CN109330931A

CN109330931A - 一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法

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Publication number: CN109330931A
Application number: CN201811183786.XA
Authority: CN
Inventors: 朱云; 程汝滨; 汤丹
Original assignee: Zigong Innovation Center of Zhejiang University
Current assignee: Zigong Innovation Center of Zhejiang University
Priority date: 2018-10-11
Filing date: 2018-10-11
Publication date: 2019-02-15
Anticipated expiration: 2038-10-11
Also published as: CN109330931B

Abstract

本发明公开了一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法。本发明步骤如下：1：取干燥积雪草全草，粉碎后与乙醇溶液混合，回流加热后过滤收集滤液；2：将滤液浓缩至稠膏状，加水得积雪草浓缩液；3：用石油醚萃取积雪草浓缩液，真空减压回收石油醚，得到石油醚部位样品。4：剩余浓缩液用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯部位样品。5：将乙酸乙酯部位样品进行硅胶柱吸附，先以石油醚‑丙酮体积比5:1和4:1混合溶剂洗脱，再以石油醚‑丙酮体积比2:1混合溶剂洗脱，收集石油醚‑丙酮体积比2:1洗脱溶剂，减压挥干溶剂，收集目标样品。6：将目标样品进行真空干燥，得到积雪草提取物。本发明分离效果好,有机溶剂回收利用，减轻环境污染压力。

Description

一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及植物提取的制备方法，特别是涉及一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法。

背景技术

积雪草为伞形科植物积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)的干燥全草，广泛分布于长江流域以南各地，全草入药，常年可采，资源丰富，在许多国家的医药领域中应用己有几千年历史，其始载于《神农本草经》，列为中品，性寒，味苦，辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疽、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等。积雪草中的化学成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯类和挥发油等。现代研究证明，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有中药作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。

积雪草苷等活性成分具有美白功效，其作为化妆品的功效成分而被广泛使用。国内制备积雪草提取物的主要方法为将溶剂提取制备的获得物，以大孔树脂吸附，以不同比例的乙醇水洗脱，收集目标组分。由于大孔树脂分离效能有限，且植物组分复杂，最后制得的积雪草提取物中含有大量的无效成分。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案来实现：

步骤1：取干燥积雪草全草，粉碎至一定粒度后与乙醇溶液混合，回流加热一段时间后，过滤收集滤液；

步骤2：将滤液进行浓缩至稠膏状，加一定体积的水得积雪草浓缩液。

步骤3：用石油醚萃取积雪草浓缩液，真空减压回收石油醚，得到石油醚部位样品。

步骤4：剩余浓缩液继续用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位样品。

步骤5：将乙酸乙酯部位样品进行硅胶柱吸附，先以石油醚-丙酮体积比5:1和4:1混合溶剂洗脱，再以石油醚-丙酮体积比2:1混合溶剂洗脱，收集石油醚-丙酮体积比2:1洗脱溶剂，减压挥干溶剂，收集目标样品。

步骤6：将目标样品进行真空干燥，即得到积雪草提取物。

作为优选，所述步骤1具体为，乙醇的浓度为30～80％，积雪草干燥粉末与乙醇溶液的质量-体积比为1:5～1:20。加热温度为30～80℃，加热时间为0.5～5小时，提取次数为3次。

作为优选，步骤2具体为将获得的提取液在45～80℃减压浓缩，得到积雪草浓缩液。

作为优选，步骤3中石油醚(bp 60～90℃)与积雪草浓缩液体积比为1:1～2:1，萃取次数为3～5次，萃取操作时需静置0.5～1h。

作为优选，步骤4中乙酸乙酯与积雪草浓缩液体积比为1:0.5～2:0.5，萃取次数为5～7次，萃取操作时需静置0.5～1h。

作为优选，步骤5中乙酸乙酯部位样品与硅胶质量比为1:3～1:10，操作方式为干法上样，常压洗脱，洗脱溶剂为不同比例的石油醚-丙酮或氯仿-甲醇；石油醚-丙酮体积比为5:1、4:1或2:1，不同比例洗脱5～7个柱体积，洗脱溶剂流速为1ml/s。

具体的：先以石油醚-丙酮体积比5:1混合溶剂洗脱，再以石油醚-丙酮体积比4:1的混合溶剂洗脱，最后以石油醚-丙酮体积比2:1的混合溶剂洗脱，收集石油醚-丙酮体积比2:1洗脱溶剂，减压回收溶剂，采用真空干燥即得积雪草提取物。

作为优选，步骤6中目标样品的真空干燥温度控制在45～65℃。

制备的样品通过高效液相色谱法进行测定，测试条件为以十八烷基硅氧烷键合硅胶为填充剂(Aglient Poroshell 120EC-C18，4.6×100mm，2.7um)，以甲醇-0.1％磷酸为流动相；检测波长为206nm。

时间/min	甲醇/％	0.1％磷酸水/％
			5	35	65
10	85	15
			11	90	10
15	95	5
			16	100	0
19	100	0

本发明有益效果如下：

本发明以纯天然的积雪草植物为原料，用水、乙醇进行提取，然后采用液-液萃取结合硅胶粗分，得到样品功效高。且本发明使用的有机试剂容易除去，分离效果好,有机溶剂回收利用，减轻环境污染压力。

本发明制备方法工序少、成本低、溶剂回收利用，减轻环境压力，适合工业化大规模生产的需求。

本发明进行HPLC高效液相检测，本法发明制得的样品组成相对单一。

本发明得到目标产物，进行体外酪氨酸酶活力抑制试验，其美白功效较好，可作为潜在的化妆品原料。

附图说明

图1积雪草提取物的高效液相图谱；

图2积雪草提取物体外对酪氨酸酶活性的影响。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对发明的解释而不是限定。

实施例1：积雪草提取物的制备方法

一种应用于化妆品的积雪草提取物及其制备方法，步骤如下：

将干燥的积雪草全草10kg粉碎为50目粉末投入提取罐中，第一次提取加入100L的70％乙醇，静置浸泡5h，过滤；将残渣进行第二次提取，再次加入100L的70％乙醇，静置浸泡5h，过滤；将残渣进行第三次提取，加入100L的30％乙醇，静置浸泡5h，过滤，合并三次滤液。

将滤液进行浓缩至稠膏状(4.4kg)，按质量比1:1加入蒸馏水分散，得到积雪草浓缩液。

用等体积的石油醚循环萃取浓缩液5次，每次静置1h，减压回收石油醚，得到石油醚部位样品82g。

剩余残渣继续用等体积乙酸乙酯萃取5次，每次静置1h，合并萃取层，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位样品251g(B)。

将800g硅胶(200～300目)用石油醚-丙酮(5:1，v/v)混匀装柱(层析柱规格：800×80mm)，压实；将乙酸乙酯部位样品(200g)用甲醇溶解，与300g硅胶混匀(200～300目)，挥干甲醇，装入硅胶柱，首先以石油醚-丙酮体积比5:1洗脱8个柱体积，再以石油醚-丙酮体积比4:1洗脱5个柱体积，接着以石油醚-丙酮体积比2:1洗脱6个柱体积，减压回收溶剂，收集石油醚-丙酮体积比2:1洗脱样品(7.38g)，真空干燥，即为本发明所述积雪草提取物。

实施例2：积雪草提取物的制备方法

将干燥的积雪草全草4.5kg粉碎为50目粉末投入提取罐中，第一次提取加入22.5L的30％乙醇，80℃加热回流30min，过滤；将残渣进行第二次提取，再次加入22.5L30％乙醇，80℃加热回流30min，过滤；将残渣进行第三次提取，加入22.5L的30％乙醇，静置浸泡30min，过滤，合并三次滤液。

将滤液进行浓缩至稠膏状(1.85kg)，按质量比1:1加入蒸馏水分散，得到积雪草浓缩液。

用2.7L石油醚循环萃取浓缩液4次，每次静置40min，减压回收石油醚，得到石油醚部位样品35g。

剩余残渣继续用3.6L乙酸乙酯萃取7次，每次静置40min，合并萃取层，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位样品105g(B)。

将300g硅胶(200～300目)用石油醚-丙酮(5:1，v/v)混匀装柱(层析柱规格：800×80mm)，压实；将乙酸乙酯部位样品(100g)用甲醇溶解，与150g硅胶混匀(200～300目)，挥干甲醇，装入硅胶柱，首先以石油醚-丙酮体积比5:1洗脱7个柱体积，再以石油醚-丙酮体积比4:1洗脱5个柱体积，接着以石油醚-丙酮体积比2:1洗脱6个柱体积，减压回收溶剂，收集石油醚-丙酮体积比2:1洗脱样品(1.65g)，真空干燥，即为本发明所述积雪草提取物。

实施例3：积雪草提取物的制备方法

将干燥的积雪草全草5kg粉碎为50目粉末投入提取罐中，第一次提取加入100L的80％乙醇，60℃加热回流2h，过滤；将残渣进行第二次提取，再次加入100L的80％乙醇，60℃加热回流2h，过滤；将残渣进行第三次提取，加入100L的80％乙醇，静置浸泡2h，过滤，合并三次滤液。

将滤液进行浓缩至稠膏状(1.4kg)，按质量比1:1加入蒸馏水分散，得到积雪草浓缩液。

用2.8L石油醚循环萃取浓缩液4次，每次静置0.5h，减压回收石油醚，得到石油醚部位样品45g。

剩余残渣继续用5.0L乙酸乙酯萃取5次，每次静置0.5h，合并萃取层，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位样品123g(B)。

将800g硅胶(200～300目)用石油醚-丙酮(5:1，v/v)混匀装柱(层析柱规格：800×80mm)，压实；将乙酸乙酯部位样品(100g)用甲醇溶解，与150g硅胶混匀(200～300目)，挥干甲醇，装入硅胶柱，首先以石油醚-丙酮体积比5:1洗脱6个柱体积，再以石油醚-丙酮体积比4:1洗脱6个柱体积，接着以石油醚-丙酮体积比2:1洗脱6个柱体积，减压回收溶剂，收集石油醚-丙酮体积比2:1洗脱样品(1.8g)，真空干燥，即为本发明所述积雪草提取物。

实施例4：积雪草提取物体外对酪氨酸酶活性的影响

精密称取适量样品，用一定量的DMSO助溶(DMSO的最终测试浓度为3.3％)，蒸馏水定容,配配置成300、150、50、25ug/ml浓度样品：

测试方法:取样1ml，用0.1mol/L pH6.8磷酸缓冲液1mL稀释后与蘑菇酪氨酸酶1mL(200U)混合，25℃孵育10min，加入0.5mg/m L-酪氨酸溶液1mL，继续孵育10min，立即于分光光度计475nm处。测光吸收值A475，测定实验组时就以实验组空白为背景，测定阴性对照组时就以阴性对照组为空白。

测试体系：

抑制率计算公式：抑制率(％)＝[(A-B)-(C-D)]×100/(A-B)

测试结果：

浓度<u>ug</u>/ml	300	1５0	50	25
					抑制率％	73.46	64.13	35.５9	31.79

由图2可知样品B₆半抑制浓度IC₅₀为：61.2ug/ml。

Claims

1.一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于其制备方法包括如下步骤：

步骤6：将目标样品进行真空干燥，即得到积雪草提取物。

2.根据权利要求1所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于所述步骤1具体为：乙醇的浓度为30～80％，积雪草干燥粉末与乙醇溶液的质量-体积比为1:5～1:20。加热温度为30～80℃，加热时间为0.5～5小时，提取次数为3次。

3.根据权利要求2所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于步骤2具体为：获得的提取液在45～80℃减压浓缩，得到积雪草浓缩液。

4.根据权利要求3所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于步骤3中石油醚(bp 60～90℃)与积雪草浓缩液体积比为1:1～2:1，萃取次数为3～5次，萃取操作时需静置0.5～1h。

5.根据权利要求4所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于步骤4中乙酸乙酯与积雪草浓缩液体积比为1:0.5～2:1，萃取次数为5～7次，萃取操作时需静置0.5～1h。

6.根据权利要求5所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于步骤5中乙酸乙酯部位样品与硅胶质量比为1:3～1:10，操作方式为干法上样，常压洗脱，洗脱溶剂为不同比例的石油醚-丙酮或氯仿-甲醇。

7.根据权利要求6所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于洗脱溶剂石油醚-丙酮体积比为5:1、4:1或2:1，不同比例洗脱5～7个柱体积，洗脱溶剂流速为1ml/s。

8.根据权利要求7所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于，步骤6中目标样品的真空干燥温度控制在45～65℃。

9.根据权利要求8所述的一种应用于化妆品的积雪草提取物，其特征在于该积雪草提取物能够作为化妆品美白原料。