CN101792373A - 一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺 - Google Patents
一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其总过程为：原料粉碎、发酵酶解、有机混合溶剂提取、浓缩、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化、精制得98％产品。本发明采用混合有机溶剂进行提取，能最大限度地选择性的将有效成分白藜芦醇提出，而抑制无效成分的提出，为后续除杂步骤节省溶剂和时间。采用有机溶剂提取，时间短，减少了提取工艺中的萃取步骤，从而缩短了生产时间，减少了生产设备，更易于生产操作。
Description
技术领域
本发明涉及白藜芦醇的提取分离纯化工艺。
背景技术
白藜芦醇，又名虎杖苷元，英文名Resveratrol，分子式C14H12O3，分子量228.25，化学名3，5，4″-三羟基芪。其由蓼科植物虎杖(Rhizoma Polygoni Cuspidati)的根茎提取精制而来，为无味、白色晶体粉末，难溶于水，易溶于乙醇，丙酮等有机溶剂。
白藜芦醇被认为是一种植物抗毒素，是在植物受到病原性进攻和环境恶化时产生的。其药理作用有抗菌、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝、保护肝脏、雌激素作用、防辐射、免疫调节、抗艾滋病活性等。白藜芦醇已被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物，它在食品、医药、保健等方面应用也越来越广。
现有技术从中药虎杖中提取白藜芦醇的方法有酶解提取、溶剂提取、微波提取、超声提取等等，但由于提取方式及采用的提取条件等的不同，存在适应性不强、操作复杂、提取产物纯度不高、提取成本高等缺点。
发明内容
本发明的目的是克服白藜芦醇现有生产工艺中存在的不足，提供一种对生产设备适应性强、易操作、可提高提取物纯度的白藜芦醇提取分离纯化工艺。
本发明的技术方案如下：
本发明提出的白藜芦醇提取工艺的总过程为：原料粉碎、发酵酶解、有机混合溶剂提取、浓缩、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化、精制得98％产品。
其具体包括如下步骤：
1、前处理：选取虎杖干药材用振荡筛筛去泥沙，选出杂物及霉变药材后粉碎成粗颗粒，待用。
2、发酵酶解：将虎杖干药材颗粒用适量的温水充分浸润后，加入发酵酶，将虎杖干药材颗粒和发酵酶的混合物物料水分调至40％-70％，充分搅拌均匀后放入发酵池中，密封发酵时间大约3天-12天，得虎杖原料。发酵酶采用纤维素酶，用量为虎杖原料重量的0.3-2％。
3、提取：将发酵酶解后的虎杖原料于40℃-70℃下用混合比例为6∶1-1∶1的混合有机溶剂提取1-3次，每次1-3小时，混合有机溶剂的体积(L)与虎杖原料重量(kg)之比为1∶1-8∶1，合并提取液，浓缩至出现大量固形物时(即得到第一次浓缩浸膏)，加入70％以上(通常为70％-95％)的醇溶液溶解后调醇至35％-65％，冷却至室温后离心过滤去沉淀，取上清液。将上清液于40℃-60℃下减压浓缩至产生大量固形物(即得到第二次浓缩浸膏)，水沉取沉淀，用高醇度醇溶液溶解，过滤，滤液过分离柱，以一定醇度的醇溶液洗脱，将洗脱液于40℃-70℃下浓缩至醇度为30度-40度，放置结晶，过滤，将结晶用高醇度的醇溶液溶解，加入一定量的活性炭于40℃-60℃脱色1-3小时，再过滤，将滤液于40℃-60℃下浓缩至醇度为35％以下重结晶，过滤，干燥即得白藜芦醇98％精品。结晶后的母液还可进一步用于制备50％-60％的白藜芦醇产品。
上述方法中，混合有机溶剂的溶剂组合为甲醇：乙酸乙酯、乙醇：乙酸乙酯、乙醇：石油醚、乙酸乙酯：石油醚。
减压浓缩压力为-0.06Mpa——0.04Mpa。
所述醇溶液为甲醇或乙醇的水溶液，用于调醇的醇溶液的醇度为70％以上，用于溶解水沉沉淀的醇溶液醇度为67％-95％，上柱洗脱醇溶液所用醇度为65％-85％。
所述分离柱所用填充材料为氧化铝或硅胶。
所述溶解第一次浓缩浸膏的醇溶液体积(L)与浓缩浸膏重量(Kg)的比为3∶1-8∶1，溶解水沉沉淀的醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为5∶1-10∶1。溶解结晶的醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为8∶1-20∶1。水沉第二次浓缩浸膏的水的重量是第二次浓缩浸膏重量的5-10倍。
本发明的优点或积极效果
本发明采用混合有机溶剂进行提取，能最大限度地选择性的将有效成分白藜芦醇提出，而抑制无效成分的提出，为后续除杂步骤节省溶剂和时间。采用有机溶剂提取，时间短，减少了提取工艺中的萃取步骤，从而缩短了生产时间，减少了生产设备，更易于生产操作。
具体实施方式
下面结合实施例来进行进一步说明本提取工艺，但并不作为对本发明的限定。
实施例1
以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成1-3mm的颗粒待用，将待用料放入发酵池，加入0.4kg纤维素酶，将物料中水分调至40％-70％，拌匀自然发酵7天。将发酵后的虎杖原料用80L的混合有机溶剂(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)于40℃下提取3次，每次1小时，合并提取液，将提取液减压浓缩至出现大量固形物即第一次浓缩浸膏，将第一次浓缩浸膏加80L 85％的乙醇溶解，再加水调至含醇量为60％，冷却后将调醇的醇沉上清液离心去除沉淀物，取上清液于45℃下减压浓缩至产生大量固形物即第二次浓缩浸膏，加入第二次浓缩浸膏5倍重量的水进行水沉，离心过滤，再沉淀用85％乙醇溶解，醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为5∶1，然后过滤，再将滤液上氧化铝柱，又用70％乙醇洗脱，将洗脱液于50℃下减压真空浓缩至含醇量为30％，然后放置结晶，过滤，将结晶用醇度80％乙醇溶解过滤，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为10∶1，再加入结晶重量10％的活性炭于50℃脱色1小时，过滤，将滤液于50℃下浓缩至醇度为35度以下重结晶，过滤，最后将结晶真空干燥即得98％产品。结晶用母液可循环套用或制备60％-70％的产品。
实施例2
以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成2-4mm的颗粒待用，将待用料放入发酵池，加入0.2kg纤维素酶，将物料中水分调至40％-70％，拌匀自然发酵10天。将发酵后的虎杖原料用100L的混合有机溶剂(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶4)于60℃下提取3次，每次1小时，合并提取液，将提取液减压浓缩至出现大量固形物得第一次浓缩浸膏，将第一次浓缩浸膏加100L80％的甲醇溶解，加水调至含醇量为50％，冷却后将调醇的醇沉液离心去除沉淀物，取上清液于60℃下减压浓缩至产生大量固形物得第二次浓缩浸膏，然后加入第二次浓缩浸膏10倍重量的水进行水沉，离心过滤，用85％甲醇溶解，醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为7∶1，再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70％甲醇洗脱，将洗脱液于50℃下减压真空浓缩至含醇量为35％放置结晶，然后过滤，将结晶用醇度85％的甲醇溶解过滤，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为15∶1，在滤液中加入20g活性炭于40℃下脱色2小时，然后过滤，将滤液于60℃下浓缩至醇度为35度重结晶，再过滤，最后将结晶真空干燥即得98％产品。结晶用母液可循环套用或制备60％-70％的产品。
实施例3
以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成1-3mm的颗粒待用，将待用料放入发酵池，加入0.4kg纤维素酶，将物料中水分调至40％-70％，拌匀自然发酵7天。将发酵后的虎杖原料用120L的混合有机溶剂(石油醚∶乙醇＝1∶1)于55℃下提取3次，每次1小时，合并提取液，将提取液减压浓缩至出现大量固形物得第一次浓缩浸膏，第一次浓缩浸膏加80L90％的乙醇溶解，加水调至含醇量为45％，冷却后将调醇的醇沉液离心去除沉淀物，取上清液于60℃下减压浓缩至产生大量固形物即得第二次浓缩浸膏，然后加入第二次浓缩浸膏6倍重量的水进行水沉，离心过滤，用80％乙醇醇溶解，醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为8∶1；再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70％乙醇洗脱，将洗脱液于50℃下减压真空浓缩至含醇量为35％放置结晶，然后过滤，将结晶用体积20倍量85％乙醇溶解，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为20∶1，过滤，在滤液中加入结晶重量10％的活性炭于40℃下脱色2小时，然后过滤，将滤液于60℃下浓缩至醇度为35度重结晶，再过滤，最后将结晶真空干燥即得98％产品。结晶用母液可循环套用或制备60％-70％的产品。
实施例4
以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成2-4mm的颗粒待用，将待用料放入发酵池，加入0.1kg纤维素酶，将物料中水分调至40％-70％，拌匀自然发酵12天。将发酵后的虎杖原料用150L的混合有机溶剂(乙酸乙酯∶甲醇＝1∶2)于60℃下提取2次，每次1小时，合并提取液，将提取液减压浓缩至出现大量固形物即得第一次浓缩浸膏，将第一次浓缩浸膏加100L90％的甲醇溶解，加水调至含醇量为55％，冷却后将调醇的醇沉液离心去除沉淀物，取上清液于60℃下减压浓缩至产生大量固形物即得第二次浓缩浸膏，然后加入第二次浓缩浸膏10倍重量的水进行水沉，离心过滤，用70％甲醇醇溶解，醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为10∶1，再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70％甲醇洗脱，将洗脱液于50℃下减压真空浓缩至含醇量为35％放置结晶，然后过滤，将结晶用醇度80％甲醇溶解，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为15∶1，过滤，在滤液中加入结晶重量10％的活性炭于40℃下脱色2小时，然后过滤，将滤液于60℃下浓缩至醇度为35度重结晶，再过滤，最后将结晶真空干燥即得98％产品。结晶用母液可循环套用或制备60％-70％的产品。
Claims (10)
1.一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其包括以下步骤：
(1)前处理：先对虎杖干药材进行筛选，然后粉碎成颗粒；
(2)发酵：将虎杖干药材颗粒加入发酵酶，发酵酶用量为虎杖干药材重量的0.3-2％，将虎杖干药材颗粒和发酵酶的混合物料水分调至40％-70％，密封发酵3-12天，得到虎杖原料；
(3)提取分离纯化：将发酵后的虎杖原料用混合有机溶剂提取1-3次，混合有机溶剂的体积与虎杖原料重量之比为1∶1-8∶1；合并提取液，减压浓缩至出现固形物，得第一次浓缩浸膏；将第一次浓缩浸膏用醇溶液溶解，用水调节醇度，将调醇后的浓缩液去沉淀，取上清液减压浓缩，得第二次浓缩浸膏，加入水对第二次浓缩浸膏进行水沉，沉淀用醇溶液溶解，过滤，将滤液上分离柱，再用醇溶液洗脱，对洗脱液浓缩结晶，又将结晶用醇溶液溶解后，加活性炭脱色，过滤，再加工滤液浓缩重结晶，即得白藜芦醇精品。
2.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述发酵酶采用纤维素酶。
3.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述每次的提取时间为1-3小时，提取温度为40℃-70℃。
4.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述混合有机溶剂的溶剂组合为甲醇∶乙酸乙酯、乙醇∶乙酸乙酯、乙醇∶石油醚或乙酸乙酯∶石油醚，它们的混合质量比例为6∶1-1∶1。
5.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述减压浓缩压力为-0.06Mpa--0.04Mpa，温度为40％-70％。
6.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述醇溶液为甲醇或乙醇的水溶液。
7.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述调醇用的醇溶液醇度为70％以上，调醇后的醇度为35％-65％；用于溶解水沉沉淀的醇溶液醇度为67％-95％；上柱洗脱醇溶液所用醇度为65％-85％。
8.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述溶解第一次浓缩浸膏的醇溶液体积与浓缩浸膏重量的比为3∶1-8∶1；用于溶解沉淀的醇溶液用量体积与沉淀重量比为5∶1-10∶1；溶解结晶的醇溶液体积与结晶重量的比为8∶1-20∶1。
9.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：水沉第二次浓缩浸膏的水的重量是第二次浓缩浸膏重量的5-10倍。
10.根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：所述分离柱所用填充材料为氧化铝或硅胶。
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Denomination of invention: Extraction, separation and purification process of high purity resveratrol Effective date of registration: 20220124 Granted publication date: 20121121 Pledgee: Chongqing Rural Commercial Bank Co.,Ltd. Qianjiang sub branch Pledgor: CHONGQING KERUI NANHAI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2022500000003 |