CN102701914B - 从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，属于植物活性成分提取技术领域。本发明所述方法是以橄榄叶为原料，用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取，所得提取液浓缩，过大孔吸附树脂柱，用甲醇或乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集醇洗脱液；将醇洗脱液浓缩，用萃取剂萃取，收集萃取相，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。与现有技术相比，本发明所述方法将橄榄叶用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取，提取和水解步骤同时进行，不仅提取率高而且水解反应完全；另一方面，由于提取和水解可以同步进行，中间无需过度步骤，因此简化了工序，节约了人力和物力，降低了生产成本，易于实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物中活性成分的提取方法，具体涉及从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法。
背景技术
羟基酪醇（Hydroxytyrosol）化学名为3,4-二羟基苯乙醇，是一种多酚类物质，分子式C8H10O3，相对分子量154。
羟基酪醇有着安全卓越的抗氧化能力以及抗菌、抗癌、抗炎等多种生物和药理活性，可以促进骨骼发育，还可以预防心脑血管疾病。在抗氧化方面：能促进新陈代谢，促进伤口愈合，消除体内自由基，恢复人体脏腑器官的健康状态，防止脑衰，延缓衰老，保持青春活力；还可以保护人体视网膜上皮细胞，防治和治疗视网膜黄斑病，保护视力。在促进骨骼发育方面：有助于人体对矿物质的吸收，无需补钙，自然吸收，保持骨密度，减少骨骼疏松和促进骨骼发育。在抗菌方面：发现羟基酪醇对革兰氏阴性菌显出很强的抑菌性，主要是通过穿透革兰氏阴性菌的细胞黏膜，分解细菌的黏肽，或者引发细菌黏膜的破损。在心脑血管疾病和抗炎方面，能抑制血小板聚集和血栓素的产生，降低动脉粥样硬化疾病的发生；还能够抑制白血细胞的增殖，并诱导其凋亡，从而达到抗炎的效果。
羟基酪醇最初来源于油橄榄中，是橄榄中的一种次生代谢物，游离的羟基酪醇很少，在橄榄中主要以橄榄苦甙的形式存在，可由橄榄苦甙分解而得到。橄榄中各个部位都含有橄榄苦甙，在干燥的橄榄叶中可达到2%～10%。目前羟基酪醇主要是从橄榄果、叶以及在制备橄榄油过程中产生的残渣和废水中分离得到；而羟基酪醇的纯化主要采用柱色谱分离的方法，如硅胶柱、离子交换树脂。如公开号为CN101631758的发明专利，公开了一种煮沸水解制备羟基酪醇的方法，首先用水或有机溶剂对原料的提取部位进行煎煮、冷浸、回流、渗漉或超声提取，水或有机溶剂的质量为原料提取部位的6～10倍，提取1～3次，每次30～90min，合并提取液，浓缩至相对密度为1.0～1.3，得到植物提取液；调节植物提取液的pH为1～3，然后常压下煮沸水解1～4h；放凉后调节其pH为6.8～7.2，过滤，取上清液上样于大孔吸附树脂，吸附完成之后先用水冲洗除杂，然后用体积分数10～90%的甲醇或乙醇进行洗脱，收集洗脱液；浓缩回收甲醇或乙醇，得到羟基酪醇提取物。该发明所述方法克服了使用酸液上柱、酸液洗脱，会对树脂设备产生腐蚀的不足，但该方法中提取和水解步骤分开进行，且提取之后需要调节提取液的pH为1～3后再进行水解，工艺较为繁索；此外，该方法所得产品的纯度不高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单、提取和水解同步进行且所得产品纯度高的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，它是以橄榄叶为原料，用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取，所得提取液浓缩，过大孔吸附树脂柱，用甲醇或乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液；将醇洗脱液浓缩，用萃取剂萃取，收集萃取相，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。
为了减少提取液对树脂设备的腐蚀，最好是先将提取液的pH值调至6～7后再浓缩，由于浓缩后的浓缩液中会有一定量的固形物产生，为了减少树脂被堵塞的机率，浓缩后最好先进行过滤或离心，所得滤液或上清液再过大孔树脂柱；因此，更为优选的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下步骤：
1)以橄榄叶为原料，用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取1～3次，每次3～8h，过滤，合并滤液，得到提取液；
2)用酸调节提取液的pH值至6～7，浓缩，过滤或离心，滤液或上清液过大孔吸附树脂柱，先用水洗柱，再用甲醇或乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩，用萃取剂萃取，收集萃取相，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。
上述方法中：
步骤1)中，优选是用pH=11～12的碱液对橄榄叶进行提取。该步骤中，进行浸提前，最好是将橄榄叶进行粉碎以提高后序浸提工序中的提取率，粉碎的粒度通常为10～30目。本申请中所述的橄榄叶为木犀科木犀榄属油橄榄树（Olea europaea L）的叶子。
步骤1)中，所述的碱液可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠或碳酸氢钠的水溶液；每次提取时碱液的用量通常为原料重量的3～10倍。
步骤2)中，调节提取液pH值的酸可以是盐酸、硫酸或醋酸等其它有机酸或无机酸。提取液调节pH值后先浓缩至1～3波美，然后再过滤或离心。
步骤2)中，所述大孔树脂的型号为LSA-21、XDA-7、HPD-100、D-101或D-102。
步骤2)中，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，然后再用甲醇或乙醇洗柱；所述甲醇或乙醇的体积浓度为10～50%，优选的浓度为20～40%。
步骤3)中，将醇洗脱液浓缩至浸膏(通常为20～25波美)时再进行萃取步骤；所述的萃取剂可以是乙酸乙酯或正丁醇等；所述萃取的次数一般为1～3次，每次萃取时萃取剂的用量通常为浸膏重量的3～6倍。
与现有技术相比，本发明所述方法将橄榄叶用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取，提取和水解步骤同时进行，由于加热情况下有利于橄榄苦甙等目标物质的溶出，溶出的这些物质在热的碱液催化下马上水解从而得到羟基酪醇，促使反应一直向右进行；又由于提取液中的橄榄苦甙等目标物质一直水解而消耗，橄榄叶中的橄榄苦甙等目标物质就会不断的溶出，可以使提取更加完全，因此，本发明所述方法提取率高而且水解反应完全；另一方面，由于提取和水解可以同步进行，中间无需过度步骤，因此简化了工序，节约了人力和物力，降低了生产成本，易于实现工业化生产；而且由本发明所述方法制得的产品纯度高。
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
1)将干燥的橄榄叶粉碎至10目，称取50kg置于提取罐中，加入原料重量8倍的pH=11的氢氧化钠水溶液，于80℃条件保温提取8h，过滤，滤渣再加入原料重量8倍的pH=11的氢氧化钠水溶液，于80℃条件下保温提取8h，过滤，合并滤液，得到提取液；
2)用盐酸调节提取液的pH值至6，浓缩至2波美，离心，上清液过HPD-100大孔吸附树脂柱，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，再用体积浓度为30%的乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩至浸膏(22波美)，所得浸膏用乙酸乙酯萃取2次，每次萃取时乙酸乙酯的用量为浸膏重量的3倍，合并萃取相，浓缩至浸膏，真空干燥至含水量≤5%，得到无色的膏状物1.25kg，HPLC法检测羟基酪醇含量为96.44%。
实施例2
1)将干燥的橄榄叶粉碎至20目，称取50kg置于提取罐中，加入原料重量6倍的pH=12的碳酸钠水溶液，于100℃条件保温提取3h，过滤，滤渣再加入原料重量6倍的pH=12的碳酸钠水溶液，于80℃条件下保温提取3h，过滤，合并滤液，得到提取液；
2)用盐酸调节提取液的pH值至7，浓缩至1波美，用100目的不锈钢筛网过滤，滤液过XDA-7大孔吸附树脂柱，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，再用体积浓度为35%的甲醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩至浸膏(25波美)，所得浸膏用乙酸乙酯萃取4次，每次萃取时乙酸乙酯的用量为浸膏重量的4倍，合并萃取相，浓缩至浸膏，真空干燥至含水量≤5%，得到淡黄色的膏状物1.06kg，HPLC法检测羟基酪醇含量为95.39%。
实施例3
1)将干燥的橄榄叶粉碎至18目，称取100kg置于提取罐中，加入原料重量10倍的pH=14的氢氧化钙水溶液，于90℃条件保温提取8h，过滤，滤液即为提取液；
2)用醋酸调节提取液的pH值至6.5，浓缩至1波美，用100目的不锈钢筛网过滤，滤液过LSA-21大孔吸附树脂柱，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，再用体积浓度为20%的乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩至浸膏(20波美)，所得浸膏用乙酸乙酯萃取3次，每次萃取时乙酸乙酯的用量为浸膏重量的5倍，合并萃取相，浓缩至浸膏，真空干燥至含水量≤5%，得到无色的膏状物2.31kg，HPLC法检测羟基酪醇含量为94.20%。
实施例4
1)将干燥的橄榄叶粉碎至16目，称取400kg置于提取罐中，加入原料重量8倍的pH=12的碳酸氢钠水溶液，于85℃条件保温提取6h，过滤，滤渣再加入原料重量4倍的pH=12的碳酸氢钠水溶液，于90℃条件下保温提取3h，过滤，合并滤液，得到提取液；
2)用盐酸调节提取液的pH值至6，浓缩至2波美，离心，上清液过D-101大孔吸附树脂柱，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，再用体积浓度为50%的甲醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩至浸膏(22波美)，所得浸膏用乙酸乙酯萃取3次，每次萃取时乙酸乙酯的用量为浸膏重量的6倍，合并萃取相，浓缩至浸膏，真空干燥至含水量≤5%，得到淡黄色的膏状物9.58kg，HPLC法检测羟基酪醇含量为95.22%。
实施例5
1)将干燥的橄榄叶粉碎至30目，称取100kg置于提取罐中，加入原料重量5倍的pH=12的碳酸钠水溶液，于100℃条件保温提取4h，过滤，滤渣再加入原料重量4倍的pH=11的碳酸钠水溶液，于80℃条件下保温提取3h，过滤，滤渣再加入原料重量3倍的pH=11的碳酸钠水溶液，于90℃条件下保温提取3h，合并滤液，得到提取液；
2)用盐酸调节提取液的pH值至6.5，浓缩至3波美，用120目的不锈钢筛网过滤，滤液过D-102大孔吸附树脂柱，先用水洗树脂柱直至流出液清澈，再用体积浓度为20%的乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩至浸膏(20波美)，所得浸膏用浸膏重量的6倍乙酸乙酯萃取，分离出萃取相，浓缩至浸膏，真空干燥至含水量≤5%，得到浅黄色的膏状物2.36kg，HPLC法检测羟基酪醇含量为95.1%。
Claims (10)
1.从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：以橄榄叶为原料，用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取，所得提取液浓缩，过大孔吸附树脂柱，用甲醇或乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液；将醇洗脱液浓缩，用萃取剂萃取，收集萃取相，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。
2.根据权利要求1所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)以橄榄叶为原料，用pH=11～14的碱液于80～100℃条件下保温提取1～3次，每次3～8h，过滤，合并滤液，得到提取液；
2)用酸调节提取液的pH值至6～7，浓缩，过滤或离心，滤液或上清液过大孔吸附树脂柱，先用水洗柱，再用甲醇或乙醇洗柱，薄层层析跟踪检测，收集含目标成分的醇洗脱液，
3)将所得醇洗脱液浓缩，用萃取剂萃取，收集萃取相，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。
3.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤1)中，用pH=11～12碱液对橄榄叶进行提取。
4.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤1)中，所述的碱液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠或碳酸氢钠的水溶液。
5.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤1)中，每次提取时碱液的用量为原料重量的3～10倍。
6.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤2)中，提取液调节pH值后浓缩至1～3波美，然后再过滤或离心。
7.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤2)中，所述大孔树脂的型号为LSA-21、XDA-7、HPD-100、D-101或D-102。
8.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤2)中，甲醇或乙醇的体积浓度为10～50%。
9.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤3)中，将醇洗脱液浓缩至浸膏时再进行萃取步骤。
10.根据权利要求2所述的从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，其特征在于：步骤3)中，所述的萃取剂为乙酸乙酯或正丁醇。
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