CN102697838B

CN102697838B - 从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法

Info

Publication number: CN102697838B
Application number: CN201210178208.3A
Authority: CN
Inventors: 池汝安; 钟玲; 张越非; 肖春桥; 徐志高; 余军霞
Original assignee: Wuhan Institute of Technology
Current assignee: Wuhan Institute of Technology
Priority date: 2012-06-01
Filing date: 2012-06-01
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2032-06-01
Also published as: CN102697838A

Abstract

本发明涉及一种从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其利用黄芪为原料，先用乙醇提取，再用水提。乙醇提取得到的提取液静置，水提取得到的提取液用乙醇沉淀，与乙醇提取静置后的下层沉淀合并，可获得黄芪多糖；将乙醇提取液静置后的上层清液与水提后醇沉的上层清液合并得到醇提液，醇提液使用碱沉淀法后，分离得黄芪黄酮富集物和黄芪皂苷富集物。本发明的优点：本发明利用不同极性的溶剂将黄芪中黄酮、皂苷和多糖从其中同时提取出来，利用酸碱沉淀法将黄酮和皂苷进行分离，工艺简单，易操作，达到三种目标物质的分离和富集。

Description

从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法

技术领域

本发明涉及一种中草药有效成分的提取方法，尤其涉及一种从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法。

背景技术

黄芪是名贵中药，属补气药，具有补气升阳、益胃固表、利水消肿、脱毒生肌等功效。黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus) 或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus)的干燥根，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌等功效。黄芪中的主要有效成分为黄酮类、皂苷类和多糖。其中黄酮类化合物主要包括芒柄花素( formononetin)、芒柄花苷(ononion)、毛蕊异黄酮(calycosin )及其糖苷等。研究证实黄芪总黄酮具有清除O^2-·和OH-·防止生物膜过氧化的作用，也能显著抑制OH-·对DNA的损伤作用，是黄芪抗氧化作用的主要成分，表现为显著的抗肝脏毒性、抗炎、抗菌及保护心血管系统的作用。黄芪总皂苷在免疫调节、心肌缺血保护等方面有显著活性，其药理作用广泛，包括抗病毒、保肝、抑瘤、改善心脏功能、抗炎镇痛、抑制滑膜成纤维细胞增殖等。黄芪多糖具有广泛的生物活性，在医学和兽医临床上研究应用也较广泛，可作为免疫促进剂或调节剂。大量体内外实验及临床研究表明，黄芪多糖具有增强机体免疫功能、强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效。

现有文献虽然报道了较为详细的将黄芪中部分有效成分进行分离的方法，但同样也没有一个将多糖、黄酮类化合物和皂苷类化合物从黄芪中同时进行分离和富集的过程。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术而提供一种从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其工艺简单、成本低、损失小和产品质量高。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，包括以下步骤：

1）将黄芪根茎原料粉碎过20-60目筛后放入容器，加入乙醇提取，在50~90℃下回流提取1~5小时，反复提取2-3次，过滤药渣后，合并得到乙醇提取液；

2）乙醇提取液冷却至室温，静置2~7天，有沉淀物A析出，过滤得到沉淀物A和乙醇提取液过滤液；

3）待步骤1）所得药渣挥去溶剂之后用水提取1~5小时，反复提取2-3次，过滤药渣后，合并得到水提取液，旋转蒸发浓缩后，得到水提浓缩液；

4）步骤3）所得水提浓缩液用乙醇醇沉，过滤得到的沉淀物B与沉淀物A合并，真空干燥研磨成粉，即得到黄芪多糖富集物；

5）将步骤2）的乙醇提取液过滤液和步骤4）过滤所得的过滤液合并，搅拌下加入碱液，离心分离，得到黄色粘稠沉淀C；

6）将步骤5）离心分离得到的清液进行蒸馏回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，离心得到淡黄色沉淀D，通过蒸馏水水洗该沉淀3-5次后，将其真空干燥研磨成粉，得到黄芪总皂苷富集物；

7）将步骤5）所得黄色粘稠沉淀C加酸液酸化，至不再沉出物质为止，离心分离，所得沉淀物经水洗后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总黄酮富集物。

按上述方案，步骤1）所述的乙醇浓度是50~95.wt%。

按上述方案，步骤1）所述的黄芪根茎与乙醇的投料比为1g∶5~30ml，步骤3）所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为1g∶5~30ml。

按上述方案，步骤4）所述的乙醇浓度为50~100.wt%。

按上述方案，步骤3）所述的旋转蒸发浓缩蒸发后体积为水提取液原体积的1/2~1/10，步骤6）所述的浓缩后母液体积为清液原体积的1/2~1/10。

按上述方案，步骤5）所述的碱液为NaOH、Ca(OH)₂或KOH以控制pH为8~10。

按上述方案，步骤7）所述的酸液为盐酸、硫酸或醋酸以控制pH为3~5。

本发明的反应机理是采用固液萃取将固体混合物浸在选定的溶剂中，利用其组分在溶剂中的不同溶解度，使易溶的组分溶解为溶液，即可达到不同机型物质与固体残渣的分离。

本发明使用碱沉淀法将黄酮类和皂苷类化合物进行分离和富集时，所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成

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盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。

本发明所得产品的分析方法：

1、黄芪总黄酮的含量测定

紫外分光光度法：以芦丁为对照品，在259.5 nm下测定吸光度，并制作黄芪黄酮的标准曲线，计算出回归方程为∶A=30.3571C+0.01357（A为吸光度；C为浓度ｇ/L），相关系数R²=0.99991。由回归方程求出待测样品总黄酮浓度。

2、黄芪总皂苷的含量测定

香草酸-冰醋酸显色后，用分光光度法在波长为456 nm处进行吸光度测定，计算得到标准曲线方程：A=3.0378C-0.0599（A为吸光度；C为浓度ｇ/L），相关系数R²=0.9988，由回归方程求出待测样品中总皂苷的浓度。

3、黄芪多糖的含量测定

苯酚-浓硫酸显色后，用分光光度法在波长为480 nm处进行吸光度测定，计算得到标准曲线方程：A=16.087C+0.0253（A为吸光度；C为浓度ｇ/L），相关系数R²=0.9959，由回归方程求出待测样品中多糖含量。

本发明的优点：本发明利用不同极性的溶剂将黄芪中黄酮、皂苷和多糖从其中同时提取出来，利用酸碱沉淀法将黄酮和皂苷进行分离，工艺简单，易操作，达到三种目标物质的分离和富集。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

1、称取经粉碎至60目的40 g黄芪根茎原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，以固液比为1∶20，加入质量百分比浓度为60%的乙醇，在50℃下回流提取2小时进行一次提取，过滤得到乙醇提取液A，滤渣用于二次提取。二次提取的固液比为1∶15，在相同温度下提取时间为1.5小时，过滤药渣后，得到乙醇提取液B，合并乙醇提取液A和乙醇提取液B；

2、冷却至室温静置3天，过滤得到沉淀物A和乙醇提取液过滤液；

3、待步骤1）所得药渣挥去溶剂之后用水提取2小时，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为1∶15，停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用。重复上述水提操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/3，冷却后得到水提浓缩液；

4、往水提浓缩液中加入质量百分比浓度为80%的乙醇，醇沉，静置24小时之后，过滤得到沉淀物B和过滤液；合并沉淀物A和沉淀物B，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪多糖富集物（经过红外检测其图谱确定）；

5、合并乙醇提取液过滤液和步骤4过滤液，搅拌下加入5 gNaOH固体配置的NaOH水溶液，控制pH为9，出现大量沉淀，离心分离得到黄色粘稠沉淀C；

6、将步骤5离心分离得到的清液进行蒸馏回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/3，离心得到淡黄色沉淀D，通过蒸馏水水洗该沉淀3次后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总皂苷富集物（经过红外检测其图谱确定）；

7、将黄色粘稠沉淀C加入盐酸酸化，控制pH至3.5，黄芪黄酮及其类似物从水中析出，至不再沉出物质为止，离心分离得到黄芪总黄酮，所得产物水洗2次后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总黄酮富集物（经过红外检测其图谱确定）。

上述实施例提取的结果为：

干燥后滤渣称重为24.969 g；黄芪粗多糖6.447 g，得率为16.12%，纯度为54.7%；黄芪总皂苷富集物6.065 g，得率为15.16%，纯度为40.6%；黄芪总黄酮富集物3.043 g，得率为7.61%，纯度为41.4%。

实施例2：

1、称取经粉碎至20目的30 g黄芪根茎原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，加入无水食用工业酒精配置的质量百分比浓度为70%的乙醇600 mL，在70℃下回流提取2小时进行一次提取，过滤得到乙醇提取液A（体积565 mL），滤渣用于二次提取。二次提取补加质量百分比浓度为70%的乙醇565 mL，在相同温度下提取时间仍为2小时，过滤药渣后，得到乙醇提取液B（体积为590 mL），合并乙醇提取液A和乙醇提取液B；

2、冷却至室温静置4天，过滤得到沉淀A和乙醇提取液过滤液；

3、待步骤1）所得药渣挥去溶剂之后加入一次蒸馏水450 mL提取2小时，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为1∶15，停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用。重复上述水提取操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/5，冷却后得到水提浓缩液；

4、往水提浓缩液中加入质量百分比浓度为80%的乙醇，醇沉，静置12小时之后，过滤得到沉淀物B和过滤液，合并沉淀物A和沉淀物B，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪多糖富集物；

5、合并乙醇提取液过滤液和步骤4过滤液，搅拌下加入3g固体KOH粉末，控制pH为9.5，出现大量沉淀，离心分离得到黄色粘稠沉淀C；

6、将步骤5离心分离得到的清液进行蒸馏回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/3，离心得到淡黄色沉淀D，通过蒸馏水水洗该沉淀3次后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总皂苷富集物；

7、将黄色粘稠沉淀C加入硫酸酸化，控制pH至4，黄芪黄酮及其类似物从水中析出，至不再沉出物质为止，离心分离得到黄芪总黄酮，所得产物水洗后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总黄酮富集物。

上述实施例提取的结果为：

干燥后滤渣称重为15.83 g；黄芪粗多糖6.32 g，得率为21.6%，纯度为50.1%；黄芪总皂苷5.203 g，得率为17.34%，纯度为40.2%；黄芪总黄酮2.639 g，得率为8.80%，纯度为43.4%。

实施例3：

1、称取经粉碎至20目的40 g黄芪根茎原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，加入无水食用工业酒精配置的质量百分比浓度为70%的乙醇600 mL，在70℃下回流提取2小时进行一次提取，过滤得到乙醇提取液A（体积570 mL），滤渣用于二次提取。二次提取补加质量百分比浓度为70%的乙醇570 mL，在相同温度下提取时间仍为2小时，过滤药渣后，得到乙醇提取液B（体积为590 mL），合并乙醇提取液A和乙醇提取液B；

3、待步骤1）所得药渣挥去溶剂之后加入一次蒸馏水445 mL提取2小时，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为1∶15，停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用。重复上述水提取操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/6，冷却后得到水提浓缩液；

5、合并乙醇提取液过滤液和步骤4过滤液，搅拌下加入8 g固体Ca(OH)₂粉末，控制pH为10，出现大量沉淀，离心分离得到黄色粘稠沉淀C；

6、将步骤5离心分离得到的清液进行蒸馏回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/2，离心得到淡黄色沉淀D，通过蒸馏水水洗该沉淀3次后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总皂苷富集物；

7、将黄色粘稠沉淀C加入盐酸酸化，控制pH至3，黄芪黄酮及其类似物从水中析出，至不再沉出物质为止，离心分离得到黄芪总黄酮，所得产物水洗后，将其真空干燥研磨成粉，即得到黄芪总黄酮富集物。

上述实施例提取的结果为：

干燥后滤渣称重为22.93 g；黄芪粗多糖6.474 g，得率为16.18%，纯度为48.7%；黄芪总皂苷6.789 g，得率为16.97%，纯度为41.3%；黄芪总黄酮3.243 g，得率为8.11%，纯度为42.4%。

Claims

1.从黄芪中同时提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其特征在于包括有以下步骤：

1）将黄芪根茎原料粉碎过20-60目筛后放入容器，加入乙醇溶液提取，乙醇溶液浓度是50~95.wt%，在50~90℃下回流提取1~5小时，反复提取2-3次，过滤药渣后，合并得到乙醇提取液；

4）步骤3）所得水提浓缩液用乙醇溶液醇沉，所述的乙醇溶液浓度为50~100.wt%，过滤得到的沉淀物B与沉淀物A合并，真空干燥研磨成粉，即得到黄芪多糖富集物；

2.按照权利要求1所述的从黄芪中提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其特征在于步骤1）所述的黄芪根茎与乙醇的投料比为1g∶5~30ml，步骤3）所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为1g∶5~30ml。

3.按照权利要求1所述的从黄芪中提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其特征在于步骤3）所述的旋转蒸发浓缩蒸发后体积为水提取液原体积的1/2~1/10，步骤6）所述的浓缩后母液体积为清液原体积的1/2~1/10。

4.按照权利要求1所述的从黄芪中提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其特征在于步骤5）所述的碱液为NaOH、Ca(OH)₂或KOH以控制pH为8~10。

5.按照权利要求1所述的从黄芪中提取和分离黄酮富集物、皂苷富集物和多糖的方法，其特征在于步骤7）所述的酸液为盐酸、硫酸或醋酸以控制pH为3~5。