BR112017024000B1 - Suspensão aquosa contendo nano partículas de glucocorticosteroide - Google Patents

Abstract

SUSPENSÃO AQUOSA CONTENDO NANO PARTÍCULAS DE GLUCOCORTICOSTEROIDE. [Problema a ser Solucionado] Um objetivo é proporcionar uma suspensão aquosa contendo como um componente ativo um composto de glucocorticosteroide. O objetivo especificamente é proporcionar uma composição farmacêutica praticamente utilizável contendo como o componente ativo um composto de glucocorticosteroide. [Solução] A presente invenção é para proporcionar uma suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide e um estabilizador de dispersão, a suspensão aquosa contendo as nano partículas tendo um diâmetro de partícula médio de 300 nm ou menos, e um diâmetro de partícula D90 de 450 nm ou menos, composição farmacêuticas para administrações parenterais, injeções, colírios ou gotas auriculares contendo a suspensão aquosa, mais especificamente um colírio para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias do olho, ou uma gota auricular para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias do ouvido.

Description

[Referência Cruzada]

[0001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido de Patente Japonês No. 2015-095610, depositado em 08 de maio de 2015, e todas as revelações do qual são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. Todos os conteúdos revelados nas patentes citadas, pedidos de patente, e literaturas, são aqui incorporados por referência em suas totalidades.

[Campo Técnico]

[0002] A presente invenção se relaciona a uma suspensão aquosa contendo nano partículas de glucocorticosteroide, e ao uso da mesma.

[Técnica Antecedente]

[0003] Os glucocorticosteroides são hidrofóbicos, e têm sido proporcionados na forma de suspensões aquosas. Contudo, a suspensão aquosa de um composto de glucocorticosteroide tem um problema que as partículas de esteroide contidas precipitam à medida que o tempo avança, e, desse modo, um paciente necessita agitar um recipiente antes de uso para dispersar um componente ativo homogeneamente na fase líquida. Mesmo no caso que um paciente agita um recipiente antes do uso sem falha, as partículas na suspensão facilmente se aglomeram para formar aglomerado; desse modo, o diâmetro de partícula do fár- maco aumenta, e a uniformidade é perdida. Tal dispersão não uniforme causa uma perda em uma dose de administração que é pré-determinada, e consequente supressão insuficiente de inflamação e dores.

[0004] De modo a solucionar um problema causado pelo esteroide, preparações de emulsão foram propostas (Literatura de Patente 1, Lite- raturas de Não-Patente 1, 2) como um dos métodos. Por exemplo, preparação de emulsão de Difluprednato O/W (Durezol (Marca Registrada): uma preparação de difluprednato 0,05%) foi confirmada ser estavel- mente aplicada à área afetada com um fármaco uniforme, indiferente das condições de armazenagem, ou agitação antes do uso.

[0005] Contudo, a preparação de emulsão O/W requer usar um solvente de óleo, que causa um problema de efeitos de irritação, tais como sensações desconfortáveis ou congestão. Desse modo, tem sido requerido preparar preparações aquosas de glucocorticosteroide sem usar solvente de óleo que pode manter a uniformidade.

[0006] A modificação de estrutura que dá hidrofilicidade ao composto, tal como fosfato de sódio de Dexametasona, tem sido tentada para dissolver o composto em água. Contudo, as preparações dissolvidas em água podem conter concentração limitada de um componente ativo devido à pobre solubilidade.

[0007] Como solução aquosa alternativa contendo um fármaco dificilmente solúvel, as nanosuspensões que contêm partículas nano-di- mensionadas de um componente ativo em uma suspensão aquosa têm sido propostas. Tem sido conhecido que o diâmetro de partícula de apenas alguns nanômetros substancialmente prolonga a área superficial específica nas nanosuspensões, e isto capacita maximização mais rápida do nível de soro do componente devido à sua solubilidade aumentada, variedade de formas de administração, e quantidade mais alta de um componente ativo a estar contido. Como a nanosuspensão de um composto de glucocorticosteroide, foi revelado que a suspensão aquosa contendo fluticasona (D90 0,4 μm) e budesonida (D90 0,4 μm) produzida por um moinho molhado usando contas de vidro mantém a uniformidade, estrutura de cristal, e diâmetro de partícula após cinco semanas de preservação a 4°C (Literatura de Não-Patente 3). Outra abordagem para formação de nano partículas como abordagem ascendente tem sido reportada, que precipita hidrocortisona, um composto de glucocor- ticosteroide, de modo a gerar nano partículas tendo um diâmetro médio de cerca de 300 nm, que é preparado como uma suspensão aquosa (Literatura de Não-Patente 4). Contudo, elas também reportam que a abordagem descendente (moagem) é mais vantajosa em ambas elevação da pressão intraocular e estabilidade. Outra nanosuspensão contendo um corticosteroide (especificamente, fluorato de mometasona) principalmente usada para administração transnasal foi revelada, que contém corticosteroide tendo um D50 de 50 a 500 nm, um polímero hi- drofílico, um agente de molhamento, e um agente de complexação (Literatura de Patente 2). Adicionalmente, uma suspensão aquosa esterilizada em autoclave de um composto de glucocorticosteroide, foi reportada (Literatura de Patente 3).

[Lista de Citação] [Literatura de Patente]

[0008] [Literatura de Patente 1] Publicação Internacional No. WO 97/05882

[0009] [Literatura de Patente 2] Publicação de Pedido de Patente Não-Examinado dos Estados Unidos No. 2011/0008453

[0010] [Literatura de Patente 3] Publicação Internacional No. WO 2007/089490

[0011] [Literatura de Não-Patente]

[0012] [Literatura de Não-Patente 1] Eric D Donnenfeld, Clinical Op- thalmology (2011) 5:811-816

[0013] [Literatura de Não-Patente 2] Hetal K. Patel et al., Colloids and Surfaces: Biointerfaces (2013) 102:86-94

[0014] [Literatura de Não-Patente 3] Jerry Z. Yang et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (2008) 97 (11):4869-4878

[0015] [Literatura de Não-Patente 4] Hany S. M. Ali et al., Journal of Controlled Release (2011) 149:175-181

[Resumo da Invenção]

[0016] [Problema Técnico]

[0017] Apesar de estudos custosos em soluções aquosas contendo tais agentes dificilmente solúveis, é ainda difícil usar praticamente suspensões aquosas, tais como injeções, colírios, e gotas auriculares contendo um composto de glucocorticosteroide, tal como propionato de clo- betasol. Foi, desse modo, esperado desenvolver suspensões aquosas para injeções e para administrações tópicas, especificamente colírios e gotas auriculares, contendo um composto de glucocorticosteroide como o componente ativo com bia estabilidade temporal e estabilidade de dispersão.

[0018] Consequentemente, em uma concretização, a presente invenção é objetivada para proporcionar uma suspensão aquosa contendo como um componente ativo um composto de glucocorticoste- roide, que tem boa estabilidade temporal e estabilidade de dispersão. Mais especificamente, a presente invenção é objetivada para proporcionar composições farmacêuticas aquosas, tais como injeções, colírios, gotas auriculares, gotas nasais, e/ou inaladores, contendo um composto de glucocorticosteroide como o componente ativo, que tem boa transparência, dispersibilidade, e estabilidade de armazenagem. O objetivo adicional da invenção é proporcionar um colírio contendo um composto de glucocorticosteroide como um componente ativo, que seja de alta retenção na córnea e boa transferibilidade no humor aquoso. A presente invenção é também objetivada para proporcionar uma suspensão aquosa, ou uma composição farmacêutica aquosa contendo propionato de clobetasol, um composto de glucocorticosteroide, como o componente ativo.

[0019] [Solução para os Problemas]

[0020] Os inventores conduziram estudos extensivos e verificaram que a suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide e, se necessário, um estabilizador de dispersão, um surfactante, um inibidor de aglomeração e/ou a modificador de viscosidade, é excelente em transparência, (longo prazo) dispersibilidade, estabilidade de armazenagem, retenção na córnea, e transferibilidade no humor aquoso, e, desse modo, é útil para composição farmacêutica aquosa. Os inventores verificaram que a suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide e, se necessário, um estabilizador de dispersão, um surfactante, um inibidor de aglomeração, e/ou um modificador de viscosidade, alcança excepcionalmente boa transparência, (longo prazo), dispersibilidade e estabilidade de armazenagem sem conter um composto orgânico que cause efeitos de irritação, tais como sensações desconfortáveis ou congestão. Com estas descobertas, os inventores alcançaram a preparação aquosa anti- inflamatória altamente efetiva contendo um composto de glucocorticos- teroide que pode proporcionar estavelmente um fármaco uniforme à um local afetado com menos irritação.

[0021] A presente invenção, mais especificamente, se relaciona aos seguintes:

[0022] (1) Uma suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide.

[0023] (2) A suspensão aquosa de (1), no qual um diâmetro de partícula médio das nano partículas é 300 nm ou menos, e um diâmetro de partícula D90 das nano partículas é 450 nm ou menos.

[0024] (3) A suspensão aquosa de (1) ou (2), no qual as nano partículas são produzidas por mistura de um composto de glucocorticoste- roide, um sal fisiologicamente aceitável, um poliol fisiologicamente aceitável, e um modificador de superfície.

[0025] (4) A suspensão aquosa de qualquer um de (1) a (3), no qual o composto de glucocorticosteroide é uma ou mais substâncias selecionadas de propionato de clobetasol, diacetato de diflorasona, propionato de dexametasona, difluprednato, fluorato de mometasona, valerato de diflucortolona, butirato propionato de betametasona, fluocinonida, butirato propionato de hidrocortisona, dipropionato de beclometasona, propionato de deprodona, valerato de betametasona, valerato de dexa- metasona, valerato acetato de prednisolona, fluocinolona acetonida, bu- tirato de hidrocortisona, butirato de clobetasona, dipropionato de alclo- metasona, triamcinolone acetonida, pivalato de flumetasona, predniso- lona, e hidrocortisona.

[0026] (5) A suspensão aquosa de qualquer um de (1) a (4), contendo adicionalmente um estabilizador de dispersão.

[0027] (6) A suspensão aquosa de (5), no qual o estabilizador de dispersão é polioxietileno polioxipropileno glicol e/ou polivinil álcool.

[0028] (7) A suspensão aquosa, de qualquer um de (1) a (6), con tendo adicionalmente um modificador de viscosidade.

[0029] (8) A suspensão aquosa de (7), no qual o modificador de viscosidade é uma ou mais substâncias selecionadas de metilcelulose, hi- droxipropilmetilcelulose, e polivinil álcool.

[0030] (9) A suspensão aquosa de (7) ou (8), contendo 1 a 10 mg/mL do modificador de viscosidade.

[0031] (10) Uma composição farmacêutica contendo a suspensão aquosa de qualquer um de (1) a (9).

[0032] (11) A composição farmacêutica de (10), que é para adminis tração parenteral.

[0033] (12) A composição farmacêutica de (11), que é para uma in jeção ou para uma preparação tópica.

[0034] (13) A composição farmacêutica de (12), que é para uma pre paração tópica para um olho, um ouvido, um nariz, ou um pulmão.

[0035] (14) A composição farmacêutica de (13), que é um colírio, uma gota auricular, uma gota nasal, ou um inalador.

[0036] (15) A composição farmacêutica de qualquer um de (10) a (14), que é um agente terapêutico, ou um agente preventivo, para uma doença inflamatória ou infecciosa.

[0037] (16) A composição farmacêutica de (15), no qual a doença inflamatória ou infecciosa é uma doença inflamatória ou infecciosa sistêmica.

[0038] (17) A composição farmacêutica de (15), no qual a doença inflamatória ou infecciosa é uma doença inflamatória ou infecciosa tópica.

[0039] (18) A composição farmacêutica de (17), no qual a área tó pica é um ou mais tecidos ou órgãos selecionados de olhos, ouvidos, nariz (trato respiratório superior), e pulmões (trato respiratório inferior).

[0040] (19) Um kit para a preparação da composição farmacêutica de qualquer um de (10) a (18), compreendendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide.

[0041] (20) Um método para produção da composição farmacêutica de qualquer um de (10) a (18), compreendendo misturar um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, um poliol fisi- ologicamente aceitável, e/ou água, e um estabilizador de dispersão.

[0042] (21) O método para a produção de (20), compreendendo mis turar um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, glicerina, ácido cítrico anidro, e lecitina de soja hidrogenada.

[0043] Particularmente, os inventores verificaram que as nano partículas de um composto de glucocorticosteroide têm excelente transferibilidade no humor aquoso, e um boa ação anti-inflamatória, quando as nano partículas têm um diâmetro de partícula médio (daqui por diante referido como "Dv") de 300 nm ou menos, e um diâmetro 90% (daqui por diante referido como "D90") de 450 nm ou menos (de preferência, um Dv de 250 nm ou menos, e um D90 de 300 nm ou menos, ou um Dv de 200 nm ou menos, e um D90 de 250 nm ou menos). Empregando tais nano partículas, a solubilidade do composto de glucocorticosteroide é esperada tornar-se mais alta, que aumenta a biodisponibilidade e reduz a dose de administração. O diâmetro de partícula médio pode ser medido como diâmetro de partícula médio de distribuição de intensidade, diâmetro de partícula médio de distribuição de volume, e diâmetro de partícula médio de distribuição de número. O Dv aqui, de preferência, representa o diâmetro de partícula médio de distribuição de intensidade.

[0044] A presente invenção, desse modo, se relaciona a, em uma concretização, a suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide, e, de preferência, à suspensão aquosa no qual as nano partículas têm um Dv de 300 nm ou menos, e um D90 de 450 nm ou menos. A suspensão aquosa contém, por exemplo, nano partículas de um composto de glucocorticosteroide produzida por mistura de um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologica- mente aceitável, um poliol fisiologicamente aceitável e/ou água, e um estabilizador de dispersão. A suspensão aquosa, mais de preferência, contém nano partículas de um composto de glucocorticosteroide produzida por mistura de um composto de glucocorticosteroide, um sal fisio- logicamente aceitável, glicerina, ácido cítrico anidro, e lecitina de soja hidrogenada.

[0045] Os inventores verificaram adicionalmente que a suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticoste- roide exibe boa transparência de longo prazo, dispersibilidade, e estabilidade de armazenagem, contendo polioxietilenos polioxipropilenos glicóis (daqui por diante referido como "POE-POP glicol"), e/ou polivinil álcoois (daqui por diante referido como como "PVA") um estabilizador de dispersão, e/ou contendo com hidroxipropil metilcelulose e/ou metil celulose como um espessador.

[0046] A presente invenção, desse modo, se relaciona a, em uma concretização, a suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide tendo um Dv de 300 nm ou menos, e um D90 de 450 nm ou menos (de preferência, um Dv é 250 nm ou menos, e um D90 é 300 nm ou menos, ou um Dv é 200 nm ou menos, e um D90 é 250 nm ou menos). A presente invenção se relaciona a, em outra concretização, a composição farmacêutica aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide como um agente efetivo, e um estabilizador de dispersão, e/ou um modificador de viscosidade como um aditivo.

[0047] A "composição farmacêutica aquosa" aqui significa um líquido aquoso ou uma composição farmacêutica de gel, especificamente uma composição farmacêutica contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide suspenso no líquido aquoso ou gel. A composição farmacêutica aqui, consequentemente, significa uma composição farmacêutica aquosa, a menos que de outro modo citado. A composição farmacêutica aquosa inclui injeções e preparações tópicas. As preparações tópicas aqui, consequentemente, significam preparações aquosas para administrações tópicas. A composição farmacêutica aquosa pode ser viscosa, considerando-se que não impede a composição de usar como uma droga farmacêutica, e inclui preparações de gel, bem como preparações aquosas.

[0048] A "área tópica" aqui significa uma parte do corpo, incluindo um local afetado, uma área ao redor do local afetado, ou um órgão incluindo o local afetado, e, de preferência, é o olho, ouvido, nariz (trato respiratório superior), ou pulmão (trato respiratório inferior).

[0049] A injeção pode ser para tratamento ou prevenção de uma doença inflamatória sistêmica, ou doença inflamatória ou infecciosa tópica, e inclui injeções, tais como injeções intravenosas, injeções subcutâneas, injeções intramusculares, e gotejamentos intravenosos.

[0050] A "preparação tópica" aqui significa uma composição farmacêutica objetivada para ser administrada localmente. A preparação tópica, de preferência, inclui preparações tópicas para os olhos (por exemplo, colírios), preparações tópicas para os ouvidos (por exemplo, gotas auriculares), preparações tópicas para o nariz (por exemplo, gotas nasais), e preparações tópicas para os pulmão (por exemplo, inaladores). Estas preparações tópicas podem ser usadas para tratar ou prevenir doenças inflamatória ou infecciosa do olho, ouvido, nariz, ou pulmão. A forma de preparação também inclui colírios, gotas auriculares, gotas nasais, e inaladores. As preparações tópicas podem, de preferência, serem preparações tópicas para os ouvidos (incluindo colírios) para tratamento ou prevenção de doenças inflamatória ou infecciosa oculares, preparações tópicas para os ouvidos (incluindo gotas auriculares) para o tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas oto- gênicas, preparações tópicas para o nariz (incluindo gotas nasais) para o tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas nasais, ou preparações tópicas para o pulmão (incluindo inaladores) para o tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas pulmonares.

[0051] A composição farmacêutica aquosa pode ser usada para tratar ou prevenir doenças inflamatórias ou infecciosas por administração topicamente de uma quantidade efetiva desta à um paciente em necessidade desta. Em outras palavras, a presente invenção se relaciona a, em uma concretização, um método para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas compreendendo administrar uma quantidade efetiva da suspensão aquosa, ou da composição farmacêutica contendo a suspensão aquosa, no qual a suspensão aquosa ou composição farmacêutica contém nano partículas de um composto de glucocorticosteroide e, opcionalmente, um estabilizador de dispersão, e/ou um modificador de viscosidade, à um paciente em necessidade desta. A presente invenção, por exemplo, envolve um método para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas compreendendo administrar topicamente uma quantidade efetiva da preparação tópica contendo nano partículas de um composto de glucocorticos- teroide e, opcionalmente, um estabilizador de dispersão à um paciente em necessidade desta.

[0052] Alternativamente, a presente invenção se relaciona a um uso de nano partículas de um composto de glucocorticosteroide (opcionalmente com um estabilizador de dispersão, e/ou um modificador de viscosidade), ou um uso de uma suspensão aquosa contendo referidas nano partículas, para produção de uma composição farmacêutica aquosa (por exemplo, injeções e preparações tópicas).

[0053] O "composto de glucocorticosteroide" aqui não é limitado considerando-se que ele é glucocorticosteroide e derivados deste. Exemplos do composto de glucocorticosteroide incluem propionato de clobetasol, diacetato de diflorasona, propionato de dexametasona, di- fluprednato, fluorato de mometasona, valerato de diflucortolona, butirato propionato de betametasona, fluocinonida, butirato propionato de hidro- cortisona, dipropionato de beclometasona, propionato de deprodona, valerato de betametasona, valerato de dexametasona, valerato acetato de prednisolona, fluocinolona acetonida, butirato de hidrocortisona, bu- tirato de clobetasona, dipropionato de alclometasona, triamcinolona acetonida, pivalato de flumetasona, prednisolona e hidrocortisona, e propionato de clobetasol, é preferível.

[0054] A "suspensão aquosa" aqui significa um líquido aquoso em que nano partículas de um composto de glucocorticosteroide são suspensas. A suspensão aquosa aqui pode constituir uma composição farmacêutica que pode ser administrada como uma droga farmacêutica por si, ou pode constituir uma composição farmacêutica por adição de outros componentes e um diluente (por exemplo, matérias primas para composição farmacêutica), ou pode não ser usada para uma droga farmacêutica.

[0055] A suspensão aquosa aqui inclui suspensões aquosas estabilizadas por dispersão. O estabilizada por dispersão significa que a suspensão aquosa tem qualquer uma de, ou duas ou mais de, as propriedades de (1) sem precipitação confirmada sob inspeção visual, (2) alta transparência, (3) nenhum aglomerado ou cristais observados sob observação microscópica, e (4) nenhuma mudança substancial no valor de Dv (nem 50% ou mais aumento) após dispersão por agitação, seguido por assentamento por 24 horas (de preferência, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 1 ano, ou 2 anos) à temperatura ambiente (25°C). A suspen-são aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorti- costeroide aqui é, de preferência, uma suspensão aquosa com nenhuma precipitação confirmada sob inspeção visual, alta transparência, e nenhum aglomerado ou cristal observados sob observação microscópica após 7 dias de vedado em um tubo de teste.

[0056] A transparência pode ser determinada em conformidade com o teste de transparência descrito na Farmacopeia Japonesa. Especificamente, a transparência pode ser determinada pelos seguintes procedimentos. Água é adicionada à 5 mL de um padrão de formazina até 100 mL, que é usado como um padrão de turbidez. Cada de uma suspensão aquosa testada e um padrão de turbidez recentemente preparado são tomados de um tubo de teste de fundo plano de vidro claro incolor tendo um diâmetro interno de 15 mm, tal que a camada líquida tem uma profundidade de 30 mm ou 40 mm, que é então comparada entre si por observação de cima em um pano de fundo negro na luz de difusão. Quando a transparência da suspensão aquosa testada é a mesma como a água ou o solvente usado, ou quando a turbidez da suspensão aquosa testada é mais baixa do que o padrão de turbidez, a transparência é determinada para ser alta. Alternativamente, as trans- mitâncias a 660 nm de uma suspensão aquosa testada e de um padrão de turbidez recentemente preparado são medidas pelo método de es- pectrofotometria visível de ultravioleta usando uma célula de camada de 50 mm, com uso de água ou o solvente como o controle. Quando a transmitância da suspensão aquosa testada é mais alta do que o padrão de turbidez, a transparência da suspensão aquosa testada é determinada para ser alta.

[0057] Em outra concretização, a preparação tópica é uma preparação tópica para o olho tendo transferibilidade no humor aquoso. A "transferibilidade no humor aquoso" aqui significa que uma concentração de um composto de glucocorticosteroide (valor médio) no humor aquoso é 45 ng/mL ou mais (de preferência, 50 ng/mL ou mais, 55 ng/mL ou mais, 60 ng/mL ou mais, 65 ng/mL ou mais, 70 ng/mL ou mais, 75 ng/mL ou mais), após 60 minutos de uma administração única de colírio da preparação tópica aquosa contendo um composto de glucocorticosteroide ajustado para ser 0,05% (p/v). A "transferibilidade no humor aquoso" al-ternativamente pode significar que uma concentração de composto de glucocorticosteroide (valor médio) no humor aquoso é 40 ng/mL ou mais (de preferência, 50 ng/mL ou mais, 55 ng/mL ou mais, 60 ng/mL ou mais, 63 ng/mL ou mais, 64 ng/mL ou mais, 65 ng/mL ou mais, 70 ng/mL ou mais, 75 ng/mL ou mais), após 30 minutos de uma administração única de colírio da preparação tópica aquosa contendo um composto de glu- cocorticosteroide ajustado para ser 0,05% (p/v).

[0058] Em outra concretização, a preparação tópica é uma preparação tópica para o olho tendo transferibilidade na conjuntiva. A "transferibilidade na conjuntiva" aqui significa que uma concentração de um composto de glucocorticosteroide (valor médio) na conjuntiva é 500 ng/mL ou mais (de preferência, 659 ng/mL ou mais, 900 ng/mL ou mais, 972 ng/mL ou mais, 1000 ng/mL ou mais, 1200 ng/mL ou mais, 1210 ng/mL ou mais, 1400 ng/mL ou mais, 1455 ng/mL ou mais, 1500 ng/mL ou mais, ou 2000 ng/mL ou mais, 2141 ng/mL ou mais), após 15 minutos de uma administração única de colírio da preparação tópica aquosa contendo um composto de glucocorticosteroide ajustado para ser 0,05% (p/v).

[0059] A transferibilidade no humor aquoso e a conjuntiva pode ser determinada de acordo com o método descrito nos Exemplos deste pedido pelo uso de animais apropriados, e, por exemplo, pelos seguintes procedimentos. A pálpebra inferior de um coelho é suavemente levantada, um colírio da substância de teste é administrado (uma administração única do colírio) no saco conjuntival do olho esquerdo usando uma pipeta, e após administração, as pálpebras superior e inferior são suavemente fechadas e mantidas por cerca de 2 segundos. Após 15 minutos, 30 minutos, 60 minutos e 90 minutos, a partir da administração, os coelhos são anestesiados e eutanizados por sangramento, seguido por lavagem completa do olho com água para injeção, e o humor aquoso e conjuntiva são coletados. Uma concentração de composto de glucocor- ticosteroide no humor aquoso coletado pode ser determinada por adição de metanol e solução de padrão interno (prednisolona) ao humor aquoso coletado, agitação da mistura, subsequentemente adicionando acetonitrila, agitação da mistura, e centrifugação (13,100 x g, 4°C, 5 minutos) da mistura, seguido por medição do sobrenadante obtido por centrífuga pelo método de LC-MS/MS. Uma concentração do composto de glucocorticosteroide na conjuntiva coletada pode ser determinada por adição de água ultrapura no volume nove vezes do peso úmido da conjuntiva obtida, homogeneização, adição adicional de metanol, e uma solução de padrão interno (prednisolona) a esta, agitação da mistura, subsequentemente adicionando acetonitrila, agitação da mistura, e centrifugação da mistura (13100 x g, 4°C, 5 minutos), seguido por medição do sobrenadante obtido por centrífuga pelo método de LC-MS/MS.

[0060] Em outra concretização, a preparação tópica é uma preparação tópica para o olho capaz de reduzir uma taxa de aumento de concentração de proteína no humor aquoso. Ser "capaz de reduzir uma taxa de aumento de concentração de proteína no humor aquoso" significa que uma concentração de proteína no humor aquoso que é obtida por administração de 40 μL da preparação tópica aquosa contendo 0,05% (p/v) ou 0,1% (p/v) de composto de glucocorticosteroide sete vezes a intervalos de 30-60 minutos antes e após queratocentese (de preferência, ajustando o tempo de queratocentese como 0 minutos, sete administrações a 180 minutos, 120 minutos, 60 minutos e 30 minutos, antes da queratocentese, e 30 minutos, 60 minutos e 90 minutos, após a queratocentese) a um animal experimental (por exemplo, coelho), e coletando o humor aquoso após 30 minutos a partir da administração final, é menos do que três vezes (de preferência, menos do que 2,5 vezes, ou menos do que duas vezes) da concentração de proteína no humor aquoso do olho ao qual queratocentese não é efetuada.

[0061] Em outra concretização, a preparação tópica é uma preparação tópica para o ilho capaz de inibir uma inflamação do olho. Especificamente, a preparação tópica é uma preparação tópica para o olho capaz de suprimir uma produção de prostaglandina E2 (PGE2) que é um mediador de inflamação. Sendo "capaz de suprimir uma produção de PGE2" significa que uma concentração de PGE2 no humor aquoso que é obtida pela administração de 40 μL da preparação tópica aquosa contendo 0,05% (p/v) ou 0,1% (p/v) de composto de glucocorticosteroide sete vezes a intervalos de 30-60 minute antes e após queratocentese (de preferência, ajustando o tempo de queratocentese como 0 minutos, sete administrações a 180 minutos, 120 minutos, 60 minutos e 30 minutos antes da queratocentese, e 30 minutos, 60 minutos e 90 minutos após a queratocentese) a um animal experimental (por exemplo, coelho), e coletando o humor aquoso após 30 minutos a partir da administração final, é mais baixa do que a concentração de PGE2 no humor aquoso obtida pela mesma maneira com administração de Durezol (Marca registrada).

[0062] A preparação tópica para o olho pode ter duas ou mais (duas, três ou todas) propriedades selecionadas a partir da transferibilidade no humor aquoso, a transferibilidade na conjuntiva, a redução da taxa de aumento de uma concentração de proteína no humor aquoso, e a atividade inibitória de inflamação no olho.

[0063] Em uma concretização, a suspensão aquosa é uma suspensão aquosa com baixa irritabilidade. A baixa irritabilidade aqui significa que um grau de reações de irritação (reações de inflamação, tais como luz, intumescimento e/ou congestão) na administração da suspensão aquosa a um indivíduo, é mais baixo do que aquele na administração de preparações aquosas previamente usadas contendo o mesmo componente ativo. Se a irritabilidade de uma suspensão aquosa de teste é mais baixa ou não pode ser determinada, por exemplo, com referência ao método de Jonas, J. Kuehne et al., Am J Ophthalmol (2004) 138:547553, por administração da suspensão aquosa de teste ao olho de um coelho, medição do grau de inflamação do olho, e determinação que a irritabilidade é baixa, quando o grau de inflamação é mais baixo do que o agente líquido padrão (o mesmo conforme acima). Mais especificamente, no caso de um colírio, a irritabilidade é determinada por aplicação de uma preparação contendo 1,0% de composto de glucocorticos- teroide ao olho, uma vez que para 20 vezes ao dia em intervalos de 30 minutos à várias horas, observando a córnea, íris e conjuntiva antes da administração, e 1, 3, 5 e 24 horas após a administração final, e con-tando de acordo com os critérios de contagem de Draize (ver OECD GUIDELINES FOR TESTING OF CHEMICALS 405 (24 Feb. 1987) Acute Eye Irritation/Corrosion).

[0064] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter um ou dois ou mais sais fisiologicamente aceitáveis. Exemplos do "sal fisiologicamente aceitável" incluem cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de amônia, sulfato de sódio, sulfato de magnésio, sulfato de potássio, sulfato de cálcio, malato de sódio, citrato de sódio, citrato de disódio, citrato dihidrogênio de sódio, citrato dihidrogênio de potássio, fosfato dihidrogênio de sódio, fosfato dihidrogênio de potássio, fosfato de hidrogênio de disódio, e fosfato de hidrogênio de dipotássio, e cloreto de sódio, é preferível.

[0065] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter o sal fisiologicamente aceitável a uma concentração de 0,01 a 10%, de preferência, 0,1 a 5% ou, por exemplo, 0,5 a 3%, 0,8 a 2%. Alterna-tivamente, a suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter o sal fisiologicamente aceitável a uma concentração de 0,01 a 50 mg/mL, 0,1 a 20 mg/mL, ou 1 a 5 mg/mL.

[0066] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter um ou dois ou mais surfactantes, e/ou um ou dois ou mais inibidores de aglomeração.

[0067] O "surfactante" não é limitado considerando-se que ele pode ser administrado a um humano como um aditivo farmacêutico sem mostrar toxicidade, e sem impedir a atividade do composto de glucocorticos- teroide. O surfactante pode ser, por exemplo, surfactante não-iônico incluindo polioxietileno (daqui por diante referido como um "POE")-polioxi- propileno (daqui por diante referido como "POP") copolímeros de bloco tais como poloxamer 407, poloxamer 235 e poloxamer 188; adutos de etilenodiamina para copolímero de bloco de polioxietileno-polioxipropi- leno, tal como poloxamina; POE ésteres de ácido graxo de sorbitan tais como POE (20) sorbitan monolaurato (polissorbato 20), POE (20) sorbi- tan monooleato (polissorbato 80) e polissorbato 60; POE óleos de rícino hidrogenados tais como POE (60) óleo de rícino hidrogenado; POE al- quil éteres, tais como POE (9) lauril éter; POE-POP alquil éteres tais como POE (20) POP (4) cetil éter; POE alquilfenil éteres, tais como POE (10) nonil fenil éter; POE-POP glicóis, tais como POE (105) POP (5) glicol, POE (120) POP (40) glicol, POE (160) POP (30) glicol, POE (20) POP (20) glicol, POE (200) POP (70) glicol, POE (3) POP (17) glicol, POE (42) POP (67) glicol, POE (54) POP (39) glicol, e POE (196) POP (67) glicol; surfactantes anfotéricos incluindo surfactantes tipo glicina, tais como alquildiaminoetil glicina, surfactantes tipo acetato de betaína, tais como ácido lauril dimetilaminoacético, e surfactantes tipo imidazo- lina; surfactantes ani-nicos incluindo !"# al+uil $ter fosfatos e sais destes, tais como POE (10) sódio lauril éter fosfato, sais de ácido N-acila- mino, tais como sódio lauroil metil alanina, alquil éter carboxilatos, N- acil tauratos, tais como sódio cocoil N-metiltaurato, sulfonatos, tais como tetradecenosulfonato de sódio, alquil sulfatos, tais como sódio lauril sulfato, POE alquil éter sulfatos, tais como POE (3) sódio lauril éter sulfato, e α-olefina sulfonatos; e surfactantes cati-nicos incluindo sais de al+ui- lamina, sais de alquil amônia quaternária (cloreto de benzalcônio e cloreto de benzetônio), e sais de alquil piridinium (cloreto de cetilpiridinium e brometo de cetilpiridinium). A suspensão aquosa pode conter um ou dois ou mais surfactantes.

[0068] O "inibidor de aglomeração" aqui não é limitado considerando-se que ele inibe uma aglomeração do composto de glucocorticos- teroide, e ele pode ser administrado a um humano sem mostrar toxicidade, e sem impedir a atividade do composto de glucocorticosteroide. O inibidor de aglomeração pode ser fosfolipídeos, tais como alquil sulfato, N-alquiloil metil taurato, etanol, glicerol, propileno glicol, citrato de sódio, fosfolipídeos, incluindo glicerofosfolipídeo (lecitina (fosfatidilco- lina) (por exemplo, lecitina de soja refinada, lecitina de soja hidroge- nada), fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, ácido fos- fatídico, fosfatidilglicerol, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidilserina, lisofos- fatidiletanolamina, lisofosfatidilinositol, ácido lisofosfatídico, e lisofosfa- tidilglicerol) e esfingofosfolipídeos (esfingomielina, ceramida, glicosfin- golipídeo ou gangliosida), D-sorbitol, lactose, xilitol, goma arábica, sacarose éster de ácido graxo, polioxietileno óleo de rícino hidrogenado, polioxietileno ésteres de ácido graxo, polietilenoglicol (PEG), polioxieti- leno sorbitan éster de ácido graxo, alquil benzeno sulfonato, sulfosucci- nato, POE-POP glicol, polivinilpirrolidona, PVA, hidroxipropil celulose, metil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropil metilcelulose, carmelose sódio, polímeros de carboxivinil, N-acil-glutamato, copolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido metacrílico, caseína sódio, L-valina, L- leucina, L-isoleucina, cloreto de benzalcônio, e cloreto de benzetônio. A suspensão aquosa pode conter um inibidor de aglomeração, ou dois ou mais inibidores de aglomeração.

[0069] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter inibidor de aglomeração a uma concentração de 0,001 a 10%, ou 0,01 a 10%, de preferência, 0,02 a 5%, por exemplo, 0,03 a 1%, 0,04 a 0,5%, 0,05 a 0,2%. Alternativamente, a suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter o inibidor de aglomeração a uma concentração de 0,01 a 50 mg/mL, 0,1 a 20 mg/mL, ou 1 a 5 mg/mL.

[0070] O surfactante e/ou o inibidor de aglomeração são, de preferência, uma ou mais substâncias selecionadas de polioxietileno óleo de rícino hidrogenado 60 (por exemplo, HCO-60), polioxietileno óleo de rícino hidrogenado 40 (por exemplo, HCO-40), polissorbato 80 (por exemplo, Tween 80), polissorbato 20 (por exemplo, Tween 20), POE- POP glicol (por exemplo, PLONON 407P, Pluronic F68, UNILUB 70DP- 950B) e PVA (por exemplo, Kuraray POVAL 217C), e, mais de preferência, uma ou mais substâncias selecionadas de POE-POP glicol e PVA.

[0071] O "modificador de viscosidade" aqui não é limitado considerando-se ele é capaz de ajustar a viscosidade da suspensão aquosa, e ele pode ser administrado a um humano como um aditivo farmacêutico sem mostrar toxicidade, e sem impedir a atividade do composto de glu- cocorticosteroide. O modificador de viscosidade pode ser polissacarí- deos ou derivados destes (goma arábica, goma karaya, goma xantana, goma de alfarroba, goma guar, goma guaiac, semente de marmelo, goma darman, goma adragante, borracha de benzoína, farinha de sementes de alfarroba, caseína, agar, ácido algínico, dextrina, dextrano, carragenina, gelatina, colágeno, pectina, amido, ácido poligalacturônico, quitina, e derivados destes, quitosana, e derivados desta, elastina, he- parina, heparinoide, sulfato de heparina, sulfato de heparana, ácido hi- alurônico, e sulfato de condroitina), ceramida, derivados de celulose (metil celulose, etil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropil celulose, hidroxipropil metilcelulose, carboximetil celulose, carboxietil celulose, celulose e nitrocelulose), PVA (completamente ou parcialmente saponi- ficado), polivinilpirrolidona, Macrogol, polivinil metacrilato, ácido poliacrí- lico, polímero de carboxivinil, polietilenoimina, óxido de polietileno, poli- etileno glicol, ácido ribonucleico, ácido deoxiribonucleico, copolímeros de metil vinil éter-anidrido maleico, e sais farmacologicamente acetáveis destes (por exemplo, alginato de sódio). A suspensão aquosa pode conter um ou dois ou mais modificadores de viscosidade. O modificador de viscosidade é, de preferência, uma ou mais substâncias selecionadas de hidroxipropil metilcelulose (por exemplo, TC-5(R), Metlose 60SH-50), PVA (Kurary POVAL 217C) e metil celulose (por exemplo, Metlose SM- 100, Metlose SM-15), com uma ou mais substâncias selecionadas de hidroxipropil metilcelulose e metil celulose sendo mais preferível.

[0072] A suspensão aquosa pode conter 1 a 10 mg/mL, de preferência, 1 a 5 mg/mL, por exemplo, 1 a 4 mg/mL, 1 a 3 mg/mL, 1 a 2 mg/mL, do modificador de viscosidade.

[0073] O estabilizador de dispersão aqui utilizável é as substâncias listadas acima como os surfactantes, inibidores de aglomeração, e/ou modificadores de viscosidades, e é, de preferência, uma ou mais substâncias selecionadas de polioxietileno óleo de rícino hidrogenado 60, polioxietileno óleo de rícino hidrogenado 40, polissorbato 80, polissor- bato 20, POE-POP glicol, PVA, hidroxipropil metilcelulose e metil celulose, e, mais de preferência, uma ou mais substâncias selecionadas de POE-POP glicol, PVA, hidroxipropil metilcelulose, e metil celulose.

[0074] O surfactante, inibidor de aglomeração, e/ou modificador de viscosidade, que são também usados como o estabilizador de dispersão (daqui por diante referido como como "aditivos" neste parágrafo) podem aderirem a ou serem adsorvidos na superfície de nano partículas de um composto de glucocorticosteroide. Quando estes aditivos são adicionados antes da etapa de pulverização, estes aditivos aderem a ou são adsorvidos na superfície das nano partículas de um composto de gluco- corticosteroide, que resulta na inibição da aglomeração de nano partícula durante a etapa de pulverização. Pela aderência a ou por adsorção na superfície de nano partículas de um composto de glucocorticoste- roide, os aditivos inibem efetivamente a aglomeração na suspensão aquosa. Neste contexto, o surfactante, inibidor de aglomeração, e/ou modificador de viscosidade, que podem serem também usados como o estabilizador de dispersão, podem ser construídos para aderirem a, ou para serem adsorvidos na superfície de nano partículas de um composto de glucocorticosteroide, considerando-se pelo menos uma parte dos aditivos adere a, ou é adsorvida na superfície da nano partícula (contribuindo para a modificação a superfície), e não é necessário que o aditivo que nem adere nem seja adsorvido não esteja presente na suspensão aquosa. O "modificador de superfície" aqui se refere ao sur- factante, o inibidor de aglomeração, e/ou o modificador de viscosidade, que podem ser o estabilizador de dispersão, que é capaz de modificar a superfície da nano partícula de um composto de glucocorticosteroide.

[0075] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter um ou dois ou mais polióis fisiologicamente aceitáveis. A composição farmacêutica pode conter, por exemplo, os polióis fisiologicamente aceitáveis descritos acima. Os "polióis fisiologicamente aceitáveis" incluem glicerina, propileno glicol, polietileno glicol, dipropileno glicol, e dietileno glicol, e, de preferência, é propileno glicol, ou glicerina. A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter o poliol fisiologica- mente aceitável a uma concentração de, por exemplo, 0,001 a 10%, ou 0,01 a 10%, de preferência, 0,02 a 5%, por exemplo, 0,03 a 1%, 0,04 a 0,5%, 0,05 a 0,2%. Alternativamente, a suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode conter o poliol fisiologicamente aceitável a uma concentração de 0,01 a 10 mg/mL, 0,05 a 5 mg/mL, ou 0,1 a 3 mg/mL.

[0076] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa não contém um solvente de óleo. O solvente de óleo significa um solvente insolúvel na água ou levemente solúvel na água.

[0077] O composto de glucocorticosteroide contido na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa está na forma de nano partículas. O diâmetro de partícula médio (Dv) das nano partículas de composto de glucocorticosteroide pode ser 300 nm ou menos, de preferência, 250 nm ou menos, 240 nm ou menos, 230 nm ou menos, 220 nm ou menos, 210 nm ou menos, 200 nm ou menos, 190 nm ou menos, 180 nm ou menos, 170 nm ou menos, 160 nm ou menos, 150 nm ou menos, 140 nm ou menos, 130 nm ou menos, 120 nm ou menos ou 110 nm ou menos. As faixas de diâmetro de partícula médio do composto de glu- cocorticosteroide podem ser, por exemplo, 50 a 300 nm, 50 a 250 nm, 50 a 240 nm, 50 a 230 nm, 50 a 220 nm, 50 a 210 nm, 50 a 200 nm, 50 a 190 nm, 50 a 180 nm, 50 a 170 nm, 50 a 160 nm, 50 a 150 nm, 50 a 140 nm, 50 a 130 nm, 50 a 120 nm, 50 a 110 nm, 100 a 300 nm, 100 a 250 nm, 100 a 240 nm, 100 a 230 nm, 100 a 220 nm, 100 a 210 nm, 100 a 200 nm, 100 a 190 nm, 100 a 180 nm, 100 a 170 nm, 100 a 160 nm, 100 a 150 nm, 100 a 140 nm, 100 a 130 nm, 100 a 120 nm, ou 100 a 110 nm.

[0078] O diâmetro de 90% (D90) das nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa é 450 nm ou menos, de preferência, 400 nm ou menos, 350 nm ou menos, 300 nm ou menos, 290 nm ou menos, 280 nm ou menos, 270 nm ou menos, 260 nm ou menos, 250 nm ou menos, 240 nm ou menos ou 230 nm ou menos. As faixas de diâmetro de 90% (D90) do composto de glucocorticosteroide podem ser, por exemplo, 50 a 400 nm, 50 a 350 nm, 50 a 300 nm, 50 a 290 nm, 50 a 280 nm, 50 a 270 nm, 50 a 260 nm, 50 a 250 nm, 50 a 240 nm, 50 a 230 nm, 100 a 400 nm, 100 a 350 nm, 100 a 300 nm, 100 a 290 nm, 100 a 280 nm, 100 a 270 nm, 100 a 260 nm, 100 a 250 nm, 100 a 240 nm ou 100 a 230 nm.

[0079] O diâmetro 50% (D50) das nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa podem ser 200 nm ou menos, de preferência, 190 nm ou menos, 180 nm ou menos, 170 nm ou menos, 160 nm ou menos, 150 nm ou menos, 140 nm ou menos, 130 nm ou menos, 120 nm ou menos, 110 nm ou menos ou 100 nm ou menos. As faixas de diâmetro 50% (D50) do composto de glucocorticosteroide podem ser 50 a 190 nm, 50 a 180 nm, 50 a 170 nm, 50 a 160 nm, 50 a 150 nm, 50 a 140 nm, 50 a 130 nm, 50 a 120 nm, 50 a 110 nm, 50 a 100 nm, 80 a 190 nm, 80 a 180 nm, 80 a 170 nm, 80 a 160 nm, 80 a 150 nm, 80 a 140 nm, 80 a 130 nm, 80 a 120 nm, 80 a 110 nm ou 80 a 100 nm.

[0080] As nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa podem encontrar duas ou mais condições de diâmetro de partícula selecionadas a partir do diâmetro de partícula médio (Dv), o diâmetro 90% (D90), e o diâmetro 50% (D50), descritos acima. As nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa podem ter, por exemplo, um diâmetro de partícula médio (Dv) de 166 nm ou menos, um D50 de 138 nm ou menos, e/ou um D90 de 241 nm ou menos. As nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na composição farmacêutica aquosa podem ter, por exemplo, um diâmetro de partícula médio (Dv) de 204 nm ou menos, um D50 de 177 nm ou menos, e/ou um D90 de 306 nm ou menos.

[0081] O composto de glucocorticosteroide contido na suspensão aquosa como o componente ativo está na forma de nano partículas, que capacita a suspensão aquosa a ser esterilizada por filtro, e, desse modo, a suspensão aquosa pode ser esterilizada facilmente, e afetando duramente as propriedades físicoquímicas do componente ativo.

[0082] As nano partículas de um composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa são, de preferência, aquelas produzidas por mistura de um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologica- mente aceitável, um poliol fisiologicamente aceitável, e um estabilizador de dispersão. Mais de preferência, a nano partícula de um composto de glucocorticosteroide é aquela produzida por mistura de um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, um poliol fisiolo- gicamente aceitável, e um estabilizador de dispersão, com adição de lecitina (por exemplo, lecitina de soja hidrogenada) durante ou após pulverização.

[0083] A suspensão aquosa inclui, por exemplo, uma preparação contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide; cloreto de sódio; lecitina de soja hidrogenada; glicerina; ácido cítrico anidro; uma ou mais substâncias selecionadas de POE-POP glicóis, polioxieti- leno óleos de rícino hidrogenados, Polissorbato 80, PVA e copolímeros de bloco de POE-POP; cloreto de benzalcônio, ácido sórbico, ou sais destes (sorbato de potássio, sorbato de sódio e sorbato de triclocarban) ou paraoxibenzoatos (metil parahidroxibenzoato, etil parahidroxibenzo- ato, propil parahidroxibenzoato e butil parahidroxibenzoato); hidroxipro- pil metilcelulose, e/ou metil celulose; e citrato de sódio (incluindo tricitrato de sódio).

[0084] A suspensão aquosa e a composição farmacêutica podem conter água como o componente principal. A composição farmacêutica, a suspensão aquosa, e/ou o diluente aqui podem conter, conforme necessário, vários aditivos, tais como um estabilizador, um agente flavori- zante, um espessador, um surfactante, um conservante, um desinfectante ou agente antibacterial, um agente de controle de pH, um agente de tonicidade, e um tampão.

[0085] O conservante e o desinfectante ou agente antibacterial incluem ácidos sórbicos ou sais destes, (sorbato de potássio, sorbato de sódio, e sorbato de triclocarban), paraoxibenzoatos (metil parahidroxi- benzoato, etil parahidroxibenzoato, propil parahidroxibenzoato, e butil parahidroxibenzoato), acrinol, cloreto de metilrosanilinium, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, cloreto de cetilpiridinium, brometo de cetilpiridinium, clorhexidina ou sais destes, polihexametileno bigua- nida, alquilpoliaminoetilglicina, benzil álcool, fenetil álcool, clorobutanol, isopropanol, etanol, fenoxietanol, prata suportada em fosfato de zircô- nio, mercurocromo, povidona iodo, timerosal, ácido dehidroacético, clo- roxilenol, clorofen, resorcinol, ortofenilfenol, isopropilmetilfenol, timol, hinokitiol, sulfamina, lisozima, lactoferrina, triclosan, 8-hidroxiquinolina, ácido undecilênico, ácido caprílico, ácido propiônico, ácido benzóico, halocarban, tiabendazole, polimixina B, 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3- ona, 2-metil-4-isotiazolin-3-ona, polilisina, peróxido de hidrogênio, cloreto de polidronium, Glokill (nome comercial: por exemplo, Glokill PQ, Rhodia), polidiaril dimetil cloreto de amônia, poli[oxietileno(dimetilimi- nio)etileno-(dimetiliminio)etileno dicloride], polietileno poliamina-dimeti- lamina epiclorohidrina policondensados (nome comercial: por exemplo, Busan 1157, Buckman Laboratories International, Inc.), e compostos de biguanida (Cosmocil CQ (nome comercial, cerca de 20 peso% de teor de polihexametilenobiguanida hidrocloreto, Arch Personal Care Products L.P.)), e sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Cloreto de benzalcônio é preferível.

[0086] O agente de controle de pH inclui ácidos inorgânicos (ácido hidroclórico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido polifosfórico, e ácido bórico), ácidos orgânicos (ácido láctico, ácido acético, ácido cítrico, ácido cítrico anidro, ácido tartárico, ácido málico, ácido succínico, ácido oxálico, ácido glucônico, ácido fumárico, ácido propiônico, ácido aspár- tico, ácido epsilon-aminocapróico, ácido glutâmico, e ácido aminoetilsul- fônico), gluconolactona, acetato de amônia, bases inorgânicas, (carbonato de hidrogênio de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, hidróxido de cálcio e hidróxido de magnésio), bases orgânicas (monoetanolamina, trietanolamina, diisopropanolamina, triisopropanolamina e lisina), borax, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0087] O agente de tonicidade inclui sais inorgânicos (cloreto de sódio, cloreto de potássio, carbonato de sódio, carbonato hidrogênio de sódio, cloreto de cálcio, sulfato de magnésio, fosfato hidrogênio de sódio, fosfato hidrogênio de disódio, fosfato hidrogênio de dipotássio, tio- sulfato de sódio e acetato de sódio), álcoois polihídricos (glicerina, pro- pileno glicol, etileno glicol e 1,3-butileno glicol), sacarídeos (glicose, ma- nitol e sorbitol).

[0088] O tampão inclui tris tampão, tampão de borato, tampão de fosfato, tampão de carbonato, tampão de citrato, tampão de acetato, ácido epsilon-aminocapróico e aspartato. Exemplos específicos incluem ácido bórico ou sais destes (borato de sódio, tetraborato de potássio, e metaborato de potássio), ácido fosfórico, ou sais destes (fosfato de hidrogênio de sódio, fosfato de dihidrogênio de sódio, e fosfato de dihidro- gênio de potássio), ácido carbônico, ou sais destes (carbonato de hidrogênio de sódio e carbonato de sódio), ácido cítrico, ou sais destes (citrato de sódio, citrato de potássio, e ácido cítrico anidro).

[0089] A viscosidade da suspensão aquosa e da composição farmacêutica aqui pode ser 1 a 5 mPa-s, e pode ser, por exemplo, 1 a 3 mPa-s.

[0090] A "%", conforme aqui usada na composição, ou o teor se refere ao peso % (p/p), a menos que de outro modo citado.

[0091] [Efeitos Vantajosos da Invenção]

[0092] A suspensão aquosa contendo nano partículas do composto de glucocorticosteroide da presente invenção tem vantagens na transparência, dispersibilidade, estabilidade de armazenagem, transferibilidade na conjuntiva, e transferibilidade no humor aquoso, com baixa irritabilidade, e, desse modo, é facilmente esterilizada, e tem boa estabilidade temporal e estabilidade de dispersão. A suspensão pode ser usada para composições farmacêuticas para administração parenteral, especificamente para colírios.

[Breve Descrição dos Desenhos]

[0093] [Figura 1] A Figura 1 é um gráfico mostrando a mudança do curso do tempo de concentração de propionato de clobetasol no humor aquoso após administração oftálmica do colírio de nanosuspensão preparado nos Exemplos 5(1) a 5(3). A ordenada representa a concentração de propionato de clobetasol (ng/mL) no humor aquoso, e a abscissa representa o tempo decorrido (minutos) após a administração. Os círculos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 100 nm), os quadrados negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 300 nm), e os triângulos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 600 nm). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0094] [Figura 2] A Figura 2 é um gráfico mostrando a mudança do curso do tempo de concentração de propionato de clobetasol na con- juntiva após administração oftálmica do colírio de nanosuspensão preparado nos Exemplos 5(1) a 5(3). A ordenada representa a concentração de propionato de clobetasol (ng/mL) na conjuntiva, e a abscissa representa o tempo decorrido (minutos) após a administração. Os círculos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 100 nm), os quadrados negros indicam 0,05% de nano- suspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 300 nm), e os triângulos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica (diâmetro de partícula médio de 600 nm). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0095] [Figura 3] A Figura 3 é um gráfico mostrando a mudança do curso do tempo de concentração de propionato de clobetasol em humor aquoso após administração oftálmica de colírio de nanosuspensão preparado nos Exemplos 7(1) a 7(4). A ordenada representa a concentração de propionato de clobetasol (ng/mL) no humor aquoso, e a abscissa representa o tempo decorrido (minutos) após a administração. Os círculos brancos indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica P (HPMC (60SH-50) 3 mg/mL), os círculos negros indicam 0,05% de nanosuspen- são oftálmica Q (HPMC (60SH-4000) 1,5 mg/mL), os triângulos brancos indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica R (MC (SM-100) 2 mg/mL), e os triângulos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica S (MC (SM-4000) 1,5 mg/mL). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0096] [Figura 4] A Figura 4 é um gráfico mostrando a mudança do curso do tempo na concentração de propionato de clobetasol na conjuntiva após administração oftálmica de colírio de nanosuspensão preparado nos Exemplos 7(1) a 7(4). A ordenada representa a concentração de propionato de clobetasol (ng/mL) na conjuntiva, e a abscissa representa o tempo decorrido (minutos) após a administração. Os círculos brancos indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica P (HPMC (60SH- 50) 3 mg/mL), os círculos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica Q (HPMC (60SH-4000) 1,5 mg/mL), os triângulos brancos indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica R (MC (SM-100) 2 mg/mL), e os triângulos negros indicam 0,05% de nanosuspensão oftálmica S (MC (SM-4000) 1,5 mg/mL). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0097] [Figura 5] A Figura 5 é um gráfico mostrando a contagem de inflamação do olho externo para um modelo de coelho de uveíte induzida por BSA. A ordenada representa a contagem de inflamação, e a abscissa representa os dias decorridos (a partir do 15° ao 18° dia) após a primeira administração de BSA. As barras brancas indicam um grupo de controle (solução de salina fisiológica), as barras cinza escura indicam 0,05% de grupo de administração de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol, e as barras cinza claro indicam um grupo de controle positivo (0,1% de grupo de administração de solução oftálmica de fluorometolona). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0098] [Figura 6] A Figura 6 é um gráfico mostrando a contagem de inflamação do olho interno para um modelo de coelho de uveíte induzida por BSA. A ordenada representa a contagem de inflamação, e a abscissa representa os dias decorridos (a partir do 15° ao 18° dia) após a primeira administração de BSA. As barras brancas indicam um grupo de controle (solução salina fisiológica), as barras cinza escura indicam 0,05% de grupo de administração de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol, e as barras cinza claro indicam um grupo de controle positivo (0,1% de grupo de administração de solução oftálmica de fluorometolona). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[0099] [Figura 7] A Figura 7 presenta gráficos mostrando as contagens de inflamação do olho externo (A) e olho interno (B) no 29° dia após a primeira administração de BSA para um modelo de coelho de uveíte induzida por BSA. As ordenadas representam as contagens de inflamação. As barras brancas indicam um grupo de controle (solução salina fisiológica), as barras cinza escura indicam 0,05% de grupo de administração de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol, e as barras cinza claro indicam um grupo de controle positivo (0,1% de grupo de administração de solução oftálmica de fluorometolona). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00100] [Figura 8] A Figura 8 é um gráfico mostrando o peso conjun- tival para um modelo de rato de conjuntivite induzida por croton. A ordenada representa o peso conjuntival (g). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00101] [Figura 9] A Figura 9 é um gráfico mostrando o peso conjun- tival palpebral para um modelo de rato de edema conjuntival induzido por carraginina. A ordenada representa o peso conjuntival palpebral (g). Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00102] [Figura 10] A Figura 10 é um gráfico mostrando a concentração de PGE2 no humor aquoso para um modelo de coelho de uveíte induzida por LPS. A ordenada representa a concentração de PGE2 (pg/mL) no humor aquoso. Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00103] [Figura 11] A Figura 11 é um gráfico mostrando a concentração de PGE2 em corpo vítreo para um modelo de coelho de uveíte induzida por LPS. A ordenada representa a concentração de PGE2 (pg/mL) no corpo vítreo. Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00104] [Figura 12] A Figura 12 é um gráfico mostrando a concentração de proteína no humor aquoso para um modelo de coelho de inflamação de câmara anterior induzida por punção. A ordenada representa a concentração de proteína (mg/mL) no humor aquoso da câmara anterior. Os valores indicados são média, e as barras de erro indicam desvios padrões.

[00105] [Figura 13] A Figura 13 é um gráfico mostrando a concentração de PGE2 no corpo vítreo para um modelo de coelho de uveíte induzida por LPS. A ordenada representa a concentração de PGE2 (pg/mL) no corpo vítreo. Os valores indicados são média, "b.i.d" significa administração duas vezes por dia, e "q.i.d" significa administração quatro vezes por dia.

[Descrição das Concretizações]

[00106] 1. Suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide

[00107] A nano partícula de um composto de glucocorticosteroide pode ser produzida por mistura do composto de glucocorticosteroide com um sal fisiologicamente aceitável e um poliol fisiologicamente aceitável, e pulverização úmida do composto orgânico. O método de produção é descrito em detalhe na Publicação Internacional No. WO 2008/126797. A etapa de mistura somente requer que o composto de glucocorticosteroide, o sal fisiologicamente aceitável, e o poliol fisiologi- camente aceitável, sejam todos misturados juntos no final, e uma ordem de adição não é limitada. A etapa de mistura pode ser alcançada por, por exemplo, adição do sal fisiologicamente aceitável e do poliol fisiolo- gicamente aceitável ao composto de glucocorticosteroide, ou alternativamente, por adição do composto de glucocorticosteroide ao sal fisiolo- gicamente aceitável e ao poliol fisiologicamente aceitável. As nano par- tículas do composto de glucocorticosteroide contidas em um pó da presente invenção podem ser produzidas por adição do sal fisiologicamente aceitável e do poliol fisiologicamente aceitável a um composto orgânico tendo um ponto de fusão de 80°C ou mais, e pulverização úmida do composto orgânico. Neste método, a suspensão aquosa pode ser preparada sem remoção do sal e do poliol. Desde que não exista necessidade de remover o sal e o poliol, a suspensão pode ser preparada por etapas muito simples. A pulverização úmida é alcançada por mistura do composto orgânico, o sal e o poliol, e amassamento da mistura. A nano partícula de um composto de glucocorticosteroide pode ser, de preferência, produzida por adição de lecitina durante ou após a etapa de pulverização.

[00108] A nano partícula de composto de glucocorticosteroide é produzida, de preferência, por pulverização úmida sem usar um auxiliador de pulverização sólido duro, mais de preferência, sem usar um auxiliador de pulverização sólido, tais como produtos de vidro, produtos metálicos, tais como aço inoxidável, produtos cerâmicos, tais como zircônia e alumina, e produtos moleculares grandes, tal como poliestireno rígido. Mais de preferência, a nano partícula de composto de glucocorticoste- roide é produzida por pulverização úmida sem usar um auxiliador de pulverização sólido outro do que o sal fisiologicamente aceitável e o modificador de viscosidade.

[00109] O "fisiologicamente aceitável" significa que é acreditado causar problemas fisiológicos sendo administrados no corpo. A aceitação fisiológica de uma certa substância é adequadamente determinada dependendo da espécies a ser administrada na substância, bem como modos de administração. Exemplos do solvente fisiologicamente aceitável incluem substâncias que são aprovadas como aditivos ou solventes para drogas farmacêuticas, ou para produtos alimentícios.

[00110] O "sal fisiologicamente aceitável" aqui não é limitado considerando-se que ele pode ser administrado sem causar problemas fisiológicos. O sal fisiologicamente aceitável, de preferência, tem baixa solubilidade para polióis, alta solubilidade para água, e/ou baixa absorção de umidade com dureza adequada para pulverização do composto orgânico. Mais de preferência, o sal fisiologicamente aceitável usado no método para produção da nano partícula de composto de glucocorticos- teroide tem duas ou mais destas propriedades. A solubilidade do sal fi- siologicamente aceitável para polióis é, de preferência, 10% (massa/vo- lume) ou menos. O sal fisiologicamente aceitável é, de preferência, altamente solúvel para água para fácil remoção após pulverização. Exemplos específicos incluem os sais listados acima neste relatório descritivo.

[00111] O "sal fisiologicamente aceitável" é, de preferência, pulveri-zado para ajustar o diâmetro de partícula antes da mistura com o composto de glucocorticosteroide. Além disso, o sal fisiologicamente aceitável pode ser secado sob pressão reduzida à uma temperatura de 30 a 200°C para reduzir uma água contida para prevenção de fusão e crescimento de partícula causados pela água contida. Quando o diâmetro de partícula do sal fisiologicamente aceitável é ajustado em avanço, o diâmetro médio do volume de partícula pode ser, por exemplo, 5 a 300 μm, 10 a 200 μm, de preferência, 0,01 a 300 μm, mais de preferência, 0,1 a 100 μm, adicionalmente de preferência, 0,5 a 50 μm, mais de preferência, 1 a 5 μm. A quantidade de sal a ser usado é, de preferência, 1 a 100 vezes, mais de preferência, 5 a 30 vezes, adicionalmente de preferência, 10 a 20 vezes uma massa do composto de glucocorticoste- roide. Um tipo de sal pode ser usado unicamente, ou dois ou mais tipos de sais podem ser usados juntos.

[00112] O "poliol fisiologicamente aceitável" usado no método para produção das nano partículas do composto de glucocorticosteroide não é limitado considerando-se que ele pode ser administrado sem causar quais problemas fisiológicos. O poliol fisiologicamente aceitável preferível tem baixa solubilidade para sais, alta solubilidade para água, um baixo ponto de congelamento, e/ou um alto ponto de ignição. O poliol fisiologicamente aceitável é, de preferência, altamente solúvel para água para fácil remoção após pulverização.

[00113] O poliol usado no método para produção das nano partículas do composto de glucocorticosteroide, de preferência, tem uma alta viscosidade. A viscosidade de um poliol a 20°C pode ser 40 mPa-s ou mais, de preferência, 50 mPa-s ou mais, mais de preferência, 80 mPa-s ou mais. O limite superior da viscosidade a 20°C do poliol a ser usado no método para produção das nano partículas do composto de glucocorti- costeroide não é limitado, e, por exemplo, pode ser selecionado de faixas de 40 mPa-s ou mais a 5.000 mPa-s ou menos, de preferência, 50 mPa-s ou mais a 3.000 mPa-s ou menos, mais de preferência, 80 mPa-s ou mais a 2.000 mPa-s ou menos. Exemplos específicos incluem os po- lióis listados acima neste relatório descritivo.

[00114] A quantidade de poliol fisiologicamente aceitável usada no método para produção das nano partículas do composto de glucocorti- costeroide é, de preferência, 0,5 a 100 vezes, mais de preferência, 1 a 10 vezes uma massa do composto orgânico a ser pulverizada. O tipo de poliol pode ser adequadamente determinado de acordo com a solubilidade do composto orgânico a ser pulverizado. Um tipo de poliol pode ser usado unicamente, ou dois ou mais tipos de polióis podem ser usados juntos.

[00115] No método para produção de nano partículas de um com- posto de glucocorticosteroide, o produto amassado contendo o composto de glucocorticosteroide, o poliol e o sal, de preferência, tem uma alta viscosidade. A viscosidade do produto amassado pode ser aumentada, de preferência, pelo uso da mistura em que um modificador de viscosidade é adicionado ao poliol, ou por adição de um modificador de viscosidade independentemente do poliol, que pode efetivamente aperfeiçoar a eficiência de pulverização. O modificador de viscosidades descrito no acima pode ser adicionado ao poliol. A viscosidade a 20°C de um poliol ao qual o modificador de viscosidade é adicionado é, de preferência 1.000 mPa-s ou mais, mais de preferência, 2.000 mPa-s ou mais, adicionalmente de preferência, 5.000 mPa-s ou mais, mais de preferência, 10.000 mPa-s ou mais. O limite superior da viscosidade a 20°C do poliol ao qual o modificador de viscosidade é adicionado, não é limitado, e, por exemplo, pode ser selecionado a partir das faixas de 1.000 mPa-s ou mais a 5.000.000 mPa-s ou menos, de preferência, 1.000 mPa-s ou mais a 1.000.000 mPa-s ou menos, mais de preferência, 2.000 mPa-s ou mais a 500.000 mPa-s ou menos, adicionalmente de preferência, 5.000 mPa-s ou mais a 300.000 mPa-s ou menos, mais de preferência, 10.000 mPa-s ou mais a 100.000 mPa-s ou menos.

[00116] No método para produção das nano partículas do composto de glucocorticosteroide, qualquer moedor pode ser usado para pulverização úmida do composto de glucocorticosteroide sem limitação, considerando-se que ele pode amassar mecanicamente e dispersar o composto de glucocorticosteroide, o sal, o poliol, e/ou o estabilizador de dispersão. Exemplos do moedor comumente usado incluem amassadores, dois rolos, três rolos, moinhos de fret, aspiradores de pó, e dispersado- res de amassador de lâmina de disco.

[00117] A temperatura de pulverização pode ser adequadamente determinada de acordo com o composto de glucocorticosteroide a ser pulverizado, e um tipo de moedor. A temperatura de pulverização não é limitada, e, de preferência, -50 a 50°C, mais de preferência, -20 a 30°C, e, mais de preferência, -10 a 25°C. O tempo de pulverização pode ser também adequadamente determinado de acordo com o composto orgânico a ser pulverizado e um tipo de moedor. O tempo de pulverização pode ser, por exemplo, 1 a 50 horas, 2 a 30 horas, 3 a 20 horas, 4 a 18 horas, 5 a 10 horas.

[00118] Após completação da pulverização de composto de gluco- corticosteroide, as partículas objetivas de composto de glucocorticoste- roide pulverizado podem ser obtidas sem remoção do sal e o poliol que são usados para a pulverização. Devido à etapa de lavagem não ser necessária, a preparação de nano partícula é produzida mais simples a um custo mais baixo. A suspensão pode ser preparada por homogeneização da mistura do composto de glucocorticosteroide, o sal, o poliol, e/ou o modificador de viscosidade em um solvente usando um homoge- neizador. O solvente usado para homogeneização da mistura não é limitado considerando-se que dissolve facilmente o poliol, o sal, e o modificador de viscosidade, mas dissolve dificilmente o composto de glu- cocorticosteroide pulverizado, e sendo fisiologicamente aceitável. O solvente é, de preferência, água, mas qualquer solvente outro do que água pode ser usado, que inclui uma mistura de água e um solvente orgânico, tal como ácido acético, metanol ou etanol. A mistura homogeneizada pode ser filtrada, se necessário. O método de filtração não é limitado, e qualquer método de filtração usado para filtrar compostos orgânicos contidos na mesma pode ser empregado. Exemplos do método de filtração incluem um método de filtração de pressão reduzida, um método de filtração de pressão aplicada, e um método de membrana de ultrafil- tração.

[00119] As partículas pulverizadas tipicamente têm uma alta energia superficial e, desse modo, facilmente se aglomeram. Desse modo, o inibidor de aglomeração descrito acima pode ser adicionado após remoção dos sais, etc., para impedir a aglomeração secundária. Um tipo do inibidor de aglomeração pode ser usado unicamente, ou dois ou mais tipos de inibidores de aglomeração podem ser usados juntos.

[00120] Após remoção do sal e o poliol, as partículas obtidas de composto de glucocorticosteroide pulverizado podem ser secadas para remover o solvente usado para remoção do sal, etc. O método de secagem não é limitado, e qualquer método comumente usado para secagem de um composto orgânico pode ser empregado. Exemplos do método de secagem incluem um método de secagem de pressão reduzida, um método de liofilização, um método de secagem por pulverização, e um método de liofilização por pulverização. A temperatura de secagem e tempo de secagem nestes métodos de secagem não são limitados, mas é, de preferência, a uma baixa temperatura para manutenção da estabilidade química das partículas do composto orgânico para uso médico, e prevenção da aglomeração de partícula secundária. Pela mesma razão, método de liofilização, o método de secagem por pulverização, e o método de liofilização por pulverização, são preferíveis.

[00121] As faixas de diâmetro de partícula médio das partículas do composto de glucocorticosteroide pulverizado obtidas pelo método de produção acima podem ser as mesmas como o diâmetro de partícula médio das nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa descrita acima. Também, as faixas do diâmetro de 90% (D90) e do diâmetro de 50% (D50) das partículas do composto de glucocorticosteroide pulverizado obtidas no método de produção acima podem ser as mesmas como o diâmetro de 90% (D90) e o diâmetro de 50% (D50), respectivamente, das nano partículas do composto de glucocorticosteroide contidas na suspensão aquosa ou composição farmacêutica aquosa descrita acima.

[00122] O "diâmetro de partícula médio" ou "Dv" aqui significa o diâmetro médio aritmético da distribuição de tamanho de partícula medida por espectroscopia de correlação de fóton de difusão de luz dinâmica. O diâmetro de 50% (também referido como diâmetro médio, D50) representa o diâmetro no qual partículas de pó são divididas em dois grupos na distribuição de tamanho de partícula medida pelo método de medição acima, no qual as quantidades de partículas são iguais entre referidos dois grupos, o grupo de diâmetro maior e o grupo de diâmetro menor. O "diâmetro de 90%" significa o diâmetro (D90) da partícula na posição 90% na distribuição de tamanho de partícula medida pelo método de medição acima, no qual o número de partículas é contado a partir do diâmetro de partícula menor para o diâmetro de partícula maior, conforme ajustando 0% (menos menor) a 100% (a partícula maior). O "diâmetro de 10%" significa o diâmetro (D10) da partícula na posição 10% na distribuição de tamanho de partícula medida pelo método de medição acima, no qual o número de partículas é contado a partir do diâmetro de partícula menor para o diâmetro de partícula maior, conforme ajustando 0% (menos menor) a 100% (a partícula maior). O método de medição por espectroscopia de correlação de fóton de difusão de luz dinâmica, e o método de cálculo de distribuição de tamanho de partícula, são bem conhecidos na técnica.

[00123] 2. Composição Farmacêutica

[00124] A presente invenção se relaciona à composição farmacêutica contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide. A composição farmacêutica é, de preferência, uma composição farmacêutica para administrações parenterais, tais como injeções ou preparações tópicas. O tipo da composição farmacêutica aqui não é limitado. Exemplos da formulação incluem preparação tópica para os olhos (por exemplo, colírios), preparações tópicas para os ouvidos (por exemplo, gotas auriculares), preparações tópicas para o nariz (por exemplo, gotas na-sais), suspensões, pomadas, cremes, géis, inaladores, injeções (por exemplo, injeções para injeção intravenosa, administração subcutânea, injeção intramuscular e gotejamentos intravenosos). Estas preparações podem ser produzidas de acordo com um método convencional. A composição farmacêutica, de preferência, contém um estabilizador de dispersão. No caso de uma injeção, a formulação pode ser preparada usando as nano partículas do composto de glucocorticosteroide suspensas em água, e podem ser suspensas em salina ou uma solução de glicose, conforme necessário, que podem adicionalmente serem adicionados um dispersante, um tampão, ou um conservante. A composição farmacêutica pode ser formulada como uma forma de administração parenteral incluindo injeção para administração intravenosa, administra-ção intramuscular, ou administração subcutânea, gotejamento intravenoso, absorvedor transdermal, absorvedor transmucosal, colírio, gota auricular, gota nasal, ou inalador.

[00125] A composição farmacêutica pode conter um transportador farmacologicamente aceitável (um aditivo para preparações). O tipo de aditivos para preparações usadas para produção da composição farmacêutica, a proporção dos aditivos para preparações relativa ao componente ativo, ou o método para produção da composição farmacêutica pode ser adequadamente selecionado pelo técnico no assunto, dependendo da forma de composição. O aditivo para preparações pode ser uma substância inorgânica ou orgânica, ou uma substância sólida ou líquida, e pode ser tipicamente adicionado em uma faixa de 1 peso% a 90 peso% do peso do componente ativo. Exemplos específicos de tal substância incluem lactose, glicose, manitol, dextrina, ciclodextrina, amido, sacarose, aluminometasilicato de magnésio, silicato de alumínio sintético, sódio carboximetil celulose, hidroxipropil amido, carboximetil celulose cálcio, resina de troca de íon, metil celulose, gelatina, goma arábica, hidroxipropilcelulose, hidroxipropil metilcelulose, polivinilpirroli- dona, PVA, ácido silícico anidro leve, estearato de magnésio, talco, adragante, bentonita, veegum, óxido de titânio, ácido graxo sorbitan éster, sódio lauril sulfato, glicerina, ácido graxo glicerina éster, lanolina purificada, glicerogelatina, polissorbato, Macrogol, óleo vegetal, cera, parafina líquida, petrolatum branco, fluorocarbono, surfactante não-iônico, propileno glicol, água, cloreto de benzalcônio, ácido hidroclórico, cloreto de sódio, hidróxido de sódio, ácido láctico, sódio, fosfato de sódio mo- nohidrogênio, fosfato de sódio dihidrogênio, ácido cítrico, citrato de sódio, disódio edetato, Poloxamer 407, e policarbofil. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter um ou mais aditivos para preparações selecionadas de POE-POP glicol, PVA, hidroxipropil metilcelulose, e metil celulose.

[00126] A suspensão aquosa ou composição farmacêutica pode ser na forma de um kit, que acompanha uma embalagem externa, um recipiente, um diluente, uma suspensão, e/ou uma instrução para uma pre- paração/administração. Quando a suspensão aquosa ou composição farmacêutica é provida na forma de um kit, componentes diferentes da suspensão aquosa ou composição farmacêutica podem ser individualmente embalados em recipientes separados e contidos em um único kit. Alternativamente, mais do que um, mas não todos dos componentes da suspensão aquosa ou composição farmacêutica podem ser incluídos no kit (pelo menos as nano partículas do composto de glucocorticosteroide está incluída no kit), e outros componentes podem ser providos separadamente a partir do kit. Quando a suspensão aquosa ou composição farmacêutica é provida na forma de um kit, os componentes necessários são, de preferência, misturados imediatamente antes do uso para obter a suspensão aquosa ou composição farmacêutica da presente invenção.

[00127] O kit da presente invenção, por exemplo, pode ser conforme segue:

[00128] (a) um kit para preparação de uma composição farmacêutica compreendendo uma suspensão aquosa contendo nano partículas de um composto de glucocorticosteroide;

[00129] (b) o kit de (a) adicionalmente compreendendo um estabili- /dordedispers1o;

[00130] (c) o kit de (b), no qual o estabilizador de dispersão é uma ou mais substâncias selecionadas de POE-POP glicol, PVA, hidroxipropil metilceluloseemetilcelulose;

[00131] (d) o kit de qualquer um de (a) a (c), para preparação de uma composi2io farmac3utica para administra2io parenteral;

[00132] (e) o kit de qualquer um de (a) a (d), para preparação de uma inje21o ou uma prepara21o t)pica;

[00133] (f) o kit de (e), para preparar uma preparação tópica para o olho, uma preparação tópica para o ouvido, uma preparação tópica para o nariz, ou uma preparação tópica para pulmão, ou um colírio, uma gota auricular, uma gota nasal ou um inalador;

[00134] (g) O kit de qualquer um de (a) a (f), no qual a composição farmacêutica é uma droga terapêutica, ou uma droga preventiva para uma doença inflamatória ou infecciosa do olho, ouvido, nariz, ou pulmão.

[00135] Em uma concretização, a presente invenção pode ser o método para preparação de uma composição farmacêutica aquosa contendo as nano partículas do composto de glucocorticosteroide, compreendendo misturar um diluente e a suspensão aquosa contendo as nano partículas do composto de glucocorticosteroide.

[00136] Na preparação da composição farmacêutica (por exemplo, injeções, preparação tópica para os olhos (de preferência, colírios), preparações tópicas para os ouvidos (de preferência, gotas auriculares), preparações tópicas para o nariz (de preferência, gotas nasais), ou preparações tópicas para o pulmão (de preferência, inaladores)), o pH e pressão osmótica não são limitadas considerando-se que elas são aceitáveis para as preparações tópicas, e, de preferência, é pH 5 a 9,5, mais de preferência, é pH 6 a 9, adicionalmente de preferência, é pH 7 a 9. A proporção de pressão osmótica da preparação (exceto pomadas) para salina é, por exemplo, cerca de 0,3 a 4,3, de preferência, cerca de 0,3 a 2,2, particularmente de preferência, cerca de 0,5 a 1,5. O pH e pressão osmótica podem ser controlados usando um agente de controle de pH, um agente de tonicidade, ou sais, por um método conhecido na técnica.

[00137] A composição farmacêutica pode ser adequadamente produ-zida por um método conhecido, por exemplo, por mistura da suspensão aquosa contendo as nano partículas do composto de glucocorticoste- roide com componentes desejados em um diluente adequado, tal como água destilada ou água purificada, ajustando a pressão osmótica acima e pH, submetendo à esterilização de vapor de alta pressão, ou esterilização de filtro sob condições assépticas, e enchimento assepticamente em um recipiente esterilizado lavado.

[00138] A composição farmacêutica pode ser um agente terapêutico ou agente preventivo para doenças inflamatórias ou infecciosas. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser um agente terapêutico ou agente preventivo para doenças inflamatórias ou infecciosas causadas por infecções. A presente invenção envolve a suspensão aquosa contendo as nano partículas do composto de glucocorticosteroide e um estabilizador de dispersão para o uso como uma droga farmacêutica (uma droga terapêutica ou droga preventiva para doenças inflamatórias ou infecciosas).

[00139] A doença inflamatória ou infecciosa aqui envolve doenças in-flamatórias sistêmicas e doenças infecciosas, e doenças inflamatórias tópicas e doenças infecciosas. As doenças inflamatórias incluem, em adição às doenças inflamatórias causadas por infecções, doenças inflamatórias alérgicas (por exemplo, rinite alérgica, conjuntivite alérgica, dermatite alérgica, eczema alérgico, asma alérgica, e pneumonia alérgica). Exemplos da doença inflamatória sistêmica incluem doenças inflamatórias ou infecciosas sistêmicas, tais como infecções superfi- cial/profunda da pele, linfangites/lifadenite, mastite, osteomielite, tonsi- lite, pneumonia, pielonefrite, uretrite, infecção gonococcal, sífilis, infecção intrauterina, escarlatina, difteria, coqueluche, infecções secundárias de ferimentos externos/queimaduras, e cirurgias, faringite/laringite, bronquite, infecções secundárias de doenças respiratórias crônicas, pericoronite, inflamação periodontal, tétano, cistite, prostatite, enterite infecciosa, inflamação da mandíbula, artrite infecciosa, e gastrite.

[00140] A composição farmacêutica pode ser especificamente usada para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias e infecciosas do olho, e vários sintomas associados com as mesmas. Exemplos das doenças inflamatórias e infecciosas do olho incluem sintomas da pálpebra, tais como blefarite, blefaroconjuntivite, meibomite, hordéplo agudo ou cr-nico, calá/io, dacriocistite, dacrioadenite e acne rosácea; sintomas conjuntivais, tais como conjuntivite, oftalmia neonatorum e tra- coma; sintomas da córnea, tais como úlcera corneal, queratite superficial e queratite intersticial, quetatoconjuntivite, objetos estranhos e infecção pós-cirurgia; e sintomas de câmara anterior e úvea, tais como endoftalmite, uveíte infecciosa e infecções pós-cirurgia. A prevenção de infeções inclui a administração antes do tratamento cirúrgico, tal como uma operação, ou antes do contato com uma pessoa que apresenta sintomas infecciosos. Em uso para a prevenção, uma administração pode ser antes de tratamentos cirúrgicos, tais como blefaroplastia, remoção de calázio, blefarorrafia, cirurgias para canalículos e sistema de drenagem lacrimal, e outros tratamentos cirúrgicos relacionados às pálpebras e aparelho lacrimal; cirurgia conjuntival, tais como remoção de pterígio, pinguecula, ou tumores, transplante conjuntival, ferimentos externos tais como cortes, queimaduras e arranhaduras, e cirurgia de aba conjuntival; cirurgias de córnea, tais como remoção de objetos estra-nhos, queratotomia e transplante de córnea; cirurgias refrativas, tais como procedimento fotorefrativo; cirurgias de glaucoma, tais como filtração de bolha; paracentese de câmara anterior; iridotomia; cirurgia de catarata; cirurgia da retina; e cirurgias relacionadas a músculo extraocular. A prevenção de oftalmia neonatal está também incluída na prevenção aqui definida.

[00141 ] A composição farmacêutica da presente invenção, por exemplo, pode ser usada para tratamento ou prevenção de vários sintomas associados com doenças inflamatórias ou infecciosas do ouvido. Exemplos da doença inflamatória ou infecciosa do ouvido incluem otite média e otite externa. A prevenção de doenças infecciosas inclui tratamentos pré-cirúrgicos e tratamentos dados antes das condições de possíveis infecções (por exemplo, contatos com uma pessoa infectada ou possivelmente infectadas). Exemplos da prevenção incluem uma administração dada antes de tratamentos cirúrgicos associados com ferimentos ou danos externos do ouvido, e outras tratamentos cirurgias ou tratamentos.

[00142] A composição farmacêutica adicionalmente pode tratar ou prevenir vários sintomas associados com doenças inflamatórias ou infecciosas do nariz. Através de todo o relatório descritivo, o termo "nariz" usado nas frases de "doenças inflamatórias ou infecciosas do nariz" e a "preparação tópica de nariz" significa o trato respiratório superior total, por exemplo, a cavidade nasal, nasofaringe, faringe e laringe. Exemplos da doença inflamatória ou infecciosa do nariz incluem sinusite, rinite alérgica, e rinite.

[00143] A composição farmacêutica pode ainda ser usada para tratar ou prevenir vários sintomas associados com doenças inflamatórias ou infecciosas do pulmão. Através de todo o relatório descritivo, o termo "pulmão" usado nas frases de "doenças inflamatórias ou infecciosas do pulmão" e a "preparação tópica do pulmão" significa o trato respiratório inferior total, por exemplo, a traqueia, brônquios, bronquíolo, e pulmão. Exemplos das doenças inflamatórias ou infecciosas do pulmão incluem pneumonia, bronquite, pneumonia alérgica, e asma.

[00144] Mais de preferência, a composição farmacêutica pode ser usada para tratar ou prevenir doenças infecciosas (por exemplo, doenças infecciosas do olho, ouvido, nariz ou pulmão) causadas por várias bactérias ou parasita. Exemplos de tais microorganismo incluem i gênero Staphylococcus, tais como Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis; o g3nero 6treptococcus, tais como Streptococcus pneumoniae e Streptococcus pyogenes, Streptococci Grupos C, F e G e 7rupo 5iridans 6treptococcus; 8aemop*ilus influen/ae incluindo %io- tipo 9 9 9 ; 8aemop*ilus ducre:i; ;oraxella catarr*alis; o g3nero <eisseria, tais como Neisseria gonorr*oeae e <eisseria meningitidis; o g3nero Chlamydia, tais como Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci e Chlamydia pneumoniae; o gênero Mycobacterium, tais como micobac- téria atípica, incluindo Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium tu- bercule bacillus intracelular complexo e Mycobacterium marinum, Mycobacterium fortuitum e Mycobacterium chelonae; Bordetella pertussis; Campylobacter jejuni; Legionella pneumophila; Bacteroides bivius; Welch bacillus; espécie Peptostreptococcus; Borrelia burgdorferi; Mycoplasma pneumonia; Treponema pallidum; Ureaplasma urealyticum; Toxoplasma; Malaria; e nosema.

[00145] 3. Método de tratamento/método de prevenção

[00146] A composição farmacêutica da presente invenção pode ser usada para tratar ou prevenir doenças inflamatórias ou infecciosas por ser administrada em uma quantidade efetiva à um paciente em necessidade deste. A presente invenção consequentemente se relaciona a um método para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias ou infecciosas, compreendendo administrar uma quantidade efetiva da composição farmacêutica contendo a suspensão aquosa contendo as nano partículas do composto de glucocorticosteroide (e um estabilizador de dispersão) à um paciente em necessidade deste. O paciente aqui inclui quaisquer animais classificados nos mamíferos incluindo, mas não limitados a; animais de companhia, tais como cães, gatos e coelhos; animais domésticos, tais como cavas, porcos, ovelha, e cavalos, em que humano é preferível.

[00147] A dose e número de administração da composição farmacêutica não são limitados, e podem ser adequadamente selecionados a uma discrição física, dependendo da proposta de prevenção de deteri- oração/progresso, e/ou a proposta de tratamento da doença a ser tratada, o tipo de doença, e condições do paciente, tais como peso corpóreo e idade. A dose é geralmente cerca de 0,01 a 1000 mg (em uma base de peso do componente ativo) ao dia para um adulto, e pode ser administrada uma vez, ou em várias vezes ao dia. A rota de administração é uma injeção ou administração tópica, por exemplo, injeções intravenosas, injeções intramusculares, ou injeções subcutâneas, goteja- mentos intravenosos, colírios, gotas auriculares, gotas nasais, administração transdermal, administração transmucosal, ou inalação. O teor do agente efetivo na composição farmacêutica pode ser, por exemplo, 0,001% a 10%, 0,01% a 1%, ou 0,05% a 0,1%.

[00148] Quando a composição farmacêutica da presente invenção está na forma de uma injeção, ela pode ser administrada continuamente ou intermitentemente em uma dose diária de 0,001 a 100 mg (em uma base de peso de componente ativo) para um adulto.

[00149] Quando a composição farmacêutica aquosa da presente invenção é para administração tópica, ela é diretamente administrada à uma área tópica, tal como um local afetado, uma área ao redor de um local afetado, ou um órgão, incluindo um local afetado. A composição farmacêutica da presente invenção, por exemplo, pode ser formada em uma preparação tópica para o olho, uma preparação tópica para o ouvido, uma preparação tópica para o nariz, ou uma preparação tópica para o pulmão. Quando a composição farmacêutica da presente invenção é uma preparação topicamente administrável, ela é aplicável todo dia, ou em qualquer número de vezes após uma doença inflamatória ou infecciosa tópica ser desenvolvida. A quantidade de aplicação pode ser adequadamente determinada dependendo das condições, e é tipicamente aplicada ao olho uma vez a seis vezes ao dia, por exemplo, uma vez, duas vezes, três vezes, quatro vezes, cinco vezes, ou seis vezes ao dia, com cerca de 1 a 3 gotas por aplicação. O período de adminis-tração pode ser qualquer período de tempo até que os sintomas diminuem adequadamente, por exemplo, duas semanas a um ano.

[00150] A presente invenção é ilustrada em mais detalhes nos exemplos, mas que não pretendem limitar o escopo da presente invenção. Todos os documentos citados através de todo este pedido são aqui incorporados por referência em sua totalidade.

[00151] (Exemplo 1) Estudo na pulverização de propionato de clobe- tasol

[00152] De modo a examinar um efeito de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada na pulverização de propionato de clobetasol, as seguintes pulverizações (1) a (9) foram conduzidas, e o diâmetro de partícula médio (Dv), o diâmetro de partícula mediano (D50), e o diâmetro de partícula 90% (D90) das partículas obtidas foram medidos usando uma analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.)

[00153] (1) Pulverização sem adição de ácido cítrico anidro ou lecitina de soja hidrogenada

[00154] 10 g de propionato de clobetasol (ponto de fusão: 193 a 200°C, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) tendo um diâmetro de partícula médio de 38,390 nm, e 110 g de cloreto de sódio (Tomita Salt K-30, Tomita Pharmaceutical Co., Ltd.) foram carregados em um amassador vertical de resfriamento com água de 1,0 L (INOUE MFG., INC.), e homogeneamente misturados. À mistura, 17 g de glicerina (Sigma-Aldrich Co. LLC.) foi adicionada com manutenção da mistura na forma de farinha, e pulverizada a 5°C por 6 horas. Subsequentemente, 0,1 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) e 5 g de 0,1% de POE-POP glicol (UNILUB 70DP-950B, NOF CORPORATION) como o dispersante, foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, que foi disperso homogeneamente usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS- 100III, AS ONE Corporation), e adicionado 45 g de água purificada para obter 50 g de uma suspensão. A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.). A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi medida para ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 285 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 231 nm, e o diâmetro de partícula de 90% (D90) de 433 nm.

[00155] (2) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro

[00156] Exceto para adição de 0,8 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como Exemplo 1 (1) a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, o produto pulverizado-amassado (farinha) foi disperso na mesma maneira como Exemplo 1. O propionato de clobetasol foi medição para a distribuição de tamanho de partículas, que mostrou um diâmetro de partícula médio (Dv) de 260 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 222 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 363 nm.

[00157] (3) Pulverização com adição de lecitina de soja hidrogenada

[00158] Exceto para adição de 10 g de lecitina de soja hidrogenada (Phospholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização e subsequente dispersão foram conduzidas na mesma maneira como Exemplo 1 (1). A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobeta- sol foi medida para ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 147 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 124 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 210 nm.

[00159] (4) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 1

[00160] Exceto para adição de 0,8 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 5 g de lecitina de soja hidrogenada (Phospholi- pon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização e subsequente dispersão foram conduzidas na mesma maneira como Exemplo 1 (1). A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi medida para ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 166 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 138 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 241 nm.

[00161] (5) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 2

[00162] Exceto para adição de 0,8 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 10 g de lecitina de soja hidrogenada (Phos- pholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como Exemplo 1 (1) a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, o produto pulverizado-amassado (farinha) foi disperso na mesma maneira como Exemplo 1. O propionato de clobetasol foi medido para a distribuição de tamanho de partículas, que mostrou um diâmetro de partícula médio (Dv) de nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 87 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 141 nm.

[00163] (6) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 3

[00164] Exceto para adição de 0,8 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 20 g de lecitina de soja hidrogenada (Phos- pholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como Exemplo 1 (1) a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, o produto pulverizado-amassado (farinha) foi disperso na mesma maneira como Exemplo 1. O propionato de clobetasol foi medido para a distribuição de tamanho de partículas, que mostrou um diâmetro de partícula médio (Dv) de 144 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 121 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 214 nm.

[00165] (7) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 4

[00166] Exceto para adição 2 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 5 g de lecitina de soja hidrogenada (Phospholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como Exemplo 1 (1) a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, 0,1 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) e 5 g de 0,01% de POE-POP glicol (UNILUB 70DP-950B, NOF CORPORATION) como o dispersante foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, e disperso homogeneamente usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), a qual 15 g de água purificada foi adicionado para obter 20 g de uma suspensão. A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.). A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clo- betasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 137 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 112 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 209 nm.

[00167] (8) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 5

[00168] Exceto para adição de 2 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 10 g de lecitina de soja hidrogenada (Phos- pholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como Exemplo 1 (1) a 5°C por 6 horas. Subsequentemente, 0,1 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) foi disperso na mesma maneira como Exemplo 1 (1). A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas. A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 129 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 112 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 179 nm.

[00169] (9) Pulverização com adição de ácido cítrico anidro e lecitina de soja hidrogenada 6

[00170] Exceto para adição de 2 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.) e 20 g de lecitina de soja hidrogenada (Phos- pholipon 90H, Lipoid GmbH) à mistura, a pulverização foi conduzida na mesma maneira como no Exemplo 1 (1) a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, 0,1 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) foi disperso na mesma maneira como Exemplo 1 (1). A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas. A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 147 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 121 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 228 nm.

[00171] A Tabela 1 mostra as condições de pulverização (1) a (9) e o diâmetro de partículas obtido como o resultado das pulverizações. Este resultado sugere que a formulação de pulverização (5) mostrou o melhor desempenho de pulverização.[Tabela 1]

[00172] (Exemplo 2) Estudo na formulação de propionato de clobeta- sol

[00173] (1) Estudo do dispersante

[00174] 0,1 g do produto pulverizado-amassado (farinha) obtido no Exemplo 1 (4) e 5 g de uma solução aquosa contendo cada dispersante mostrado na Tabela 2 foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, e dispersos homogeneamente usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), ao qual 45 g de água purificada foi adicionado para obter 50 g de uma dispersão. Cada das dispersões obtidas foi armazenada à temperatura ambiente (cerca de 25°C) por 1 dia. A transparência e a presença de precipitação foram visualmente observadas imediatamente após a dispersão e após 1 dia de armazenagem para avaliar a estabilidade das dispersões.

[00175] Os resultados são mostrados na Tabela 2. Os símbolos usados na Tabela 2 para descrever a estabilidade de armazenagem avaliada significa conforme segue. Boa: boa estabilidade, Razoável: estável imediatamente após dispersão, mas precipitação foi gerada como avan- 2os de tempo; !o%reD instá5el, tur%ide/ foi identificada imediatamente após preparação. Os resultados de teste mostrados na Tabela 2 revelaram que a suspensão usando POE-POP glicol (PLONON 407P, Pluronic F68, UNILUB 70DP-950B) e PVA (Kuraray POVAL 217C) como o dis- persante não exibiram precipitação detectada e a transparência mantida com boa estabilidade em ambas de imediatamente após dispersão e mesmo após 1 dia de armazenagem.[Tabela 2]

[00176] (2) Estudo no espessador

[00177] 0,1 g do produto pulverizado-amassado (farinha) obtido no Exemplo 1 (4), e 7,3 g de uma solução aquosa de mistura de 0,1% de Pluronic F68/0,01% Tween80 (1:1) foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, e dispersos homogeneamente por 3 minutos usando um homogeneizador ultrassônico (Sonicator S-4000, #418 microtip, power output 30, Astrason), a qual 1,5 g da solução aquosa contendo cada dos espessadores mostrados na Tabela 3 foi adicionada, e subsequentemente 13,5 g de água purificada foi adicionado para obter 22,4 g de uma dispersão. A concentração final de cada espessador foi conforme mostrado na Tabela 3. Cada das dispersões obtidas foi armazenada à temperatura ambiente (cerca de 25°C) por 4 dias, e a transparência e a presença de precipitação foram visualmente observadas para avaliar a estabilidade.

[00178] Os resultados são mostrados na Tabela 3. Os símbolos usados na Tabela 3 para descrever a estabilidade de armazenagem avaliada significa conforme seguθc >oaD %oa esta%ilidade; Ea/oá5elD esta%i- lidade é baixa, modesta precipita2io foi encontrada; !o%reD instá5el, precipitação total foi observada. Os resultados de teste mostrados na Tabela 3 revelam que a suspensão usando hidroxipropil metilcelulose e metilcellulose como o espessador não exibiu precipitação detectada, e a transparência mantida com boa estabilidade em ambos de imediatamente após dispersão e mesmo após 4 dias de armazenagem.[Tabela 3]

[00179] (3) Estudo do conservante 1

[00180] 0,1 g do produto pulverizado-amassado (farinha) obtido no Exemplo 1 (4), 7,3 g de uma solução aquosa de mistura de 0,1% de Pluronic F68/0,01% de Tween80 (1:1), e 1,43 g de 1% de solução aquosa de Kurary POVAL 217C foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, e dispersos homogeneamente por 7 minutos usando um homogeneizador ultrassônico (Sonicator S-4000, #418 microtip, power output 30, Astrason), a qual 1,43 g de 0,01% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio, 1,43 g de uma solução aquosa de 3% TC-5(R), foram adicionados. À mistura, desse modo, obtida, 100 mM de solução aquosa de citrato de sódio foi gradualmente adicionado com agitação até pH 7,0, a qual água purificada foi adicionada para obter 14,6 g de um colírio. O colírio obtido foi armazenado em um ciclo de 5°C - 25°C, ou a 40°C, por 7 dias, e a transparência foi visualmente observada para avaliar a estabilidade.

[00181] Os resultados do Exemplo 2 (3) são mostrados na Tabela 4. O "ciclo (5°C - 25°C)" na temperatura de armazenagem na Tabela 4 significa que o colírio foi armazenado repetidamente a 5°C por 6 horas e, em seguida, a 25°C por 6 horas. Os resultados do teste mostrados na Tabela 4 revelaram que o colírio preparado usando cloreto de benzalcô- nio como o conservante mantém a transparência, e tem boa estabilidade m ambos de imediatamente após preparação, e mesmo após 7 dias de armazenagem.[Tabela 4]

[00182] (Exemplo 3) Estudo do filtro-esterilização

[00183] (1) Preparação de um colírio 1

[00184] 6,0 g do produto pulverizado-amassado (farinha) obtido no Exemplo 1 (5), 408 g de solução aquosa de 0,01% de UNILUB 70DP- 950B, e 81,6 g de uma solução aquosa de 1,0% de Kurary POVAL 217C foram adicionados a um béquer de 1 L, disperso usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), e, em seguida, uniformemente disperso usando um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1,90 MPa x 5 passes, SANWA ENGINEERING LTD.). À mistura obtida, 7,48 g de uma solução aquosa de 0,1% de cloreto de benzalcô- nio e 7,48 g de uma solução aquosa de 3% de TC-5 (R) foram adicionados, que foi agitado por 5 minutos. Uma solução aquosa de 100 de mM citrato de sódio foi adicionado até pH 7,0, a qual água purificada foi adicionada com agitação para dar a quantidade total de 748 g. O colírio obtido foi medido para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.), que mostrou ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 173 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 151 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 233 nm.

[00185] (2) Preparação de um colírio 2

[00186] 6,0 g do produto pulverizado-amassado (farinha) obtido no Exemplo 1 (7), 414 g de uma solução aquosa de 0,01% de UNILUB 70DP-950B, e 82,8 g de uma solução aquosa de 1,0% de Kurary POVAL 217C, foram adicionados a um béquer de 1 L, disperso usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), e, em seguida, uniformemente disperso usando um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1, 90 MPa x 5 passes, SANWA ENGINEERING LTD.). À mistura obtida, 7,5 g de uma solução aquosa de 0,1% de cloreto de benzalcônio e solução aquosa de 7,5 g de uma solução aquosa de 3% de TC-5 (R), foram adicionado, e agitados por 5 minutos. Uma solução aquosa de 100 mM de citrato de sódio foi adicionada até pH 7,0, a qual água purificada foi adicionada com agitação para dar uma quantidade total de 750 g. O colírio obtido foi medido para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.) que mostrou um diâmetro de partícula médio (Dv) de 201 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 177 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 260 nm.

[00187] (3) Preparação de um colírio 3

[00188] À um béquer de 1 L, 6,29 g do produto pulverizado-amas- sado (farinha) obtido no Exemplo 1 (8), 415 g de uma solução aquosa de 0,01% de UNILUB 70DP-950B, e 83,0 g de uma solução aquosa de 1,0% de Kurary POVAL 217C, foram adicionado, e grosseiramente disperso usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), que foi, em seguida, uniformemente disperso usando um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1, 90 MPa x 5 passes, SANWA ENGINEERING LTD.). À mistura, 7,84 g de uma solução aquosa de 0,1% de cloreto de benzalcônio e 7,84 g de uma solução aquosa de 3% de TC-5 (R), foram adicionados, e a mistura foi agitada por 5 minutos. O pH da mistura foi ajustado com solução aquosa de 100 mM de citrato de sódio até pH 7,0. Em seguida, água purificada foi adicionada com agitação para dar a quantidade total de 784 g. O colírio obtido foi medido para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.), que mostrou um diâmetro de partícula médio (Dv) de 204 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 166 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 306 nm.

[00189] (4) Estudo na permeabilidade de filtração

[00190] Cada dos colírios preparados nos Exemplos 3 (1) a (3) foi testado para a permeabilidade de filtração usando dois tipos de membranas de filtro (Optiscale 25 e Optiscale 25 Capsule) manufaturadas por Merck Millipore Corporation. As condições de filtração foram conforme segue.

[00191] Nomes do filtro:

[00192] Optiscale 25 (pré-filtro 0,5 μm/filtro principal 0,22 μm)

[00193] Optiscale 25 Capsule (pré-filtro 0,2 μm/filtro principal 0,22 μm)

[00194] Material de filtro: fluoreto de polivinilideno (PVDF)

[00195] Área de filtração efetiva: 3,5 cm2

[00196] Pressão de teste: 0,18 MPa

[00197] O teste foi conduzido pelo método de Vmax que mede uma taxa de fluxo de permeação do colírio com o tempo para estimar a quantidade de processamento máxima do filtro, e a filtração não foi continuada até que o filtro obstrui completamente.

[00198] Os resultados são mostrados na Tabela 5. A quantidade de permeação mostrada na Tabela 5 representa o valor convertido de quantidade permeada de cada colírio através do filtro em L/m2. A proporção de permeação é uma percentagem da concentração de pós-fil- tração relativa à concentração de pré-filtração, em que as concentrações de pré- e pós-filtração de propionato de clobetasol, foram medidas por HPLC. Os resultados mostrados na Tabela 5 revelaram que todo do diâmetro de partículas podem ser esterilizados por filtração. O colírio preparado no Exemplo 3 (1) contendo o diâmetro de partícula menor do propionato de clobetasol após pulverização mostrou os valores mais altos em ambas quantidade de permeação e proporção de permeação.[Tabela 5]

[00199] (Exemplo 4) Pulverização de propionato de clobetasol

[00200] (1) Produção de nano partículas com um diâmetro de partícula médio de 100 a 150 nm

[00201] À um amassador vertical de resfriamento de água de 1,0 L (INOUE MFG., INC.), 10 g de propionato de clobetasol (ponto de fusão: 193 a 200°C, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) tendo um diâmetro de partícula médio de 38,390 nm, 110 g de cloreto de sódio (Tomita Salt K- 30, Tomita Pharmaceutical Co., Ltd.), 10 g de lecitina de soja hidroge- nada (Phospholipon 90H, Lipoid GmbH), e 0,8 g de ácido cítrico anidro (JUNSEI CHEMICAL CO., LTD.), foram carregados, e homogeneamente misturados. À mistura, 17 g de glicerina (Sigma-Aldrich Co. LLC.) foi adicionado com manutenção da mistura em um estado de farinha, e pulverizado a 5°C por 7 horas. Subsequentemente, 0,1 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) e 5 g de 0,01% de POE-POP gli- col (UNILUB 70DP-950B, NOF CORPORATION) como o dispersante, foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, que foram dispersos homogeneamente usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS- 100III, AS ONE Corporation), e 45 g de água purificada foi adicionado para obter 50 g de uma suspensão. A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula (DelsaNano S, Beckman Coulter, Inc.), e a distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 101 nm, um diâmetro de partícula de 10% (D10) de 56 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 87 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 141 nm.

[00202] (2) Produção de nano partículas com um diâmetro de partí cula médio de 100 a 150 nm

[00203] Propionato de clobetasol foi pulverizado e medido para a dis-tribuição de tamanho de partículas na mesma maneira como (1). A dis-tribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 108 nm, um diâmetro de partícula de 10% (D10) de 57 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 89 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 151 nm.

[00204] (3) Produção de nano partículas com um diâmetro de partícula médio de 250 a 300 nm

[00205] Propionato de clobetasol foi pulverizado e medido para a dis-tribuição de tamanho de partículas na mesma maneira como (1), exceto para nenhuma adição de 10 g de lecitina de soja hidrogenada (Phos- pholipon 90H, Lipoid GmbH). A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 260 nm, um diâmetro de partícula de 10% (D10) de 143 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 222 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 363 nm.

[00206] (4) Produção de nano partículas com um diâmetro de partícula médio de 500 a 700 nm

[00207] No Mortar Grinder RM 200 (Retsch GmbH), 1 g de propionato de clobetasol tendo um diâmetro de partícula médio de 38,390 nm, e 2 g de uma mistura de cloreto de sódio e glicerina (cloreto de sódio 11 g, glicerina 2 g), foram carregados e pulverizados repetidamente nove ve- zes por 1 minuto por operação à temperatura ambiente. Subsequentemente, 0,04 g do produto pulverizado-amassado obtido (farinha) e 5 g de 0,01% de POE-POP glicol (UNILUB 70DP-950B) como o disper- sante, foram pesados em uma garrafa com rosca de 50 mL, que foram dispersos homogeneamente usando um dispositivo ultrassônico. À mistura dispersa, 45 g de água purificada foi adicionada para obter 50 g de uma suspensão. A suspensão obtida foi medida para a distribuição de tamanho de partículas usando um analisador de distribuição de tamanho de partícula, e a distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foi verificada ter um diâmetro de partícula médio (Dv) de 637 nm, um diâmetro de partícula de 90% (D10) de 233 nm, um diâmetro de partícula mediano (D50) de 475 nm, e um diâmetro de partícula de 90% (D90) de 1129 nm.

[00208] (Exemplo 5) Preparação de uma suspensão oftálmica contendo nano partícula de propionato de clobetasol

[00209] (1) Preparação de 0,05% de suspensão de nano partícula oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 100 nm)

[00210] Em um béquer, 2,4 g do produto pulverizado-amassado (farinha) produzido no Exemplo 4 (1), 150 g de uma solução aquosa de 0,01% de UNILUB e 30 g de uma solução aquosa de 1,0% de PVA (Merck KGaA), foram pesados, e homogeneamente dispersos por cerca de 5 minutos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation) para dar uma dispersão bruta, que foi processado usando um homogeneizador de alta pressão (SANWA ENGINEERING LTD., L01-YH1), para obter uma dispersão. À dispersão, 2,5 g de uma solução aquosa de 0,1% de cloreto de benzalcônio (BAC) e 2,5 g de uma solução aquosa de 3,0% de hidroxipropil metilcelulose (HPMC), foram adicionados, ao qual subsequentemente 500 mM de citrato de sódio, foi gradualmente adicionado até pH 7,0. Água para injeção foi, em seguida, adicionada para dar uma quantidade total de 417,6 g para obter 0,05% de nanosuspensão oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 100 nm). A suspensão oftálmica obtida tem uma proporção de pressão osmótica de 0,8.

[00211] (2) Preparação de 0,05% de nanosuspensão oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 300 nm)

[00212] Em um béquer, 2,1 g do produto pulverizado-amassado (farinha) produzido no Exemplo 4 (3), 150 g de uma solução aquosa de 0,01% de UNILUB e 30 g de uma solução aquosa de 1,0% de PVA, foram pesados, e homogeneamente dispersos por cerca de 5 minutos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation) para dar uma dispersão bruta, que foi processado usando um homogeneizador de alta pressão (SANWA ENGINEERING LTD., L01- YH1), para obter uma dispersão. À dispersão, 2,5 g de uma solução aquosa de 0,1% de BAC e 2,5 g de uma solução aquosa de 3,0% de HPMC foram adicionados, a qual subsequentemente 500 mM de citrato de sódio foi gradualmente adicionado até pH 7,0. Água para injeção foi, em seguida, adicionada para dar uma quantidade total de 405,4 g para obter 0,05% de nanosuspensão oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 300 nm). A suspensão oftálmica obtida tem uma proporção de pressão osmótica de 0,8.

[00213] (3) Preparação de 0,05% de nanosuspensão oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 600 nm)

[00214] Em um béquer, 0,52 g do produto pulverizado-amassado (farinha) produzido no Exemplo 4 (4), 150 g de água para injeção, e 30 g de uma solução aquosa de 1,0% de PVA foram pesados, e homogeneamente dispersos por cerca de 5 minutos usando um dispositivo ultras- sônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation) para dar uma disper- são bruta, que foi processada usando um homogeneizador de alta pressão (SANWA ENGINEERING LTD., L01-YH1) para obter uma dispersão. À dispersão, 2,5 g de uma solução aquosa de 0,1% de BAC e uma 2,5 g de uma solução aquosa de 3,0% de HPMC foram adicionados, a qual subsequentemente 500 mM de citrato de sódio foi gradualmente adicionado até pH 7,0. À mistura obtida, 1,45 g de cloreto de sódio foi adicionado, e, em seguida, água para injeção foi adicionada para dar uma quantidade total de 245 g para obter 0,05% de nanosuspensão oftálmica (um diâmetro de partícula médio de cerca de 600 nm). A suspensão oftálmica obtida tem uma proporção de pressão osmótica de 0,9.

[00215] A Tabela 6 mostra a composição de cada da 0,05% de nano- suspensões oftálmicas de propionato de clobetasol preparadas nos Exemplos 5 (1) a (3).[Tabela 6]

[00216] (Exemplo 6) Teste de Farmacocinética Intraocular

[00217] As nanosuspensões oftálmicas preparadas nos Exemplos 5(1) a 5(3) foram oftalmicamente administradas nos olhos de coelhos (Kbl:JW, macho) para testar uma farmacocinética intraocular (n=3). A pálpebra inferior de cada coelho foi suavemente levantada, a substância de teste foi oftalmicamente administrada no saco da conjuntiva do olho esquerdo usando uma pipeta (administração ocular única, 50 μL/olho), e as pálpebras superior e inferior foram suavemente fechadas após ad-ministração e mantidas por cerca de 2 segundos. Após 15 minutos, 30 minutos, 60 minutos, e 90 minutos a partir da administração, os coelhos foram anestesiados por administração de uma solução aquosa de pen-tobarbital sódio (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), via suas veias auri-culares e, seguida, eutanizados por sangramento. Os olhos foram total-mente lavados com água para injeção, o humor aquoso (olho esquerdo) foi coletado, e subsequentemente a conjuntiva (olho esquerdo) foi coletada. Cada do humor aquoso coletado, e conjuntiva foram pesados por um equilíbrio de força eletrônico, e em seguida, congelados por nitrogênio líquido, que foi armazenado em um congelador ultra frio (faixa aceitável: -70°C ou mais baixa) até medição. A concentração de propionato de clobetasol no humor aquoso e conjuntiva foi medida por LC-MS/MS.

[00218] (Pré-tratamento de Humor aquoso)

[00219] À 25 μL do humor aquoso coletado, 20 μL de metanol e 20 μL de uma solução de uma substância padrão interna (prednisolona), foram adicionados e totalmente agitados. À mistura resultante, 100 μL de acetonitrila foi adicionado, e totalmente agitado. Após centrifugação (13100 x g, 4°C, 5 minutos), 10 μL do sobrenadante foi injetado no LC- MS/MS.

[00220] (Pré-tratamento de Conjuntiva)

[00221] À conjuntiva coletada, água ultrapura foi adicionada em um volume nove vezes do peso úmido da conjuntiva, e homogeneizada. À 25 μL do homogenado, 25 μL de metanol e 20 μL de uma solução de uma substância padrão interna (prednisolona) foram adicionados, e to- talmente agitado. À mistura resultante, 100 μL de acetonitrila foi adicionado, e totalmente injetado. Após centrifugação (13100 x g, 4°C, 5 minutos), 20 μL do sobrenadante foi injetado no LC-MS/MS.

[00222] (Condições de Medição em LC-MS/MS)

[00223] (Condições de Medição em HPLC)

[00224] Coluna: CAPCELL PAK C18 MGIII (5 μm, 2 mm x 150 mm, Shiseido Company, Limited)

[00225] Fase Móvel A: 0,2% de solução aquosa de ácido fórmico

[00226] Fase Móvel B: Acetonitrila

[00227] Programa de Tempo de Gradiente: As seguintes proporções de volume foram empregadas.

[00228] Como os resultados do teste de farmacocinética intraocular das nanosuspensões oftálmicas preparadas nos Exemplos 5(1) a 5(3), as mudanças do curso do tempo da concentração da droga no humor aquoso são mostradas na Figura 1 e Tabela 7, e as mudanças do curso do tempo da concentração da droga na conjuntiva são mostradas na Figura 2 e Tabela 8. A concentração da droga no humor aquoso indica a dependência do diâmetro de partícula. A concentração da droga no humor aquoso tende a aumentar com a diminuição do diâmetro de partícula. Desse modo, é mostrado que um diâmetro de partícula menor é mais adequado para alcançar melhor migração do propionato de clobe- tasol nano-dimensionado oftalmicamente administrado no humor aquoso. A concentração da droga na conjuntiva também mostrou uma tendência para a dependência do diâmetro de partícula, que indica que um diâmetro de partícula menor é mais adequado para transferibilidade do propionato de clobetasol nano-dimensionado oftalmicamente administrado na conjuntiva. [Tabela 7][Tabela 8]

[00229] (Exemplo 7) Exame de Influência de Espessador na Nano- suspensão oftálmica

[00230] Desde que o Exemplo 6 mostrou que o diâmetro de partícula médio do propionato de clobetasol nano-dimensionado é adequadamente cerca de 100 nm, usando suspensão oftálmicas contendo propionato de clobetasol nano-dimensionado com um diâmetro de partícula médio de cerca de 100 nm, uma farmacocinética intraocular foi testada para várias viscosidades de nanosuspensões oftálmicas que foram controladas pelo emprego de vários espessadores.

[00231] (1) Preparação de Nanosuspensão oftálmica P

[00232] Em um béquer, 5 g do produto pulverizado-amassado (farinha) produzido no Exemplo 4(2), 335 g de 0,01% de solução aquosa de UNILUB, e 67 g de 1,0% de solução aquosa de PVA foram pesados, que foram homogeneamente dispersos por cerca de 5 minutos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um ho- mogeneizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) para obter uma dispersão. À dispersão, 6,7 g de 0,1% de solução aquosa de BAC e 201 g de uma solução aquosa de 1,0% de HPMC (60SH-50) foram adicionados, e, em seguida, 500 mM de citrato de sódio foi gradualmente adicionado para ajustar o pH a 7,0. Subsequentemente, água para injeção foi adicionada para dar uma quantidade total de 670 g para obter 0,05% de nanosuspensão oftálmica P. A viscosidade da suspensão oftálmica foi cerca de 2 mPa-S.

[00233] (2) Preparação de Nanosuspensão oftálmica Q

[00234] 0,05% de nanosuspensão oftálmica Q foi preparada na mesma maneira como o Exemplo 7(1), exceto pela substituição de "100,5 g de uma solução aquosa de 1,0% de HPMC (60SH-4000)" por "201 g de uma solução aquosa de 1,0% de HPMC (60SH-50)". A viscosidade da suspensão oftálmica foi cerca de 3 mPa-S.

[00235] (3) Preparação de Nanosuspensão oftálmica R

[00236] 0,05% de nanosuspensão oftálmica R foi preparada na mesma maneira como o Exemplo 7(1), exceto pela substituição de "134 g de uma solução aquosa de 1,0% de MC (SM-100)" por "201 g de uma solução aquosa de 1,0% de HPMC (60SH-50)". A viscosidade da sus-pensão oftálmica foi cerca de 2 mPa-S.

[00237] (4) Preparação de Nanosuspensão oftálmica S

[00238] 0,05% de nanosuspensão oftálmica S foi preparada na mesma maneira como o Exemplo 7(1), exceto pela substituição de "100,5 g de uma solução aquosa de 1,0% MC (SM-4000)" por "201 g de uma solução aquosa de 1,0% de HPMC (60SH-50)". A viscosidade da suspensão oftálmica foi cerca de 3 mPa-S.

[00239] As composições do 0,05% de nanosuspensões oftálmicas de propionato de clobetasol preparadas nos Exemplos 7(1) a 7(4) são mos-tradas na seguinte Tabela 9.[Tabela 9]

[00240] (5) Teste de Farmacocinética Intraocular

[00241] As nanosuspensões oftálmicas preparadas nos Exemplos 7(1) a 7(4) foram submetidas a um teste de farmacocinética intraocular de acordo com o método descrito no Exemplo 6.

[00242] (6) Resultados

[00243] As mudanças do curso do tempo da concentração da droga no humor aquoso são mostradas na Figura 3 e Tabela 10, e as mudanças do curso do tempo da concentração da droga na conjuntiva são mostradas na Figura 4 e Tabela 11. Os resultados mostrados na Figura 3 demonstraram que viscosidade mais alta de uma suspensão oftálmica mostrou melhor transferibilidade da suspensão oftálmica no humor aquoso. Os resultados mostrados na Figura 4 demonstraram que viscosidade mais alta de uma suspensão oftálmica mostrou melhor transferibilidade da suspensão oftálmica na conjuntiva na fase inicial (nos primeiros 15 minutos).[Tabela 10][Tabela 11]

[00244] (Exemplo 8) Eficácia de Nanosuspensão oftálmica de Clobe- tasol para Modelo de coelho de uveíte induzida por BSA

[00245] (1) Pulverização de Propionato de clobetasol

[00246] Propionato de clobetasol foi pulverizado na mesma maneira como o Exemplo 4(1) para produzir um produto pulverizado-amassado (farinha) contendo partículas de propionato de clobetasol com a distribuição de tamanho de partícula tendo o diâmetro de partícula médio (Dv) de 132 nm, o diâmetro de partícula de 90% (D10) de 65 nm, o diâmetro de partícula mediano (D50) de 109 nm, e o diâmetro de partícula de 90% (D90) de 186 nm.

[00247] (2) Preparação de 0,05% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00248] Em um béquer, 2,4 g do produto pulverizado amassado (farinha) preparado em (1) acima, 167,5 g de 0,01% de solução aquosa de POE-POP glicol, e 33,5 g de 1,0% de solução aquosa de PVA foram pesados, e dispersos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS- 100III, AS ONE Corporation) para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) cinco vezes para obter uma dispersão de farinha. À dispersão, 2,8 g de 0,1% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio, e 56,4 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose foram adicionados, e, em seguida, 500 mM de solução aquosa de citrato de sódio foi gradualmente adicionado para ajustar o pH a 7,0. Em seguida, 1,5 g de glicerina foi adicionado para ajustar a proporção de pressão osmótica a 1,0, e água para injeção foi adicionada para dar 282,1 g em uma quantidade total de 0,05% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da suspensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00249] (3) Eficácia Usando Modelo de coelho de uveíte induzida por BSA

[00250] Coelhos (Std:JW/CSK) foram anestesiados por uma combinação de hidrocloreto de cetamina (500 mg de Ketalar para injeção intramuscular) e xilazina (2% de injeção Celactal), e 0,4% de hidrocloreto de oxibuprocaína (solução oftálmica de Benoxil 0,4%) foi oftalmica- mente administrada na pálpebra direita de cada coelho para anestesiar. Após perda de reflexo corneal, 0,1 mL de 10% de solução salina fisiológica de BSA foi injetada na região central do corpo vítreo do olho direito para causar uveíte (a primeira indução). A partir do próximo dia, 50 μL de uma substância de controle (solução salina fisiológica), 50 μL da substância de teste (o 0,05% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol preparada em (2) acima), e 50 μL de uma substância de controle positivo (0,1% de solução oftálmica de fluorometolona comercialmente disponível) foram cada pesados com uma micropipeta e administrados na pálpebra direita duas vezes ao dia (a 9:00 e 17:00 em princípio) por 29 dias consecutivos. Os olhos esquerdos foram não-tra- tados, e n = 5 para cada grupo.

[00251] Durante 4 dias a partir do 15° ao 18° dia após a primeira ad-ministração de BSA, os sintomas de inflamação do olho externo (o exterior da córnea) e o olho interno (o interior da córnea) foram contados de acordo com os critérios de avaliação de inflamação ocular especificados por Yamauchi et al. (Hideyasu Yamauchi et al. (1973), Folia ophthalmologica Japonica, 24, 969-979) para avaliar o efeito anti-infla- matório. No 27° dia, uma solução salina fisiológica de 1,25% de BSA foi injetada, via as veias auriculares a uma dose de 2 mL/kg para causar uveíte (a segunda indução). No 29° dia, os sintomas de inflamação dos olhos externo e interno foram contados na mesma maneira como descrito acima para avaliar o efeito anti-inflamatório.

[00252] (4) Resultados

[00253] Os resultados são mostrados na Figuras 5 a 7, que demonstram que o 0,05% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobe- tasol tem o mesmo efeito anti-inflamatório no modelo de inflamação dos olhos externo e interno como o 0,1% de solução oftálmica de fluorome- tolona.

[00254] (Exemplo 9) Eficácia para Modelo de Rato de Conjuntivite Induzida por Croton

[00255] (1) Preparação de 0,1% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00256] Em um béquer, 4,2 g do produto pulverizado-amassado (farinha) preparado no Exemplo 8(1) acima, 150 g de 0,01% de solução aquosa de polioxietileno polioxipropileno glicol, e 30 g de 1,0% de solução aquosa de PVA foram pesados, e foram dispersos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation) para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homoge- neizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) cinco vezes para obter uma dispersão de farinha. À dispersão, 2,4 g de 0,1% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio e 48,3 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose foram adicionados, e, em seguida, 500 mM de solução aquosa de citrato de sódio foi gradualmente adicionado para ajustar o pH a 7,0. Em seguida, água para injeção foi adicionada para dar 241,4 g em quantidade total de 0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da suspensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00257] (2) Eficácia Usando Modelo de Rato de Conjuntivite Induzida por Croton

[00258] Etanol (agente inflamatório) foi oftalmicamente administrado em ambos os olhos dos ratos (Wistar, fêmea) a uma dose de 2,5 μL/local para causar inflamação a -41 minutos e a 0 minuto, duas vezes no total. A substância de teste (0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol preparada em (1)) e uma substância de controle positivo (0,1% de dexametasona comercialmente disponível) foram oftalmica- mente administrada em ambos os olhos dos ratos com uma micropipeta a uma dose de 5 μL/local duas vezes, 1 minute antes da primeira admi-nistração do agente inflamatório (a -42 minutos) e 1 minute antes da segunda administração do agente inflamatório (a -1 minute). Um grupo de controle normal (não causa inflamação sem administração de droga) e um grupo de controle de inflamação (causa inflamação sem administração de droga) foram usados como grupos de controle, e n = 10 para cada grupo.

[00259] 10% de solução de etanol de óleo de croton (agente de indução de inflamação) foi oftalmicamente administrado em ambos os olhos dos ratos a uma dose de 5 μL/local para induzir inflamação três vezes no total, 40 minutos após, 100 minutos após, e 160 minutos após a segunda administração do agente inflamatório. Após 2 horas a partir da última administração dos 10% de solução de etanol de óleo de croton, os ratos foram eutanizados pelo deslocamento cervical sob anestesia de isoflurano, e, em seguida, a conjuntiva foi coletada de ambos os olhos. O peso da conjuntiva foi medida. O efeito anti-inflamatório da substância de teste foi avaliado a partir do peso conjuntival comparando com o peso conjuntival do grupo de controle de inflamação.

[00260] Os resultados são mostrados na Figura 8, que mostram que o peso conjuntival do grupo de controle de inflamação foi maior do que aquele do grupo de controle normal, e, desse modo, inflamação foi confirmada para ser induzida no modelo. Os pesos conjuntivais de ambos dos grupos em que a substância de teste (0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol) foi administrada, e em que a substância de controle positivo (0,1% de dexametasona) foi administrada, foram menores do que aqueles do grupo de controle de inflamação. Desse modo, 0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clo- betasol do presente pedido foi mostrado ser capaz de suprimir edema da conjuntiva em administração oftalmicamente nos olhos de modelo de ratos de conjuntivite induzida por croton.

[00261] (Exemplo 10) Eficácia para Modelo de Rato de Edema Con- juntival Induzida por Carraginina

[00262] (1) Preparação de 0,1% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00263] Em um béquer, 4,3 g do produto pulverizado amassado (farinha) preparado no Exemplo 8(1) acima, 150 g de 0,01% de solução aquosa de polioxietileno polioxipropileno glicol, e 30 g de 1,0% de solução aquosa de PVA, foram pesados, e foram dispersos usando um dispositivo ultrassônico (MODEL VS-100III, AS ONE Corporation), para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homoge- neizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) cinco vezes para obter uma dispersão de farinha. À dispersão, 2,4 g de 0,1% solução aquosa de cloreto de benzalcônio e 47,9 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose foram adicionados, e, em seguida, 500 mM de solução aquosa de citrato de sódio foi gradualmente adicionado para ajustar o pH a 7,0. Em seguida, água para injeção foi adicionada para dar 239,5 g em uma quantidade total de 0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da suspensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00264] (2) Eficácia Usando Modelo de Rato de Edema Conjuntival Induzido de Carraginina

[00265] Uma substância de controle (solução salina fisiológica), as substâncias de teste (o 0,05% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol preparada no Exemplo 8(2) e o 0,1% de nanosus- pensão oftálmica de propionato de clobetasol preparada no Exemplo 10(1)), e uma substância de controle positivo (0,1% de solução oftálmica de fluorometolona comercialmente disponível) foram administradas nos olhos direitos dos ratos (Wistar, macho) usando uma micropipeta (n = 8 para cada grupo). Após 15 minutos a partir da administração oftálmica, 50 μL de uma solução salina fisiológica de 1% de carraginina (substância inflamatória) foi subcutaneamente administrada na conjuntiva palpebral do olho direito dos ratos sob anestesia de isoflurano para gerar um modelo de edema conjuntival. Após 4 horas a partir da administração da substância inflamatória, os ratos foram eutanizados por sangramento da aorta abdominal sob anestesia de isoflurano, e cada área edematosa, incluindo a pálpebra direita e glândulas lacrimais acessórias (glândulas de Harderian) foi isolada. A conjuntiva palpebral direita foi, em seguida, separada da área edematosa, e o peso da conjuntiva foi medido. Os pesos conjuntivais palpebral determinados foram comparados para avaliar o efeito anti-inflamatório.

[00266] Os resultados da medição do peso conjuntival palpebral são mostrados na Figura 9, que demonstra o efeito anti-inflamatório dependente da concentração da nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol, e mostrou que o 0,1% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol exibe substancialmente o mesmo grau de atividade anti-inflamatória como a substância de controle positivo, o 0,1% de solução oftálmica de fluorometolona.

[00267] (Exemplo 11) Eficácia de Nanosuspensão oftálmica de Clo- betasol para Modelo de Coelho de Uveíte Induzida por LPS

[00268] (1) Pulverização de Propionato de clobetasol

[00269] Em um amassador vertical resfriado por água de 1,0 L (ma-nufaturado por INOUE MFG., INC.), 50 g de propionato de clobetasol (FARMABIOS S.p.A.), 550 g de cloreto de sódio (Tomita Salt K-30, To- mita Pharmaceutical Co., Ltd.), 4 g de ácido cítrico anidro (Sigma-Aldrich Co. LLC.), e 50 g de lecitina de soja hidrogenada (Phospholipon 90H, Lipoid GmbH), foram adicionados, e foram homogeneamente misturados. À mistura, 70 g de glicerina (Sigma-Aldrich Co. LLC.) foi adicionada com manutenção da mistura na forma de farinha, e pulverizada a 5°C por 5 horas. O produto pulverizado-amassado resultante (farinha) foi disperso usando um dispersante para dar uma suspensão na mesma maneira como o Exemplo 1(1), e a distribuição de tamanho de partícula do propionato de clobetasol foi medida. A distribuição de tamanho de partículas de propionato de clobetasol foram verificadas ter o diâmetro de partícula médio (Dv) de 132 nm, o diâmetro de partícula de 90% (D10) de 67 nm, o diâmetro de partícula mediano (D50) de 110 nm, e o diâmetro de partícula de 90% (D90) de 184 nm.

[00270] (2) Preparação de 0,002% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00271] Em um béquer, 0,076 g do produto pulverizado-amassado (farinha) preparado em (1), 31,3 g de 0,01% de solução aquosa of Po- loxamer 407, 25,0 g de 1,0% de solução aquosa de PVA, 0,217 g de cloreto de sódio, e 93,3 g de água para injeção, foram pesados, e foram dispersos usando um dispositivo ultrassônico para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) quatro vezes para obter a dispersão de farinha. Em um béquer, 110,67 g da dispersão de farinha foi pesada, a qual 1,85 g de 0,1% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio, e 36,91 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose foram adicionados. Uma solução aquosa 1 M de citrato de sódio foi, em seguida, gradualmente adicionada para ajustar o pH a 7,0. Em seguida, glicerina foi adicionada para ajustar a proporção de pressão osmótica a 1,0, e água para injeção foi adicionada para dar 184,6 g em uma quantidade total de 0,002% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da suspensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00272] (3) Preparação de 0,01% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00273] Em um béquer, 0,38 g do produto pulverizado-amassado (farinha) preparado em (1), 62,5 g de 0,01% de solução aquosa de Po- loxamer 407, 25,0 g de 1,0% de solução aquosa de PVA, e 62,5 g de água para injeção, foram pesados, e foram dispersos usando um dispositivo ultrassônico para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homogeneizador de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) quatro vezes para obter uma dispersão de farinha. Em um béquer, 119,44 g da dispersão de farinha foi pesado, a qual 1,98 g de 0,1% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio e 39,70 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose, foram adicionados. Uma solução aquosa 1 M de citrato de sódio foi, em seguida, gradualmente adicionada para ajustar o pH a 7,0. Após isto, glicerina foi adicionada para ajustar a proporção de pressão osmótica a 1,0, e água para injeção foi adicionada para dar 198,5 g em quantidade total de 0,01% de nano- suspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da suspensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00274] (4) Preparação de 0,05% de Nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol

[00275] Em um béquer, 1,84 g do produto pulverizado amassado (farinha) preparado em (1), 125,0 g de 0,01% de solução aquosa de Po- loxamer 407, e 25,0 g de 1,0% de solução aquosa de PVA, foram pesados, e foram dispersos usando um dispositivo ultrassônico para dar uma dispersão bruta. A dispersão bruta foi processada por um homogeneiza- dor de alta pressão (L01-YH1, SANWA ENGINEERING LTD.) quatro vezes para obter uma dispersão de farinha. Em um béquer, 116,79 g da dispersão de farinha foi pesado, a qual 1,92 g de 0,1% de solução aquosa de cloreto de benzalcônio e 38,45 g de 1,0% de solução aquosa de metil celulose, foram adicionados. Uma solução aquosa 1 M de citrato de sódio foi, em seguida, gradualmente adicionada para ajustar o pH a 7,0. Em seguida, glicerina foi adicionada para ajustar a proporção de pressão osmótica a 1,0, e água para injeção foi adicionada para dar 192,3 g em quantidade total de 0,05% de nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol. A composição e propriedades físicas da sus-pensão oftálmica são mostradas nas seguintes tabelas.

[00276] (5) Eficácia para Modelo de Coelho de Uveíte Induzida por LPS

[00277] Coelhos (Kbs:JW) foram anestesiados por administração de pentobarbital sódio (Somnopentyl), via suas veias auriculares, e 0,4% de hidrocloreto de oxibuprocaína (solução oftálmica de Benoxil) foi, em seguida, oftalmicamente administrada em ambos os olhos dos coelhos. Após perda de reflexo corneal, um espéculo de cobertura foi fixado a cada coelho, e 0,02 mL de LPS (Lipopolissacarídeo, de E.Coli O55: sigma) ajustado a uma concentração de 2 μg/mL foi administrado no corpo vítreo usando uma seringa com uma agulha 30G para causar in-flamação. Uma substância de controle (salina), uma substância de controle positivo (durezol (marca registrada): 0,05% de emulsão oftálmica de difluprednato manufaturada por Alcon Laboratories Inc.), e a substância de teste (0,05% de suspensão oftálmica) preparada em (4) acima foram oftalmicamente administrada em ambos os olhos dos coelhos usando uma micropipeta a uma dose de 50 μL, 4 horas antes, 15 minutos após, 6 horas após, e 8 horas após a administração de LPS. Para cada grupo, ambos os olhos de 6 coelhos foram usados de modo a ajustar n = 12 para cada grupo. A 24 horas após a administração de LPS, os coelhos foram eutanizados por administração excessiva de pentobarbital sódio (Somnopentyl), e a quantidade total de humor aquoso de câmara anterior foi coletada usando uma seringa com uma agulha 26G. Os globos oculares foram isolados e incisados ao redor do limbo corneoscleral, e o corpo vítreo foi coletado usando uma seringa de 1 mL. As concentrações de PGE2 nas amostras coletadas de ambos humor aquoso de câmara anterior e corpo vítreo foram medidas por ensaio ELISA (Prostaglandin E2 Express ELISA Kit: cayman).

[00278] (6) Resultados

[00279] A Figura 10 mostra os resultados da medição da concentração de PGE2 em humor aquoso (avaliação de segmento de olho anterior), e a Figura 11 mostra os resultados da medição da concentração de PGE2 no corpo vítreo (avaliação de segmento de olho posterior). Estes resultados demonstraram que quando oftalmicamente administrada nos olhos de modelo de coelhos de uveíte induzida por LPS, a nanosus- pensão oftálmica de propionato de clobetasol da presente invenção exibe o mesmo nível de ação anti-inflamatória na uveíte (segmento de olho anterior) como o controle positivo, Durezol (marca registrada). Adicionalmente, a concentração de PGE2 no corpo vítreo foi mais baixa no grupo administrado nanosuspensão oftálmica de propionato de clobeta- sol da presente invenção do que para o grupo administrado Durezol (marca registrada), que demonstrou que a nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol da presente invenção exibe atividade anti-in- flamatória mais alta na uveíte (segmento de olho posterior) do que Du- rezol (marca registrada).

[00280] (Exemplo 12) Eficácia de Nanosuspensão oftálmica de Clo- betasol para Modelo de Coelho de Inflamação de Câmara Anterior de Punção

[00281] (1) Eficácia para Modelo de Coelho de Inflamação de Câmara Anterior de Punção

[00282] Uma substância de controle (salina), uma substância de controle positivo (Durezol (marca registrada)), e as substâncias de teste preparadas nos Exemplos 11(2), 11(3), e 11(4) (0,002%, 0,01%, e 0,05% de suspensões oftálmicas) foram administradas em ambos os olhos de coelhos (Kbs:JW) usando uma micropipeta uma vez em uma dose de 50 μL. Para cada grupo, ambos os olhos de 6 coelhos foram usados de modo a ajustar n = 12 para cada grupo. Após 4 horas a partir da administração, 0,4% de hidrocloreto de oxibuprocaína (Solução oftálmica de Benoxil) foi oftalmicamente admninistrado em ambos os olhos dos coelhos. Após perda de reflexo corneal, um espéculo de cobertura foi fixado a cada coelho, e uma seringa com uma agulha 26G foi inserida na câmara anterior para coletar a quantidade total do humor aquoso de câmara anterior e, desse modo, causar inflamação do segmento de olho anterior. Após 3 horas, a quantidade total do humor aquoso de câmara anterior foi coletada novamente usando uma seringa com uma agulha 26G, e a concentração de proteína no humor aquoso de câmara anterior foi medida por ensaio de BCA(PierceTM BCA Protein Assay Kit: Thermo Fisher Scientific Inc.). A concentração de proteína no humor aquoso de câmara anterior foi medida por ensaio de BCA para o grupo (Normal) em que nenhuma inflamação do olho anterior foi causada por punção da câmara anterior.

[00283] (2) Resultados

[00284] A Figura 12 mostra os resultados da medição da concentração de proteína no humor aquoso da câmara anterior, que demonstra que as nanosuspensões oftálmicas de propionato de clobetasol (0,002%, 0,01%, e 0,05%) da presente invenção exibem o mesmo nível de ação anti-inflamatória como o controle positivo, Durezol (marca registrada) (0,05% de difluprednato) na administração oftalmicamente nos olhos de modelo de coelhos de inflamação da câmara anterior induzida por punção.

[00285] (Exemplo 13) Eficácia de Nanosuspensão oftálmica de Clo- betasol para Modelo de Coelho de Uveíte Induzida por LPS

[00286] (1) Eficácia para Modelo de Coelho de Uveíte Induzida por LPS

[00287] Coelhos (Kbs:JW) foram anestesiados por administração de sódio pentobarbital (Somnopentyl), via suas veias auriculares, e 0,4% de hidrocloreto de oxibuprocaína (solução oftálmica de Benoxil) foi, em seguida, oftalmicamente administrada em ambos os olhos dos coelhos. Após perda de reflexo corneal, um espéculo de cobertura foi fixado a cada coelho, no corpo vítreo do qual 0,02 mL de LPS (Lipopolissacarí- deo, de E.Coli O55: sigma) ajustado a uma concentração de 2 μg/mL, foi administrado usando uma seringa com uma agulha 30G para causar inflamação. Por 6 dias consecutivos a partir do próximo dia da adminis-tração de LPS, uma substância de controle (salina), uma substância de controle positivo (Durezol: 0,05% de emulsão oftálmica de fluprednato manufaturada por Alcon Laboratories Inc.), e a substância de teste (0,05% de suspensão oftálmica) preparada no Exemplo 11(4), foram of- talmicamente administrados em ambos os olhos dos coelhos usando uma micropipeta a uma dose de 50 μL em uma tabela de b.i.d (administração diária duas vezes) em que a administração foi feita a 9:00 e 17:00, e em uma tabela de q.i.d (administração diária quatro vezes) em que a administração foi feita a 9:00, 12:00, 15:00, e 18:00. Para cada grupo, ambos os olhos de 4 ou 5 coelhos foram usados de modo a ajustar n = 8 ou 10 para cada grupo. Após 24 horas a partir da administração de LPS, os coelhos foram eutanizados por administração excessiva de pentobarbital sódio (Somnopentyl). Seus globos oculares foram isolados e incisados ao redor do limbo corneoscleral, e o corpo vítreo foi coletado usando uma seringa de 1 mL. As concentrações de PGE2 nas amostras coletadas foram medidas por ensaio ELISA (Prostaglandin E2 Express ELISA Kit: cayman).

[00288] (2) Resultados

[00289] A Figura 13 mostra os resultados da medição da concentração de PGE2 no corpo vítreo (avaliação do segmento de olho posterior). Para o caso da substância de controle, a concentração de PGE2 no corpo vítreo foi 345,6 pg/ml. A administração diária duas vezes e a administração diária quatro vezes das concentrações de PEG2 produzem Durezol de controle positivo no corpo vítreo de 256,35 pg/ml e 179,4 pg/ml, respectivamente, que significa que o Durezol tem uma tendência a aperfeiçoamento. A administração diária duas vezes e a administração diária quatro vezes da nanosuspensão oftálmica de propionato de clo- betasol da presente invenção produziram concentrações de PGE2 no corpo vítreo de 219,2 pg/ml e 167,6 pg/ml, respectivamente, que significa que a suspensão oftálmica exibiu atividade anti-inflamatória mais alta do que o Durezol. Foi demonstrado que a nanosuspensão oftálmica de propionato de clobetasol da presente invenção exibe ação anti-infla- matória mais alta do que o Durezol de controle positivo na administração oftalmicamente nos olhos de modelo de coelhos de uveíte induzida por LPS em uma tabela b.i.d (administração diária duas vezes), bem como em uma tabela q.i.d (administração diária quatro vezes).

Claims (20)

1. Suspensão aquosa, caracterizada pelo fato de compreender nano partículas de um composto de glucocorticosteroide; um sal fisiologicamente aceitável; glicerina; lecitina de soja hidrogenada; e ácido cítrico anidro; em que um diâmetro de partícula médio das nanopartículas é 300 nm ou menos e um diâmetro de partícula D90 das nanopartículas é 450 nm ou menos.

2. Suspensão aquosa caracterizada pelo fato de compreender nanopartículas de um composto glucocorticosteróide, um diâmetro de partícula médio das nanopartículas é 300 nm ou menos e um diâmetro de partícula D90 das nanopartículas é 450 nm ou menos, e as nano partículas são produzidas por mistura do composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, glicerina, lecitina de soja hidrogenada e ácido cítrico anidro.

3. Suspensão aquosa, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o composto de glucocorticosteroide é uma ou mais substâncias selecionadas de propionato de clobetasol, diacetato de diflorasona, propionato de dexametasona, difluprednato, fluorato de mometasona, valerato de diflucortolona, butirato propionato de betametasona, fluocinonida, butirato propionato de hidrocortisona, dipropionato de beclometasona, propionato de deprodona, valerato de betametasona, valerato de dexametasona, valerato acetato de prednisolona, fluocinolona acetonide, butirato de hidrocortisona, butirato de clobetasona, dipropionato de alclometasona, triamcinolona acetonide, pivalato de flumetasona, prednisolona e hidrocortisona.

4. Suspensão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de conter adicionalmente um estabilizador de dispersão.

5. Suspensão aquosa, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o estabilizador de dispersão é polioxietileno polioxipropileno glicol e/ou polivinil álcool.

6. Suspensão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de conter adicionalmente um modificador de viscosidade.

7. Suspensão aquosa, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o modificador de viscosidade é uma ou mais substâncias selecionadas de metil celulose, hidroxipropil metilcelulose, e polivinil álcool.

8. Suspensão aquosa, de acordo com a reivindicação 6 ou reivindicação 7, caracterizada pelo fato de conter 1 a 10 mg/mL do modificador de viscosidade.

9. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de conter a suspensão aquosa conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de ser para administração parenteral.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que é para uma injeção ou para uma preparação tópica.

12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que é para uma preparação tópica para um olho, um ouvido, um nariz, ou um pulmão.

13. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que é uma colírio, um gota auricular, uma gota nasal, ou um inalador.

14. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 13, caracterizada pelo fato de que é um agente terapêutico, ou um agente preventivo para uma doença inflamatória ou infecciosa.

15. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a doença inflamatória ou infecciosa é uma doença inflamatória ou infecciosa sistêmica.

16. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a doença inflamatória ou infecciosa é uma doença inflamatória ou infecciosa tópica.

17. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que a área tópica é um ou mais tecidos ou órgãos selecionados de olho, ouvido, nariz (trato respiratório superior), e pulmão (trato respiratório inferior).

18. Kit para preparação da composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 9 a 17,caracterizado pelo fato de compreender nano partículas de um composto de glucocorticosteroide.

19. Método para produção da composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 9 a 17,caracterizado pelo fato de compreender misturar um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, um poliol fisiologicamente aceitável, e/ou água, e um estabilizador de dispersão.

20. Método para produção de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de compreender misturar um composto de glucocorticosteroide, um sal fisiologicamente aceitável, glicerina, ácido cítrico anidro, e lecitina de soja hidrogenada.