CN102492003B - 一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属医药技术领域，涉及一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺。该工艺包括下述步骤：（1）以女贞子为原料，将女贞子粉碎后采用水或乙醇作为提取溶媒进行提取制备提取液；（2）将步骤（1）的提取液浓缩，在浓缩后的浓缩液中加入冰乙酸进行水解；（3）将步骤（2）水解后的水解液制得红景天苷粗品。本发明采用除红景天属以外的植物提取分离红景天苷，缓解了资源不足的压力，利用酸水解的方法将女贞子中红景天苷的含量提高，操作方法简单，后续处理容易，水解原料无毒，所采用的填料便宜，所用溶剂部分可回收再利用，节省成本。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种木犀科植物女贞子中红景天苷的提取分离工艺。
背景技术
女贞子为木犀科植物女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实，是中医常用的扶正固本药物，具有滋补肝肾、明目乌发的功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明等。女贞子中含有齐墩果酸、红景天苷、酪醇以及多种裂环环烯醚萜苷类等化学成分。红景天苷，英文名salidroside，化学名为“对羟基苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷”，具有扩张阻力血管和容量血管，抗心肌缺血、抗肝纤维化等多种药理作用，已经作为药品和保健食品被广泛开发应用。红景天苷的制备方法主要有化学合成法和从红景天属植物中提取。考虑成本和资源的问题，如果能从价格低廉、人工种植面积高达上万亩的女贞子中提取红景天苷，不但能够有效的降低成本提高经济效益，还能够有效的缓解对红景天植物的需求，达到保护环境的目的。但是女贞子中红景天苷的含量较低，约为0.043 %。
在中国专利CN200510111859.0中记载了一种从女贞子中提取红景天苷的方法，但是该方法所制备的红景天苷粗品含量较低。迄今为止，未见涉及水解提高女贞子中红景天苷含量方法的专利。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，采用该工艺制备的红景天苷粗品含量较高。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，包括下述步骤：
（1）以女贞子为原料，将女贞子粉碎后采用水或乙醇作为提取溶媒进行提取制备提取液；
（2）将步骤（1）的提取液浓缩，在浓缩后的浓缩液中加入冰乙酸进行水解；
（3）将步骤（2）水解后的水解液纯化后制得红景天苷粗品。
具体地，所述提取溶媒水或乙醇的用量为6～10倍，采用渗漉或加热回流提取2～3次，每次提取2～3小时，提取后合并提取液。
所述浓缩液中干浸膏浓度为0.05～0.10 g/ml。
所述冰乙酸与浓缩液的体积比为1：10～1：40。冰乙酸的比例采用本发明体积比范围之外的范围，同样可以提高该工艺制备的红景天苷粗品含量，本发明所选定的范围只是便于控制工业成本。
所述浓缩液加入冰乙酸后于80～100 ℃下回流12～20小时。
所述步骤（3）的具体步骤为：将步骤（2）水解后的水解液调至中性后浓缩，对浓缩后的浓缩液进行离心，离心后的上样原液经纯化制得红景天苷粗品。
所述步骤（3）中用碳酸氢钠将水解液调至中性。
所述离心为以3000～5000转/分钟的速度离心20～40分钟，离心后的上样原液制备成干浸膏浓度为0.1～1.0 g/mL的浓缩液后用大孔吸附树脂纯化得到红景天苷粗品。
所述纯化采用大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂用量按重量计为上样原液的2～10倍。
所述大孔吸附树脂纯化为采用大孔树脂色谱柱进行纯化，纯化步骤中采用乙醇水溶液为洗脱溶液，洗脱溶液中乙醇的含量按体积计为10～80 %，洗脱溶液体积用量为大孔树脂色谱柱柱体积的2～5倍。
现代研究表明，女贞子中含有的多种裂环环烯醚萜苷类成分，如特女贞苷、女贞苷、异女贞苷以及新女贞苷等都含有红景天苷的结构母核，考虑可以通过化学水解的方法，以提高女贞子中红景天苷的含量，满足大规模工业提取的需要。由于红景天苷也易于被水解成酪醇，故在选择水解条件时，综合考虑红景天苷与酪醇二者的量，选择最优水解方法。
本发明以女贞子为原料，经粉碎后，采用水进行加热回流提取；所得水提取物经回收溶剂、浓缩至一定体积后，加入一定量的冰乙酸水解提取物。本发明的提取工艺和纯化工艺都可以采用现有技术中红景天苷的提取和纯化技术，申请人经过创造性劳动发现，采用冰乙酸对提取女贞子的浓缩液进行水解处理，进行水解反应后可以提高浓缩液中红景天苷的含量，进一步提高浓缩液制备的浸膏中红景天苷的含量，实验证明，采用冰乙酸水解处理后，可以显著提高制得的红景天苷粗品中红景天苷的含量，满足大规模工业提取的需要。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）采用除红景天属以外的植物提取分离红景天苷，缓解了资源不足的压力；
（2）采用水解的方法将女贞子中红景天苷的含量提高，操作方法简单，后续处理容易，水解原料无毒，在此基础上，加上分离纯化，能使红景天苷的含量增加更多；
（3）所采用的填料便宜，所用溶剂部分可回收再利用，节省成本；
（4）用于洗脱的有机相为乙醇，毒性小，对环境污染小。
附图说明
图1为女贞子中红景天苷提取分离简图；
图2为红景天苷标准品溶液高效液相色谱峰面积对浓度线性回归图，其回归方程为：y = 11.9x - 285.37(R2 = 0.9989)；
图3为酪醇标准品溶液高效液相色谱峰面积对浓度线性回归图，其回归方程为：y = 51.982x - 78.56（R2 = 0.9979）；
图4为实施例1红景天苷提取分离过程中红景天苷对照品和酪醇对照品的HPLC色谱图；
图5为实施例1红景天苷提取分离过程中女贞子干浸膏的HPLC色谱图；
图6为实施例1红景天苷提取分离过程中女贞子水解浸膏的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
（1）以木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实女贞子为原料。粉碎至粗粉，按重量计加入6～10倍的水进行回流提取2次或3次，每次时间2～3小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得到干浸膏浓度0.05 g/mL为女贞子浓缩液。
（2）在浓缩液中加入体积比为20：1的冰乙酸，于100 ℃下回流20小时后。用碳酸氢钠调至中性，于80 ℃下减压回收溶剂至干，得到红景天苷的水解物浸膏。
（3）在上述水解物中加入一定体积的蒸馏水，使浸膏量与分散后溶液体积比为1：0.1～1：10。再以3000～5000转/分钟的速度离心20～40分钟，倾出上清液，即为上样原液。上样原液制备成浓度0.1～1.0 g浸膏/ml ，吸附流速为0.5～2 BV/h，将料液与大孔树脂比为1：2～1：10置于D4020型树脂柱上（10 g，30 mm×150 mm），水洗脱2倍树脂体积进行除杂，用10～80 %乙醇洗脱3～5倍树脂体积。减压回收10～80 %乙醇洗脱部分的溶剂，得红景天苷粗品。
上述方法的步骤（1）和步骤（2）中，是为了便于储存浓缩液，因此将步骤（1）中的提取液和步骤（2）中的水解后的溶液回收溶剂至干，得到干浸膏，在下一程序中才采用溶剂将干浸膏制备成适宜工业应用或实验应用的浓缩液。或者，上述方法的步骤（1）和步骤（2）中也可以将步骤（1）中的提取液和步骤（2）中的水解后的溶液直接浓缩成满足工业应用或实验应用的浓缩液，然后进行下一步的操作处理。
本发明提取溶媒为用水以及乙醇。优选为水。提取时采用渗漉或加热回流，优选为加热回流。提取后的溶液，经过滤、浓缩至一定体积。浓缩液加入一定量冰乙酸进行水解。水解液调至中性后，干燥。用水分散离心，所得上样原液用大孔树脂进行粗分。
所述大孔树脂包括非极性大孔树脂(D101、D4020和NKA)，弱极性大孔树脂（AB-8），极性大孔树脂（NKA-9），优选为D4020型大孔树脂。
用于大孔树脂洗脱的溶液为为水、以及其它含水有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等按不同比例混合的溶剂，按亲水溶剂的比例不断增加的顺序进行洗脱，优选为乙醇；在纯水洗脱除杂后，按10～80 %乙醇的次序进行洗脱，洗脱液用高效液相色谱（HPLC）技术进行检测，收集20%乙醇洗脱部分，经浓缩，得红景天苷粗品。
下述实施例中红景天苷的含量测定均参照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VID）进行：
（a）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱分析柱；以甲醇—水（20:80）为流动相；检测波长为224 nm；流速为1.0 mL/min。理论塔板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
（b）对照品溶液的制备：精密称取红景天苷标准品1.1 mg，得1.1 mg/mL的红景天苷标准品溶液；精密称取酪醇标准品2.25 mg，得225 μg/mL的酪醇标准品溶液。然后依次精密吸取以上两种标准品溶液0.3 mL、0.1 mL，配成两种标准品的混合溶液，其中红景天苷标准品浓度为330 μg/mL，酪醇标准品浓度为22.5μg/mL。
（c）供试品溶液的制备：称取女贞子水提取物干浸膏（或者是水解后干浸膏），加入20 %甲醇溶解，定容于10 mL容量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（d）测定法：分别精密吸取混合对照品溶液10μL和供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
2、上述测定红景天苷和酪醇的含量时，所用标准曲线按照如下线性试验所得：
精密称取红景天苷及酪醇标准品溶液适量，加甲醇溶解稀释，分别配制成红景天苷66.0、132.0、198.0、264.0、330.0 μg/mL系列浓度，酪醇2.25、4.50、6.75、9.00、11.25μg/mL系列浓度。用高效液相色谱仪测定各溶液中红景天苷和酪醇峰面积（进样量为10μL），结果见表1和表2，以峰面积积分值为纵坐标，以红景天苷及酪醇对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图2和图3。由图可知，红景天苷在66～330 μg/mL范围内呈线性关系，其回归方程为：y = 11.9x - 285.37(R2 = 0.9989)。酪醇在2.25～11.25μg/mL范围内呈线性关系，其回归方程为：y = 51.982x - 78.56（R2 = 0.9979）。
表1 红景天苷线性关系考察
表2 酪醇线性关系考察
实施例1
取木犀科女贞属植物女贞的干燥成熟果实，粉碎至粗粉，加入8倍量水回流提取3次，每次时间为2小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得到干浸膏浓度0.05 g/mL为女贞子浓缩液，其中干浸膏得率为25.1 %，测得红景天苷含量为1.65 %。干浸膏浓度0.05 g/mL是指1 mL浓缩液中含有干浸膏0.05 g，即将1 mL浓缩液回收溶剂至干可以得到0.5 mg干浸膏。
取2mL浓缩液，加入冰乙酸100μL，即体积比为20︰1的冰乙酸，于100 ℃下回流20小时后。用碳酸氢钠调至中性，于80 ℃下减压回收溶剂至干，得到女贞子水解物干浸膏，测得其中红景天苷含量为4.66 %，相对浸膏水解前含量增加三倍。
图4为红景天苷提取分离过程中红景天苷对照品和酪醇对照品的HPLC色谱图，其保留时间和峰面积具体信息见表3，其中保留时间为8.092的峰面积为红景天苷对照品的峰面积。
表3
图5为红景天苷提取分离过程中女贞子干浸膏的HPLC色谱图；其保留时间和峰面积具体信息见表4，其中保留时间为7.795的峰面积为红景天苷对照品的峰面积。
表4
图6为红景天苷提取分离过程中女贞子水解浸膏的HPLC色谱图；其保留时间和峰面积具体信息见表5，其中保留时间为7.880的峰面积为红景天苷对照品的峰面积。
表5
本实施例中，采用冰乙酸对提取女贞子的浓缩液进行水解处理，可以提高浓缩液中红景天苷的含量，进一步大幅度提高浓缩液制备的浸膏中红景天苷的含量，更容易满足大规模工业提取的需要。
实施例2
取木犀科女贞属植物女贞的干燥成熟果实，粉碎至粗粉，加入10倍量水回流提取3次，每次时间为2小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得到女贞子浓缩液。
在浓缩液中加入体积比为20：1的冰乙酸，于100 ℃下回流20小时后。用碳酸氢钠调至中性，于80℃下减压回收溶剂至干，得到红景天苷的水解物浸膏。在水解物浸膏中加入一定体积的蒸馏水，使药材量与分散后溶液体积比为1：2（药材量指女贞子的重量g：溶液体积mL）。再以5000转/分钟的速度离心40分钟，倾出上清液，即为上样原液。上样原液制备成浓度0.5 g浸膏/mL，吸附流速为1 BV/h，将料液与大孔树脂比为1：3置于D4020型树脂柱上（10 g，30 mm×150 mm），水洗脱2倍树脂体积进行除杂，用20 %乙醇洗脱5倍树脂体积。减压回收20 %乙醇洗脱部分的溶剂，得红景天苷粗品，经HPLC测定，红景天苷在浸膏中含量为16.34 %。
实施例3
取木犀科女贞属植物女贞的干燥成熟果实，粉碎至粗粉，加入10倍量水回流提取2次，每次时间为3小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得浓缩液。
在浓缩液中加入体积比为20：1的冰乙酸，于100 ℃下回流20小时后进行水解。
水解后的水解液用碳酸氢钠调至中性，将水解液浓缩，再以4000转/分钟的速度离心30分钟，倾出上清液，即为上样原液。上样原液制备成浓度0.5 g浸膏/mL，吸附流速为1 BV/h，将料液（即0.5 g浸膏/mL的物料）与大孔树脂比为1：3置于D4020型树脂柱上（10 g，30 mm×150 mm），水洗脱2倍树脂体积进行除杂，用20 %乙醇洗脱5倍树脂体积。减压回收20 %乙醇洗脱部分的溶剂，得红景天苷粗品，经HPLC测定，红景天苷在浸膏中含量为15.34 %。
实施例4
取木犀科女贞属植物女贞的干燥成熟果实，粉碎至粗粉，加入8倍量水回流提取3次，每次时间为3小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得浓缩液。
在浓缩液中加入体积比为40：1的冰乙酸，于80 ℃下回流12小时后进行水解。
水解后的水解液用碳酸氢钠调至中性，将水解液浓缩，再以5000转/分钟的速度离心40分钟，倾出上清液，即为上样原液。上样原液制备成浓度0.1 g浸膏/mL，吸附流速为1 BV/h，将料液（即0.1 g浸膏/mL的物料）与大孔树脂比为1：5置于D4020型树脂柱上（10 g，30 mm×150 mm），水洗脱2倍树脂体积进行除杂，用20 %乙醇洗脱5倍树脂体积。减压回收20 %乙醇洗脱部分的溶剂，得红景天苷粗品，经HPLC测定，红景天苷在浸膏中含量为13.54 %。
实施例5
取木犀科女贞属植物女贞的干燥成熟果实，粉碎至粗粉，加入6倍量水回流提取3次，每次时间为2小时，合并提取液，于80 ℃下减压回收溶剂得浓缩液。
在浓缩液中加入体积比为10：1的冰乙酸，于80 ℃下回流12小时后进行水解。
水解后的水解液用碳酸氢钠调至中性，将水解液浓缩，再以5000转/分钟的速度离心40分钟，倾出上清液，即为上样原液。上样原液制备成浓度0.1 g浸膏/mL，吸附流速为1 BV/h，将料液（即0.1 g浸膏/mL的物料）与大孔树脂比为1：5置于D4020型树脂柱上（10 g，30 mm×150 mm），水洗脱2倍树脂体积进行除杂，用20%乙醇洗脱5倍树脂体积。减压回收20 %乙醇洗脱部分的溶剂，得红景天苷粗品，经HPLC测定，红景天苷在浸膏中含量为12.89 %。
如上所述，可以较好的实施本发明。
Claims (10)
1.一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，包括下述步骤：
（1） 以女贞子为原料，将女贞子粉碎后采用水或乙醇作为提取溶媒进行提取制备提取液；
（2）将步骤（1）的提取液浓缩，在浓缩后的浓缩液中加入冰乙酸进行水解；
（3）将步骤（2）水解后的水解液纯化后制得红景天苷粗品。
2.根据权利要求1所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述提取溶媒水或乙醇的用量为6～10倍，采用渗漉或加热回流提取2～3次，每次提取2～3小时，提取后合并提取液。
3.根据权利要求1所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述浓缩液中干浸膏浓度为0.05～0.10 g/ml。
4.根据权利要求1或3所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述冰乙酸与浓缩液的体积比为1：10～1：40。
5.根据权利要求4所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述浓缩液加入冰乙酸后于80～100 ℃下回流12～20小时。
6.根据权利要求1所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述步骤（3）的具体步骤为：将步骤（2）水解后的水解液调至中性后浓缩，对浓缩后的浓缩液进行离心，离心后的上样原液经纯化制得红景天苷粗品。
7.根据权利要求6所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述步骤（3）中用碳酸氢钠将水解液调至中性。
8.根据权利要求6所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述离心为以3000～5000转/分钟的速度离心20～40分钟，离心后的上样原液制备成干浸膏浓度为0.1～1.0 g/ml的浓缩液后用大孔吸附树脂纯化得到红景天苷粗品。
9.根据权利要求6所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述纯化采用大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂用量按重量计为上样原液的2～10倍。
10.根据权利要求8或9所述的一种女贞子中红景天苷的提取分离工艺，其特征在于，所述大孔吸附树脂纯化为采用大孔树脂色谱柱进行纯化，纯化步骤中采用乙醇水溶液为洗脱溶液，洗脱溶液中乙醇的含量按体积计为10～80%，洗脱溶液体积用量为大孔树脂色谱柱柱体积的2～5倍。
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