KR102345084B1 - 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제 - Google Patents

매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제 Download PDF

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Abstract

<과제>
매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로서 함유하는 수성 현탁액을 제공하는 것을 목적으로 한다. 구체적으로는 실용화 가능한 매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로서 함유하는 의약 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
<해결 수단>
본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자 및 분산 안정제를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제, 나노미립자의 평균 입자경이 500nm 이하이고 D90 입자경이 1500nm 이하인 수성 현탁액제, 당해 수성 현탁액을 함유하는 비경구 투여용 의약 조성물, 주사제, 점안제 또는 점이제, 보다 구체적으로는 눈의 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 점안제, 또는 귀의 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 점이제를 제공하는 것이다.

Description

매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제{AQUEOUS SUSPENSION FORMULATION COMPRISING NANOPARTICLES OF MACROLIDE ANTIBIOTICS}
<관련출원의 상호참조＞
본 출원은 2013년 11월 8일에 일본에 있어서 출원된 특허출원 2013－231796호에 기초하는 우선권을 주장하는 것이고, 당해 출원에 기재된 내용은 모두 참조에 의해 그대로 본 명세서에 원용된다. 또, 본원에 있어서 인용한 모든 특허, 특허출원 및 문헌에 기재된 내용은 모두 참조에 의해 그대로 본 명세서에 원용된다.
본 발명은 매크롤라이드(macrolide)계 항균제의 나노미립자(nanoparticle)를 함유하는 수성 현탁액제 및 그 이용에 관한 것이다.
에리트로마이신, 록시트로마이신, 클래리트로마이신, 및 아지트로마이신 등의 매크롤라이드계 항균제는 주로 경구 투여에 의해 이용되고 있지만, 주사제, 점안제, 점이제(點耳劑) 등의 국소 적용 제제로서의 이용이 요구되고 있다. 그러나, 이들 약제는 용해성이 낮은 난용성 약물이기 때문에 액체 제제로 하는 것이 어려웠다. 이들 중에서도 에리트로마이신은 메탄올, 에탄올, 아세톤에 녹기 쉽고, 에테르에 약간 녹기 쉽지만 물에는 매우 녹기 어렵다. 또, 클래리트로마이신은 아세톤, 클로로폼에 약간 녹기 쉽기는 하지만, 메탄올, 에탄올, 에테르에 녹기 어렵고, 물에 거의 녹지 않는다. 이와 같이 클래리트로마이신은 물에 녹기 어려울 뿐만 아니라, 에리트로마이신과 비교하여 생물 실험에서 사용하는 유기용매에 녹기 어려워, 용액으로 하는 것이 꽤 어려운 것이 알려져 있었다. 이 때문에 난용성 약물을 주사제, 점안제, 점이제 등의 국소 제제로서 이용하기 위해 약물을 현탁시킨 수성 현탁액제로 하는 제제가 알려져 있다. 예를 들면, 난용성 약물의 나노미립자(난용성 약물의 미립자의 90% 이상이 입자경 1000nm 미만의 미립자)와 당해 입제를 포함하는 국소 투여용의 수성 현탁액제가 보고되어 있다(특허문헌 1). 또, 난용성 약물, 폴리비닐피롤리돈 및 알긴산 또는 그 염을 함유하는 점안제, 점이제 등의 수성 현탁액제가 재분산성이 뛰어나다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 2).
또, 난용성 약제는 경구 섭취시의 생체 이용 효율이 낮은 것이 알려져 있고, 그 개선을 목적으로 하여 여러 가지 가용화·현탁화의 검토가 이루어지고 있다. 예를 들면, 클래리트로마이신을 L－아스코브산2－글리코시드와 함께 분쇄함으로써 용해성을 높일 수가 있다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1). 또, 2000nm 미만의 유효 평균 입경을 가지는 (난용성의) 활성 물질 입자를 표면 안정제 및 침투압 활성 결정성장 인히비터(inhibitor)와 함께 나노입자 액체 투여 조성물로 함으로써, 용해·재결정이나 활성 물질의 응집을 억제하여 안정화할 수 있는 것(특허문헌 3)이나, 2000nm 미만의 유효 평균 입경을 가지는 클래리트로마이신을 표면 안정제와 함께 배합함으로써, 보다 용해성이고 경구 섭취시의 생물학적 이용능이 높은 제제로 하는 것(특허문헌 4)이 보고되어 있다.
또한, 지금까지 클래리트로마이신 등의 난용성 약물의 주사제 등의 비경구 투여 형태에 대해 여러 가지 검토가 보고되어 있다. 예를 들면, 클래리트로마이신 등의 난용성 약물은 주사에 의한 투여시, 주사 부위 동통이 있는 것이 문제로 되어 있었다. 이 문제를 해결하기 위해, 지방 유제로 하는 방법(특허문헌 5), 리포솜 내에 난용성 약물을 포매하는 방법(특허문헌 6), 및 담즙산염의 미셀 내에 난용성 약물을 배합하는 방법(특허문헌 7)이 보고되어 있다.
한편, 매크롤라이드계 항균제는 국소 투여에 의해 각막염, 특히 LASIK술 후의 비결핵성 항산균에 의한 각막염에 유효하다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 2). 특히, 클래리트로마이신은 동물 실험에서 비결핵성 항산균에 의한 각막염 치료에 적합하다는 것이 나타나 있었다. 비결핵성 항산균에 대한 작용은 아지트로마이신과 비교하여 클래리트로마이신이 4~8배의 작용을 가지는 것이 보고되어 있다. 이들 점안제나 점이제 등의 국소 투여 제제화의 시도로서, 아지트로마이신의 점안제가 DuraSite(등록상표) 기술을 이용한 제제화에 의해 이미 실용화하고 있지만, 클래리트로마이신의 점안제는 실용화되어 있지 않다. 클래리트로마이신의 점안 투여에 대해서는 클래리트로마이신 분말을 메탄올에 용해시켜 생리 식염수로 희석한 용액을 토끼에 점안에 의해 투여하는 방법이 개시되어 있고, 당해 투여에 의해 클래리트로마이신이 각막에 체류하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 3). 한편, 경구 투여용 클래리트로마이신 과립의 멸균수 현탁액을 생리 식염수로 희석한 클래리트로마이신 현탁액을 마찬가지로 투여해도 각막에서는 클래리트로마이신이 검출되지 않고, 눈 표면에 염증을 일으키는 것도 보고되어 있다(비특허문헌 4). 이러한 자극 작용은 아지트로마이신의 점안제의 임상 시험에 있어서도 1~2%의 환자에 있어서 확인되고 있다.
한편, 점이제에 관해서는 지속 투여를 위한 점이용 제제(특허문헌 8)나, 매크롤라이드계 항균제를 고막에 장기간 국소적으로 존재시키기 위한 제제(특허문헌 9) 등이 보고되어 있음에도 불구하고, 클래리트로마이신, 아지트로마이신 등의 매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로 하는 점이제는 아직도 실용화에 이르지 않았다.
일본국 특허공개 2007－119456호 공보 국제공개 WO2002/015878호 공보 국제공개 WO2004/006959호 공보 국제공개 WO2007/008537호 공보 국제공개 WO90/14094호 공보 국제공개 WO98/33482호 공보 일본국 특허공개 1991－169807호 공보 미국 특허공개 2013/0216609호 공보 국제공개 WO2004/050021호 공보
Yutaka Inoue 등, International Journal of Pharmaceutics (2007) 331： 38－45 Joon－Young Hyon 등, Arch Ophthalmol (2004) 122： 1166－1169 Robert H. Gross 등, Invest Ophthalmol Vis Sci (1995) 36(5)： 965－968 Jonas, J. Kuehne 등, Am J Ophthalmol (2004) 138： 547－553
이러한 난용성 약물을 함유하는 수성 액제에 관한 여러 가지 검토에도 불구하고, 클래리트로마이신 등의 난용성 약물을 함유하는 주사제, 점안제나 점이제 등의 수성 현탁액제의 실용화는 아직도 곤란하여, 보다 자극성이 낮고, 멸균이 용이하고, 경시 안정성 및 분산 안정성이 뛰어난 광범위한 난용성 약물에 적용 가능한 주사제 및 국소 투여용 수성 현탁액제, 특히 점안제 및 점이제의 개발이 요망되고 있다.
따라서, 본 발명은 보다 자극성이 낮고, 멸균이 용이하고, 경시 안정성 및 분산 안정성이 뛰어난, 매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로서 함유하는 수성 현탁액을 제공하는 것을 목적으로 한다. 보다 구체적으로는 본 발명은 실용화 가능한 매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로서 함유하는 주사제, 점안제, 점이제, 점비제, 및/또는 흡입제 등의 수성 의약 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 특히는 본 발명은 징명(澄明)성, (장기) 분산성, 보존 안정성, 각막 체류성, 방수(房水) 이행성이 뛰어나고, 자극성이 낮은 매크롤라이드계 항균제를 유효성분으로서 함유하는 주사제, 점안제, 점이제, 점비제, 및/또는 흡입제를 제공하는 것을 목적으로 한다. 또, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제로서 클래리트로마이신을 유효성분으로서 함유하는 상기 수성 현탁액, 또는 주사제, 점안제, 점이제, 점비제, 및/또는 흡입제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 예의 검토한 결과, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자 및 분산 안정제, 계면활성제, 응집 방지제, 및/또는 점도 조제제를 함유하는 수성 현탁액제가 징명성, (장기) 분산성, 보존 안정성, 각막 체류성, 및 방수 이행성이 뛰어나, 수성 의약 조성물로서 뛰어나다는 것을 알아냈다. 특히, 본 발명자들은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를, 평균 입자경(이하 「Dv」라고 한다)이 500nm 이하이고, 또한 90% 직경(이하 「D90」이라고 한다)이 1500nm 이하(바람직하게는 Dv가 300nm 이하이고, 또한 D90이 400nm 이하, 또는 Dv가 200nm 이하이고, 또한 D90이 300nm 이하)인 미립자로 함으로써 매우 뛰어난 효과를 가져오는 것을 알아냈다.
따라서, 일태양에 있어서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제에 관한 것으로, 바람직하게는 나노미립자의 Dv가 500nm 이하이고 D90이 1500nm 이하인 수성 현탁액제에 관한 것이다. 예를 들면, 본 발명의 수성 현탁액제는 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 염 및/또는 생리적으로 허용되는 당과, 생리적으로 허용되는 폴리올 및/또는 물과, 분산 안정제를 혼합함으로써 제조된 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유한다.
또한, 본 발명자들은 상기 수성 현탁액제에 있어서, 분산 안정제로서 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유를 사용하고, 또한/또는 증점제인 히드록시프로필메틸셀룰로스 또는 메틸셀룰로스를 사용하는 것이 수성 의약 조성물로서의 이용에 적합하다는 것을 알아냈다. 특히, 본 발명자들은 분산 안정제로서 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(HCO－60(계면활성제))와 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC(고분자 증점제)) 또는 메틸셀룰로스(MC(고분자 증점제))를 함유하는 매크롤라이드계 항균제의 눈용 국소 적용 제제는, HPMC 또는 MC가 고분자이기 때문에 각막·결막의 점막과 상호작용하는 효과를 기대할 수 있고, 본 제제에 있어서 나노입자가 안정하게 됨으로써 HPMC 또는 MC의 효과로 각막 체류성을 기대할 수 있고, 또한 체류 시간이 길어짐으로써 방수 이행성도 기대할 수 있다는 것을 알아냈다.
또, 본 발명자들은 나노입자를 채용함으로써 매크롤라이드계 항균제의 용해성의 향상을 기대할 수 있고, 그에 의해 투여량을 감소시키는 것을 기대할 수 있다는 것을 알아냈다. 또한, 본 발명자들은 놀랄 만한 일로 본 발명의 나노입자 또는 나노입자 제제를 채용함으로써, 종래 문제로 되어 있던 매크롤라이드계 항균제의 자극성이 저감되는 것을 알아내어 본 발명을 달성하기에 이르렀다.
따라서, 일태양에 있어서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(바람직하게는 나노미립자의 Dv가 500nm 이하이고 D90이 1500nm 이하)를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제에 관한 것이다. 예를 들면, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(바람직하게는 나노미립자의 Dv가 500nm 이하이고 D90이 1500nm 이하) 및 분산 안정제를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제를 포함한다. 또, 본 발명은 상기 분산 안정제가 계면활성제, 응집 방지제, 점도 조제제인 수성 현탁액제에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 태양에 있어서는, 상기 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유60, 폴리소베이트80, 모노스테아르산폴리에틸렌글리콜, 및/또는 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜이고, 또한/또는 상기 응집 방지제가 폴리비닐알코올, 폴리에틸렌글리콜, 및/또는 폴리비닐피롤리돈이고, 또한/또는 상기 점도 조제제가 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 및/또는 히드록시에틸셀룰로스이다. 예를 들면, 본 발명은 분산 안정제로서 HCO－60(계면활성제)과 HPMC 또는 MC(고분자 증점제)를 함유하는 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액이라도 좋다.
또, 다른 태양에 있어서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하고, 선택적으로 분산 안정제도 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 의약 조성물에 관한 것이다. 본 명세서에 있어서, 수성 의약 조성물이란 수성의 액체상 또는 겔상의 의약 조성물을 의미하고, 구체적으로는 수성의 액체에 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자가 현탁된 상태의 의약 조성물을 의미한다. 따라서, 특히 그에 반하는 기재가 없는 한, 본 명세서에 있어서 의약 조성물은 수성 의약 조성물을 의미한다. 수성 의약 조성물은 주사제 및 국소 적용 제제를 포함한다. 따라서, 특히 그에 반하는 기재가 없는 한, 본 명세서에 있어서 국소 적용 제제는 국소에 투여하기 위한 수성의 제제를 의미한다.
구체적으로는 본 발명의 주사제는 전신성 또는 국소의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 주사제일 수 있고, 정맥 주사용, 피하 주사용, 근육 주사용, 점적(點滴)용 등의 주사제를 포함한다. 또, 국소 적용 제제는 눈용 국소 적용 제제, 귀용 국소 적용 제제, 코용 국소 적용 제제, 또는 폐용 국소 적용 제제를 포함하고, 보다 구체적으로는 눈, 귀, 코 또는 폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약 조성물, 예를 들면, 점안제, 점이제, 점비제, 및 흡입제를 포함한다. 본 발명의 국소 적용 제제는 바람직하게는 눈의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 눈용 국소 적용 제제, 귀의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 귀용 국소 적용 제제, 코의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 코용 국소 적용 제제, 혹은 폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 폐용 국소 적용 제제라도 좋다.
또, 본 발명의 수성 의약 조성물은 그것을 필요로 하는 환자의 국소에 유효량을 투여함으로써 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방에 이용할 수가 있다. 즉, 일태양에 있어서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하고, 선택적으로 분산 안정제도 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제 또는 당해 수성 현탁액제를 함유하는 의약 조성물을, 그것을 필요로 하는 환자에게 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 방법 또는 예방 방법에 관한 것이다. 예를 들면, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하고, 선택적으로 분산 안정제도 함유하는 것을 특징으로 하는 국소 적용 제제를, 그것을 필요로 하는 환자의 국소에 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 방법 또는 예방 방법을 포함한다.
혹은, 본 발명은 수성 의약 조성물(예를 들면 주사제 및 국소 적용 제제)을 제조하기 위한, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(및 선택적으로 분산 안정제)의 사용에 관한 것이다. 또, 본 발명은 수성 의약 조성물(예를 들면 주사제 및 국소 적용 제제)을 제조하기 위한, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(바람직하게는 나노미립자의 Dv가 500nm 이하이고 D90이 1500nm 이하)(및 선택적으로 분산 안정제)를 함유하는 수성 현탁액제의 사용을 포함한다.
본 명세서에 있어서 「매크롤라이드계 항균제」란 매크롤라이드 골격을 가지고, 또한 항균 작용을 가지는 화합물이면 특히 한정되는 것은 아니다. 매크롤라이드 골격으로서는 14~16원환(員環) 매크롤라이드라도 좋고, 바람직하게는 14원환 매크롤라이드이다. 매크롤라이드계 항균제로서는 예를 들면, 에리트로마이신, 클래리트로마이신, 록시트로마이신, 아지트로마이신, 조사마이신, 로키타마이신, 및 키타사마이신을 들 수가 있고, 바람직하게는 에리트로마이신, 클래리트로마이신, 또는 아지트로마이신이고, 가장 바람직하게는 클래리트로마이신이다.
본 명세서에 있어서 「수성 현탁액제」란 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자가 현탁된 수성 액제를 의미하고, 바람직하게는 의료용 수성 현탁액 제제이다. 본 명세서에 있어서의 수성 현탁액제 및 의약 조성물은 의약품으로서의 사용을 방해하지 않는 한에 있어서 점성을 가지고 있어도 좋고, 수상 제제 외에 겔상 제제를 포함한다. 본 명세서에 있어서 수성 현탁액제 및 의약 조성물은 주사제 및 국소 적용 제제를 포함한다. 본 명세서에 있어서 「국소」란 몸의 일부를 의미하고, 예를 들면, 환부, 그 주변, 또는 환부가 존재하는 장기 등이고, 바람직하게는 눈, 귀, 코(상기도) 또는 폐(하기도)이다. 「국소 적용 제제」란 국소에 투여하는 것을 목적으로 한 의약 조성물을 의미한다. 바람직하게는 국소 적용 제제는 눈용 국소 적용 제제(예를 들면 점안제), 귀용 국소 적용 제제(예를 들면 점이제), 코용 국소 적용 제제(예를 들면 점비제) 및 폐용 국소 적용 제제(예를 들면 흡입제)이다. 본 명세서에 있어서 수성 현탁액제는 그 자체가 의약품으로서 투여 가능한 의약 조성물을 구성하고 있어도 좋고, 적당히 다른 성분이나 희석제가 첨가됨으로써 투여 가능한 의약 조성물을 제공하는 것(예를 들면 의약 조성물의 원료)이라도 좋다.
본 명세서에 있어서의 수성 현탁액제는 바람직하게는 교반 등에 의해 분산시킨 24시간 후(바람직하게는 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후 또는 7일 후)(실온)에 있어서, (1) 침전을 눈으로 보아 확인할 수 없다, (2) 징명성이 높다, (3) 현미경 관찰로 응집물·결정이 관찰되지 않는다, 의 어느 하나 또는 2 이상의 성질을 가진다. 바람직하게는 본 명세서에 있어서의 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제는, 시험관 봉입으로부터 7일 후에 있어서, 침전물을 눈으로 보아 확인할 수 없고, 징명성이 높고, 또한 현미경 관찰에 있어서 응집물·결정이 확인되지 않는 수성 현탁액제이다.
징명성은 일본약전 수록의 징명성 시험법에 준하여 판정할 수가 있다. 구체적으로는 이하의 수순으로 판정할 수가 있다： 포마진 표준 유탁액 5mL에 물을 가하여 100mL로 하고 탁도의 비교액으로 한다. 피검 수성 현탁액제 및 새롭게 조제한 탁도의 비교액을, 각각 내경 15mm의 무색 투명의 유리제 평저(平底) 시험관에 액층이 깊이 30mm 또는 40mm로 되도록 취하고, 산란광 중에서 흑색의 배경을 이용하여 상방으로부터 관찰하여 비교한다. 피검 수성 현탁액제의 징명성이 물 또는 이용한 용매와 동일하거나, 그 탁도의 정도가 탁도의 비교액 이하일 때, 징명성이 높다고 판정할 수가 있다. 혹은 피검 수성 현탁액제 및 새롭게 조제한 탁도의 비교액에 대해, 층 길이 50mm의 셀을 이용하여 물 또는 이용한 용매를 대조로 하여 자외가시 흡광도 측정법에 의해 시험을 행하여, 660nm에 있어서의 투과율을 측정하고, 피검 수성 현탁액제의 투과율이 탁도의 비교액 이상일 때, 징명성이 높다고 판정할 수가 있다.
다른 태양에 있어서, 본 발명의 국소 적용 제제는 각막 체류성이 높은 눈용 국소 적용 제제이다. 피검 수성 현탁액제의 각막 체류성은 예를 들면, Jonas, J. Kuehne 등, Am J Ophthalmol (2004) 138： 547－553 기재의 방법에 준하여 시험할 수가 있다. 구체적으로는 토끼의 눈에 피검 수성 현탁액제를 투여하고, 각막 중의 약제 농도를 측정하여, 표준 액제(예를 들면, 눈용 국소 적용 제제로서 시험된 것이 보고되어 있던 제제, 예를 들면, 클래리트로마이신의 경우, 경구 투여용 클래리트로마이신 과립의 멸균수 현탁액(Jonas, J. Kuehne 등, Am J Ophthalmol (2004) 138： 547－553 참조), 이하 동)보다 각막 중의 약제 농도가 높은 경우에는 각막 체류성이 높다고 판정할 수가 있다.
어느 태양에 있어서, 본 발명의 수성 현탁액제는 자극성이 낮은 수성 현탁액제이다. 여기서, 자극성이 낮다란 당해 수성 현탁액제가 대상에 투여되었을 때에, 종래 이용되어 온 같은 유효성분을 함유하는 수성 제제와 비교하여 자극성의 반응(예를 들면, 발적, 종창, 충혈 등의 염증성 반응)의 정도가 낮은 것을 의미한다. 피검 수성 현탁액제의 자극성이 낮은지 어떤지는 예를 들면, Jonas, J. Kuehne 등, Am J Ophthalmol (2004) 138： 547－553 기재의 방법에 준하여 토끼의 눈에 피검 수성 현탁액제를 투여하고, 눈의 염증의 정도를 측정하여, 표준 액제(위와 같음)보다 염증의 정도가 낮은 경우에는 자극성이 낮다고 판정할 수가 있다. 보다 구체적으로는 점안제의 경우, 자극성은 매크롤라이드계 항균제의 농도가 1.0%인 제제를 30~수시간 간격으로 1일 1~20회 점안하고, 투여 전, 최종 투여 후 1, 3, 5, 24시간에 있어서의 각막, 홍채, 및 결막을 관찰하여, Draize의 평가 기준(OECD GUIDELINES FOR TESTING OF CHEMICALS 405 (24 Feb. 1987) Acute Eye Irritation/Corrosion 참조)에 따라 점수화함으로써 판정할 수가 있다.
본 명세서에 있어서 「계면활성제」란 의약품 첨가물로서 사람에 투여해도 독성을 나타내지 않는 계면활성제로서, 매크롤라이드계 항균제의 작용을 방해하지 않는 계면활성제이면 특히 한정되는 것은 아니고, 예를 들면, 폴록사머 407, 폴록사머 235, 폴록사머 188 등의 폴리옥시에틸렌(이하 「POE」라고 한다)－폴리옥시프로필렌(이하 「POP」라고 한다) 블록 코폴리머； 폴록사민 등의 에틸렌디아민의 폴리옥시에틸렌－폴리옥시프로필렌블록 코폴리머 부가물； 모노라우르산POE(20)소비탄(폴리소베이트20), 모노올레산POE(20)소비탄(폴리소베이트80), 폴리소베이트60 등의 POE소비탄 지방산 에스터류； POE(60) 경화 피마자유 등의 POE 경화 피마자유； POE(9)라우릴에테르 등의 POE알킬에테르류； POE(20)POP(4)세틸에테르 등의 POE·POP알킬에테르류； POE(10)노닐페닐에테르 등의 POE알킬페닐에테르류； POE(10)노닐페닐에테르 등의 POE알킬페닐에테르류； POE(105)POP(5)글리콜, POE(120)POP(40)글리콜, POE(160)POP(30)글리콜, POE(20)POP(20)글리콜, POE(200)POP글리콜(70), POE(3)POP(17)글리콜, POE(42)POP(67)글리콜, POE(54)POP(39)글리콜, POE(196)POP(67)글리콜 등의 POE·POP글리콜류 등의 비이온성 계면활성제； 알킬디아미노에틸글리신 등의 글리신형, 라우릴디메틸아미노초산베타인 등의 초산베타인형, 이미다졸린형 등의 양성 계면활성제； POE(10)라우릴에테르인산나트륨 등의 POE알킬에테르인산 및 그 염, 라우로일메틸알라닌나트륨 등의 N－아실아미노산염, 알킬에테르카복실산염, N－코코일메틸타우린나트륨 등의 N－아실타우린염, 테트라데센술폰산나트륨 등의 술폰산염, 라우릴황산나트륨 등의 알킬 황산염, POE(3)라우릴에테르황산나트륨 등의 POE알킬에테르황산염, α－올레핀술폰산염 등의 음이온 계면활성제； 알킬아민염, 알킬4급 암모늄염(염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등), 알킬피리디늄염(염화세틸피리디늄, 브롬화세틸피리디늄 등) 등의 양이온 계면활성제 등을 들 수가 있다. 본 발명의 수성 현탁액제는 계면활성제로서 1종류의 계면활성제를 함유하고 있어도 좋고, 또는 2종류 이상의 계면활성제를 함유하고 있어도 좋다. 계면활성제로서 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유60(HCO－60), 폴리소베이트80(Tween80), 모노스테아르산폴리에틸렌글리콜(MYS－40), 및/또는 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜이다.
또, 본 명세서에 있어서 「응집 방지제」는 매크롤라이드계 항균제의 응집을 방지할 수가 있고, 인체에 투여하여 독성을 나타내지 않는 물질이고, 매크롤라이드계 항균제의 작용을 방해하지 않는 응집 방지제이면 특히 한정되는 것은 아니고, 예를 들면, 알킬황산염, N－알킬로일메틸타우린염, 에탄올, 글리세린, 프로필렌글리콜, 구연산나트륨, 글리세로인지질(레시틴(포스파티딜콜린)(예를 들면, 정제 대두 레시틴, 수첨 대두 레시틴), 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜글리세롤, 리소포스파티딜콜린, 리소포스파티딜세린, 리소포스파티딜에탄올아민, 리소포스파티딜이노시톨, 리소포스파티드산, 및 리소포스파티딜글리세롤), 및 스핑고인지질(스핑고미엘린, 세라미드, 스핑고당지질, 또는 강글리오시드) 등의 인지질, D－소비톨, 유당, 자일리톨, 아라비아고무, 자당 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스터, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 폴리옥시에틸렌소비탄 지방산 에스터, 알킬벤젠술폰산염, 술포호박산 에스터염, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐알코올(PVA), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 메틸셀룰로스(MC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 카멜로스나트륨, 카복시비닐 폴리머(CVP), N－아실－글루탐산염, 아크릴산 코폴리머, 메타크릴산 코폴리머, 카제인나트륨, L－발린, L－류신, L－이소류신, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등을 들 수 있다. 본 발명의 수성 현탁액제는 응집 방지제로서 1종류를 함유하고 있어도 좋고, 또는 2종류 이상의 응집 방지제를 함유하고 있어도 좋다. 응집 방지제로서 바람직하게는 폴리비닐알코올(PVA), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)이다.
본 명세서에 있어서 「점도 조제제」란 본 발명의 수성 현탁액제의 점도를 조제하는 것이 가능한 물질이고, 의약품 첨가물로서 사람에 투여해도 독성을 나타내지 않는 물질이고, 매크롤라이드계 항균제의 작용을 방해하지 않는 물질이면 특히 한정되는 것은 아니고, 예를 들면, 다당류 또는 그 유도체(아라비아고무, 카라야검, 잔탄검, 캐롭검, 구아검, 과이액지, 퀸스시드, 달만검, 트라가칸트검, 벤조인검, 로카스트빈검, 카제인, 한천, 알긴산, 덱스트린, 덱스트란, 카라기난, 젤라틴, 콜라겐, 펙틴, 전분, 폴리갈락투론산, 키틴 및 그 유도체, 키토산 및 그 유도체, 엘라스틴, 헤파린, 헤파리노이드, 헤파린황산, 헤파란황산, 히알론산, 콘드로이틴황산 등), 세라미드, 셀룰로스 유도체(메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 카복시에틸셀룰로스, 셀룰로스, 니트로셀루로스 등), 폴리비닐알코올(완전 또는 부분 비누화물), 폴리비닐피롤리돈, 매크로골, 폴리비닐메타크릴레이트, 폴리아크릴산, 카복시비닐 폴리머, 폴리에틸렌이민, 폴리에틸렌옥사이드, 폴리에틸렌글리콜, 리보핵산, 디옥시리보핵산, 메틸비닐에테르·무수 말레산 공중합체 등, 및 그 약리학적으로 허용되는 염류(예를 들면 알긴산나트륨) 등을 들 수가 있다. 본 발명의 수성 현탁액제는 점도 조제제로서 1종류를 함유하고 있어도 좋고, 또는 2종류 이상의 점도 조제제를 함유하고 있어도 좋다. 점도 조제제로서 바람직하게는 메틸셀룰로스(MC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 및/또는 히드록시에틸셀룰로스(HEC)이다.
본 명세서에 있어서의 분산 안정제로서는 바람직하게는 계면활성제 및/또는 증점제이고, 보다 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 및/또는 메틸셀룰로스이고, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유와 히드록시프로필메틸셀룰로스, 또는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유와 메틸셀룰로스라도 좋다.
본 명세서에 있어서 분산 안정제로서도 사용할 수 있는 계면활성제, 응집 방지제, 및/또는 점도 조제제(이하 본 단락에 있어서 「약제」라고 한다)는 매크롤라이드계 항균제의 나노입자 표면에 부착 또는 흡착되어 있어도 좋다. 이러한 약제가 분쇄 공정 전에 첨가된 경우에는 매크롤라이드계 항균제의 나노입자 표면에 부착 또는 흡착됨으로써, 분쇄 공정 중에서의 나노입자의 응집이 억제된다. 또, 매크롤라이드계 항균제의 나노입자 표면에 부착 또는 흡착됨으로써, 수성 현탁액 중에 있어서도 응집을 억제하는 효과가 있다. 또한 본 명세서에 있어서, 분산 안정제인 계면활성제, 응집 방지제, 및/또는 점도 조제제가 매크롤라이드계 항균제의 나노입자 표면에 부착 또는 흡착되어 있다는 것은, 나노입자 표면에 적어도 일부의 이들 약제가 부착 또는 흡착되어(표면 수식(修飾)에 기여하고) 있는 것을 의미하는 것이고, 수성 현탁액제 중에 부착도 흡착도 되어 있지 않은 이들 약제가 존재하지 않는 것을 의미하는 것은 아니다. 다른 표현에 있어서, 분산 안정제인 계면활성제, 응집 방지제, 및/또는 점도 조제제는 매크롤라이드계 항균제의 나노입자 표면을 표면 수식할 수가 있기 때문에, 매크롤라이드계 항균제의 「표면 수식제」라고 할 수가 있다.
본 발명의 수성 현탁액제가 함유하는 매크롤라이드계 항균제는 나노미립자상이다. 당해 매크롤라이드계 항균제의 평균 입자경(Dv)은 500nm 이하이고, 바람직하게는 400nm 이하, 300nm 이하, 200nm 이하, 150nm 이하이고, 가장 바람직하게는 145nm 이하이다. 예를 들면, 매크롤라이드계 항균제의 평균 입자경의 범위는 20~500nm, 20~400nm, 20~300nm, 20~200nm라도 좋고, 바람직하게는 50~400nm, 50~300nm, 50~200nm, 50~150nm이다. 또, 당해 매크롤라이드계 항균제의 90% 직경(D90)은 1500nm 이하이고, 바람직하게는 1200nm 이하, 1000nm 이하, 800nm 이하, 700nm 이하, 600nm 이하, 500nm 이하, 400nm 이하, 300nm 이하, 200nm 이하이고, 가장 바람직하게는 197nm 이하이다. 예를 들면, 매크롤라이드계 항균제의 90% 직경(D90)의 범위는 50~1200nm, 50~1000nm, 50~800nm, 50~700nm라도 좋고, 바람직하게는 80~800nm, 80~700nm, 80~600nm, 80~500nm이고, 더 바람직하게는 100~600nm, 100~500nm, 100~400nm, 100~300nm이다. 본 발명의 수성 현탁액제는 그 유효성분인 매크롤라이드계 항균제가 나노미립자상이기 때문에, 필터에 의한 멸균이 가능하고, 따라서 용이하게 활성 성분의 물리화학적 성질에의 영향이 적은 멸균을 행할 수가 있다.
본 발명의 수성 현탁액제가 함유하는 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자는 바람직하게는 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 염 및/또는 생리적으로 허용되는 당과, 생리적으로 허용되는 폴리올 및/또는 물과, 분산 안정제를 혼합함으로써 제조된 나노미립자이다. 보다 바람직하게는 본 발명의 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자는 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 염 및/또는 생리적으로 허용되는 당과, 생리적으로 허용되는 폴리올 및/또는 물과, 분산 안정제를 혼합함으로써 제조된 나노미립자로서, 분쇄 중 혹은 분쇄 후에 레시틴을 첨가함으로써 제조된 나노미립자이다.
본 발명의 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(및 분산 안정제)를 함유하는 수성 현탁액제는 징명성, (장기) 분산성, 보존 안정성, 각막 체류성, 및 방수 이행성이 뛰어나고, 자극성이 낮고, 멸균이 용이하고, 경시 안정성 및 분산 안정성이 뛰어나기 때문에, 비경구 투여용 의약 조성물로서 사용할 수가 있다.
도 1은 혈장 중의 클래리트로마이신 농도의 경시 변화를 나타내는 그래프이다. 도 중 종축은 혈장 중의 클래리트로마이신 농도(ng/mL)를, 횡축은 경과시간(시간)을 나타낸다. 도 중 환은 0.3% 나노화 제제, 사각은 1% 나노화 제제, 삼각은 1% 원분말 제제를 나타낸다.
도 2는 안방수(眼房水) 중의 클래리트로마이신 농도의 경시 변화를 나타내는 그래프이다. 도 중 종축은 안방수 중의 클래리트로마이신 농도(ng/mL)를, 횡축은 경과시간(시간)을 나타낸다. 도 중 환은 0.3% 나노화 제제, 사각은 1% 나노화 제제, 삼각은 1% 원분말 제제를 나타낸다.
도 3은 결막 중의 클래리트로마이신 농도의 경시 변화를 나타내는 그래프이다. 도 중 종축은 결막 중의 클래리트로마이신 농도(ng/mL)를, 횡축은 경과시간(시간)을 나타낸다. 도 중 환은 0.3% 나노화 제제, 사각은 1% 나노화 제제, 삼각은 1% 원분말 제제를 나타낸다.
도 4는 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준에 의한 약효 시험의 결과를 나타내는 그래프이다. 종축은 점수를, 횡축은 균액 섭취 후의 경과일수를 나타낸다. 흑환은 컨트롤군(vehicle), 백환은 AzaSite 투여군, 흑삼각은 0.3% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 백삼각은 1% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 흑사각은 1% 클래리트로마이신 원분말 제제 투여군을 나타낸다. 값은 평균치를 나타내고, 에러바(error bar)는 표준편차를 나타낸다.
도 5는 Draize 등의 평가 기준에 의한 약효 시험의 결과를 나타내는 그래프이다. 종축은 점수를, 횡축은 균액 섭취 후의 경과일수를 나타낸다. 흑환은 컨트롤군(vehicle), 백환은 AzaSite 투여군, 흑삼각은 0.3% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 백삼각은 1% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 흑사각은 1% 클래리트로마이신 원분말 제제 투여군을 나타낸다. 값은 평균치를 나타내고, 에러바는 표준편차를 나타낸다.
도 6은 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준에 의한 약효 시험의 결과를 나타내는 그래프이다. 종축은 점수를, 횡축은 균액 섭취 후의 경과일수를 나타낸다. 흑환은 컨트롤군(vehicle), 백환은 AzaSite 투여군, 흑삼각은 0.3% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 백삼각은 1% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 흑사각은 1% 클래리트로마이신 원분말 제제 투여군을 나타낸다. 값은 평균치를 나타내고, 에러바는 표준편차를 나타낸다.
도 7은 Draize 등의 평가 기준에 의한 약효 시험의 결과를 나타내는 그래프이다. 종축은 점수를, 횡축은 균액 섭취 후의 경과일수를 나타낸다. 흑환은 컨트롤군(vehicle), 백환은 AzaSite 투여군, 흑삼각은 0.3% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 백삼각은 1% 나노화 클래리트로마이신 제제 투여군, 흑사각은 1% 클래리트로마이신 원분말 제제 투여군을 나타낸다. 값은 평균치를 나타내고, 에러바는 표준편차를 나타낸다.
1. 매크롤라이드계 항균제의 미립자를 함유하는 수성 현탁액제
매크롤라이드계 항균제의 미립자는 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 염 및/또는 생리적으로 허용되는 당과, 생리적으로 허용되는 폴리올 및/또는 물과, 분산 안정제를 혼합함으로써 제조할 수가 있다. 바람직하게는 본 발명의 매크롤라이드계 항균제의 미립자는 분쇄하는 공정 중 혹은 당해 공정 후에 레시틴을 첨가함으로써 제조할 수가 있다.
매크롤라이드계 항균제의 미립자의 제조에 이용되는 폴리올은 생리학상 특히 문제를 일으키지 않고 섭취할 수가 있는 폴리올이면 특히 한정되지 않는다. 생리적으로 허용되는 폴리올로서 바람직하게는 염에 대한 용해성이 낮은 것, 물에 대한 용해성이 높은 것, 응고점이 낮은 것 및/또는 인화점이 높은 것이다. 또, 분쇄 후의 제거를 간편하게 행하는 경우에는 생리적으로 허용되는 폴리올은 물에 대한 용해성이 높은 것이 바람직하다.
폴리올로서는 예를 들면, 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 및 디에틸렌글리콜 등을 들 수가 있고, 바람직하게는 프로필렌글리콜 또는 글리세린이다. 폴리올의 점도로서는 바람직하게는 1~100,000(mPa·S)이고, 보다 바람직하게는 5~10,000(mPa·S)이고, 더 바람직하게는 10~2,000(mPa·S)이다.
폴리올의 사용량은 분쇄 대상인 유기 화합물 1질량부에 대해 0.2~50질량부인 것이 바람직하고, 0.4~15질량부인 것이 보다 바람직하고, 0.6~10질량부인 것이 더 바람직하다. 또, 사용하는 폴리올의 종류는 분쇄 대상인 유기 화합물의 용해성을 고려하여 적당히 결정할 수가 있다. 또한, 당해 폴리올은 1종류의 폴리올을 이용해도 좋고, 2종류 이상의 폴리올을 혼합하여 이용해도 좋다.
본 실시의 형태에 관한 제조 방법에서 이용되는 염은 생리학상 특히 문제를 일으키지 않고 섭취할 수가 있는 염이면 특히 한정되지 않는다. 생리학적으로 허용되는 염으로서 바람직하게는 폴리올에 대한 용해성이 낮은 염, 물에 대한 용해성이 높은 염 및/또는 흡습성이 적고 유기 화합물의 미세분쇄화에 적합한 경도를 가지고 있는 염이다. 염으로서 보다 바람직하게는 이들 성질의 2 이상을 구비하는 염이다. 염의 폴리올에 대한 용해도는 바람직하게는 10(질량/용량)% 이하이다. 또, 분쇄 후에 염의 제거를 간편하게 하는 경우에는 매우 적합한 염은 물에 대한 용해성이 높은 것이다.
매우 적합한 염으로서는 예를 들면, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화암모늄, 황산나트륨, 황산마그네슘, 황산칼륨, 황산칼슘, 사과산나트륨, 구연산나트륨, 구연산이나트륨, 구연산이수소나트륨, 구연산이수소칼륨, 인산이수소나트륨, 인산이수소칼륨, 인산수소이나트륨, 및 인산수소이칼륨 등을 들 수 있다. 더 적합한 염으로서 염화나트륨, 염화칼륨, 황산마그네슘, 황산칼슘, 구연산나트륨, 인산이수소나트륨, 인산이수소칼륨, 인산수소이나트륨, 인산수소이칼륨 등을 들 수가 있고, 바람직하게는 염화나트륨이다.
또, 염은 매크롤라이드계 항균제와 혼합하기 전에 분쇄 등을 행하여 입자경을 가지런히 해 두어도 좋다. 염의 입자경을 미리 조정하는 경우, 입자의 Dv로서 예를 들면, 5~300μm, 10~200μm라도 좋지만, 바람직하게는 0.01~300μm이고, 보다 바람직하게는 0.1~100μm이고, 더 바람직하게는 0.5~50μm이다. 또, 당해 염의 사용량은 유기 화합물 1질량부에 대해 0~100질량부인 것이 바람직하고, 0.2~50질량부인 것이 보다 바람직하고, 0.5~30질량부인 것이 더 바람직하다. 또한, 당해 염은 1종류의 염을 이용해도 좋고, 2종류 이상의 염을 혼합하여 이용해도 좋다.
예를 들면, 본 발명의 매크롤라이드계 항균제의 미립자는 「분쇄 공정」, 「레시틴의 혼합 공정」, 「여과·수세 공정」 및 「건조 공정」을 순서대로 거쳐 제조된다. 다만, 「분쇄 공정」과「레시틴의 혼합 공정」을 통합한 하나의 공정으로 하여, 분쇄하면서 분쇄 입자에 레시틴을 혼합하도록 해도 좋다. 바람직하게는 매크롤라이드계 항균제의 미립자를 포함하는 현탁액의 제조는 각 공정을 거쳐 얻어진 매크롤라이드계 항균제의 미립자에, 필요에 따라 분산제를 가하여 물과 혼합함으로써 행할 수가 있다. 예를 들면, 매크롤라이드계 항균제의 미립자를 포함하는 현탁액은 「여과·수세 공정」 및 「건조 공정」을 생략하고 「분쇄 공정」 및 「레시틴 혼합 공정」을 거쳐 얻어진 매크롤라이드계 항균제의 미립자에 필요에 따라 분산제를 가하여 물과 혼합함으로써 제조할 수도 있다. 이하, 「분쇄 공정」, 「레시틴의 혼합 공정」, 「여과(분리)·수세 공정」 및 「건조 공정」에 대해 설명한다.
(분쇄 공정)
매크롤라이드계 항균제의 미립자의 제조 방법에 있어서, 매크롤라이드계 항균제를 습식 분쇄하기 위해 이용되는 분쇄 장치는, 기계적 수단에 의해 매크롤라이드계 항균제를 미세하게 할 수 있는 능력을 가지는 것이면 특히 제한없이 이용할 수가 있다. 당해 분쇄 장치로서 예를 들면, 니더(kneader), 2개 롤(roll), 3개 롤, 프렛밀(fret mill), 후버 멀러(Hoover muller), 원반 블레이드 혼련 분산기, 2축 익스트루더(extruder) 등의 통상 이용되고 있는 분쇄 장치를 들 수가 있다.
매크롤라이드계 항균제를 분쇄하는데는, 분쇄 장치 내에 유기 화합물, 염 및 분산 안정제를 투입하고, 폴리올을 조금씩 가하면서 혼련하는 것이 바람직하다. 혼련시의 점도는 분쇄되는 매크롤라이드계 항균제, 염, 폴리올의 종류에 따라 적당히 결정할 수가 있다. 분쇄 온도는 분쇄되는 매크롤라이드계 항균제나 분쇄 장치 등을 고려하여 적당히 결정할 수가 있다. 분쇄 온도로서 매크롤라이드계 항균제의 융해 혹은 분해를 저감할 수 있는 온도이면 특히 제한은 없지만, 바람직하게는 －50~50℃이고, 보다 바람직하게는 －20~30℃이고, 가장 바람직하게는 －10~25℃이다. 또, 분쇄 시간은 분쇄되는 매크롤라이드계 항균제, 분쇄 장치 등을 고려하여 적당히 결정할 수가 있다. 분쇄 시간은 예를 들면 0.5~50시간 정도로 할 수가 있고, 바람직하게는 1~30시간이고, 보다 바람직하게는 1.5~20시간이고, 가장 바람직하게는 2~10시간이다.
분산 안정제의 사용량은 분쇄 대상인 매크롤라이드계 항균제 1질량부에 대해 0.002~10질량부인 것이 바람직하고, 0.01~5질량부인 것이 보다 바람직하고, 0.1~1질량부인 것이 더 바람직하다. 또, 사용하는 분산 안정제의 종류는 분쇄 대상인 유기 화합물의 종류를 고려하여 적당히 결정할 수가 있다. 또한, 분산 안정제는 1종류를 이용해도 좋고, 2종류 이상의 다른 것을 혼합하여 이용해도 좋다.
(레시틴의 혼합 공정)
레시틴은 분쇄 중 혹은 분쇄 종료 후의 혼련물과 혼합된다. 또한, 이 혼련물에 분산 안정제가 포함되어 있지 않아도 좋다. 혼합 공정은 분쇄 장치에서 분쇄한 후 혹은 분쇄 중에 레시틴을 혼합하고, 같은 분쇄 장치 내에서 혼련을 계속함으로써 행할 수가 있다. 그 외, 혼합용의 다른 장치(혼합 장치)를 준비하여, 분쇄 후의 혼련물을 당해 혼합 장치로 옮겨, 거기에 레시틴을 가하여 혼합 공정을 행할 수도 있다. 레시틴의 사용량은 분쇄 대상인 매크롤라이드계 항균제 1질량부에 대해 0.01~10질량부인 것이 바람직하고, 0.05~2질량부인 것이 보다 바람직하고, 0.1~1.0질량부인 것이 더 바람직하다. 레시틴은 단독으로도 좋지만, 폴리올과 레시틴의 혼화물을 가할 수도 있다. 그 경우 레시틴과 폴리올의 혼합비(중량비)는 레시틴 1질량부에 대해 폴리올 1~10질량부, 보다 바람직하게는 1.5~5질량부, 더 바람직하게는 2~4질량부이다.
(여과(분리)·수세 공정)
레시틴의 혼합 후 필요에 따라 여과 및 수세를 행하여 염 및 폴리올을 제거할 수가 있다. 구체적으로는 레시틴 혼합 후의 혼련물을 용매 중에 넣어 호모지나이저(homogenizer) 등을 이용하여 균일하게 혼합한 후, 여과 및 수세를 행함으로써 염 및 폴리올을 제거할 수가 있다. 당해 혼련물을 균일하게 혼합할 때 사용하는 용매는, 폴리올 및 염이 용해하기 쉽고 또한 미세분쇄된 매크롤라이드계 항균제가 용해하기 어려운 용매이고, 또한 생리학적으로 허용되는 용매이면 특히 한정되는 것은 아니다. 당해 용매로서는 물이 바람직하지만, 물 이외의 용매도 사용할 수가 있다. 당해 물 이외의 용매로서 예를 들면, 초산, 메탄올, 에탄올 등의 유기용매와 물의 혼합액이 있다. 또, 여과 방법은 특히 한정되는 것은 아니고, 통상 매크롤라이드계 항균제의 함유물을 여과하기 위해 이용되는 공지의 방법으로 행할 수가 있다. 당해 여과 방법으로서 예를 들면, 감압 여과법, 가압 여과법, 한외 여과막법이 있다. 또, 여과와 마찬가지로 염 및 폴리올을 제거하는 방법으로서 원심분리법이 있다. 원심분리의 구체적인 방법은 레시틴 혼합 후의 혼련물을 용매 중에 넣고, 호모지나이저 등을 이용하여 균일하게 혼합한 후, 원심분리기에서 미세분쇄된 유기 화합물을 침강시키고 위의 맑은 액을 제거한다. 이 조작을 반복함으로써 염 및 폴리올을 제거할 수 있다. 위의 맑은 액의 전기 전도도를 측정함으로써 세정의 종점을 구할 수가 있다. 즉, 예를 들면, 위의 맑은 액의 전기 전도도가 10μS/cm이면 염화나트륨의 농도는 약 5ppm이라고 예측할 수 있으므로, 물질의 특성에 맞추어 종점의 전기 전도도를 결정하면 좋다.
미세분쇄한 매크롤라이드계 항균제의 입자는 통상 높은 표면 에너지를 가지고 있기 때문에 응집하기 쉽다. 따라서, 염 등을 제거한 후 2차 응집을 방지하기 위한 첨가제를 가해도 좋다. 당해 2차 응집 방지제로서 예를 들면, 알킬황산염, N－알킬로일메틸타우린염, 에탄올, 글리세린, 프로필렌글리콜, 구연산나트륨, 정제 대두 레시틴, 인지질, D－소비톨, 유당, 자일리톨, 아라비아고무, 자당 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리옥시에틸렌소비탄 지방산 에스터, 알킬벤젠술폰산염, 술포호박산 에스터염, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐알코올(PVA), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 메틸셀룰로스(MC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 카멜로스나트륨, 카복시비닐 폴리머(CVP), N－아실－글루탐산염, 아크릴산 코폴리머, 메타크릴산 코폴리머, 카제인나트륨, L－발린, L－류신, L－이소류신, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등이 있다. 특히, 알킬황산염 및 N－알킬로일메틸타우린염이 바람직하고, 그 중에서도 특히 도데실황산나트륨 및 N－미리스토일메틸타우린나트륨이 바람직하다. 2차 응집 방지제는 1종류를 이용해도 좋고, 2종류 이상의 2차 응집 방지제를 혼합하여 이용해도 좋다.
(건조 방법)
염 및 폴리올을 제거(완전히 제거하고 있지 않은 경우라도 저감되어 있으면 「제거」라고 한다)한 후, 필요에 따라 건조 처리를 행함으로써 미세분쇄한 매크롤라이드계 항균제의 입자로부터, 염 등의 제거에 이용한 용매를 제거할 수가 있다. 당해 건조 방법은 특히 한정되는 것은 아니고, 통상 유기 화합물을 건조하기 위해 이용되는 방법으로 행할 수가 있다. 당해 건조 방법으로서 예를 들면, 감압 건조법, 동결 건조법, 분무 건조법, 동결 분무 건조법 등이 있다. 당해 건조에 있어서의 건조 온도나 건조 시간 등은 특히 제한되는 것은 아니지만, 의료용 복합 유기 화합물 입자의 화학적 안정성의 유지 및 입자의 2차 응집을 방지하기 위해, 당해 건조는 저온에서 행하는 것이 바람직하고, 감압 건조법, 동결 건조법, 분무 건조법, 동결 분무 건조법으로 행하는 것이 바람직하다.
(현탁)
「분쇄 공정」, 「레시틴의 혼합 공정」, 「여과·수세 공정」 및 「건조 공정」의 어느 공정의 종료 시점에서 얻어진 매크롤라이드계 항균제의 미립자(예를 들면 「분쇄 공정」 및 「레시틴 혼합 공정」을 거쳐 얻어진 매크롤라이드계 항균제의 미립자)는 필요에 따라 분산제를 가하여 물과 혼합하고, 필요에 따라 초음파 처리를 함으로써 현탁시킬 수가 있다.
본 명세서에서 말하는 「평균 입자경」또는 「Dv」란 동적 광산란 광자 상관법에 따라 측정되는 입도분포에 있어서의 산술 평균 직경을 의미한다. 50% 직경(미디언(median) 직경, D50이라고도 한다)은 분체를 어느 입자경으로부터 2개로 나누었을 때 큰 쪽과 작은 쪽이 등량으로 되는 직경을 의미한다. 「90% 직경」이란 상기 측정법으로 측정되는 입도분포에 있어서 입자경이 작은 쪽으로부터 순서대로 0(최소)~100%(최대)까지 셌을 때의 90%의 위치에 있는 입자경(D90)을 의미한다. 「10% 직경」이란 상기 측정법으로 측정되는 입도분포에 있어서 입자경이 작은 쪽으로부터 순서대로 0(최소)~100%(최대)까지 셌을 때의 10%의 위치에 있는 입자경(D10)을 의미한다. 특히 본 명세서에 기재된 수성 현탁액제가 점성인 경우, 특히 명시되지 않는 한에 있어서, 평균 입자경(Dv) 및 90% 직경(D90)은 점도 보정 후의 평균 입자경(Dv) 및 90% 직경(D90)을 의미한다. 동적 광산란 광자 상관법에 의한 측정 방법, 입도분포의 산출 방법, 및 점도 보정 방법에 대해서는 당 기술분야에 있어서 널리 알려져 있다.
2. 의약 조성물
또, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는 본 발명의 의약 조성물은 비경구 투여용 의약 조성물이고, 예를 들면, 주사제 또는 국소 적용 제제로 할 수가 있다. 본 명세서에 있어서 「국소 적용 제제」란 국소에 투여하는 것을 목적으로 한 제제, 또는 국소에 투여하는 것에 적합한 제제를 의미한다. 본 명세서에 있어서, 의약 조성물의 종류는 특히 한정되지 않고, 제형으로서는 눈용 국소 적용 제제(예를 들면 점안제), 귀용 국소 적용 제제(예를 들면 점이제), 코용 국소 적용 제제(예를 들면 점비제), 현탁제, 연고, 크림제, 겔제, 흡입제, 주사제(예를 들면 정맥 주사용 주사제, 피하 투여용 주사제, 근육 주사용 주사제, 점적) 등을 들 수 있다. 이들 제제는 통상의 방법에 따라 조제할 수가 있다. 바람직하게는 본 발명의 의약 조성물은 분산 안정제를 함유한다. 주사제의 경우에는 본 발명의 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 물에 현탁시켜 조제되지만, 필요에 따라 생리 식염수 혹은 포도당 용액에 현탁시켜도 좋고, 또 분산제, 완충제나 보존제를 첨가해도 좋다. 본 발명의 의약 조성물은 예를 들면, 정맥내 투여용, 근육내 투여용, 혹은 피하 투여용 등의 주사제, 점적제, 경피 흡수제, 경점막 흡수제, 점안제, 점이제, 점비제, 흡입제 등의 형태의 비경구 투여용 의약 조성물로서 조제할 수가 있다.
본 발명의 의약 조성물은 약리학적으로 허용되는 담체(제제용 첨가물)를 함유하고 있어도 좋다. 의약 조성물의 제조에 이용되는 제제용 첨가물의 종류, 유효성분에 대한 제제용 첨가물의 비율, 또는 의약 조성물의 제조 방법은 조성물의 형태에 따라 당업자가 적당히 선택하는 것이 가능하다. 제제용 첨가물로서는 무기 또는 유기물질, 혹은 고체 또는 액체의 물질을 이용할 수가 있고, 일반적으로는 유효성분 중량에 대해 1중량%로부터 90중량% 사이에서 배합할 수가 있다. 구체적으로는 그와 같은 물질의 예로서 유당, 포도당, 만니톨, 덱스트린, 시클로덱스트린, 전분, 자당, 메타규산알루민산마그네슘, 합성 규산알루미늄, 카복시메틸셀룰로스나트륨, 히드록시프로필전분, 카복시메틸셀룰로스칼슘, 이온교환수지, 메틸셀룰로스(MC), 젤라틴, 아라비아고무, 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐알코올(PVA), 경질 무수규산, 스테아르산마그네슘, 탈크, 트라가칸트, 벤토나이트, 비검, 산화티탄, 소비탄 지방산 에스터, 라우릴황산나트륨, 글리세린, 지방산 글리세린 에스터, 정제 라놀린, 글리세로젤라틴, 폴리소베이트, 매크로골, 식물유, 밀랍, 유동 파라핀, 백색 바셀린, 플루오로카본, 비이온성 계면활성제, 프로필렌글루콜, 물, 염화벤잘코늄, 염산, 염화나트륨, 수산화나트륨, 유산, 나트륨, 인산일수소나트륨, 인산이수소나트륨, 구연산, 구연산나트륨, 에데트산이나트륨, 폴록사머 407, 폴리카보필 등을 들 수 있다.
본 발명의 수성 현탁액제 또는 의약 조성물은 키트(kit)의 형태로, 바깥 상자, 용기, 희석제, 탁액제, 및/또는 조제 방법·투여 방법에 관한 설명서와 함께 포함할 수가 있다. 본 발명의 수성 현탁액제 또는 의약 조성물이 키트로서 공급되는 경우, 당해 수성 현탁액제 또는 의약 조성물 중 다른 구성 성분이 각각의 용기 중에 포장되어 하나의 키트에 포함되어 있어도 좋고, 혹은 당해 수성 현탁액제 또는 의약 조성물 중 1 이상의 일부의 구성 성분(적어도 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 포함한다)만이 키트에 포함되고, 다른 구성 성분이 키트와는 별도로 제공되어 있어도 좋다. 또, 본 발명의 수성 현탁액제 또는 의약 조성물이 키트로서 공급되는 경우, 본 발명의 수성 현탁액제 또는 의약 조성물을 얻기 위해, 바람직하게는 필요한 구성 성분이 사용 직전에 혼합된다.
예를 들면, 본 발명의 키트는 이하의 키트로 할 수가 있다：
(a) 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 구비하는 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물을 조제하기 위한 키트； 혹은,
매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제를 구비하는 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물을 조제하기 위한 키트
(b) 상기 나노미립자의 평균 입자경이 500nm 이하이고 D90 입자경이 1500nm 이하인 (a)에 기재된 키트；
(c) 상기 나노미립자가 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 염 및/또는 생리적으로 허용되는 당과, 생리적으로 허용되는 폴리올 및/또는 물과, 분산 안정제를 혼합함으로써 제조된 미립자인 것을 특징으로 하는 (a) 또는 (b)에 기재된 키트；
(d) 상기 매크롤라이드계 항균제가 에리트로마이신, 클래리트로마이신, 록시트로마이신, 아지트로마이신, 조사마이신, 로키타마이신, 또는 키타사마이신인 (a)~(c)의 어느 한 항에 기재된 키트；
(e) 분산 안정제를 더 구비하는 것을 특징으로 하는 (a)~(d)의 어느 한 항에 기재된 키트；
(f) 상기 분산 안정제가 계면활성제, 응집 방지제, 점도 조제제인 (e)에 기재된 키트；
(g) 상기 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유60, 폴리소베이트80, 모노스테아르산폴리에틸렌글리콜, 및/또는 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜인 (f)에 기재된 키트；
(h) 상기 응집 방지제가 폴리비닐알코올, 폴리에틸렌글리콜, 및/또는 폴리비닐피롤리돈인 (f)에 기재된 키트；
(i) 상기 점도 조제제가 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 및/또는 히드록시에틸셀룰로스인 (f)에 기재된 키트；
(j) 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물의 자극성이 낮은 것을 특징으로 하는 (a)~(i)의 어느 한 항에 기재된 키트；
(k) 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제로서 구비하는 (a)~(j)의 어느 한 항에 기재된 키트；
(l) 비경구 투여용 의약 조성물을 조제하기 위한 키트인 (a)~(k)의 어느 한 항에 기재된 키트；
(m) 주사제 또는 국소 적용 제제를 조제하기 위한 키트인 (l)에 기재된 키트.
(n) 눈용 국소 적용 제제, 귀용 국소 적용 제제, 코용 국소 적용 제제, 또는 폐용 국소 적용 제제를 조제하기 위한 키트인 (m)에 기재된 키트.
(o) 점안제, 점이제, 점비제, 또는 흡입제를 조제하기 위한 키트인 (n)에 기재된 키트.
(p) 눈, 귀, 코, 또는 폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료약 또는 예방약을 조제하기 위한 키트인 (a)~(o)의 어느 한 항에 기재된 키트.
따라서, 일태양에 있어서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제와 희석제를 혼합하는 것을 포함하는, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 의약 조성물의 조제 방법이라도 좋다. 혹은 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자와 현탁제를 혼합하는 것을 포함하는, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제 또는 수성 의약 조성물의 조제 방법이라도 좋다.
특히, 본 발명의 의약 조성물(예를 들면 주사제, 눈용 국소 적용 제제(바람직하게는 점안제), 귀용 국소 적용 제제(바람직하게는 점이제), 코용 국소 적용 제제(바람직하게는 점비제), 또는 폐용 국소 적용 제제(바람직하게는 흡입제))를 조제하는 경우, 그 pH 및 침투압에 대해서는 국소 적용 제제로서 허용되는 것을 한도로 하여 특히 제한되지 않지만, pH5~9.5로 하는 것이 바람직하고, pH6~9가 보다 바람직하고, pH7~9가 더 바람직하다. 당해 제제(연고제 이외의 경우)의 생리 식염액에 대한 침투압비로서는 예를 들면 0.3~4.3이고, 바람직하게는 0.3~2.2, 특히 바람직하게는 0.5~1.5 정도이다. pH나 침투압의 조절은 pH 조정제, 등장화제, 염류 등을 이용하여, 당해 기술 분야에서 기존의 방법으로 행할 수가 있다.
본 명세서에 있어서, 현탁제 및/또는 희석제는 물을 주성분으로서 함유할 수가 있다. 또, 본 명세서에 있어서 의약 조성물, 현탁제 및/또는 희석제는 필요에 따라 첨가물로서 증점제, 계면활성제, 방부제, 살균제 또는 항균제, pH 조절제, 등장화제, 완충제 등의 각종 첨가제를 함유하고 있어도 좋다.
방부제, 살균제 또는 항균제로서는 예를 들면, 소브산 또는 그 염(소브산, 소브산칼륨, 소브산나트륨, 소브산트리클로카반 등), 파라옥시안식향산 에스터(파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산프로필, 파라옥시안식향산부틸 등), 아크리놀, 염화메틸로자닐린, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 염화세틸피리디늄, 브롬화 세틸피리디늄, 클로르헥시딘 또는 그 염, 폴리헥사메틸렌비구아니드, 알킬폴리아미노에틸글리신, 벤질알코올, 페네틸알코올, 클로로부탄올, 이소프로판올, 에탄올, 페녹시에탄올, 인산지르코늄의 은, 머큐로크롬, 포비돈요오드 등의 담지체, 티메로살, 디히드로초산, 클로로자일레놀, 클로로펜, 레조신, 오쏘페닐페놀, 이소프로필메틸페놀, 티몰, 히노키티올, 술파민, 리소자임, 락토페린, 트리클로산, 8－히드록시퀴놀린, 운데실렌산, 카프릴산, 프로피온산, 안식향산, 할로카반, 티아벤다졸, 폴리믹신 B, 5－클로로－2－메틸－4－이소티아졸린－3－온, 2－메틸－4－이소티아졸린－3－온, 폴리리신, 과산화수소, 염화폴리드로늄, Glokill (상품명： 예를 들면 Glokill PQ, 로디아사제), 폴리디알릴디메틸암모늄클로라이드, 폴리［옥시에틸렌(디메틸이미니오)에틸렌－(디메틸이미니오)에트란디클로리드］, 폴리에틸렌폴리아민·디메틸아민에피클로로히드린 중축합물(상품명： 예를 들면 Busan 1157, 바크만사제), 비구아니드 화합물(코스모실 CQ(상품명, 폴리헥사메틸렌비구아니드 염산염을 약 20중량% 함유, 아피시아사제)) 등, 및 그 약리학적으로 허용되는 염류 등을 들 수 있다.
pH 조정제로서는 예를 들면, 무기산(염산, 황산, 인산, 폴리인산, 붕산 등), 유기산(유산, 초산, 구연산, 주석산, 사과산, 호박산, 옥살산, 글루콘산, 푸마르산, 프로피온산, 아스파라긴산, 입실론－아미노카프로산, 글루탐산, 아미노에틸술폰산 등), 글루코놀락톤, 초산암모늄, 무기 염기(탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼슘, 수산화마그네슘 등), 유기 염기(모노에탄올아민, 트리에탄올아민, 디이소프로판올아민, 트리이소프로판올아민, 리신 등), 붕사, 및 그 약리학적으로 허용되는 염류 등을 들 수 있다.
등장화제로서는 예를 들면, 무기 염류(예를 들면 염화나트륨, 염화칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 염화칼슘, 황산마그네슘, 인산수소나트륨, 인산수소이나트륨, 인산수소이칼륨, 티오황산나트륨, 초산나트륨 등), 다가 알코올류(예를 들면 글리세린, 프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜, 1, 3－부틸렌글리콜 등), 당류(예를 들면 포도당, 만니톨, 소비톨 등) 등을 들 수 있다.
완충제로서는 예를 들면, 트리스 완충제, 붕산 완충제, 인산 완충제, 탄산 완충제, 구연산 완충제, 초산 완충제, 입실론－아미노카프로산, 아스파라긴산염 등을 들 수 있다. 구체적으로는 붕산 또는 그 염(붕산나트륨, 테트라붕산칼륨, 붕산칼륨 등), 인산 또는 그 염(인산수소나트륨, 인산이수소나트륨, 인산이수소칼륨 등), 탄산 또는 그 염(탄산수소나트륨, 탄산나트륨 등), 구연산 또는 그 염(구연산나트륨, 구연산칼륨 등) 등을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물의 조제는 적당히 공지의 방법으로 행할 수가 있고, 예를 들면, 증류수 또는 정제수 등의 적당한 희석제 중에서, 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 수성 현탁액제와 임의의 배합 성분을 혼합하여, 상기의 침투압 및 pH로 조정하고, 무균 환경하, 고압 증기 멸균 혹은 여과 멸균 처리하고, 세정 멸균 완료 용기에 무균 충전함으로써 제조할 수가 있다.
본 발명의 의약 조성물은 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료약 또는 예방약으로 할 수가 있다. 예를 들면, 본 발명의 의약 조성물은 감염에 기인하는 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료용 또는 예방용으로 할 수가 있다. 따라서, 본 발명은 의약(염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료약 또는 예방약)으로서 사용하기 위한 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자 및 분산 안정제를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제를 포함한다.
본 명세서에 있어서, 염증성 질환 또는 감염성 질환이란 전신성 염증성 질환 및 감염성 질환, 및 국소성의 염증성 질환 또는 감염성 질환을 포함한다. 염증성 질환에는 감염에 기인하는 염증성 질환 외에 알레르기성 염증성 질환(예를 들면 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 습진, 알레르기성 천식, 알레르기성 폐렴)도 포함된다. 전신성 염증성 질환으로서는 표재성·심재성 피부 감염증, 림프관·림프절염, 유선염, 골수염, 편도염, 폐렴, 신우신염, 요도염, 임균 감염증, 매독, 자궁내 감염, 성홍열, 디프테리아, 백일해, 외상·열탕 및 수술 등의 2차 감염, 인두·후두염, 기관지염, 만성 호흡기 병변의 2차 감염, 치관주위염, 치주조직염, 파상풍, 방광염, 전립선염, 감염성 장염, 악염, 감염성 관절염, 위염 등의 전신의 염증성 질환 또는 감염성 질환을 들 수가 있다.
구체적으로는 본 발명의 의약 조성물은 눈의 염증성 질환 및 감염성 질환 및 그들에 부수하는 다양한 증상을 치료 또는 예방하기 위해 사용할 수가 있다. 눈의 염증성 질환 및 감염성 질환으로서는 예를 들면, 안검염, 안검 결막염, 마이봄선염, 급성 혹은 만성 맥립종, 선립종, 누낭염, 누선염, 및 주사비성 여드름을 포함하는 안검 증상； 결막염, 신생아 안염, 및 트라코마를 포함하는 결막 증상； 각막 궤양, 표재성 각막염 및 각막실질염, 각결막염, 이물, 및 수술 후 감염증을 포함하는 각막 증상； 및 안내염, 감염성 포도막염, 및 수술 후 감염증을 포함하는 전안방 및 포도막 증상을 들 수가 있다. 감염증의 예방으로서는 수술 등의 외과 처치 전, 감염성 증상을 나타내는 사람과의 접촉 전에 투여하는 것을 포함한다. 예방을 위해 사용하는 경우, 예를 들면, 안검 형성술, 선립종의 적출, 검판 봉합술, 카뉴아리큐리나 누관 배액 시스템을 위한 수술, 및 안검과 누기에 관한 다른 외과 처치라고 하는 외과 처치； 익상편, 결막 지방반 및 종양의 적출, 결막 이식, 절상, 화상 및 찰과라고 하는 외상성 상처, 및 결막 피복술을 포함하는 결막의 수술； 이물의 제거, 각막 절개술 및 각막 이식을 포함하는 각막의 수술； 광굴절률 처치를 포함하는 굴절률 수술； 블렙(bleb)의 여과를 포함하는 녹내장 수술； 전안방 천자； 광채 절제술； 백내장 수술； 망막 수술； 및 외안근에 관한 수술 전에 투여할 수가 있다. 또, 신생아 안염의 예방도 본 명세서에 있어서의 예방에 포함된다.
예를 들면, 본 발명의 의약 조성물은 귀의 염증성 질환 또는 감염성 질환에 부수하는 다양한 증상의 치료 또는 예방에 사용할 수가 있다. 귀의 염증성 질환 또는 감염성 질환으로서는 예를 들면 중이염 또는 외이염을 들 수가 있다. 감염증의 예방이란 수술 및 다른 의심되는 감염성 상태 혹은 접촉 전의 수술 전 처치를 포함한다. 예방적 상황의 예로서는 귀의 외상 혹은 손상을 수반하는 외과적 처치 및 그 외의 수술 또는 처치 전 치료를 들 수 있다.
또, 본 발명의 의약 조성물은 코의 염증성 질환 또는 감염성 질환에 부수하는 다양한 증상을 치료 또는 예방할 수가 있다. 또한 본 명세서 전체에 걸쳐 「코의 염증성 질환 또는 감염성 질환」 및 「코용 국소 적용 제제」란 말에 있어서의 「코」란 상기도 전체를 포함하는 의미이고, 예를 들면 비강, 비인후, 인두, 및 후두를 포함하는 것이다. 코의 염증성 질환 또는 감염성 질환으로서는 예를 들면, 부비강염, 알레르기성 비염, 및 비염을 들 수가 있다.
또, 본 발명의 의약 조성물은 폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환에 부수하는 다양한 증상의 치료 또는 예방에 사용할 수가 있다. 또한 본 명세서 전체에 걸쳐 「폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환」 및 「폐용 국소 적용 제제」란 말에 있어서의 「폐」란 하기도 전체를 포함하는 의미이고, 예를 들면 기관, 기관지, 세기관지, 및 폐를 포함하는 것이다. 폐의 염증성 질환 또는 감염성 질환으로서는 예를 들면, 폐렴, 기관지염, 알레르기성 폐렴, 및 천식 등을 들 수가 있다.
보다 바람직하게는 본 발명의 의약 조성물은 다양한 세균 또는 기생충에 의해 야기되는 감염성 질환(예를 들면 눈, 귀, 코 또는 폐의 감염성 질환)의 치료 또는 예방에 사용할 수가 있다. 그러한 미생물로서는 예를 들면, 황색 포도상 구균 및 표피 포도상 구균을 포함하는 포도상 구균속； 폐렴 연쇄구균 및 화농 연쇄구균 그리고 C, F 및 G군의 연쇄구균 및 비리단스군의 연쇄구균을 포함하는 연쇄구균속； 바이오 타입 III을 포함하는 인플루엔자균； 연성 하감균； 모락셀라 카타랄리스； 임균 및 수막염균을 포함하는 나이세리아속； 트라코마클라디미아, 앵무병 클라디미아 및 클라디미아 뉴모니에를 포함하는 클라디미아속； 사람 결핵균 및 새 결핵균 세포내 복합체 그리고 미코박테리움 마리눔, 미코박테리움 포투이툼 및 거북 결핵균을 포함하는 비정형 미코박테리움균을 포함하는 미코박테리움속； 백일해균； 캄필로박터 제쥬니； 레지오넬라 뉴모필라； 박테로이데스 비비우스； 웰치균； 펩토스트렙토코커스 스피시즈； 보렐리아 부르그도르페리； 폐렴 마이코플라즈마； 매독 트레포네마； 우레아플라즈마 우레아리티컴； 톡소플라즈마； 말라리아； 그리고 노세마를 들 수가 있다.
3. 치료 방법·예방 방법
본 발명의 의약 조성물은 그것을 필요로 하는 환자에게 유효량을 투여함으로써, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방에 이용할 수가 있다. 따라서, 본 발명은 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자(및 분산 안정제)를 함유하는 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제를 포함하는 의약 조성물을, 그것을 필요로 하는 환자에게 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료 방법 또는 예방 방법에 관한 것이다. 여기서, 대상으로 되는 환자는 포유류로 분류되는 임의의 동물을 의미하고, 이것에 한정되는 것은 아니다. 예로서 사람； 개, 고양이, 토끼 등의 애완 동물； 소, 돼지, 양, 말 등의 가축 동물을 포함하고, 바람직하게는 사람이다.
본 발명의 의약 조성물의 투여량 및 투여 횟수는 특히 한정되지 않고, 치료 대상 질환의 악화·진전의 방지 및/또는 치료의 목적, 질환의 종류, 환자의 체중이나 연령 등의 조건에 따라, 의사의 판단에 의해 적당히 선택하는 것이 가능하다. 일반적으로는 성인 1일당 투여량은 0.01~1000mg(유효성분 중량) 정도이고, 1일 1회 또는 수회 투여할 수가 있다. 투여 경로는 주사 또는 국소 투여이고, 예를 들면, 정맥 주사, 근육내 주사, 혹은 피하 주사, 점적, 점안, 점이, 점비, 경피, 경점막, 흡입 등을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물이 주사제인 경우, 성인에 대해 1일량 0.001~100mg(유효성분 중량)을 연속 투여 또는 간헐 투여할 수가 있다.
본 발명의 수성 의약 조성물이 국소 투여용인 경우, 환부, 환부의 주변부 또는 환부를 포함하는 장기 등의 국소에 직접 투여되는 것이다. 예를 들면, 본 발명의 의약 조성물은 눈용 국소 적용 제제, 귀용 국소 적용 제제, 코용 국소 적용 제제, 또는 폐용 국소 적용 제제로 할 수가 있다. 본 발명의 의약 조성물이 국소 투여용 제제인 경우, 일상적으로 적용할 수도 있고, 국소의 염증성 질환 또는 감염성 질환이 발병한 후에 임의의 횟수 적용할 수가 있다. 또, 적용량은 증상 등에 따라 적당히 조제할 수가 있고, 통상 1일당 1~6회 정도 점안하고, 1회에 1~3방울 정도 적용한다.
이하에 실시예를 이용하여 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 이것은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 또한 본원 명세서 전체를 통해 인용하는 문헌은 참조에 의해 그 전체가 본원 명세서에 넣어진다.
(실시예 1) 클래리트로마이신 분쇄 Dough(도우)의 제작
0.5L 트리믹스(이노우에제작소제)에 평균 입자경 10,370nm의 클래리트로마이신(융점： 217－220℃； Assia Chemical Industries Ltd.) 10g, 분쇄한 염화나트륨(평균 입자경： 5μm) 10g, 만니톨(와코순약공업사제) 60g, 폴리비닐피롤리돈 K25(와코순약공업사제) 3g, 및 수첨 대두 레시틴 PHOSPHOLIPON 90H(에이치홀스타인사제) 5g을 넣어 균일하게 혼합한 후, 글리세린 20g을 주입하고 내용물을 반죽상으로 유지하여 5℃에서 5시간 분쇄를 행하였다. 얻어진 혼련 도우는 회수량 93g(회수율 86%)이었다.
얻어진 혼련 도우 100mg에 0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제)을 3g 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 144.7nm, 10% 직경(D10) 81.4nm, 50% 직경(D50) 124.6nm, 90% 직경(D90) 197.0nm였다.
(실시예 2) 분산제(계면활성제)의 검토
(1) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(HCO－60； 일본서팩턴트공업사제)
실시예 1에서 얻어진 트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 0.5g을 50mL의 유리 바이얼에 달아 취하고, 거기에 0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제) 수용액 44g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브(probe)식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산 처리를 행하였다. 당해 분산액 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제, 이하 동)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 146.0nm, 10% 직경(D10) 72.5nm, 50% 직경(D50) 119.2nm, 90% 직경(D90) 220.3nm였다.
(2) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(Tween80； 칸토화학사제)
상기 실시예 2 (1)에 있어서의 「0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제)」을 「0.1% Tween80(칸토화학사제)」으로 바꾼 외에는 실시예 2 (1)과 마찬가지로 처리를 행하였다. 클래리트로마이신의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 198.5nm, 10% 직경(D10) 84.3nm, 50% 직경(D50) 154.9nm, 90% 직경(D90) 291.3nm였다.
(3) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(MYS－40； 일본서팩턴트공업사제)
상기 실시예 2 (1)에 있어서의 「0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제)」을 「0.1% MYS－40(일본서팩턴트공업사제)」으로 바꾼 외에는 실시예 2 (1)과 마찬가지로 처리를 행하였다. 클래리트로마이신의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 142.2nm, 10% 직경(D10) 72.4nm, 50% 직경(D50) 118.8nm, 90% 직경(D90) 208.1nm였다.
(실시예 3) 나노화 클래리트로마이신 분산액의 안정성 시험
실시예 2에 있어서 제작한 나노화 클래리트로마이신의 각 분산액 약 4mL를 9mL의 스크류관에 나누어 주입하여 뚜껑을 확실히 닫고, 실온에서 보존하고, 1일 후의 안정성을 눈으로 보는 등에 의해 평가하였다. 결과를 표 1에 나타낸다. 본 결과로부터, 분산제로서 HCO－60이 뛰어나다는 것이 밝혀졌다.
Figure 112021052442891-pat00001
(실시예 4) 증점제의 검토
(1) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(HPMC 60SH－50； 신에츠화학공업사제)
실시예 1에서 얻어진 트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 1g을 50mL의 유리 바이얼에 달아 취하고, 거기에 0.1% HCO－60 수용액 44g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 고압 호모지나이저(homogenizer)(형식： L01, 산와엔지니어링주식회사제)를 사용하여 고압화(90MPa)로 분산 처리를 행하였다. 당해 분산액 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DelsaNano, 베크만쿨터사제, 이하 동)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 154.9nm, 10% 직경(D10) 77.1nm, 50% 직경(D50) 113.2nm, 90% 직경(D90) 224.9nm였다.
상기 분산액에 0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여 마그네틱 스터러(magnetic stirrer)로 교반하고, 마지막에 정제수를 가하여 89g으로 조정하고 교반 혼합하여 최종 제제로 하였다. 당해 제제 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 327.8nm, 10% 직경(D10) 189.5nm, 50% 직경(D50) 284.4nm, 90% 직경(D90) 423.0nm였다. 또한 점도 보정에 의해 입도분포를 재계산한 결과, 평균 입자경(Dv) 170.1nm, 10% 직경(D10) 98.6nm, 50% 직경(D50) 148.6nm, 90% 직경(D90) 223.3nm였다.
(2) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(HPMC 60SH－4000； 신에츠화학공업사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여 마그네틱 스터러로 교반하고」를 「0.9% HPMC 60SH－4000 수용액을 22g 첨가하여 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산시키고」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지의 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 1017.7nm, 10% 직경(D10) 441.8nm, 50% 직경(D50) 818.3nm, 90% 직경(D90) 1629.6nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 219.4nm, 10% 직경(D10) 98.5nm, 50% 직경(D50) 183.6nm, 90% 직경(D90) 370.2nm였다.
(3) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(HPMC 65SH－4000； 신에츠화학공업사제)
상기 실시예 4 (2)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－4000 수용액을 22g 첨가하여」를 「1% HPMC 65SH－4000 수용액을 23g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (2)와 마찬가지의 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 990.1nm, 10% 직경(D10) 424.8nm, 50% 직경(D50) 840.2nm, 90% 직경(D90) 1565.5nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 219.4nm, 10% 직경(D10) 93.5nm, 50% 직경(D50) 183.4nm, 90% 직경(D90) 342.0nm였다.
(4) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(HPMC 90SH－4000SR； 신에츠화학공업사제)
상기 실시예 4 (2)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－4000 수용액을 22g 첨가하여」를 「1% HPMC 90SH－4000SR 수용액을 8g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (2)와 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 425.0nm, 10% 직경(D10) 146.9nm, 50% 직경(D50) 332.6nm, 90% 직경(D90) 715.6nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 219.4nm, 10% 직경(D10) 71.1nm, 50% 직경(D50) 157.7nm, 90% 직경(D90) 334.4nm였다.
(5) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(MC SM－15； 신에츠화학공업사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여」를 「1% MC SM－15 수용액을 33g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 325.5nm, 10% 직경(D10) 158.1nm, 50% 직경(D50) 271.3nm, 90% 직경(D90) 474.8nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 167.8nm, 10% 직경(D10) 81.4nm, 50% 직경(D50) 141.1nm, 90% 직경(D90) 246.9nm였다.
(6) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(MC SM－100； 신에츠화학공업사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여」를 「1% MC SM－100 수용액을 33g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 608.4nm, 10% 직경(D10) 258.8nm, 50% 직경(D50) 499.1nm, 90% 직경(D90) 979.6nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 199.8nm, 10% 직경(D10) 81.6nm, 50% 직경(D50) 160.5nm, 90% 직경(D90) 321.3nm였다.
(7) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(PVA－204C； 쿠라레사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여」를 「2% PVA－204C 수용액을 33g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 197.1nm, 10% 직경(D10) 109.3nm, 50% 직경(D50) 169.1nm, 90% 직경(D90) 268.6nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 142.4nm, 10% 직경(D10) 80.1nm, 50% 직경(D50) 123.3nm, 90% 직경(D90) 196.1nm였다.
(8) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(PEG－4000； 칸토화학사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여」를 「2% PEG－4000 수용액을 33g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 160.6nm, 10% 직경(D10) 82.1nm, 50% 직경(D50) 133.1nm, 90% 직경(D90) 235.6nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 149.4nm, 10% 직경(D10) 68.0nm, 50% 직경(D50) 110.3nm, 90% 직경(D90) 201.1nm였다.
(9) 클래리트로마이신 0.1% 제제의 제작(PVP K30； 와코순약공업사제)
상기 실시예 4 (1)에 있어서의 「0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여」를 「4% PVP K30 수용액을 33g 첨가하여」로 바꾼 외에는 실시예 4 (1)과 마찬가지로 처리를 행하여 최종 제제로 하였다. 점도 보정 전의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 212.7nm, 10% 직경(D10) 108.2nm, 50% 직경(D50) 176.4nm, 90% 직경(D90) 309.4nm였다. 또, 점도 보정 후의 입도분포는 평균 입자경(Dv) 157.0nm, 10% 직경(D10) 78.9nm, 50% 직경(D50) 130.4nm, 90% 직경(D90) 231.4nm였다.
(실시예 5) 제제의 안정성 시험
(1) 안정성에의 증점제의 영향의 검토 1
실시예 4에서 제작한 나노화 클래리트로마이신의 각 분산액 약 4mL를 9mL의 스크류관에 나누어 주입하여 뚜껑을 확실히 닫고, 40℃에서 보존하고, 7일 후의 안정성을 눈으로 보는 등에 의해 평가하였다. 결과를 표 2에 나타낸다. 본 실험 결과에 의해, 증점제로서 HPMC(60SH－50)와 MC(SM15)가 뛰어난 것이 밝혀졌다.
Figure 112021052442891-pat00002
(2) 안정성에의 증점제의 영향의 검토 2
실시예 5 (1)로부터, 증점제로서 HPMC 및 MC가 뛰어난 것이 밝혀졌기 때문에, 또한 HPMC의 종류와 MC의 종류에 의한 안정성에의 영향을 조사하기 위해 시험을 행하였다. 실시예 4에서 제작한 나노화 클래리트로마이신의 각 분산액 약 4mL를 9mL의 스크류관에 나누어 주입하여 뚜껑을 확실히 닫고, 25℃에서 보존하고, 14일 후의 안정성을 눈으로 보는 등에 의해 평가하였다. 결과를 표 3에 나타낸다. 본 결과에 의해, 실시예 4 (2), (3), (4) 및 (6)에 있어서 이용한 HPMC 시리즈와 MC 시리즈는 모두 증점제로서 매우 적합하다는 것이 밝혀졌다.
Figure 112021052442891-pat00003
(실시예 6) In vitro 항균 시험(최소 발육 저지 농도 시험)
(1) 제제의 제작： 클래리트로마이신 0.3% 제제 제작
실시예 1에서 얻어진 트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 3g을 50mL의 유리 바이얼에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60 수용액 10g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산 처리를 행하였다. 당해 분산액 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 246.0nm, 10% 직경(D10) 103.7nm, 50% 직경(D50) 196.4nm, 90% 직경(D90) 393.8nm였다.
상기 분산액에 0.9% HPMC 60SH－50 수용액을 22g 첨가하여 마그네틱 스터러로 교반하고, 마지막에 정제수를 가하여 89g으로 조정하고 교반 혼합하여 최종 제제로 하였다. 당해 제제 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 328.9nm, 10% 직경(D10) 167.3nm, 50% 직경(D50) 270.4nm, 90% 직경(D90) 481.2nm였다. 또한 점도 보정에 의해 입도분포를 재계산한 결과, 평균 입자경(Dv) 162.4nm, 10% 직경(D10) 82.0nm, 50% 직경(D50) 133.6nm, 90% 직경(D90) 239.9nm였다.
(2) 최소 발육 저지 농도(MIC) 측정 시험
미량 액체 희석법에 의한 최소 발육 저지 농도(MIC) 측정법(일본화학요법학회 표준법)을 응용하여 MIC 시험을 행하였다. 피험물질로서 실시예 6 (1)에서 조제한 클래리트로마이신 현탁액(피험물질 1)을 사용하고, 비교를 위한 대조(컨트롤)로서 미(未)분쇄의 클래리트로마이신 현탁액(피험물질 2), 클래리트로마이신의 DMSO 용액(피험물질 3)을 사용하였다.
(2－1) 피험물질 함유 배지의 조제
각 피험물질을 희석 조제 전에 보텍스 믹서로 15초 이상 교반하였다. 클래리트로마이신 함유 샘플(피험물질 1~3)은 Staphylococcus aureus subsp. aureus 접종용 배지로서 뮬러힌톤II 브로스(broth)로 250μg/mL로 희석한 후, 2배 단계 희석을 행하여, 최종 약제 농도로서 0.012~25μg/mL를 함유하는 배지를 조제하였다. 또, Pseudomonas aeruginosa 접종용 배지로서 뮬러힌톤II 브로스로 1000μg/mL로 희석한 후, 2배 단계 희석을 행하여 최종 약제 농도로서 0.049~100μg/mL를 함유하는 배지를 조제하였다.
제작한 각 피험물질 함유 배지를 U자형 웰 마이크로플레이트(well microplate)에 1웰당 0.1±0.02mL 나누어 주입하였다. 대조로서 약제 불함유 배지를 2웰에 각각 나누어 주입하였다.
(2－2) 접종균액의 조제
뮬러힌톤II 한천 배지로 taphylococcus aureus subsp. aureus 또는 Pseudomonas aeruginosa를 하룻밤 배양하였다. 한천 평판 상의 신선 배양균을 멸균 생리 식염액으로 0.5McFarand(약 108CFU/mL) 상당으로 현탁시키고, 이것을 멸균 생리 식염액으로 또한 10배로 희석(약 107CFU/mL)하여 접종균액을 조제하였다.
(2－3) 접종균액의 접종 및 배양
피험물질 함유 배지 및 피험물질 불함유 배지를 나누어 주입한 각 웰에, 상기 (2－2)에서 조제한 Staphylococcus aureus subsp. aureus 또는 Pseudomonas aeruginosa의 접종균액을 0.005mL 접종하였다(최종 접종균량： 약 104CFU/웰). 피험물질 불함유 배지 웰에 균액을 접종하지 않은 것을 네거티브 컨트롤(negative control)로 하였다. 접종 후 35±1℃에서 18~24시간 배양하였다.
(2－4) 판정
대조에 이용한 피험물질 불함유 배지 웰에서의 발육을 확인한 후, 균의 발육이 육안적으로 인지되지 않은 웰 중, 최소의 약제 농도를 가지고 최소 발육 저지 농도(MIC)로 하였다. 구체적으로는 육안적으로 혼탁 또는 직경 1mm 이상의 침전이 인지된 경우, 및 침전물의 직경이 1mm 이하라도 침전괴가 2개 이상 인지된 경우에는 발육 양성(＋)으로 하고, 육안적으로 혼탁 또는 침전이 인지되지 않은 경우, 및 침전이 있어도 직경이 1mm 이하이고 1개인 경우에는 발육 저지(－)로 하여 판정하였다.
(3) 결과
결과를 표 4에 나타낸다. 이 결과로부터, 나노화한 클래리트로마이신은 미분쇄 및 용해시킨 클래리트로마이신과 동등의 항균 활성을 유지하고 있는 것이 밝혀졌다.
Figure 112021052442891-pat00004
(실시예 7) 안자극성 시험
(1) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 제작
(1－1) 클래리트로마이신의 분쇄
1L 트리믹스(이노우에제작소제)에 평균 입자경 10,370nm의 클래리트로마이신(융점： 217－220℃； Assia Chemical Industries Ltd.) 30.1g, 만니톨(와코순약사제) 90.1g, 폴리비닐피롤리돈 K25(와코순약공업사제) 8.9g, 및 수첨 대두 레시틴 PHOSPHOLIPON 90H(에이치홀스타인사제) 12.0g을 넣어 균일하게 혼합한 후, 글리세린 21.5g을 주입하고 내용물을 반죽상으로 유지하여 5℃에서 5시간 분쇄를 행하였다. 얻어진 혼련 도우는 회수량 136.6g(회수율 84%)이었다.
(1－2) 나노화 클래리트로마이신의 입도분포 측정
얻어진 혼련 도우 100mg에 0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제)을 3g 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv)은 159.7nm였다.
(1－3) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트 농도 0.3%)의 제작
트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 1.25g을 50mL의 유리 바이얼에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제) 수용액 10g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산 처리를 행하였다. 그 후 1% HCO－60 수용액 10g, 1% HPMC(60SH－50) 수용액 17.5g, 1M Tris 완충액 7.5g, 0.1% 염화벤잘코늄 수용액 0.75g을 순서대로 첨가하고, 또한 정제수를 첨가하여 전체량을 75g으로 하였다. 마지막에 마그네틱 스터러로 30분간 교반하여 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트 농도 0.3%)로 하였다.
(1－4) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트 농도 1.0%)의 제작
트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 4.05g을 비커에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제) 수용액 33.5g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산 처리를 행하였다. 그 후 1% HPMC(60SH－50) 수용액 17.5g, 1M Tris 완충액 7.5g, 0.1% 염화벤잘코늄 수용액 0.75g을 순서대로 첨가하고, 또한 정제수를 첨가하여 전체량을 75g으로 하였다. 마지막에 마그네틱 스터러로 30분간 교반하여 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트 농도 1.0%)로 하였다.
(1－5) 클래리트로마이신 원분말 현탁액제(클래리트 농도 1.0%)의 제작
클래리트로마이신 0.75g을 비커에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제) 수용액 33.5g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간 분산 처리를 행하였다. 그 후 1% HPMC(60SH－50) 수용액 17.5g, 1M Tris 완충액 7.5g, 0.1% 염화벤잘코늄 수용액 0.75g을 순서대로 첨가하고, 또한 정제수를 첨가하여 전체량을 75g으로 하였다. 마지막에 마그네틱 스터러로 30분간 교반하여 클래리트로마이신 원분말 현탁액제(클래리트 농도 1.0%)로 하였다.
(2) 평가 시험
(2－1) 토끼에 각각 (a) 생리 식염수, 상기 (1)에서 제작한 (b) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트로마이신 농도 0.3%), (c) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트로마이신 농도 1.0%), (d) 클래리트로마이신 원분말 현탁액제(클래리트로마이신 농도 1.0%), 혹은 (e) Azasite(등록상표)(양성 대조)(아지트로마이신 농도 0.3%)를 30분~수시간 간격으로 1일 1회~20회 점안한 후, 플루오레세인을 점안하고, 각막 염색반을 관찰함으로써 안자극성을 평가한다.
(2－2) 토끼의 한쪽 눈에 각각 상기 (1)에서 제작한 (b) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트로마이신 농도 0.3%), (c) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트로마이신 농도 1.0%)를 50μL 점안하고, 6시간에 걸쳐 안자극성을 눈으로 보아 평가하였다. 그 결과 (b) 및 (c)의 양 나노화 클래리트로마이신 현탁액제로도 눈깜빡임 횟수의 증가, 눈의 충혈 및 분비물은 관찰되지 않고, 안자극성은 인지되지 않았다.
(2－3) 토끼의 한쪽 눈을 대상으로 하여 생리 식염액을, 다른 눈에 상기 제제 (b)~(e)를 30분~수시간 간격으로 1일 1회~20회 점안하고, 눈깜빡임 횟수와 안자극성을 평가한다. 안자극성의 평가에 대해서는 투여 전, 최종 투여 후 1, 3, 5, 24시간에 양 눈의 각막, 홍채 및 결막에 대해 관찰하고, Draize의 평가 기준에 따라 점수화하여 판정한다.
나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 안자극성은 양성 대조인 Azasite의 안자극성과 비교하여 동등 또는 낮다고 생각된다.
(실시예 8) 감염성 모델 동물을 이용한 약효 시험
(1) 백색 토끼의 각막에 상처를 낸 후 녹농균을 점안함으로써 각막 감염증 모델을 제작한다. 토끼의 한쪽 눈에 생리 식염액, 다른 눈에 실시예 7에서 조제한 제제 (b)~(e)를 균접종 수시간 후부터 1일 1회~10회, 3일~5일간 점안하고, 균접종 수시간 후부터 24시간마다 4~8일간에 걸쳐 외안부 감염 증상의 관찰을 행한다. 외안부 감염 증상은 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준 또는 Draize의 평가 기준에 따라 점수화하여 판정한다.
(2) 백색 토끼의 결막낭 내에 녹농균을 접종함으로써 각막 감염증 모델을 제작한다. 각막염의 발증을 확인(균접종 5~10시간) 후, 한쪽 눈에 생리 식염액, 다른 눈에 실시예 7에서 조제한 제제 (b)~(e)를 1일 1회~10회, 3일~5일간 점안하고, 균접종 수시간 후부터 24시간마다 4~8일간에 걸쳐 외안부 감염 증상의 관찰을 행한다. 외안부 감염 증상은 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준 또는 Draize의 평가 기준에 따라 점수화하여 판정한다.
(3) 백색 토끼의 각막에 상처를 낸 후 황색 포도상 구균을 점안함으로써 각막 감염증 모델을 제작한다. 토끼의 한쪽 눈에 생리 식염액, 다른 눈에 실시예 7에서 조제한 제제 (b)~(e)를 균접종 수시간 후부터 1일 1회~10회, 3일~5일간 점안하고, 균접종 수시간 후부터 24시간마다 4~8일간에 걸쳐 외안부 감염 증상의 관찰을 행한다. 외안부 감염 증상은 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준 또는 Draize의 평가 기준에 따라 점수화하여 판정한다.
(4) 백색 토끼의 각막실질 내에 황색 포도상 구균을 주입함으로써 각막 감염증 모델을 제작한다. 토끼의 한쪽 눈에 생리 식염액, 다른 눈에 실시예 7에서 조제한 제제 (b)~(e)를 균접종 수시간 후부터 1일 1회~10회, 3일~5일간 점안하고, 균접종 수시간 후부터 24시간마다 4~8일간에 걸쳐 외안부 감염 증상의 관찰을 행한다. 외안부 감염 증상은 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준 또는 Draize의 평가 기준에 따라 점수화하여 판정한다.
나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 눈으로 보는 것에 의한 안자극성(각막 혼탁, 안검 결막 충혈, 안검 결막 부종, 구결막 충혈)은 양성 대조인 Azasite와 비교하여 동등 또는 낮다고 생각된다. 또 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 항균·항염증 효과는 양성 대조인 Azasite와 비교하여 동등 또는 그 이상이라고 생각된다.
(실시예 9) 염증성 모델 동물을 이용한 약효 시험
(1) 래트(rat)의 상안검 결막에 2% 아라키돈산을 주사함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 아라키돈산을 주사하기 전에 15분~30분 간격으로 1회~수회, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 점안하고, 아라키돈산 주사의 3시간~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 가장자리를 따라 부종 부위를 떼어내고 그 중량을 측정한다. 제제 점안군의 생리 식염액 점안군에 대한 부종 중량의 감소 비율을 계산하여, 결막 부종에 대한 억제 효과를 평가한다.
(2) 래트의 상안검 결막에 1% 카라게닌을 주사함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 카라게닌을 주사하기 전에 15분~30분 간격으로 1회~4회, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 점안하고, 카라게닌 주사의 3시간~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 가장자리를 따라 부종 부위를 떼어내고 그 중량을 측정한다. 제제 점안군의 생리 식염액 점안군에 대한 부종 중량의 감소 비율을 계산하여, 결막 부종에 대한 억제 효과를 평가한다.
(3) 래트의 상안검 결막에 1% 카라게닌을 주사함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 또 카라게닌 주사 직후에 1% 에반스 블루(Evans blue)를 꼬리 정맥으로부터 투여한다. 카라게닌을 주사하기 전에 15분~30분 간격으로 1회~4회, 한쪽 눈(우안)에는 실시예 7에서 조제한 제제 (b)~(e)를 점안하고, 다른 눈(좌안)에는 생리 식염액을 점안하고, 카라게닌 주사의 3시간~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 피부를 적출한다. 당해 안검 피부를 팔콘튜브(falcon tube)에 넣고, 폼아미드를 가하여 하룻밤 냉장고 내에서 침지하고, 원심분리 후 위의 맑은 액에 포함되는 에반스 블루의 색소량을 분광 광도계를 이용하여 620nm의 흡광도로부터 구한다. 결막 부종에 대한 억제 효과는 이하에 나타내는 색소 누출량의 억제율로서 평가한다.
억제율(%)=｛(좌안의 색소 누출량－우안의 색소 누출량)/좌안의 색소 누출량｝×100
(4) 래트의 상안검 결막에 1% 포말린을 주사함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 포말린을 주사하기 전에 15분~30분 간격으로 1회~4회, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 점안하고, 포말린 주사의 3시간~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 가장자리를 따라 부종 부위를 떼어내고 그 중량을 측정한다. 제제 점안군의 생리 식염액 점안군에 대한 부종 중량의 감소 비율을 계산하여 결막 부종에 대한 억제 효과를 평가한다.
(5) 래트의 상안검 결막에 10% 카올린을 주사함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 카올린을 주사하기 전에 15분~30분 간격으로 1회~4회, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 점안하고, 카올린 주사의 3시간~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 가장자리를 따라 부종 부위를 떼어내고 그 중량을 측정한다. 제제 점안군의 생리 식염액 점안군에 대한 부종 중량의 감소 비율을 계산하여 결막 부종에 대한 억제 효과를 평가한다.
(6) 래트의 결막낭 내에 10% 크로톤유를 점안함으로써 급성 결막 부종(결막염 모델)을 제작한다. 크로톤유를 점안하기 전에 30분~50분 간격으로 1회~4회, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 점안하고, 크로톤유의 마지막 점안으로부터 2~6시간 후에 래트를 도살하여 안검 가장자리를 따라 부종 부위를 떼어내고 그 중량을 측정한다. 제제 점안군의 생리 식염액 점안군에 대한 부종 중량의 감소 비율을 계산하여 결막 부종에 대한 억제 효과를 평가한다.
(7) 토끼의 유리체에 소 혈청 알부민을 주입함으로써 포도막염을 제작한다(1차적 포도막염). 또한 이 염증이 들어간 후(소 혈청 알부민의 유리체 주입 27~29일 후), 다시 소 혈청 알부민을 귀 정맥으로부터 주입하여 포도막염을 재발시킨다(2차적 포도막염). 1차적 포도막염과 2차적 포도막염에 대해, 실시예 7에서 조제한 제제 (a)~(e)를 30분~수시간 간격으로 1일 1회~6회 점안하고, 생리 식염액 점안군과 제제 투여군에서 외안부 염증 증상(각막 혼탁, 안검 결막 충혈, 안검 결막 부종, 구결막 충혈)과 내안부 염증 증상(홍채 충혈, 홍채 형태적 변화, 전방 혼탁)을 채점 기준에 의해 점수화하여 포도막염의 지표로 한다.
나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 눈으로 보는 것에 의한 안자극성(각막 혼탁, 안검 결막 충혈, 안검 결막 부종, 구결막 충혈)은 양성 대조인 Azasite(등록상표)와 비교하여 동등 또는 낮다고 생각된다. 또 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 항염증 효과는 양성 대조인 Azasite(등록상표)와 비교하여 동등 또는 그 이상이라고 생각된다.
(실시예 10) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 안정성 시험
실시예 7 (1)에서 제작한 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(클래리트로마이신 농도 0.3% 및 1.0%)를 용량 9mL의 스크류관에 6~8g 달아 취하고, 각각 5℃, 25℃, 40℃로 설정한 항온 항습기 중에 가만히 두고, 14일간에 걸쳐 안정성 시험을 행하였다. 7일 후와 14일 후에 클래리트로마이신의 농도를 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 정량하여, 제제 조제 직후의 클래리트로마이신 농도를 100%로 했을 때의 잔존율을 구함으로써 안정성을 평가하였다. HPLC의 분석 조건은 이하와 같이 하였다.
장치： Waters alliance
칼럼： Inertsil ODS 4.6mm×150mm
칼럼 온도： 50℃
용리액(溶離液)： 20mM KH2PO4/CH3CN(8：2)
검출 파장： 210nm
안정성 시험의 결과를 표 5에 나타낸다. 클래리트로마이신은 5℃, 25℃ 및 40℃의 각 온도에 있어서 14일간에 걸쳐, 분해는 인지되지 않고 안정하였다.
Figure 112021052442891-pat00005
(실시예 11) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 안내(眼內) 동태 시험
실시예 7 (1)에서 제작한 (b) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제 (클래리트로마이신 농도 0.3%), (c) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제 (클래리트로마이신 농도 1.0%), (d) 클래리트로마이신 원분말 현탁액제 (클래리트로마이신 농도 1.0%), 혹은 (e) Azasite(등록상표)(양성 대조)(아지트로마이신 농도 0.3%)를 5분~30분 간격으로 1회~10회 토끼에 점안하고, 점안 30분, 1, 2, 4, 6시간 후의 외안부 각 조직(결막, 각막, 방수) 중의 클래리트로마이신 농도를 HPLC 또는 LC/MS/MS 등에 의해 측정한다.
나노화 클래리트로마이신 현탁액제에서는 결막, 각막 및 방수 중의 클래리트로마이신 농도가 클래리트로마이신 원분말 현탁액제의 경우보다 높고, 양성 대조인 Azasite의 경우와 비교하면 동등 또는 높다고 생각된다.
(실시예 12) 클래리트로마이신 분쇄 Dough(도우)의 제작
0.5L 트리믹스(이노우에제작소제)에 평균 입자경 10,370nm의 클래리트로마이신(융점： 217－220℃； Assia Chemical Industries Ltd.) 30g, 만니톨(와코순약공업사제) 90g, 폴리비닐피롤리돈 K25(와코순약공업사제) 9g, 및 수첨 대두 레시틴 PHOSPHOLIPON 90H(에이치홀스타인사제) 12g을 넣어 균일하게 혼합한 후, 글리세린 23.6g을 주입하고 내용물을 반죽상으로 유지하여 10℃에서 6시간 분쇄를 행하였다. 얻어진 혼련 도우는 회수량 145.8g(회수율 88.5%)이었다.
얻어진 혼련 도우 100mg에 0.1% HCO－60(일본서팩턴트공업사제)을 3g 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 146.8nm, 10% 직경(D10) 85.5nm, 50% 직경(D50) 131.1nm, 90% 직경(D90) 222.0nm였다.
(실시예 13) 아지트로마이신 분쇄 Dough(도우)의 제작
0.5L 트리믹스(이노우에제작소제)에 평균 입자경 74.99μm의 아지트로마이신 2수화물(융점： 133－135℃； 토쿄화성공업사제) 5g, 염화나트륨(토미타솔트 K30, 토미타제약사제) 60g, 수첨 대두 레시틴(PHOSPHOLIPON 90H, 에이치홀스타인사제)/글리세린(쥰세이화학사제) 혼합물(1：3) 8g, 및 글리세린 9.6g을 투입하고, 내용물을 반죽상으로 유지하여 5℃에서 2시간 분쇄를 행하였다. 얻어진 혼련 도우는 회수량 74.8g(회수율 90.6%)이었다.
얻어진 혼련 도우 100mg에 0.05% MYS－40(일본서팩턴트공업사제)/0.05% 프로논 407P(일본유지사제) 혼합액을 5g 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 또한 정제수를 45g 첨가하고 욕조형 초음파 분산기를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 아지트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 147.3nm, 10% 직경(D10) 88.9nm, 50% 직경(D50) 130.1nm, 90% 직경(D90) 188.2nm였다.
(실시예 14) 록시트로마이신 분쇄 Dough(도우)의 제작
0.5L 트리믹스(이노우에제작소제)에 평균 입자경 121.3μm의 록시트로마이신(융점： 122－126℃； 와코순약공업사제) 5g, 염화나트륨(오시오미크론 T－0, 아코화성사제) 60g, 수첨 대두 레시틴(PHOSPHOLIPON 90H, 에이치홀스타인사제)/글리세린(쥰세이화학사제) 혼합물(1：3) 8g, 및 글리세린 9.6g을 투입하고, 내용물을 반죽상으로 유지하여 5℃에서 2시간 분쇄를 행하였다. 얻어진 혼련 도우는 회수량 81.6g(회수율 98.4%)이었다.
얻어진 혼련 도우 100mg에 0.05% MYS－40(일본서팩턴트공업사제)/0.05% 프로논 407P(일본유지사제) 혼합액을 5g 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 또한 정제수를 25g 첨가하여 욕조형 초음파 분산기를 사용하여 수분간 분산 처리를 행하였다. 록시트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DeLsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 234.5nm, 10% 직경(D10) 119.0nm, 50% 직경(D50) 195.0nm, 90% 직경(D90) 341.5nm였다.
(실시예 15) 0.3% 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 제작
실시예 12에서 얻어진 트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 2.55g을 50mL의 유리 바이얼에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60 수용액 20.0g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간(30초를 2회) 분산 처리를 행하였다. 당해 분산액 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DelsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv)은 219.2nm였다.
상기 분산액에 1% HCO－60 수용액 20.0g, 1% HPMC 60SH－50 수용액 35.0g, 1M Tris 완충액(pH7.5) 15.0g, 0.1% 염화벤잘코늄(BAC) 수용액 1.5g을 첨가하여 마그네틱 스터러로 교반하고, 마지막에 정제수를 가하여 150g으로 조정하고 교반 혼합하여 0.3% 제제로 하였다. 당해 제제 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 391.9nm, 10% 직경(D10) 205.3nm, 50% 직경(D50) 326.1nm, 90% 직경(D90) 556.5nm였다.
(실시예 16) 1.0% 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 제작
실시예 12에서 얻어진 트리믹스 분쇄 후의 클래리트로마이신 혼련물(혼련 도우) 5.55g을 유리 비커에 달아 취하고, 거기에 1% HCO－60 수용액 46.7g을 가하고, 욕조형 초음파 분산기(형식： VS－100III, 애즈원사제)를 사용하여 1~2분간 분산 처리를 행하였다. 또한 프로브식 초음파 분산기(형식： S－4000, MISONIX사제)로 1분간(30초를 2회), 분산 처리를 행하였다. 당해 분산액 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치(장치명： DelsaNano, 베크만쿨터사제)에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv)은 217.6nm였다.
상기 분산액에 1% HPMC 60SH－50 수용액 23.3g, 1M Tris 완충액(pH7.5) 7.5g, 0.1% 염화벤잘코늄(BAC) 수용액 1.0g을 첨가하여 마그네틱 스터러로 교반하고, 마지막에 정제수를 가하여 100g으로 조정하고 교반 혼합하여 1.0% 제제로 하였다. 당해 제제 중의 클래리트로마이신의 입도분포를 입도분포 측정 장치에 의해 측정한 결과, 평균 입자경(Dv) 548.1nm, 10% 직경(D10) 294.4nm, 50% 직경(D50) 484.4nm, 90% 직경(D90) 785.6nm였다.
(실시예 17) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 안내 약물 동태 시험
실시예 15에서 제작한 0.3% 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(이하 0.3% 나노화 제제), 실시예 16에서 제작한 1.0% 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(이하 1.0% 나노화 제제) 및 1.0% 클래리트로마이신 원분말 현탁액제(이하 1.0% 원분말 제제)의 3종류의 제제를 이용하여, 하기와 같이 안내 약물 동태 시험을 행하였다.
토끼(계통 Kbl： JW, 수컷)의 하안검을 온화하게 벌리고, 좌안의 결막낭 내에 각 제제 50μL를 피펫(pipette)을 이용하여 단회 점안 투여하고, 그 후 상하 안검을 느슨하게 합쳐 약 2초간 유지하였다. 점안 30분, 2, 4, 6시간 후의 각 시점에서 혈장, 안방수 및 결막을 채취하여 클래리트로마이신 농도를 LC－MS/MS로 측정하였다.
혈장의 채취는 이하의 방법에 의해 행하였다. 귓바퀴 정맥으로부터 약 1mL 채혈한 후, 신속히 원심분리(4℃, 1710×g, 3000rpm)하여 혈장을 얻었다. 얻어진 혈장은 분석할 때까지 초저온 프리저(freezer)(－70℃ 이하)에서 동결 보존하였다.
안방수 및 결막의 채취는 다음의 방법에 의해 행하였다. 상기 채혈 후 펜토바비탈 수용액을 귓바퀴 정맥 내 투여하여 마취를 행하고 방혈 안락사시켰다. 주사 용수로 눈을 잘 세정한 후 안방수를 채취하였다. 그 후 결막을 채취하였다. 채취한 안방수 및 결막은 각각 중량을 측정한 후, 액체 질소로 동결하고, 분석할 때까지 초저온 프리저(－70℃ 이하)에서 동결 보존하였다.
각 시료의 전처리는 다음의 방법에 의해 행하였다. 혈장의 경우, 혈장 20μL에 아세토니트릴 50μL를 가하여 충분히 교반한 후, 원심분리(13100×g, 4℃, 5분)하고, 위의 맑은 액 2μL를 LC－MS/MS에 주입하였다. 안방수의 경우, 안방수 20μL에 아세토니트릴 50μL를 가하여 충분히 교반한 후, 원심분리(13100×g, 4℃, 5분)하고, 위의 맑은 액 2μL를 LC－MS/MS에 주입하였다. 결막의 경우, 결막의 습중량의 9배 용량의 초순수를 가하여 호모지나이즈(homogenize)하고, 결막 호모지네이트 20μL에 아세토니트릴 50μL를 가하여 충분히 교반한 후, 원심분리(13100×g, 4℃, 5분)하고, 위의 맑은 액 2μL를 LC－MS/MS에 주입하였다.
HPLC 분석 조건은 이하와 같이 하였다：
칼럼 Inertsil ODS－4 HP(GL Science사)
이동상 A 20mM 폼산암모늄
이동상 B 아세토니트릴
그레이디언트(gradient) 시간(min) 이동상 A(%) 이동상 B(%)
0.00 60 40
3.00 20 80
4.50 20 80
4.51 60 40
6.00 60 40
유속 0.2mL/min
칼럼 온도 40℃
오토샘플러 온도 4℃
주입량 2μL
분석 시간 6분간
MS/MS 분석 조건은 이하와 같이 하였다：
Ion Source： Electrospray ionization (ESI)
Scan Type： Multiple reaction monitoring (MRM)
Polarity： Positive
Source Temperature： 500℃
모니터 이온： 화합물 Q1(m/z) Q3(m/z)
클래리트로마이신 749.00 158.00
결과를 도 1~3에 나타낸다. 나노화 클래리트로마이신은 원분말과 비교하여 안방수 및 결막에의 이행성이 높고, 혈액에의 이행성은 거의 동등하다는 것이 밝혀졌다.
(실시예 18) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 약효 시험 1
토끼를 이용하여, 각막 궤양 모델을 제작하고, 황색 포도상 구균 감염에 의해 결막염을 발증시켜, 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(점안액)의 약효 평가를 하기와 같이 행하였다.
각막 궤양 모델의 제작은 다음의 방법으로 행하였다. 일본 백색종 토끼(계통 Slc： JW/CSK, 수컷)을 펜토바비탈나트륨 마취(귓바퀴 정맥 내 투여) 하에서 외안부를 생리 식염액으로 세정하고, 0.4% 염산옥시부프로카인으로 각막에 국소마취를 하였다. 토끼의 안구를 약숟가락으로 압박 탈구시키고, 6mm 직경의 트레판(trepan)(카스트로비호씨 각막 이식용 트레판)으로 각막 중앙에 원형의 얕은 상처를 내고, 원형 상처의 내측에 26G×1/2 SB 침으로 종횡 2줄의“＃”자형의 각막실질에 이르는 상처를 냈다.
균액 접종은 이하의 방법으로 행하였다. 마이크로피펫(micropipette)과 팁(tip)을 이용하여, 1×109cfu/mL 농도의 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus； St. aureus ATCC25923주)액을 50μL/eye의 비율로 각막에 1회 적하하고, 눈깜빡이게 하고, 안검 상에서 가볍게 2~3회 마사지하였다. 또 1회 적하하고, 눈깜빡이게 하고, 안검 상에서 가볍게 2~3회 마사지하였다(1안당 0.1mL를 각막 상에 적하 투여하였다).
피험물질로서는 AzaSite(1% azithromycin ophthalmic solution), 실시예 15에서 제작한 0.3% 나노화 클래리트 제제, 실시예 16에서 제작한 1.0% 나노화 클래리트 제제, 1.0% 클래리트로마이신 원분말 현탁액 및 Vehicle(상기 0.3% 나노화 클래리트 제제로부터 클래리트로마이신을 제외한 조성의 것)을 시험에 제공하였다.
피험물질의 투여는 다음의 방법으로 행하였다. 마이크로피펫과 팁을 이용하여 하안검을 느슨하게 당기고, 결막낭 내에 피험물질을 50μL/eye 적하하였다. 투여 기간은 4일간으로 하고, 균액 접종일(초일)은 2회 투여(균액 접종 후 4시간과 8시간)로 하고, 2~4일은 1일 3회(4시간 간격) 투여하였다.
Figure 112021052442891-pat00006
관찰 및 약효 평가·판정은 다음과 같이 행하였다. 각막 감염 부위, 각막, 홍채 및 결막의 임상 관찰은 세극등 현미경에 의해 균액 접종 후 1일째로부터 균액 접종 후 7일째까지 7일간, 1일 1회 실시하였다. 약효 평가·판정은 이하에 나타내는 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준(표 7)에 따른 각막 소견의 평가 및 Draize J. H. et. al.의 평가 기준(표 8)에 따른 각막·홍채·결막 소견의 평가를 채용하였다. 또한, Draize J. H. et. al.의 평가 기준을 이용한 평가는 이하와 같이 행하였다：
각막=A×B×5 (최대 80점)
홍채=×5 (최대 10점)
결막=(A＋B＋C)×2 (최대 20점)
총 점수=각막＋홍채＋결막 (최대 110점)
Figure 112021052442891-pat00007
Figure 112021052442891-pat00008
표 9에 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준에 의한 각막 감염 부위의 점수 결과를 정리하였다. 또, 도 4에는 각 피험물질에 있어서의 점수의 경시 변화(약효 평가)를 나타냈다.
Figure 112021052442891-pat00009
표 10에 Draize 등의 평가 기준에 의한 각막·홍채·결막 감염 부위의 점수 결과를 정리하였다. 도 5에는 각 피험물질에 있어서의 점수의 경시 변화(약효 평가)를 나타냈다.
Figure 112021052442891-pat00010
도 4 및 도 5로부터, 나노화 클래리트로마이신 현탁액(점안제)의 항염증 효과는 양성 대조인 AzaSite와 비교하여 동등 이상이었다. 또 1.0% 클래리트로마이신 원분말 제제는 6일째 이후, 항염증 효과의 감약(減弱)이 인지되었지만, 나노화 클래리트로마이신 현탁액(점안제)은 7일간에 걸쳐 항염증 효과를 나타냈다. 따라서, 나노화함으로써, 원분말과 비교하여 약효의 장기 지속을 기대할 수 있다는 것을 알 수 있었다.
(실시예 19) 나노화 클래리트로마이신 현탁액제의 약효 시험 2
토끼를 이용하여, 각막 궤양 모델을 제작하고, 황색 포도상 구균 감염에 의해 결막염을 발증시켜, 나노화 클래리트로마이신 현탁액제(점안액)의 약효 평가를 행하였다. 실시예 18과 비교하여, 본 실시예에서는 점안제의 투여 개시 시간의 지연에 의한 치료 효과를 검토하였다.
각막 궤양 모델의 제작 방법, 균액 접종 방법 및 약효 평가·판정은 실시예 18과 마찬가지로 행하였다. 피험물질은 실시예 15에서 제작한 0.3% 나노화 클래리트 제제 및 Vehicle(상기 0.3% 나노화 클래리트 제제로부터 클래리트로마이신을 제외한 조성의 것)을 사용하였다. 투여 횟수 등을 하기 표에 정리하였다.
Figure 112021052442891-pat00011
표 12 및 표 13에 하타노 등·나카무라 등의 평가 기준에 의한 각막 감염 부위의 점수 결과를 정리하였다. 도 6에는 각 피험물질에 있어서의 점수의 경시 변화(약효 평가)를 나타냈다.
Figure 112021052442891-pat00012
Figure 112021052442891-pat00013
표 14 및 표 15에 Draize 등의 평가 기준에 의한 각막·홍채·결막 감염 부위의 점수 결과를 정리하였다. 도 7에는 각 피험물질에 있어서의 점수의 경시 변화(약효 평가)를 나타냈다.
Figure 112021052442891-pat00014
Figure 112021052442891-pat00015
도 6 및 도 7로부터, 점안제의 투여 개시 시간을 지연시켜도 동등의 항염증 효과가 얻어지는 것을 알 수 있었다(도 7의 3군과 4군의 비교). 또 점안제의 투여 횟수를 증가시킴으로써, 보다 높은 항염증 효과가 얻어지는 것을 알 수 있었다(도 7의 4군과 5군의 비교).

Claims (11)

  1. 매크롤라이드계 항균제로 이루어지는 나노미립자와, 계면활성제와, 응집 방지제와, 점도 조제제를 함유하는 수성 현탁액제로서,
    상기 나노미립자는 상기 매크롤라이드계 항균제와, 생리적으로 허용되는 당과, 글리세린을 혼합하여 분쇄함으로써 제조되고,
    상기 나노미립자의 평균 입자경이 500nm 이하이며 D90 입자경이 1500nm 이하이고,
    상기 매크롤라이드계 항균제가 에리트로마이신, 클래리트로마이신, 록시트로마이신, 또는 아지트로마이신이며,
    상기 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60이고,
    상기 응집 방지제가 레시틴이며,
    상기 점도 조제제가 메틸셀룰로스 및 히드록시프로필메틸셀룰로스 중 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제.
  2. 제1항에 있어서,
    자극성이 낮은 것을 특징으로 하는 수성 현탁액제.
  3. 제1항 또는 제2항에 기재된 수성 현탁액제를 함유하고, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료약 또는 예방약인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    비경구 투여용인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    주사제 또는 국소 적용 제제인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    눈용 국소 적용 제제, 귀용 국소 적용 제제, 코용 국소 적용 제제, 또는 폐용 국소 적용 제제인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    점안제, 점이제, 점비제, 또는 흡입제인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  8. 삭제
  9. 제3항에 있어서,
    염증성 질환 또는 감염성 질환이 전신성의 염증성 질환 또는 감염성 질환인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  10. 제3항에 있어서,
    눈, 귀, 코(상기도), 또는 폐(하기도)의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 치료약 또는 예방약인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
  11. 매크롤라이드계 항균제의 나노미립자를 함유하는 것을 특징으로 하는, 제3항의 의약 조성물을 조제하기 위한 키트.
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