CN101701019B - 一种银杏内酯a、b单体的分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

一种银杏内酯A、B单体的分离纯化方法，以纯度≥95％的银杏总内酯为起始原料，包括结晶分离、纯化和干燥。所述的纯化是用重结晶-超临界CO2萃取组合工艺进行纯化，首先对结晶分离得到的单体GA和GB分别用无水乙醇按1∶5～80的料液比重结晶至少三次，得到纯度≥95％单体的GA和GB；然后用超临界CO2萃取方法对纯度≥95％的单体GA和GB分别萃取，萃取压力10～100Mpa，萃取温度32～150℃。重复萃取一次，可制备纯度≥99.5％的单体GA和GB。以起始原料中单体量计，收率≥90％。在本方法中除乙醇和CO2外不接触任何其他有机溶剂，是绿色、环保工艺，且收率高，特别适合于原料药的生产。

Description

一种银杏内酯A、B单体的分离纯化方法

一、技术领域

本发明涉及一种自植物中获取药用化合物的方法，确切地说是一种白银杏总内酯中分离纯化银杏内酯A和银杏内酯B单体的新方法。

二、背景技术

银杏叶提取物(GBE)已列入中华人民共和国药典(2005年版)。按该标准生产的药用GBE，总黄酮醇苷含量≥24％、萜类内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计)含量≥6％。

银杏总内酯包括银杏内酯A(以下简称GA)、银杏内酯B(以下简称GB)、银杏内酯C(以下简称GC)、银杏内酯J、银杏内酯M和白果内酯等，属银杏特有成分。银杏总内酯中各单体的药效和功用有一定差异。GA、GB对治疗心脑血管疾病具有显著疗效。而白果内酯对治疗神经系统疾病则药效独特。为开发高效新药，控制药品质量，有必要对GA和GB进行高纯分离。

见诸于文献报道的有银杏内酯单体分离方法主要有醇类提取-溶剂萃取-柱色谱分离法、醇类提取-溶剂萃取-反相色谱分离法、色谱分离-重结晶法、超临界流体萃取法(SCFE)等。

经由国家知识产权局网站检索，截至2009年5月18日，与银杏内酯单体分离/制备方法直接相关的授权发明专利或申请主要有：

(1)ZL98111546.2(发明人潘见、

《物质成分的超临界流体结晶分离方法》)：该发明是将超临界流体萃取与结晶分离技术方法集成为一体；在超临界流体、夹带剂和结晶器的共同作用下，在结晶釜内完成萃取、吸附、结晶和干燥，使混合物料中的有效成分一步实现梯度结晶分离。该法可用于分离银杏总内酯。

(2)ZL200310104958.7(《模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法》)：该发明是一种用模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法。以银杏叶为原料，经过水煮，乙酸乙酯萃取、模拟移动床纯化、乙醇重结晶、甲醇重结晶得到纯度大于90％银杏内酯B单体。该发明基于模拟移动床色谱分离GB。

(3)ZL200410014878.7(发明人潘见，《白果内酯配位色谱分离纯化方法》)：该发明是一种白果内酯配位色谱分离纯化方法。白果内酯初提物在流动相作用下流经固定相以及流份收集、浓缩和干燥，其特征在于在含白果内酯初提物中或柱填料添加配位剂。本方法得到的白果内酯纯度95％以上。

(4)ZL00117758.3(《由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法》)：该发明是一种由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法。该方法是向银杏叶或其浸膏加入乙醇等浸取剂，得到的浸取液经过滤、分层，取出有机相去杂，然后经浓缩、干燥获得富集GA和GB，采用制备型液相色谱再分离A与B。该发明的特征在于加入浸取液的同时加入氯化物盐析剂，及去杂过程加入钾盐或钠盐；液相色谱的分离柱流动相为乙酸乙酯和石油醚混合液，固定相为硅胶。该发明的单体纯化依赖于制备色谱。

(5)ZL200410061284.1(《银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法》)：该发明公开了一种银杏叶中GB和白果内酯的提取方法。将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重结晶，获得较纯的GB和白果内酯。它包括下列步骤：①、将银杏叶烘干，温度控制在65～75℃，去杂、粉碎，过55～65目，在65～75℃用50～60％乙醇分别提取2～3次，每次90～120分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，加水为浓缩液的1～2倍，沉淀20～24小时，离心，取上清液上吸附柱，先用水冲洗，用75～80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩；②、将浓缩液加入1～2倍水和浓缩液的30～40％乙酸乙酯萃取2～3次，水相液浓缩、65～75℃真空干燥，为银杏黄酮甙产品，萃取分离出的有机相浓缩、干燥、粉碎到90～100目，为银杏内酯；③、在银杏内酯中，加85～95％乙醇，上酸性氧化铝柱，收集流出液，浓缩至固形物25～30％时，停止加热，有结晶析出，为GA、GB，过滤，再用95％乙醇溶解结晶，重结晶，先析出银杏内酯A，分离出结晶GA，溶液再结晶，为GB，用结晶的20～40％的95％乙醇冲洗，抽滤，再用95％乙醇溶解，重结晶，银杏内酯B经三次重结晶，分离；④、将母液加入1～2倍水，在75～80℃蒸去乙醇，冷却，析出结晶，结晶为GC，分离出结晶，母液减压蒸干，粉碎90～100目为黄色粉末白果内酯，用结晶的20～40％无水乙醇冲洗白果内酯，抽滤，用95％乙醇溶解，重结晶为白色的白果内酯，再用95％乙醇溶液溶解，再重结晶，白果内酯经三次重结晶，分离。该发明在银杏内酯B的结晶过程③中引入了较多的水(来自85％～95％乙醇)。

(6)CN1634925A(申请人潘见，申请号200410065104.7，《一种银杏内酯单体的分离纯化方法》)：该发明公开了一种银杏内酯类单体的分离纯化方法，采用柱色谱-重结晶-超临界CO₂精制纯化组合工艺，制取高纯银杏内酯类单体。柱色谱采用正相或反相固定填料，使用水、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、氯仿、石油醚等溶剂梯度洗脱，超临界CO₂精制纯化和晶型整理工艺条件为：压力≤100MPa，温度≤150℃，夹带剂为乙酸乙酯、乙醇等；所得单体含量最高可达99.8％；总收率≥90％。该工艺将为GB(原料药)的工业生产所采用。

(7)CN101085780A(申请号200610014207.X，《银杏内酯的制备方法》)：该发明公开了本发明公开了一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤：(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶，得银杏内酯晶体混合物；(3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。该发明的目标产物是银杏内酯A和银杏内酯B的混合晶体。

(8)CN101134758A(申请号：200710050242.1，《从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法》)：该发明公开了一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，即以银杏叶为原料，采用乙醇提取，乙酸乙酯萃取，极性无孔吸附树脂柱吸附，乙醇结晶得银杏总内酯，再经过硅胶柱层析，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯，再用不同浓度乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A(60-80％乙醇结晶)、银杏内酯B(30-70％乙醇结晶)、银杏内酯C和银杏内酯J单体，纯度99％以上。此方法采用硅胶柱层析方法预分离各单体。

(9)CN101182325A(申请号：200610097492.6，《静脉给药银杏内酯B及提取方法》)：该发明公开一种静脉给药银杏内酯B及提取方法，其中银杏内酯B提取方法是以银杏叶为原料，采用乙醇溶液回流提取，活性炭吸附，乙醇结晶获得银杏总内酯，再在甲醇溶液中-10℃～-25℃低温条件下结晶，可获得含量≥97％银杏内酯B。该发明采用甲醇结晶，容易造成产品的甲醇残留超标，需强化过程安全性控制。

(10)CN1680392A(申请号：200510023164.7，《一种高纯度银杏内酯的制备方法》)：该发明公开了采用高速逆流色谱法(HSCCC)从银杏叶中分离一种高纯度银杏内酯的制备方法。用三个溶剂体系，分别经过两次HSCCC分离后，可得到银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J和白果内酯，纯度均达到99％以上。该方法涉及三个溶剂体系，二次分离。

(11)CN101054384A(申请号：200710106040.4，《一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法》)：该发明公开了一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法，采用高速逆流萃取、聚酰胺和大孔树脂两次柱层析分离、重结晶相结合的方法。该方法涉及两次不同的层析分离，会增加脱除产品中树脂残留物的难度。

(12)CN101302222A(申请号：200810024206.2，《一种银杏内酯B原料及其制备方法》)：该发明公开了一种银杏内酯B原料制备方法。该银杏内酯B原料是通过以下方法制备得到的：取银杏叶或银杏叶提取物，在盐酸溶液中浸煮，浸煮液过滤后采用有机溶剂萃取，得到的萃取液浓缩后添加100～200目硅胶混合干燥，采用硅胶柱层析法收集富含银杏内酯B的洗脱液，经结晶得到银杏内酯B原料。该发明的特征在于：①所述盐酸溶液的质量浓度为0.1～1％，用量为银杏叶或银杏叶提取物质量的5～50倍。②所述银杏叶或银杏叶提取物在盐酸溶液中浸煮的时间为30～180min。③所述的有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、正丁醇中的一种，用量为浸煮液体积的2～5倍。④所述的100～200目硅胶的用量与银杏叶或银杏叶提取物的质量比为1∶0.5～1∶10。⑤柱层析时使用的流动相为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、环己烷、丙酮中的两种或两种以上混合溶剂。⑥柱层析时流动相的流速控制在每公斤银杏叶或银杏叶提取物18～360mL/min。该方法采用硅胶柱层析法收集富含银杏内酯B的洗脱液，经结晶得到银杏内酯B原料。

(13)CN101392000A(申请号：200810046162.3，《银杏内酯A、B、C、J和白果内酯单体的高效分离纯化方法》)：该发明公开了一种银杏内酯A、B、C、J和白果内酯单体的分离纯化方法，主要操作过程有：银杏叶提取物脱除银杏酸，银杏总内酯的获得，总内酯制备溶液的准备，总内酯中银杏内酯A、B、C、J和白果内酯单体的高效液相色谱分离。该方法利用高效液相色谱分离单体，适合用于实验室微量产品制备。

(14)CN101412722A(申请号：200710050239.X，《从银杏叶中提取分离银杏内酯C的方法》)：该发明公开了一种从银杏叶中提取分离银杏内酯C的方法，即以银杏叶为原料，采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取、极性无孔吸附树脂柱、乙醇结晶得到银杏内酯类化合物、上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯C的洗脱液，再用乙醇结晶，得到银杏内酯C单体，纯度99％。该发明的目标产物是银杏内酯C。

(15)CN101412725A(申请号：200710050245.5，《从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法》)：该发明公开了一种从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其步骤如下：1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；

3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯B单体。该发明的特征在于：①步骤1)中，先用体积浓度为60～80％的乙醇对银杏叶进行提取；然后用体积浓度为30～55％的乙醇对银杏叶进行提取；再用体积浓度为10～25％的乙醇对银杏叶进行提取。②步骤1)中，所述提取的温度为50～70℃。③步骤1)中，第一次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶8～10；第二次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶6～8；第三次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶5～7。④步骤2)中，所述加入的乙酸乙酯的体积与浓缩后的提取液的体积比为1∶1，萃取的次数为3次。⑤步骤3)中，所述选择性极性无孔吸附树脂型号为ADS-15，或ADS-17，或ADS-FS。⑥步骤3)中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为50～70％。该发明属于色谱分离-结晶纯化工艺。

(16)CN1844125A(申请号：200510063407.X，《一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的新方法》)：该发明特征在于，采用了液-液萃取后再进行精制的方法；萃取的溶剂为正丁醇或其他与正丁醇溶解性与极性相似的溶剂；其提取方法包含以下步骤：(1)取银杏叶或银杏叶提取物，加水煮沸，冷藏，取上清液，过滤，收集滤液；(2)滤液中加入正丁醇或其他与正丁醇相似溶解性、相似极性的溶剂萃取，分出水层；(3)萃取液经减压回收正丁醇作为萃取液，并蒸干，收集干燥物；(4)干燥物中加入乙醇溶液煮沸使溶解，冷藏，抽滤，并洗涤得晶体；(5)晶体中加入乙醇使溶解，冷藏，抽滤，得银杏内酯B晶体；(6)银杏内酯B晶体经真空干燥后得纯度为90％以上的银杏内酯B单体。该方法中正丁醇萃取的浸膏内含有较多GA、GC、白果内酯和黄酮类成分，难以直接结晶获得GB。

(17)CN1424315A(申请号02128965.4，《银杏内酯化合物及其制备方法和含有该化合物的药物组合物》)：该发明公开了一种从银杏内酯总提取物当中分离获得新化合物——银杏内酯K的方法。即取银杏内酯粗品3g置索氏提取器中，加乙酸乙酯或丙酮2500mL回流24小时，回收乙酸乙酯至浸膏状，用硅藻土拌样，烘干，研细，用石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1湿法装于低压硅胶柱，压力0.2～0.3kPa/cm³，以石油醚∶乙酸乙酯梯度递增洗脱，当石油醚∶乙酸乙酯＝6∶4时，97～121流份，经TCL检查，甲苯∶乙酸乙酯∶丙酮∶甲醇＝5∶2∶2.5∶0.3，4％NaAc硅胶H板，与银杏内酯对照品比较出现银杏内酯斑点，将其合并浓缩，放置出现沉淀，母液留用，将沉淀以丙酮溶解，以制备型高效液相纯化，即得该化合物。该发明的目标产物是银杏内酯K，纯化依赖于制备型高效液相。

(18)CN1594319A(申请号200410041120.2，《银杏内酯提取工艺和银杏内酯注射液及其制备方法》)：该发明公开了一种银杏内酯提取工艺和银杏内酯注射液及其制备方法。该提取工艺为称取一定量银杏叶粉碎，加数倍量的稀丙酮液温浸提取，回收丙酮，除杂，醋酸乙酯萃取纯化，醋酸钠再除杂，回收醋酸乙酯，40％～95％乙醇或甲醇中重结晶，过滤，40℃～80℃干燥。此法使用乙醇水或甲醇结晶，产品脱水困难亦可能有甲醇残留。

(19)CN1733768A(申请号200510041266.1，《银杏内酯提取和纯化工艺》)：该发明公开了一种银杏内酯提取和纯化工艺，该工艺包含下列步骤：称取银杏干叶，粉碎，按药材重量加2～10倍的5％～95％乙醇或甲醇提取，提取液回收醇后用脱脂溶剂除杂，萃取，再除杂，得粗制品，用5％～95％乙醇重结晶，过滤，干燥得银杏总内酯精制品。该发明的目标产物是银杏总内酯。

(20)CN101041661A(申请号200710051805.9，《一种用免疫亲和层析色谱柱提取银杏内酯B的方法》)：该发明公开了一种用免疫亲和层析色谱柱提取银杏内酯B的方法，其方法步骤为：①银杏内酯B的初步提取：将银杏叶以三倍量的90％乙醇提取，提取三次后，以旋转蒸发仪浓缩，将乙醇蒸干至提取物为粘稠；②将步骤1所得粘稠提取的上免疫亲和层析色谱柱，然后用磷酸缓冲液冲洗三次，然后以甲醇冲洗，即得银杏内酯B。该发明建立的是一种免疫亲和层析色谱分离方法。

三、发明内容

本发明旨在为中药新药开发提供高纯度的原料药银杏内酯A(ginkgolide A，GA)和银杏内酯B(ginkgolide B，GB)，所要解决的技术问题是自银杏总内酯中分离并纯化目标产物GA和GB。

本发明的技术方案以纯度≥95％(指银杏内酯含量≥95％，重量百分比。下同)的银杏总内酯为起始原料，包括结晶分离、纯化和干燥，与现有技术的区别是所述的纯化是用重结晶-超临界CO₂萃取组合工艺进行纯化，然后干燥得到纯度≥97％的单体GA和GB。所述的结晶分离是利用单体GA和GB在无水乙醇中溶解度的差别自起始原料中通过结晶分别得到单体GA和GB。所述的重结晶纯化是对结晶分离得到的单体GA和GB分别用无水乙醇按1∶5～80(w/v)的料液比重结晶至少三次，得到纯度≥95％的单体GA和GB。所述的超临界CO₂萃取是对纯度≥95％的单体GA和GB分别进行萃取，萃取压力10～100MPa，萃取温度32～150℃。最后对萃取纯化得到的单体于0.06Mpa～0.1Mpa条件下真空干燥至少10小时，在负压条件下脱水，温度＜100℃。

所述的起始原料银杏总内酯是自符合药典规定要求的银杏叶提取物(GBE)中用乙酸乙酯萃取得到的，这时银杏总内酯中基本不含白果内酯。作为起始原料，要求银杏总内酯的含量≥95％，若含量低于95％，可使用酸性氧化铝或活性炭等进行吸附除杂，除去残留的黄酮类化合物或其它杂质。由于银杏叶提取物中的银杏内酯J、银杏内酯M的含量很少，所得银杏总内酯中的主要成分是GA、GB和GC，通常GA含量在50％～65％，GB含量在25％～35％，GC含量有5％～15％。

所述的结晶分离是用无水乙醇对起始原料银杏总内酯进行多次结晶处理；由于无水乙醇中GB溶解度低于GA、GC，所以GB可先结晶析出；经2～3结晶后，银杏总内酯母液中GB含量已较低，可对母液浓缩结晶，得到GA；当GB、GA含量都很低时，可将银杏总内酯母液与下一批次的银杏总内酯母液混合。由于天然银杏总内酯母液中GC含量很低，析出结晶甚微，可在重结晶中作为杂质处理。

析出的GB和GA分别经2～4次无水乙醇重结晶可获得高纯度GB和GA。

GA和GB的重结晶时，液固比为5∶1～80∶1(V/W)，通常经过3次以上重结晶处理可获得含量≥95％GA或GB单体。

所述的超临界CO₂萃取就是重结晶得到的含量≥95％的GA和GB单体分别进行萃取结晶纯化，脱除残留溶剂和微量杂质，萃取压力10～100MPa、温度32～150℃。

最后进行真空干燥(温度＜100℃，真空度：0.06MPa～0.1MPa，时间：10～48h)，可得到含量≥97％的GA和GB单体。重复萃取1次，可制备GA、GB单体含量达99.5％。以起始原料中单体量计，收率均≥90％。

真空度表示设备系统的压强低于大气压强的数值，即真空度＝大气压强(0.1MPa)-绝对压强，单位MPa。

本发明的主要的优点在于：

①、利用银杏总内酯中GA、GB和GC含量的天然差异，直接进行结晶粗分，省去了色谱分离过程。

②、对粗分所获GB或GA的粗晶分别进行重结晶，调整结晶溶剂用量，可逐步提高GA和GB单体的纯度。

③、使用无水乙醇结晶，可以有效减轻产品最终的脱水负荷。

④、GC留在母液中，待积累到一定浓度时(如20％以上)再结晶分离。

⑤、重结晶剩下的低含量GA和GB，可返回母液循环套用，从而使各单体的总回收率达到90％。，工艺实用。

⑥、超临界CO₂萃取结晶过程中，不外加夹带剂，利用欲脱除的残留溶剂的夹带作用同步脱除微量杂质和水分。

⑦、本工艺所制备的GA、GB单体的含量最高可达99.5％。

本发明的工艺路线简捷，分离全程除乙醇和CO₂外物料不接触任何有机溶剂，用超临界CO₂同步脱除残留溶剂、微量杂质和水分，可实现绿色生产。产品品质优异，工艺特别适合用于原料药生产。

四、具体实施方式

实施例1：

取含量高于97％的银杏总内酯(其中，GA含量56.3％，GB含量31.2％)100g，80～100℃真空干燥后，用10～30倍无水乙醇结晶2～3次，得GB；合并GB，滤干，再用无水乙醇重结晶，乙醇用量分别为溶质量的20、30、50、50倍；再用超临界CO₂萃取(操作温度65℃，压力12MPa)，以除去微量杂质和溶剂；真空干燥(温度60℃，真空度：0.090MPa，时间48h)；得含量≥99％的GB 28.3g。

实施例2：

取含量高于97％的银杏总内酯(其中，GA含量56.3％，GB含量31.2％)100g，80～100℃真空干燥后，用10～30倍无水乙醇结晶2～3次，分离GB；将剩下的母液浓缩，得GA，滤干；用无水乙醇重结晶，乙醇用量分别为溶质量的20、30、50、50倍；再用超临界CO₂萃取(操作温度55℃，压力14MPa)，以除去微量杂质和溶剂；真空干燥(温度70℃，真空度：0.095MPa，时间48h)；得含量≥99％的GA 51.4g。

实施例3：

取含量高于90％的银杏总内酯(其中，GA含量52.6％，GB含量28.8％)100g，先用用20～40倍乙醇溶解，加适量酸性氧化铝脱色，提高银杏总内酯纯度；80～100℃真空干燥；用10～30倍无水乙醇结晶2～3次，得GB；合并GB，滤干；再用无水乙醇重结晶，乙醇用量分别为溶质量的20、40、60倍；然后用超临界CO₂萃取(操作温度50℃，压力15MPa)，以除去微量杂质和溶剂；真空干燥(温度70℃，真空度：0.090MPa，时间：48h)；可得含量≥97.5％的GB 26.7g。

实施例4：

取含量高于90％的银杏总内酯(其中，GA含量52.6％，GB含量28.8％)100g，先用用10～20倍乙醇溶解，加适量酸性氧化铝脱色，提高银杏总内酯纯度；80～100℃真空干燥；用10～30倍无水乙醇结晶2～3次，分离GB；将剩余母液浓缩得GA，滤干；再用无水乙醇重结晶，乙醇用量分别为溶质量的20、40、60倍；然后用超临界CO₂萃取(操作温度60℃，压力13MPa)，以除去微量杂质和溶剂；真空干燥(温度60℃，真空度：0.095MPa，时间：48h)；可得含量≥97.5％的GA 48.8g。

Claims (1)

1.一种银杏内酯A、B单体的分离纯化方法，以纯度≥95％的银杏总内酯为起始原料，包括结晶分离、纯化和干燥，其特征在于：所述的结晶分离是利用单体银杏内酯A和银杏内酯B在无水乙醇中溶解度的差别自起始原料中通过结晶分别得到单体银杏内酯A和银杏内酯B，所述的纯化是用重结晶-超临界CO₂萃取组合工艺进行纯化，所述的重结晶纯化是对结晶分离纯化得到的单体银杏内酯A和银杏内酯B分别用无水乙醇按1∶5～80(W/V)的料液比重结晶至少三次，得到纯度≥95％的单体银杏内酯A和银杏内酯B；所述的超临界CO₂萃取纯化是对纯度≥95％的单体银杏内酯A和银杏内酯B分别进行萃取，萃取压力10～100Mpa，萃取温度32～150℃。