CN102532244A - 一种制备高纯度积雪草苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备高纯度积雪草苷的方法。该方法主要包括用乙醇水溶液在超声波条件下制备积雪草提取液，将提取液浓缩得到浸膏。浸膏溶液分别用石油醚、乙酸乙酯萃取后的水溶液，再用正丁醇、乙酸乙酯混合溶剂萃取，合并上相有机溶液，活性碳脱色，减压浓缩并真空干燥即得到积雪草总苷，总苷再重结晶可得到高纯度的积雪草苷。本工艺操作方法简单，操作工艺不经过层析柱分离，生产周期短，处理量大，产品纯度高，适合工业化大量生产。
Description
技术领域
本发明是一种从天然植物中提取有效成份的技术领域。具体是一种制备高纯度积雪草苷的方法。
技术背景
积雪草为伞形科植物积雪草(Centella asiatica(L)Urban)的干燥全草或带根全草，又称雷公根、马蹄草、落得打，常年可采，资源丰富，生长在东南亚、澳大利亚、南非和中非热带地区，在很多国家的医药领域中应用已有悠久历史。积雪草性寒，味苦，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疸、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等症。积雪草中化学成分主要包括积雪草苷、羟基积雪草苷、参枯尼苷、积雪草酸、积雪草糖、山柰酚、槲皮素等。近年研究发现，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有重要作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。
积雪草中积雪草苷分离方法主要包括硅胶柱层析法、大孔树脂吸附法、双水相萃、超滤膜法分离、超临界CO2流体萃取、高速逆流色谱法等，这些方法均存在一定缺点并且不利于工业化生产。其主要问题在于：工艺复杂、物耗过大、得率低，处理量不大。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备高纯度积雪草苷的方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
1.一种制备高纯度积雪草苷的方法之一，该方法是以积雪草为原料，用乙醇水溶液在超声波条件下制备初提液，初提液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下：
1)制备积雪草粗提物
将积雪草粉碎，以5～15倍积雪草重量的质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤后将滤液减压浓缩得到浸膏。
2)积雪草粗提取物的初步除杂
将步骤1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。
3)粗积雪草总苷制备
用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1的混合溶剂萃取3～6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷。
4)粗积雪草苷的纯化
将步骤3)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
2.一种制备高纯度积雪草苷的方法之二，该方法以积雪草为原料，用水溶液在超声波条件下制备初提液，提取液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下：
1)制备积雪草粗提物
将积雪草粉碎，以5～15倍积雪草重量的水浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤，将滤液减压浓缩得到浸膏。
2)除去多糖、叶绿素等
将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10～15倍浸膏重量的无水乙醇，产生沉淀，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得浸膏。
3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小极性物质
将步骤2)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。
4)粗积雪草总苷制备
用与步骤3)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取3～6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷。
5)粗积雪草苷的纯化
将步骤4)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇，过滤，滤液浓缩，再用质量浓度为90％乙醇水溶液溶解后，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
上述的一种制备高纯度积雪草昔的方法之一中，步骤1)中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时。
上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之二中，步骤1)中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的水浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时。
上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之一中，步骤3)中，用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取4次。
上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之二中，步骤2)中，将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量水溶解，再加入10倍浸膏重量无水乙醇，将产生沉淀，除去多糖、叶绿素等。
本发明具有以下优势：
1.本发明以超声波为辅助，在一定温度下用质量浓度75％乙醇水溶液或纯水溶液对积雪草进行提取，该提取方法具有快速、彻底、效率高的优点，在生产过程中能缩短生产周期和提高积雪草苷的产率，乙醇可回收循环使用。
2.本发明使用溶剂萃取的方法分离得到积雪草苷，未使用柱层析法或大孔树脂吸附法，处理量大，操作简单，易于放大及工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
称取500g粉碎积雪草粉末，以2500ml质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏20.5g；用200ml水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取3次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷7.3g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷3.3g，纯度为90％，得率0.66％。
实施例2
称取500g粉碎积雪草粉末，以5000ml质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏25.1g；用250ml水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷9.3g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷3.8g，纯度为92％，得率0.76％。
实施例3
称取500g粉碎积雪草粉末，以7500ml质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏28.7g；用290ml水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10.1g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4.8g，纯度为90％，得率0.96％。
实施例4
称取500g粉碎积雪草粉末，以2500ml水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏35.0g，用350ml水溶解浸膏，再加入525ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得27.8g浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取4次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10.7g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4.7g，纯度为89％，得率为0.94％。
实施例5
称取500g粉碎积雪草粉末，以7500ml水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏39.7g，用400ml水溶解浸膏，再加入400ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得30.5g浸膏。用400ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷11.9g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷5.2g，纯度为93％，得率为1.04％。
实施例6
称取500g粉碎积雪草粉末，以5000ml水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏37.8g，用400ml水溶解浸膏，再加入570ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得29.1g浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取3次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10.2g；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4.2g，纯度为93％，得率为0.84％。
Claims (6)
1.一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，以积雪草为原料，用乙醇水溶液在超声波条件下制备初提液，初提液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下：
1)制备积雪草粗提物
将积雪草粉碎，以5～15倍积雪草重量的质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤后将滤液减压浓缩得到浸膏；
2)积雪草粗提取物的初步除杂
将步骤1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；
3)粗积雪草总苷制备
用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1的混合溶剂萃取3～6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷；
4)粗积雪草苷的纯化
将步骤3)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇后，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
2.一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，以积雪草为原料，用水溶液在超声波条件下制备初提液，提取液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下：
1)制备积雪草粗提物
将积雪草粉碎，以5～15倍积雪草重量的水浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤，将滤液减压浓缩得到浸膏；
2)除去多糖、叶绿素等
将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10～15倍浸膏重量的无水乙醇，产生沉淀，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得浸膏。
3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小极性物质
将步骤2)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；
4)粗积雪草总苷制备
用与步骤3)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取3～6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷；
5)粗积雪草苷的纯化
将步骤4)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇后，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90％乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
3.根据权利要求1所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤1)中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时。
4.根据权利要求2所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤1)中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的水浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时。
5.根据权利要求1所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤3)中，用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1∶1混合溶剂萃取4次。
6.根据权利要求2所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤2)中，将步骤1)制得的浸膏用10倍重量水溶解，再加入10倍浸膏重量无水乙醇，将产生沉淀，除去多糖、叶绿素等。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120704 |