测试(Sterility Tests)(第23版，1995)中所述的测试。美国药典第<85>和<151>章(USP23/NF 18，生物测试(Biological Tests)，美国药典规范(The United States Pharmacopeial Convention)，马里兰州罗克维尔(Rockville，MD)，1995)中详细说明了兔子热原测试与鲎变形细胞溶解物测试(Limulus amebocytelysate test)。已基于单核细胞活化-细胞因子分析开发出替代性热原分析。已开发出适于品质控制应用的均一细胞系且已证明能够检测已通过兔子热原测试和鲎变形细胞溶解物测试的样品中的致热性(塔克塔克(Taktak)等人，药学与药理学杂志(J.Pharm.Pharmacol.)(1990)，43：578-82)。在另一实施例中，对耳可接受的耳部治疗剂调配物进行去热原操作。在另一实施例中，耳可接受的耳部治疗剂调配物的制造工艺包含测试调配物的致热性。在某些实施例中，本文所述的调配物实质上不含热原。
pH值和实际容积渗透摩尔浓度
如本文所使用的“实际容积渗透摩尔浓度”意思是通过包括活性剂和除胶凝剂和/或增稠剂(例如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、羧甲基纤维素等)以外的所有赋形剂测量的调配物的容积渗透摩尔浓度。本文所述的调配物的实际容积渗透摩尔浓度由任何适合的方法测量，例如维嘎斯(Viegas)等人，国际药学杂志(Int.J.Pharm.)，1998，160，157-162所述的冰点下降法。在一些情况下，本文所述的组合物的实际容积渗透摩尔浓度由允许测定组合物在较高温度下的容积渗透摩尔浓度的蒸气压渗透压测定法(例如蒸气压下降法)测量。在一些情况下，蒸气压下降法允许测定包含胶凝剂(例如热可逆性聚合物)的调配物在胶凝剂呈凝胶形式的较高温度下的容积渗透摩尔浓度。本文所述的耳用调配物的实用重量渗透摩尔浓度为约100mOsm/kg至约1000mOsm/kg、约200mOsm/kg至约800mOsm/kg、约250mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约320mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、或约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一些实施例中，本文所述的调配物的实际容积渗透摩尔浓度为约100mOsm/L至约1000mOsm/L、约200mOsm/L至约800mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约250mOsm/L至约320mOsm/L、或约280mOsm/L至约320mOsm/L。
在一些实施例中，目标作用部位(例如外淋巴)处的容积渗透摩尔浓度与本文所述的任何调配物的传递的容积渗透摩尔浓度(即，穿过或渗透圆窗膜的物质的容积渗透摩尔浓度)大致相同。在一些实施例中，本文所述的调配物的可传递容积渗透摩尔浓度为约150mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约280mOsm/L至约370mOsm/L、或约250mOsm/L至约320mOsm/L。
内淋巴中所存在的主要阳离子是钾。另外，内淋巴具有高浓度的带正电氨基酸。外淋巴中所存在的主要阳离子是钠。在某些情况下，内淋巴和外淋巴的离子组成调节毛细胞的电化学脉冲。在某些情况下，内淋巴或外淋巴的离子平衡的任何变化都会因电化学脉冲沿耳部毛细胞传导发生变化而导致听力丧失。在一些实施例中，本文公开的组合物不破坏外淋巴的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物具有与外淋巴相同或实质上相同的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物不破坏内淋巴的离子平衡。在一些实施例中，本文公开的组合物具有与内淋巴相同或实质上相同的离子平衡。在一些实施例中，本文所述的耳用调配物经调配以提供与内耳流体(例如内淋巴和/或外淋巴)相容的离子平衡。
内淋巴和外淋巴的pH值接近血液的生理学pH值。内淋巴的pH值范围为约7.2-7.9；外淋巴的pH值范围为约7.2-7.4。近端内淋巴的原位pH值为约7.4，而远端内淋巴的pH值为约7.9。
在一些实施例中，将本文所述的调配物的pH值调节(例如通过使用缓冲液)到约5.5至9.0的内淋巴相容的pH值范围。在具体实施例中，将本文所述的调配物的pH值调节到约5.5至约9.0的外淋巴适合的pH值范围。在一些实施例中，将本文所述的调配物的pH值调节到约5.5至约8.0、约6至约8.0、或约6.6至约8.0的外淋巴适合的范围。在一些实施例中，将本文所述的调配物的pH值调节到约7.0-7.6的外淋巴适合的pH值范围。
在一些实施例中，适用的调配物还包括一种或一种以上pH值调节剂或缓冲剂。适合的pH值调节剂或缓冲剂包括(但不限于)乙酸盐、碳酸氢盐、氯化铵、柠檬酸盐、磷酸盐、其医药学上可接受的盐和其组合或混合物。
在一个实施例中，当本发明调配物中使用一种或一种以上缓冲剂时，所述缓冲剂(例如与医药学上可接受的媒剂)组合且存在于最终调配物中(存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内)。在本发明的某些实施例中，凝胶调配物中包括的缓冲剂的量是使得凝胶调配物的pH值不干扰身体天然缓冲系统的量。
在一个实施例中，还使用稀释剂来稳定化合物，因为其可提供更稳定的环境。在所属领域中使用溶解于缓冲溶液中的盐(还可提供pH值控制或维持)作为稀释剂，包括(但不限于)磷酸盐缓冲盐水溶液。
在一些实施例中，本文所述的任何凝胶调配物的pH值允许在医药剂(例如耳感觉细胞调节剂)或构成凝胶的聚合物不降解的情况下对凝胶调配物进行灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))。为减少灭菌期间耳用药剂和/或凝胶聚合物的水解和/或降解，缓冲液的pH值经设计以将调配物pH值在灭菌(例如高温高压灭菌处理)过程中维持在7-8范围内。
在具体实施例中，本文所述的任何凝胶调配物的pH值允许在医药剂(例如耳感觉细胞调节剂)或构成凝胶的聚合物不降解的情况下对凝胶调配物进行最终灭菌(例如通过热处理和/或高压灭菌处理)。举例来说，为减少高压灭菌处理期间耳用药剂和/或凝胶聚合物的水解和/或降解，设计缓冲液的pH值将调配物pH值在高温下维持在7-8范围内。视调配物中所用的耳用药剂而定，可使用任何适当的缓冲液。在一些情况下，因为TRIS的pKa以约-0.03/℃随温度增加而降低，且PBS的pKa以约0.003/℃随温度增加而增加，所以在250°F(121/℃)下进行高压灭菌处理使得TRIS缓冲液的pH值显著向下偏移(即，酸性更大)，而PBS缓冲液的pH值相对程度小的多地向上偏移，因此耳用药剂在TRIS中的水解和/或降解的增加比在PBS中多得多。耳用药剂的降解通过使用如本文所述的缓冲液与聚合物添加剂(例如CMC)的适当组合而减少。
在一些实施例中，适于本文所述的耳用调配物灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))的调配物pH值在约5.0与约9.0之间、在约5.5与约8.5之间、在约6.0与约7.6之间、在约7与约7.8之间、在约7.0与约7.6之间、在约7.2与7.6之间、或在约7.2与约7.4之间。在具体实施例中，适于本文所述的任何调配物的灭菌(例如通过过滤或无菌混合或热处理和/或高压灭菌处理(例如最终灭菌))的调配物pH值为约6.0、约6.5、约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4、约7.5或约7.6。
在一些实施例中，调配物具有如本文所述的pH值，且包括增稠剂(例如粘度增强剂)，作为非限制性实例，诸如本文所述的基于纤维素的增稠剂。在一些情况下，第二聚合物(例如增稠剂)的添加和如本文所述的调配物的pH值允许对本文所述的调配物进行灭菌而耳用调配物中的耳用药剂和/或聚合物组分无任何实质性降解。在一些实施例中，具有如本文所述的pH值的调配物中热可逆性泊洛沙姆与增稠剂的比率为约40∶1、约35∶1、约30∶1、约25∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1或约5∶1。举例来说，在某些实施例中，本文所述的持续释放和/或延长释放调配物包含泊洛沙姆407(泊洛尼克F127)与羧甲基纤维素(CMC)的组合，两者的比率为约40∶1、约35∶1、约30∶1、约25∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1或约5∶1。
在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物的量为调配物的总重量的约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％或约40％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物的量为调配物的总重量的约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％或约25％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127(pluronic F127))的量为调配物的总重量的约7.5％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约10％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约11％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约12％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约13％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约14％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约15％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约16％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约17％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约18％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约19％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约20％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约21％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约23％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中热可逆性聚合物(例如普朗尼克F127)的量为调配物的总重量的约25％。
在一些实施例中，本文所述的任何调配物中增稠剂(例如胶凝剂)的量为调配物的总重量的约1％、约5％、约10％或约15％。在一些实施例中，本文所述的任何调配物中增稠剂(例如胶凝剂)的量为调配物的总重量的约0.5％、约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％或约5％。
在一些实施例中，本文所述的医药调配物就pH值来说在任何以下时期内是稳定的：至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月。在其它实施例中，本文所述的调配物就pH值来说在至少约1周的时期内是稳定的。本文还描述就pH值来说在至少约1个月的时期内是稳定的调配物。
张力剂
一般来说，内淋巴的重量渗透摩尔浓度高于外淋巴。举例来说，内淋巴的重量渗透摩尔浓度为约304mOsm/kg H2O，而外淋巴的重量渗透摩尔浓度为约294mOsm/kg H2O。在某些实施例中，向本文所述的调配物中添加一定量的张力剂以提供耳用调配物的实用重量渗透摩尔浓度为约100mOsm/kg至约1000mOsm/kg、约200mOsm/kg至约800mOsm/kg、约250mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、或约280mOsm/kg至约320mOsm/kg。在一些实施例中，本文所述的调配物的实际容积渗透摩尔浓度为约100mOsm/L至约1000mOsm/L、约200mOsm/L至约800mOsm/L、约250mOsm/L至约500mOsm/L、约250mOsm/L至约350mOsm/L、约280mOsm/L至约320mOsm/L、或约250mOsm/L至约320mOsm/L。
在一些实施例中，本文所述的任何调配物的可传递容积渗透摩尔浓度经设计与目标耳部结构(例如内淋巴、外淋巴等)等张。在具体实施例中，本文所述的耳用组合物经调配以在目标作用部位提供约250至约320mOsm/L且优选约270至约320mOsm/L的传递的外淋巴适合的容积渗透摩尔浓度。在具体实施例中，本文所述的耳用组合物经调配以在目标作用部位提供约250至约320mOsm/kg H2O的传递的外淋巴适合的重量渗透摩尔浓度；或约270至约320mOsm/kg H2O的重量渗透摩尔浓度。在具体实施例中，在传递到目标部位之后，例如通过使用适当的盐浓度(例如钾盐或钠盐的浓度)或使用使调配物变得与内淋巴相容和/或与外淋巴相容(即，与内淋巴和/或外淋巴等张)的张力剂调节调配物的可传递的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度(即，在无胶凝剂或增稠剂(例如热可逆性凝胶聚合物)存在下调配物的容积渗透摩尔浓度/重量渗透摩尔浓度)。归因于不同水量与聚合物的单体单元的缔合，包含热可逆性凝胶聚合物的调配物的容积渗透摩尔浓度是不可靠的量度。调配物的实际容积渗透摩尔浓度(即，在无胶凝剂或增稠剂(例如热可逆性凝胶聚合物)存在下调配物的容积渗透摩尔浓度)是可靠的量度，且由任何适合的方法(例如冰点下降法、蒸气下降法)测量。在一些情况下，本文所述的调配物提供在投予后之对内耳环境产生最小干扰且引起哺乳动物最小程度的不适(例如眩晕和/或恶心)的可传递的容积渗透摩尔浓度(例如目标部位(例如外淋巴))。
在一些实施例中，本文所述的任何调配物与外淋巴和/或内淋巴等张。等张调配物通过添加张力剂提供。适合的张力剂包括(但不限于)任何医药学上可接受的糖、盐或其任何组合或混合物，诸如但不限于右旋糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化钠和其它电解质。
适用的耳用组合物包括一种或一种以上使组合物的重量渗透摩尔浓度在可接受范围内所需的量的盐。所述盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；适合的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些实施例中，本文所述的调配物具有如本文所述的pH值和/或实际容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度在约1μM与约10μM之间，在约1mM与约100mM之间，在约0.1mM与约100mM之间，在约0.1mM与约100nM之间。在一些实施例中，本文所述的调配物具有如本文所述的pH值和/或实际容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以调配物的重量计为约0.01％-约20％之间、约0.01％-约10％之间、约0.01％-约7.5％之间、约0.01％-6％之间、约0.01-5％之间、约0.1-约10％之间或约0.1-约6％之间的活性成分。在一些实施例中，本文所述的调配物具有如本文所述的pH值和/或实际容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以调配物的体积计在约0.1mg与约70mg之间、在约1mg与约70mg/mL之间、在约1mg与约50mg/mL之间、在约1mg/mL与约20mg/mL之间、在约1mg/mL与约10mg/mL之间、在约1mg/mL与约5mg/mL之间、或在约0.5mg/mL与约5mg/mL之间的活性剂。在一些实施例中，本文所述的调配物具有如本文所述的pH值和/或实际容积渗透摩尔浓度，且活性医药成分的浓度以调配物的体积计为在约1μg/mL与约500μg/mL之间、在约1μg/mL与约250μg/mL之间、在约1μg与约100μg/mL之间、在约1μg/mL与约50μg/mL之间、或在约1μg/mL与约20μg/mL之间的活性剂。
粒径
使用尺寸减小来增加表面积和/或调节调配物的溶解性质。其还用于维持本文所述的任何调配物的一致平均粒径分布(PSD)(例如微米级粒子、纳米级粒子等)。在一些实施例中，本文所述的任何调配物包含多颗粒，即包含多种粒径(例如微粉化粒子、纳米级粒子、尺寸未定的粒子(non-sized particle)、胶体粒子；即调配物是多颗粒调配物。在一些实施例中，本文所述的任何调配物包含一种或一种以上多颗粒(例如微粉化)治疗剂。微粉化是降低固体材料粒子的平均直径的工艺。微粉化粒子的直径约为微米尺寸到约为纳米尺寸。在一些实施例中，微粉化固体中的粒子的平均直径为约0.5μm至约500μm。在一些实施例中，微粉化固体中的粒子的平均直径为约1μm至约200μm。在一些实施例中，微粉化固体中的粒子的平均直径为约2μm至约100μm。在一些实施例中，微粉化固体中的粒子的平均直径为约3μm至约50μm。在一些实施例中，微粉化固体颗粒包含小于约5微米、小于约20微米和/或小于约100微米的粒径。在一些实施例中，与包含非多颗粒(例如未微粉化)耳感觉细胞调节剂的调配物相比，使用耳感觉细胞调节剂颗粒(例如微粉化粒子)允许耳感觉细胞调节剂从本文所述的任何调配物中延长释放和/或持续释放。在一些情况下，含有多颗粒(例如微粉化)耳感觉细胞调节剂的调配物从配有27G针的1mL注射器中喷出且不会有任何堵塞或阻塞。
在一些情况下，本文所述的任何调配物中的任何粒子是涂布过的粒子(例如涂布过的微粉化粒子、纳米粒子)和/或微球体和/或脂质体粒子。粒径减小技术包括例如碾磨、研磨(例如气磨研磨(喷射研磨)、球磨研磨)、凝聚、复合凝聚、高压均质化、喷雾干燥和/或超临界流体结晶。在一些情况下，通过机械冲击(例如锤磨机、球磨机和/或针磨机)控制粒子的尺寸。在一些情况下，通过流体能量(例如螺旋喷射研磨机、环流喷射研磨机和/或流化床喷射研磨机)控制粒子的尺寸。在一些实施例中，本文所述的调配物包含结晶粒子和/或各向同性粒子。在一些实施例中，本文所述的调配物包含非晶粒子和/或各向异性粒子。在一些实施例中，本文所述的调配物包含治疗剂粒子，其中治疗剂是治疗剂的游离碱、或盐、或前药、或其任何组合。
在一些实施例中，本文所述的调配物包含一种或一种以上耳感觉细胞调节剂，其中耳感觉细胞调节剂包含纳米颗粒。在一些实施例中，本文所述的调配物包含任选地涂有控制释放赋形剂的耳感觉细胞调节剂珠粒(例如右美沙芬(dextromethorphan)珠粒)。在一些实施例中，本文所述的调配物包含颗粒化和/或尺寸减小且涂有控制释放赋形剂的耳感觉细胞调节剂；然后任选地将所述颗粒化的经涂布耳感觉细胞调节剂颗粒微粉化和/或调配于本文所述的任何组合物中。
在一些情况下，通过利用本文所述的程序使用呈中性分子、游离酸或游离碱形式的耳感觉细胞调节剂与耳感觉细胞调节剂盐的组合来制备脉冲释放的耳用药剂调配物。在一些调配物中，通过利用本文所述的任何程序使用微粉化耳感觉细胞调节剂(和/或其盐或前药)与涂布过的粒子(例如纳米粒子、脂质体、微球体)的组合来制备脉冲释放耳用药剂调配物。或者，通过借助于环糊精、表面活性剂(例如泊洛沙姆407、338、188)、吐温(80、60、20、81)、PEG-氢化蓖麻油、辅溶剂(如N-甲基-2-吡咯烷酮)等将多达20％的传递剂量的耳感觉细胞调节剂(例如微粉化耳感觉细胞调节剂、游离碱、游离酸或其盐或前药；多颗粒耳感觉细胞调节剂、游离碱、游离酸或其盐或前药)溶解且使用本文所述的任何程序制备脉冲释放调配物来达成脉冲释放曲线。
在具体实施例中，本文所述的任何耳相容性调配物包含一种或一种以上微粉化医药剂(例如耳感觉细胞调节剂)。在一些所述实施例中，微粉化医药剂包含微粉化粒子、涂布(例如涂有延长释放涂层)过的微粉化粒子或其组合。在一些所述实施例中，包含微粉化粒子、涂布过的微粉化粒子或其组合的微粉化医药剂包含呈中性分子、游离酸、游离碱、其盐、前药或任何组合形式的耳感觉细胞调节剂。在某些实施例中，本文所述的医药组合物包含呈微粉化粉末形式的耳感觉细胞调节剂。在某些实施例中，本文所述的医药组合物包含呈耳感觉细胞调节剂微粉形式的耳感觉细胞调节剂。
本文所述的多颗粒和/或微粉化耳感觉细胞调节剂借助于任何类型的基质(包括固体、液体或凝胶基质)传递到耳结构(例如内耳)。在一些实施例中，本文所述的多颗粒和/或微粉化耳感觉细胞调节剂借助于任何类型的基质(包括固体、液体或凝胶基质)经由鼓室内注射传递到耳结构(例如内耳)。
可调性释放特征
活性剂从本文所述的任何调配物、组合物或装置中的释放任选地可调成想要的释放特征。在一些实施例中，本文所述的组合物是实质上不含胶凝组分的溶液。在所述情况下，组合物提供活性剂的大体立即释放。在一些所述实施例中，组合物适用于灌注耳部结构，例如在外科手术期间。
在一些实施例中，本文所述的组合物是实质上不含胶凝组分且包含微粉化耳用药剂(例如皮质类固醇)的溶液。在一些所述实施例中，组合物的活性剂在约2天到约4天内释放。
在一些实施例中，本文所述的组合物包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约1天到约3天的时间内释放。在一些实施例中，本文所述的组合物包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约1天到约5天的时间内释放。在一些实施例中，本文所述的组合物包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)且活性剂在约2天到约7天的时间内释放。
在一些实施例中，本文所述的组合物包含胶凝剂(例如泊洛沙姆407)与微粉化耳用药剂组合且提供较长时间内的长时间持续释放。在一些实施例中，本文所述的组合物包含约14-17％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和微粉化耳用药剂；且在约1周到约3周的时间内长时间持续释放。在一些实施例中，本文所述的组合物包含约18-21％的胶凝剂(例如泊洛沙姆407)和微粉化耳用药剂；且在约3周到约6周的时间内长时间持续释放。
因此，组合物中胶凝剂的量和耳用药剂的粒径可调到获得想要的耳用药剂从组合物中的释放曲线。
如本文所述，包含微粉化耳用药剂的组合物与包含非微粉化耳用药剂的组合物相比提供一段更长时间内的延长释放。在一些情况下，微粉化耳用药剂经由缓慢降解提供稳定的活性剂供给(例如，+/-20％)，且用作活性剂的储库；所述储库作用增加耳用药剂在耳朵中的滞留时间。在特定实施例中，选择适当粒径的活性剂(例如微粉化活性剂)与组合物中胶凝剂的量组合提供允许活性剂在数小时、数天、数周或数月时间内释放的可调延长释放特征。
在一些实施例中，本文所述的任何调配物的粘度经设计以提供适合的从耳相容性凝胶中释放的速率。在一些实施例中，增稠剂(例如胶凝组分，诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)的浓度提供可调的平均溶解时间(MDT)。MDT与活性剂从本文所述的组合物或装置中的释放速率成反比。在实验上，任选地将释放的耳用药剂拟合成考斯梅尔-佩帕斯等式(Korsmeyer-Peppas equation)
Q Q &alpha; = kt n + b
其中Q是时间t时释放的耳用药剂的量，Qα是耳用药剂的总释放量，k是n次的释放常数，n是与溶解机制相关的无量纲数且b是轴截距，表征最初爆发的释放机制，其中n＝1表征侵蚀控制机制。平均溶解时间(MDT)是不同时段释放之前留在基质中的药物分子的和除以分子总数，且任选地如下计算：
MDT = nk - 1 / n n + 1
举例来说，组合物或装置的平均溶解时间(MDT)与胶凝剂(例如泊洛沙姆)的浓度之间的线性关系指示耳用药剂因聚合物凝胶(例如泊洛沙姆)腐蚀而非经由扩散释放。在另一实例中，非线性关系指示耳用药剂经由扩散和/或聚合物凝胶降解的组合释放。在另一实例中，组合物或装置的凝胶排除时程越快(活性剂释放越快)指示平均溶解时间(MDT)越短。测试组合物中胶凝组分和/或活性剂的浓度以确定MDT的适合参数。在一些实施例中，还测试注射体积以确定临床前和临床研究的适合参数。活性剂的凝胶强度和浓度影响耳用药剂从组合物中的释放动力学。在低泊洛沙姆浓度下，消除速率加快(MDT较短)。组合物或装置中耳用药剂浓度的增加延长耳用药剂在耳朵中的滞留时间和/或MDT。
在一些实施例中，泊洛沙姆从本文所述的组合物或装置中的MDT为至少6小时。在一些实施例中，泊洛沙姆从本文所述的组合物或装置中的MDT为全少10小时。
在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约48小时。在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约96小时。在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置中的MDT为约30小时到约1周。在一些实施例中，活性剂从本文所述的组合物或装置的MDT为约1周到约6周。
在某些实施例中，本文所述的任何控制释放耳用调配物与不为控制释放耳用调配物的调配物相比增加耳用药剂的暴露且使耳部流体(例如内淋巴和/或外淋巴)的曲线下面积(AUC)增加约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。在某些实施例中，本文所述的任何控制释放耳用调配物与不为控制释放耳用调配物的调配物相比可增加耳用药剂的暴露时间且使耳部流体(例如内淋巴和/或外淋巴)的Cmax减小约40％、约30％、约20％或约10％。在某些实施例中，本文所述的任何控制释放耳用调配物与不为控制释放耳用调配物的调配物相比改变(例如减小)Cmax与Cmin的比率。在某些实施例中，本文所述的任何控制释放耳用调配物与不为控制释放耳用调配物的调配物相比可增加耳用药剂的暴露且使耳用药剂浓度高于Cmin的时间长度增加约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。在某些情况下，本文所述的控制释放调配物延迟达到Cmax的时间。在某些情况下，药物的控制稳定释放可延长药物浓度将保持高于Cmin的时间。在一些实施例中，本文所述的耳组合物可延长药物在内耳中的滞留时间且提供稳定药物暴露曲线。在一些情况下，组合物中活性剂的浓度增加贯穿清除过程且允许达到更快速且更稳定的稳态。
在某些情况下，一旦药物的药物暴露(例如内淋巴或外淋巴中的浓度)达到稳态，内淋巴或外淋巴中药物的浓度即保持在治疗剂量或治疗剂量左右持续一段较长时间(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周、3周、6周、2个月)。在一些实施例中，从本文所述的控制释放调配物中释放的活性剂的稳态浓度为从不为控制释放调配物的调配物中释放的活性剂的稳态浓度的约20到约50倍。图5显示活性剂从四种组合物中的预测可调释放。
医药调配物
本文提供医药组合物或装置，其包括至少一种耳感觉细胞调节剂和医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载剂。在一些实施例中，医药组合物包括其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。在其它实施例中，医药组合物还含有其它治疗物质。
在一些实施例中，本文所述的组合物或装置包括染料以在施用时帮助增强对凝胶的观测。在一些实施例中，与本文所述的耳可接受的组合物或装置相容的染料包括伊文思蓝(Evans blue)(例如耳用调配物总重量的0.5％)、亚甲基蓝(Methylene blue)(例如耳用调配物总重量的1％)、异硫蓝(Isosulfan blue)(例如耳用调配物总重量的1％)、台盼蓝(Trypan blue)(例如耳用调配物总重量的0.15％)和/或吲哚菁绿(indocyanine green)(例如每小瓶25mg)。其它常见染料，例如FD&C红40、FD&C红3、FD&C黄5、FD&C黄6、FD&C蓝1、FD&C蓝2、FD&C绿3、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate)、若丹明(rhodamine)、Alexa Fluors、DyLight Fluors)和/或可结合诸如MRI、CAT扫描、PET扫描等非侵入性成像技术观测的染料。还涵盖与本文所述的任何耳用调配物一起使用钆基MRI染料、碘基染料、钡基染料等。西格玛-阿尔德里奇(Sigma-Aldrich)目录的染料条目下列出与本文所述的任何调配物或组合物相容的其它染料(关于所述公开内容，以引用的方式包括在本文中)。
在一些实施例中，使用机械或成像装置来监测或检查听力、平衡或其它耳部病症。举例来说，所述实施例的范围内特别涵盖磁共振成像(MRI)装置，其中MRI装置(例如3特斯拉(Tesla)MRI装置)能够评估美尼尔氏病进展和本文公开的医药调配物的后续治疗。还涵盖与本文所述的任何耳相容性组合物或装置和/或本文所述的任何机械或成像装置一起使用钆基染料、碘基染料、钡基染料等。在某些实施例中，使用钆水合物与MRI和/或本文所述的任何医药组合物或装置组合来评估疾病严重程度(例如内淋巴水肿的规模)、组合物向内耳中的渗透和/或医药调配物/装置在本文所述的耳部疾病(例如美尼尔氏病)中的治疗效力。
任何本文所述的医药组合物或装置通过使组合物或装置与蜗窗嵴、圆窗、鼓室、鼓膜、中耳或外耳接触来投予。
在本文所述的耳可接受的控制释放耳感觉细胞调节剂医药调配物的一个具体实施例中，耳感觉细胞调节剂于凝胶基质中提供，凝胶基质在本文中也称为“耳可接受的凝胶调配物”、“内耳可接受的凝胶调配物”、“中耳可接受的凝胶调配物”、“外耳可接受的凝胶调配物”、“耳用凝胶调配物”或其变化形式。凝胶调配物的所有组分必须与目标耳结构相容。另外，凝胶调配物控制释放耳感觉细胞调节剂到目标耳结构的所要部位；在一些实施例中，凝胶调配物还具有用于将耳感觉细胞调节剂传递到所要目标部位的立即释放或快速释放组分。在其它实施例中，凝胶调配物具有用于传递耳感觉细胞调节剂的持续释放组分。在一些实施例中，凝胶调配物包含多颗粒(例如微粉化)耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，耳用凝胶调配物是生物可降解的。在其它实施例中，耳用凝胶调配物包括粘膜粘附赋形剂以允许粘附于圆窗膜的外部粘膜层。在又其它实施例中，耳用凝胶调配物包括渗透增强剂赋形剂；在其它实施例中，耳用凝胶调配物含有足以提供以下粘度的粘度增强剂：约500与1,000,000厘泊之间；约750与1,000,000厘泊之间；约1000与1,000,000厘泊之间；约1000与400,000厘泊之间；约2000与100,000厘泊之间；约3000与50,000厘泊之间；约4000与25,000厘泊之间；约5000与20,000厘泊之间；或约6000与15,000厘泊之间。在一些实施例中，耳用凝胶调配物含有足以提供约50,0000与1,000,000厘泊之间的粘度的粘度增强剂。
在一些实施例中，本文所述的组合物或装置在体温下是低粘度组合物或装置。在一些实施例中，低粘度组合物或装置含有约1％至约10％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，低粘度组合物或装置含有约2％至约10％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，低粘度组合物或装置含有约5％至约10％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，低粘度组合物或装置实质上不含粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，本文所述的低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约100cP至约10,000cP。在一些实施例中，本文所述的低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约500cP至约10,000cP。在一些实施例中，本文所述的低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约1000cP至约10,000cP。在一些所述实施例中，低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置与外部耳部介入组合投予，所述外部耳部介入例如外科手术，包括(但不限于)中耳外科手术、内耳外科手术、鼓膜切开术、耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。在一些所述实施例中，低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置在耳部介入期间投予。在其它所述实施例中，低粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置在耳部介入之前投予。
在一些实施例中，本文所述的组合物或装置在体温下是高粘度组合物或装置。在一些实施例中，高粘度组合物或装置含有约10％至约25％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，高粘度组合物或装置含有约14％至约22％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，高粘度组合物或装置含有约15％至约21％粘度增强剂(例如诸如聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等胶凝组分)。在一些实施例中，本文所述的高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约100,000cP至约1,000,000cP。在一些实施例中，本文所述的高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约150,000cP至约500,000cP。在一些实施例中，本文所述的高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置的表观粘度为约250,000cP至约500,000cP。在一些所述实施例中，高粘度组合物或装置在室温下是液体且在约室温与体温(包括严重发烧的个体，例如高达约42℃)之间胶凝。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂高粘度组合物或装置以单一疗法投予以用于治疗本文所述的耳部疾病或病状。在一些实施例中，高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置与外部耳部介入组合投予，所述外部耳部介入例如外科手术，包括(但不限于)中耳外科手术、内耳外科手术、鼓膜切开术、耳蜗切开术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、镫骨切开术、内淋巴球囊切开术等。在一些所述实施例中，高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置在耳部介入之后投予。在其它所述实施例中，高粘度耳感觉细胞调节剂组合物或装置在耳部介入之前投予。
在其它实施例中，本文所述的内耳医药调配物另外提供耳可接受的水凝胶；在又其它实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的微球体或微粒；在又其它实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的脂质体。在一些实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的泡沫体；在又其它实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的涂剂；在又其它实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的现场形成海绵状材料。在一些实施例中，耳医药调配物提供耳可接受的溶剂释放凝胶。在一些实施例中，耳医药调配物提供光化辐射可固化凝胶。其它实施例在耳医药调配物中包括热可逆性凝胶，以致在室温下或低于室温制备凝胶后，调配物是流体，但凝胶施用于内耳和/或中耳目标部位(包括鼓室、圆窗膜或蜗窗嵴)之中或附近后，耳医药调配物变硬或硬化成凝胶样物质。
在其它或替代实施例中，耳用凝胶调配物能够经由鼓室内注射投在圆窗膜上或圆窗膜附近。在其它实施例中，耳用凝胶调配物通过经由耳后切开和外科操作进入圆窗或蜗窗嵴区域中或附近而投在圆窗或蜗窗嵴上或附近。另外，耳用凝胶调配物经由注射器和针施用，其中针插穿鼓膜并导向圆窗或蜗窗嵴区域。耳用凝胶调配物然后沉积于圆窗或蜗窗嵴上或附近以供局部治疗自体免疫耳部病症。在其它实施例中，耳用凝胶调配物经由植入患者的微导管施用，且在又其它实施例中，调配物经由泵装置投在圆窗膜上或附近。在又其它实施例中，耳用凝胶调配物经由微注射装置施用在圆窗膜上或附近。在又其它实施例中，耳用凝胶调配物施用于鼓室中。在一些实施例中，耳用凝胶调配物施用在鼓膜上。在又其它实施例中，耳用凝胶调配物施用在耳道上或耳道中。
在其它具体实施例中，本文所述的任何医药组合物或装置包含多颗粒耳感觉细胞调节剂于液体基质(例如用于鼓室内注射的液体组合物或耳用滴剂)中。在某些实施例中，本文所述的任何医药组合物包含多颗粒耳感觉细胞调节剂于固体基质中。
控制释放调配物
一般来说，控制释放型药物调配物控制药物释放的释放部位和在体内的释放时间。如本文所论述，控制释放是指立即释放、延迟释放、持续释放、延长释放、可变释放、脉动释放和双模释放。控制释放有许多优点。第一，医药剂的控制释放允许较低的给药频率因此将重复治疗减至最少。第二，控制释放型治疗产生更有效的药物利用且较少化合物以残余物形式残留。第三，控制释放提供通过将传递装置或调配物置于疾病部位来进行局部药物传递的可能。另外，控制释放提供借助于单一剂量单元投予和释放两种或两种以上各具有独特的释放曲线的不同药物的可能，或以不同速率或不同持续时间释放相同药物的可能。
因此，本文公开的实施例的一个方面在于提供用于治疗自体免疫病症和/或炎症的耳可接受的控制释放耳感觉细胞调节剂组合物或装置。本文公开的组合物和/或调配物和/或装置的控制释放方面通过多种药剂赋予，包括(但不限于)赋形剂、可为在内耳或其它耳部结构中使用所接受的药剂或材料。仅举例来说，所述赋形剂、药剂或材料包括耳可接受的聚合物、耳可接受的粘度增强剂、耳可接受的凝胶、耳可接受的涂剂、耳可接受的泡沫体、耳可接受的干凝胶、耳可接受的微球体或微粒、耳可接受的水凝胶、耳可接受的现场形成海绵状材料、耳可接受的光化辐射可固化凝胶、耳可接受的溶剂释放凝胶、耳可接受的脂质体、耳可接受的纳米胶囊或纳米球体、耳可接受的热可逆性凝胶或其组合。
耳可接受的凝胶
凝胶，有时称为凝胶剂(jellies)，已以多种方式加以定义。举例来说，美国药典定义凝胶为由小无机粒子构成的悬浮液或穿插有液体的大有机分子组成的半固体系统。凝胶包括单相或两相系统。单相凝胶由有机大分子以分散的大分子与液体之间不存在明显边界的方式均匀地分布在整个液体中组成。一些单相凝胶由合成大分子(例如卡波姆)或由天然胶(例如黄芪胶)制备。在一些实施例中，虽然单相凝胶一般是水性的，但还将使用醇和油制备。两相凝胶由小个别粒子的网络组成。
凝胶还可分类成疏水性的或亲水性的。在某些实施例中，疏水性凝胶的基质由液体石蜡与聚乙烯、或脂肪油与胶体二氧化硅胶凝、或铝或锌皂组成。相比之下，疏水性凝胶的基质通常由水、甘油或丙二醇与适合的胶凝剂(例如黄芪胶、淀粉、纤维素衍生物、羧乙烯基聚合物和硅酸镁铝)胶凝组成。在某些实施例中，本文公开的组合物或装置的流变学是假塑性、塑性、触变性或膨胀性。
在一个实施例中，本文所述的粘度增强的耳可接受的调配物在室温下不是液体。在某些实施例中，粘度增强的调配物的特征在于在室温与体温(包括重度发烧的个体，例如高达约42℃)之间发生相变。在一些实施例中，相变在低于体温1℃、低于体温2℃、低于体温3℃、低于体温4℃、低于体温6℃、低于体温8℃或低于体温10℃下发生。在一些实施例中，相变在低于体温约15℃、低于体温约20℃或低于体温约25℃下发生。在具体实施例中，本文所述的调配物的胶凝温度(T凝胶)为约20℃、约25℃或约30℃。在某些实施例中，本文所述的调配物的胶凝温度(T凝胶)为约35℃或约40℃。在一个实施例中，大致在体温下投予本文所述的任何调配物会降低或抑制与鼓室内投予耳用调配物相关的眩晕。体温的定义包括健康个体或包括发烧个体(高达约42℃)的不健康个体的体温。在一些实施例中，本文所述的医药组合物或装置大致在室温下是液体且在室温下或大致在室温下投予，以减少或改善诸如眩晕等副作用。
由聚氧丙烯和聚氧乙烯构成的聚合物在并入水溶液中时形成热可逆性凝胶。这些聚合物能够在接近体温的温度下从液态变成凝胶状态，从而得到施用于目标耳部结构的适用调配物。液态到凝胶状态的相变取决于溶液中的聚合物浓度和成分。
泊洛沙姆407(Poloxamer 407)(PF-127)是由聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物构成的非离子型表面活化剂。其它泊洛沙姆包括188(F-68级)、237(F-87级)、338(F-108级)。泊洛沙姆水溶液在酸、碱金属和金属离子存在下是稳定的。PF-127是具有通式E106P70E106的可购得的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物，平均摩尔质量为13,000。所述聚合物可另外利用会增强聚合物的胶凝性质的适合方法纯化。其含有约70％环氧乙烷，是其亲水性的原因。其是一系列泊洛沙姆ABA嵌段共聚物中的一种，泊洛沙姆ABA嵌段共聚物成员共有如下所示的化学式。
Figure BPA00001308809100761
PF-127受到特别关注，因为共聚物的浓溶液(＞20％w/w)在加热到体温时从低粘度透明溶液转变成固体凝胶。因此，这一现象表明当与身体接触时，凝胶制剂会形成半固体结构和持续释放型储积库(depot)。此外，PF-127具有良好的溶解能力，低毒，因此视为药物传递系统的良好介质。
在一替代实施例中，热敏凝胶(thermogel)是PEG-PLGA-PEG三嵌段共聚物(正(Jeong)等人，自然(Nature)(1997)，388：860-2；正(Jeong)等人，控制释放杂志(J.Control.Release)(2000)，63：155-63；正(Jeong)等人，先进药物传递评论(Adv.DrugDelivery Rev.)(2002)，54：37-51)。聚合物在约5％w/w至约40％w/w浓度内展现溶胶-凝胶特性。取决于所想要的性质，PLGA共聚物中丙交酯/乙交酯的摩尔比在约1∶1至约20∶1范围内。所得共聚物可溶于水中，且在室温下形成自由流动液体，但在体温下形成水凝胶。市售PEG-PLGA-PEG三嵌段共聚物是由勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)制造的RESOMER RGP t50106。这一材料由50∶50聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的PGLA共聚物构成，且含10％w/w PEG，且分子量为约6000。
Figure BPA00001308809100771
是麦克罗公司(MacroMed Incorporated)的一类低分子量生物可降解嵌段共聚物的商品名称，其具有如美国专利第6,004,573号、第6,117949号、第6,201,072号和第6,287,588号所述的逆转热胶凝性质。其还包括申请中的美国专利申请案第09/906,041号、第09/559,799号和第10/919,603号中公开的生物可降解聚合物药物载剂。生物可降解的药物载剂包含ABA型或BAB型三嵌段共聚物或其混合物，其中A嵌段具有相对疏水性且包含生物可降解的聚酯或聚(原酸酯)，且B嵌段具有相对亲水性且包含聚乙二醇(PEG)，所述共聚物的疏水性含量在50.1重量％至83重量％之间且亲水性含量在17重量％至49.9重量％之间，且总嵌段共聚物分子量在2000道尔顿与8000道尔顿之间。药物载剂在低于正常哺乳动物体温的温度下展现水溶性且经历可逆的热胶凝，因此在等于生理学哺乳动物体温的温度下以凝胶形式存在。生物可降解的疏水性A聚合物嵌段包含聚酯或聚(原酸酯)，其中聚酯由选自由以下组成的群组的单体合成：D，L-丙交酯、D-丙交酯、L-丙交酯、D，L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、乙交酯、乙醇酸、ε-己内酯、ε-羟基己酸、γ-丁内酯、γ-羟基丁酸、δ-戊内酯、δ-羟基戊酸、羟基丁酸、苹果酸和其共聚物，且平均分子量在约600道尔顿与3000道尔顿之间。亲水性B嵌段节段优选是聚乙二醇(PEG)，平均分子量在约500道尔顿与2200道尔顿之间。
其它生物可降解的热塑性聚酯包括
Figure BPA00001308809100772
(由阿特里克斯实验室(AtrixLaboratories，Inc.)提供)和/或例如美国专利第5,324,519号、第4,938,763号、第5,702,716号、第5,744,153号和第5,990,194号中公开的热塑性聚酯；其中适合的生物可降解的热塑性聚酯以热塑性聚合物公开。适合的生物可降解热塑性聚酯的实例包括聚乳酸、聚乙交酯、聚己酸内酯、其共聚物、其三元共聚物和其任何组合。在一些所述实施例中，适合的生物可降解热塑性聚酯是聚乳酸、聚乙交酯、其共聚物、其三元共聚物或其组合。在一个实施例中，生物可降解的热塑性聚酯是具有羧基末端基团的50/50聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；占组合物的约30wt.％至约40wt.％；且平均分子量为约23,000至约45,000。或者，在另一实施例中，生物可降解的热塑性聚酯是无羧基末端基团的75/25聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；占组合物的约40wt.％至约50wt.％；且平均分子量为约15,000至约24,000。在其它或替代实施例中，取决于聚合方法，聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的末端基团是羟基、羧基或酯。乳酸或乙醇酸的聚缩合提供含末端羟基和羧基的聚合物。环状丙交酯或乙交酯单体与水、乳酸或乙醇酸的开环聚合提供含相同末端基团的聚合物。然而，用单官能醇(诸如甲醇、乙醇或1-十二烷醇)进行环状单体的开环提供含一个羟基和一个酯末端基团的聚合物。环状单体与二醇(诸如1，6-己二醇或聚乙二醇)的开环聚合提供仅含羟基末端基团的聚合物。
因为热可逆性凝胶的聚合物系统在低温下更完全溶解，所以溶解方法包括在低温下向待使用的量的水中添加所需量的聚合物。一般来说，在通过振荡润湿聚合物之后，盖上混合物且置于冷室中或约0-10℃的恒温容器中以使聚合物溶解。搅拌或振荡混合物以使热可逆性凝胶聚合物更快速地溶解。接着添加耳感觉细胞调节剂和诸如缓冲剂、盐和防腐剂等各种添加剂并溶解。在一些情况下，如果耳感觉细胞调节剂和/或其它医药活性剂不溶于水，那么将其悬浮。通过添加适当的缓冲剂调节pH值。任选地通过在调配物中并入圆窗膜粘膜粘附剂卡波姆(诸如
Figure BPA00001308809100781
934P)使热可逆性凝胶具有圆窗膜粘膜粘附特征(麻吉提亚(Majithiya)等人，美国药学科学家学会医药科技(AAPSPharmSciTech)(2006)，7(3)，第E1页；EP0551626，关于所述公开内容，两者以引用的方式并入本文中)。
一个实施例是不需要使用添加的粘度增强剂的耳可接受的医药凝胶调配物。这些凝胶调配物合并有至少一种医药学上可接受的缓冲剂。一方面是包含耳感觉细胞调节剂和医药学上可接受的缓冲剂的凝胶调配物。在另一实施例中，医药学上可接受的赋形剂或载剂是胶凝剂。
在其它实施例中，适用的耳可接受的耳感觉细胞调节剂医药调配物还包括一种或一种以上pH值调节剂或缓冲剂以提供适合于内淋巴或外淋巴的pH值。适合的pH值调节剂或缓冲剂包括(但不限于)乙酸盐、碳酸氢盐、氯化铵、柠檬酸盐、磷酸盐、其医药学上可接受的盐和其组合或混合物。所包括的这些pH值调节剂和缓冲剂的量是维持组合物的pH值在约pH 5与约pH 9之间所需的量，在一个实施例中，pH值在约6.5至约7.5之间，且在又一实施例中，pH值为约6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。在一个实施例中，当本发明调配物中使用一种或一种以上缓冲剂时，所述缓冲剂例如与医药学上可接受的媒剂组合且于最终调配物中的存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内。在本发明的某些实施例中，凝胶调配物中所包括的缓冲剂的量是使得凝胶调配物的pH值不干扰中耳或内耳的天然缓冲系统或不干扰内淋巴或外淋巴的天然pH值的量：取决于耳感觉细胞调节剂调配物以耳蜗中的何处为目标。在一些实施例中，凝胶调配物中存在约10μM至约200mM浓度的缓冲剂。在某些实施例中，存在约5mM至约200mM浓度的缓冲剂。在某些实施例中，存在约20mM至约100mM浓度的缓冲剂。一个实施例是诸如呈微酸性pH值的乙酸盐或柠檬酸盐等缓冲剂。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约4.5至约6.5的乙酸钠缓冲剂。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约5.0至约8.0或约5.5至约7.0的柠檬酸钠缓冲剂。
在替代性实施例中，所用的缓冲剂是呈微碱性pH值的三(羟基甲基)氨基甲烷、碳酸氢盐、碳酸盐或磷酸盐。在一个实施例中，缓冲剂是pH值为约6.5至约8.5、或约7.0至约8.0的碳酸氢钠缓冲剂。在另一实施例中，缓冲剂是pH值为约6.0至约9.0的磷酸二钠缓冲剂。
本文还描述包含耳感觉细胞调节剂和粘度增强剂的控制释放调配物或装置。仅举例来说，适合的粘度增强剂包括胶凝剂和悬浮剂。在一个实施例中，粘度增强的调配物不包括缓冲剂。在其它实施例中，粘度增强的调配物包括医药学上可接受的缓冲剂。必要时，任选使用氯化钠或其它张力剂来调节张力。
仅举例来说，耳可接受的粘度剂包括羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、硫酸软骨素钠、透明质酸钠。与目标耳结构相容的其它粘度增强剂包括(但不限于)阿拉伯胶、琼脂、硅酸铝镁、海藻酸钠、硬脂酸钠、墨角藻(bladderwrack)、膨土、卡波姆、卡拉胶、卡波普(Carbopol)、黄原胶、纤维素、微晶纤维素(MCC)、长角豆(ceratonia)、几丁质、羧甲基化聚葡萄胺糖、角叉菜(chondrus)、右旋糖、红藻胶(furcellaran)、明胶、印度树胶(Ghatti gum)、瓜尔胶、锂皂石(hectorite)、乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精、甘露醇、山梨醇、蜂蜜、玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、苹婆胶(sterculia gum)、黄原胶、黄芪胶、乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、乙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、氧化聚明胶(oxypolygelatin)、果胶、聚明胶肽(polygeline)、聚维酮、碳酸丙二酯、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物(PVM/MA)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙基酯)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙基酯)、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(CMC)、二氧化硅、聚乙烯吡咯烷酮(PVP：聚维酮)、(右旋糖、麦芽糖糊精和蔗糖素)或其组合。在具体实施例中，粘度增强赋形剂是MCC与CMC的组合。在另一实施例中，粘度增强剂是羧甲基化壳聚糖或几丁质与海藻酸盐的组合。几丁质和海藻酸盐与本文公开的耳感觉细胞调节剂的组合以控制释放调配物形式起作用，限制耳感觉细胞调节剂从调配物中扩散。此外，任选使用羧甲基化壳聚糖与海藻酸盐的组合以帮助增加耳感觉细胞调节剂穿过圆窗膜的渗透性。
一些实施例是粘度增强的调配物，包含约0.1mM与约100mM的耳感觉细胞调节剂、医药学上可接受的粘度剂和注射用水，粘度剂于水中的浓度足以提供最终粘度为约100至约100,000cP的粘度增强的调配物。在某些实施例中，凝胶的粘度在约100至约50,000cP、约100cP至约1,000cP、约500cP至约1500cP、约1000cP至约3000cP、约2000cP至约8,000cP、约4,000cP至约50,000cP、约10,000cP至约500,000cP、约15,000cP至约1,000,000cP的范围内。在其它实施例中，当需要甚至更粘的介质时，生物相容的凝胶包含以重量计至少约35％、至少约45％、至少约55％、至少约65％、至少约70％、至少约75％或甚至至少约80％左右的耳感觉细胞调节剂。在高度浓缩的样品中，生物相容的粘度增强调配物包含以重量计至少约25％、至少约35％、至少约45％、至少约55％、至少约65％、至少约75％、至少约85％、至少约90％或至少约95％或95％以上的耳感觉细胞调节剂。
在一些实施例中，本文呈示的凝胶调配物的粘度由任何描述的方式测量。举例来说，在一些实施例中，使用LVDV-II+CP锥板式粘度计和锥轴式CPE-40计算本文所述的凝胶调配物的粘度。在其它实施例中，使用博力飞(Brookfield)(轴式和杯式)粘度计计算本文所述的凝胶调配物的粘度。在一些实施例中，本文提及的粘度范围是在室温下测量。在其它实施例中，本文提及的粘度范围是在体温(例如健康人类的平均体温)下测量。
在一个实施例中，医药学上可接受的粘度增强的耳可接受的调配物包含至少一种耳感觉细胞调节剂和至少一种胶凝剂。用于制备凝胶调配物的适合胶凝剂包括(但不限于)纤维素、纤维素衍生物、纤维素醚(例如羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素)、瓜尔胶、黄原胶、刺槐豆胶、海藻酸盐(例如海藻酸)、硅酸盐、淀粉、黄芪胶、羧乙烯基聚合物、卡拉胶、石蜡、凡士林和其任何组合或混合物。在一些其它实施例中，利用羟丙基甲基纤维素(美多秀
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)作为胶凝剂。在某些实施例中，还利用本文所述的粘度增强剂作为本文呈示的凝胶调配物的胶凝剂。
在一些实施例中，本文公开的耳部治疗剂以耳可接受的涂剂形式分配。如本文所使用，涂剂(也称为成膜剂)是包含溶剂、单体或聚合物、活性剂和任选的一种或一种以上医药学上可接受的赋形剂的溶液。施用于组织后，溶剂蒸发，留下包含单体或聚合物和活性剂的薄涂层。涂层保护活性剂且将其以固定状态维持在施用部位。此举可减小可能损失的活性剂的量并相应增加传递给个体的量。作为非限制性实例，涂剂包括火棉胶(例如弹性火棉胶，USP)以及包含糖类硅氧烷共聚物和交联剂的溶液。火棉胶是含有火棉(硝化纤维素)的乙醚/乙醇溶液。施用后，乙醚/乙醇溶液蒸发，留下火棉薄膜。在包含糖类硅氧烷共聚物的溶液中，糖类硅氧烷共聚物在溶剂蒸发引发糖类硅氧烷共聚物交联之后形成涂层。关于涂剂的其它揭示内容，参看雷明顿：药学科学和实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，其关于这一主题的内容并入本文中。涵盖在本文中使用的涂剂是弹性的以致其不会干扰压力波穿过耳朵传播。另外，涂剂可以液体(即，溶液、悬浮液或乳液)、半固体(即，凝胶、泡沫体、糊状物或胶状物)或气雾剂形式施用。
在一些实施例中，本文公开的耳部治疗剂以控制释放泡沫体形式分配。适用于本文公开的组合物的可泡沫化载剂的实例包括(但不限于)海藻酸和其衍生物、羧甲基纤维素和其衍生物、胶原蛋白、多糖(包括例如葡聚糖、葡聚糖衍生物、果胶、淀粉、变性淀粉，诸如具有额外羧基和/或酰胺基和/或具有亲水性侧链的淀粉)、纤维素和其衍生物、琼脂和其衍生物(诸如经聚丙烯酰胺稳定的琼脂)、聚氧化乙烯、甲基丙烯酸乙二醇酯、明胶、胶(诸如黄原胶(xanthum gum)、瓜尔胶(guar gum)、刺梧桐树胶(karaya gum)、结冷胶(gellan gum)、阿拉伯胶(arabic gum)、黄芪胶和刺槐豆胶)或其组合。同样适合的是前述载剂的盐，例如海藻酸钠。调配物任选地另外包含发泡剂，其促进泡沫体形成，包括表面活性剂或外置推进剂(external propellant)。适合的发泡剂的实例包括西曲溴铵(cetrimide)、卵磷脂、肥皂、硅酮等。诸如吐等可自市面上购得的表面活性剂也是适合的。
在一些实施例中，取决于特定耳感觉细胞调节剂、所用的其它医药剂或赋形剂/添加剂，其它凝胶调配物也适用，因而视为在本发明的范围内。举例来说，预期其它可购得的基于甘油的凝胶、甘油衍生的化合物、结合或交联的凝胶、基质、水凝胶和聚合物、以及明胶和其衍生物、海藻酸盐和基于海藻酸盐的凝胶、和甚至各种天然和合成水凝胶和水凝胶衍生的化合物全部适用于本文所述的耳感觉细胞调节剂调配物中。在一些实施例中，耳可接受的凝胶包括(但不限于)海藻酸盐水凝胶
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凝胶(康复宝(ConvaTec)，新泽西州普林斯顿(Princeton，N.J.))；
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水凝胶(康复宝(ConvaTec))、Nu-
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(强生医学(Johnson & Johnson Medical)，德克萨斯州阿灵顿(Arlington，Tex.))；
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(V)醋孟南水凝胶(Acemannan Hydrogel)(卡灵顿实验室公司(CarringtonLaboratories，Inc.)，德克萨斯州欧文(Irving，Tex.))；甘油凝胶
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水凝胶(瑞士-美国产物公司(Swiss-American Products，Inc.)，德克萨斯州达拉斯(Dallas，Tex.))和无菌K-
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(强生公司(Johnson&Johnson))。在其它实施例中，生物可降解的生物相容性凝胶还表示存在于本文公开和描述的耳可接受的调配物中的化合物。
在一些开发用于向哺乳动物投药和用于经调配以供人类投药的组合物的调配物中，耳可接受的凝胶占组合物重量的实质上全部。在其它实施例中，耳可接受的凝胶占组合物的高达约98重量％或约99重量％。当需要实质上非流体或实质上粘性的调配物时，希望如此。在另一实施例中，当需要粘性略小或流动性略大的耳可接受的医药凝胶调配物时，调配物的生物相容性凝胶部分占化合物的至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、或甚至至少约80重量％或90重量％。涵盖这些范围内的所有中间整数均在本案的范围内，且在一些替代实施例中，调配流动性更大(因而粘性较小)的耳可接受的凝胶组合物，诸如混合物的凝胶或基质组分占不超过约50重量％、不超过约40重量％、不超过约30重量％的组合物，或甚至占不超过约15重量％或约20重量％的组合物。
耳可接受的悬浮剂
在一实施例中，医药学上可接受的粘度增强调配物中包括至少一种耳感觉细胞调节剂，其中所述调配物另外包含至少一种悬浮剂，其中所述悬浮剂帮助赋予调配物控制释放特征。在一些实施例中，悬浮剂还用于增加耳可接受的耳感觉细胞调节调配物和组合物的粘度。
仅举例来说，悬浮剂包括以下化合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30；乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)；羧甲基纤维素钠；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)；硬脂酸醋酸羟甲基纤维素；聚山梨醇酯-80；羟乙基纤维素；海藻酸钠；胶，诸如黄芪胶和阿拉伯树胶、瓜尔胶；黄原胶类，包括黄原胶；糖；纤维素塑料，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯、聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯、聚维酮等。在一些实施例中，适用的水性悬浮液还含有一种或一种以上聚合物作为悬浮剂。适用的聚合物包括水溶性聚合物，诸如纤维素聚合物，例如羟丙基甲基纤维素；和水不溶性聚合物，诸如交联含羧基聚合物。
在一实施例中，本发明提供于羟乙基纤维素凝胶中包含治疗有效量的耳感觉细胞调节剂的耳可接受的凝胶组合物。获得呈干粉状的羟乙基纤维素(HEC)，其于水或水性缓冲溶液中复原以得到想要的粘度(一般为约200cps到约30,000cps，对应于约0.2到约10％HEC)。在一实施例中，HEC的浓度在约1％与约15％之间，约1％与约2％之间，或约1.5％与约2％之间。
在其它实施例中，包括凝胶调配物和粘度增强调配物的耳可接受的调配物另外包括赋形剂、其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、盐、增溶剂、消泡剂、抗氧化剂、分散剂、润湿剂、表面活性剂或其组合。
耳可接受的光化辐射可固化凝胶
在其它实施例中，凝胶是光化辐射可固化凝胶，以致投予目标耳结构中或附近后，利用光化辐射(或光，包括紫外光、可见光或红外光)形成想要的凝胶性质。仅举例来说，使用光纤提供光化辐射以形成想要的凝胶性质。在一些实施例中，光纤和凝胶投予装置形成单个单元。在其它实施例中，光纤和凝胶投予装置分开提供。
耳可接受的溶剂释放凝胶
在一些实施例中，凝胶是溶剂释放凝胶，以致想要的凝胶性质在投予目标耳结构中或附近之后形成，其为当注入的凝胶调配物中的溶剂扩散出凝胶时，形成具有想要凝胶性质的凝胶。举例来说，包含蔗糖醋酸异丁酸酯、医药学上可接受的溶剂、一种或一种以上添加剂和耳感觉细胞调节剂的调配物投予圆窗膜之上或附近：溶剂扩散出注入的调配物提供具有想要凝胶性质的储库。举例来说，使用水溶性溶剂，当溶剂快速扩散出注入的调配物时提供高粘度储库。另一方面，使用疏水性溶剂(例如苯甲酸苄酯)提供粘度较小的储库。耳可接受的溶剂释放凝胶调配物的一个实例是杜雷科特公司(DURECTCorporation)销售的SABERTM传递系统。
耳可接受的现场形成海绵状材料
实施例的范围内还涵盖使用在内耳或中耳中现场形成的海绵状材料。在一些实施例中，海绵状材料由透明质酸或其衍生物形成。海绵状材料浸有想要的耳感觉细胞调节剂且放置到中耳内以控制释放耳感觉细胞调节剂在中耳内，或与圆窗膜接触放置以控制释放耳感觉细胞调节剂到内耳内。在一些实施例中，海绵状材料是生物可降解的。
圆窗膜粘膜粘附剂
实施例范围内还涵盖向本文公开的耳感觉细胞调节剂调配物和组合物和装置中添加圆窗膜粘膜粘附剂。术语‘粘膜粘附’用于指结合于诸如三层圆窗膜的外膜等生物膜的粘蛋白层的物质。为用作圆窗膜粘膜粘附聚合物，聚合物具有一些一般生理化学特征，诸如阴离子亲水性占优和许多氢键形成基团、适于润湿粘液/粘膜组织表面的表面性质或足以渗透粘液网络的灵活性。
与耳可接受的调配物一起使用的圆窗膜粘膜粘附剂包括(但不限于)至少一种可溶性聚乙烯吡咯烷酮聚合物(PVP)；水可膨胀但不溶于水的纤维状交联羧基官能型聚合物；交联聚(丙烯酸)(例如
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947P)；卡波姆同聚物；卡波姆共聚物；亲水性多糖胶、麦芽糖糊精、交联海藻酸盐胶凝胶、水可分散性聚羧基化乙烯基聚合物、至少两种选自由二氧化钛、二氧化硅和粘土组成的群组的颗粒组分、或其混合物。圆窗膜粘膜粘附剂任选与耳可接受的粘度增加赋形剂组合使用，或单独使用以增加调配物与粘膜层目标耳部组件的相互作用。在一个非限制性实例中，粘膜粘附剂是麦芽糖糊精。在一些实施例中，粘膜粘附剂是海藻酸盐胶。当使用时，赋予组合物的圆窗膜粘膜粘附剂特征处于足以传递有效量的耳感觉细胞调节剂组合物到例如圆窗膜的粘膜层或蜗窗嵴达涂布粘膜的量且此后传递组合物到受影响区域(仅举例来说，包括内耳前庭和/或耳蜗结构)的水平。当使用时，确定本文提供的组合物的粘膜粘附特征，且使用这一信息(以及本文提供的其它教示)，确定适当的量。一种确定足够的粘膜粘附的方法包括监测组合物与粘膜层相互作用的变化，包括(但不限于)测量组合物在不存在和存在粘膜粘附赋形剂的情况下保留或滞留时间的变化。
粘膜粘附剂已描述于例如美国专利第6,638,521号、第6,562,363号、第6,509,028号、第6,348,502号、第6,319,513号、第6,306,789号、第5,814,330号和第4,900,552号中，其各自的揭示内容以引用的方式并入本文中。
在另一非限制性实例中，粘膜粘附剂是例如至少两个选自二氧化钛、二氧化硅和粘土的颗粒组分，其中组合物在投予之前不另外用任何液体稀释，且二氧化硅存在时，水平为组合物的约3重量％到约15重量％。二氧化硅存在时包括烟雾状二氧化硅、沉淀二氧化硅、团聚二氧化硅、凝胶二氧化硅和其混合物。粘土存在时包括高岭土矿物、蛇纹石矿物、蒙脱石、伊利石或其混合物。举例来说，粘土包括锂藻土(laponite)、膨润土、锂蒙脱石、皂石、蒙脱石或其混合物。
在一个非限制性实例中，圆窗膜粘膜粘附剂是麦芽糖糊精。麦芽糖糊精是通过水解任选来源于玉米、马铃薯、小麦或其它植物产品的淀粉所产生的碳水化合物。麦芽糖糊精任选地单独使用或与其它圆窗膜粘膜粘附剂组合使用以使本文公开的组合物具有粘膜粘附特征。在一个实施例中，使用麦芽糖糊精与卡波普聚合物的组合来增加本文公开的组合物或装置的圆窗膜粘膜粘附特征。
在另一实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷和/或糖烷基酯。如本文所使用的“烷基-糖苷”意思是化合物包含任何连接于疏水性烷基的亲水性糖(例如蔗糖、麦芽糖或葡萄糖)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷包含糖经由酰胺键、胺键、氨基甲酸酯键、醚键、硫醚键、酯键、硫酯键、糖苷键、硫糖苷键和/或酰脲键连接于疏水性烷基(例如包含约6至约25个碳原子的烷基)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-麦芽糖苷；己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-葡糖苷；己基-、庚基-、辛基-、壬基-、癸基-、十一烷基-、十二烷基-、十三烷基-、十四烷基-、十五烷基-、十六烷基-、十七烷基-和十八烷基α-或β-D-蔗糖苷；己基-、庚基-、辛基-、十二烷基-、十三烷基-和十四烷基-β-D-硫代麦芽糖苷；十二烷基麦芽糖苷；庚基-或辛基-1-硫代-α-或β-D-吡喃葡萄糖苷；烷基硫代蔗糖苷；烷基麦芽三糖苷；蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰胺；巴拉金糖(palatinose)或异麦芽胺(isomaltamine)经由酰胺键连接于烷基链的衍生物和异麦芽胺经由脲连接于烷基链的衍生物；蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰脲和蔗糖β-氨基-烷基醚的长链脂肪族碳酸酰胺。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是麦芽糖、蔗糖、葡萄糖或其组合经由糖苷键连接于具有9-16个碳原子的烷基链(例如壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基蔗糖苷；壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基葡糖苷；和壬基-、癸基-、十二烷基-和十四烷基麦芽糖苷)。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是十二烷基麦芽糖苷、十三烷基麦芽糖苷和十四烷基麦芽糖苷。
在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基糖苷，其中烷基糖苷是含至少一个葡萄糖的二糖。在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷、正十二烷基-4-O-α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷和/或正十四烷基-4-O-α-D-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡糖苷的表面活性剂。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷于纯水或水溶液中的临界胶束浓度(CMC)小于约1mM。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基-糖苷内的氧原子经硫原子取代。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷是β-异头物。在一些实施例中，圆窗膜粘膜粘附剂是烷基-糖苷，其中烷基糖苷包含90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.5％或99.9％的β-异头物。
耳可接受的控制释放粒子
本文公开的耳感觉细胞调节剂和/或其它医药剂任选地合并于增强或促进耳感觉细胞调节剂的局部传递的控制释放粒子、脂质复合物、脂质体、纳米粒子、微粒、微球体、团聚体、纳米胶囊或其它药剂中。在一些实施例中，使用存在至少一种耳感觉细胞调节剂的单个粘度增强调配物，而在其它实施例中，使用存在至少一种耳感觉细胞调节剂的包含两种或两种以上不同的粘度增强调配物的混合物的医药调配物。在一些实施例中，还采用溶胶、凝胶和/或生物相容基质的组合以提供控制释放耳感觉细胞调节剂组合物或调配物的想要特征。在某些实施例中，控制释放耳感觉细胞调节剂调配物或组合物经一种或一种以上试剂交联以改变或改进组合物的性质。
与本文公开的医药调配物相关的微球体的实例包括：卢齐L.A.(Luzzi，L.A.)，药学心理学杂志(J.Pharm.Psy.)59：1367(1970)；美国专利第4,530,840号；路易斯D.H.(Lewis，D.H.)，″生物活性剂从丙交酯/乙交酯聚合物中的控制释放(Controlled Release ofBioactive Agents from Lactides/Glycolide Polymers)″，作为药物传递系统的生物可降解聚合物(Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems)，查辛M.(Chasin，M.)和朗格R.(Langer，R.)编，马塞尔·德克尔公司(Marcel Decker)(1990)；美国专利第4,675,189号；贝克(Beck)等人，″聚(乳酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)避孕传递系统(Poly(lactic acid)andPoly(lactic acid-co-glycolic acid)Contraceptive Delivery Systems)″，长效类固醇避孕法(Long Acting Steroid Contraception)，米歇尔D.R.(Mishell，D.R.)编，莱文出版社(RavenPress)(1983)；美国专利第4,758,435号；美国专利第3,773,919号；美国专利第4,474,572号。调配成微球体的蛋白质治疗剂的实例包括：美国专利第6,458,387号；美国专利第6,268,053号；美国专利第6,090,925号；美国专利第5,981,719号；和美国专利第5,578,709号，且其揭示内容以引用的方式并入本文中。
虽然微球体通常具有球形，但不规则形状的微粒也有可能。微球体的尺寸可变化，直径从亚微米到1000微米。适于与本文公开的耳可接受的调配物一起使用的微球体是亚微米到250微米直径的微球体，从而允许通过用标准型号针注射来投药。耳可接受的微球体由制造尺寸范围为在可注射组合物中使用所接受的微球体的任何方法制备。任选地用用于投予液体组合物的标准型号针来注射。
用于本文的耳可接受的控制释放粒子中的聚合物基质材料的适合实例包括聚(乙醇酸)、聚-d，l-乳酸、聚-l-乳酸、前述者的共聚物、聚(脂肪族羧酸)、共聚草酸酯、聚己酸内酯、聚二氧杂环己酮(polydioxonene)、聚(原碳酸酯)、聚(乙缩醛)、聚(乳酸-己内酯)、聚原酸酯、聚(乙醇酸-己内酯)、聚二氧杂环己酮、聚酸酐、聚磷嗪(polyphosphazine)、和天然聚合物，包括白蛋白、酪蛋白和一些蜡(诸如甘油单硬脂酸酯和甘油二硬脂酸酯)等。各种可自市面上购得的聚(丙交酯-共-乙交酯)材料(PLGA)任选地用于本文公开的方法中。举例来说，聚(d，l-乳酸-共-乙醇酸)可自勃林格殷格翰公司(Boehringer-Ingelheim)以RESOMER RG 503H购得。这一产品的摩尔百分比组成为50％丙交酯和50％乙交酯。可获得宽范围分子量和乳酸与乙醇酸比率的这些共聚物。一个实施例包括使用聚合物聚(d，l-丙交酯-共-乙交酯)。这类共聚物中丙交酯与乙交酯的摩尔比率包括约95∶5到约50∶50的范围。
聚合物基质材料的分子量具有一定的重要性。分子量应足够高以能形成令人满意的聚合物涂层，即聚合物应是良好的成膜剂。令人满意的分子量通常在5,000到500,000道尔顿范围内。从分子量会影响聚合物生物降解速率的观点来看，聚合物的分子量也很重要。对于药物释放的扩散机理，聚合物应在所有药物从微粒释放之前仍是完整的，然后降解。当聚合物赋形剂生物腐蚀时，药物也从微粒中释放。通过适当选择聚合物材料，可制备一种微球体调配物以致所得微球体展现扩散释放与生物降解释放性质。这适用于得到多相释放模式。
已知多种将化合物囊封于微球体中的方法。在这些方法中，一般使用搅拌器、搅拌机或其它动力学混合技术将耳感觉细胞调节剂分散或乳化于含有成壁材料的溶剂中。然后从微球体中去除溶剂，其后获得微球体产物。
在一实施例中，控制释放耳感觉细胞调节剂调配物通过在乙烯-醋酸乙烯共聚物基质中并入耳感觉细胞调节剂和/或其它医药剂来制备。(参看美国专利第6,083,534号，其揭示内容并入本文中)。在另一实施例中，耳感觉细胞调节剂并入聚(乳酸-乙醇酸)或聚-L-乳酸微球体中。Id.在又一实施例中，耳感觉细胞调节剂囊封于海藻酸酯微球体中。(参看美国专利第6,036,978号，其揭示内容并入本文中)。囊封耳感觉细胞调节剂化合物或组合物的基于生物相容性甲基丙烯酸酯的聚合物任选地用于本文公开的调配物和方法中。多种基于甲基丙烯酸酯的聚合物系统可自市面上购得，诸如以Evonik销售的EUDRAGIT聚合物。甲基丙烯酸酯聚合物的一个适用方面是调配物的性质因并入各种共聚合物而变化。举例来说，聚(丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯)微粒粘膜粘附的性质增强，因为聚(丙烯酸)中的羧基与粘蛋白形成氢键(帕克(Park)等人，药理学研究(Pharm.Res.)，(1987)4(6)：457-464)。变化丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯单体之间的比率可用于调节共聚合物的性质。基于甲基丙烯酸酯的微粒还用于蛋白质治疗调配物中(纳哈(Naha)等人，微囊化杂志(Journal of Microencapsulation)，2008年2月4日(在线公开))。在一实施例中，本文描述的粘度增强耳可接受的调配物包含耳感觉细胞调节剂微球体，其中所述微球体由甲基丙烯酸酯聚合物或共聚物形成。在另一实施例中，本文描述的粘度增强调配物包含耳感觉细胞调节剂微球体，其中微球体具有粘膜粘附性。本文公开的实施例中还明确涵盖其它控制释放系统，包括在含有耳感觉细胞调节剂的固体或空心球体上并入或沉积聚合物材料或基质。可利用的耳感觉细胞调节剂活性没有显著丧失的控制释放系统的类型使用本文公开的教示、实例和原理确定。
药物制剂的常规微囊法的一个实例显示于美国专利第3,737,337号中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。使用常规混合器，包括(在分散液制备时)振动器和高速搅拌器等，将待囊封或包埋的耳感觉细胞调节剂物质溶解或分散于聚合物(A相)的有机溶液中。再次使用常规混合器，诸如高速混合器、振动混合器或甚至喷雾嘴，在水相(B)中分散含有呈溶液状态或悬浮状态的核心材料的相(A)，在此情况下，微球体的粒度将不仅由相(A)的浓度而且由乳化物或微球体尺寸来决定。利用微囊化耳感觉细胞调节剂的常规方法，当通过搅拌、搅动、振动或其它动力学混合技术，通常历经一段相对较长的时间，将含有活性剂和聚合物的溶剂乳化或分散于不混溶溶液中时，形成微球体。
微球体的构造方法还描述于美国专利第4,389,330号和美国专利第4,530,840号中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。将想要的耳感觉细胞调节剂溶解或分散于适当的溶剂中。向含药剂的介质中所加入的聚合物基质材料相对于活性成分的量可赋予产品想要的活性剂负荷。任选地，可将耳感觉细胞调节剂微球体产品的所有成分一起掺合于溶剂介质中。能溶解药剂和聚合物基质材料的适合溶剂包括有机溶剂，诸如丙酮、卤代烃(诸如氯仿、二氯甲烷等)、芳香族烃化合物、卤化芳香族烃化合物、环状醚、醇、乙酸乙酯等。
在连续相加工介质中乳化各成分于溶剂中的混合物；所述连续相介质使得在连续相介质中形成含有指示成分的微滴分散液。当然，连续相加工介质和有机溶剂必须不混溶，且包括水，但任选地使用诸如二甲苯和甲苯等非水性介质和合成油和天然油。任选地，向连续相加工介质中加入表面活性剂以防止微粒凝聚且控制乳液中溶剂微滴的尺寸。优选的表面活性剂分散介质组合是1到10重量％聚(乙烯醇)于水中的混合物。分散液通过机械搅拌混合的材料形成。乳液任选地通过向连续相加工介质中加入小滴活性剂成壁材料溶液来形成。虽然乳液形成期间的温度不是特别重要，但其影响微球体的尺寸和质量以及药物在连续相中的溶解性。希望连续相中具有尽可能少的药剂。此外，视采用的溶剂和连续相加工介质而定，温度不能太低，否则溶剂和加工介质将固化，或从实用目的来看，加工介质将变得太粘稠，或温度不能太高，否则加工介质将蒸发或液体加工介质不能维持。此外，介质温度不能太高以致不利地影响并入微球体中的特定药剂的稳定性。因此，分散过程在任何维持稳定操作条件的温度下进行，优选温度为约15℃到60℃，视所选药物和赋形剂而定。
所形成的分散液是稳定乳液，且在溶剂去除过程的第一步骤中，任选地从这一分散液中部分去除有机溶剂不混溶液体。利用诸如加热、施加减压或两者的组合等技术来去除溶剂。虽然用于从微滴中蒸发溶剂的温度并不重要，但不应高到以致其降解既定微粒制备中所采用的耳感觉细胞调节剂，也不应高得以致溶剂蒸发速率太快从而在成壁材料中产生缺陷。一般来说，在第一溶剂去除步骤中去除5％到75％的溶剂。
第一阶段后，利用任何便利的分离方法从流体介质中分离溶剂不混溶流体介质中的分散微粒。因此，举例来说，从微球体中倾析流体或过滤微球体悬浮液。另外，需要时，使用分离技术的各种组合。
从连续相加工介质中分离微球体后，通过萃取去除微球体中的剩余溶剂。在这一步骤中，将微球体悬浮于步骤1中所用的同一连续相加工介质(有或无表面活性剂)或另一液体中。萃取介质从微球体中去除溶剂但不溶解微球体。萃取期间，任选地去除溶解有溶剂的萃取介质并用新鲜萃取介质置换。此举最好不断进行。既定方法的萃取介质补充速率是所述方法进行时确定的变量，因此无需预先确定所述速率的精确界限。在大多数溶剂已从微球体中去除后，通过暴露于空气中或通过其它常规干燥技术(诸如真空干燥、干燥剂干燥等)干燥微球体。这一方法对囊封耳感觉细胞调节剂非常有效，因为获得多达80重量％、优选多达60重量％的核心负荷。
或者，通过使用静态混合器制备含有耳感觉细胞调节剂的控制释放微球体。静态或不动混合器由接收多种静态混合剂的管道或管组成。静态混合器在相对较短长度的管道和相对较短的时间内提供均匀混合。用静态混合器，使流体流经混合器而不是混合器的某一部分(诸如桨叶)移动通过流体。
任选地使用静态混合器形成乳液。当使用静态混合器形成乳液时，若干因素决定乳液粒径，包括待混合的各种溶液或相的密度和粘度、各相的体积比、相之间的界面张力、静态混合器参数(管道直径；混合元件的长度；混合元件的数目)和通过静态混合器的线速度。温度是变量，因为其影响密度、粘度和界面张力。控制变量是线速度、剪切速率和单位长度静态混合器的压降
为使用静态混合器方法形成含有耳感觉细胞调节剂的微球体，组合有机相和水相。有机相和水相在很大程度上或实质上不混溶，其中水相构成乳液的连续相。有机相包括耳感觉细胞调节剂以及成壁聚合物或聚合物基质材料。通过将耳感觉细胞调节剂溶解于有机溶剂或其它适合的溶剂中或通过形成含有耳感觉细胞调节剂的分散液或乳液来制备有机相。泵送有机相和水相以使两相同时流经静态混合器，由此形成包含含有耳感觉细胞调节剂囊封于聚合物基质材料中的微球体的乳液。泵送有机相和水相流经静态混合器进入大量冷却液(quench liquid)中以萃取或去除有机溶剂。任选地从微球体中去除有机溶剂，同时于冷却液中洗涤或搅拌微球体。在微球体于冷却液中洗涤之后，过筛分离，并干燥。
在一实施例中，使用静态混合器制备微球体。虽然这一方法不限于上文论述的溶液萃取技术，但与其它囊封技术一起使用。举例来说，这一方法任选地与相分离囊封技术一起使用。为实现此举，制备包含悬浮或分散于聚合物溶液中的耳感觉细胞调节剂的有机相。非溶剂第二相不含能溶解聚合物和活性剂的溶剂。优选非溶剂第二相是硅油。通过静态混合器将有机相和非溶剂相泵送到诸如庚烷等非溶剂冷却液中。冷却半固体粒子以完全硬化和洗涤。微囊法包括喷雾干燥、溶剂蒸发、蒸发和萃取的组合以及熔融挤出。
在另一实施例中，微囊法涉及使用利用单一溶剂的静态混合器。这一方法详细描述于美国申请案第08/338,805号中，其所述揭示内容以引用的方式并入本文中。另一替代方法涉及使用利用共溶剂的静态混合器。在这一方法中，制备包含生物可降解的聚合粘合剂和耳感觉细胞调节剂的生物可降解微球体，其包含至少两种实质上无毒溶剂的无卤代烃掺合物以溶解药剂与聚合物。将含有溶解的药剂和聚合物的溶剂掺合物分散于水溶液以形成液滴。然后将所得乳液加入优选含有所述掺合物中至少一种溶剂的水性萃取介质中，由此控制各溶剂的萃取率，从而形成含有医药学活性剂的生物可降解微球体。这一方法的优点在于需要较少萃取介质，因为一种溶剂于水中的溶解性实质上与另一溶剂无关，且尤其在使用特别难萃取的溶剂时溶剂选择性增加。
还涵盖纳米粒子与本文揭示的耳感觉细胞调节剂一起使用。纳米粒子是尺寸为约100nm或100nm以下的材料结构。纳米粒子在医药调配物中的一个用途是形成悬浮液，因为粒子表面与溶剂的相互作用足以克服密度差异。当纳米粒子足够小而能进行无菌过滤时，给纳米粒子悬浮液灭菌(例如，参见美国专利第6,139,870号，其所述揭示内容以引用的方式并入本文中)。纳米粒子包含至少一种乳化于表面活性剂、磷脂或脂肪酸的溶液或水性分散液中的疏水性、水不溶性和水不可分散性聚合物或共聚物。任选地将耳感觉细胞调节剂与聚合物或共聚物一起引入纳米粒子中。
本文还涵盖呈控制释放结构同时穿透圆窗膜并到达内耳和/或中耳目标的脂质纳米胶囊。脂质纳米胶囊任选地通过乳化癸酸与辛酸甘油三酯(Labrafac WL 1349；平均分子量为512)、大豆卵磷脂(
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S75-3；69％磷脂酰胆碱和其它磷脂)、表面活性剂(例如Solutol HS15)(聚乙二醇660羟基硬脂酸酯与游离聚乙二醇660的混合物)、NaCl和水形成。在室温下搅拌混合物，得到水包油乳液。在磁力搅拌下以4℃/min的速率渐进性加热后，在接近70℃应出现一段短时间间隔的透明，在85℃时出现反转的相(油包水液滴)。然后在85℃与60℃之间以4℃/min的速率应用三次冷却与加热循环，且在接近0℃的温度下快速稀释于冷水中，制得纳米胶囊悬浮液。为囊封耳感觉细胞调节剂，所述试剂任选地在即将用冷水稀释之前加入。
还通过将耳感觉细胞调节剂与耳活性剂的水性胶束溶液一起培育90分钟使其插入脂质纳米胶囊中。然后每15分钟使悬浮液涡旋，然后于冰浴中冷却1分钟。
适合的耳可接受的表面活性剂是例如胆酸或牛磺胆酸盐。牛磺胆酸，由胆酸与牛磺酸形成的结合物，是一种完全可代谢的磺酸表面活性剂。牛磺胆酸类似物，牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)，是一种天然存在的胆酸且是牛磺酸与熊去氧胆酸(UDCA)的结合物。任选地使用其它天然存在的阴离子表面活性剂(例如硫酸半乳糖脑苷)、中性表面活性剂(例如乳糖苷基神经酰胺(lactosylceramide))或两性离子表面活性剂(例如鞘磷脂、磷脂酰胆碱、棕榈酰肉碱)制备纳米粒子。
耳可接受的磷脂选自例如天然、合成或半合成磷脂；卵磷脂(磷脂酰胆碱)，诸如纯卵磷脂或大豆磷脂(卵磷脂E100、卵磷脂E80和phospholipon系列，例如phospholipon90)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱甘油酯、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱和磷脂酸，或更尤其使用其混合物。
供耳可接受的调配物使用的脂肪酸选自例如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、花生酸、山萮酸、油酸、肉豆寇烯酸、棕榈油酸、亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥子酸、二十二碳六烯酸等。
适合的耳可接受的表面活性剂选自已知的有机和无机医药赋形剂。所述赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。优选表面改性剂包括非电离型和离子型表面活性剂。两种或两种以上表面改性剂组合使用。
耳可接受的表面活性剂的代表性实例包括氯化十六烷基吡锭、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、葡聚糖、甘油、阿拉伯胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八十六醇、聚西托醇乳化蜡(cetomacrogol emulsifying wax)、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、溴化十二烷基三甲基铵、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羟丙基纤维素(HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、非结晶纤维、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol)、士贝亮(superione)和曲通(triton))、泊洛沙姆、泊洛沙胺(poloxamnine)，一种带电磷脂，诸如二肉豆蔻酰基磷脂酰基甘油、磺基丁二酸二辛基酯(DOSS))；
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1508、磺基丁二酸钠的二烷基酯、Duponol P、Tritons X-200、Crodestas F-110、对异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、Crodestas SL-40(禾大公司(Croda，Inc.))；和SA90HCO，其为C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(伊斯曼柯达公司(Eastman Kodak Co.))；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正癸基β-D-吡喃葡萄糖苷；正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷；正十二烷基β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷；正庚基β-D-硫代葡萄糖苷；正己基β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正壬基β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基β-D-硫代吡喃葡萄糖苷等。大部分这些表面活性剂是已知的医药赋形剂且详细描述于医药赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，由美国医药协会(American Pharmaceutical Association)和英国医药学会(Pharmaceutical Society ofGreat Britain)联合出版(医药出版社(Pharmaceutical Press)，1986)，其揭示内容特别地以引用的方式并入本文中。
疏水性、水不溶性和水不可分散聚合物或共聚物可选自生物相容和生物可降解的聚合物，例如乳酸或乙醇酸聚合物和其共聚物、或聚乳酸/聚氧乙烯(或聚氧丙烯)共聚物(优选分子量在1000与200,000之间)、聚羟基丁酸聚合物、含有至少12个碳原子的脂肪酸的聚内酯或聚酸酐。
纳米粒子可通过团聚或溶剂蒸发技术自添加有包含有效成分和疏水性、水不溶性和水不可分散性聚合物或共聚物的不混溶有机相的磷脂和油酸盐的水性分散液或溶液获得。预乳化所述混合物，然后进行均化作用并蒸发有机溶剂，获得极小尺寸纳米粒子的水性悬浮液。
任选采用各种方法制造在实施例范畴内的耳感觉细胞调节剂纳米粒子。这些方法包括汽化法，诸如自由喷流膨胀、激光汽化、电火花腐蚀、电爆炸和化学气相淀积；物理法，包括机械磨损(例如“高速珠磨(pearlmilling)”技术，伊兰纳米系统公司(ElanNanosystems))、超临界CO2和溶剂置换后的界面沉积。在一实施例中，使用溶剂置换法。由此方法制造的纳米粒子的尺寸易随有机溶剂中聚合物的浓度、混合速率和过程中所用的表面活性剂变化。连续流动混合器提供必要的湍流以确保小粒径。已描述一种类型的任选用于制备纳米粒子的连续流动混合装置(汉森(Hansen)等人，物理化学杂志(JPhys Chem)，92，2189-96，1988)。在其它实施例中，可使用超声波装置、流过均化器或超临界CO2装置来制备纳米粒子。
如果直接合成不能获得适合的纳米粒子均一性，那么使用尺寸排阻色谱法来制造含高度均一药物的粒子，即不含其制造中所涉及的其它组分。使用尺寸排阻色谱(SEC)技术(诸如凝胶过滤色谱)分离粒子结合的耳感觉细胞调节剂或其它医药化合物与游离耳感觉细胞调节剂或其它医药化合物，或选择含耳感觉细胞调节剂纳米粒子的适合粒度范围。各种SEC介质(诸如Superdex 200、Superose 6、Sephacryl 1000)均可自市面上购得，且用于所述混合物的基于尺寸的分馏。另外，任选地利用离心、膜过滤和利用其它分子筛分装置、交联的凝胶/材料和薄膜来纯化纳米粒子。
耳可接受的环糊精和其它稳定调配物
在一具体实施例中，耳可接受的调配物另外包含环糊精。环糊精是含有6、7或8个吡喃葡糖单元的环状寡糖，分别称为α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。环糊精具有增强水可溶性的亲水性外部，和形成空腔的疏水性内部。在水性环境中，其它分子的疏水性部分通常进入环糊精的疏水性空腔形成包合化合物(inclusion compound)。另外，环糊精还能够与不在疏水性空腔内部的分子发生其它类型的非键结相互作用。环糊精的各吡喃葡糖单元具有三个自由羟基，或α-环糊精具有18个羟基，β-环糊精具有21个羟基，且γ-环糊精具有24个羟基。一个或一个以上这些羟基可与若干试剂中的任何试剂反应以形成多种环糊精衍生物，包括羟丙基醚、磺酸盐和磺烷基醚。下文显示β-环糊精和羟丙基-β-环糊精(HPβCD)的结构。
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在一些实施例中，在本文所述的医药组合物中使用环糊精提高药物的溶解度。在许多增强溶解的情况下，涉及包合化合物；然而环糊精与不可溶化合物之间的其它相互作用也提高溶解度。羟丙基-β-环糊精(HPβCD)可以无致热原产品形式购得。其是易溶解于水中的非吸湿性白色粉末。HPβCD是热稳定的且在中性pH值下不降解。因此，环糊精提高治疗剂在组合物或调配物中的溶解度。因此，在一些实施例中，纳入环糊精以增加耳可接受的耳感觉细胞调节剂在本文所述的调配物中的溶解度。在其它实施例中，环糊精另外在本文所述的调配物内用作控制释放赋形剂。
仅举例来说，可用环糊精衍生物包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟乙基β-环糊精、羟丙基γ-环糊精、硫酸化β-环糊精、硫酸化α-环糊精、磺丁基醚β-环糊精。
本文公开的组合物和方法中所用的环糊精的浓度随生理化学性质、药物动力学性质、副作用或不良事件、调配物考虑因素、或其它与治疗活性剂或其盐或前药相关的因素、或组合物中其它赋形剂的性质而变化。因此，在某些情况下，根据本文公开的组合物和方法使用的环糊精的浓度或量将视需要而变化。当使用时，增加耳感觉细胞调节剂的溶解度和/或充当本文所述的任何调配物中的控制释放赋形剂所需的环糊精的量使用本文所述的原理、实例和教示来进行选择。
适用于本文公开的耳可接受的调配物的其它稳定剂包括例如脂肪酸、脂肪醇、醇、长链脂肪酸酯、长链醚、脂肪酸的亲水性衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醚、聚乙烯醇、烃、疏水性聚合物、水分吸收聚合物和其组合。在一些实施例中，还使用稳定剂的酰胺类似物。在其它实施例中，所选稳定剂改变调配物的疏水性(例如油酸、蜡)，或改良调配物中各种组分的混合(例如乙醇)，控制配方中的水分含量(例如PVP或聚乙烯吡咯烷酮)，控制相迁移率(熔点高于室温的物质，诸如长链脂肪酸、醇、酯、醚、酰胺等或其混合物；蜡)，和/或提高配方与囊封材料的相容性(例如油酸或蜡)。在另一实施例中，使用这些稳定剂中的一些作为溶剂/共溶剂(例如乙醇)。在其它实施例中，稳定剂的存在量足以抑制耳感觉细胞调节剂的降解。所述稳定剂的实例包括(但不限于)：(a)约0.5％到约2％w/v甘油，(b)约0.1％到约1％w/v甲硫氨酸，(c)约0.1％到约2％w/v单硫代甘油，(d)约1mM到约10mM EDTA，(e)约0.01％到约2％w/v抗坏血酸，(f)0.003％到约0.02％w/v聚山梨醇酯80，(g)0.001％到约0.05％w/v聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(l)多硫酸戊聚糖和其它类肝素，(m)二价阳离子，诸如镁和锌；或(n)其组合。
其它适用的耳可接受的耳感觉细胞调节剂调配物包括一种或一种以上抗聚集添加剂以通过降低蛋白质聚集速率来增强耳感觉细胞调节剂调配物的稳定性。所选抗聚集添加剂取决于例如耳感觉细胞调节剂抗体等耳感觉细胞调节剂所暴露的条件的性质。举例来说，经受搅拌和热应力的某些调配物需要与经受冻干和复原的调配物不同的抗聚集添加剂。仅举例来说，适用的抗聚集添加剂包括脲、氯化胍、诸如甘氨酸或精氨酸等简单氨基酸、糖、多元醇、聚山梨醇酯、诸如聚乙二醇和葡聚糖等聚合物、诸如烷基糖苷等烷基糖类、和表面活性剂。
需要时，其它适用的调配物任选包括一种或一种以上耳可接受的抗氧化剂以增强化学稳定性。仅举例来说，适合的抗氧化剂包括抗坏血酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠和偏亚硫酸氢钠。在一个实施例中，抗氧化剂选自金属螯合剂、含硫醇化合物和其它一般稳定剂。
其它适用的组合物包括一种或一种以上耳可接受的表面活性剂以增强物理稳定性或用于其它目的。适合的非离子型表面活性剂包括(但不限于)聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。
在一些实施例中，本文所述的耳可接受的医药调配物就化合物降解来说在任何以下时期内是稳定的：至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月。在其它实施例中，本文所述的调配物就化合物降解来说在至少约1周的时期内是稳定的。本文还描述就化合物降解来说在至少约1个月的时期内是稳定的调配物。
在其它实施例中，将另一表面活性剂(共表面活性剂)和/或缓冲剂与一种或一种以上本文先前所述的医药学上可接受的媒剂组合以使表面活性剂和/或缓冲剂将产品维持在稳定性最佳的pH值下。适合的共表面活性剂包括(但不限于)：a)天然与合成亲脂性试剂，例如磷脂、胆固醇和胆固醇脂肪酸酯和其衍生物；b)非离子型表面活性剂，包括例如聚氧乙烯脂肪醇酯、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘(Span))、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温60)、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温20)和其它吐温、脱水山梨醇酯、甘油酯，例如Myrj与三乙酸甘油酯(glycerol triacetate/triacetin)、聚乙二醇、十六烷醇、十六醇硬脂醇、硬脂醇、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、泊洛沙胺、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如
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RH40、Cremphor A25、Cremphor A20、
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EL)和其它Cremophor、磺基丁二酸酯、烷基硫酸酯(SLS)；PEG甘油基脂肪酸酯，诸如PEG-8甘油基辛酸酯/癸酸酯(Labrasol)、PEG-4甘油基辛酸酯/癸酸酯(Labrafac HydroWL 1219)、PEG-32甘油基月桂酸酯(Gelucire 444/14)、PEG-6甘油基单油酸酯(LabrafilM 1944CS)、PEG-6甘油基亚油酸酯(Labrafil M 2125CS)；丙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯，诸如丙二醇月桂酸酯、丙二醇辛酸酯/癸酸酯；
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700、抗坏血酸基-6-棕榈酸酯、硬脂胺、月桂基硫酸钠、聚氧乙烯三蓖麻醇酸甘油酯和其任何组合或混合物；c)阴离子型表面活性剂包括(但不限于)羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、磺基丁二酸钠二辛酯、海藻酸钠、烷基聚氧乙烯硫酸盐、月桂基硫酸钠、三乙醇胺硬脂酸酯、月桂酸钾、胆汁盐和其任何组合或混合物；和d)阳离子型表面活性剂，诸如溴化十六烷基三甲基铵和氯化十二烷基二甲基苄基-铵。
在另一实施例中，当本发明的耳可接受的调配物中使用一种或一种以上共表面活性剂时，所述共表面活性剂例如与医药学上可接受的媒剂组合且于最终调配物中的存在量例如在约0.1％至约20％、约0.5％至约10％范围内。
在一实施例中，表面活性剂的HLB值为0到20。在其它实施例中，表面活性剂的HLB值为0到3、4到6、7到9、8到18、13到15、10到18。
在一个实施例中，还使用稀释剂来稳定耳感觉细胞调节剂或其它医药化合物，因为其提供更稳定的环境。使用溶解于缓冲溶液中的盐(还可提供pH值控制或维持)作为稀释剂，包括(但不限于)磷酸盐缓冲生理盐水溶液。在其它实施例中，凝胶调配物与内淋巴或外淋巴等张：取决于作为耳感觉细胞调节剂调配物的目标的耳蜗部分。等张调配物通过添加张力剂提供。适合的张力剂包括(但不限于)任何医药学上可接受的糖、盐或任何其组合或混合物，诸如但不限于右旋糖和氯化钠。在其它实施例中，张度剂的存在量为约100mOsm/kg到约500mOsm/kg。在一些实施例中，张度剂的存在量为约200mOsm/kg到约400mOsm/kg，约280mOsm/kg到约320mOsm/kg。如本文所述，张力剂的量将取决于医药调配物的目标结构。
适用的张力组合物还包括使组合物的重量渗透摩尔浓度在外淋巴或内淋巴可接受的范围内所需的量的一种或一种以上盐。所述盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；适合的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些实施例中，本文公开的耳可接受的凝胶调配物替代地或另外含有防腐剂以防止微生物生长。用于本文所述的粘度增强的调配物的适合耳可接受的防腐剂包括(但不限于)苯甲酸、硼酸、对羟基苯甲酸盐、醇、季铵化合物、稳定的二氧化氯、汞剂(诸如硝酸苯汞和硫柳汞)、上述物质的混合物等。
在另一实施例中，仅举例来说，在本文呈示的耳可接受的调配物内，防腐剂是抗微生物剂。在一个实施例中，调配物包括防腐剂，仅举例来说，对羟基苯甲酸甲酯、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、氯丁醇、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、苯基乙醇等。在另一实施例中，对羟基苯甲酸甲酯的浓度为约0.05％至约1.0％，约0.1％至约0.2％。在另一实施例中，凝胶通过混合水、对羟基苯甲酸甲酯、羟乙基纤维素和柠檬酸钠来制备。在另一实施例中，凝胶通过混合水、对羟基苯甲酸甲酯、羟乙基纤维素和乙酸钠来制备。在另一实施例中，混合物通过在120℃高压灭菌处理约20分钟来灭菌，且在与适量本文公开的耳感觉细胞调节剂混合之前，测试pH值、对羟基苯甲酸甲酯浓度和粘度。
药物传递媒剂中所用的适合的耳可接受的水溶性防腐剂包括亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、氯丁醇、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、丁基化羟基甲苯(BHT)、苯基乙醇等。这些试剂的存在量一般为约0.001重量％至约5重量％，且存在量优选为约0.01重量％至约2重量％。在一些实施例中，本文所述的耳相容性调配物不含防腐剂。
圆窗膜渗透增强剂
在另一实施例中，调配物另外包含一种或一种以上圆窗膜渗透增强剂。穿过圆窗膜的渗透通过存在圆窗膜渗透增强剂来增强。圆窗膜渗透增强剂是有利于将共投予的物质传输穿过圆窗膜的化学实体。圆窗膜渗透增强剂根据化学结构分组。诸如月桂基硫酸钠、月桂酸钠、聚氧乙烯-20-十六烷基醚、月桂醇-9、十二烷基磺酸钠、磺基丁二酸钠二辛酯、聚氧乙烯-9-月桂基醚(PLE)、吐
Figure BPA00001308809100971
80、壬基苯氧基聚乙烯(NP-POE)、聚山梨醇酯等离子型与非离子型表面活性剂可用作圆窗膜渗透增强剂。胆汁盐(诸如甘胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺双氢褐霉素钠(sodium taurodihydrofusidate)、糖双氢褐霉素钠等)、脂肪酸和衍生物(诸如油酸、羊脂酸、甘油单酯和甘油二酯、月桂酸、酰基胆碱、羊脂酸、酰基肉碱、癸酸钠等)、螯合剂(诸如EDTA、柠檬酸、水杨酸盐等)、亚砜(诸如二甲亚砜(DMSO)、十二烷基甲基亚砜等)和醇(诸如乙醇、异丙醇、甘油、丙二醇等)也可用作圆窗膜渗透增强剂。
在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含烷基糖苷的表面活性剂，其中烷基糖苷是十四烷基-β-D-麦芽糖苷。在一些实施例中，耳可接受的渗透增强剂是包含烷基糖苷的表面活性剂，其中烷基糖苷是十二烷基-麦芽糖苷。在某些情况下，渗透增强剂是透明质酸酶(hyaluronidase)。在某些情况下，透明质酸酶是人类或牛透明质酸酶。在一些情况下，透明质酸酶是人类透明质酸酶(例如人类精子中可见的透明质酸酶、PH20(哈罗齐姆公司(Halozyme))、
Figure BPA00001308809100972
(巴克斯特国际有限公司(Baxter International，Inc.))。在一些情况下，透明质酸酶是牛透明质酸酶(例如牛睾丸透明质酸酶、
Figure BPA00001308809100973
(安发斯达制药公司(Amphastar Pharmaceuticals))、
Figure BPA00001308809100974
(普瑞姆制药公司(PrimaPharm，Inc))。在一些情况下，透明质酸酶是羊透明质酸酶，
Figure BPA00001308809100975
(ISTA制药公司(ISTA Pharmaceuticals))。在某些情况下，本文所述的透明质酸酶是重组透明质酸酶。在一些情况下，本文所述的透明质酸酶是人类化重组透明质酸酶。在一些情况下，本文所述的透明质酸酶是聚乙二醇化透明质酸酶(例如PEGPH20(哈罗齐姆公司(Halozyme)))。另外，涵盖美国专利第7,151,191号、第6,221,367号和第5,714,167号(其揭示内容以引用的方式并入本文中)描述的肽样渗透增强剂作为另一实施例。这些渗透增强剂是氨基酸和肽衍生物且能够通过被动跨细胞扩散实现药物吸收而不影响膜或细胞间紧密连接的完整性。
圆窗膜可渗透脂质体
还可采用脂质体或脂质粒子来囊封耳感觉细胞调节剂调配物或组合物。缓和分散于水性介质中的磷脂形成多层微脂粒，其中截留水性介质的区域将各脂质层隔开。对这些多层微脂粒进行超声波处理或湍流搅拌形成单层微脂粒，常称为脂质体，尺寸为约10-1000nm。这些脂质体具有许多作为耳感觉细胞调节剂或其它医药剂载剂的优点。其是生物惰性的，生物可降解的，无毒的且无抗原性。所形成的脂质体具有各种尺寸且具有不同组成和表面特性。另外，其能够截留多种试剂并在脂质体瓦解的部位释放所述试剂。
此处用于耳可接受的脂质体的适合磷脂为例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂、心磷脂、缩醛磷脂、磷脂酸和脑苷脂，尤其为可与本文的耳感觉细胞调节剂一起溶于无毒的医药学上可接受的有机溶剂中的磷脂。优选磷脂为例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油等和其混合物，尤其为卵磷脂，例如大豆卵磷脂。本发明调配物中所用的磷脂的量在约10％至约30％、优选约15％至约25％范围内，且尤其为约20％。
宜采用亲脂性添加剂选择性修饰脂质体的特征。仅举例来说，这些添加剂的实例包括硬脂胺、磷脂酸、生育酚、胆固醇、胆固醇琥珀酸单酯和羊毛脂提取物。所用的亲脂性添加剂的量在0.5％至8％、优选1.5％至4％的范围内，且尤其为约2％。一般来说，亲脂性添加剂的量与磷脂的量的比率在约1∶8至约1∶12范围内，且尤其为约1∶10。所述磷脂、亲脂性添加剂同耳感觉细胞调节剂和其它医药化合物与溶解所述成分的无毒的医药学上可接受的有机溶剂系统结合使用。所述溶剂系统不仅必须完全溶解耳感觉细胞调节剂，而且其必须允许调配物具有稳定的单个双层脂质体。溶剂系统包含约8％至约30％的量的异山梨醇二甲醚(dimethylisosorbide)和四甘醇(四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)，即四氢呋喃聚乙二醇醚(tetrahydrofurfuryl alcohol polyethylene glycolether))。在所述溶剂系统中，异山梨醇二甲醚的量与四甘醇的量的比率在约2∶1至约1∶3、尤其约1∶1至约1∶2.5的范围内，且优选为约1∶2。因此，最终组合物中四甘醇的量从5％到20％、尤其5％到5％不等，且优选为约10％。因此，最终组合物中异山梨醇二甲醚的量在3％至10％、尤其3％至7％范围内，且优选为约5％。
如下文使用的术语“有机组分”是指包含所述磷脂、亲脂性添加剂和有机溶剂的混合物。耳感觉细胞调节剂可溶解于有机组分中，或其它方式以维持药剂的完全活性。最终调配物中耳感觉细胞调节剂的量可在0.1％至5.0％范围内。另外，可向有机组分中添加诸如抗氧化剂等其它成分。实例包括生育酚、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸油酸酯等。
或者，关于耳感觉细胞调节剂或适度耐热的其它医药如下制备脂质体调配物：(a)在容器中将磷脂和有机溶剂系统加热到约60-80℃，溶解所述活性成分，然后添加任何其它调配剂，且搅拌混合物直到完全溶解；(b)在第二容器中将水溶液加热到90-95℃且在其中溶解防腐剂，冷却混合物，然后添加剩余辅助调配剂和剩余水，且搅拌混合物直到完全溶解；由此制得水性组分；(c)将有机相直接转移到水性组分中，同时用高效混合设备(例如高剪切混合器)均质化所述组合，和(d)在进一步均质化时，向所得混合物中添加粘度增强剂。水性组分任选地放置在配备有均质机的适合容器中，且通过在注入有机组分期间制造湍流来实现均质化。可采用对混合物施加高剪切力的任何混合构件或均质机。一般来说，可采用能够从约1,500rpm加速到20,000rpm、尤其约3,000rpm加速到约6,000rpm的混合器。适合用于方法步骤(d)中的粘度增强剂为例如黄原胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或其混合物。粘度增强剂的量视其它成分的性质和浓度而定且一般在约0.5到2.0％范围内或为约1.5％。为防止脂质体调配物制备期间使用的材料降解，宜用诸如氮气或氩气等惰性气体冲洗所有溶液且在惰性气氛下执行所有步骤。通过上述方法制备的脂质体通常含有大多数结合于脂质双层中的活性成分，且不需要分离脂质体与未囊封材料。
在其它实施例中，耳可接受的调配物(包括凝胶调配物和粘度增强的调配物)另外包括赋形剂、其它医学或医药剂、载剂、佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、盐、增溶剂、消泡剂、抗氧化剂、分散剂、润湿剂、表面活性剂或其组合。
用于本文所述的耳可接受的调配物的适合载剂包括(但不限于)与目标耳部结构的生理环境相容的任何医药学上可接受的溶剂。在其它实施例中，基质是医药学上可接受的表面活性剂与溶剂的组合。
在一些实施例中，其它赋形剂包括硬脂酰反丁烯二酸钠、二乙醇胺十六烷基硫酸酯、异硬脂酸酯、聚乙氧基化蓖麻油、壬苯醇醚10(nonoxyl 10)、辛苯聚醇9、月桂基硫酸钠、脱水山梨醇酯(脱水山梨醇单月桂酸酯、脱水山梨醇单油酸酯、脱水山梨醇单棕榈酸酯、脱水山梨醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇倍半油酸酯、脱水山梨醇三油酸酯、脱水山梨醇三硬脂酸酯、脱水山梨醇月桂酸酯、脱水山梨醇油酸酯、脱水山梨醇棕榈酸酯、脱水山梨醇硬脂酸酯、脱水山梨醇二油酸酯、脱水山梨醇倍半异硬脂酸酯、脱水山梨醇倍半硬脂酸酯、脱水山梨醇三异硬脂酸酯)、卵磷脂其医药学上可接受的盐和其组合或混合物。
在其它实施例中，载剂是聚山梨醇酯。聚山梨醇酯是脱水山梨醇酯的非离子型表面活性剂。适用于本发明的聚山梨醇酯包括(但不限于)聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80(吐温80)和其任何组合或混合物。在其它实施例中，利用聚山梨醇酯80作为医药学上可接受的载剂。
在一个实施例中，用于制备医药传递媒剂的基于甘油的水可溶性耳可接受的粘度增强调配物包含含有至少约0.1％水可溶性甘油化合物或更多的至少一种耳感觉细胞调节剂。在一些实施例中，耳感觉细胞调节剂的百分比在总医药调配物的重量或体积的约1％与约95％之间、约5％与约80％之间、约10％与约60％之间或更大百分比间变化。在一些实施例中，各治疗上适用的耳感觉细胞调节剂调配物中化合物的量经制备以使化合物的任何既定单位剂量内将获得适合的剂量。本文涵盖诸如溶解度、生物利用率、生物半衰期、投药途径、产品贮存期以及其它药理学考虑因素等因素。
必要时，耳可接受的医药凝胶除缓冲剂以外还含有共溶剂、防腐剂、共溶剂、离子强度和重量渗透摩尔浓度调节剂和其它赋形剂。适合的耳可接受的水溶性缓冲剂是碱金属或碱土金属碳酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、柠檬酸盐、硼酸盐、乙酸盐、丁二酸盐等，诸如磷酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠、乙酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠和缓血酸胺(TRIS)。这些试剂的存在量足以将系统的pH值维持在7.4±0.2且优选为7.4。因而，缓冲剂以总组合物的重量计多达5％。
使用共溶剂来增强耳感觉细胞调节剂的溶解性，然而，一些耳感觉细胞调节剂或其它医药化合物不可溶。通常借助于适合的悬浮或粘度增强剂将其悬浮于聚合物媒剂中。
此外，一些医药赋形剂、稀释剂或载剂可能具有耳毒性。举例来说，氯化苯甲烃铵，一种常见防腐剂，具有耳毒性，因此如果引入前庭或耳蜗结构中，那么可能有害。在调配控制释放耳感觉细胞调节剂调配物时，建议避免或组合适当的赋形剂、稀释剂或载剂以从调配物中减少或消除可能的耳毒性组分或减少所述赋形剂、稀释剂或载剂的量。控制释放耳感觉细胞调节剂调配物任选包括耳保护剂，诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素、或铁螯合剂，以抵消可因使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂造成的可能的耳毒性作用。
以下是治疗上可接受的耳用调配物：
Figure BPA00001308809101011
或者，本文公开的调配物除至少一种活性剂和/或赋形剂以外还涵盖耳保护剂，包括(但不限于)诸如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素或铁螯合剂等药剂，以抵消可因使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载剂造成的可能的耳毒性作用。
治疗模式
给药方法和时程
传递到内耳的药物已经由经口、静脉内或肌肉内途径全身性投予。然而，针对内耳局部性病理学的全身性投药增加全身性毒性和不良副作用的可能性，且产生药物的非富有成效的分布，在这一分布中，血清中可见高含量的药物而相应地内耳中可见较低含量。
鼓室内注射治疗剂是将治疗剂注射到鼓膜后方的中耳和/或内耳中的技术。在一个实施例中，本文所述的调配物经由经鼓室注射直接投予到圆窗膜上。在另一实施例中，本文所述的耳可接受的耳感觉细胞调节剂调配物经由通向内耳的非经鼓室途径投予到圆窗膜上。在其它实施例中，本文所述的调配物经由通向圆窗膜的外科途径投予到圆窗膜上，包含修改蜗窗嵴。
在一个实施例中，传递系统是能够刺穿鼓膜并直接到达圆窗膜或内耳的蜗窗嵴的注射器和针装置。在一些实施例中，注射器上的针比18号针宽。在另一实施例中，针号为18号到31号。在另一实施例中，针号为25号到30号。取决于耳感觉细胞调节剂组合物或调配物的稠度或粘度，注射器或皮下注射针的针号可相应变化。在另一实施例中，针的内径可通过减小针(通常称为薄壁或超薄壁针)的壁厚来增加以减小针堵塞的可能性，同时维持适当的针型号。
在另一实施例中，针是用于即时传递凝胶调配物的皮下注射针。皮下注射针可为单次使用针或一次性针。在一些实施例中，注射器可用于传递如本文公开的医药学上可接受的基于凝胶的含耳感觉细胞调节剂组合物，其中注射器具有压配合型(press-fit)(Luer)或旋紧型(twist-on)(Luer-lock)接头。在一个实施例中，注射器是皮下注射器。在另一实施例中，注射器由塑料或玻璃制成。在又一实施例中，皮下注射器是单次使用性注射器。在另一实施例中，玻璃注射器能够进行灭菌。在又一实施例中，灭菌利用高压灭菌器进行。在另一实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中凝胶调配物在使用前储存于其中。在其它实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中如本文公开的基于凝胶的医药学上可接受的耳感觉细胞调节剂组合物在使用前储存于其中，其允许便利地与适合的医药学上可接受的缓冲液混合。在其它实施例中，注射器可含有其它赋形剂、稳定剂、悬浮剂、稀释剂或其组合以稳定或以其它方式稳定地储存其中所含的耳感觉细胞调节剂或其它医药化合物。
在一些实施例中，注射器包含圆柱形注射器主体，其中主体被隔室化，各隔室能够储存耳可接受的耳感觉细胞调节剂凝胶调配物的至少一种组分。在另一实施例中，具有隔室化主体的注射器允许在注射到中耳或内耳中之前混合各组分。在其它实施例中，传递系统包含多个注射器，多个注射器的各注射器含有凝胶调配物的至少一种组分以便各组分在注射之前预先混合或在注射之后混合。在另一实施例中，本文公开的注射器包含至少一个储积器，其中至少一个储积器包含耳感觉细胞调节剂或医药学上可接受的缓冲液或粘度增强剂(诸如胶凝剂)或其组合。任选采用呈最简单形式的市售注射装置进行鼓室内注射，如具有注射筒、含针的针组合件、含柱塞杆的柱塞和固定凸缘的即用型塑料注射器。
在一些实施例中，传递装置是设计用于将治疗剂投予中耳和/或内耳的装置。仅举例来说，佳乐医药有限公司(GYRUS Medical Gmbh)提供观测圆窗龛(round window niche)和传递药物至圆窗龛的微耳镜(micro-otoscope)；阿伦伯格(Arenberg)已在美国专利第5,421,818号、第5,474,529号和第5,476,446号中描述传递流体至内耳结构的医学治疗装置，关于所述公开内容，各专利以引用的方式并入本文中。美国专利申请案第08/874,208号(关于所述公开内容，以引用的方式并入本文中)描述植入流体转移导管以传递治疗剂至内耳的外科方法。美国专利申请公开案2007/0167918(关于所述公开内容，以引用的方式并入本文中)另外描述用于鼓室内流体取样和药剂施用的组合型耳用抽吸器和药物分配器。
含有本文所述的耳感觉细胞调节剂化合物的耳可接受的组合物或调配物可投予用于预防性和/或治疗性处理。在治疗性应用中，向已罹患自体免疫疾病、病状或病症的患者投予足以治愈或至少部分阻止疾病、病症或病状的症状的量的耳感觉细胞调节剂组合物。对此用途有效的量将取决于疾病、病症或病状的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态和对药物的反应以及治疗医师的判断。
投药频率
在一些实施例中，本文公开的组合物投予有需要个体一次。在一些实施例中，本文公开的组合物投予有需要个体一次以上。在一些实施例中，第一次投予本文公开的组合物，接着第二次投予本文公开的组合物。在一些实施例中，第一次投予本文公开的组合物，接着第二次和第三次投予本文公开的组合物。在一些实施例中，第一次投予本文公开的组合物，接着第二次、第三次和第四次投予本文公开的组合物。在一些实施例中，第一次投予本文公开的组合物，接着第二次、第三次、第四次和第五次投予本文公开的组合物。在一些实施例中，第一次投予本文公开的组合物，接着为药物假期。
投予有需要个体组合物的次数取决于医学专业人员的判断、病症、病症的严重程度和个体对调配物的反应。在一些实施例中，本文公开的组合物投予罹患轻度急性病状的有需要个体一次。在一些实施例中，本文公开的组合物投予罹患中度或重度急性病状的有需要个体一次以上。在患者的病状未得以改善的情况下，基于医生的判断，可长期投予耳感觉细胞调节剂投药，即长时间投予，包括患者的整个生命持续时间，以改善或以其它方式控制或限制患者的疾病或病状的症状。
在患者的病状未改善的情况下，基于医生的判断，可长期投予耳感觉细胞调节剂化合物投药，即长时间投予，包括患者的整个生命持续时间，以改善或以其它方式控制或限制患者的疾病或病状的症状。
在患者状态改善的情况下，基于医生的判断，可连续给予耳感觉细胞调节剂化合物投药；或者，所投予的药物剂量可暂时减少或暂时暂停某一段时间(即“药物假期”)。药物假期的长度从2天到1年不等，仅举例来说，包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天和365天。药物假期期间，剂量减少可为10％-100％，仅举例来说，包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％和100％。
一旦患者的耳部病状得到改善，必要时即投予维持性耳感觉细胞调节剂剂量。接着，任选根据症状减少投药的剂量或频率或两者至保持疾病、病症或病状改善的水平。在某些实施例中，在症状出现任何复发之后，患者需要长期的间歇疗法。
耳感觉细胞调节剂的对应于这一量的量将视以下因素而变化：诸如特定化合物、疾病病状和其严重程度、病例相关的特定境况，包括例如所投予的具体耳感觉细胞调节剂、投药途径、所治疗的自体免疫病状、所治疗的目标区域和所治疗的个体或宿主。然而，一般来说，用于成年人类治疗的剂量通常会在每次投药0.02-50mg范围内，优选为每次投药1-15mg。所要的剂量以单次剂量或同时(或在短时期内)或以适当间隔投予的分次剂量提供。
在一些实施例中，最初投药是特定耳感觉细胞调节剂，而后续投药是一不同调配物或耳感觉细胞调节剂。
控制释放调配物的药物动力学
在一个实施例中，本文公开的调配物另外提供耳感觉细胞调节剂从组合物中的立即释放，或在1分钟内、或在5分钟内、或在10分钟内、或在15分钟内、或在30分钟内、或在60分钟内、或在90分钟内释放。在其它实施例中，治疗有效量的至少一种耳感觉细胞调节剂从组合物中立即、或在1分钟内、或在5分钟内、或在10分钟内、或在15分钟内、或在30分钟内、或在60分钟内、或在90分钟内释放。在某些实施例中，组合物包含提供至少一种耳感觉细胞调节剂的立即释放的耳医药学上可接受的凝胶调配物。调配物的其它实施例还可包括增强本文包括的调配物粘度的试剂。
在其它或另外的实施例中，调配物提供至少一种耳感觉细胞调节剂的延长释放调配物。在某些实施例中，至少一种耳感觉细胞调节剂从调配物中扩散的持续时间超过5分钟、或15分钟、或30分钟、或1小时、或4小时、或6小时、或12小时、或18小时、或1天、或2天、或3天、或4天、或5天、或6天、或7天、或10天、或12天、或14天、或18天、或21天、或25天、或30天、或45天、或2个月、或3个月、或4个月、或5个月、或6个月、或9个月、或1年。在其它实施例中，治疗有效量的至少一种耳感觉细胞调节剂从调配物中释放的持续时间超过5分钟、或15分钟、或30分钟、或1小时、或4小时、或6小时、或12小时、或18小时、或1天、或2天、或3天、或4天、或5天、或6天、或7天、或10天、或12天、或14天、或18天、或21天、或25天、或30天、或45天、或2个月、或3个月、或4个月、或5个月、或6个月、或9个月、或1年。
在其它实施例中，调配物提供耳感觉细胞调节剂的立即释放与延长释放调配物。在又其它实施例中，调配物含有0.25∶1比率、或0.5∶1比率、或1∶1比率、或1∶2比率、或1∶3、或1∶4比率、或1∶5比率、或1∶7比率、或1∶10比率、或1∶15比率、或1∶20比率的立即释放与延长释放调配物。在另一实施例中，调配物提供第一耳感觉细胞调节剂的立即释放和第二耳感觉细胞调节剂或其它治疗剂的延长释放。在又其它实施例中，调配物提供至少一种耳感觉细胞调节剂和至少一种治疗剂的立即释放和延长释放调配物。在一些实施例中，调配物分别提供0.25∶1比率、或0.5∶1比率、或1∶1比率、或1∶2比率、或1∶3、或1∶4比率、或1∶5比率、或1∶7比率、或1∶10比率、或1∶15比率、或1∶20比率的第一耳感觉细胞调节剂和第二治疗剂的立即释放与延长释放调配物。
在一具体实施例中，调配物在疾病部位提供治疗有效量的至少一种耳感觉细胞调节剂，基本上无全身性暴露。在另一实施例中，调配物在疾病部位提供治疗有效量的至少一种耳感觉细胞调节剂，基本上检测不到全身性暴露。在其它实施例中，调配物在疾病部位提供治疗有效量的至少一种耳感觉细胞调节剂，极少检测到或不可检测到全身性暴露。
立即释放、延迟释放和/或延长释放耳感觉细胞调节剂组合物或调配物的组合可与其它医药剂以及本文公开的赋形剂、稀释剂、稳定剂、张力剂和其它组分组合。因而，取决于所用的耳感觉细胞调节剂、所要的稠度或粘度、或所选的传递模式，本文公开的实施例的替代方面相应地与立即释放、延迟释放和/或延长释放实施例组合。
在某些实施例中，通过将调配物注射于测试动物(包括例如豚鼠或栗鼠)的圆窗膜上或附近来测定本文所述的耳感觉细胞调节剂调配物的药物动力学。在确定的时期(例如，在1周时期内，第6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天和7天测试调配物的药物动力学)，对测试动物实施安乐死且测试5mL外淋巴流体样品。取出内耳且测试耳感觉细胞调节剂的存在。需要时，测量其它器官中耳感觉细胞调节剂的含量。另外，通过从测试动物中抽取血液样品来测量耳感觉细胞调节剂的全身性含量。为确定调配物是否阻碍听力，任选对测试动物的听力进行测试。
或者，提供内耳(从测试动物中取出)并且测量耳感觉细胞调节剂的迁移。作为又一替代，提供圆窗膜的活体外模型，并且测量耳感觉细胞调节剂的迁移。
试剂盒/制品
本案还提供预防、治疗或改善哺乳动物的疾病或病症的症状的试剂盒。所述试剂盒一般将包含一种或一种以上本文公开的耳感觉细胞调节剂控制释放组合物或装置和所述试剂盒的使用说明书。本案还涵盖一种或一种以上耳感觉细胞调节剂控制释放组合物的用途，其用于制造用于治疗、缓解、减轻或改善患有、怀疑患有内耳病症或处于发展内耳病症风险之中的哺乳动物(诸如人类)的疾病、功能异常或病症的症状的药剂。
在一些实施例中，试剂盒包括经划分以容纳一个或一个以上诸如小瓶、管等容器的载具、包装或容器，诸如小瓶、管等容器各包括本文所述的方法中使用的一个独立的元件。适合的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在其它实施例中，容器由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。
本文提供的制品含有包装材料。本文还提供用于包装医药产品的包装材料。参看例如美国专利第5,323,907号、第5,052,558号和第5,033,252号。医药包装材料的实例包括(但不限于)泡罩包装、瓶子、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子和任何适于所选调配物和预定投药模式和治疗的包装材料。预期本文提供的多种耳感觉细胞调节剂调配物和组合物作为用于可通过将耳感觉细胞调节剂控制释放投予至内耳中而受益的任何疾病、病症或病状的多种治疗。
在一些实施例中，从商业和使用者使用本文所述的调配物的观点看，希望试剂盒包括一个或一个以上额外容器，各具有一种或一种以上各种材料(诸如任选呈浓缩形式的试剂，和/或装置)。所述材料的非限制性实例包括(但不限于)缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器；列出内含物和/或使用说明书的载具、包装、容器、小瓶和/或管标签和带使用说明书的包装插页。任选地包括一组说明书。在另一实施例中，标签可位于容器上或附随容器。在又一实施例中，当形成标签的字母、数字或其它字符粘贴、模制或蚀刻于容器本身时，标签可位于容器上；当标签存在于还容纳容器的贮器或载具内部时，其可附随容器，例如包装插页形式。在其它实施例中，标签可用于指明内含物将用于特定的治疗应用。在又一实施例中，标签还指明内含物的用法说明，诸如在本文所述的方法中的用法说明。
在某些实施例中，医药组合物存在于含有一个或一个以上含本文提供的化合物的单位剂型的包装或分配器装置中。在另一实施例中，包装例如含有金属或塑料箔片，诸如泡罩包装。在另一实施例中，包装或分配器装置可随附投药说明书。在又一实施例中，包装或分配器还附带容器附随的呈医药制造、使用或销售的政府管理机构规定的形式的告示，所述告示反映机构批准所述药物形式用于人类或兽医投药。在另一实施例中，所述告示例如是美国食品与药物管理局关于处方药物所批准的标签或批准的产品插页。在又一实施例中，还制备含有本文提供的化合物调配于相容性医药载剂中的组合物，放置在适当的容器中，且加以治疗指示病状的标签。
实例
实例1-制备热可逆性凝胶AMN082调配物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  AMN082   3.0
  对羟基苯甲酸甲酯   0.3
  羟丙基甲基纤维素   3.0
  泊洛沙姆407   54
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   239.7
AMN082以固体形式提供。其于水中再水化成最终摩尔浓度为10mM。
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))悬浮于TRIS HCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％AMN082的凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌所述组合物直到观察到溶解。添加AMN082溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例2-制备粘膜粘附热可逆性凝胶AMN082调配物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  AMN082   3.0
  对羟基苯甲酸甲酯   0.3
  羟丙基甲基纤维素   3.0
  卡波普934P   0.6
  泊洛沙姆407   54
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   239.1
AMN082以固体形式提供。其于水中再水化成最终摩尔浓度为10mM。
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))和卡波普934P悬浮于TRISHCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％AMN082的粘膜粘附凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407、卡波普934P和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407和卡波普934P完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌所述组合物直到观察到溶解。添加AMN082溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例3-制备基于水凝胶的CNQX调配物
Figure BPA00001308809101081
首先通过轻轻混合CNQX与水直到CNQX溶解来制备膏状调配物。然后，通过在高达60℃的温度下混合石蜡油、三羟基硬脂酸酯和鲸蜡基二甲聚硅氧烷共聚醇来制备油基质。冷却油基质到室温，且添加CNQX溶液。混合两相直到形成均一的单相水凝胶。
实例4-制备凝胶卡马西平调配物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  卡马西平   6.4
  壳聚糖   3.2
  甘油磷酸钠   12.8
  水   134.4
滴定5ml乙酸溶液直到pH值为约4.0。添加壳聚糖以使pH值为约5.5。然后将卡马西平溶解于壳聚糖溶液中。通过过滤对这一溶液进行灭菌。另外制备5ml甘油磷酸钠水溶液且灭菌。混合这两种溶液，且在37℃下在2小时内形成所要的凝胶。
实例5-制备粘膜粘附热可逆性凝胶D-甲硫氨酸调配物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  D-甲硫氨酸   3.0
  苯甲醇   0.3
  羟丙基甲基纤维素   3.0
  卡波普934P   0.6
  泊洛沙姆407   54
  磷酸盐缓冲液(pH 7.4)   补足到克
将D-甲硫氨酸溶解于磷酸盐缓冲液中。通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASFCorp.))和卡波普934P悬浮于磷酸盐缓冲液中制备10g批料的含D-甲硫氨酸的粘膜粘附凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407、卡波普934P和磷酸盐缓冲液过夜以确保泊洛沙姆407和卡波普934P完全溶解于缓冲液中。向混合物中添加羟丙基甲基纤维素、苯甲醇和额外的磷酸盐缓冲液。搅拌所述组合物直到观察到溶解。添加D-甲硫氨酸溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例6-制备脂质体AMN082调配物
  成分   量(毫克/克)
  AMN082   3.0
  大豆卵磷脂   200.0
  胆固醇   20.0
  四甘醇   100.0
  异山梨醇二甲醚   50.0
  对羟基苯甲酸甲酯   2.0
  对羟基苯甲酸丙酯   0.2
  BHT   0.1
  氯化钠   1.0
  HPMC   15.0
  氢氧化钠   0.6
  柠檬酸   1.0
  纯水，USP   603.6
AMN082以固体形式提供。其于水中再水化成最终摩尔浓度为10mM。
加热大豆卵磷脂、四甘醇和异山梨醇二甲醚到约70-75℃。将胆固醇和丁基化羟基甲苯溶解于所述加热的混合物中。搅拌直到完全溶解。在另一容器中将约三分之一的水加热到80-95℃，且在搅拌下将防腐剂对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯溶解于加热的水中。冷却溶液到约25℃，然后添加AMN082、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠、氢氧化钠和柠檬酸。添加剩余的水并搅拌直到完全溶解。借助于真空将有机混合物转移到水性混合物中，同时用高剪切混合器使组合均质化直到得到均一的产物。借助于真空向双相混合物中添加羟丙基甲基纤维素，同时用混合器均质化。形成单个双层脂质体。
实例7-制备含(S)-氯胺酮的热可逆性凝胶
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  (S)-氯胺酮   21.0
  对羟基苯甲酸甲酯   2.1
  羟丙基甲基纤维素   21.0
  泊洛沙姆407   378
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   1677.9
通过首先将泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))悬浮于TRIS HCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含1.0％(S)-氯胺酮的凝胶调配物。在4℃下搅拌混合泊洛沙姆407和TRIS过夜以确保泊洛沙姆407完全溶解于TRIS中。添加羟丙基甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯和额外的TRIS HCl缓冲液(0.1M)。搅拌所述组合物直到观察到溶解。添加(S)-氯胺酮溶液且混合组合物直到得到均一凝胶。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例8-制备包含微粉化(S)-氯胺酮粉末的热可逆性凝胶(S)-氯胺酮组合物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  (S)-氯胺酮   20.0
  BHT   0.002
  泊洛沙姆407   160.0
  PBS缓冲液(0.1M)   9.0
用8.2g无菌过滤的去离子水溶解含有2.0％微粉化(S)-氯胺酮、13.8mg二水合磷酸二钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific.))+3.1mg单水合磷酸二氢钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific.))+74mg氯化钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific.))的10g批料的凝胶调配物，且用1M NaOH调节pH值至7.4。冷却缓冲溶液，且在混合下，向冷却的PBS溶液中洒入1.6g泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.)，含有约100ppmBHT)，混合溶液直到所有泊洛沙姆都溶解。使用33mm PVDF 0.22μm无菌针筒过滤器(密理博公司(Millipore Corp.))无菌过滤泊洛沙姆并在无菌环境下转移到2mL无菌玻璃小瓶(惠顿(Wheaton))中，用无菌丁基橡胶塞子(金布尔(Kimble))封闭小瓶并用13mm铝封(金布尔(Kimble))封口。将20mg微粉化(S)-氯胺酮置于各别的洁净去热原小瓶中，用无菌丁基橡胶塞子(金布尔(Kimble))封闭小瓶并用13mm铝封(金布尔(Kimble))封口，在140℃下对小瓶进行干热灭菌(飞世尔科技(Fisher Scientific)Isotemp烘箱)7小时。在投药以便进行本文所述的实验之前，使用连接于1mL无菌注射器(百顿狄金森(Becton Dickinson))的21号针(百顿狄金森(Becton Dickinson))向含有20mg无菌微粉化(S)-氯胺酮的小瓶中传递1mL冷泊洛沙姆溶液，通过振荡充分混合悬浮液以确保悬浮液的均一性。然后用21号注射器抽取悬浮液，且将针换成27号针进行投药。
实例9-制备包含渗透增强剂的热可逆性凝胶微粉化AM-101组合物
  成分   量(每克调配物的毫克数)
  AM-101   20.0
  对羟基苯甲酸甲酯   1.0
  十二烷基麦芽糖苷(A3)   1.0
  HPMC   10.0
  泊洛沙姆407   180.0
  TRIS HCl缓冲液(0.1M)   789.0
通过将1.80g泊洛沙姆407(巴斯夫公司(BASF Corp.))悬浮于5.00g TRIS HCl缓冲液(0.1M)中制备10g批料的含2.0％微粉化AM-101的凝胶调配物，且在4℃下搅拌混合各组分过夜以确保完全溶解。添加(S)-氯胺酮(200.0mg)、羟丙基甲基纤维素(100.0mg)、对羟基苯甲酸甲酯(10mg)和十二烷基麦芽糖苷(10mg)和额外的TRISHCl缓冲液(0.1M)(2.89g)，且进一步搅拌直到观察到完全溶解。将混合物维持在低于室温直到使用。
实例10：pH值对高压灭菌处理的含17％泊洛沙姆407NF/2％耳用药剂的PBS缓冲 液的降解产物的影响
通过用79.3g无菌过滤的去离子水溶解351.4mg氯化钠(飞世尔科技(FisherScientific))、302.1mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、122.1mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和适量耳用药剂制备17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的储备溶液。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入17.05g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SPECTRUM CHEMICALS))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。测量这一溶液的pH值。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的PBS，pH 5.3。取上述溶液的等分试样(约30mL)，且通过添加1M HCl调节pH值至5.3。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂的PBS，pH 8.0。取上述储备溶液的等分试样(约30mL)，且通过添加1M NaOH调节pH值至8.0。
通过用无菌过滤的去离子水溶解805.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、606mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、247mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))，然后补足到200g来制备PBS缓冲液(pH 7.3)。
通过将适量耳用药剂溶解于PBS缓冲液中且用PBS缓冲液补足到10g来制备耳用药剂于PBS(pH 7.3)中的2％溶液。
将1mL样品个别地置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌15分钟。高压灭菌之后，冷却样品至室温，然后置于冰箱中。趁冷混合小瓶，使样品均质化。
观察外观(例如褪色和/或沉淀)并记录。使用配备有Luna C18(2)3μm，100
Figure BPA00001308809101121
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。
使用上述程序测试根据上述程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定高压灭菌处理步骤期间pH值对降解的影响。
实例11：高压灭菌处理对含17％泊洛沙姆407NF/2％耳用药剂的PBS的释放曲线和 粘度的影响
评估样品的等分试样(高压灭菌处理和未高压灭菌处理)的释放曲线和粘度测量以评估热灭菌对凝胶性质的影响。
在37℃下在膜嵌套(snapwell)(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL置于储积器中且使用优莱博(Labline)轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。相对于外部校准标准曲线，使用硫氰酸钴方法在624nm下利用UV分析样品的泊洛沙姆浓度。简单地说，混合20μL样品与1980μL 15mM硫氰酸钴溶液，且使用Evolution 160UV/Vis分光光度计(赛默科技(Thermo Scientific))在625nm下测量吸光度。
将释放的耳用药剂拟合成考斯梅尔-佩帕斯等式(Korsmeyer-Peppas equation)
Q Q &alpha; kt n + b
其中Q是时间t时释放的耳用药剂的量，Qα是耳用药剂的总释放量，k是n次的释放常数，n是与溶解机制相关的无量纲数且b是轴截距，表征最初爆发的释放机制，其中n＝1表征侵蚀控制机制。平均溶解时间(MDT)是不同时段释放之前留在基质中的药物分子的和除以分子总数，且如下计算：
MDT = nk - 1 / n n + 1
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计(Brookfield viscometer)RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线的拐点。
使用上述程序测试根据上述程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定T胶凝。
实例12：添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的调配物在热 灭菌(高压灭菌处理)之后的降解产物和粘度的影响
溶液A：通过用78.4无菌过滤的去离子水溶解178.35mg氯化钠(飞世尔科技(FisherScientific))、300.5mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、126.6mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))制备于PBS缓冲液中包含羧甲基纤维素钠(CMC)的溶液(pH 7.0)，然后向缓冲溶液中洒入1g Blanose 7M65CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时的粘度为5450cP)且加热以帮助溶解，然后冷却溶液。
通过在冰冷水浴中冷却8.1g溶液A，然后添加适量耳用药剂，接着混合，来制备于PBS缓冲液中包含17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的溶液(pH 7.0)。在混合下，向冷溶液中洒入1.74g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。进一步混合混合物直到所有泊洛沙姆完全溶解。
将2mL上述样品置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温，然后置于冰箱中。趁小瓶尚冷时混合，使样品均质化。
在高压灭菌处理之后，观察到沉淀或褪色。使用配备有Luna C18(2)3μm，100
Figure BPA00001308809101132
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行非高压灭菌处理样品的溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL置于储积器中且使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。相对于外部校准标准曲线，在245nm下利用UV分析样品的耳用药剂浓度。
使用上述程序测试包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的调配物在热灭菌(高压灭菌处理)之后降解产物和粘度的影响。
实例13：缓冲液类型对含有泊洛沙姆407NF的调配物在热灭菌(高压灭菌处理) 之后的降解产物的影响
通过用无菌过滤的去离子水溶解377.8mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和602.9mg缓血酸胺(西格玛化学公司(Sigma Chemical Co.))，然后补足到100g来制备TRIS缓冲液，用1M HCl调节pH值至7.4。
含有25％泊洛沙姆407溶液的TRIS缓冲液的储备溶液：
称量45g TRIS缓冲液，在冰冷浴中冷却，然后在混合下，向缓冲液中洒入15g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。进一步混合混合物直到所有泊洛沙姆完全溶解。
用上述储备溶液制备一系列调配物。所有实验使用适量耳用药剂(或其盐或前药)和/或呈微粉化/涂布/脂质体粒子形式的耳用药剂(或其盐或前药)。
含有25％泊洛沙姆407溶液的PBS缓冲液的储备溶液(pH 7.3)：
使用上述PBS缓冲液。用140.4g无菌过滤的去离子水溶解704mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、601.2mg无水磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、242.7mg无水磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入50g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(SPECTRUMCHEMICALS))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
用上述储备溶液制备一系列调配物。所有实验使用适量耳用药剂(或其盐或前药)和/或呈微粉化/涂布/脂质体粒子形式的耳用药剂(或其盐或前药)。
表2和3列出使用上述程序制备的样品。向各样品中添加适量耳用药剂以在样品中提供最终浓度为2％的耳用药剂。
表2.制备含TRIS缓冲液的样品
  样品   pH值  25％储备溶液(g)  TRIS缓冲液(g)
  20％P407/2％耳用药剂/TRIS   7.45   8.01   1.82
  18％P407/2％耳用药剂/TRIS   7.45   7.22   2.61
  16％P407/2％耳用药剂/TRIS   7.45   6.47   3.42
  18％P4072％耳用药剂/TRIS   7.4   7.18   2.64
  4％耳用药剂/TRIS   7.5   -   9.7
  2％耳用药剂/TRIS   7.43   -   5
  1％耳用药剂/TRIS   7.35   -   5
  2％耳用药剂/TRIS(悬浮液)   7.4   -   4.9
表3.制备含PBS缓冲液(pH 7.3)的样品
  样品   25％于PBS中的储备溶液(g)   PBS缓冲液(g)
  20％P407/2％耳用药剂/PBS   8.03   1.82
  18％P407/2％耳用药剂/PBS   7.1   2.63
  16％P407/2％耳用药剂/PBS   6.45   3.44
  18％P407/2％耳用药剂/PBS   -   2.63
  2％耳用药剂/PBS   -   4.9
将1mL样品个别地置于3mL螺旋盖玻璃小瓶(具有橡胶衬)中，且紧密封闭。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。
使用配备有Luna C18(2)3μm，100250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200使用30-80乙腈梯度(1-10min)(含0.05％TFA的水-乙腈混合物)进行HPLC分析，总操作时间为15分钟。通过取30μL样品且用1.5mL 1∶1乙腈水混合物溶解来稀释样品。记录高压灭菌处理样品中耳用药剂的纯度。比较调配物在TRIS与PBS缓冲液中的稳定性。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。仅分析高压灭菌处理之后不显示变化的调配物。
使用上述程序测试包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定添加第二聚合物对含有2％耳用药剂和17％泊洛沙姆407NF的调配物在热灭菌(高压灭菌处理)之后降解产物和粘度的影响。比较含有微粉化耳用药剂的调配物与非微粉化耳用药剂调配物对应物的稳定性。
实例14：脉冲释放型耳用调配物
通过利用本文所述的程序，使用D-甲硫氨酸和D-甲硫氨酸盐酸盐的组合(比率为1∶1)制备脉冲释放型耳用药剂调配物。借助于β-环糊精，将20％传递剂量的D-甲硫氨酸溶解于实例10的17％泊洛沙姆溶液中。然后向混合物中添加其余80％的耳用药剂，且使用本文所述的任何程序制备最终调配物。
使用本文所述的程序测试根据上述程序和实例制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的脉冲释放型调配物以测定脉冲释放曲线。
实例15：制备含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/78ppm伊文思蓝的PBS
通过用1mL PBS缓冲液(来自实例10)溶解5.9mg伊文思蓝(西格玛化学公司(Sigma Chemical Co))制备伊文思蓝(5.9mg/mL)于PBS缓冲液中的储备溶液。
这一研究中使用含有25％泊洛沙姆407的PBS缓冲液溶液的储备溶液。向储备溶液中添加适量耳用药剂以制备包含2％耳用药剂的调配物(表4)。
表4制备含伊文思蓝的泊洛沙姆407样品
Figure BPA00001308809101161
根据上述程序制备包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物，且经由0.22μm PVDF注射器过滤器(密理博公司(Millipore corporation))无菌过滤并高压灭菌处理。
通过本文所述的程序和调配物在接触之后胶凝的能力给予豚鼠的中耳上述调配物，且在给药之后和给药之后24小时辨识凝胶的位置。
实例16：有和无显色染料的泊洛沙姆407调配物的最终灭菌
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液，pH 7.3：用158.1g无菌过滤的去离子水溶解709mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、742mg脱水磷酸二钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific))、251.1mg单水合磷酸二氢钠USP(飞世尔科技(FisherScientific))和适量耳用药剂。在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入34.13g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum chemicals))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
含17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/59ppm伊文思蓝的磷酸盐缓冲液：取2mL 17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液且添加2mL 5.9mg/mL伊文思蓝(西格玛-阿尔德里奇化学公司(Sigma-Aldrich chemical Co))的PBS缓冲液溶液。
25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液：用70.5g无菌过滤的去离子水溶解330.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、334.5mg去水磷酸二钠USP(飞世尔科技(Fisher Scientific))、125.9mg单水合磷酸二氢钠USP(飞世尔科技(FisherScientific))和适量耳用药剂。
在冰冷水浴中冷却溶液，然后在混合下，向冷溶液中洒入25.1g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum chemicals))。进一步混合混合物直到泊洛沙姆完全溶解。
含25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/59ppm伊文思蓝的磷酸盐缓冲液：取2mL25％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/磷酸盐缓冲液且添加2mL 5.9mg/mL伊文思蓝(西格玛-阿尔德里奇化学公司(Sigma-Aldrich chemical Co))的PBS缓冲液溶液。
将2mL调配物置于2mL玻璃小瓶(惠顿(Wheaton)血清玻璃小瓶)中，且用13mm丁基苯乙烯(金布尔(kimble)塞子)密封，且用13mm铝封封口。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温，然后冷冻放置。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。记录在高压灭菌处理之后的样品褪色或沉淀。
使用配备有Luna C18(2)3μm，100
Figure BPA00001308809101171
250×4.6mm管柱)的阿格兰特(Agilent)1200依次使用30-95甲醇∶乙酸盐缓冲液(pH 4)梯度(1-6min)和等梯度(11分钟)进行HPLC分析，总操作时间为22分钟。通过取30μL样品且用0.97mL水溶解来稀释样品。主峰记录在下表中。使用此方法，在高压灭菌处理之前纯度始终大于99％。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从15℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.31s-1)下旋转的CPE-51轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定调配物的稳定性。
实例17：释放曲线的活体外比较
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的6.5mm直径的聚碳酸酯膜)中进行溶解，将0.2mL本文所述的凝胶调配物放置于膜嵌套中并使之硬化，然后将0.5mL缓冲液置于储积器中并使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品(抽取0.1mL且用温缓冲液置换)。利用245nm的紫外线相对于外部校准标准曲线分析样品的耳用药剂浓度。在624nm下使用硫氰酸钴方法分析泊洛尼克浓度。决定随％P407变化的平均溶解时间(MDT)的相对等级次序。调配物平均溶解时间(MDT)与P407浓度之间的线性关系指示耳用药剂因聚合物凝胶(泊洛沙姆)腐蚀而释放，而非经由扩散释放。非线性关系指示耳用药剂经由扩散和/或聚合物凝胶降解的组合释放。
或者，使用李新宇(Li Xin-Yu)论文[药学学报(Acta Pharmaceutica Sinica)2008，43(2)：208-203]描述的方法分析样品，且决定随％P407而变的平均溶解时间(MDT)的等级次序。
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定耳用药剂的释放曲线。
实例18：胶凝温度的活体外比较
出于操纵胶凝温度的目的，评估泊洛沙姆188和耳用药剂对泊洛沙姆407调配物的胶凝温度和粘度的影响。
使用25％泊洛沙姆407的PBS缓冲液储备溶液和上述PBS溶液。使用来自巴斯夫(BASF)的泊洛沙姆188NF。向表5中所述的溶液中添加适量耳用药剂以提供耳用药剂2％的调配物。
表5制备含泊洛沙姆407/泊洛沙姆188的样品
Figure BPA00001308809101181
使用本文所述的程序测量上述调配物的平均溶解时间、粘度和胶凝温度。
将所获得的数据拟合成等式，且可利用这一等式估算F127/F68混合物(17-20％F127和0-10％F68)的胶凝温度。
T胶凝＝-1.8(％F127)+1.3(％F68)+53
将所获得的数据拟合成等式，且可使用上述实例中获得的结果基于F127/F68混合物(17-25％F127和0-10％F68)的胶凝温度利用这一等式估算平均溶解时间(hr)。
MDT＝-0.2(T胶凝)+8
通过向表5中所述的溶液中添加适量耳用药剂来制备包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物。使用上述程序确定调配物胶凝温度。
实例19：测定无菌过滤的温度范围
测量低温下的粘度以帮助指导需要进行无菌过滤以降低堵塞可能性的温度范围。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从10℃上升到25℃)的具有在1、5和10rpm(剪切速率为7.5、37.5和75s-1)下旋转的CPE-40轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。
随耳用药剂浓度递增测定17％泊洛尼克P407的T胶凝。由下式估算17％泊洛尼克调配物的T胶凝的增加：
ΔT胶凝＝0.93[耳用药剂％]
使用上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定无菌过滤的温度范围。记录添加增加量的耳用药剂对调配物的T胶凝和表观粘度的影响。
实例20：决定制造条件
表6.制造/过滤条件下可能的调配物的粘度
Figure BPA00001308809101191
a37.5s-1剪切速率下测得的粘度
制造8升批料的17％P407安慰剂以评估制造/过滤条件。通过将6.4升去离子水置于3加仑SS压力容器中制造安慰剂，且在冰箱中冷却过夜。第二天早晨，取出水槽(水温5℃，室温18℃)，且添加48g氯化钠、29.6g脱水磷酸二钠和10g单水合磷酸二氢钠，且用顶置式混合器(IKA RW20，1720rpm)溶解。半小时后，一旦缓冲液溶解(溶液温度8℃，室温18℃)，在15分钟间隔内向缓冲溶液中缓慢洒入1.36kg泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(spectrum chemicals))(溶液温度12℃，室温18℃)，然后速度增至2430rpm。再混合1小时之后，将混合速率降至1062rpm(完全溶解)。
室温维持在低于25℃以保持溶液温度低于19℃。制造开始后溶液温度维持在低于19℃长达3小时，无需冷冻/冷却容器。
在溶液在20psi和14℃下，评估表面积为17.3cm2的三个不同赛多斯克(Sartoscale)(赛多利斯斯泰迪公司(Sartorius Stedim))过滤器
1)Sartopore 2，0.2μm 5445307HS-FF(PES)，流速：16mL/min
2)Sartobran P，0.2μm 5235307HS-FF(纤维素酯)，流速：12mL/min
3)Sartopore 2XL1，0.2μm 5445307IS-FF(PES)，流速：15mL/min
使用Sartopore 2过滤器5441307H4-SS，使用表面积为0.015m2的0.45，0.2μmSartopore 2150无菌胶囊(赛多利斯斯泰迪公司(Sartorius Stedim))在溶液温度下在16psi压力下进行过滤。在16psi下流速经测量为约100mL/min，当温度维持在6.5-14℃范围内时，流速无变化。溶液的递减压力和递增温度因溶液粘度增加而引起流速减小。在这一过程期间监测溶液的褪色。
表7.17％泊洛沙姆407安慰剂在6.5-14℃的溶液温度范围内使用Sartopore 20.2μm过滤器在16psi压力下预测得到的过滤时间
  过滤器   尺寸(m2)   估算的流速(mL/min)  过滤8升的时间(估算值)
  Sartopore 2，4号   0.015   100mL/min   80min
  Sartopore 2，7号   0.05   330mL/min   24min
  Sartopore 2，8号   0.1   670mL/min   12min
在过滤评估之前，检查粘度、T胶凝和UV/Vis吸收。泊洛尼克UV/Vis光谱由Evolution 160UV/Vis(赛默科技(Thermo Scientific))获得。250-300nm范围内的峰归因于原料中存在BHT稳定剂(泊洛沙姆)。表8列出上述溶液在过滤之前与之后的物理化学性质。
表8.17％泊洛沙姆407安慰剂溶液在过滤之前与之后的物理化学性质
  样品  T胶凝(℃)   19℃下的粘度a(cP)   274nm下的吸光度
  过滤之前   22   100   0.3181
  过滤之后   22   100   0.3081
a37.5s-1剪切速率下测得的粘度
上述工艺适用于制造17％P407调配物，且包括室内条件的温度分析。优选地，最大19℃的温度降低制造期间冷却容器的成本。在一些情况下，使用夹套容器进一步控制溶液温度以减少制造方面的问题。
实例21：高压灭菌处理的微粉化样品中耳用药剂的活体外释放
含17％泊洛沙姆407/1.5％耳用药剂的TRIS缓冲液：将250.8mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))和302.4mg缓血酸胺(西格玛化学公司(Sigma Chemical Co.))溶解于39.3g无菌过滤的去离子水中，用1M HCl调节pH值至7.4。使用4.9g上述溶液，且将适量微粉化耳用药剂充分悬浮并分散。将2mL调配物转移到2mL玻璃小瓶(惠顿(Wheaton)血清玻璃小瓶)中，且用13mm丁基苯乙烯(金布尔(kimble)塞子)密封，且用13mm铝封封口。将小瓶置于马科佛格(Market Forge)sterilmatic高压灭菌器(环境，缓慢的液体)中并在250°F下灭菌25分钟。高压灭菌处理之后，冷却样品至室温。将小瓶置于冰箱中，且趁冷混合以使样品均质化。记录在高压灭菌处理之后的样品褪色或沉淀。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的6.5mm直径的聚碳酸酯膜)中进行溶解，将0.2mL凝胶放置于膜嵌套中并使之硬化，然后将0.5mL PBS缓冲液置于储积器中并使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品[抽取0.1mL且用含2％PEG-40氢化蓖麻油(巴斯夫(BASF))的温PBS缓冲液置换以增强耳用药剂溶解性]。相对于外部校准标准曲线，由245nm的紫外线分析样品的耳用药剂浓度。与本文公开的其它调配物比较释放速率。计算各样品的MDT时间。
通过使用艾本德(eppendorf)离心机5424在15,000rpm下离心样品10分钟之后测量上清液中耳用药剂的浓度来评估17％泊洛沙姆系统中耳用药剂的溶解。相对于外部校准标准曲线，由245nm的紫外线测量上清液中的耳用药剂浓度。
使上述程序测试根据本文所述的程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定耳用药剂从各调配物中的释放速率。
实例22：含有羧甲基纤维素钠的调配物的释放速率或MDT和粘度
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/1％CMC(赫尔克里斯(Hercules)Blanose 7M)：通过将205.6mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、372.1mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、106.2mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(FisherScientific))溶解于78.1g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.0)。向缓冲溶液中洒入1g Blanose 7M CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时粘度为533cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.08g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。通过向9.8g上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到所有耳用药剂完全溶解来制备于PBS缓冲液中包含17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的调配物。
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/0.5％CMC(Blanose 7M65)：通过将257mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、375mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(FisherScientific))、108mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))溶解于78.7g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.2)。向缓冲溶液中洒入0.502g Blanose 7M65CMC(赫尔克里斯(Hercules)，2％时粘度为5450cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.06g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。通过向9.8g上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到耳用药剂完全溶解来制备17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的PBS缓冲液溶液。
17％泊洛沙姆407/2％耳用药剂/0.5％CMC(Blanose 7H9)：通过将256.5mg氯化钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))、374mg二水合磷酸二钠(飞世尔科技(FisherScientific))、107mg单水合磷酸二氢钠(飞世尔科技(Fisher Scientific))溶解于78.6g无菌过滤的去离子水中制备羧甲基纤维素钠(CMC)的PBS缓冲液溶液(pH 7.3)，然后向缓冲溶液中洒入0.502g Blanose 7H9CMC(赫尔克里斯(Hercules)，1％时粘度为5600cP)并加热成流动的溶液，然后冷却溶液，且在混合下向冷溶液中洒入17.03g泊洛沙姆407NF(斯百全化学公司(Spectrum Chemicals))。通过向9.8上述溶液中添加/溶解适量耳用药剂并混合直到耳用药剂完全溶解来制备17％泊洛沙姆407NF/1％CMC/2％耳用药剂的PBS缓冲液溶液。
使用配备有水夹套温控单元(温度以1.6℃/min从10℃上升到34℃)的具有在0.08rpm(剪切速率为0.6s-1)下旋转的CPE-40轴的布氏粘度计RVDV-II+P测量粘度。T胶凝定义为因溶胶-凝胶转变而粘度增加的曲线拐点。
在37℃下在膜嵌套(孔径为0.4μm的直径6.5mm的聚碳酸酯膜)中进行溶解。将0.2mL凝胶置于膜嵌套中且使之硬化，然后将0.5mL PBS缓冲液置于储积器中且使用优莱博轨道振荡器在70rpm下振荡。每小时获取样品，抽取0.1mL且用温PBS缓冲液置换。相对于外部校准标准曲线，在245nm下利用UV分析样品的耳用药剂浓度。将释放速率与上述实例中公开的调配物作比较，且计算上述各调配物的MDT时间。
使用上述程序测试根据上述程序制备的包含DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的调配物以确定含有羧甲基纤维素钠的调配物的释放速率和/或平均溶解时间与粘度之间的关系。记录平均溶解时间(MDT)与表观粘度(在胶凝温度以下2℃时测量)之间的任何关系。
实例23：泊洛沙姆浓度和耳用药剂浓度对释放动力学的影响
使用上述程序制备一系列包含不同浓度的胶凝剂和微粉化地塞米松的组合物。使用上述程序测定表9中各组合物的平均溶解时间(MDT)。
表9：制备泊洛沙姆/耳用药剂组合物
  样品   pH   MDT
  15.5％P407/1.5％地塞米松/PBS   7.4   46小时
  16％P407/1.5％地塞米松/PBS   7.4   40小时
17％P407/1.5％地塞米松/PBS 7.4 39小时
  15.5％P407/4.5％地塞米松/PBS   7.4   ＞7天
  16％P407/4.5％地塞米松/PBS   7.4   ＞7天
  17％P407/4.5％地塞米松/PBS   7.4   ＞7天
胶凝强度和耳用药剂浓度对耳用药剂从组合物或装置中的释放动力学的影响通过测量泊洛沙姆的MDT和测量耳用药剂的MDT来确定。还通过测量耳用药剂在外淋巴中的浓度测定各调配物的耳用药剂的半衰期和耳用药剂的平均滞留时间。
如上所述测量各组合物的表观粘度。上述组合物或装置中约15.5％的热可逆性聚合物凝胶浓度提供约270,000cP的表观粘度。上述组合物或装置中约16％的热可逆性聚合物凝胶浓度提供约360,000cP的表观粘度。上述组合物或装置中约17％的热可逆性聚合物凝胶浓度提供约480,000cP的表观粘度。
使用上述程序测试根据上述程序制备的包含微粉化DNQX、D-甲硫氨酸、微粉化AM-101或微粉化(S)-氯胺酮的组合物以确定耳用药剂从各组合物中的释放速率。
实例24：施用粘度增强耳感觉细胞调节剂调配物于圆窗膜上
制备根据实例8制备的包含AM-101的调配物，且装入5ml硅化玻璃注射器中，连接于15号路厄旋转锁一次性针。利多卡因(Lidocaine)局部施用于鼓膜，且产生小切口以允许观测中耳空腔。将针尖导入圆窗膜上方的位置，且将耳感觉细胞调节剂调配物直接施用于圆窗膜上。
实例25：在豚鼠中鼓室内注射耳感觉细胞调节调配物的活体内试验
给21只豚鼠的群组(查尔斯河(Charles River)，雌性，重200-300g)鼓室内注射50μL含有0至50％耳用药剂的本文所述的不同P407-耳用药剂调配物。测定各调配物的凝胶排除时程。调配物的凝胶排除时程越快指示平均溶解时间(MDT)越短。因此，测试注射体积和调配物中耳感觉细胞调节剂的浓度以决定临床前和临床研究的最佳参数。
实例26：活体内延长释放动力学
给21只豚鼠的群组(查尔斯河(Charles River)，雌性，重200-300g)鼓室内注射50μL缓冲为280mOsm/kg且含有以调配物重量计1.5％至35％的耳感觉细胞调节剂的17％泊洛尼克F-127调配物。第1天对动物进行给药。基于对外淋巴的分析确定调配物的释放曲线。
实例27：在耳鸣小鼠模型中对(S)-氯胺酮进行评估
使用12只重20至24g的哈伦司帕拉格-道利(Harlan Sprague-Dawley)小鼠。训练各小鼠在无声音期间从水分配器中饮水，但在有声音存在时忍住不饮水。投予各小鼠每公斤体重350mg阿司匹林(mg/kg)。
投予阿司匹林后，投予对照组(n＝10)盐水。在投予阿司匹林后，投予实验组(n＝10)(S)-氯胺酮(每公斤体重400mg)。投药经由鼓室内注射进行。
投予(S)-氯胺酮后，监测无外界声音存在时小鼠是否饮水。
实例28：在顺铂诱发的耳毒性小鼠模型中对N-乙酰基半胱氨酸(NAC)进行评估
方法和材料
诱发耳毒性
使用12只重20至24g的哈伦司帕拉格-道利(Harlan Sprague-Dawley)小鼠。测量4-20mHz的基线听觉脑干反应(ABR)。用顺铂(每公斤体重6mg)处理小鼠。顺铂通过静脉内灌输传递到主动脉。
处理
投予顺铂后，投予对照组(n＝10)盐水。投予顺铂后，投予实验组(n＝10)NAC(每公斤体重400mg)。
结果分析
电生理实验
最初和在实验程序后1周测量每只动物每只耳朵对滴答声刺激的听觉脑干反应阈值(ABR)的听力阈值。将动物放置在位于加热板上的单壁隔声间(工业声学公司(IndustrialAcoustics Co)，美国纽约布朗克斯(Bronx，NY，USA))中。将皮下电极(阿斯曲医药公司(Astro-Med，Inc.)格拉斯仪器分公司(Grass Instrument Division)，美国罗得岛州西沃威克(West Warwick，RI，USA))插在颅顶(有效电极)、乳突(参考)和后腿(接地)上。滴答声刺激(0.1毫秒)由计算机产生，且传递到装备有放置在外耳道中的耳镜的200欧姆的Beyer DT 48扬声器。由电池操作的前置放大器放大所记录的ABR并数字化，且输入对刺激、记录和平均功能提供计算机控制的塔克-戴维斯技术(Tucker-DavisTechnologies)ABR记录系统(塔克-戴维斯技术(Tucker Davis Technology)，美国佛罗里达州盖恩斯维尔(Gainesville，FL，USA))中。向动物提供以5dB为步幅的幅度连续递降的刺激，且求取所记录下的刺激锁定活性的平均值(n＝512)并显示。阈值定义为无明显可检测反应与有明显可鉴别反应的记录之间的刺激水平。
实例29-(S)-氯胺酮作为耳鸣治疗的临床试验
活性成分：(S)-氯胺酮
剂量：于10μL热可逆性凝胶中传递10ng。(S)-氯胺酮的释放是控制释放且在30天内发生。
投药途径：鼓室内注射
治疗持续时间：12周
方法学
·单中心
·前瞻性
·随机
·双盲
·安慰剂对照
·平行组
·适应性
纳入标准
·年龄在18岁与64岁之间的男性和女性个体。
·患有主观性耳鸣的个体。
·耳鸣持续时间超过3个月。
·在4周内未治疗耳鸣
评估标准
·功效(主要)
1.耳鸣问卷总评分
·功效(次要)
1.听力量值(模式、频率、耳鸣响度、纯音听力图、言语听力图)
2.生活质量问卷
·安全性
1.比较治疗组的终点提前发生率、治疗出现的不良事件、实验室异常和ECG异常。
研究设计
将个体分成三个治疗组。第一组是安全性样品。第二组是意向治疗(intent-to-treat，ITT)样品。第三组是功效有效(VfE)组。
对于各组，一半个体给予(S)-氯胺酮，且其余给予安慰剂。
统计方法
主要功效分析基于ITT样品中耳鸣问卷的总评分。统计分析基于协方差分析(ANCOVA)，其中以基线作为协变量且最后一次观察所得的值作为因变量。因子是“治疗”。测试回归斜率的齐次性。对VfE样品重复所述分析。
还经由前述模型分析听力量值(模式、频率、耳鸣响度、纯音听力图、言语听力图)以及生活质量。不测试模型的适当性。p值是探索性的且不根据多重性而调整。
实例30-针对顺铂诱发耳毒性评估AMN082
研究目标
这一研究的主要目标将是相对于安慰剂，评估AMN082(100mg)在预防顺铂诱发耳毒性中的安全性和功效。
方法
研究设计
这将是比较顺铂诱发耳毒性中AMN082(100mg)与安慰剂的3期多中心双盲随机安慰剂对照平行组研究。约有140位个体将参加这一研究，且基于主办方制定的随机分配顺序，随机分配(1∶1)到2个治疗组中的一个。各组将接受AMN082100mg或安慰剂。
将不替换未完成这一研究的个体。患者将每周接受化疗(剂量为70mg/m2的顺铂，持续7周，且每天放疗)。化疗后，患者将接受以凝胶调配物直接投予到个体圆窗膜上的研究药物(AMN082500mg或匹配的安慰剂)，持续8周。
各患者将在各顺铂治疗之前接受听力评估。最后剂量的顺铂后2到4周，各患者将接受听力评估。将比较治疗前听力图与治疗后听力图以确定顺铂诱发耳毒性的程度。此后，患者将以4周为间隔接受听力评估，同时伴随AMN082治疗。
主要纳入标准
接受顺铂化疗的年龄在18岁与75岁之间的男性或女性门诊患者。预期接受最少3轮化疗的患者。如果个体在研究期间受孕，那么她将立即退出且不再投予研究药物。
排除标准
已进行中耳外科手术的患者。患有活性外耳或中耳疾病的患者。前述纯音平均值＞40dB HL的患者。
实例31-AM-101治疗噪声诱发听力丧失的临床试验
活性成分：AM-101
剂量：于10μL剂量的热可逆性凝胶中传递包含4重量％微粉化AM-101的组合物。AM-101的释放是控制释放且在3周内发生。
投药途径：鼓室内注射
治疗持续时间：12周，每3周注射一次。
方法学
·单中心
·前瞻性
·随机
·双盲
·安慰剂对照
·平行组
·适应性
纳入标准
·年龄在18岁与64岁之间的男性和女性个体。
·听觉损伤后继之以由听力图和医生检查报告所证明内耳听力丧失为至少15dB的听力丧失。
·持续至少3个月的急性耳鸣。
·在4周内未进行先前耳鸣治疗
评估标准
·功效(主要)
1.耳鸣问卷总评分
·功效(次要)
1.听力量值(模式、频率、耳鸣响度、纯音听力图、言语听力图)
2.生活质量问卷
·安全性
1.比较治疗组的终点提前发生率、治疗出现的不良事件、实验室异常和ECG异常。
研究设计
将个体分成三个治疗组。第一组是安全性样品。第二组是意向治疗(ITT)样品。第三组是功效有效(VfE)组。
对于各组，一半个体给予AM-101，且其余给予安慰剂。
统计方法
主要功效分析基于ITT样品中耳鸣问卷的总评分。统计分析基于协方差分析(ANCOVA)，其中以基线作为协变量且最后一次观察所得的值作为因变量。因子是“治疗”。测试回归斜率的齐次性。对VfE样品重复所述分析。
还经由前述模型分析听力量值(模式、频率、耳鸣响度、纯音听力图、言语听力图)以及生活质量。不测试模型的适当性。p值是探索性的且不根据多重性而调整。
实例32-(S)-氯胺酮治疗与植入耳蜗听力装置组合的临床试验
活性成分：(S)-氯胺酮与地塞米松组合
剂量：包含微粉化(S)-氯胺酮和微粉化地塞米松的组合物，用作外科手术前灌洗溶液和外科手术后灌洗溶液。(S)-氯胺酮和地塞米松的释放是立即释放。
研究设计
有20位患者将参加这一研究。10位患者将为对照组且10位患者将为治疗组。
合格标准
·两只耳朵都患有重度至深度感觉神经听力损害
·具有起作用的听觉神经
·在无听力(平均约70+分贝听力丧失)的情况下已生活至少一段较短的时间
·具有良好的言语、语言和交流技能，或在幼儿和青少年的情况下，具有用治疗研究言语和语言技能的家庭意愿
·不能从其它种类的助听器(hearing aids)中充分受益
·无避免外科手术的医学理由
将对各患者进行耳蜗切开术和电极插入。将在外科手术之前和外科手术之后用测试组合物灌注治疗组的外科手术区域。将监测患者6周。将基于听力量值、言语听力图以及生活质量评估耳蜗内损伤。将监测继发性感染和/或炎症的发生。
实例33-耳感觉细胞调节剂调配物与外科手术组合的临床试验
这一研究的目的在于测定与鼓膜切开术组合投予的包含AM-101与地塞米松的组合的组合物在预防和/或治疗具有耳管的患者的中耳感染中是否是安全且有效的。
研究类型：介入
研究设计：这将是比较现行护理标准与使用延长释放鼓室内组合物与鼓膜切开术组合的非劣性开放标签研究。现行护理标准需要在外科手术后5-7天使用耳用滴剂。这一研究经设计以测试在外科手术时投予持续释放组合物是否可免除对门诊患者治疗的需要。测试假设在于在外科手术时投予单次延长释放组合物注射不劣于在外科手术后投予耳用滴剂。
纳入标准
6个月至12岁，一只或两只耳朵听力丧失
患者在最后一年可能不必进行除管放置以外的耳外科手术
患者可能不患任何将负面影响研究进行的疾病或病状
患者在研究期间可能不需要任何其它全身性抗微生物疗法
不允许使用止痛剂(除对乙酰氨基酚(acetaminophen)以外)
排除标准：年龄
研究方案：将20位患者分成两组。第一组患者在外科手术期间将接受根据实例22制备的包含微粉化AM-101和微粉化地塞米松的延长释放组合物的注射。各患者将进行鼓膜切开术以放置管。在外科手术期间，外科医生将洁净耳朵，且当鼓膜切开术切口打开时，外科医生将测试组合物注入中耳空间中。在将延长释放组合物注入中耳空间之后，插入管。测试组合物在手术室中通过悬浮AM-101和地塞米松的干燥微粉化粉末和其它赋形剂来制备，或测试组合物是随时可用于注射的制备好的悬浮液。
第二组患者将给予包含非微粉化AM-101和非微粉化地塞米松作为立即释放组分的滴耳剂，将在外科手术后投予5-7天。
监测患者，每周跟踪随访，持续1个月。记录两个组之间治疗结果的任何差异。
主要结果测量：由患者父母或监护人记录的终止耳溢液的时间。
次要结果测量：临床治愈率；微生物结果；治疗失败；疾病复发。
比较各组患者的治疗结果以确定在减小与鼓膜切开术相关的耳液溢、感染和/或炎症方面投予包含AM-101和地塞米松的延长释放组合物与鼓膜切开术组合是否不劣于在外科手术之后投予包含AM-101和地塞米松的滴耳剂。
虽然本文已显示和描述本发明的优选实施例，但这些实施例仅以举例的方式提供。任选采用本文所述的实施例的各种替代方案实施本发明。希望随附权利要求书界定本发明的范畴，因此涵盖所述权利要求书范围内的方法和结构以及其等效物。

Claims (28)

1.一种选择性诱导耳感觉细胞损伤的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的耳毒性剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的所述耳毒性剂的降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳毒性剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的所述耳毒性剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述耳毒性剂经至少3天的时间从所述组合物或装置中释放。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述耳毒性剂经至少5天的时间从所述组合物或装置中释放。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述耳毒性剂基本上呈微粉化粒子形式。
5.一种诱导耳感觉细胞生长的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的营养剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的所述营养剂的降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒营养剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的所述营养剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述营养剂经至少3天的时间从所述组合物或装置中释放。
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述营养剂经至少5天的时间从所述组合物或装置中释放。
8.根据权利要求5所述的方法，其中所述营养剂基本上呈微粉化粒子形式。
9.一种减轻耳部介入对耳感觉细胞的损伤的方法，所述方法包含投予有需要个体包含治疗有效量的耳保护剂的鼓室内组合物或装置，所述组合物或装置包含实质上低的所述耳保护剂的降解产物，所述组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述耳保护剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳保护剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的所述耳保护剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述耳保护剂在耳部介入之前或期间投予。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述耳保护剂在耳部介入之后投予。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述耳保护剂基本上呈微粉化粒子形式。
13.一种医药组合物或装置，其包含治疗耳部疾病或病状的治疗有效量的耳毒性剂，包含实质上低的所述耳毒性剂的降解产物，所述医药组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒耳毒性剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的所述耳毒性剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
14.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述耳毒性剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒耳毒性剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；和
(v)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
15.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
16.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
17.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述耳毒性剂经至少3天的时间从所述组合物或装置中释放。
18.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述耳毒性剂经至少5天的时间从所述组合物或装置中释放。
19.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。
20.根据权利要求13所述的医药组合物或装置，其中所述耳毒性剂基本上呈微粉化粒子形式。
21.一种医药组合物或装置，其包含治疗耳部疾病或病状的治疗有效量的营养剂，包含实质上低的所述营养剂的降解产物，所述医药组合物或装置另外包含两个或两个以上选自以下的特征：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)适量无菌水，经缓冲以提供介于约5.5与约8.0之间的pH值；
(iv)多颗粒营养剂；
(v)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(vi)每克调配物少于约50个菌落形成单位(cfu)的微生物剂；
(vii)每公斤个体体重少于约5个内毒素单位(EU)；
(viii)约30小时的所述营养剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
22.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述组合物或装置包含：
(i)约0.1重量％至约10重量％之间的所述营养剂或其医药学上可接受的前药或盐；
(ii)约14重量％至约21重量％之间的具有通式E106P70E106的聚氧乙烯-聚氧丙烯三嵌段共聚物；
(iii)多颗粒营养剂；
(iv)约19℃至约42℃之间的胶凝温度；
(viii)约30小时的所述营养剂的平均溶解时间；和
(ix)约100,000cP至约500,000cP的表观粘度。
23.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置提供约200与400mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
24.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置提供约250与320mOsm/L之间的实际容积渗透摩尔浓度。
25.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述营养剂经至少3天的时间从所述组合物或装置中释放。
26.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述营养剂经至少5天的时间从所述组合物或装置中释放。
27.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述医药组合物或装置是耳可接受的热可逆性凝胶。
28.根据权利要求21所述的医药组合物或装置，其中所述营养剂基本上呈微粉化粒子形式。
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